CN111337667A - 一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法，包括装在铝箔袋中的一组检测试纸、阳性对照、检测结果记录卡和说明书，快速检测新型冠状病毒检测试纸由底板、样品区、反应区、封闭用乳胶、显色层和吸水区组成，样品垫和吸水垫分别设置于底板上且位于底板上相对的两侧，样品垫为吸滤纸或玻璃纤维膜，用于承载待检测物；底板上固定有硝酸纤维膜，吸水垫为吸水纸；通过ACE2、CHOP双蛋白，采用“双酶联免疫吸附”来特异性捕捉结合冠状病毒蛋白抗原；再通过试纸反应区中CHOP反应元件与生物素联合，亲和素连接辣根过氧化物酶，经过生物素‑亲和素系统，通过化学显色，可快速判断检测结果，也可以利用酶标仪精准检测病毒含量。

Description

一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及抗原快速检测试剂技术领域，具体为一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法。
背景技术
2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征（MERS）和严重急性呼吸综合征（SARS）等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
但由于有限的物资和检测手段，目前已知确诊新型冠状病毒需要用qPCR方法，其操作难度较大以及相较于其他检测方法成本较高。这就导致现有试剂盒的数量并不能满足大量市民的统一检测，目前新型冠状病毒的疑似病例居高不下，因此，早期并且快速的确诊病毒感染是当务之急，发明一种检测新型冠状病毒试纸以改善目前早期确诊病毒感染具有重要临床价值。
由于ACE2蛋白体外非特异性结合病毒，我们通过增加CHOP（(C/EBP-homologousprotein)是转录因子C/EBP(CCAAT enhancer binding protein,CCAAT增强子结合蛋白)的同源蛋白）蛋白结合点，与冠状病毒特异性双结合，因此本研究采用的“双酶联免疫吸附测定”，捕捉到的蛋白抗原，同时必须能够结合ACE2蛋白和CHOP蛋白，满足此两种条件的为：COVID-19 (Corona Virus Disease 2019)。此检测方法无须直接获取冠状病毒的抗体，只需获取常见的ACE2蛋白和CHOP蛋白，通过“双酶联免疫吸附测定”来检测新型冠状病毒为本专利的创新点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法，以解决上述背景技术中提出的操作难度较大以及相较于其他检测方法成本较高等问题；本检测方法无须直接获取冠状病毒的抗体，只需获取常见的ACE2蛋白和CHOP蛋白，通过“双酶联免疫吸附测定”来检测新型冠状病毒，用最简单的试纸颜色就能呈现，无需仪器设备，简单快速，适合现场筛查；降低个体在医院感染的风险；缩短病人等待时间，及时进行治疗；减轻疫情定点医院的工作量。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，包括装在铝箔袋中的一组检测试纸、阳性对照、检测结果记录卡和说明书，所述一组检测试纸共有五片，阳性对照为一袋，检测结果记录卡为一张，说明书为一份，检测试纸为快速检测新型冠状病毒检测试纸，快速检测新型冠状病毒检测试纸由底板、样品区、反应区、封闭用乳胶、显色层和吸水区组成，所述样品区的样品垫和吸水区的吸水垫分别设置于底板上且位于底板上相对的两侧；其中，样品垫用于承载待检测物；所述底板上固定有硝酸纤维膜；样品垫为吸滤纸或玻璃纤维膜；吸水垫为吸水纸；所述反应区设在样品区和吸水区之间，反应区由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与生物素相连的CHOP反应元件、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、底物构成；反应区与显色层连接，所述封闭用乳胶在显色层的外圈，显色层为酶的显色液。
进一步的，所述反应区由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、与生物素相连的CHOP反应元件、底物依次连接，所述底物是由可发色的过氧化物和供氢体组成，其中ACE2蛋白和CHOP蛋白的用量比1：2-1：3；CHOP与生物素相连的CHOP反应元件用量比1：1-1.5；CHOP反应元件用量比与亲和素相连的特异性酶之间的用量比 1：1；可发色的过氧化物和供氢体即底物的用量比为2：1。
进一步的，所述显色区的周边密封有封闭用乳胶，酶的显色液如TMB显色液或DAB辣根过氧化物酶显色液。
