CN111281866B - 一种预防或治疗溃疡性结肠炎的中药化学制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了野黄芩素或其立体异构体、或其在药学上可接受的盐或溶剂化物在研制预防或治疗肠道性疾病的药物中的应用。特别是公开了将野黄芩素用于预防或治疗溃疡性结肠炎时能够获得良好的预防或治疗效果。在3%葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型中,野黄芩素具有显著的改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,具体地,涉及野黄芩素在预防或治疗溃疡性结肠炎中的应用。
背景技术
溃疡性结肠炎是一种炎症性肠病,病变多位于乙状结肠和直肠,也可延伸至降结肠,甚至整个结肠。溃疡性结肠炎最常见的症状是腹泻和便血。此外,根据疾病的严重程度和部位,患者出现不同程度的腹痛、夜间腹泻、粘液排出和里急后重。在罕见的严重炎症病例中,尤其是长期未治疗的患者中可能出现体重减轻、发烧或穿孔。该疾病病因不明,是环境、遗传和微生物因素相互作用的结果,其特点是周期性的静止和暴发。溃疡性结肠炎无性别差异,发病的高峰年龄在30到40岁之间。目前,溃疡性结肠炎的发病率和患病率在世界范围内呈现不断增加的趋势。
针对溃疡性结肠炎患者的治疗方针为:控制病情,减轻症状,避免复发,提高患者生活质量。临床上对溃疡性结肠炎药物治疗的目的主要是缓解临床症状,即停止便血,改善胃肠损伤和组织粘膜的炎症反应。目前已有多种药物用于治疗溃疡性结肠炎:对于轻度至中度患者,通常使用5-氨基水杨酸类药物,如美沙拉嗪和柳氨磺吡啶;中重度结肠炎的治疗药物包括糖皮质激素类(如布地奈德和倍氯米松)、硫嘌呤类(如咪唑巯嘌呤和6-巯基嘌呤)、针对肿瘤坏死因子和整合素的生物制剂(如英夫利昔)以及Janus激酶抑制剂(如托法替尼)。尽管治疗药物多种多样,但药物带来的不良反应也不容忽视。比如柳氨磺吡啶会引起白血球减少症、肝炎以及恶心、呕吐、腹痛、腹胀等不适表现;糖皮质激素类药物只可以用于缓解病症,易产生依赖性、代谢紊乱,具有感染的风险,无法长期服用;免疫调节剂类药物的不良反应如骨髓移植、胰腺炎、肝毒性等,且价格昂贵,限制其广泛应用。临床应用中,许多患者无法通过药物获得长期且有效的救治,约15%的溃疡性结肠炎在确诊后的20年内,最终只能通过手术切除一大块甚至全部结肠。因此,发现新颖的治疗溃疡性结肠炎的作用靶点并针对这一新靶点开发一种能够缓解病情、可以长期使用、价格低廉而不产生副作用的新型药物具有十分重要的意义。
目前,随着溃疡性结肠炎的研究不断深入,具有新靶点的药物数量在未来几年将迅速增加。大约8%至14%的溃疡性结肠炎患者有炎症性肠炎的家族史,许多遗传因素已与溃疡性结肠炎的发生发展相关。多种遗传途径会增加溃疡性结肠炎发生的风险,包括涉及上皮屏障功能的基因(例如CHD1和LAMB1),编码细胞因子的基因(例如IL1R2,IL8RaIRB和IL7R)以及编码炎性标记的基因(例如TNFRSF15,TNFRSF9)。故此,预防或治疗溃疡性结肠炎的药物主要是从以下三个方面发挥作用:第一,阻止免疫细胞迁移到结肠的受损部位,以打破炎症循环;第二,促进上皮屏障的修复,恢复上皮屏障的完整性;第三,研究人员甚至探索是否可以通过补充从健康供体获得的微生物,进而控制溃疡性结肠炎。
野黄芩素(scutellarein)化学名4′,5,6,7-四羟基黄酮(4′,5,6,7-tetrahydroxyflavone),是野黄芩苷的苷元,相比野黄芩苷具有更高的生物相关活性,更易吸收,有更好的生物利用度。野黄芩素是从中药灯盏细辛(Erigeron breviscapus)、虎尾草(Clerodendrumphlomidis)和木蝴蝶(Oroxylum indicum)中分离的活性单体,上述中药具有广泛的抗炎镇痛活性,所以野黄芩素可能具有抗炎镇痛作用。因此,有必要发掘野黄芩素在胃肠道炎症和治疗溃疡性结肠炎中的作用。
发明内容
发明目的:本发明针对现有技术不足,提供了野黄芩素或其立体异构体、或其在药学上可接受的盐或溶剂化物在研制预防或治疗肠道性疾病的药物中的应用。
为了实现上述目的,本发明研究表明野黄芩素能够缓解葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎。
本发明具体技术方案如下:
本发明提供了野黄芩素或其立体异构体、或其在药学上可接受的盐或溶剂化物在研制预防或治疗肠道性疾病的药物中的应用,特别是提供了野黄芩素在预防或治疗溃疡性结肠炎中的应用。
