CN113197948B

CN113197948B - 荆防制剂在制备预防或治疗甲状腺疾病药物中的用途

Info

Publication number: CN113197948B
Application number: CN202110613060.0A
Authority: CN
Inventors: 张贵民; 关永霞; 程国良
Original assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Current assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Priority date: 2021-03-20
Filing date: 2021-06-02
Publication date: 2023-01-03
Anticipated expiration: 2041-06-02
Also published as: CN113197948A

Abstract

本发明属于中药领域，具体公开了一种了荆防制剂在制备预防或治疗甲状腺疾病药物中的用途，所述荆防制剂由荆芥、防风、羌活、独活、柴胡、前胡、川芎、枳壳、茯苓、桔梗、甘草11味原料药材制成，具辛散解肌、降气开肺、祛痰渗湿功效。本发明荆防制剂能显著抑制体内外结节性甲状腺肿细胞的增殖，且作用24h后能够显著抑制体外结节性甲状腺肿细胞的分泌功能，标本兼治，对结节性甲状腺肿有确切的治疗作用。

Description

荆防制剂在制备预防或治疗甲状腺疾病药物中的用途

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种中药组合物荆防制剂的新用途，具体涉及荆防制剂在制备预防或治疗甲状腺疾病药物中的用途。

背景技术

随着人们生活知识以及对健康的理解，现在大部分食盐已变成了低碘钠盐，从某种程度上说降低了甲状腺疾病的发生，比如甲状腺结节，甲状腺癌等。其中甲状腺结节的突出临床表现为结节性甲状腺肿，其病变实际上是指单纯性甲状腺肿晚期所形成的多发结节，该病发病率很高，且发病原因很容易忽视。

结节性甲状腺肿是甲状腺结节的一种临床表现，具有甲状腺癌转化风险，其发病机理是由各种原因引起垂体促甲状腺激素分泌增加，不断刺激甲状腺反复或持续增生，导致复旧不平衡，进而纤维组织增生分隔使甲状腺组织形成多发结节。患者多数无自觉症状，少数颈前有不适感，肿大明显者可有压迫症状，出现呼吸困难、吞咽困难和声嘶等。由于生活节奏的加快和生活方式的转变，人们精神压力增大、夜生活增多，导致结节性甲状腺肿的发病率急剧上升，而健康体检制度的完善和检测手段的发展，又促使结节性甲状腺肿的检出率明显升高，这些意味着迫切需要更多低成本、疗效好、副作用小的结节性甲状腺肿治疗手段。

目前，西医治疗结节性甲状腺肿的方法主要包括手术治疗、甲状腺激素抑制治疗、碘131治疗、超声引导下经皮无水酒精注射和激光消融等。但是，这些方法有的损伤正常组织，并且大多长期使用可导致多种不良反应，如甲减、恶变、疼痛、组织纤维化和复发率高等，严重限制它们在临床的长期应用。中药以中药材为原料，以传统中药思想为指导，讲究“君臣佐使”、“配伍”和“中和”，具有毒副作用相对较小的优点，而以中药为基础制得的中成药，兼具中药毒副作用小这一优点的同时，又具备性质稳定，疗效确切，服用、携带、贮藏保管方便等特点。因此，用中药及其中成药治疗代替西医治疗用于结节性甲状腺肿的治疗，可能是一条避免西医治疗长期使用易导致诸多不良反应的潜在有效又便捷的途径。

中医认为结节性甲状腺肿的主要病理表现是脾失健运，肝郁气滞，气血疾滞，痰湿内生，痰湿凝结颈前，病久致血脉瘀阻，成气、痰、瘀三者合而为患。荆防制剂来源于古方荆防败毒散，由荆芥、防风、羌活、独活、柴胡、前胡、川芎、枳壳、茯苓、桔梗、甘草十一味原料药材制成，主要具有辛散解肌、降气开肺、祛痰渗湿的功效。能够有效治疗风寒感冒等相关疾病，现有技术表明，荆防颗粒对于治疗或预防冠状病毒感染疾病有一定疗效，并且对扁平疣、荨麻疹、皮肤瘙痒等相关疾病有确切疗效。因此关于荆防制剂产品的临床应用需要进一步开发研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种荆防制剂的新用途，特别是制备预防和/或治疗甲状腺疾病药物中的新用途。

