CN115634262B - 一种抗炎组合物及其用途与制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明“一种抗炎组合物及其用途与制备方法”属于食品保健或药品领域。特别涉及。所述一种抗炎组合物包括抗炎活性成分；所述抗炎活性成分包括：酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物和蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.‑Mazz.。本发明首次提出酸竹属的抗炎药用价值，同时提出了酸竹属植物与蒲公英的配方组合，并通过实验证实该配方在乳腺增生、过氧化损伤方面的显著疗效。
Description
技术领域
本发明属于食品保健或药品领域，特别涉及一种抗炎组合物及其用途与制备方法。
背景技术
酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao属于禾本科，目前共6种，其中5种分布于中国南部及中南半岛，它们是：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta，还有一种A.brilletii(A.Camus)C.S.Chao et S.A.Renv.分布于越南。酸竹的竿可供造纸或篾用，笋可食用，但目前尚未报道酸竹属植物的药用价值及保健价值。
蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.属于菊科，蒲公英属多年生草本植物，别名黄花地丁、婆婆丁、华花郎等。蒲公英是一种公知的抗氧化的中药材。
有关酸竹属植物与蒲公英的配伍目前尚未见报道，而酸竹属植物的抗炎报道更是一片空白。
发明内容
基于上述领域的空白，本发明意外发现酸竹属植物的药用新用途，并提供一种酸竹属植物与蒲公英配伍的抗腺体炎症的组合物及其制备方法。
发明的技术方案如下：
一种抗炎组合物，其特征在于，包括抗炎活性成分；所述抗炎活性成分包括：酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物和蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.。
所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta。
所述组合物通过抗氧化作用对抗腺体炎症；
优选地，所述组合物通过酸竹属植物发挥所述抗氧化作用或通过酸竹属植物增强或提升蒲公英的抗氧化作用；
优选地，所述腺体炎症选自：甲状腺炎、乳腺炎、甲状腺结节、乳腺结节、前列腺炎。
酸竹属植物与蒲公英的重量配比为1-9∶9-1；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、6∶9、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5；
优选地，所述一种抗炎组合物还包括食品添加剂或药用辅料；
优选地，所述食品添加剂选自：防腐剂、着色剂、食品香料、增稠剂、稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸味剂、增白剂；
优选地，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂；
优选地，所述一种抗炎组合物为食品或药物；
优选地，所述一种抗炎组合物的剂型选自：口服液、压片糖果、代用茶、凝胶糖果。
酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物在制备抗炎药方面的用途。
所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，所述抗炎药的适应症选自腺体炎症；所述腺体炎症优选乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等。
酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物与蒲公英的组合在制备抗炎药方面的用途。
所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，所述抗炎药的适应症选自腺体炎症；所述腺体炎症优选乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等；
优选地，所述酸竹属植物与蒲公英的组合中，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为：1-9∶9-1；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、6∶9、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5。
