CN111289654B - 一种盐酸尼卡地平原料中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残留溶剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸尼卡地平原料中四种残留溶剂的检测方法。所述的检测方法采用气相毛细管色谱柱顶空进样法测定。本方法操作简便，能够准确测定盐酸尼卡地平原料药中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残留溶剂。

Description

一种盐酸尼卡地平原料中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残 留溶剂的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸尼卡地平原料中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残留溶剂的检测方法。

背景技术

盐酸尼卡地平(Nicardipine hydrochloride)是一种具有较好亲水性的二氢吡啶类钙拮抗剂，它能抑制心肌与血管平滑肌的跨膜钙离子内流，对血管有较强的选择性，临床被应用于手术时异常高血压的急救处置和高血压性急症等。

盐酸尼卡地平的合成方法较多，通常会采用一步Hantzch合成法或改良的两步合成法，按照人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)指导原则Q3C和《中国药典》2015年版残留溶剂测定法，都要求原料药合成中使用到的有机溶剂应按照危害程度对残留溶剂分级，并建立相应的分析控制方法。盐酸尼卡地平的合成过程中使用到了《中国药典》2015年版规定的应限制使用的三种第二类溶剂，分别为：甲苯、三氯甲烷和甲醇，以及原料药重结晶所使用的第三类有机溶剂丙酮，而现行《中国药典》在盐酸尼卡地平原料国家标准方面，并未设置有机溶剂测定检查项，因此在原料药质量控制和完善提高国家标准方面存在缺陷与不足。

发明内容

为了解决现行国家标准分析方法中缺少溶剂残留检查项目，本发明建立了盐酸尼卡地平原料中四种残留溶剂甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯的溶剂残留毛细管色谱柱GC顶空测定方法，操作简便、结果准确，为盐酸尼卡地平原料有机溶剂测定的国家药典标准提升提供了现实依据。

本发明提供的盐酸尼卡地平原料中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残留溶剂的检测方法，采用气相毛细管色谱柱顶空进样法(或称为毛细管色谱柱GC顶空测定法)测定，色谱条件如下：

色谱柱：DB-624气相色谱柱；

程序升温：45℃恒温6min，以5℃·min^-1升至50℃，再以10℃·min^-1升至120℃保持3min；

检测器温度：230℃；

进样口温度：200℃；

流速：2mL·min^-1；

进样方式：分流进样；

分流比10:1；

载气为氮气；

进样量为1mL。

优选地，所述色谱柱为DB-624毛细管柱(30m×0.32mm，1.8μm)。即6％腈丙苯基94％二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱。

优选地，所述检测方法的甲醇的检测限为2.08μg·mL^-1；丙酮的检测限为0.50μg·mL^-1；三氯甲烷的检测限为1.00μg·mL^-1；甲苯的检测限为0.30μg·mL^-1。

优选地，所述检测方法的甲醇的定量限为10.41μg·mL^-1、丙酮的定量限为10.01μg·mL^-1、三氯甲烷的定量限为9.88μg·mL^-1、甲苯的定量限为3.02μg·mL^-1。

优选地，避光操作取盐酸尼卡地平原料。

优选地，所述检测方法，包括以下步骤：

(1)样品配制

对照品溶液的制备：精密称取甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯适量，置于同一量瓶中，用二甲基亚砜稀释成混合对照品储备溶液，再精密量取混合对照品储备溶液适量，用二甲基亚砜稀释成混合标准溶液；分别精密量取上述混合标准适量，用二甲基亚砜稀释至刻度，制成不同质量浓度作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：避光操作，准确称取盐酸尼卡地平原料置于顶空进样瓶中，精密加入二甲基亚砜密封，超声使溶解，作为供试品溶液。

(2)标准曲线绘制

将上述对照品溶液注入气相相色谱仪中，测定相应的峰面积，以对照品溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线并列出校准曲线的数学方程和线性范围；

(3)检测

将上述供试品溶液顶空进样注入气相色谱仪，得到供试品色谱峰面积；

(4)计算

将供试品色谱峰面积代入上述标准曲线计算含量。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

随着GC毛细管色谱技术的迅速发展，现行2015年版中国药典也首选采用毛细管柱测定残留溶剂的含量；《中国药典》作为药品质量技术法典应及时对原料药合成中采用的残留溶剂进行全面系统的考察，并建立质量控制方法，以便切实提高和确保国产产品的质量。

经数据库查询，国家药品监督管理总局批准的国内生产企业盐酸尼卡地平原料批准文号共计5个，就生产工艺来说基本一致，因此本方涉及的残留溶剂适合各企业开展原料生产的残留溶剂控制，也为企业对自身产品进行进一步的质量研究考察，并完善提升相关标准，提供了依据。

