CN113049831A - 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用 - Google Patents

检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113049831A
CN113049831A CN202110270816.6A CN202110270816A CN113049831A CN 113049831 A CN113049831 A CN 113049831A CN 202110270816 A CN202110270816 A CN 202110270816A CN 113049831 A CN113049831 A CN 113049831A
Authority
CN
China
Prior art keywords
kit
ncov
novel coronavirus
enzyme label
detecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110270816.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113049831B (zh
Inventor
王志新
曾滨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Bohui Innovation Biotechnology Group Co Ltd
Original Assignee
Beijing Bohui Innovation Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Bohui Innovation Biotechnology Co Ltd filed Critical Beijing Bohui Innovation Biotechnology Co Ltd
Priority to CN202110270816.6A priority Critical patent/CN113049831B/zh
Publication of CN113049831A publication Critical patent/CN113049831A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113049831B publication Critical patent/CN113049831B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明适用于生物医学技术领域，提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用，该检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒包括酶标板，所述酶标板上固定有新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE‑2。本发明通过将新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白通过物理吸附的方法固定在酶标板上，固定在酶标板上的新冠病毒2019‑nCov衣壳蛋白再与辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE‑2特异性结合形成配体复合物，既增强了保护酶标蛋白的活性的作用，同时也减少了酶标蛋白的用量，而且缩减了操作步骤和检测时间。

