CN111358780B - 芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、滴丸和注射乳剂 - Google Patents

芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、滴丸和注射乳剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供了芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、滴丸和注射乳剂，属于药物用途技术领域，所述芒柄花素通过抑制NF‑κB信号通路，升高IκBα水平，从而降低促炎因子的表达，以起到对重症急性胰腺炎的预防和治疗作用。

Description

芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、 滴丸和注射乳剂
技术领域
本发明属于药物用途技术领域，尤其涉及芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、滴丸和注射乳剂。
背景技术
重症急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis，SAP)是一类由多种病因导致胰酶在胰腺内被激活后引起胰腺组织自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症反应，发病急骤，病死率高达39％。研究表明，SAP的过程是一个涉及多种因素的复杂病理生理过程，包括微循环，氧化应激，钙超载和促炎介质过度释放的干扰。在胰酶活化后，白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)被释放。为了缓解炎症和全身中毒症状，临床上在重症胰腺炎的急性期往往采用地塞米松进行病情控制，但由于地塞米松可能造成消化道出血、免疫抑制等并发症，在临床应用中存在一定局限性。
芒柄花素是从膜荚黄芪或红车轴草等植物中纯化得到的一个异黄酮化合物，具有抗氧化、雌激素样等多方面生理活性，但是现有技术并未公开芒柄花素具有抗重症急性胰腺炎方面的的用途。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用、片剂、滴丸和注射乳剂，所述芒柄花素具有防治重症急性胰腺炎的作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用。
本发明还提供了芒柄花素在制备抑制NF-κB信号通路的药物中的应用。
本发明还提供了芒柄花素在制备升高IκBα水平的药物中的应用。
本发明还提供了芒柄花素在制备降低促炎因子的表达的药物中的应用。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的片剂，包括以下重量份数的组分：芒柄花素80～120份、糖粉20～30份、乳糖30～40份、羧甲基淀粉钠45～55份和硬脂酸镁10～20份。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的滴丸，包括以下重量份数的组分：
芒柄花素20～30份、PEG 4005～15份、PEG 400010～20份、羧甲基淀粉钠0.5～1.5份和聚维酮K30 0.005份。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的注射乳剂，包括以下重量份数的组分：
芒柄花素45～55份、大豆油200～300份、磷脂45～55份、油酸5～15份、泊洛沙姆5～15份和甘油80～120份。
本发明提供了芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用，所述芒柄花素通过抑制NF-κB信号通路，升高IκBα水平，从而降低促炎因子的表达，以起到对重症急性胰腺炎的预防和治疗作用。
附图说明
图1为芒柄花素对胰腺病理改变的影响；
图2为免疫组化检测结果；
图3为Western Blot电泳图；
图4为Western Blot电泳分析结果。
具体实施方式
本发明提供了芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、冻干粉针剂或注射用乳剂。本发明对所述药物中芒柄花素的含量以及使用的辅料的种类和含量没有特殊限定，采用芒柄花素在医学上可接收的剂型和辅料种类即可，采用常规药物中活性物质的含量即可。
本发明还提供了芒柄花素在制备抑制NF-κB信号通路的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、冻干粉针剂或注射用乳剂。本发明对所述药物中芒柄花素的含量以及使用的辅料的种类和含量没有特殊限定，采用芒柄花素在医学上可接收的剂型和辅料种类即可，采用常规药物中活性物质的含量即可。
本发明还提供了芒柄花素在制备升高IκBα水平的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、冻干粉针剂或注射用乳剂。本发明对所述药物中芒柄花素的含量以及使用的辅料的种类和含量没有特殊限定，采用芒柄花素在医学上可接收的剂型和辅料种类即可，采用常规药物中活性物质的含量即可。
