CN110499267B - 一种溶藻弧菌菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及一种溶藻弧菌菌株及其应用。该溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌株保藏编号为GDMCC No:60730。本发明还提供一种抗水产弧菌的组合物，其活性成分为灭活或减活的上述溶藻弧菌菌株。能够大大提高水产鱼类的抗病原菌感染力。

Description

一种溶藻弧菌菌株及其应用

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及一种溶藻弧菌菌株，进一步涉及由该溶藻弧菌菌株制备的灭活疫苗，及它们在预防或治疗由溶藻弧菌引起的各种疾病中的应用。

背景技术

弧菌(Vibrion)广泛分布于海水养殖环境中，一直被认为是许多海水鱼、虾及蟹类的重要致病菌，是一类革兰氏阴性，具有鞭毛，能运动，无芽孢和荚膜的杆状细菌。多数弧菌是兼性厌氧菌，对营养要求不高，嗜盐，在含有NaCl的蛋白胨水中就可以生长，适宜在pH为8.0-9.0的碱性环境中生长。目前，已发现对海水鱼类具有致病性的弧菌主要是副溶血弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌和哈维氏弧菌等十几种。

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)，属弧菌科(Vibrionaceae)，弧菌属(Vibrio)，是由Miyamoto在1961年定名，在弧菌选择培养基TCBS(硫代硫酸盐柠檬酸胆盐蔗糖琼脂)上菌落颜色呈黄色，菌落形态为圆形、凸起、光滑，直径2-3mm，菌落粘稠而不易挑取，无荚膜和芽孢，具有鞭毛，是革兰氏阴性短杆菌，能在液体培养基和固体培养基中移动。溶藻弧菌为嗜温菌，适宜温度为17-35℃，广泛分布于海水及河口中，数量居海水中各种弧菌之首，溶藻弧菌对海水鱼类的致病过程包括粘附、侵染、定居和繁殖，在海水鱼生长过程中进行侵染，对机体造成细胞、组织损伤，其代谢产物可以破坏机体局部或全身的正常代谢或机能，而导致疾病的产生；如溶藻弧菌致病的黑鲷鱼会出现表皮溃烂、出血、眼球突出、腹部肿胀肝脏充血，肾脏苍白等症状。

黑鲷(Sparus macrocephlus)，属鲈形目(Perciformes)，鲷科(Sparidae)，是名贵海产鱼类之一，具有多种适合人工养殖的生物学特性，如适温，适盐性广，食谱杂，抗病力较强，生长较迅速等。然而，随着黑鲷养殖规模的不断扩大及数量的增加，海水中病原数量越来越多，导致黑鲷鱼各种病害的发生越来越频繁，其中细菌病害特别是弧菌病害，已给黑鲷养殖生产造成了极大的经济损失，严重阻碍了黑鲷养殖业的发展。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌株。

因此，本发明的目的之一在于提供上述溶藻弧菌菌株在制备抗水产弧菌疫苗中的应用。

本发明的另一目的在于提供抗水产弧菌疫苗。

本发明所采用的技术方案如下文所述。

一种溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌株，该菌株于2019年07月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:60730，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

进一步地，本发明从病症特征明显，濒临死亡的黑鲷鱼的肝肾肺中筛选分离获得所述溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌株，经形态学特征、生理生化特征、分子生物学特征鉴定为Vibrio alginolyticus。

进一步地，所述溶藻弧菌菌株形态特征为：

在TCBS培养基上菌落颜色呈黄色，菌落形态为圆形、凸起、光滑，菌落粘稠而不易挑取。

进一步地，所述溶藻弧菌菌株生理生化特征为：

经革兰氏染色后菌体呈紫色，为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆；能发酵蔗糖、甘露糖，在无盐胨水中不生长，在3％-10％的NaCl胨水培养基上生长；V-P(葡萄糖磷酸盐胨水反应)和赖氨酸脱羧酶反应呈阳性；葡糖糖产气和精氨酸双水解酶反应呈阴性。

进一步地，所述溶藻弧菌菌株的16S rDNA的序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供一种上述溶藻弧菌菌株在制备抗水产弧菌制剂中的应用。