上述应用以野黄芩素作为药物,考察药物缓解溃疡性结肠炎的症状和结肠中的炎症状态。
进一步地,本发明提供野黄芩素及其立体异构体、其在药学上可接受的盐和/或溶剂化物在预防或治疗溃疡性结肠炎中的应用,所述野黄芩素具有式(1)结构。
本发明所述的疾病为溃疡性结肠炎,还可包括感染性、溃疡性、缺血性、出血性、节段性(伴憩室炎)、放射性、药物性结肠炎和克罗恩氏病中的一种或几种。优选的,所述疾病为溃疡性结肠炎。
在本发明所述野黄芩素的制备方法没有特别的限定,本领域技术人员可以根据本领域内的公知常识制备本发明所述的野黄芩素,或者通过市售获得本发明所述的野黄芩素。
本发明所述野黄芩素的立体异构体没有特别的限定,可以为本领域的常规选择,例如可以是野黄芩素的对映异构体或非对映异构体。另外,本发明对所述在药学上可接受的盐也没有特别的限定,可以为本领域的常规选择。
进一步的,本发明对所述溶剂化物也没有特别的限定,可以为本领域的常规选择,在优选情况下,所述溶剂化物包括将野黄芩素溶于二甲基亚砜、吐温80、生理盐水、盐酸和乙醇中的一种或多种,优选为二甲基亚砜、吐温80或生理盐水。
进一步的,本发明对野黄芩素的剂型没有特别的限定,只要其可以实现便于使用且可以获得较好的治疗效果即可。在优选的情况下,所述药物可以为静脉注射剂、栓剂、灌肠剂、凝胶剂、泡沫剂、肠溶片、汤剂、合剂、糖浆剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂中的一种或几种,进一步优选为颗粒剂。当所述药物以上述剂型的形式被使用时,该药物还可以包括赋形剂、稳定化剂、保存剂、缓冲剂、助溶剂、乳化剂、稀释剂或等渗剂。
在本发明中对上述静脉注射剂、栓剂、灌肠剂、凝胶剂、泡沫剂、肠溶片、汤剂、合剂、糖浆剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂的制备方法没有特别的限定,可以为本领域技术人员所公知的方法,在此不再赘述。
在本发明中,对所述野黄芩素的含量没有特别的限定,可以为本领域的常规选择,只要能够获得良好的治疗效果即可。
有益效果:相对于现有技术,本发明具备以下优点:
本发明研究发现野黄芩素及其立体异构体、其在药学上可接受的盐和/或溶剂化物对溃疡性结肠炎具有很好的预防或治疗效果,且给药方便,药物副作用小,毒性低,生物利用度高。进一步地,从本发明提供的研究结果可以看出:在3%葡聚糖硫酸钠(DextranSulfate Sodium Salt,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型中,野黄芩素具有显著的改善作用。
综上所述,将本发明所述的野黄芩素用于制备预防或治疗溃疡性结肠炎的治疗具有很好的开发前景。本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分的予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与下面的具体实施方式一起用于解释本发明,但并不构成对本发明的限制。在附图中:
图1A为野黄芩素对3%DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型结肠形态的影响;图1B为野黄芩素对3%DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型结肠长度的影响。
图2A-D为本发明提供的优选实施方式中野黄芩素对3%DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型结肠组织COX-2、IL-6、IL-2和TNF-α的mRNA变化的影响。
注:Veh和3%DSS分别表示对C57BL/6野生型小鼠饲喂纯净水或3%(wt/vol)DSS饮用水;20mg/kg Scu和50mg/kg Scu分别表示从造模第一天起对C57BL/6野生型小鼠按体重灌胃给予20mg/kg或50mg/kg的野黄芩素混悬液。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是,此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明,并不用于限制本发明。