本发明处方荆防制剂来源于古方荆防败毒散，依托现有技术制备了荆防颗粒、荆防片剂、警方胶囊剂等系列荆防制剂。其中荆防颗粒和剂荆防合剂属于已上市产品，其中荆防颗粒由山东新时代有限公司生产，荆防合剂由鲁南厚普制药有限公司生产。

本发明的目的在于提供一种荆防制剂在制备预防和/或治疗甲状腺疾病药物中的用途。

优选地，所述的甲状腺疾病为甲状腺功能亢进症、急性甲状腺炎症、亚急性甲状腺炎症、慢性甲状腺炎症、甲状腺肿、甲状腺瘤中的一种或几种。

进一步优选地，所述的甲状腺疾病为甲状腺肿。

所述甲状腺肿为单纯性甲状腺肿或结节性甲状腺肿，进一步优选为结节性甲状腺肿。

本发明所述的荆防制剂包括如下的中药组成成分：

更进一步地，所述的荆防制剂包括如下的中药组成成分：

本发明所述的荆防制剂为口服制剂，进一步地，采用上述中药成分及药学上可接受的辅料制备成片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、粉剂、胶囊剂、微囊剂、合剂、口服液中的一种或几种。

进一步地，所述的荆防制剂为颗粒剂或合剂。

更进一步地，所述的荆防制剂为荆防颗粒或荆防合剂。

应当说明的是，本发明的发明用途已上市产品荆防颗粒或荆防合剂，采用本发明的技术方案制备的其他荆防制剂均具有制备抗血栓药物的用途。下面将进一步说明本发明所述荆防制剂的制备方法。

所述的中药口服制剂的制备方法包括以下步骤：

A.荆芥、防风、羌活、独活、前胡、川芎和枳壳7味药材分别提取挥发油，分别得7种药材挥发油，蒸馏后的药渣、川芎和枳壳蒸馏后的水溶液备用；

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成20～30％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草三味加水煎煮2～3次，每次1.5～2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.18～1.25的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.22～1.28的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏及步骤B所得β-环糊精包合物，经常规工序直接或加入药学上可接受的赋形剂制成口服药物制剂。

本发明优选的剂型是颗粒剂，所述颗粒剂的制备方法包括下列步骤：

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成25％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草三味加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.23的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.26的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的重量比为蔗糖粉：羟丙基淀粉：甘露醇＝3：2：0.5的赋形剂，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，即得。

本发明另一种优选的剂型是微丸制剂，所述微囊制剂的制备方法包括下列步骤：

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎及枳壳蒸馏后的水溶液配成28％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮2次，每次2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.22的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.25的浸膏；

F.取步骤E所得清膏，加入步骤B所得环糊精包合物，混匀，制成颗粒，带式真空干燥，粉碎，得荆防提取物细粉，备用；

G.按配方量称取步骤F荆防提取物细粉、囊材、抗粘剂和增塑剂，将囊材、抗粘剂和增塑剂加入纯化水，54℃条件下加热搅拌使溶解，配置成质量分数为33％的囊材溶液，冷却至室温，搅拌状态下加入荆防提取物细粉和乳化剂，均质乳化，得乳化液，备用；

H.步骤G乳化液在进风温度165℃、喷雾压力0.40MPa、进料速度21.5mL/min条件下进行喷雾干燥，收集微囊，冷却，即得。

优选地，步骤F中带式真空干燥的条件为真空度-0.08MPa～-0.10Mpa，干燥温度56℃。

优选地，步骤G所述囊材为按重量计络蛋白酸钠：麦芽糊精＝3:2，抗粘剂为按重量计十八醇：二氧化钛＝3：1，增塑剂为按重量计聚乙二醇：柠檬酸＝3：1。

优选地，步骤C所述乳化剂按重量计为蔗糖脂肪酸酯：大豆磷脂＝8∶5的复合乳化剂，用量按质量分数计为制剂配方总量的1.18％。

本发明所述相对密度均指与水的相对密度。

本发明现对于现有技术取得了如下的技术进步：

荆防制剂能有效对抗甲状腺相关疾病，包括甲状腺功能亢进，急性甲状腺炎、亚急性甲状腺炎、慢性甲状腺炎症、甲状腺肿、甲状腺瘤等相关疾病，尤其是结节性甲状腺肿，抑制体内外结节性甲状腺肿细胞增殖和体外结节性甲状腺肿细胞的分泌功能，标本兼治，对结节性甲状腺肿有确切显著的治疗效果。