一种抗炎组合物的制备方法，其特征在于，采用酸竹属植物做为抗炎活性成分。
采用酸竹属植物与蒲公英做为抗炎活性成分；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为：1-9∶9-1；
优选地，所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，将酸竹属植物的叶片或地下茎、与蒲公英的干燥全草按重量配比混合得到混合原料药，采用水煮法对混合原料药进行提取得到抗炎活性成分。
在一些国家或地区的专利法允许的情况下，本发明还请求保护酸竹属植物在抗炎方面的新用途。
本发明还请求保护酸竹属植物与蒲公英的组合物在抗炎方面的新用途。
在一些实施例中，所述抗炎指对抗腺体炎症。
在具体的实施例中，所述腺体炎症选自：乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等。
所述氧化损伤指D-半乳糖诱导的氧化损伤。
发明人在某次食疗中意外发现添加了酸竹一起煎煮的蒲公英汤在抗炎方面具有更显著的疗效，发明人推测有如下2种可能：1.酸竹本身具有抗炎作用，2.酸竹的添加增强了蒲公英的抗炎作用，因此，顺着这2个思路，发明人对酸竹属的药理作用进行相关实验验证。经大量细胞水平实验和动物实验证实，酸竹属植物不仅本身具有抗炎作用，而且还能放大和增强蒲公英的抗炎作用，因此提出本发明。本发明验证了酸竹属和蒲公英的配方在对抗腺体炎症方面的功效，首次提出酸竹属植物的抗氧化作用，它单独使用有一定的抗炎功效，而当它与蒲公英组合使用是能使二者的抗炎效果进一步显著提升，最终达到抗炎目的。本发明提出了酸竹属植物与蒲公英的配方组合，并通过实验证实该配方在腺体炎症(例如乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等)方面的显著疗效。
附图说明
图1为本发明实验例1各组干预结束的体重和干预期间的摄食量对比图。
图2为本发明实验例1干预后各组实验动物左右两侧乳头直径和高度的对比图；其中(A)左侧乳头直径；(B)左侧乳头高度；(C)右侧乳头直径；(D)右侧乳头高度。
图3为本发明实验例1干预后各组实验动物血清泌乳素水平的对比图。
图4为本发明实验例1干预后各组实验动物血清雌二醇水平的对比图。
图5为本发明实验例1干预后各组实验动物血清孕酮水平的对比图。
图6为本发明实验例2各组的CD8+T细胞水平的流式细胞分析图。
图7为本发明实验例2各组的CD3+T细胞和CD4+T细胞水平的流式细胞分析图。
图8为本发明实验例2各组的CD8+T细胞和CD4+T细胞水平的对比图。
图9为本发明实验例2各组的CD4+/CD8+T淋巴细胞占比的比值的对比图。
图10为本发明实验例2各组的血清MDA水平的对比图。
图11为本发明实验例2各组的血清SOD水平的对比图。
图12为本发明实验例2各组的血清CAT水平的对比图。
图13为本发明实验例2各组的血清GSH水平的对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的具体内容做进一步的详细描述，但并不以此限制本发明的保护范围。
生物材料的来源
本发明实验例1-2使用的酸竹属植物：酸竹A.chinensis的叶片采集自广东阳春河尾山；毛花酸竹A.hirtiflora采集自云南屏边县；
蒲公英购自内蒙古华蒲科技有限公司；
大鼠和小鼠均可商购获得。
第1在实施例、本发明的抗炎组合物
本组实施例提供一种抗炎组合物，其特征在于，包括抗炎活性成分；所述抗炎活性成分包括：酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物和蒲公英Taraxacum mongolicumHand.-Mazz.。
本领域技术人员可根据本发明的教导，将本发明以含有酸竹属、蒲公英为活性成分的抗炎组合物与本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质/组方/原料药进行组合使用或联用，能获得预期的抗炎效果，均落入本发明的保护范围。所述本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质可以是：阿司匹林、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、萘普生、萘普酮、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布、塞来昔布等；所述本领域其它具有抗炎活性的组方可以是中医领域已报道的具有消肿散结功效的组方，例如，仙方活命饮、大黄牡丹皮汤等；所述本领域其它具有抗炎活性的原料药可以是中医领域公知的具有消肿散结功效的原料药，例如，可以是：皂角刺、穿山甲、芒硝等。
在具体的实施例中，所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta。
