CN111346025A - 一种能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体及其组合物以及在化妆品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供能提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体，原料包括磷脂、神经酰胺，其中磷脂为大豆磷脂或/和氢化大豆磷脂。磷脂与神经酰胺重量比为10:1~3:1，最优选3:1；磷脂优选方案为重量比20:1~1:1的大豆磷脂、氢化大豆磷脂混合物，最优选5:1；原料还可包括冻干保护剂。本发明还提供含有灵芝水提物的脂质体，灵芝水提物中多糖含量不低于0.10mg/mL，多糖和多肽重量比10:1~1:10，最优选多糖含量不低于0.30mg/mL，多糖和多肽重量比1:10。通过加入神经酰胺这一关键角质脂质成分提高水溶性成分，包括灵芝多糖水提物的入皮效果，从而显著提升功效物质的抗衰老效果，其机制为通过复合磷脂技术与神经酰胺脂质体融合成均一相，这项发明为灵芝水提物等水溶性功效物质在化妆品中的应用提供关键技术。

Description

一种能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体及其组合物 以及在化妆品中的应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，涉及一种能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体及其组合物，和在化妆品中的应用。
背景技术
脂质体是一种具有类似于生物膜组成和结构的囊泡，也是一种新型药物载体。由于脂质体能够与皮肤脂质融合，干扰皮肤屏障功能，因此早在上世纪八十年代末就被作为皮肤局部给药的载体，能够增加药物在皮内的含量，改善递送效果。一般而言，脂质体采用单一磷脂组成，并以不饱和磷脂如大豆磷脂为主。
皮肤屏障功能主要在角质层脂质，在脂质体中添加角质层脂质(最主要的是神经酰胺)能够增强脂质体的皮肤递送效果，但是，由于神经酰胺的相变温度较高，加入脂质体后易导致脂质体形成多相共存导致相分离，从而严重制约了其应用。
不同于单一磷脂的传统脂质体，复合磷脂脂质体通常采用2种具有不同相变温度(Tm)的磷脂材料作为膜材，研究表明复合磷脂能够通过静电作用相互组合，从而有效调节脂质体的相变温度，提高脂质体的包封率和稳定性以及靶向递送效果。
灵芝是一种真菌类中药，有“仙草”之称，被《神农本草经》列为上品。现代科学研究表明，灵芝水提物中的多糖或多肽是其主要活性成分之一，具有显著的抗氧化活性，应用到化妆品中具有抗衰老、保湿、美白等功效。此外，灵芝中还含有蛋白质，通过发酵工艺处理的灵芝水提物，一般均能促进蛋白质等大分子活性物质水解为多肽，增加了多肽的含量，从而也提高了活性，因此在化妆品领域有较好的应用前景。但是，由于多肽和多糖极性较强，分子量相对较高，不符合容易经皮吸收的化合物性质要求(分子量小于600，脂溶性大于水溶性)，因此，如何改善其经皮吸收效果就成为化妆品领域的研究热点。
本专利方案通过调节复合磷脂组成比例增强与神经酰胺的相互作用，进而提高皮内递送效果，从而实现了将水溶性成分，包括灵芝水提物中的极性有效成分高效递送入皮发挥抗衰老等功效，最终为灵芝水提物化妆品的开发提供了一项关键技术。
发明内容
发明目的：本发明要解决的技术问题是研发一种能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体及其组合物，和在化妆品中的应用。
技术方案：
本发明提供一种能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体，制备所述脂质体的原料包括磷脂、神经酰胺。
作为进一步改进，所述磷脂为大豆磷脂、氢化大豆磷脂或其混合物。优选方案为磷脂由大豆磷脂与氢化大豆磷脂按重量配比20:1～1:1组成，优选比例10:1～5:1，更优选比例5:1。