本发明提供了野黄芩素在预防或治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用,还可包括感染性、溃疡性、缺血性、出血性、节段性(伴憩室炎)、放射性、药物性结肠炎和克罗恩氏病中的一种或几种。将含有根据本发明发现的野黄芩素用于预防或治疗溃疡性结肠炎时能够获得良好的预防或治疗效果,所述野黄芩素为式(1)所示的化合物。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中,在没有特别说明的情况下,所使用的各种试剂和材料均来自市售。
在以下优选实施方式中,使用小鼠自由摄取含3%葡聚糖硫酸钠(DextranSulfate Sodium Salt,DSS)水溶液连续给予7天诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型评价药物对溃疡性结肠炎的作用。3%DSS诱导的溃疡性结肠炎模型是目前应用最为广泛的评价药物对溃疡性结肠炎进程影响的模型。
在以下优选实施方式中,所使用的实验C57BL/6小鼠购自南京医科大学实验动物中心,雌雄各半,体重20-25g,鼠龄8-10周。
在以下实施例中,通过实时定量PCR实验检测组织中特定基因的转录水平。
在以下优选实施方式中,野黄芩素对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型的影响通过结肠病理变化、结肠中炎症因子mRNA水平及含量等指标进行评价。
实施例1
本实施例用于说明本发明发现的野黄芩素在预防或治疗溃疡性结肠炎中的应用。
(1)野黄芩素改善3%葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型
购自南京医科大学实验动物中心的32只C57BL/6野生型小鼠,雌雄各半,体重20-25g。实验前将小鼠放置在安静、避强光的环境中饲养3天以适应环境,光照与黑暗时间比为1∶1,室温控制在25℃,湿度55%,小鼠能够自由进食和饮水。将C57BL/6野生型小鼠随机分成4组(每组8只),分别为:空白组、模型组、20mg/kg野黄芩素给药组、50mg/kg野黄芩素给药组。除空白组外,各组小鼠给予3%(wt/vol)DSS饮用水;空白组小鼠饲喂纯净的饮用水,自由采食7天。野黄芩素给药组从实验第一天起按体重每日按时灌胃给予一定体积的野黄芩素混悬液,空白组和模型组则按体重给予相应体积的0.5%吐温80溶液。实验结束后,脱颈椎处死小鼠后,对小鼠进行腹部解剖。总肛门至回肠处分离出结肠部分和回盲瓣,观察记录结肠外观及长短变化。结果如图1A和1B所示,20mg/kg野黄芩素和50mg/kg野黄芩素均可一定程度恢复由于DSS引起的结肠长度缩短,其中50mg/kg野黄芩素给药的保护作用具有显著性。注:计量资料以均数±标准差(mean±SEM)表示,分析结果中,##表示P<0.01,相对于空白组;**表示P<0.01,相对于模型组。
(2)野黄芩素抑制小鼠溃疡性结肠炎模型相关炎症因子的mRNA水平
称取空白组、模型组、20mg/kg野黄芩素给药组和50mg/kg野黄芩素给药组50mg结肠组织,使用液氮将称取的组织研磨至粉末,加入1mL Trizol(Vazyme,货号:R401-01),冰上孵育10分钟。将裂解产物转移至1.5mL无酶(RNase-free)离心管中,加入100μL氯仿剧烈振荡15秒,冰上静置2分钟。于4℃,12000rpm离心10分钟。吸取上层水相到新的1.5mLRNase-free离心管中,加入等量的异丙醇沉淀RNA。再于4℃,12000rpm离心10分钟。弃上清,加入DEPC水配置的75%乙醇500μL洗涤RNA沉淀。再于4℃,12000rpm离心5分钟。弃上清,略干燥RNA沉淀,用10μL DEPC水溶解RNA。取1μL进行浓度检测,检测仪器是Nano-100超微量分光光度计(杭州奥盛仪器有限公司,货号:AS-11010)。再取500ng RNA进行逆转录反应,按II One Step RT-PCR Kit(Vazyme,货号:P611-01)说明书进行操作。逆转录产物于-20℃保存,备用。
实时定量PCR反应按照AceQ qPCRGreen Master Mix(Vazyme,货号:Q111-01)说明书在实时荧光定量PCR系统(QuantStudio3,Thermo Fisher Scientific,USA)中进行。反应体系由1μL逆转录产物,0.5μL 10μM前引,0.5μL 10μM后引,8μL DEPC水和10μL染料预混液组成;反应条件为:95℃预变性10分钟,94℃变性30秒,60℃退火与延伸30秒(采集一次信号),变性、退火与延伸反复进行40次;随后进入溶解曲线反应:95℃维持1分钟,55℃维持1分钟,然后开始每个循环增加0.5℃,维持13秒(采集一次信号),共81个循环,增加到95℃结束。实时定量PCR的数据以2-ΔΔCt法进行处理。