在优选的实施例中，所述组合物通过消肿散结作用对抗腺体炎症；
优选地，所述组合物通过酸竹属植物发挥所述消肿散结作用或通过酸竹属植物增强或提升蒲公英的消肿散结作用；
优选地，所述腺体炎症选自：乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等。所述氧化损伤指D-半乳糖诱导的氧化损伤。
在一些实施例中，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为1-9∶9-1；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、6∶9、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5；
优选地，所述一种抗炎组合物还包括食品添加剂或药用辅料；
优选地，所述食品添加剂选自：防腐剂、着色剂、食品香料、增稠剂、稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸味剂、增白剂；
优选地，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂；
优选地，所述一种抗炎组合物为食品或药物；
优选地，所述一种抗炎组合物的剂型选自：口服液、压片糖果、代用茶、凝胶糖果。
第2组实施例、本发明酸竹属的制药新用途
本组实施例提供酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物在制备抗炎药消肿散结功效保健食品方面的用途。
本领域技术人员可基于本发明的启示，将酸竹属植物与本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质/组方/原料药进行组合使用或联用，能获得预期的抗炎或消肿散结的效果，均落入本发明的保护范围。所述本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质可以是：阿司匹林、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、萘普生、萘普酮、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布、塞来昔布等；所述本领域其它具有抗炎活性的组方可以是中医领域已报道的具有消肿散结功效的组方，例如，仙方活命饮、大黄牡丹皮汤等；所述本领域其它具有抗炎活性的原料药可以是中医领域公知的具有消肿散结功效的原料药，例如，可以是：蒲公英、皂角刺、穿山甲、芒硝等。
在具体的实施例中，所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，所述抗炎药的适应症选自腺体炎症；所述腺体炎症优选乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等。
在优选的实施例中，除酸竹属植物之外，所述抗炎药还包括药用辅料；
在另一些实施例中，除酸竹属植物之外，所述消肿散结功效保健食品还包括食品添加剂。
在更具体的实施例中，所述食品添加剂选自：防腐剂、着色剂、食品香料、增稠剂、稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸味剂、增白剂；
在具体的实施例中，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂；
在一些实施例中，所述抗炎药或消肿散结功效保健食品的剂型选自：口服液、压片糖果、代用茶、凝胶糖果。
在本发明的一些实施例中，可将酸竹属植物与蒲公英配伍制成所述抗炎药或消肿散结功效保健食品。
在进一步的实施例中，在所述酸竹属植物与蒲公英配伍中，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为：1-9∶9-1；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、6∶9、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5。
第3组实施例、本发明酸竹+蒲公英组合的制药新用途
本组实施例提供酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物与蒲公英Taraxacummongolicum Hand.-Mazz.的组合在制备抗炎药或抗氧化功能的保健食品方面的用途。