为验证本发明荆防制剂治疗甲状腺疾病的作用，发明人开展了相应动物试验研究。需要说明的是，动物试验研究所选取是已上市产品，本发明所包含的其它配方及制备方法所得产品涉及的试验及其结果，由于篇幅限制，在此不再穷举。

实验例1含荆防制剂血清对体外人结节性甲状腺肿细胞增殖及分泌的影响

1材料和仪器

受试药物为荆防颗粒(山东新时代有限公司生产)；左甲状腺素纳片(德国默克公司)，IV型胶原酶(Simga-Aldrich)，胰蛋白酶(Gibco)，RPMI-1640培养基(Hyclone)，胎牛血清(Gibco-Life Technologies)，Cell Counting Kit-8(CCK-8，日本同仁化学)，FT3、FT4检测试剂盒(天津九鼎公司)；SpectraMax M5微孔板分光光度计(Molecular Devices，美国)。

2方法

2.1含药动物血清的制备

购自上海甲干生物科技有限公司的10只日本大耳白家兔(体重1.5±0.2kg)随机分成5组，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)20150005。每日8时，等体积分别灌胃对照组生理盐水，小、中、大剂量组0.7、2.1、6.3g/kg荆防颗粒(按体表面积折算，分别相当于成人每日用量的1/3、1、3倍)，阳性对照组2.875μg/kg左甲状腺素纳片(相当于成人每日用量)。连续灌胃7天，第7天灌胃后1h，对大鼠进行颈动脉无菌采血，4℃、2000r/min离心20min使血清分离，并用56℃灭活血清30min，在预灭菌的超净工作台中分装后储存于﹣20℃冰箱内备用。

2.2人结节性甲状腺肿细胞的分离培养

从临沂市人民医院获得了10例手术切除的新鲜人甲状腺组织，冰冻切片显示为结节性甲状腺肿。取这些结节性甲状腺肿的病变组织，立刻置于含100U/mL青霉素和100mg/L链霉素的RPMI-1640培养基中，使其表面结缔组织清除，再用PBS反复冲洗。将洗净的组织剪成lmm³左右的小块，加入浓度为1g/L胶原酶和0.25％胰酶，37℃联合消化60min。待组织消化呈糊状，加人含10％胎牛血清的含双抗RPMI-1640培养基终止消化，用200目不锈钢网过滤后，于离心管中，用220r/min离心10min，去上清。加入红细胞裂解液作用10min，220r/min离心10min，去上清，加RPMI-1640培养基重悬细胞，接种于l00 mL玻璃培养瓶中，置于37℃含5％CO₂的培养箱中分瓶培养。

2.3CCK-8法检测含药血清对细胞增殖的影响

在37℃培养箱中，用0.25％胰蛋白酶消化原代培养的结节性甲状腺肿细胞至细胞收缩变圆，立即加入1mL含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基终止消化，用巴士小管轻轻吹打培养瓶上贴壁的细胞使其脱落，收集细胞悬液至离心管中，800r/min离心3min，去上清，加含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基重悬，计数后调整细胞浓度至每毫升1×105个细胞。按每孔100μL接种细胞悬液于96孔板中后，在37℃的含5％CO₂的潮湿气氛中培养过夜。次日，去除未贴壁细胞，分别向对照组、荆防颗粒大、中、小剂量组、阳性对照组加入100μL含10％相应含药兔血清的双抗RPMI-1640培养基。分别于药物作用24、48、72h后，按培养基10％的比例加入CCK-8溶液，37℃下避光孵育1h，SpectraMax M5微孔板分光光度计读取450nm处的吸光度值，按照说明书计算各组细胞存活率。

