CN110368414A

CN110368414A - 一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂

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Publication number: CN110368414A
Application number: CN201910589520.3A
Authority: CN
Inventors: 刘煜洪; 苏子仁; 陈建南; 黎玉翠; 徐楠; 吴雪
Original assignee: Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine; Guangzhou University of Chinese Medicine
Priority date: 2019-06-28
Filing date: 2019-06-28
Publication date: 2019-10-25

Abstract

本本发明属于生物医药领域，涉及一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂及广藿香油在制备防治非酒精性脂肪肝病药物中的应用。本发明的药物制剂，有效成分包括广藿香油，所述广藿香油占药物制剂的重量百分含量为0.71％～40％。本发明将广藿香油应用于预防或治疗非酒精性脂肪肝病的药物中，能够有效预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病，增加广藿香油新的用途，促进其产业、商业化。

Description

一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂及广藿香油在制备防治非酒精性脂肪肝病药物中的应用。

背景技术

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是世界上最常见的慢性肝病，在全球普通人群中患病率高达20％～30％，世界范围内超过一半的人有发生NAFLD的危险。NAFLD指的是无过量酒精史和其他确切的肝损伤因素引起的以肝细胞脂肪变性为主要特征的临床病理综合征，包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。同时，作为代谢综合征的组成部分，NAFLD与肥胖、胰岛素抵抗、血脂紊乱和心血管疾病等多种致病因素有关，是代谢综合征在肝脏的主要表现形式。

肝内脂质蓄积是引起肝细胞脂肪变性的主要原因，在NAFLD发展过程中起着重要作用。肝内脂质蓄积常由于肝内脂质储存与脂质分解之间的脂质稳态失衡所造成的，其中脂质储存包括脂肪酸摄取、合成等过程，脂质分解则包括脂肪酸氧化、脂蛋白输出等过程。当肝内脂质储存过多而来不及分解时，便会造成肝内脂质蓄积、变性，进一步发展为一系列的脂肪肝疾病。因此维持肝内脂质稳态，抑制脂质蓄积变性，是阻断NAFLD进一步发展的潜在治疗策略。

目前，市场上暂无针对NAFLD的特效药，现有的西药疗效单一，存在不同毒副作用和不良反应。大量实验药理研究及临床疗效观察证实，中医药在防治NAFLD方面有良好疗效和独特优势，并展现出广阔的发展前景。因此，深入研究中医药对NAFLD的防治作用，对于研发新一代安全、高效的抗NAFLD药物，具有重要的现实意义。

广藿香油(Patchouli Oil，PO)是从广藿香叶子中提取的精油，其作为一种添加剂在保健品和食品产业中有着广泛的应用。近年来，在药理药效研究中，广藿香油具有抗氧化、抗炎和保护多种器官等的生物活性。目前尚无报道公开广藿香油具有防治NAFLD的功效及其在防治NAFLD药物中的应用。

发明内容

岭南地产药材广藿香(Pogostemon cablin)是中医临床上治疗消化系统疾病的常用中药，味辛，性微温，归脾、胃、肺经，具有芳香化浊，和胃止呕的功效，主要用于湿阻中焦，脘痞呕吐等胃肠疾患。而中医认为非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的脂质蓄积与浊邪内蕴相通，且其用药归经包含了脾、胃、肺经，与广藿香适应症相似。因此，广藿香可能具有通过抑制脂质蓄积治疗NAFLD的功效。本发明研究广藿香油通过调节脂质蓄积来抑制肝细胞脂肪变性从而能有效预防和/或治疗NAFLD。

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种含有广藿香油的药物制剂，所述广藿香油的药物制剂能有效预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

本发明的另一目的是提供广藿香油在制备预防和/或防治非酒精性脂肪肝病药物中的应用，所述广藿香油通过调节脂质蓄积来抑制肝细胞脂肪变性从而能有效预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂，所述药物制剂的有效成分包括广藿香油，所述广藿香油在药物制剂中的重量百分含量为0.71％～40％。

优选地，所述广藿香油在药物制剂中的重量百分含量为5％～20％。

优选地，所述药物制剂还包括药用赋形剂，所述药用赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑助流剂、水溶性基质、冷凝介质、增溶剂、防腐剂、甜味剂。

优选地，所述药用赋形剂在药物制剂中的重量百分含量为：填充剂40％～80％、粘合剂1％～45％、崩解剂5％～20％、润滑助流剂0.1％～10％、水溶性基质55％～65％、冷凝介质1.5％～6.7％、增溶剂30％～40％、防腐剂0.5％～1％、甜味剂3％～5％。

优选地，所述填充剂选自乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、淀粉、蔗糖、β-环糊精中的至少一种。

优选地，所述粘合剂选自淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、糊精、羟丙基纤维素中的至少一种。