本发明还提供一种抗水产弧菌的组合物，所述组合物包括作为活性成分的灭活或减毒的如上所述的溶藻弧菌菌株。

本发明还提供一种抗水产弧菌疫苗，所述疫苗包括作为活性成分的灭活或减毒的如上所述的溶藻弧菌菌株。

进一步地，所述溶藻弧菌可以采用甲醛进行灭活。

进一步地，所述组合物还包括佐剂或辅料。

进一步地，所述佐剂可以选自角鲨烷和角鲨烯(或其他动物源性油)；嵌段共聚物；清洁剂如吐温80；Quil，矿物油如Drakeol或Marcol，植物油如花生油；棒状杆菌衍生佐剂，如短棒状杆菌，牛分枝杆菌(卡介苗，卡介苗或卡介苗)；白细胞介素如白细胞介素-2和白细胞介素12；单核细胞介素如白细胞介素1，肿瘤坏死因子；干扰素如γ干扰；表面活性物质如十六烷胺，十八烷胺，十八烷基氨基酸酯，溶血卵磷脂和多元醇；油乳剂；和矿物质如磷酸铝，氢氧化铝或明矾凝胶。

进一步地，所述组合物的剂型可以为皮下注射剂型、口服型、浸泡型和喷雾型。

本发明从死亡黑鲷鱼体内分离出了新的弧菌菌株，通过形态学、生理生化实验及分子生物学三个方面进行鉴定，其形态学特征及生理生化特征均与《伯杰氏系统细菌学手册》(第九版)所描述的溶藻弧菌特征相符合，对该菌株16S rDNA进行PCR扩增，在NCBI上进行blast对比，该菌株的序列与溶藻弧菌的同源性高达98％，结果表明该菌株为溶藻弧菌。并研究了该菌株对黑鲷鱼的攻毒实验，可用于溶藻弧菌体内致病机理方面的研究，也为水产养殖过程中弧菌疾病的预防提供了理论基础。

附图说明

图1为本发明菌株的革兰氏染色图；

图2为本发明菌株16S rDNA的PCR电泳图；

图3为攻毒后的黑鲷鱼病变图；

图4为攻毒后黑鲷鱼Kaplan-Meier生存曲线。

具体实施方式

近些年来，海水鱼病害的发生给水产养殖业造成了巨大的损失，特别是致病菌引发的海水鱼大量死亡给水产养殖业带来毁灭性的灾害。海水鱼机体及养殖环境中弧菌的监测是水产养殖业发展的重要环节，致病菌攻毒试验是水产动物病害学及免疫研究的重要组成部分，弧菌引发的致病过程受到多种因素的影响，与海水鱼的生理状态，环境胁迫，致病菌株及剂量，攻毒持续时间及感染方式有关。

弧菌攻毒试验是水产动物病害学及免疫学研究的重要内容，急性攻毒试验可以评价弧菌对海水鱼可能产生的影响，不仅可用于评价分离致病菌的毒力、测定水体污染程度，也能为制定水质标准提供环境依据。海水鱼养殖水体内或机体中存在大量弧菌，提高了海水鱼感染暴发疾病的风险。腹腔注射攻毒容易感染试验鱼，并且致病力很强。随着攻毒剂量的提高，试验对象的死亡率显著上升，因此，严格监控弧菌数量及其毒力是控制海水鱼养殖过程中暴发疾病的重要手段。

本发明研究弧菌攻毒剂量与黑鲷鱼死亡率之间的相关性，旨在为黑鲷鱼养殖业及其他海水鱼类防治弧菌病及探究溶藻弧菌致病机理提供理论基础。

以下结合附图和具体的实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明并不限于这些具体实施方式。实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实验仪器：

超净工作台、手术刀、接种环、高压蒸汽灭菌锅(济南来宝医疗器械有限公司LMQ.C-50E)、微量台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司H1650-W)、紫外分光光度计(上海精科精密仪器有限公司721G)、水平电泳槽(Tanon ESP300)、电泳仪(TanonHE120)、恒温培养箱(上海喆图科学仪ZDP-9082)、恒温水浴锅(常州迈科诺仪器HH-S4)、恒温培养摇床(上海恒一科学仪器THZ-300)、PCR仪(ABI Veriti96)、低速离心机(上海中佳精密仪器有限公司sc-3610)。