2.4放射免疫法检测细胞游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和甲状腺素(FT4)分泌

按上述方法，取加入含药血清作用24h后的对照组、荆防颗粒中剂量组、阳性对照组的细胞培养上清液，以不加细胞的各组含药培养液为空白对照，放射免疫法测定各组FT3、FT4的含量。为反映细胞的实际分泌功能，消除因含药血清作用后各组细胞数量不同而造成的上清液中FT3、FT4浓度的差异，根据下列公式计算各组FT3、FT4浓度的相对值：

FT3、FT4相对值＝(实测FT3、FT4浓度–空白对照FT3、FT4浓度)/对应的CCK-8平均吸光度值。

2.5统计方法

采用GraphPad Prism软件版本5(GraphPad Software，美国)进行数据分析，结果以平均值±标准偏差表示。P<0.05被认为有显著性差异，P<0.01被认为极显著性差异。

3结果

3.1含药血清对结节性甲状腺肿细胞增殖的影响

如表1、图1中CCK-8检测结果所示，与对照组相比，除低剂量组外，含中、高剂量荆防颗粒动物血清和含左甲状腺素纳片动物血清均能显著抑制结节性甲状腺肿细胞的增殖(P<0.05)，且其抑制作用随作用时间的延长和剂量的增大而增强，呈一定的时效和量效关系。并且，统计分析证实，含高剂量荆防颗粒动物血清对结节性甲状腺肿细胞增殖的抑制作用与含左甲状腺素纳片动物血清无显著性差异(P>0.05)。

表1含药血清对体外培养的结节性甲状腺肿细胞增殖的影响(n＝3)

注：“**”表示与对照组相比P<0.01，“^▲▲”表示与阳性对照组相比P<0.01。

3.2含药血清对结节性甲状腺肿细胞FT3和FT4分泌功能的影响

含药血清对结节性甲状腺肿细胞FT3和FT4分泌功能的影响如表2、图2所示，在均衡了细胞数量差异的因素后，药物作用24h时，相比对照组，荆防颗粒中、高剂量组和左甲状腺素纳片阳性对照组均能够显著抑制结节性甲状腺肿细胞分泌FT3和FT4的水平(P<0.05)，且荆防颗粒高剂量组抑制分泌的效果与左甲状腺素纳片无显著性差异(P>0.05)，表明荆防颗粒能够抑制结节性甲状腺肿细胞的分泌功能，并且高剂量的荆防颗粒有望代替左甲状腺素纳片用于治疗结节性甲状腺肿。

表2含药血清作用24h后各组细胞培养上清液中FT3和FT4相对浓度比较(n＝3)

注：“*”表示与对照组相比P<0.05，“**”表示与对照组相比P<0.01，

“^▲▲”表示与阳性对照组相比P<0.01。

以上实验结果表明，达到成人每日用量的荆防颗粒对体外结节性甲状腺肿细胞增殖的抑制具有显著效果，且作用24h后能够抑制结节性甲状腺肿细胞的分泌功能，同时，高剂量荆防颗粒对体外结节性甲状腺肿细胞的增殖和分泌的抑制作用与左甲状腺素纳片相当，是代替左甲状腺素纳片用于治疗结节性甲状腺肿的良好药物来源。

实验例2荆防制剂对大鼠结节性甲状腺肿细胞增值的影响

1 材料和仪器

1.1 试验药物和材料

受试药物为荆防颗粒(山东新时代药业有限公司生产)。丙基硫氧嘧啶(深圳市中联制药有限公司)；左甲状腺素纳片(德国默克公司)；北京索莱宝科技有限公司生产的抗体洗脱液，4％多聚甲醛，由裂解液、磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和苯甲基磺酰氟化物(Phenylmethyl sulfonylfluoride，PMSF)组成的全蛋白提取试剂盒，牛血清白蛋白和蛋白上样缓冲液；0.45μm聚偏氟乙稀(Polyvinylidene difluoride，PVDF)膜(Millipore公司)；Bradford蛋白浓度测定试剂盒和超敏ECL化学发光试剂盒来自碧云天生物技术研究所；Western Blotting用细胞增殖核抗原(Proliferating cell nuelear antigen，PCNA)—抗；武汉谷歌生物科技有限公司的丽春红染液，Cooktail溶液，显影定影液，SDS-PAGE凝胶制备试剂盒；Tween-20(Amresco)；蛋白Marker(10-170kDa，Fermentas)；柯达X-OMAT BT医用X射线胶片。