作为进一步改进，所述磷脂与神经酰胺按如下重量配比组成：磷脂：神经酰胺＝10:1～3:1，更优选方案为3:1。
作为进一步改进，所述原料还包括冻干保护剂。
本发明还提供上述脂质体的制备方法，按照如下步骤制备：采用薄膜分散法制备脂质体，称取磷脂膜材至茄形瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜；取出后，加入磷酸缓冲液水合1小时；水合后取出脂质体在-80℃和30℃冻融循环3～5次；通过超声或挤出减小粒径，即得。
本发明还提供一种含有上述能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体的组合物。
作为进一步改进，上述组合物还含有一种可药用载体。
作为进一步改进，上述组合物还含有灵芝水提物。
作为更进一步改进，上述组合物中灵芝水提物由以下方法制备所得：灵芝粉采用水通过超声工艺提取，获得的提取物或灵芝粉加入酵母菌和水发酵后得到的发酵体系通过高压灭菌、离心取上清液所得到的水提取物，即为所述灵芝水提物。
作为更进一步改进，上述组合物中灵芝水提物的主要成分以多糖和多肽为主，优选方案有如下几种：多糖含量不低于0.10mg/mL，且多糖含量和多肽的重量配比为10:1～1:10，优选1:1；多糖含量不低于0.15mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:1～1:10，优选1:3；多糖含量不低于0.20mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:3～1:10，优选1:6；多糖含量不低于0.30mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:3～1:10，优选1:10。其中最优选的方案为多糖含量不低于0.30mg/mL，多糖和多肽的含量比为1:10。
本发明还提供上述组合物在化妆品中的应用。
本发明还提供上述组合物的制备方法，按照如下步骤制备：采用薄膜分散法制备脂质体，称取磷脂膜材至茄形瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜；取出后，加入灵芝水提物水合1小时；水合后取出脂质体在-80℃和30℃冻融循环3～5次；通过超声或挤出减小粒径，即得。
有益效果：
本专利方案提供的能够提高水溶性成分皮肤递送效果的脂质体，通过加入神经酰胺这一关键角质脂质成分提高入皮效果，通过磷脂或复合磷脂技术与神经酰胺融合成一相，提高水溶性大分子的皮肤递送效果，从而显著提升了灵芝水提物等水溶性功效物质的抗衰老效果，最终为灵芝水提物等水溶性功效物质在化妆品中的应用提供了关键技术。
附图说明
图1给予灵芝水提物和灵芝水提物脂质体后皮内SOD活力比较(n＝10)，与模型组相比：*p<0.05；
图2给予灵芝水提物和灵芝水提物脂质体后皮内MDA含量比较(n＝10)，与模型组相比：*p<0.05,**p<0.01；
图3给予灵芝水提物和灵芝水提物脂质体后皮内羟脯氨酸含量比较(n＝10)，与模型组相比：*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001；
图4复合磷脂与神经酰胺按不同比例混合后的DSC图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例进一步阐明本发明的内容，但这些实例并不限制本发明的保护范围。
实施例1：脂质体的制备
取磷脂450mg，加入神经酰胺3，于茄形瓶中加入无水乙醇超声溶解，减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜，取出后，加入20mL磷酸缓冲液水合1h，水合后取出脂质体在-80℃和30℃冻融循环3～5次；超声，即得。
其中磷脂为大豆磷脂或氢化大豆磷脂或其混合物。