本领域技术人员可基于本发明的启示，将酸竹属植物+蒲公英的组合/配方/组方与本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质/组方/原料药进行组合使用或联用，能获得预期的抗炎或抗氧化的效果，均落入本发明的保护范围。所述本领域其它具有抗炎活性的成分/组分/物质可以是：阿司匹林、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、萘普生、萘普酮、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布、塞来昔布等；所述本领域其它具有抗炎活性的组方可以是中医领域已报道的具有抗氧化功效的组方，例如，仙方活命饮、大黄牡丹皮汤等；所述本领域其它具有抗炎活性的原料药可以是中医领域公知的具有抗氧化功效的原料药，例如，可以是：皂角刺、穿山甲、芒硝等。
蒲公英，又名公英、黄花地丁，为菊科蒲公英属多年生草本植物。全国各地均有分布，是我国常见的野生蔬菜和中草药，也被列入国家卫建委公布的“药食同源”名单之中。我国传统医籍《新修本草》记载，“蒲公英，主妇人乳痈肿”。现代药理研究表明蒲公英具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、利胆健胃等作用。
在具体的实施例中，所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，所述抗炎药的适应症选自腺体炎症；所述腺体炎症优选乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤等；所述氧化损伤指D-半乳糖诱导的氧化损伤。
优选地，所述酸竹属植物与蒲公英的组合中，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为：1-9∶9-1；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、6∶9、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5。
在优选的实施例中，除酸竹属植物与蒲公英之外，所述抗炎药还包括药用辅料；
在另一些实施例中，除酸竹属植物与蒲公英之外，所述抗氧化功效保健食品还包括食品添加剂。
在更具体的实施例中，所述食品添加剂选自：防腐剂、着色剂、食品香料、增稠剂、稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸味剂、增白剂；
在具体的实施例中，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂；
在一些实施例中，所述抗炎药或抗氧化功效保健食品的剂型选自：口服液、压片糖果、代用茶、凝胶糖果。
第4组实施例、本发明抗炎组合物的制备方法
本组实施例提供一种抗炎组合物的制备方法，其特征在于，采用酸竹属植物做为抗炎活性成分。
在进一步的实施例中，采用酸竹属植物与蒲公英做为抗炎活性成分；
优选地，酸竹属植物与蒲公英的重量配比为：1-9∶9-1；
在更具体的实施例中，酸竹属植物与蒲公英的重量配比选自：1∶9、2∶9、1∶3、4∶9、5∶9、2∶3、7∶9、8∶9、1∶1、1∶8、1∶4、3∶8、1∶2、5∶8、3∶4、7∶8、1∶7、2∶7、3∶7、4∶7、5∶7、6∶7、1∶6、2∶3、5∶6、1∶5、2∶5、3∶5、4∶5。
优选地，所述酸竹属Acidosasa C.D.Chu et C.S.Chao植物选自下述植物中的一种或两种或两种以上：粉酸竹A.chienouensis、酸竹A.chinensis、毛花酸竹A.hirtiflora、福建酸竹A.longiligula、黎竹A.venusta；
优选地，将酸竹属植物的叶片、与蒲公英的干燥全草按重量配比混合得到混合原料，采用水煮法(即普通中药的煎煮法)对混合原料进行提取得到抗炎活性成分。
在优选的实施例中，所述一种抗炎组合物还包括食品添加剂或药用辅料；
在更具体的实施例中，所述食品添加剂选自：防腐剂、着色剂、食品香料、增稠剂、稳定剂、膨松剂、甜味剂、酸味剂、增白剂；
在具体的实施例中，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂；
在优选的实施例中，所述一种抗炎组合物为食品或药物；
在另一些实施例中，所述一种抗炎组合物的剂型选自：口服液、压片糖果、代用茶、凝胶糖果。
在优选的实施例中，所述抗炎药的适应症选自腺体炎症；所述腺体炎症优选乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤。所述氧化损伤指D-半乳糖诱导的氧化损伤。
第5组实验例、酸竹属植物的抗炎新用途
本组实施例提供酸竹属植物在抗炎方面的新用途。
本组实施例还进一步提供酸竹属植物与蒲公英的组合物在抗炎方面的新用途。
在一些实施例中，所述抗炎指对抗腺体炎症。
在具体的实施例中，所述腺体炎症选自：乳腺增生、乳腺炎、氧化损伤。所述氧化损伤指D-半乳糖诱导的氧化损伤。
实验例1、本发明的抗炎组合物对乳腺增生模型动物的干预效果评价
1材料
1.1实验材料与试剂