1.2仪器与设备

DC-N3S彩色多普勒超声系统(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，DR6000哈希多参数水质仪(ThermoFisher，美国)，ChemiDoc MP凝胶成像系统(Bio-Rad，美国)。

2 方法

2.1 分组和模型制备

取60只5周龄的健康雌性SD大鼠(鲁南制药集团股份有限公司提供，实验动物许可证号：SYXK(鲁)2018 0008)，随机分为6组，即正常组、模型对照组、左甲状腺素纳片阳性对照组(简称“阳性对照组”)、荆防颗粒低剂量组(简称“低剂量组”)、荆防颗粒中剂量组(简称“中剂量组”)和荆防颗粒高剂量组(简称“高剂量组”)。模型制备前，在清洁级动物饲养室(恒温：20℃，恒湿：50％)适应性饲养2周，自由摄食、饮无菌水，每两天更换一次消毒垫料。之后，每天9点按1ml/100g体重，给正常组大鼠灌服生理盐水，给其它组大鼠灌服0.1％的丙基硫氧嘧啶溶液。连续8周后，用彩色多普勒超声系统判断除正常组模型均制备成功。

2.2灌服治疗

造模成功后，每日8时，按照1ml/100g体重，给阳性对照组大鼠灌服0.1mg/L的左甲状腺素纳片溶液，给低、中、高剖量组分别灌服成人临床用药剖量1倍(405g/L)、2倍(1215g/L)、4倍(3645g/L)的荆防颗粒溶液(溶剂为纯化水)，给模型对照组和正常组分别灌服纯化水，连续灌服12周。

2.3组织标本的获得和组织总蛋白的提取

灌服治疗12周后，按30mg/kg体重腹腔注射5％苯巴比妥麻醉大鼠后，在灭菌的超净工作台中，用75％酒精对大鼠进行喷洒消毒，用已灭菌的解剖器具将各组大鼠颈部皮肤剖开至气管暴露，将两侧甲状腺组织从其它组织中完整地解剖出来。按照1mL冷裂解液加10μL磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF配制裂解液，混匀，放置在冰上备用，称取0.1g各组的新鲜甲状腺组织，分别置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块剪成2mm²以内的小块，加入10倍组织体积新配置的裂解液，冰上研磨直至没有明显的组织块，将组织匀浆液移入各组对应的1.5mL离心管中，4℃12000g离心30min，收集上清，即为各组细胞的总蛋白溶液。

2.4Bradford法测定蛋白浓度

取1mg/mL牛血清白蛋白标准品溶液15、10、8、4、2、lμL，分别加入0.9％生理盐水85、90、92、96、98、99μL及900μL Bradford配制成15、10、8、4、2、lμg/mL浓度的标准品溶液，分别混匀，测定595nm处吸光度，制作蛋白浓度-吸光度曲线，即为标准曲线。取1μL各组待测蛋白溶液分别加入900μL Bradford溶液及99μL 0.9％生理盐水，混匀后在595nm处用哈希多参数水质仪检测吸光度。根据标准曲线计算出各组样本的蛋白浓度。

2.5SDS-PAGE电泳

使各组样品上样量为40μg。在蛋白样品中加入5×蛋白上样缓冲液，使其终浓度为1×蛋白上样缓冲液后，将溶液于95℃预处理5min。将洗净的坡璃板对齐后卡紧。配制12％分离胶，将胶加热溶解后立即加入四甲基乙二胺并摇匀后即可向坡璃板间隙中灌胶。45min后倒去胶上层的水，并将剩余的水分用吸水纸吸干。配制5％的浓缩胶，将胶溶解后加入四甲基乙二胺后立即摇句即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶，然后将浓缩胶中插入梳子。将凝胶放入电泳槽中，再加入1×电泳缓冲液，将样品分别加入1个点样孔中。按分离股120V、浓缩胶75V进行恒压电泳，至溴酚蓝刚出胶时停止电泳。