优选地，所述崩解剂选自交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠中的至少一种。

优选地，所述润滑助流剂选自硬脂酸镁、硬脂酸钠、十二烷基硫酸钠、二氧化硅、聚乙二醇中的至少一种。

优选地，所述水溶性基质选自PEG4000、PEG6000、甘油明胶中的至少一种。

优选地，所述冷凝介质选自液体石蜡和甲基硅油中的至少一种。

优选地，所述增溶剂选自泊洛沙姆、乙醇中的至少一种。

优选地，所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠中的至少一种。

优选地，所述甜味剂选自甜菊苷、单糖浆、蜂蜜中的至少一种。

本发明所述药物制剂按照药学上常用的制备方法制备成药学上可接收的任意一种剂型。

优选地，所述药物制剂的剂型为口服液、片剂、胶囊剂、滴丸或颗粒剂。

本发明所述的广藿香油在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用。

所述非酒精性脂肪肝病的病变部位主要位于肝脏；所述非酒精性脂肪肝病症状为多无自觉症状，轻度的疲乏，食欲不振，腹胀，嗳气，肝区胀满等非特异性症状，还有体重超重，空腹血糖增高，高血压等代谢综合征症状。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明将广藿香油应用于预防或治疗非酒精性脂肪肝病的药物中，能够有效预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病，增加广藿香油新的用途，促进其产业、商业化；

(2)本发明将广藿香油应用于预防或治疗非酒精性脂肪肝病的药物中，通过调节脂质蓄积来抑制肝细胞脂肪变性，即所述含有广藿香油的药物可明显改善高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠血清内ALT、AST、HDL-C和LDL-C含量，显著降低血清和肝组织内TG、TC含量，修复肝组织病理学变化，降低肝组织中FFA、MDA、ROS含量，增强肝组织中SOD、CAT、GSH活性，还可调节NAFLD大鼠肝组织中SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、apoB-100、VLDL的蛋白和基因表达，抑制脂肪酸合成通路SREBP-1c的活化以降低脂肪酸合成，促进脂肪酸氧化通路PPAR-α的活化以改善脂肪酸氧化，以及增强脂蛋白输出，维持脂质稳态，减少肝细胞脂肪蓄积、变性；

(3)本发明所述的广藿香油可制备成多种药物制剂，比如口服液、片剂、胶囊剂、滴丸、颗粒剂，可供患者依需要选择。

附图说明

图1为广藿香油的气相色谱-质谱(GC-MS)分析图；

图2为血清中肝功能指标水平和脂质含量的变化示意图；

图3为肝脏中脂质含量的变化示意图；

图4为肝脏中组织病理学变化示意图；

图5为广藿香油对肝脏中脂肪酸合成的影响示意图；

图6为肝脏中相关氧化指标含量变化示意图；

图7为广藿香油对肝脏中脂肪酸氧化的影响示意图；

图8为广藿香油对肝脏中脂蛋白分泌的影响的示意图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

一、制剂实施例

实施例1

本实施例为本发明每片含有10mg广藿香油的片剂的配方和制备工艺，所述配方如表1所示：

表1 10000片含广藿香油的片剂的配方

上述片剂的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的广藿香油、乳糖、淀粉混合均匀，用淀粉浆作为粘合剂进行湿法制粒，然后烘干，再加入硬脂酸镁混合均匀，压制成片，获得所述广藿香油片剂，共压制10000片，每片净重138mg，每片含广藿香油10mg。

服用方法：口服；上述片剂用于治疗非酒精性脂肪肝病，对应症状：轻度疲乏，食欲不振，腹胀，嗳气，肝区胀满，体重超重，空腹血糖增高，高血压。

实施例2

本实施例为本发明每片含有20mg广藿香油的片剂的配方和制备工艺，所述配方如表2所示：

表2 10000片含广藿香油的片剂的配方

上述片剂的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的广藿香油、甘露醇、淀粉混合均匀，用羟丙基甲基纤维素作为粘合剂进行湿法制粒，然后烘干，再加入硬脂酸镁混合均匀，压制成片，获得所述广藿香油片剂，共压制10000片，每片净重148mg，每片含广藿香油20mg。

实施例3

本实施例为本发明每片含有40mg广藿香油的片剂的配方和制备工艺，所述配方如表3所示：

表3 10000片含广藿香油的片剂的配方

上述片剂的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的广藿香油、山梨醇、淀粉混合均匀，用淀粉浆作为粘合剂进行湿法制粒，然后烘干，再加入十二烷基硫酸钠混合均匀，压制成片，获得所述广藿香油片剂，共压制10000片，每片净重168mg，每片含广藿香油40mg。

实施例4

本实施例为本发明每片含有10mg广藿香油的片剂的配方和制备工艺，所述配方如表4所示：

表4 10000片含广藿香油的片剂的配方

上述片剂的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的广藿香油、淀粉混合均匀，用羟丙基纤维素作为粘合剂进行湿法制粒，然后烘干，再加入硬脂酸钠混合均匀，压制成片，获得所述广藿香油片剂，共压制10000片，每片净重138mg，每片含广藿香油10mg。

实施例5

本实施例为本发明每片含有20mg广藿香油的片剂的配方和制备工艺，所述配方如表5所示：

表5 10000片含广藿香油的片剂的配方

上述片剂的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的广藿香油、淀粉混合均匀，用淀粉浆作为粘合剂进行湿法制粒，然后烘干，再加入硬脂酸镁混合均匀，压制成片，获得所述广藿香油片剂，共压制10000片，每片净重148mg，每片含广藿香油20mg。