进一步的，所述底板为不吸水材料，如PVC或其它硬质材料。
进一步的，所述显色区内的结合物与辣根过氧化物酶偶联，该结合产物与底物及酶的显色液发生反应，通过显色反应来判断病毒的感染情况；而若待检测物中不含有新型冠状病毒，则不形成结合物，若待检测物中含有新型冠状病毒，则形成ACE2蛋白-新冠状病毒-CHOP蛋白—CHOP反应元件生物素—亲和素辣根过氧化物酶，从而激活发色过氧化物和供氢体而呈现颜色变化。
进一步的，所述快速检测新型冠状病毒检测试纸本体为方形。
进一步的，所述显色区为位于快速检测新型冠状病毒检测试纸中部的圆形。
一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法的检测方法，包括以下步骤：
第一步，准备：使用前将检测试剂、样本和裂解液恢复至室温；
第二步：用稀释液瓶竖直滴加11-13滴裂解液到样本抽提管的第一刻度线处；
第三步：用棉签采集患者的咽喉拭子或鼻腔拭子即样本插入到上述抽提管中，静置1分钟；
第四步：将咽喉拭子或鼻腔拭子在抽提管中旋转6次，使样本与裂解液完全混合；
第五步：用手指捏抽提管壁，尽量挤干棉签上的溶液后将其取出；
第六步：将抽提管的滴头插入到抽提管上；
第六步：将快速检测新型冠状病毒检测试纸从铝箱袋中取出，平放在桌面上；
第七步：将抽提管中液体滴3滴到快速检测新型冠状病毒检测试纸的样品区中；
第八步：经吸水垫的吸水力，待测物进入反应区，10min时观察结果，10min后观察结果无效；
第九步：若待检测物中含有新型冠状病毒，得到的抗原抗体结合物与酶偶联，该结合产物与相应底物发生反应，显色层出现黄色为阳性POSITIVE，显色层颜色没有变化为阴性NEGATIVE；
第十步：重复测试三次，抽提快速检测新型冠状病毒检测试纸上面的底物，通过生物素-亲合素系统来化学发光，通过颜色变化来直接判断结果，进一步也可以通过酶标仪来精确检测精确定量新型冠状病毒。
进一步的，所述第一步中室温为15℃~30℃，裂解液是RIPA裂解液。
进一步的，所述第二步中样本抽提管的第一刻度线为0.5mL。
有益效果
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：
1、用最简单的试纸颜色就能呈现结果；
2、无需仪器设备，简单快速；
3、适合现场筛查；
4、 降低个体在医院感染的风险；
5、 缩短病人等待时间，及时进行治疗；
6、减轻疫情定点医院的工作量；
7、本发明提供的免疫层析试纸，加入样品，经吸水垫的吸水力，待测物进入反应区，若待检测物中含有新型冠状病毒，得到的抗原抗体结合物与酶偶联，该结合产物与相应底物发生反应，通过显色反应来判断病毒的感染情况；而若待检测物中不含有新型冠状病毒，则不形成结合物；
8、我们的测试系统做成试纸形式，通过初步的颜色变化来初判有无感染冠状病毒，这种初筛型的试纸材料 ，可以用在口罩上，通过颜色变化，帮助判断口罩寿命以及是否感染上病毒；进一步的也可以抽提试纸上面的底物，通过生物素-亲合素系统来化学发光，通过酶标仪来精确检测；
9、采取本发明的检测试纸来进行检测时，无需专业检测人员来进行，操作非常简单，直观的感受病毒的感染情况，而且能够快速获得结果；本发明提供的新型冠状病毒检测试纸条，为新型冠状病毒的检测提供便利；
10、本发明利用新型冠状病毒可在体外特异性结合CHOP蛋白和ACE2蛋白从而通过简易ELISA来判断病毒的感染情况，也涉及生物素和亲和素到反应的颜色变化，进而反应到试纸上的颜色变化；之后通过生物素和亲和素放大级别的化学发光来靠酶标仪来进行更为精确的检测，测试方法简单，检测速度快，检测效果明显，可作为初步筛查的重要手段。
附图说明
图1是本申请一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的简要理论指导图；
图2是本申请快速检测新型冠状病毒检测试纸结构示意图；
图3是本申请一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的检测方法的第二到第五步操作示意图；
图4是本申请一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的检测方法的第七步操作示意图；
图5是本申请一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的双酶联免疫吸附测定图。