2.6转膜

用甲醇活化PVDF膜，PVDF膜活化后放入加有转移液的盆中，打开转移夹使其黑色的一面保持水平，剥下分离胶后置于滤纸上，将PVDF膜盖于胶上，并排除其中的气泡，再在膜上盖三层滤纸，并排除气泡。最后盖上一个海绵垫，200mA电流转膜1h。

2.7免疫反应

室温下，将转好的膜在用0.5％TBST溶解制成的5％脱脂牛奶脱色摇床上封闭1小时，用5％脱脂牛奶稀释PCNA—抗，4℃过夜，室温下，将膜在脱色摇床上用TBST冲洗三次，每次5min，用TBST稀释二抗3000倍，并与膜在室温下孵育30min后，在脱色摇床上将膜用TBST反复冲洗三次，每次5min。

2.8化学发光法检测

分别取超敏ECL化学发光试剂盒中等体积的A和B两种试剂混匀后，均匀滴加到含有蛋白的一侧膜上，持续1-2min，去尽残液后，用保鲜膜塑封，放入X光片夹中爆光，调整胶片的曝光条件，并显影、定影。

2.9凝胶图像分析

用扫描仪将X射线胶片进行扫描存档，并用Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值。

2.10统计学处理

全部实验数据均采用GraphPad Prism软件版本5(GraphPad Software，美国)进行统计学处理，结果均以平均数±标准偏差表示，P<0.05被认为具有显著性差异。

3结果

采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠结节性甲状腺肿组织中PCNA(在DNA修复和复制中起着重要功能，是反映细胞增殖的重要指标)的表达，经Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值，结果如表3、图3所示：与正常组相比，模型组大鼠PCNA的表达显著增多(P<0.05)；与模型对照组相比，阳性对照组及荆防颗粒低、中、高剂量组PCNA的表达均显著减少(P<0.05)；与阳性对照组相比，荆防颗粒低、中剂量组PCNA的表达均有显著差异(P<0.05)，而高剂量组PCNA的表达无显著差异(P>0.05)。这些结果表明各剂量荆防颗粒及左甲状腺素纳片均可抑制大鼠结节性甲状腺肿组织PCNA的表达，并且，随着浓度的增大荆防颗粒抑制PCNA表达的效果更为明显。同时，高剂量荆防颗粒对大鼠结节性甲状腺肿组织PCNA表达的抑制作用最为显著，与左甲状腺素纳片的抑制效果无显著性差异。

表3细胞增殖核抗原在大鼠结节性甲状腺肿组织中的表达(n＝10)

注：“*”表示与正常组相比P<0.05，“^▲”表示与模型对照组相比P<0.05，“^▲”表示与阳性对照组相比P<0.05。

以上实验结果表明，达到成人每日用量的荆防颗粒对结节性甲状腺肿细胞的增殖具有显著抑制效果，且成人每日用量4倍的荆防颗粒对结节性甲状腺肿细胞的增殖的抑制作用与左甲状腺素纳片相当。可以推断，荆防颗粒能够通过抑制结节性甲状腺肿细胞的增殖成为代替左甲状腺素纳片治疗结节性甲状腺肿的良好药物来源。

附图说明：

图1为含药血清对体外培养的结节性甲状腺肿细胞增殖的影响(n＝3)，“*”表示与对照组相比P<0.01，“^▲”表示与阳性对照组相比P<0.01；

图2为含药血清作用24h后各组细胞培养上清液中FT3和FT4相对浓度比较(n＝3)，“*”表示与对照组相比P<0.05，“**”表示与对照组相比P<0.01，“^▲▲”表示与阳性对照组相比P<0.01；

图3为细胞增殖核抗原在大鼠结节性甲状腺肿组织中的表达(n＝10)，“*”表示与正常组相比P<0.05，“^▲”表示与模型对照组相比P<0.05，“^▲”表示与阳性对照组相比P<0.05。