实施例6

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的胶囊的配方和制备工艺，所述配方如表6所示：

表6 10000粒含广藿香油的胶囊的配方

上述胶囊的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的乳糖、淀粉、硬脂酸镁过60目筛预处理，将过筛后的乳糖、淀粉与广藿香油置于三维混合机中充分混合均匀，制得预混物料，将淀粉浆与二氧化硅加入预混合物料中，然后置于三维混合机进行充分混合，根据各成分的含量结果确定填充量重量范围，使用自动胶囊填充机填充胶囊，获得所述广藿香油胶囊，共制备10000粒，每粒净重168mg，每粒含广藿香油10mg。

服用方法：口服；上述胶囊用于治疗非酒精性脂肪肝病，对应症状：轻度疲乏，食欲不振，腹胀，嗳气，肝区胀满，体重超重，空腹血糖增高，高血压。

实施例7

本实施例为本发明每粒含有20mg广藿香油的胶囊的配方和制备工艺，所述配方如表7所示：

表7 10000粒含广藿香油的胶囊的配方

上述胶囊的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的乳糖、淀粉、硬脂酸镁过60目筛预处理，将过筛后的乳糖、淀粉与广藿香油置于三维混合机中充分混合均匀，制得预混物料，将淀粉浆与硬脂酸镁加入预混合物料中，然后置于三维混合机进行充分混合，根据各成分的含量结果确定填充量重量范围，使用自动胶囊填充机填充胶囊，获得所述广藿香油胶囊，共制备10000粒，每粒净重178mg，每粒含广藿香油20mg。

实施例8

本实施例为本发明每粒含有40mg广藿香油的胶囊的配方和制备工艺，所述配方如表8所示：

表8 10000粒含广藿香油的胶囊的配方

上述胶囊的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的乳糖、淀粉、硬脂酸镁过60目筛预处理，将过筛后的乳糖、淀粉与广藿香油置于三维混合机中充分混合均匀，制得预混物料，将淀粉浆与硬脂酸镁加入预混合物料中，然后置于三维混合机进行充分混合，根据各成分的含量结果确定填充量重量范围，使用自动胶囊填充机填充胶囊，获得所述广藿香油胶囊，共制备10000粒，每粒净重198mg，每粒含广藿香油40mg。

实施例9

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的胶囊的配方和制备工艺，所述配方如表9所示：

表9 10000粒含广藿香油的胶囊的配方

上述胶囊的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的淀粉、硬脂酸镁过60目筛预处理，将过筛后的淀粉与广藿香油置于三维混合机中充分混合均匀，制得预混物料，将淀粉浆与硬脂酸镁加入预混合物料中，然后置于三维混合机进行充分混合，根据各成分的含量结果确定填充量重量范围，使用自动胶囊填充机填充胶囊，获得所述广藿香油胶囊，共制备10000粒，每粒净重168mg，每粒含广藿香油10mg。

实施例10

本实施例为本发明每粒含有20mg广藿香油的胶囊的配方和制备工艺，所述配方如表10所示：

表10 10000粒含广藿香油的胶囊的配方

上述胶囊的制备工艺，包括以下步骤：

取上述处方量的淀粉、硬脂酸镁过60目筛预处理，将过筛后的淀粉与广藿香油置于三维混合机中充分混合均匀，制得预混物料，将淀粉浆与硬脂酸镁加入预混合物料中，然后置于三维混合机进行充分混合，根据各成分的含量结果确定填充量重量范围，使用自动胶囊填充机填充胶囊，获得所述广藿香油胶囊，共制备10000粒，每粒净重178mg，每粒含广藿香油20mg。

实施例11

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的滴丸的配方和制备工艺，所述配方如表11所示：

表11 20000粒含广藿香油的滴丸配方

上述滴丸的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油和基质PEG4000混合加热成具一定流动态，充分混匀，置滴制装置中，在85℃温度保温状态下以约40滴/分钟的速度滴入55℃的液体石蜡中，收集滴丸，沥净滴丸表面的液体石蜡，放置自然干燥，即可制得所述广藿香油滴丸，共制备20000粒滴丸，每粒净重30mg，每丸粒含广藿香油10mg。

服用方法：口服；上述滴丸用于治疗非酒精性脂肪肝病，对应症状：轻度疲乏，食欲不振，腹胀，嗳气，肝区胀满，体重超重，空腹血糖增高，高血压。

实施例12

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的滴丸的配方和制备工艺，所述配方如表12所示：

表12 20000粒含广藿香油的滴丸配方

上述滴丸的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油和基质PEG6000混合加热成具一定流动态，充分混匀，置滴制装置中，在85℃温度保温状态下以约40滴/分钟的速度滴入65℃的甲基硅油中，收集滴丸，沥净滴丸表面的硅油，放置自然干燥，即可制得所述广藿香油滴丸，共制备20000粒滴丸，每粒净重30mg，每丸粒含广藿香油10mg。

实施例13

本实施例为本发明每粒含有12mg广藿香油的滴丸的配方和制备工艺，所述配方如表13所示：

表13 20000粒含广藿香油的滴丸配方

上述滴丸的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油和基质PEG6000混合加热成具一定流动态，充分混匀，置滴制装置中，在85℃温度保温状态下以约40滴/分钟的速度滴入55℃的液体石蜡中，收集滴丸，沥净滴丸表面的液体石蜡，放置自然干燥，即可制得所述广藿香油滴丸，共制备20000粒滴丸，每粒净重30mg，每丸粒含广藿香油12mg。