二氢吡啶类药物合成中使用的溶剂不同会导致产生不同的副产物杂质，如尼群地平的副产物杂质是由溶剂乙醇产生，尼莫地平杂质B、C是由于合成中使用了乙醇产生的而杂质D则是由于使用了与国外合成路线中不一样的有机溶剂乙醇而产生的。再如非洛地平杂质A，其结构虽然也包含二氢吡啶结构，但副产物的毒性并不比无活性降解杂质低，因此同样应该被严格控制，从杂质产生的条件来看，研究主药合成路线中的残留溶剂对于主成分杂质分析同样具有积极的意义。

盐酸尼卡地平熔点为179～185℃，在水中几乎不溶，选用二甲亚砜作为样品配制溶剂能够很好的溶解样品，顶空测定时使得残留溶剂充分释出，同时二甲亚砜出峰时间较晚，能够和上述四种溶剂完全分离，确保了不同企业选用溶剂差异时残留溶剂测定结果的准确性。本发明可以修正国家标准不足，能够起到完善标准，促进国家标准提升的目的作用。

本发明涉及基金项目为：陕西省社会科学发展基金资助项目(编号：2018SF-100)。

附图说明

图1是空白溶液气相色谱分析图谱。

图2是对照品溶液气相色谱分析图谱。

图3是供试品溶液气相色谱分析图谱。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详述，但本发明的实施方式不限于此。本发明的实施例仅用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制。

本检测方法为药典规定的标准曲线法，以下实验过程和试验方法未详细说明的，均采用标准操作流程，例如溶液配制、系统适应性试验的操作方法。

仪器：7890B气相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；SPB-3全自动空气源(北京中惠普分析技术研究所)；梅特勒电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)。

试药：盐酸尼卡地平原料(陕西兴邦药业有限公司提供，规格批号150801，120301)；甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯和二甲基亚砜均为色谱纯。

色谱条件如下：

色谱柱：DB-624，毛细管柱(30m×0.32mm，1.8μm)；即6％腈丙苯基94％二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱；

程序升温：45℃恒温6min，以5℃·min^-1升至50℃，再以10min^-1升至120℃保持3min；

检测器温度：230℃；

进样口温度：200℃；

流速：2mL·min-1；

进样方式：分流进样；

分流比10:1；

载气为氮气；

进样量为1mL。

实施例1：

(1)样品配制

对照品溶液的制备：精密称取甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯适量，置于同一量瓶中，用二甲基亚砜稀释成质量浓度分别为100mg·mL^-1、100mg·mL^-1、10mg·mL^-1、30mg·mL^-1的混合对照品储备溶液，再精密量取混合对照品储备溶液适量，用二甲基亚砜稀释成质量浓度分别为1mg·mL^-1、1mg·mL^-1、0.1mg·mL^-1、0.3mg·mL^-1的混合标准溶液；分别精密量取上述混合对照品储备液适量，用二甲基亚砜稀释至刻度，制成不同质量浓度作为对照品溶液；精密量取4mL置于20ml顶空进样瓶中测定。

供试品溶液制备：避光操作，准称取样品0.2g置于20ml顶空进样瓶中，精密加入二甲基亚砜4mL密封，超声10min，使溶解，作为供试品溶液。

(2)标准曲线绘制

将上述对照品溶液注入气相相色谱仪中，测定相应的峰面积，以对照品溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线并列出校准曲线的数学方程和线性范围；

(3)检测

将供试品溶液顶空进样注入气相色谱仪，得到供试品色谱峰面积；

(4)计算

将供试品色谱峰面积代入上述标准曲线计算含量。

测定的色谱图如图1-3所示。图1是空白溶液气相色谱分析图谱。图2是对照品溶液气相色谱分析图谱。图3是供试品溶液气相色谱分析图谱。

通过比对色谱图，色谱峰顺序如下：1、甲醇；2、丙酮；3、三氯甲烷；4、甲苯；5、二甲基亚砜。

在该检测系统中，四种残留溶剂能被有效检出，甲醇的检测限为2.08μg·mL^-1；丙酮的检测限为0.50μg·mL^-1；三氯甲烷的检测限为1.00μg·mL^-1；甲苯的检测限为0.30μg·mL^-1。

(5)结果

分别取不同批号的供试品，平行取样2次，按照上述方法制备样品，按照上述色谱条件进样测定，以标准计算甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯的含量。结果显示，批号为150801和120301的盐酸尼卡地平原料均未检出三氯甲烷及甲苯，甲醇的含量均在定量限以下，丙酮的含量均为0.2％。