Description

检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用。
背景技术
新型冠状病毒(2019-nCov病毒)严重威胁了人类生命和健康，其中和抗体可以起到保护作用。简单、快速的检测手段和方法是诊断、治疗、预后、疫苗效果观察的有效的方法。
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2，2019-nCoV)是冠状病毒科β属的一个分型，是一种具有包膜的线性单股正链RNA病毒。2019-nCoV具有几种结构蛋白，其中的刺突蛋白(S)包含一个受体结合域(RBD)，负责识别细胞表面受体血管紧张素转化酶2(ACE2)。RBD蛋白与人ACE2受体会发生强烈作用，使病毒进入宿主细胞并进行病毒复制。病毒感染后，会引发免疫反应，在血液中产生可保护宿主、防止再次受到病毒感染的抗体，此抗体被称为中和抗体。在新冠病毒感染后产生的抗体并非都是中和抗体，而仅中和抗体可以保护机体避免受到病毒侵害，因此，在临床上对于新型冠状病毒中和抗体的测定对于临床诊断及预后具有重大意义。
当前病毒中和检测金标准是需要在专业的生物防护设施(三级生物安全实验室，BSL3)中使用活病毒。该检测方法不仅十分昂贵，具有生物安全风险，而且很慢，通常需要3-5天才能拿到结果。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，旨在解决背景技术中提出的问题。
本发明实施例是这样实现的，检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，所述酶标板上固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。
作为本发明实施例的一个优选方案，所述新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白通过物理吸附的方法固定在所述酶标板上。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：
将缓冲液和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到包被液；
用包被液对酶标板进行包被处理后，再经洗涤，得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板；
将高碘酸钠溶液与辣根过氧化物酶溶液进行避光混合后，再加入乙二醇进行混合，得到混合液；
往混合液中添加受体蛋白ACE-2进行混合，并添加缓冲液调整pH值后，再进行透析处理，得到透析液；
往透析液中加入硼氢化钠溶液进行避光混合后，再进行透析处理，得到得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2；
将辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2进行稀释，并加入到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中进行二次包被处理后，再经洗涤、封闭和干燥处理，得到所述试剂盒。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述包被液中，新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的浓度为80～120ng/mL。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述步骤中，包被处理的温度为3～5℃。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述步骤中，采用含有牛血清白蛋白的缓冲液进行封闭。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述含有牛血清白蛋白的缓冲液中牛血清白蛋白的质量百分浓度为1％～3％。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述步骤中，封闭的温度为36～38℃。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述制备方法制得的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的试剂盒在制备用于快速检测新型冠状病毒2019-nCov中和抗体的试剂盒中的应用。
新冠病毒在破碎、裂解过程中会刺激机体产生很多种抗体，其中只有与受体(ACE-2)有竞争结合能力的中和抗体对机体才有保护作用。用竞争法检测新冠病毒中和抗体是比较适合的检测方法。
本发明实施例提供的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，通过将新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)通过物理吸附的方法固定在酶标板上，固定在酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)受体蛋白ACE-2特异性结合形成配体复合物，既增强了保护酶标蛋白的活性的作用，同时也减少了酶标蛋白的用量，而且缩减了操作步骤和检测时间。另外，由于新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)与受体的结合能力小于与新冠病毒中和抗体的能力，当反应溶液中有新冠病毒中和抗体存在时会与2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)竞争结合，原有的辣根过氧化物酶(HRP)标记的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白(S-RBD)受体蛋白ACE-2的多少会有所改变，测量反应样本450波长的OD值变化，可以得到反应样本中是否含有新冠病毒中和抗体，中和抗体的含量越多OD值改变就越大。与传统的ELISA方法相比，本发明在检测操作时节省了步骤，简化了操作，加快了检测时间；并且节省了原料的使用量，降低试剂盒成本；同时，将液相的酶标蛋白转化为固相包被，使酶标蛋白的稳定性大幅提高。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
该实施例提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，所述酶标板上通过物理吸附的方法固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。具体的，该试剂盒的制备方法包括以下步骤：
S1、将碳酸盐缓冲液(pH＝9.6)和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到浓度为100ng/mL的包被液。
S2、按照每孔100μL的用量将包被液添加至酶标板中，并置于4℃进行包被处理18h后，再用生理盐水进行4次洗涤，生理盐水的用量为每次250微升/孔，洗涤完毕后，应在毛巾上拍干参与液体，即可得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板，备用。
S3、将8mL浓度为0.06mol/L的高碘酸钠溶液与10mL浓度为10mg/mL的辣根过氧化物酶溶液进行避光搅拌混合30min后，再加入5mL浓度为0.16mol/L的乙二醇溶液进行混合30min，得到混合液。
S4、往上述混合液中添加5mg新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的受体蛋白AC E-2进行混合，并添加碳酸盐缓冲液调整pH值为9.6后，再转移至透析袋中，用碳酸盐缓冲液中透析，换液3次、每次500mL、每次2.0小时进行透析处理，得到透析液。
S5、往透析液中加入5mL浓度为5mg/mL的硼氢化钠溶液进行室温避光混合2h后，再用50％饱和硫酸铵盐析一次，12000rpm，4℃离心30min，取沉淀用5mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液重悬，然后装入透析袋，并置于0.01mol/L。pH为7.4的磷酸盐缓冲液中进行透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。