实施例14

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的滴丸的配方和制备工艺，所述配方如表14所示：

表14 20000粒含广藿香油的滴丸配方

上述滴丸的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油和基质甘油明胶混合加热成具一定流动态，充分混匀，置滴制装置中，在85℃温度保温状态下以约40滴/分钟的速度滴入55℃的液体石蜡中，收集滴丸，沥净滴丸表面的液体石蜡，放置自然干燥，即可制得所述广藿香油滴丸，共制备20000粒滴丸，每粒净重30mg，每丸粒含广藿香油10mg。

实施例15

本实施例为本发明每粒含有10mg广藿香油的滴丸的配方和制备工艺，所述配方如表15所示：

表15 20000粒含广藿香油的滴丸配方

上述滴丸的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油和基质泊洛沙姆混合加热成具一定流动态，充分混匀，置滴制装置中，在85℃温度保温状态下以约40滴/分钟的速度滴入55℃的液体石蜡中，收集滴丸，沥净滴丸表面的液体石蜡，放置自然干燥，即可制得所述广藿香油滴丸，共制备20000粒滴丸，每粒净重30mg，每丸粒含广藿香油10mg。

实施例16

实施例为本发明每包含有50mg广藿香油的颗粒剂的配方和制备工艺，所述配方如表16所示：

表16 4000包含广藿香油颗粒剂的配方

上述颗粒剂的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方的固体辅料过60目筛预处理；将过筛后的β-环糊精与广藿香油混合均匀制成包合物，然后再与蔗糖、微晶纤维素、聚乙二醇、淀粉浆一起加入至高效混合制粒机中充分混合均匀，再逐渐加入30％乙醇和水并充分混匀，制得软材，经过30目筛制粒，放置50℃的流化床中干制，干物料经过30目筛制得干颗粒，用颗粒分装机进行分装填充包装，制得所述多广藿香油颗粒剂，共制备4000包颗粒剂，每包净重7000mg，每包含广藿香油50mg。

服用方法：口服；上述颗粒剂用于治疗非酒精性脂肪肝病，对应症状：轻度疲乏，食欲不振，腹胀，嗳气，肝区胀满，体重超重，空腹血糖增高，高血压。

实施例17

实施例为本发明每包含有50mg广藿香油的颗粒剂的配方和制备工艺，所述配方如表17所示：

表17 4000包含广藿香油颗粒剂的配方

上述颗粒剂的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方的固体辅料过60目筛预处理；将过筛后的β-环糊精与广藿香油混合均匀制成包合物，然后再与糊精、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、淀粉浆一起加入至高效混合制粒机中充分混合均匀，再逐渐加入30％乙醇和水并充分混匀，制得软材，经过30目筛制粒，放置50℃的流化床中干制，干物料经过30目筛制得干颗粒，用颗粒分装机进行分装填充包装，制得所述多广藿香油颗粒剂，共制备4000包颗粒剂，每包净重7000mg，每包含广藿香油50mg。

实施例18

实施例为本发明每包含有50mg广藿香油的颗粒剂的配方和制备工艺，所述配方如表18所示：

表18 4000包含广藿香油颗粒剂的配方

上述颗粒剂的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方的固体辅料过60目筛预处理；将过筛后的β-环糊精与广藿香油混合均匀制成包合物，然后再与乳糖、微晶纤维素、淀粉浆一起加入至高效混合制粒机中充分混合均匀，再逐渐加入30％乙醇和水并充分混匀，制得软材，经过30目筛制粒，放置50℃的流化床中干制，干物料经过30目筛制得干颗粒，用颗粒分装机进行分装填充包装，制得所述多广藿香油颗粒剂，共制备4000包颗粒剂，每包净重7000mg，每包含广藿香油50mg。

实施例19

实施例为本发明每包含有50mg广藿香油的颗粒剂的配方和制备工艺，所述配方如表19所示：

表19 4000包含广藿香油颗粒剂的配方

上述颗粒剂的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方的固体辅料过60目筛预处理；将过筛后的β-环糊精与广藿香油混合均匀制成包合物，然后再与淀粉、微晶纤维素、聚乙二醇、淀粉浆一起加入至高效混合制粒机中充分混合均匀，再逐渐加入30％乙醇和水并充分混匀，制得软材，经过30目筛制粒，放置50℃的流化床中干制，干物料经过30目筛制得干颗粒，用颗粒分装机进行分装填充包装，制得所述多广藿香油颗粒剂，共制备4000包颗粒剂，每包净重7000mg，每包含广藿香油50mg。

实施例20

实施例为本发明每包含有50mg广藿香油的颗粒剂的配方和制备工艺，所述配方如表20所示：

表20 4000包含广藿香油颗粒剂的配方

上述颗粒剂的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方的固体辅料过60目筛预处理；将过筛后的β-环糊精与广藿香油混合均匀制成包合物，然后再与蔗糖、交联羧甲基纤维素钠、淀粉浆一起加入至高效混合制粒机中充分混合均匀，再逐渐加入30％乙醇和水并充分混匀，制得软材，经过30目筛制粒，放置50℃的流化床中干制，干物料经过30目筛制得干颗粒，用颗粒分装机进行分装填充包装，制得所述多广藿香油颗粒剂，共制备4000包颗粒剂，每包净重7000mg，每包含广藿香油50mg。