附图标记说明： 1、样品区；2、反应区；3、封闭用乳胶； 4、显色层；5、吸水区。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，包括装在铝箔袋中的一组检测试纸、阳性对照、检测结果记录卡和说明书，所述一组检测试纸共有五片，阳性对照为一袋，检测结果记录卡为一张，说明书为一份，检测试纸为快速检测新型冠状病毒检测试纸，快速检测新型冠状病毒检测试纸由底板、样品区1、反应区2、封闭用乳胶3、显色层4和吸水区5组成，所述样品区1的样品垫和吸水区5的吸水垫分别设置于底板上且位于底板上相对的两侧；其中，样品垫用于承载待检测物；所述底板上固定有硝酸纤维膜；样品垫为吸滤纸或玻璃纤维膜；吸水垫为吸水纸；所述反应区2设在样品区1和吸水区5之间，反应区2由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与生物素相连的CHOP反应元件、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、底物构成；反应区2与显色层4连接，所述封闭用乳胶3在显色层4的外圈，显色层4为酶的显色液。
所述反应区2由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、与生物素相连的CHOP反应元件、底物依次连接，所述底物是由可发色的过氧化物和供氢体组成，其中ACE2蛋白和CHOP蛋白的用量比1：2-1：3；CHOP与生物素相连的CHOP反应元件用量比1：1-1.5；CHOP反应元件用量比与亲和素相连的特异性酶之间的用量比 1：1；可发色的过氧化物和供氢体即底物的用量比为2：1。
所述显色区4的周边密封有封闭用乳胶3，酶的显色液如TMB显色液或DAB辣根过氧化物酶显色液；底板为不吸水材料，如PVC或其它硬质材料；显色区4内的结合物与辣根过氧化物酶偶联，该结合产物与底物及酶的显色液发生反应，通过显色反应来判断病毒的感染情况；而若待检测物中不含有新型冠状病毒，则不形成结合物，若待检测物中含有新型冠状病毒，则形成ACE2蛋白-新冠状病毒-CHOP蛋白—CHOP反应元件生物素—亲和素辣根过氧化物酶，从而激活发色过氧化物和供氢体而呈现颜色变化；快速检测新型冠状病毒检测试纸本体为方形；显色区4为位于快速检测新型冠状病毒检测试纸中部的圆形。
一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法的检测方法，包括以下步骤：
第一步，准备：使用前将检测试剂、样本和RIPA裂解液恢复至室温15℃~30℃；
第二步：用稀释液瓶竖直滴加11-13滴裂解液到样本抽提管的第一刻度线处；
第三步：用棉签将采集患者的咽喉拭子或鼻腔拭子即样本插入到上述抽提管中，静置1分钟；
第四步：将样本在抽提管中旋转6次，使样本与裂解液完全混合；
第五步：用手指捏抽提管壁，尽量挤干棉签上的溶液后将棉签取出；
第六步：将抽提管的滴头插入到抽提管上；
第六步：将快速检测新型冠状病毒检测试纸从铝箱袋中取出，平放在桌面上；
第七步：将抽提管中液体滴3滴到快速检测新型冠状病毒检测试纸的样品区1中，样品区、反应区、封闭用乳胶、显色层和吸水区在底板处相连，借助吸收区的虹吸作用，将待测物进入反应去；
第八步：经吸水垫的吸水力，待测物进入反应区2，10min时观察结果，10min后观察结果无效；
第九步：若待检测物中含有新型冠状病毒，得到的抗原抗体结合物与酶偶联，该结合产物与相应底物发生反应，显色层4出现黄色为阳性POSITIVE，显色层4颜色没有变化为阴性NEGATIVE；
第十步：重复测试三次，抽提快速检测新型冠状病毒检测试纸上面的底物，通过生物素-亲合素系统来化学发光，通过颜色变化来直接判断结果，进一步也可以通过酶标仪来精确检测精确定量新型冠状病毒。
因为ACE2蛋白和CHOP蛋白，它们能体外特异性结合冠状病毒，通过试纸的反应区中CHOP反应元件与生物素联合，最后通过CHOP与病毒偶联，亲和素连接辣根过氧化物酶，经过生物素-亲和素系统，通过显色反应化学发光，可利用常规的酶标仪检测病毒的含量，根据生物素和亲和素的颜色变化来间接呈现病毒含量的多少。
所述阴性结果应该排除以下因素干扰:检测方法是否有误。
基于以上颜色对结果的判断还包括以下四种情况：
1、阴性检测测试结果应为阴性结果，否则说明环境不合格;
2、阳性对照测试结果应为阳性结果，否则说明试剂盒失效;
3、测试三次均为阴性结果，判定测试结果为阴性;
4、至少有一次测试为阳性结果，判定测试结果为阳性；
所述阳性结果应该排除以下因素干扰：其他流感病毒感染。