其中大豆磷脂、氢化大豆磷脂混合物的质量配比有如下几种方案：20:1、10:1、5:1、1:1，优选5:1。
磷脂总量与神经酰胺的重量配比有如下几种方案：10:1、4.5:1、3:1，优选3:1。
实施例2：脂质体的制备
与实施例1不同的是，在最后一个步骤超声结束后，在脂质体混悬液中加入冻干保护剂甘露糖，冻干得粉末。
实施例3：灵芝水提物脂质体的制备
与实施例1不同的是，真空干燥过夜，取出后，加入20mL灵芝水提物水合1h。
实施例4：灵芝水提物脂质体的制备
与实施例3不同的是，限定灵芝多糖中多糖含量，多糖与多肽的重量配比，见下表：
多糖浓度不低于/mg/mL 多糖与多肽的质量含量比 多糖与多肽比例的优选方案
0.10 10:1～1:10 1:1
0.15 1:1～1:10 1:3
0.20 1:3～1:10 1:6
0.25 10:1～1:1 1:5
0.30 1:3～1:10 1:10
实施例5：灵芝水提物脂质体的制备
与实施例3、4不同的是，在最后一个步骤超声结束后，在脂质体混悬液中加入冻干保护剂甘露糖，冻干得粉末。
实施例6：抗衰老动物实验
将灵芝水提物(原料中磷脂为重量配比为5:1的大豆磷脂、氢化大豆磷脂混合物，磷脂总量与神经酰胺的重量配比为3:1，多糖浓度为0.3mg/mL，多糖与多肽的含量比为1:10)制成脂质体的制备方法参照实施例3。
选洁净级昆明种小鼠50只，随机分为5组，适应性饲养一周后，先用手术剪剪去小鼠背部的毛发，再用10％硫化钠涂在小鼠背部进行脱毛处理，使小鼠裸露出约2.5cm×2.5cm的皮肤面积，观察小鼠皮肤状态，再适应性饲养三天无特殊反应后建立小鼠衰老模型，具体方法：每天给小鼠颈背部皮下注射剂量为1000mg/kg的D-半乳糖，连续注射42天，正常组每天皮下注射等剂量的生理盐水。从造模第一天开始，按多肽含量50mg/kg/d在脱毛处皮肤涂抹相应药物(生理盐水即模型组、灵芝水提物、灵芝水提物脂质体、灵芝乳液市售制剂)。给药完成后处死动物，取下给药部位的皮肤，加入9倍量的冷生理盐水制备匀浆，匀浆完成后重复冻融3次，使皮肤细胞破碎，取上清液按试剂盒测定皮肤中SOD、MDA和羟脯氨酸含量以评价抗衰老效果。SOD是唯一能够特异性清除超氧自由基的抗氧化酶，MDA是脂类过氧化的最终产物，羟脯氨酸的含量能反映胶原纤维变化，三者均是评价抗皮肤衰老的常用指标。
结果如图1～3所示。可见，灵芝水提物采用复合磷脂组成并加入神经酰胺制成脂质体后，能显著提高皮肤的抗衰老效果。
实施例7：DSC研究
将神经酰胺(神经酰胺3)与复合磷脂(大豆磷脂与氢化大豆磷脂重量比为5:1)溶解于无水乙醇中，在茄形瓶中减压成膜，取膜做差示扫描量热分析(DSC)，结果如图4所示，可见，当复合磷脂与神经酰胺比例达到3:1之后，神经酰胺的特征峰消失，脂质体形成均一相。
实施例8：荧光探针的皮内递送
采用FITC-dextran10k作为荧光探针，固定磷脂与神经酰胺3的重量比为3:1，改变复合磷脂比例(大豆磷脂，或大豆磷脂：氢化大豆磷脂＝20：1，5：1，3：1，1：1)，按实施例1方法制备荧光探针脂质体，取荧光探针脂质体1mL进行体外经皮吸收实验，采用垂直的Franz扩散池，以大鼠离体腹部皮肤为皮肤模型，以生理盐水为接收液，给予荧光探针脂质体10h后，取下皮肤，滤纸吸干，采用生理盐水制成匀浆，离心取上清采用荧光分光光度计测定皮内荧光物质的含量，结果如下表所示。可见，当大豆磷脂：氢化大豆磷脂＝5:1时皮内递送效果最好(与SPC脂质体相比有显著性差异，p<0.01)。
表1复合磷脂组成比例对荧光探针皮内递送效果的影响(n＝5)
Figure BDA0002408638710000051
Figure BDA0002408638710000061
注：SPC:大豆磷脂；HSPC:氢化大豆磷脂。

Claims (23)

1.一种能够提高水溶性成分皮肤局部递送效果的脂质体，其特征在于制备所述脂质体的原料包括磷脂、神经酰胺。
2.如权利要求1所述脂质体，其特征在于：所述磷脂为大豆磷脂、氢化大豆磷脂或其混合物。