实施例2方法学考察

(1)线性关系考察

精密量取对照品储备液适量，加二甲基亚砜溶解并稀释制成甲醇和丙酮质量浓度均为10、50、150、250和400μg·mL^-1的溶液，三氯甲烷质量浓度为10、15、30、60、90μg·mL^-1的溶液，甲苯质量浓度为3.15、45、75、120μg·mL^-1的溶液作为对照品溶液，按照上述色谱条件进行测定，以甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯的峰面积纵坐标(y)，对四者的质量浓度(x)作标准曲线。得甲醇回归方程：y＝144x-0.458(r＝0.9955)，线性范围：10.409～401.278μg·mL^-1；丙酮回归方程：y＝822x-0.630(r＝0.9945)，线性范围：10.008～400.308μg·mL^-1；三氯甲烷回归方程y＝0.0528x-0.136(r＝0.9988)，线性范围：9.877～88.895μg·mL^-1；甲苯回归方程：y＝883x-0.271(r＝0.9948)，线性范围：3.022～120.873μg·mL^-1。

(2)检出限及定量限

取对照品溶液，用二甲基亚砜稀释到适宜质量浓度，以信噪比10︰1时的进样量为定量限，以信噪比3︰1时的进样量为检测限。在上述色谱条件下，甲醇的检测限为2.08μg·mL^-1；丙酮的检测限为0.50μg·mL^-1，三氯甲烷的检测限为1.00μg·mL^-1；甲苯的检测限为0.30μg·mL^-1，四者的定量限分别为10.41μg·mL^-1、10.01μg·mL^-1、9.88μg·mL^-1、3.02μg·mL^-1。

(3)精密度

取线性实验项下甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯质量浓度分别为150、150、30和45μg·mL^-1的对照品溶液，上述色谱条件下各进样6次，记录峰面积，计算RSD值。甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯峰面积的RSD值分别为0.66％，0.54％，2.74％和0.54％(n＝6)。结果表明，仪器精密度良好。

(4)稳定性

精密量取同一加标供试品溶液，在0，2…24h进样测定，甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯的峰面积的RSD分别为0.93％、1.19％、1.12％。结果表明，加标供试品溶液在8h内稳定。

(5)加样回收实验

取已知甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯含量的供试品(批号150801)9份，按照上述方法制备样品，取适量已知含量的供试品，每3份加入适量对照品溶液，使得最终含量相当于标准溶液，按照上述色谱条件下所述的方法进行测定，计算回收率，见表1。

表1加样回收试验结果表(n＝9)

结果：甲醇的平均回收率为101.6％，RSD值为3.9％；丙酮的平均回收率为102.3％，RSD值为2.1％；三氯甲烷的平均回收率为101.7％，RSD为3.2％；甲苯的平均回收率为102.3％，RSD为2.5％。

(6)专属性实验按照上述色谱条件测定样品，结果表明，二甲基亚砜(溶剂)、甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯均能有效分离。色谱图见图1。

基于以上发明内容的描述，本领域技术人员能够全面地应用本发明，所有相同原理或类似的改动均应视为包括在本发明的范围之内。

Claims (6)

1.一种陕西兴邦药业有限公司制备的盐酸尼卡地平原料中甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯四种残留溶剂的检测方法，其特征在于，采用气相毛细管色谱柱顶空进样法测定，色谱条件如下：

色谱柱：DB-624气相色谱柱；

程序升温：45℃恒温6 min，以5℃·min^-1升至50 ℃，再以10℃·min^-1升至120℃保持3min；

检测器温度：230 ℃；

进样口温度：200 ℃；

流速：2 mL·min^-1；

进样方式：分流进样；

分流比10:1；

载气为氮气；

进样量为1mL；

其中，甲苯的保留时间为约12min；所述盐酸尼卡地平原料的规格批号为150801和120301。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为：DB-624毛细管柱；规格为30m×0.32 mm，1.8 µm。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的甲醇的检测限为2.08μg·mL^-1；丙酮的检测限为0.50μg·mL^-1；三氯甲烷的检测限为1.00μg·mL^-1；甲苯的检测限为0.30μg·mL^-1。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的甲醇的定量限为10.41μg·mL^-1、丙酮的定量限为10.01 μg·mL^-1、三氯甲烷的定量限为9.88 μg·mL^-1、甲苯的定量限为3.02μg·mL^-1。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，避光操作称取盐酸尼卡地平原料。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品配制

对照品溶液的制备：精密称取甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯适量，置于同一量瓶中，用二甲基亚砜稀释成混合对照品储备溶液，再精密量取混合对照品储备溶液适量，用二甲基亚砜稀释成混合标准溶液；分别精密量取上述混合标准溶液适量，用二甲基亚砜稀释至刻度，制成不同质量浓度作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：避光操作，准确称取盐酸尼卡地平原料置于顶空进样瓶中，精密加入二甲基亚砜密封，超声使溶解，作为供试品溶液；

（2）标准曲线绘制

将上述对照品溶液注入气相色谱仪中，测定相应的峰面积，以对照品溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并列出标准曲线的数学方程和线性范围；

（3）检测

将上述供试品溶液顶空进样注入气相色谱仪，得到供试品色谱峰面积；

（4）计算

将供试品色谱峰面积代入上述标准曲线计算含量。

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