实验材料及试剂：

黑鲷鱼(广东省海洋试验中心)、2216E培养基(上海古朵生物科技有限公司GD-G00764)、TCBS培养基(青岛海博生物HB4130)、弧菌科细菌生化鉴定试剂盒(环凯微生物070060)。

1％琼脂糖凝胶：称取0.5g琼脂糖置于锥形瓶中，加入50mL1×TAE，微波炉加热三分钟至琼脂糖全部融化，摇匀。

PBS缓冲液：PBS粉末(博士德生物工程科技有限公司)一包加超纯水定容到2000mL。

实施例1溶藻弧菌菌株的筛选

在某养殖场采集病症特征明显，濒临死亡的黑鲷鱼，无菌水洗净后，用75％的酒精棉球擦拭体表消毒，用无菌手术刀开启，取病鱼的肝肾脾于2216E液体培养基中，37℃，180rpm/min摇床过夜培养。用细接种环蘸取少量菌液在TCBS板上，划线纯化，28℃培养24h后，选取优势菌进行划线纯化。选取其中一株优势菌的纯培养物置4℃冰箱保存。

实施例2溶藻弧菌菌株的鉴定

1、生化鉴定

根据细菌生化鉴定试剂盒的说明书，挑取平板分离的菌落进行革兰氏染色镜检，新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，将菌悬液制备成约10⁸cfu/mL，用吸管吸取2滴菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，放置于瓶架中，于37℃培养箱中培养，观察结果，对照细菌生化鉴定试剂盒说明书及《伯杰氏鉴定细菌学手册》(第九版)判定细菌种类。

细菌菌落在TCBS培养基上，菌落颜色呈黄色，菌落形态为圆形、凸起、光滑，菌落粘稠而不易挑取。细菌菌落在2216E培养基上，菌落形态为白色、圆形、光滑的菌落。符合溶藻弧菌的形态学特征。

如图1所示，为菌株革兰氏染色结果。显微镜下观察，经革兰氏染色后菌体呈紫色，革兰氏染色鉴定该菌为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆。

如表1所示，为菌株的生化鉴定指标。分离菌株的生化鉴定结果显示，分离菌株能发酵蔗糖、甘露糖，在无盐胨水中不生长，在3％-10％的NaCl胨水培养基上生长。V-P(葡萄糖磷酸盐胨水反应)和赖氨酸脱羧酶反应呈阳性，葡糖糖产气和精氨酸双水解酶反应等呈阴性。根据《伯杰氏系统细菌学手册》(第九版)及弧菌生理生化鉴定试剂盒说明书，对照溶藻弧菌的主要特征，可判定分离菌株为典型的溶藻弧菌。

表1菌株的生化鉴定指标(均含1％NaCl)

2、分子生物学鉴定

(1)细菌基因组的提取

用细接种环从TCBS板上蘸取单菌落于2216E琼脂培养基上，连续划线，37℃培养24小时。蘸取1接种环菌苔加入含150μL三蒸水的EP管中，混匀，100℃煮沸10min。12000rpm/min，离心10min，取上清，-20℃保存备用。

(2)PCR鉴定16S rDNA基因

扩增16S rDNA细菌种属鉴定通用引物，引物由北京六合华大基因科技有限公司合成。

通用引物序列：

27F(上游序列):5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’(SEQ ID NO:2)

1429R(下游序列):5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’(SEQ ID NO:3)

PCR采用50μL的反应体系，反应体系见表2，PCR的反应程序见表3。

表2 PCR反应体系

表3 PCR反应程序

目的基因的序列测定：

扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，以DNA分子量标准(DL2000)做参考，按照6V/cm电压电泳，结束后用凝胶成像系统(Tanon)观察拍照分析。如图2所示，为菌株的PCR电泳图。