具体实施方式

为了使本领域技术人员充分了解本发明，以下通过具体的实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应该知晓，本发明实施例并不以任何方式限制本发明。

实施例1荆防胶囊的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成29％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.20的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.24的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的淀粉、微晶纤维素(重量比7：1)，混匀，制粒，干燥，整粒，灌装，磨光机中抛光，剔除破损胶囊，即得。

实施例2荆防片的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成22％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮2次，每次2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.24的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.22的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的淀粉、糊精和蔗糖(重量比5：1：1)，混匀，制成粗颗粒，干燥，粉碎，过筛，制颗粒，低温干燥，整粒，加入0.3％硬脂酸镁，混匀，压制成10000片，即得。

实施例3荆防胶囊的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成26％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.19的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.23的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的淀粉、微粉硅胶、低取代羟丙基纤维素(重量比5：1.5：2)，混匀，制粒，干燥，整粒，灌装，磨光机中抛光，剔除破损胶囊，即得。

实施例4荆防颗粒的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.23的浸膏；

实施例5荆防片的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成24％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.25的浸膏；

E.合并步骤C所得漉液和步骤D所得浸膏，混匀，静置，滤过，滤液浓缩至50～60℃时相对密度为1.28的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、甘露醇(重量比4：3：0.5)，混匀，制成粗颗粒，干燥，粉碎，过筛，制颗粒，低温干燥，整粒，加入0.2％硬脂酸镁和0.1％的滑石粉，混匀，压制成10000片，即得。

实施例6荆防颗粒的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成20％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.18的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的蔗糖粉、糊精(重量比3：2)，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，制成10kg，即得。

实施例7荆防微囊的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

F.取步骤E所得清膏，加入步骤B所得环糊精包合物，混匀，制成颗粒，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度56℃条件下带式真空干燥，粉碎，得荆防提取物细粉，备用；

G.按配方量称取步骤F荆防提取物细粉，络蛋白酸钠：麦芽糊精＝3:2混合物为囊材，十八醇：二氧化钛＝3：1为抗粘剂，聚乙二醇：柠檬酸＝3：1为增塑剂，将上述囊材、抗粘剂和增塑剂加入纯化水，54℃条件下加热搅拌使溶解，配置成质量分数为33％的囊材溶液，冷却至室温，搅拌状态下加入荆防提取物细粉，加入制剂配方总量的1.18％蔗糖脂肪酸酯：大豆磷脂＝8∶5的复合乳化剂，均质乳化，得乳化液，备用；

实施例8荆防颗粒的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成27％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.24的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的蔗糖粉、羟丙基淀粉、甘露醇(重量比4：2：0.5)，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，制成10kg，即得。

实施例9荆防胶囊的制备

B.取步骤A所得挥发油，分别加β-环糊精制成包合物；

C.将步骤A所得川芎和枳壳蒸馏后的水溶液配成30％的乙醇溶液作溶剂，对步骤A所得川芎、枳壳的药渣与茯苓进行渗漉，得渗漉液，备用；

D.将步骤A所得荆芥、防风、羌活、独活和前胡的药渣与其余柴胡、桔梗、甘草等三味加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60～70℃时相对密度为1.19的浸膏；

F.取步骤E所得浸膏，真空度-0.08MPa～-0.10Mpa、干燥温度63℃条件下带式真空干燥，粉碎成细粉，过筛，加入步骤B所得β-环糊精包合物，混匀，即得荆防提取物细粉，加入配方量的淀粉、微粉硅胶(重量比3.5：1)，混匀，制粒，干燥，整粒，灌装，磨光机中抛光，剔除破损胶囊，即得。

Claims

1.荆防制剂在制备预防或治疗结节性甲状腺肿药物中的用途，所述的制剂由如下的中药组分制成：

荆芥97重量份防风97重量份羌活97重量份

独活97重量份柴胡97重量份前胡97重量份

川芎97重量份枳壳97重量份茯苓97重量份

桔梗97重量份甘草32.4重量份。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的荆防制剂为颗粒剂或合剂。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的荆防制剂为颗粒剂。