S6、将上述辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2用碳酸盐缓冲液进行稀释至浓度为30ng/mL，并按照每孔100μL的用量加入到上述固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中，于37℃下进行二次包被处理1.5h后，再用生理盐水进行洗涤，然后按照每孔150μL的用量加入含有质量百分浓度为2％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，并盖好盖板膜，于37℃进行封闭1.5h；封闭完后，摔倒孔内液体，并在毛巾上拍干，接下来采取37℃烘干的方式彻底干燥酶标板；酶标板干燥后，应及时装入自封袋或使用真空封装机进行封装，放入5℃冷藏环境保存备用，即可得到检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。
实施例2
该实施例提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，所述酶标板上通过物理吸附的方法固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。具体的，该试剂盒的制备方法包括以下步骤：
S1、将碳酸盐缓冲液(pH＝9.6)和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到浓度为80ng/mL的包被液。
S2、按照每孔100μL的用量将包被液添加至酶标板中，并置于3℃进行包被处理16h后，再用生理盐水进行3次洗涤，生理盐水的用量为每次250微升/孔，洗涤完毕后，应在毛巾上拍干参与液体，即可得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板，备用。
S3、将8mL浓度为0.05mol/L的高碘酸钠溶液与10mL浓度为8mg/mL的辣根过氧化物酶溶液进行避光搅拌混合30min后，再加入5mL浓度为0.14mol/L的乙二醇溶液进行混合30min，得到混合液。
S4、往上述混合液中添加5mg新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的受体蛋白AC E-2进行混合，并添加碳酸盐缓冲液调整pH值为9.6后，再转移至透析袋中，用碳酸盐缓冲液中透析，换液3次、每次500mL、每次2.0小时进行透析处理，得到透析液。
S5、往透析液中加入5mL浓度为6mg/mL的硼氢化钠溶液进行室温避光混合2h后，再用50％饱和硫酸铵盐析一次，12000rpm，4℃离心30min，取沉淀用5mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液重悬，然后装入透析袋，并置于0.01mol/L。pH为7.4的磷酸盐缓冲液中进行透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。
S6、将上述辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2用碳酸盐缓冲液进行稀释至浓度为25ng/mL，并按照每孔100μL的用量加入到上述固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中，于37℃下进行二次包被处理1h后，再用生理盐水进行洗涤，然后按照每孔150μL的用量加入含有质量百分浓度为1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，并盖好盖板膜，于36℃进行封闭1.5h；封闭完后，摔倒孔内液体，并在毛巾上拍干，接下来采取37℃烘干的方式彻底干燥酶标板；酶标板干燥后，应及时装入自封袋或使用真空封装机进行封装，放入2℃冷藏环境保存备用，即可得到检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。
实施例3
该实施例提供了一种检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，所述酶标板上通过物理吸附的方法固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。具体的，该试剂盒的制备方法包括以下步骤：
S1、将碳酸盐缓冲液(pH＝9.6)和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到浓度为120ng/mL的包被液。
S2、按照每孔100μL的用量将包被液添加至酶标板中，并置于5℃进行包被处理20h后，再用生理盐水进行5次洗涤，生理盐水的用量为每次250微升/孔，洗涤完毕后，应在毛巾上拍干参与液体，即可得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板，备用。
S3、将8mL浓度为0.07mol/L的高碘酸钠溶液与10mL浓度为12mg/mL的辣根过氧化物酶溶液进行避光搅拌混合30min后，再加入5mL浓度为0.18mol/L的乙二醇溶液进行混合30min，得到混合液。
S4、往上述混合液中添加5mg新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的受体蛋白AC E-2进行混合，并添加碳酸盐缓冲液调整pH值为9.6后，再转移至透析袋中，用碳酸盐缓冲液中透析，换液3次、每次500mL、每次2.0小时进行透析处理，得到透析液。
S5、往透析液中加入5mL浓度为6mg/mL的硼氢化钠溶液进行室温避光混合2h后，再用50％饱和硫酸铵盐析一次，12000rpm，4℃离心30min，取沉淀用5mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液重悬，然后装入透析袋，并置于0.01mol/L。pH为7.4的磷酸盐缓冲液中进行透析过夜，得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。
S6、将上述辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2用碳酸盐缓冲液进行稀释至浓度为35ng/mL，并按照每孔100μL的用量加入到上述固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中，于37℃下进行二次包被处理2h后，再用生理盐水进行洗涤，然后按照每孔150μL的用量加入含有质量百分浓度为3％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，并盖好盖板膜，于36～38℃进行封闭1.5h；封闭完后，摔倒孔内液体，并在毛巾上拍干，接下来采取37℃烘干的方式彻底干燥酶标板；酶标板干燥后，应及时装入自封袋或使用真空封装机进行封装，放入8℃冷藏环境保存备用，即可得到检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。
上述实施例提供的试剂盒的使用方法包括以下步骤：
取待检样本10μL加入到上述试剂盒中的酶标板的反应孔内后，再加入含0.1％吐温-20的磷酸盐缓冲液100μL，并于37℃反应30分钟；然后，洗板3次，并加入显色液100μL，于37℃进行显色10分钟后，再加入50μL终止液，然后进行OD值测量，即可完成对待检样本中新型冠状病毒中和抗体进行定量检测。
经过性能测试对比，本发明实施例提供的试剂盒具有以下优点：
(1)缩短检测时间。从加入样本开始，经过30分钟温育，再经过15分钟显色，共计45分钟即可完成检测。与传统检测方式相比，可以节省30％～50％的检测时间。
(2)减少试剂盒中酶结合物的组分。酶结合物组分改为预包被在酶标板上，从而提高酶结合物的稳定性。经过37度热加速试验的测试，与传统的工艺方式相比，在37度3天和7天时，OD值下降幅度减少20％以上。
(3)节省原料。每个试剂盒酶结合物的使用量是传统试剂盒的五分之一到三分之一。
(4)检测过程简化。一步法检测，只需加入样本(稀释后)就可以直接温育，洗涤后显色即可完成检测过程。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (10)