实施例21

实施例为本发明每瓶含有50mg广藿香油的口服液的配方和制备工艺，所述配方如表21所示：

表21 4000瓶含广藿香油口服液的配方

上述口服液的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油与乙醇以及增溶剂泊洛沙姆混合搅拌均匀，然后加入其它辅料，充分搅拌溶解均匀，滤过澄清，将滤液灌装，湿热灭菌，获得所述制剂口服液。

实施例22

实施例为本发明每瓶含有50mg广藿香油的口服液的配方和制备工艺，所述配方如表22所示：

表22 4000瓶含广藿香油口服液的配方

上述口服液的制备工艺，包括以下步骤：

将上述处方量的广藿香油与增溶剂泊洛沙姆混合搅拌均匀，然后加入其它辅料，充分搅拌溶解均匀，滤过澄清，将滤液灌装，湿热灭菌，获得所述制剂口服液。

实施例23

实施例为本发明每瓶含有50mg广藿香油的口服液的配方和制备工艺，所述配方如表23所示：

表23 4000瓶含广藿香油口服液的配方

上述口服液的制备工艺，包括以下步骤：

实施例24

实施例为本发明每瓶含有50mg广藿香油的口服液的配方和制备工艺，所述配方如表24所示：

表24 4000瓶含广藿香油口服液的配方

上述口服液的制备工艺，包括以下步骤：

实施例25

实施例为本发明每瓶含有50mg广藿香油的口服液的配方和制备工艺，所述配方如表25所示：

表25 4000瓶含广藿香油口服液的配方

上述口服液的制备工艺，包括以下步骤：

二、效果实验例

1.实验材料

1.1实验动物

SPF级SD(Sprague Dawley)大鼠，雄性，180-220g，购于广州中医药大学实验动物中心(SCXK(粤)2018-0085)。实验动物分笼饲养，适应性饲养7天，实验期间自由饮水和进食。饲养环境温度为22±2℃，相对湿度为60％，每天12小时光照和12小时黑夜循环。

1.2供试药品及造模材料

来源：广藿香油购于佛山南海中南有限公司(Lot.140801)

给药组供试药品：称取一定量的广藿香油溶于生理盐水中，同时加入2％的吐温80助溶，分别配成100mg/kg，200mg/kg，400mg/kg的广藿香油溶液；

阳性对照组供试药品：称取一定量的维生素E溶于生理盐水中，同时加入2％的吐温80助溶，配成100mg/kg的维生素E溶液；

上述药品配制后，4℃冰箱保存备用。

模型组造模材料：造模用的高脂饲料D12492购于广东省医学实验动物中心，总能量为5.24Kcal/g，供能占比为蛋白：碳水化合物：脂肪＝20：20：60。

1.3实验试剂

生理盐水，江西科伦药业有限公司；维生素E，大连美仑生物科技有限公司；吐温80，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；4％多聚甲醛溶液，北京雷根生物技术有限公司；乙醇、乙醚，广州化学制剂总厂；BCA蛋白定量试剂盒，上海BestBio-贝博生物科技有限公司；H&E和油红染色，武汉谷歌生物科技有限公司；大鼠SREBP-1c、FFA、PPAR-α、CYP2E1、ROS、MTTP、apoB-100和VLDL的ELISA试剂盒，美国ebioscience公司；AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C生化试剂盒，南京建成生物工程研究所。

RT-qPCR测定相关试剂：TRIzol试剂，赛默飞世尔科技(中国)有限公司；氯仿、无水乙醇、异丙醇，国药集团化学试剂有限公司；II Q RTSuperMix(+gDNA wiper)、ChamQ^TM qPCR Master Mix，南京诺唯赞生物科技有限公司；SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、apoB-100、VLDL和GAPDH引物，生工生物工程(上海)股份有限公司。

Western blot测定相关试剂：RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂cooktail、PMSF(100mM)、磷酸化蛋白酶抑制剂、蛋白上样缓冲液、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒，武汉谷歌生物科技有限公司；蛋白Marker，Thermo Fisher Scientific公司；TRIS缓冲液、甘氨酸、SDS，北京索莱宝科技有限公司；PVDF膜(0.45um和0.22um)，Merck Millipore公司；BSA，上海罗氏制药有限公司；Tween-20，美国Sigma公司；一抗SREBP-1c、FAS、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、β-actin及二抗羊抗兔，美国Affinity Biosicences公司；一抗apoB-100，美国ABclonalTechnology公司；一抗SCD-1，美国Proteintech Group公司。

1.4实验仪器

气相色谱-质谱联用仪(安捷伦GC7890A/MSD5975C)，安捷伦科技(中国)科技有限公司；Precisa分析天平，普利赛斯国际贸易(上海)有限公司；电子天平，常州市衡正电子仪器有限公司；IKA10组织匀浆机，德国IKA公司；BH22型光学显微镜，日本Olympus公司；FLUOstar Optima酶标仪，德国BMG Labtec公司；PCR扩增仪，美国Bio-Rad公司；PCR逆转录仪，美国Bio-Rad公司；TGL16M高速冷冻离心机，湖南湘立科学仪器有限公司；电泳仪，美国Bio-Rad公司；Tanon凝胶化学成像系统，广州誉维生物科技仪器有限公司。