选取16S rDNA PCR阳性产物送北京华大基因科技股份有限公司进行序列测定，菌株16S rDNA的双向测序结果序列经DNAMAN软件拼接后，序列如SEQ ID NO:1所示，将此序列在NCBI上blast进行对比分析，结果表明，分离菌株的16S rDNA序列与溶藻弧菌16S rDNA的同源性高达98％，结合菌株的形态学和生化鉴定，可确定该菌株为溶藻弧菌。

实施例3攻毒实验

1、菌株的扩增培养

取单克隆菌落接种至5mL 2216E液体培养基中，37℃，180rpm/min摇床过夜培养；取4mL增菌液加入400mL 2216E液体培养基中扩增培养。菌液经5000g离心10分钟后，弃上清，收集沉淀，用PBS重悬。将菌液浓度通过分光光度计560nm(OD560)比浊测定后备用。

2、实验用黑鲷鱼及饲养管理

黑鲷鱼，体长为14.6±0.8cm，体重为91.7±5.6g。黑鲷鱼先在2000L的高效循环系统中暂养2周，水温28-30℃，盐度2.9-3.4％，并用普通膨化饲料喂养。黑鲷鱼在暂养期间未发现有疾病和死亡。黑鲷鱼在攻毒实验前禁食一天。随后将黑鲷鱼随机分组到高效循环系统中，共四个组，每组有三个桶，桶的体积约为150L。在循环系统中加入28℃，3.0％盐度的无菌海水，每组30条黑鲷鱼，每个桶10条，各组之间黑鲷鱼体重无明显差异。

3、攻毒实验

根据预实验结果，攻毒试验共设3个实验组及一个对照组，实验组分为A、B、C三组，每组做三个平行实验。实验采取注射攻毒的方式。三个实验组的溶藻弧菌注射攻毒浓度为高浓度组1×10¹⁰cfu/mL、中浓度组1×10⁹cfu/mL、低浓度组1×10⁸cfu/mL。对照组为生理盐水。用丁香酚将黑鲷鱼迷昏后，从黑鲷鱼腹腔注射菌液或生理盐水0.2mL。监测黑鲷鱼攻毒后96h内的生存情况，并记录每条黑鲷鱼的生存时间，即溶藻弧菌侵染后至黑鲷鱼死亡的时间。

对黑鲷鱼进行溶藻弧菌的攻毒试验，结果如图3所示，可以看出，黑鲷鱼感染溶藻弧菌后出现典型的弧菌病灶，腹鳍、腮盖、胸鳍等部位都出现出血的情况(图3A)，解剖发现其肝、肾有充血现象(图3B)。

黑鲷鱼腹腔注射10¹⁰、10⁹及10⁸cfu/mL溶藻弧菌96h后，结果如表4所示，可以看出，三组平行实验的累计死亡率分别为100％、50％、0％，100％、50％、10％和100％、70％、0％，对照组的死亡率为零。试验鱼在感染后24h内死亡，属于急性感染。

表4溶藻弧菌人工感染黑鲷鱼试验结果

从三组平行实验中选取B组试验结果，用SPSS 21.0数据处理软件进行Probit回归分析，计算溶藻弧菌腹腔感染黑鲷鱼的半致死量LD50，概率为0.50的值即为溶藻弧菌LD50，Probit分析结果LD50为7.53×10⁸cfu/mL，95％的置信区间为2.86×10⁸-2.12×10⁹cfu/mL。

采用Kaplan-Merier法绘制不同攻毒剂量攻毒后黑鲷鱼的生存曲线。如图4所示，随时间变化，黑鲷鱼生存率趋于下降趋势。采用log-rank检验方法对不同弧菌攻毒浓度生存期进行比较，结果显示，卡方值为22.871，Sig值为0.000。攻毒试验中，不同弧菌浓度攻毒对黑鲷鱼生存期影响有显著性差异(P＝0.000<0.05)。高浓度弧菌(1×10¹⁰cfu/mL)攻毒引起了黑鲷鱼持续大量死亡。在1×10⁸cfu/mL攻毒剂量组中，黑鲷鱼在24h时的生存率为90％，显著高于第24h时1×10¹⁰cfu/mL组及1×10⁹cfu/mL组，说明黑鲷鱼在低浓度攻毒组中能抵抗较长时间。