1.检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，包括酶标板，其特征在于，所述酶标板上固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白；所述酶标板上的新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白特异性结合有辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2。
2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白通过物理吸附的方法固定在所述酶标板上。
3.如权利要求1或2所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将缓冲液和新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白进行混合，配制得到包被液；
用包被液对酶标板进行包被处理后，再经洗涤，得到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板；
将高碘酸钠溶液与辣根过氧化物酶溶液进行避光混合后，再加入乙二醇进行混合，得到混合液；
往混合液中添加受体蛋白ACE-2进行混合，并添加缓冲液调整pH值后，再进行透析处理，得到透析液；
往透析液中加入硼氢化钠溶液进行避光混合后，再进行透析处理，得到辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2；
将辣根过氧化物酶标记的受体蛋白ACE-2进行稀释，并加入到固定有新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的酶标板中进行二次包被处理后，再经洗涤、封闭和干燥处理，得到所述试剂盒。
4.根据权利要求3所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述包被液中，新冠病毒2019-nCov衣壳蛋白的浓度为80～120ng/mL。
5.根据权利要求3所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤中，包被处理的温度为3～5℃。
6.根据权利要求3所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤中，采用含有牛血清白蛋白的缓冲液进行封闭。
7.根据权利要求6所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述含有牛血清白蛋白的缓冲液中牛血清白蛋白的质量百分浓度为1％～3％。
8.根据权利要求3所述的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤中，封闭的温度为36～38℃。
9.如权利要求3～8中任一项所述制备方法制得的检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒。
10.如权利要求1～2、9中任一项所述的试剂盒在制备用于快速检测新型冠状病毒2019-nCov中和抗体的试剂盒中的应用。
CN202110270816.6A 2021-03-12 2021-03-12 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用 Active CN113049831B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110270816.6A CN113049831B (zh) 2021-03-12 2021-03-12 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110270816.6A CN113049831B (zh) 2021-03-12 2021-03-12 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113049831A true CN113049831A (zh) 2021-06-29
CN113049831B CN113049831B (zh) 2022-11-11