2实验方法

2.1广藿香油气相色谱-质谱(GC-MS)分析

将2μL的广藿香油样品溶于1mL的乙醚溶液中配成供试品溶液进入HP-5MS毛细管柱中(30m×250μm×0.5μm)，程序起始温度为80℃。保持1分钟后，以40℃/min的速率升至200℃并保持1分钟。随后，再以20℃/min的速率继续升至260℃并保持1分钟。当入口温度达到250℃时，氦载气用于支持柱上20.4psi的压力，此时恒定流速为1mL/min。质谱仪的离子源温度为230℃，在70eV的不分流EI模式下操作。全扫描监测模式应用于质谱图中，扫描范围为m/z 35-400，分流比为60:1。通过比较化合物的质谱和保留指数与数据库中的质谱和保留指数以及文献中报道的值来鉴定所得峰，实验结果如图1所示。

2.2动物分组及模型建立

实验开始前取各大鼠，称重，按体重随机分组：正常组(NC)，模型组(Model)，维生素E组(Vitamin E：100mg/kg)，广藿香油组(PO低、中、高剂量组：对应剂量为100、200、400mg/kg)，每组8只小鼠。分组后，标号，再称量各大鼠体重，记录并计算相应给药体积(0.1mL/10g)。供给除正常组(给予正常饲料)之外的各组大鼠自由食用4周高脂饲料以诱导NAFLD模型。模型建立的同时，各组大鼠给予相应的药物进行治疗，其中NC组和Model组给予相同体积的生理盐水，每日一次，持续给药4周。

2.3血液、肝脏取材及肝组织病理学观察

2.3.1血液、肝脏取材

实验结束后，给大鼠注射1％戊巴比妥钠进行麻醉，并迅速从腹主动脉取血，血液在常温下放置30分钟后，以3500转/分离心15分钟，取血清待测。采血后马上解剖取肝脏，洗净，称重，并且每次从不同肝脏的相同位置剪取1.0cm×1.0cm大小的组织块，一部分于4％多聚甲醛中固定，用于H&E染色，一部分于-80℃冻存，用于油红染色，剩余肝组织适当取材后，放入-80℃冰箱保存，用于后续实验。

2.3.2切片制备

H&E染色：固定后的肝组织块经脱水→透明→透蜡和包埋→切片和贴片→染色和固封后，于400×放大倍数下，各样品取5个视野进行观察。

油红染色：冻存后的肝组织块经固定液固定→油红染色→背景分化→苏木素染色→甘油明胶封片剂封片后，于400×放大倍数下，各样品取5个视野进行观察，实验结果如图4所示。

2.4血清中的生化分析

采用BCA蛋白定量试剂盒测定肝组织中总蛋白的含量，继而根据生化试剂盒说明书对待测血清进行AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C含量的测定，实验结果如图2所示。

2.5肝脏中脂质含量和脂质氧化相关指标测定

取肝组织加入9倍体积的无水乙醇(4℃)用匀浆机混匀制成10％乙醇匀浆液，于4℃低温冷冻离心机中离心(2500转/分，10分钟)，吸取上清液待用。根据试剂盒说明书进行TG、TC含量的测定，试验结果如图3所示。

取肝组织加入9倍体积的生理盐水(4℃)用匀浆机混匀制成10％生理盐水匀浆液，于4℃低温冷冻离心机中离心(2500转/分，10分钟)，吸取上清液待用。根据试剂盒说明书进行MDA、SOD、CAT、GSH活性的测定，实验结果如图6所示。

2.6肝脏中脂质蓄积相关因子的测定

将肝组织置于预冷PBS中进行漂洗，加入9倍体积的PBS(4℃)用匀浆机混匀制成10％PBS匀浆液，于4℃低温冷冻离心机离心(3000转/分，20分钟)，吸取上清液待用。根据ELISA试剂盒说明书进行SREBP-1c、FFA、PPAR-α、CYP2E1、ROS、apoB-100、MTTP和VLDL含量的测定，实验结果如图5、图7、图8所示。

2.7 RT-qPCR测定肝脏中脂质蓄积相关基因表达

将溶于Trizol中的0.1g肝组织用氯仿和异丙醇提取出总RNA，然后将RNA逆转录成cDNA，最后将cDNA扩增用于测量SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、apoB-100和GAPDH基因的表达水平(引物序列表见表26)。PCR扩增反应程序为：在95℃下预变性30秒，然后95℃30s，60℃30s算一个循环，进行40次循环。最后结果以GAPDH为内参基因，计算相对表达量2-ΔΔCt，其中ΔΔCt＝(Ct目的基因-Ct GAPDH)处理组-(Ct目的基因-CtGAPDH)正常组，实验结果如图5、图7、图8所示。