本发明还提供了芒柄花素在制备降低促炎因子的表达的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、冻干粉针剂或注射用乳剂。本发明对所述药物中芒柄花素的含量以及使用的辅料的种类和含量没有特殊限定，采用芒柄花素在医学上可接收的剂型和辅料种类即可，采用常规药物中活性物质的含量即可。
在本发明中，当所述芒柄花素以注射形式用于防治重症急性胰腺炎时，所述芒柄花素的成人使用剂量优选为5～1000mg，更优选为10～250mg。在本发明中，当所述芒柄花素以口服形式用于治疗重症急性胰腺炎时，所述芒柄花素的成人使用剂量优选为10～1500mg，更优选为25～500mg。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的片剂，包括以下重量份数的组分：芒柄花素80～120份、糖粉20～30份、乳糖30～40份、羧甲基淀粉钠45～55份和硬脂酸镁10～20份；优选包括芒柄花素100份、糖粉25份、乳糖35份、羧甲基淀粉钠50份和硬脂酸镁15份。在本发明中，所述片剂在制备过程中使用质量百分含量为3％的PVPK30水溶液，本发明对PVPK30水溶液的使用量没有特殊限定，将原料润湿至挤压成团、轻触即散的程度即可。本发明对所述片剂的制备方法没有特殊限定，采用常规制备片剂的制备方法即可，每片的质量优选为150mg。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的滴丸，包括以下重量份数的组分：芒柄花素20～30份、PEG400 5～15份、PEG4000 10～20份、羧甲基淀粉钠0.5～1.5份和聚维酮K30 0.005份；优选包括芒柄花素25份、PEG400 10份、PEG4000 15份、羧甲基淀粉钠1份和聚维酮K30 0.005份。本发明对所述滴丸的制备方法没有特殊限定，采用常规滴丸的制备方法制备即可。
本发明还提供了一种防治重症急性胰腺炎的注射乳剂，包括以下重量份数的组分：芒柄花素45～55份、大豆油200～300份、磷脂45～55份、油酸5～15份、泊洛沙姆5～15份和甘油80～120份；优选包括芒柄花素50份、大豆油250份、磷脂50份、油酸10份、泊洛沙姆10份和甘油100份。本发明对所述注射乳剂的制备方法没有特殊限定，采用常规注射乳剂的制备方法即可。
在本发明中，所述注射乳剂还优选包括水，所述水优选为注射用水，本发明对所述水的使用量没有特殊限定，能够将原料溶解即可。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
芒柄花素片剂的制备：
处方:
Figure BDA0002415838470000041
操作：称取处方量的芒柄花素、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉钠，充分混合均匀后过100目筛，加入3％PVPk30水溶液适量制软材，20目筛制粒，60℃干燥3小时，18目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀后浅凹冲压片，调节片重约150mg，即得。
实施例2
芒柄花素滴丸的制备：
处方:
Figure BDA0002415838470000042
Figure BDA0002415838470000051
操作：称取处方量的PEG400、PEG4000、羧甲基淀粉钠、聚维酮K30，加入滴丸机95℃熔融，边搅拌边加入处方量的芒柄花素，充分混匀，药料温度为85℃，药料以滴距20cm、按28滴.min-1的滴速滴入液体石蜡中，10℃冷凝，固化，形成滴丸后，取出、干燥，即得。
实施例3
芒柄花素注射乳剂的制备：
处方:
Figure BDA0002415838470000052
操作：称取处方量的甘油，加注射用水适量，使溶解，配成甘油水溶液，在60℃保温，作为水相；称取处方量的磷脂、泊洛沙姆与大豆油，混合，在60℃搅拌溶解，作为油相；将油酸和芒柄花素加入油相，搅拌使混合均匀，边剪切边加入到水相中，高速剪切形成均匀初乳，以注射用水定容到5000mL，过均质机，制得粒径均一、平均粒径在200nm的脂质微球；将制得的液体用0.22μm的膜过滤、充氮气、灌装，125℃流通蒸汽旋转灭菌5分钟，即得。
实验例
芒柄花素对大鼠重症急性胰腺炎的作用
1材料
1.1实验动物清洁级SD大鼠，雄性，体重(200±25)g，由济南鹏悦实验动物繁育有限公司提供，动物合格证号：SCXK(鲁)20140007。
1.2药品与试剂芒柄花素片剂(实施例1制备得到)；醋酸地塞米松片(浙江仙琚制药股份有限公司)；雨蛙素(上海源叶生物科技有限公司)；脂多糖(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；核转录因子-κB(NF-κB)p65多克隆抗体(山羊抗兔/兔抗大鼠，Abcam)；中性树胶(中国上海懿洋仪器有限公司)。其他试剂均为国药集团化学试剂有限公司生产。
1.3仪器SpectraMax iD3多功能酶标仪(美国Molecular Devices公司)；PowerPacTMBasic分析仪(美国BIORAD)；血生化仪(朗普PUZS-300)；全自动组织脱水仪与包埋仪(天津爱华医疗器械有限公司)；病理切片机(德国SLEE)；光学显微镜(上海佑科仪器仪表有限公司)；电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；101-3A型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)。