3.如权利要求1所述脂质体，其特征在于：所述磷脂由大豆磷脂与氢化大豆磷脂按重量配比20:1~1:1组成。
4.如权利要求1所述脂质体，其特征在于：所述磷脂由大豆磷脂与氢化大豆磷脂按重量配比10:1~5:1组成。
5.如权利要求1所述脂质体，其特征在于：所述磷脂由大豆磷脂与氢化大豆磷脂按重量配比5:1组成。
6.如权利要求1~5任一项所述脂质体，其特征在于，所述磷脂与神经酰胺按重量配比10:1~3:1组成。
7.如权利要求6所述脂质体，其特征在于，所述磷脂与神经酰胺按重量配比3:1组成。
8.如权利要求6所述脂质体，其特征在于：所述原料还包括冻干保护剂。
9.如权利要求7所述脂质体，其特征在于：所述原料还包括冻干保护剂。
10.一种制备权利要求1~9中任一项脂质体的方法，其特征在于采用薄膜分散法制备，具体包括如下步骤：磷脂与神经酰胺的膜材加无水乙醇减压旋转蒸发，真空干燥过夜，磷酸缓冲液水合，冻融循环，超声或挤出减小粒径。
11.一种制备权利要求1~9中任一项脂质体的方法，其特征在于按照如下步骤制备：采用薄膜分散法制备脂质体，称取磷脂与神经酰胺的膜材至茄形瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜；取出后，加入磷酸缓冲液水合1小时；水合后取出脂质体在-80 ℃和30 ℃冻融循环3~5次；通过超声或挤出减小粒径，即得。
12.一种含有权利要求1~9之一的脂质体的组合物。
13.如权利要求12的组合物，其特征在于所述组合物还含有一种可药用载体。
14.如权利要求12或13的组合物，其特征在于所述组合物还含有灵芝水提物。
15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于所述灵芝水提物由以下方法制备所得：灵芝粉采用水通过超声工艺提取，获得的提取物或灵芝粉加入酵母菌和水发酵后得到的发酵体系通过高压灭菌、离心取上清液所得到的水提取物，即为所述灵芝水提物。
16.如权利要求14所述的组合物，其特征在于：所述灵芝水提物的主要成分以多糖和多肽为主，其中多糖含量不低于0.10mg/mL，并且多糖含量和多肽的重量配比为10:1~1:10。
17.如权利要求14所述的组合物，其特征在于：所述灵芝水提物中多糖含量不低于0.15mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:1~1:10。
18.如权利要求14所述的组合物，其特征在于：所述灵芝水提物中多糖含量不低于0.20mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:3~1:10。
19.如权利要求14所述的组合物，其特征在于：所述灵芝水提物中多糖含量不低于0.30mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:3~1:10。
20.如权利要求14所述的组合物，其特征在于：所述灵芝水提物中多糖含量不低于0.30mg/mL，多糖和多肽的重量配比为1:10。
21.权利要求12~20中任一项所述组合物在化妆品中的应用。
22.一种制备权利要求14~20中任一项组合物的方法，其特征在于采用薄膜分散法制备，具体包括如下步骤：磷脂与神经酰胺的膜材加无水乙醇减压旋转蒸发，真空干燥过夜，灵芝水提物水合，冻融循环，超声或挤出减小粒径。
23.一种制备权利要求14~20中任一项组合物的方法，其特征在于按照如下步骤制备：采用薄膜分散法制备，称取磷脂与神经酰胺的膜材至茄形瓶中，加适量无水乙醇超声溶解，减压旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜；取出后，加入灵芝水提物水合1小时；水合后取出脂质体在-80 ℃和30 ℃冻融循环3~5次；通过超声或挤出减小粒径，即得。
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