表26.引物序列

2.8 Western blot测定肝脏中脂质蓄积相关蛋白表达

取肝组织加入20倍体积的蛋白提取液和蛋白酶抑制剂，根据试剂盒说明进行冰上匀浆、离心提取总蛋白，经过灌胶与上样、电泳、切胶、转模和封闭后，分别加入一抗(SREBP-1c、FAS、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、apoB-100、SCD-1、β-actin，稀释比均为1：1000)4℃孵育过夜。第二天在室温下孵育二抗(1：3000)1小时，最后按照ECL试剂盒说明进行化学发光显影，用Quantity One软件分析免疫条带灰度值，最后结果以β-actin作为内参蛋白，实验结果如图5、图7、图8所示。

2.9统计学处理

各数据以均数±标准差(mean±SD)表示，应用Graphpad Prism 7软件制图，SPSS20.0软件进行统计学分析，各组间差异比较，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，方差齐时，组间两两多重比较采用LSD法；方差不齐时，组间两两多重比较采Dunnett’s T3法，以P<0.05为标准，表示有显著性差异。正常组与模型组的比较，采用独立样本T检验(Student's t test)。与正常组相比，##：P<0.01；与模型组相比，*：P<0.05，**：P<0.01。

3实验结果

3.1广藿香油的成分分析

如图1所示，GC-MS分析鉴定了广藿香油中主要含有八种成分。表27列出了这八种化合物的保留指数和相对比例含量。其中，patchouli alcohol在广藿香油中占最大比例，为34.267％，其次是azulene占23.362％。此外，化合物α-guaiene(15.269％)、1H-3a,7-Methanoazulene(8.974％)、seychellene(6.860％)，4,7-Methanoazulene(5.212％)、caryophyllene(3.041％)和aciphyllene(3.016％)的相对比例含量均低于10％。

表27 广藿香油在总离子色谱图中的成分

3.2广藿香油对血清中肝功能相关指标和脂质含量相关指标的影响

图2中，(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、(F)分别表示AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量变化，与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，*P<0.05，**P<0.01，其中Vitamin E为维生素E。

由图2的(A)和(B)可知，与正常组相比，高脂饮食显著提高了血清AST和ALT水平(p<0.01)，而给予广藿香油和维生素E服用后，显著减轻了这些改变，且存在明显的剂量依赖关系(p<0.01)。

由图2的(C)、(D)、(E)、(F)可知，与正常组相比(p<0.01)，高脂饮食显着增加TG，TC和LDL-C在血清中的含量，但降低了HDL-C的血清含量。相反，广藿香油和维生素E的服用显著改善了TG，TC和LDL-C的这些异常增加(p<0.01)，并且提高了HDL-C含量(p<0.05；)。

3.3广藿香油对肝脏中脂质含量相关指标的影响

图3中(A)和(B)分别为TG、TC的含量测定图；与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，**P<0.01，其中Vitamin E：维生素E；由图3可知，与正常组相比，高脂饮食显著增加TG和TC在肝脏中的含量(p<0.01)；相反，广藿香油的服用显著降低了TG和TC的在肝脏中的含量(p<0.01)；此外，维生素E(100mg/kg)对TG和TC在肝脏中的含量也展示出显著性影响(p<0.01)。

3.4广藿香油对肝脏病理改变的影响

图4中，(A)为H&E染色，(B)为油红染色；由图4可知，喂食高脂饲料的大鼠在H&E和油红染色中显示出显著的组织病理学变化，如H&E染色所示，模型组中的肝脏H&E染色显示不规则的肝细胞排列和大空泡积聚，并且用油红染色的肝脏显微照片也清楚地显示出红泡积聚。然而，服用广藿香油可明显改善这些作为肝细胞脂肪变性指示的异常病理变化。此外，维生素E(100mg/kg)也有类似的治疗效果。

3.5广藿香油对肝脏中脂肪酸生成的影响

图5中，(A)为SREBP-1c的蛋白含量；(B)为FFA的蛋白含量；(C)、(D)为SREBP-1c；FAS；SCD-1的蛋白和基因表达水平；与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，*P<0.05，**P<0.01，Vitamin E为维生素E。

由图5(A)和(B)可知，与正常组相比，模型组中的SREBP-1c和FFA在肝脏中的蛋白含量显著增加(p<0.01)，但在服用广藿香油后可以显著改变SREBP-1c(p<0.05)和FFA(p<0.05)的这些异常趋势，值得注意的是，FFA(100mg/kg)显示出无统计学意义(p>0.05；)。由图5(C)可知，与正常组相比，高脂饮食显著提高了脂肪酸合成相关因子如SREBP-1c、FAS和SCD-1的基因表达，而广藿香油的服用显著抑制了这些改变(p<0.05)。由图5(D)可知，通过Western blot分析的蛋白表达水平的变化与基因表达水平的改变相似，除了SCD-1在低剂量的广藿香油中呈现出无显著性差异，维生素E(100mg/kg)对上述模型组中的现象都有显著性影响(p<0.05)。

3.6广藿香油对肝脏中脂肪酸氧化的影响

图6中，(A)、(B)、(C)、(D)、(E)分别为ROS、MDA、SOD、CAT、GSH的测定图；与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，*P<0.05，**P<0.01，Vitamin E为维生素E。

图7中，(A)和(B)分别为PPAR-α和CYP2E1的蛋白含量；(C)、(D)为PPAR-α；CPT-1；CYP2E1的蛋白和基因表达水平；与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，*P<0.05，**P<0.01，Vitamin E为维生素E。