4、验证

取死鱼的肝脾肾，用细接种环蘸取组织在TCBS板上，28℃培养箱培养18小时，菌落形态观察，对比攻毒前后细菌形态特征和生化特征，发现从死鱼体内肝、脾、肾中分离细菌在TBCS培养基中菌落形态和生化鉴定结果与攻毒前一致。

实施例4疫苗免疫保护实验

1、试验鱼和饲养条件

试验鱼：黑鲷鱼，体长14-16cm，体重50-70g，用于注射免疫实验。

饲养条件：试验期间水温为25℃左右。用45x45x25cm塑料箱饲养，采用盐度3％的自然海水，按正常饲喂、正常通气并换水，随机分组，每组50尾。

2、细菌准备

将实施例1制备得到的溶藻弧菌接种于2216E肉汤培养基，28℃培养24h，用灭菌生理盐水洗涤两次，用稀释涂布平板法测定菌浓度。

稀释成10⁷cfu/mL不同浓度，每尾鱼腹腔注射菌悬液0.1mL，每天正常饲喂并通气换水，连续饲养观察14d，随时记录发病症状及死亡情况。

3、疫苗制备

将实施例1制备得到的溶藻弧菌接种在2216E液体培养基中，37℃培养24h，以灭菌生理盐水洗下，加入终浓度0.5％的福尔马林，37℃培养24h，即为注射用灭活疫苗(10⁹cfu/ml)，接种在2216E液体培养基中。37℃培养24h后加入终浓度0.5％的福尔马林28℃灭活48h，即为浸泡用疫苗(10⁹cfu/ml)，用时稀释10倍。

4、鱼免疫

分注射免疫组和对照组，各组用鱼50尾。浸泡免疫组，先用8％NaCI充气条件下高渗处理5分钟后，再在充气条件下疫苗浸泡15分钟，注射免疫组经腹腔注射灭活疫苗0.2ml/尾，对照组鱼腹腔注射相同剂量生理盐水。一周后，各试验组同法加强免疫一次。然后正常饲养。

5、攻毒实验

在免疫接种后第28天，各免疫组分别各取12尾，腹腔注射0.2ml培养24小时的溶藻弧菌活菌液，攻毒浓度：注射免疫组为3.7x10⁸cfu/ml；攻毒感染后饲养于泡沫箱中，每天换水2次，连续观察14d，统计死亡率，计算免疫保护力；免疫保护力＝(1-受免鱼死亡率/对照死亡率)×l00％。

结果

溶藻弧菌灭活疫苗对黑鲷鱼注射免疫后都能产生一定的免疫保护力。4周后用3.7x10⁸cfu/ml的活菌注射感染黑鲷鱼。对照组在感染后30小时内全部死亡；注射免疫组的注射免疫保护力为83.33％。

综上，本发明从形态学、生理生化实验及分子生物学三个方面对分离得到的弧菌进行鉴定，其形态学特征及生理生化特征均与《伯杰氏系统细菌学手册》(第九版)所描述的溶藻弧菌特征相符合，对该菌株16S rDNA进行PCR扩增，在NCBI上blast对比，该菌株的序列与溶藻弧菌的同源性高达98％，结果表明该菌株为溶藻弧菌。

采用上述菌株对黑鲷鱼进行攻毒研究，发现感染后的试验黑鲷鱼出现弧菌病明显的病症，腹鳍、腮盖、胸鳍等部位都有出血的情况，解剖发现体内肝脏、肾脏都有充血现象。三个攻毒浓度中，高浓度弧菌攻毒(1×10¹⁰cfu/mL)较中浓度(1×10⁹cfu/mL)及低浓度(1×10⁸cfu/mL)更容易引起黑鲷鱼持续大量的死亡现象(P＝0.000)，从发病黑鲷鱼体内分离出到与攻毒前相同的细菌，可判定该分离菌是对黑鲷鱼有较强致病力的病原体。