2方法
2.1样品溶液制备雨蛙素和脂多糖用无菌生理盐水分别溶解成浓度为10μg.mL-1和1mg.mL-1的溶液备用。芒柄花素片用0.5％的羧甲基纤维素钠溶液混悬。
2.2动物建模与分组36只SD大鼠随机分为6组，每组六只。分别为正常组(A)，SAP模型组(B)，地塞米松治疗组(C，剂量为5mg.Kg-1)，三个不同剂量的芒柄花素治疗组(D～F)，对应剂量分别为：低剂量组(50mg.Kg-1)、中剂量组(100mg.Kg-1)、高剂量组(200mg.Kg-1)。实验前24h，动物禁食，不禁水。实验开始后，每小时按100μg.Kg-1的剂量给大鼠腹腔注射雨蛙素一次，连续6次。最后一次注射雨蛙素后，立即按10mg.Kg-1的剂量给大鼠腹腔注射脂多糖，诱导建立重症急性胰腺炎模型。造模完成5min后，芒柄花素治疗组通过灌胃给予芒柄花素，每只2mL.3h-1，连续3次。地塞米松治疗组通过灌胃给予同等剂量的地塞米松，正常和SAP组给予同等剂量的空白片剂(不含芒柄花素)的0.5％羧甲基纤维素钠混悬液。
2.3组织病理学观察造模完成12h后，将大鼠称重，麻醉，采用颈椎脱臼法处死大鼠，刨腹取胰腺，称其湿重。剪取靠近十二指肠部位的胰腺组织，用4％的多聚甲醛，制作病理切片，H&E染色，观察实验动物胰腺的病理改变情况。
2.4免疫组化检测将石蜡包埋的胰腺组织切片在62℃下加热1h以进行脱蜡，然后复水，再用Tris-EDTA/柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复。再依次与3％的过氧化氢孵育15min、滴加5％BSA封闭液后孵育30min。滴加NF-κB p65抗体，4℃过夜。辣根过氧化酶标记的二抗，37℃孵育30min。最后，依次用DAB染色、用苏木精复染、加1％盐酸盐和乙醇进行分色、洗涤20min，最后进行检测分析，获得图像用Image j软件分析积分光密度(IOD)。
2.5 Western Blot分析通过蛋白质印迹法在胰腺组织的蛋白质提取物中检测大鼠胰腺蛋白质IκBα，p65，p-p65，TIPE2和PCNP，过程如下：用手术剪刀将大鼠胰腺样品切成约3mm×3mm的小块，每片浸入0.5mL的冷RIPA裂解缓冲液(其中含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂)中。通过将样品上下移动15次直至样品材料完全均质。将组织匀浆转移至预冷的离心管中，并在4℃下以12,000rpm离心10分钟。将上清液转移至新的预冷离心管中，并使用BCA法进行蛋白定量。将提取的蛋白质与5x缓冲液混合，煮沸5分钟，冷却，通过SDS-PAGE在10％聚丙烯酰胺凝胶中分离蛋白质样品(25μg)，并将其转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)。室温下用5％(w/v)BSA封闭2小时。用于酯交换印迹的一抗是抗p65抗体(1：1000)，抗p-p65抗体(1：1000)，抗IκBα抗体(1：1000)，抗TIPE2抗体(1：1000)，抗PCNP抗体(1：1000)和抗GAPDH抗体(1：1000)。抗GAPDH用作内部样品对照。使用化学发光测定法检测蛋白质，通过Image j测量每个条带的灰度值。
3结果
3.1芒柄花素对胰腺病理改变的影响见图1。与A组相比，B组的胰腺组织均出现明显的充血现象，说明造模成功，且与B组相比，C～F组的胰腺组织的充血现象均有明显改善，说明醋酸地塞米松、芒柄花素对大鼠重症急性胰腺炎病理现象均有所改善，而D～F组的结果同时说明芒柄花素对雨蛙素联合脂多糖诱导的SAP大鼠有治疗作用。
3.2免疫组化检测结果见图2。从图中可以看出，与A组空白对照组相比，大鼠造模后NF-κB p65均有明显的阳性表达，而D、E、F组NF-κB p65的阳性表达又明显低于B组，说明芒柄花素可降低NF-κB p65的阳性表达。
3.3芒柄花素对NF-κB信号通路的影响见图3～图4。Western Blot分析结果显示，尽管芒柄花素三个剂量组之间NF-κB和p65的总量没有显著差异，但磷酸化p65(p-p65)和PCNP的表达降低，而IκBα和TIPE2的表达明显高于模型组。这些结果表明，芒柄花素可能通过阻断NF-κB途径，从而对雨蛙素联合脂多糖诱导的SAP大鼠起保护作用。
由以上实施例可以得出，芒柄花素对雨蛙素联合脂多糖诱导产生的大鼠SAP有明显的保护作用，其显示的作用机制之一是抑制NF-κB信号通路，升高IκBα水平，从而降低促炎因子的表达。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.芒柄花素在制备防治重症急性胰腺炎的药物中的应用。
2.一种防治重症急性胰腺炎的片剂，其特征在于，包括以下重量份数的组分：芒柄花素80～120份、糖粉20～30份、乳糖30～40份、羧甲基淀粉钠45～55份和硬脂酸镁10～20份。
3.一种防治重症急性胰腺炎的滴丸，其特征在于，包括以下重量份数的组分：
芒柄花素20～30份、PEG400 5～15份、PEG4000 10～20份、羧甲基淀粉钠0.5～1.5份和聚维酮K30 0.005份。
4.一种防治重症急性胰腺炎的注射乳剂，其特征在于，包括以下重量份数的组分：
芒柄花素45～55份、大豆油200～300份、磷脂45～55份、油酸5～15份、泊洛沙姆5～15份和甘油80～120份。
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