如图6所示，与正常组相比，高脂饮食显着提高了ROS和MDA的水平而降低了SOD，CAT和GSH的含量(p<0.01)。相反，广藿香油的服用可以明显改善ROS和MDA的含量且提高SOD，CAT和GSH的含量(p<0.05)，除了ROS在低剂量的广藿香油中呈现无显著性差异，维生素E(100mg/kg)也发挥了类似的作用。

由图7(A)和(B)可知，与正常组相比，高脂饮食显著增加CYP2E1的蛋白含量，而降低PPAR-α的蛋白含量(p<0.01)。相反，广藿香油的服用显著抑制了CYP2E1的异常趋势(p<0.05)，且提高了PPAR-α的含量(p<0.01)。脂肪酸氧化相关因子的基因表达包括PPAR-α和CPT-1，与正常组相比受到明显的抑制(p<0.01)，而CYP2E1的基因表达被显著增强；由图7(C)可知，服用广藿香油后可显著提高PPAR-α和CPT-1的基因表达，降低CYP2E1的基因表达(p<0.01，除p<0.05，PPAR-α中PO 100mg/kg)；由图7(D)可知，PPAR-α，CPT-1和CYP2E1的Western blot分析结果与RT-qPCR分析中的结果相似(p<0.01)，维生素E(100mg/kg)对上述异常现象都起到了显著的治疗作用(p<0.05)。

3.7广藿香油对肝脏中脂蛋白输出的影响

图8中，(A)、(B)和(C)分别为MTTP、apoB-100和VLDL的蛋白含量；(D)、(E)分别为MTTP、apoB-100蛋白和基因表达水平；与正常组(NC)相比，##P<0.01；与模型组(Model)相比，*P<0.05，**P<0.01，Vitamin E为维生素E。

由图8(A)、(B)、(C)可知，与正常组相比，高脂饮食显著降低了肝脏中MTTP，apoB-100和VLDL的蛋白含量(p<0.01)，而这些异常的降低通过服用广藿香油后可得到显著的改善(p<0.05)。与此同时，与正常组相比，脂蛋白输出相关因子的基因表达如MTTP和apoB-100在模型组中可观察到显著的抑制现象(p<0.01)。相反，服用广藿香油后可显著提高MTTP和apoB-100的基因表达(p<0.01；图8D)。通过Western blot测量的蛋白表达水平的趋势与这些基因表达水平的趋势相似(p<0.05)，除了apoB-100在低剂量广藿香油中呈现无显著性差异(图8E)。维生素E(100mg/kg)对上述异常趋势都有显著治疗效果(p<0.05)。

综上所述，本发明的研究结果显示，广藿香油可明显改善高脂饮食诱导NAFLD大鼠血清内ALT、AST、HDL-C和LDL-C含量，显著降低血清和肝组织内TG、TC含量，修复肝组织病理学变化，降低肝组织中FFA、MDA、ROS含量，增强肝组织中SOD、CAT、GSH活性；此外，广藿香油还可调节NAFLD大鼠肝组织中SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPAR-α、CPT-1、CYP2E1、MTTP、apoB-100、VLDL的蛋白和基因表达，抑制脂肪酸合成通路SREBP-1c的活化以降低脂肪酸合成，促进脂肪酸氧化通路PPAR-α的活化以改善脂肪酸氧化，以及增强脂蛋白输出，维持脂质稳态，减少肝细胞脂肪蓄积、变性；可见，广藿香油可通过调节脂质蓄积来抑制肝细胞脂肪变性从而能有效预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的有效成分包括广藿香油，所述广藿香油在药物制剂中的重量百分含量为0.71％～40％。

2.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述广藿香油在药物制剂中的重量百分含量为5％～20％。

3.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂还包括药用赋形剂，所述药用赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑助流剂、水溶性基质、冷凝介质、增溶剂、防腐剂、甜味剂。

4.如权利要求3所述药物制剂，其特征在于，所述药用赋形剂在药物制剂中的重量百分含量为：填充剂40％～80％、粘合剂1％～45％、崩解剂5％～20％、润滑助流剂0.1％～10％、水溶性基质55％～65％、冷凝介质1.5％～6.7％、增溶剂30％～40％、防腐剂0.5％～1％、甜味剂3％～5％。

5.如权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，所述填充剂选自乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、淀粉、蔗糖、β-环糊精中的至少一种；所述粘合剂选自淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、糊精、羟丙基纤维素中的至少一种；所述崩解剂选自交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠中的至少一种；所述润滑助流剂选自硬脂酸镁、硬脂酸钠、十二烷基硫酸钠、二氧化硅、聚乙二醇中的至少一种；所述水溶性基质选自PEG4000、PEG6000、甘油明胶中的至少一种；所述冷凝介质选自液体石蜡和甲基硅油中的至少一种；所述增溶剂选自泊洛沙姆、乙醇中的至少一种；所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸、苯甲酸钠中的至少一种；所述甜味剂选自甜菊苷、单糖浆、蜂蜜中的至少一种。

6.如权利要求1～5任一项所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂的剂型为口服液、片剂、胶囊剂、滴丸或颗粒剂。

7.广藿香油在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用。