本专利涉及的新型冠状病毒检测试纸虽然便于患者自检，可以通过简便的检测方法得到结果，但只能作为一个新型冠状病毒感染筛查的手段，仍然不能完全排除多种因素引起的伪阳性及伪阴性。故需要以试纸的结果与临床症状，还有结合医师的经验来最终判断结果，检测阳性及时就医。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，包括装在铝箔袋中的一组检测试纸、阳性对照、检测结果记录卡和说明书，其特征在于：所述一组检测试纸共有五片，阳性对照为一袋，检测结果记录卡为一张，说明书为一份，检测试纸为快速检测新型冠状病毒检测试纸，快速检测新型冠状病毒检测试纸由底板、样品区（1）、反应区（2）、封闭用乳胶（3）、显色层（4）和吸水区（5）组成，所述样品区（1）的样品垫和吸水区（5）的吸水垫分别设置于底板上且位于底板上相对的两侧；其中，样品垫用于承载待检测物；所述底板上固定有硝酸纤维膜；样品垫为吸滤纸或玻璃纤维膜；吸水垫为吸水纸；所述反应区（2）设在样品区（1）和吸水区（5）之间，反应区（2）由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与生物素相连的CHOP反应元件、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、底物构成；反应区（2）与显色层（4）连接，所述封闭用乳胶（3）在显色层（4）的外圈，显色层（4）为酶的显色液。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述反应区（2）由ACE2蛋白和CHOP蛋白、与亲和素相连的辣根过氧化物酶、与生物素相连的CHOP反应元件、底物依次连接，所述底物是由可发色的过氧化物和供氢体组成，其中ACE2蛋白和CHOP蛋白的用量比1：2-1：3；CHOP与生物素相连的CHOP反应元件用量比1：1-1.5；CHOP反应元件用量比与亲和素相连的特异性酶之间的用量比 1：1；可发色的过氧化物和供氢体即底物的用量比为2：1。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述显色区（4）的周边密封有封闭用乳胶（3），酶的显色液如TMB显色液或DAB辣根过氧化物酶显色液。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述底板为不吸水材料，如PVC或其它硬质材料。
5.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述显色区（4）内的结合物与辣根过氧化物酶偶联，该结合产物与底物及酶的显色液发生反应，通过显色反应来判断病毒的感染情况；而若待检测物中不含有新型冠状病毒，则不形成结合物，若待检测物中含有新型冠状病毒，则形成ACE2蛋白-新冠状病毒-CHOP蛋白—CHOP反应元件生物素—亲和素辣根过氧化物酶，从而激活发色过氧化物和供氢体而呈现颜色变化。
6.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述快速检测新型冠状病毒检测试纸本体为方形。
7.根据权利要求1所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于：所述显色区（4）为位于快速检测新型冠状病毒检测试纸中部的圆形。
8.一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的检测方法，其特征在于,包括以下步骤:
第一步，准备：使用前将检测试剂、样本和裂解液恢复至室温；
第二步：用稀释液瓶竖直滴加11-13滴裂解液到样本抽提管的第一刻度线处；
第三步：用棉签将采集患者的咽喉拭子或鼻腔拭子即样本插入到上述抽提管中，静置1分钟；
第四步：将样本在抽提管中旋转6次，使样本与裂解液完全混合；
第五步：用手指捏抽提管壁，尽量挤干棉签上的溶液后将棉签取出；
第六步：将抽提管的滴头插入到抽提管上；
第六步：将快速检测新型冠状病毒检测试纸从铝箱袋中取出，平放在桌面上；
第七步：将抽提管中液体滴3滴到快速检测新型冠状病毒检测试纸的样品区（1）中；
第八步：经吸水垫的吸水力，待测物进入反应区（2），10min时观察结果，10min后观察结果无效；
第九步：若待检测物中含有新型冠状病毒，得到的抗原抗体结合物与酶偶联，该结合产物与相应底物发生反应，显色层（4）出现黄色为阳性POSITIVE，显色层（4）颜色没有变化为阴性NEGATIVE；
第十步：重复测试三次，抽提快速检测新型冠状病毒检测试纸上面的底物，通过生物素-亲合素系统来化学发光，通过颜色变化来直接判断结果，进一步也可以通过酶标仪来精确检测精确定量新型冠状病毒。
9.根据权利要求7所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述第一步中室温为15℃~30℃，裂解液是RIPA裂解液。
10.根据权利要求7所述的一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述第二步中样本抽提管的第一刻度线为0.5mL。
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