抗炎组合物为酸竹A.chinensis的干燥叶片、与蒲公英的干燥全草按重量配比1∶1混合得到混合原料，采用水煮法(即普通中药的煎煮法)对混合原料进行提取得到抗炎活性成分。水与混合原料的重量配比为1∶1。
雌二醇注射液(规格，厂家，批号)，黄体酮注射液，他莫昔芬，戊巴比妥，苏木素-伊红(HE)染色液(厂家，批号)；免疫组化抗体；孕酮(P)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)ELISA试剂盒。
1.2仪器
游标卡尺；石蜡包埋机，转式切片机，SpectraMaxM2多功能酶标仪，美国美谷分子仪器有限公司；5810R低温离心机，Eppendorf公司；EclipseCi-L正置白光拍照显微镜，Nikon公司。
1.3实验动物
SPF级健康SD大鼠，雌性未孕，190-200g，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司(实验动物使用许可证号：SCXK(京)2019-0010)。所有动物均正常饲养，自由饮水、进食，饲养温度24～26℃，相对湿度40％～60％。
2方法
2.1乳腺增生动物模型的建立
大鼠适应性喂养7d后，均给予苯甲酸雌二醇注射液(0.5mg/kg，肌内注射)，每日1次，连续25d；然后给予黄体酮注射液(5mg/kg，肌内注射)，每日1次，连续5d，建立大鼠乳腺增生模型。本实验选择以乳腺腺泡增生为造模成功的主要评判依据。
2.2实验设计
将60只雌性未孕SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、抗炎组合物低剂量组(灌胃剂量：5ml/kg，相当于人50ml/天)、抗炎组合物中剂量组(灌胃剂量：11ml/kg，相当于人100ml/天)，抗炎组合物高剂量组(灌胃剂量：21ml/kg，相当于人200ml/天)，阳性对照组(1.8mg/kg·d他莫昔芬)，每组10只。除空白组每只大鼠每日肌肉注射0.9％生理盐水0.2mL(连续注射30d)外，其余5组复制乳腺增生大鼠模型。造模成功后，给予相应的药物灌胃处理，正常组和模型组给予相同剂量的蒸馏水，持续30天。末次给药后禁食12h，各组动物用1％戊巴比妥钠溶液(30mg/kg)进行腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，以3000r·min-1离心15min，分离出血清，保存于-80℃，用于激素水平的测定。
2.3检测指标
2.3.1大鼠乳头高度及直径测量造模结束和给药结束后，测量大鼠第二对乳头高度和直径。
2.3.2乳腺组织病理学检测大鼠取血后处死，每组随机抽取6只，取下右侧第2对乳头及周围乳腺组织样本，置于4％多聚甲醛中固定组织标本，再经过选块、脱水，包埋制成蜡块，后切成3μm切片，最后采用HE染色，封片，进而在显微镜下观察动物乳腺组织病理切片。
2.3.3免疫组化测定大鼠乳腺组织蛋白表达大鼠处死之后，取下胸部第2对右侧乳头及周围乳腺组织样本，置于4％多聚甲醛中固定组织标本。使用二甲苯以及梯度浓度乙醇脱蜡，蒸馏水浸泡。再使用高压锅进行抗原热修复后使用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次。每张切片加1滴正常非免疫血清，37℃孵育30min，滴加一抗(PR1∶400，ERα+β1∶200)，4℃孵育过夜。使用PBS洗涤3次，每张切片加1滴二抗(与一抗相对应的生物素标记的山羊抗兔免疫球蛋白G(1∶25)，37℃孵育40min。使用PBS浸泡洗涤3次，每张切片滴加1滴辣根过氧化酶标记的链亲和素溶液(1∶200)，置于37℃孵育40～50min。最后使用PBS洗涤3次，在每张切片上滴加2滴新配制的DAB工作液，显微镜下观察随时终止反应。最后使用蒸馏水浸泡5min，苏木素(1∶25)复染10min，蒸馏水浸泡5min，晾干，中性树胶封固。以细胞质和(或)细胞核内出现棕黄色颗粒作为阳性细胞，每例样本选取5个高倍镜视野进行统计，采用Image-ProPlus软件测量棕黄色区域的积分光密度值(IOD)。
2.3.4血清激素水平测定
血清中孕酮(P)，雌二醇(E2)，泌乳素(PRL)含量按照ELISA试剂盒说明书操作测定。
2.4统计学处理
采用SPSS20.0软件系统统计分析，计量资料采用均数±标准差表示。多组间比较采用单因素分析，组间两两比较是否齐性，方差齐用LSD分析，方差不齐用Dunnett’sT3分析。P<0.05为差异有统计学意义。
3结果
3.1试验期间实验动物的摄食量和体重情况
基线时期，对照组的体重为(215.8±8.7)g，模型组为(216.8±9.3)g，两者差异不具有统计学意义；造模后对照组的体重为(282.0±27.4)g，模型组为(258.6±25.8)g，使用雌二醇和黄体酮造模后，造模组大鼠体重明显低于空白组。干预期间，各组实验动物的体重结果见图1。干预结束，各组实验动物的体重无明显差异。实验期间，各组实验动物的摄食量，只有在干预第3周时，低剂量组与空白对照、阳性对照组和模型组存在明显差异，而其余各组间无明显差异，其余时期均无明显差异。