Family

ID=76512009

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110270816.6A Active CN113049831B (zh) 2021-03-12 2021-03-12 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113049831B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113774108A (zh) * 2021-07-27 2021-12-10 罗义 一种通过选择性吸附刺突糖蛋白富集并检测侵染性新冠病毒的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102019008B1 (ko) * 2019-01-31 2019-09-05 대한민국(관리부서 질병관리본부장) 메르스 코로나바이러스 뉴클레오캡시드 융합 단백질을 이용한 메르스 코로나바이러스 검출 방법
CN111273016A (zh) * 2020-02-26 2020-06-12 浙江诺迦生物科技有限公司 一种基于s蛋白配体与ace2受体竞争法层析的冠状病毒快速检测的试剂盒
CN111337667A (zh) * 2020-02-24 2020-06-26 南通大学 一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法
CN111781354A (zh) * 2020-09-04 2020-10-16 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 新型冠状病毒中和性抗体滴度检测elisa试剂盒
CN112098644A (zh) * 2020-09-11 2020-12-18 江苏美克医学技术有限公司 一种酶联免疫法检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其检测方法
CN112245428A (zh) * 2020-12-23 2021-01-22 中国药科大学 能够抑制冠状病毒Spike蛋白与ACE2相互作用的化合物的用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102019008B1 (ko) * 2019-01-31 2019-09-05 대한민국(관리부서 질병관리본부장) 메르스 코로나바이러스 뉴클레오캡시드 융합 단백질을 이용한 메르스 코로나바이러스 검출 방법
CN111337667A (zh) * 2020-02-24 2020-06-26 南通大学 一种快速检测新型冠状病毒检测试剂盒及检测方法
CN111273016A (zh) * 2020-02-26 2020-06-12 浙江诺迦生物科技有限公司 一种基于s蛋白配体与ace2受体竞争法层析的冠状病毒快速检测的试剂盒
CN111781354A (zh) * 2020-09-04 2020-10-16 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 新型冠状病毒中和性抗体滴度检测elisa试剂盒
CN112098644A (zh) * 2020-09-11 2020-12-18 江苏美克医学技术有限公司 一种酶联免疫法检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其检测方法
CN112245428A (zh) * 2020-12-23 2021-01-22 中国药科大学 能够抑制冠状病毒Spike蛋白与ACE2相互作用的化合物的用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JAMES R. BYRNES 等: ""A SARS-CoV-2 serological assay to determine the presence of blocking antibodies that compete for human ACE2 binding", 《MEDRXIV》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113774108A (zh) * 2021-07-27 2021-12-10 罗义 一种通过选择性吸附刺突糖蛋白富集并检测侵染性新冠病毒的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113049831B (zh) 2022-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101738473B (zh) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒及其制备方法
CN108152511B (zh) 柯萨奇A16病毒抗原多肽及其IgM抗体检测试剂盒
CN101923091B (zh) 用于检测高敏感性的结核分枝杆菌的试剂盒
CN111961120B (zh) 非洲猪瘟病毒MGFs和CD2v ELISA抗体检测试剂盒
CN113049831B (zh) 检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及其制备方法和应用
CN101551393B (zh) 一种检测ⅳ型登革病毒ns1抗原的免疫诊断试剂盒
CN102621328A (zh) 牛奶抗体谱诊断试剂盒及其制备方法
CN1687134A (zh) 幽门螺杆菌HpaA和ureB单克隆抗体、免疫测定法和诊断试剂盒
CN102778565A (zh) 1型登革热快速金标诊断试纸条
EP0497825A1 (en) ANTIVIRAL MATERIAL.
CN101241138A (zh) Asia 1型口蹄疫抗体水平检测试纸及制备方法
CN101581720A (zh) 一种人类免疫缺陷病毒抗体确认试剂盒
CN115993449B (zh) 牛结节性皮肤病病毒elisa抗体检测试剂盒
CN102898517B (zh) 抗西尼罗河病毒的非结构蛋白1的抗体及其应用
CN111896744B (zh) 一种羊棘球蚴抗体elisa检测试剂盒及其制备方法和应用
CN111398594B (zh) 一种特异性检测黄热病毒ns1抗原的免疫诊断试剂盒
CN111686240B (zh) 达巴万星在制备抑制SARS-CoV-2与ACE2结合的药物中的应用
CN113203855A (zh) Rbd中和抗体检全方法及产品
JPWO2009122592A1 (ja) 常温保存可能な試薬を備えたウイルス抗原及びウイルス抗体の検出キット、並びにウイルス抗原及びウイルス抗体の検出方法
CA2648481A1 (en) Pestivirus species
CN106405089A (zh) 一种快速检测动物源食品中三氮脒残留的酶联免疫试剂盒
US6596846B2 (en) Method and composition for the diagnosis of equine infectious anemia virus disease by using the recombinant capsid protein virus (p26)
CN112904018B (zh) 一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途
KR100509815B1 (ko) 신증후출혈열진단용합성올리고펩티드
JP3451783B2 (ja) コリンエステラーゼの測定法及び肝硬変と肝炎の識別法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 102206 9 life Garden Road, Changping District, Beijing

Patentee after: Beijing Bohui innovative biotechnology group Co.,Ltd.

Address before: 102200 9 life Garden Road, Changping District, Beijing

Patentee before: BEIJING BOHUI INNOVATION BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.