应用Probit模型计算溶藻弧菌人工感染黑鲷鱼的半致死量LD₅₀为7.53×10⁸cfu/mL，采用Kaplan-Merier法对不同浓度溶藻弧菌攻毒黑鲷鱼进行生存分析，有效地分析了在溶藻弧菌的攻毒试验中黑鲷鱼的动态生存情况，并对溶藻弧菌的攻毒剂量进行了评价。根据上述评价将溶藻弧菌进行疫苗免疫保护试验，发现该溶藻弧菌灭活后对黑鲷鱼具有一定的免疫保护力，可以作为抗水产弧菌疫苗。

本领域技术人员应该理解的是，本发明的使用不受限于上述特定应用。就本文描述或描绘的特定元素和/或特征而言，本发明也不局限于其优选实施方案。应当理解的是，本发明不限于所公开的实施方案例或各个实施方案，且在不脱离由以下权利要求所阐述和限定的本发明的范围的情况下能够进行许多重新布置、修改和替换。

SEQUENCE LISTING

<110> 广东海大畜牧兽医研究院有限公司

<120> 一种溶藻弧菌菌株及其应用

<130> 111

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1454

<212> DNA

<213> Vibrio alginolyticus

<400> 1

accgggggaa gcacctgctt gaggcttcgc tgtcccaata ctgaaagact tcggggaacg 60

ataacggcga ctagcggcgg acgggtgagt aatgcctagg aaattgccct gatgtggggg 120

ataaccattg gaaacgatgg ctaataccgc atgatgccta cgggccaaag agggggacct 180

tcgggcctct cgcgtcagga tatgcctagg tgggattagc tagttggtga ggtaagggct 240

caccaaggcg acgatcccta gctggtctga gaggatgatc agccacactg gaactgagac 300

acggtccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt gcacaatggg cgcaagcctg 360

atgcagccat gccgcgtgtg tgaagaaggc cttcgggttg taaagcactt tcagtcgtga 420

ggaaggtggt gtagttaata gctgcattat ttgacgttag cgacagaaga agcaccggct 480

aactccgtgc cagcagccgc ggtaatacgg agggtgcgag cgttaatcgg aattactggg 540

cgtaaagcgc atgcaggtgg tttgttaagt cagatgtgaa agcccggggc tcaacctcgg 600

aatagcattt gaaactggca gactagagta ctgtagaggg gggtagaatt tcaggtgtag 660

cggtgaaatg cgtagagatc tgaaggaata ccggtggcga aggcggcccc ctggacagat 720

actgacactc agatgcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780

gccgtaaacg atgtctactt ggaggttgtg gccttgagcc gtggctttcg gagctaacgc 840

gttaagtaga ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaatga attgacgggg 900

gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgatgca acgcgaagaa ccttacctac 960

tcttgacatc cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgagacagg 1020

tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgttgt gaaatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080

caacccttat ccttgtttgc cagcgagtaa tgtcgggaac tccagggaga ctgccggtga 1140

taaaccggag gaaggtgggg acgacgtcaa gtcatcatgg cccttacgag tagggctaca 1200

cacgtgctac aatggcgcat acagagggcg gccaacttgc gaaagtgagc gaatcccaaa 1260

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acaccatggg agtgggctgc aaaagaagta ggtagtttaa ccttcggggg gacgcttacc 1440

actttgggtc agcg 1454

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (6)

1.一种溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌株，其特征在于，所述溶藻弧菌菌株的16SrDNA的序列如SEQ ID NO:1所示；所述溶藻弧菌菌株的保藏编号为GDMCC No:60730。

2.一种抗水产弧菌的组合物，其特征在于，所述组合物包括作为活性成分的灭活或减毒的如权利要求1所述的溶藻弧菌菌株。

3.一种抗水产弧菌的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括作为活性成分的灭活或减毒的如权利要求1所述的溶藻弧菌菌株。

4.根据权利要求3所述的抗水产弧菌的疫苗，其特征在于，所述溶藻弧菌菌株是经甲醛灭活的。

5.根据权利要求3所述的抗水产弧菌的疫苗，其特征在于，还包括佐剂。

6.根据权利要求1所述的溶藻弧菌菌株在制备抗水产弧菌疫苗中的用途。

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