3.2干预后实验动物的两侧乳头高度、直径和比值
干预后各组实验动物左右两侧乳头直径和高度结果如图2所示。模型组左侧乳头的直径、高度，以及右侧高度均呈现出显著高于空白对照组。抗炎组合物低剂量组干预后，与模型组比较，左侧乳头直径、右侧乳头直径、右侧乳头高度均显著下降(P<0.05)；左侧乳头高度，与模型组和空白对照组均没有差异。与蒲公英中剂量组、高剂量组相比较，抗炎组合物低剂量组表现出更明显的下降趋势，但是差异没有统计学意义。
将干预前后乳头高度、直径的变化情况进行比较，结果见表1。结果表明，干预期间，没有雌激素和孕激素的刺激，模型组的乳头的肿胀程度也在变小；与模型组的变化值相比较，蒲公英低剂量组不论是左右两侧的高度，还是左侧的直径都表现出更为明显的减少程度，结果具有统计学意义。
表1.干预前后乳头高度、直径和比值变化情况比较
注：#代表与正常对照组有统计学差异；*代表与模型对照组有统计学差异。
3.3干预后实验动物血清泌乳素、雌二醇、孕酮水平
图3-5显示的是干预后各组实验动物血清泌乳素、雌二醇、孕酮水平。结果表明雌激素和孕激素造模处理后，经过30天干预时期，模型组的泌乳素和孕酮水平依然处于较高的血清水平，但是血清雌二醇水平与空白对照组比较，差异没有统计学意义。
与模型组比较，抗炎组合物低剂量组表现出明显降低血清泌乳素水平的效果(P<0.05)，其血清泌乳素水平与空白对照组、阳性对照组水平比较，差异不具有统计学意义(P>0.05)。
此外，抗炎组合物低剂量组的血清泌乳素水平和孕酮水平明显低于高剂量组(P<0.05)。
干预后各组实验动物的雌二醇水平，差异没有统计学意义。
实验例2、本发明的抗炎组合物对体内体外抗炎抗氧化效果评价
1材料
1.1实验材料与试剂
抗炎组合物为毛花酸竹A.hirtiflora的干燥叶片、与蒲公英的干燥全草按重量配比9∶1混合得到混合原料，采用水煮法(即普通中药的煎煮法)对混合原料进行提取得到抗炎活性成分。水与混合原料的重量配比为1∶1。
D-半乳糖注射液(规格，厂家，批号)；超氧化物歧化酶(SOD)活性试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)活性试剂盒、丙二醛(MDA)含量试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司、小鼠淋巴细胞及其亚群抗体CD4+FITC(美国Affymetrix公司)。
1.2仪器
游标卡尺；石蜡包埋机，转式切片机，SpectraMaxM2多功能酶标仪，美国美谷分子仪器有限公司；5810R低温离心机，Eppendorf公司；EclipseCi-L正置白光拍照显微镜，Nikon公司。
7270-G可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、TGL-16M高速台式冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)、数显恒温水浴锅DK-S26(上海三发科学仪器有限公司)、DYY-7C型电泳仪(北京市六一仪器厂)、BS-124S电子天平(德国赛多利斯股份公司)、TH-86-340-LA-(80℃)超低温冰箱(北京天地精仪科技有限公司)、TS-DI-20L/H实验室超纯水设备(陶氏水处理设备工程有限公司)、AppliedbiosystemsPCR仪(美国应用生物系统公司)。
1.3实验动物
SPF级ICR健康成年小鼠，8-10周龄，25-30g，雄性，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司(实验动物使用许可证号：SCXK(京)2019-0010)。所有动物均正常饲养，自由饮水、进食，饲养温度24～26℃，相对湿度40％～60％。
2方法
2.1D-半乳糖氧化损伤模型的建立
25-30g健康成年小鼠适应性喂养7d后，均给予D-半乳糖注射液(40mg～1.2g/kg，腹腔注射)，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续6周，取血测MDA，按MDA水平分组。
2.2实验设计
实验选用雄性成年小鼠50只，分别设空白组，模型组、抗炎组合物低剂量组(灌胃剂量：10ml/kg，相当于人100ml/天)、抗炎组合物中剂量组(灌胃剂量：20ml/kg，相当于人100ml/天)，抗炎组合物高剂量组(灌胃剂量：40ml/kg，相当于人100ml/天)，每组10只。
除空白组外，其余动物用D-半乳糖40mg～1.2g/kg腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。空白组给予0.9％生理盐水0.1mL/10g(连续注射30d)，模型组和各剂量组在给受试样品的同时，继续给予相同剂量D-半乳糖腹腔注射。实验30d后，禁食24h，断颈处死，取血液，离心制备血清。检测血液淋巴细胞活性、脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原型谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。
2.3检测指标
2.3.1淋巴细胞活性
取血后处死，每组随机抽取6只，对样本的血清，置于4％多聚甲醛中固定组织标本，再经过选块、脱水，包埋制成蜡块，后切成3μm切片，最后采用HE染色，封片，进而在显微镜下观察血液病理切片，T淋巴细胞亚群计数。
2.3.2脂质氧化产物测定
丙二醛(MDA)含量，按试剂盒说明书要求进行测定。
2.3.3还原型谷胱甘肽含量
抗氧化酶(SOD、GSH和CAT)活性，按试剂盒说明书要求进行测定。
2.4统计学处理采用SPSS20.0软件系统统计分析，计量资料采用均数±标准差表示。多组间比较采用单因素分析，组间两两比较是否齐性，方差齐用LSD分析，方差不齐用Dunnett’sT3分析。P<0.05为差异有统计学意义。
3结果
3.1血液T淋巴细胞亚群计数检测
采用流式细胞分析技术。结果见下图6-图9。
与空白对照组比较，D-半乳糖造模的模型组，CD8+T淋巴细胞占外周血总T淋巴细胞的比例明显减少了，CD4+T淋巴细胞占总T淋巴细胞的比例明显增加了。与模型组比较，抗炎组合物干预后，低、中、高剂量均显著降低了CD4+T淋巴细胞的比例；另外，低剂量组和高剂量组还显示出增加CD8+T淋巴细胞比例的效果；抗炎组合物干预后，低、中、高剂量均显著降低了CD4+/CD8+T淋巴细胞占比的比值。图7显示的CD3+为流式细胞分析的原始数据图表，图8和图9的CD4+、CD8+、以及CD4+/CD8+比值这些结果的得到是基于CD3+的原始数据计算得到的。
3.2血清MDA水平
如图11所示，与空白对照组比较，D-半乳糖造模的模型组，血清MDA水平升高了，抗炎组合物低剂量组和高剂量组表现出较模型组更低的血清MDA水平，此水平与空白对照组，差异具有统计学意义。
3.3血清SOD、GSH水平
如图11-13所示，与空白对照组比较，D-半乳糖造模的模型组，血清SOD、CAT、GSH水平显著降低了。与模型组比较，抗炎组合物低剂量组显著增加了血清SOD、CAT和GSH水平；高剂量组表现出了增加血清SOD和GSH的效果，中剂量组仅增加了GSH水平。而这三个指标，抗炎组合物低、中、高剂量组之间，差异没有统计学意义。
Claims (4)
1.一种抗炎组合物在制备治疗乳腺增生的药物方面的用途，其特征在于，所述一种抗炎组合物的活性成分由酸竹A .chinensis与蒲公英Taraxacum mongolicum Hand .-Mazz.按重量配比1∶1混合通过水煮法制备得到。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述一种抗炎组合物通过消肿散结作用对抗乳腺增生。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述一种抗炎组合物还包括药用辅料。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂。
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Citations (1)
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| CN113425757A (zh) * | 2021-06-08 | 2021-09-24 | 中国中医科学院中医基础理论研究所 | 一种蒲公英提取物及其制备方法和应用 |
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2022
- 2022-09-30 CN CN202211207217.0A patent/CN115634262B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113425757A (zh) * | 2021-06-08 | 2021-09-24 | 中国中医科学院中医基础理论研究所 | 一种蒲公英提取物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Jin-Wen,Huang et al..The Extract from Acidosasa longiligula Alleviates in vitro UV-Induced Skin Cell Damage via Positive Regulation of Thioredoxin 1..Clinical interventions in aging.2020,第15卷897-905. * |
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