表1:相关炎症因子引物表
结果如图2A-D所示,DSS引起模型组小鼠结肠组织中COX-2、IL-6、IL-2和TNF-αmRNA表达水平显著性增加。20mg/kg野黄芩素和50mg/kg野黄芩素给药后可以明显降低结肠组织中上述炎症因子mRNA的含量。注:计量资料以均数±标准差(mean±SEM)表示,分析结果中,##表示P<0.01,相对于空白组;**表示P<0.01,相对于模型组。
由上述实施例的结果可以看出,由3%葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎,表现为结肠长度缩短、结肠组织炎细胞浸润及相关炎症因子表达水平增加等症状,将本发明所述的野黄芩素用于治疗可改善3%DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,显著降低相关炎症因子的表达水平,减轻结肠组织的病理变化。因此,野黄芩素是能够预防或治疗溃疡性结肠炎的药物。
以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于上述实施方式中的具体细节,在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复,本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外,本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合,只要其不违背本发明的思想,其同样应当视为本发明所公开的内容。
序列表
<110> 中国药科大学
<120> 一种预防或治疗溃疡性结肠炎的中药化学制剂
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> COX-2上有引物(Artificial Sequence)
<400> 1
ctcctggaac atggactcac tca 23
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> COX-2下游引物 (Artificial Sequence)
<400> 2
aggcctttgc cactgcttgt a 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> IL-2上游引物 (Artificial Sequence)
<400> 3
atgaacttgg acctctgcgg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> IL-2下游引物 (Artificial Sequence)
<400> 4
gtccaccaca gttgctgact 20
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> IL-6上游引物 (Artificial Sequence)
<400> 5
gtccttcaga gagatacaga aact 24
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> IL-6下游引物 (Artificial Sequence)
<400> 6
agcttatctg ttaggagagc attg 24
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> TNF-α上游引物 (Artificial Sequence)
<400> 7
catcttctca aaattcgagt gacaa 25
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> TNF-α下游引物 (Artificial Sequence)
<400> 8
tgggagtaga caaggtacaa ccc 23
Claims (2)
1.野黄芩素作为唯一活性成分在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为静脉注射剂、栓剂、灌肠剂、凝胶剂、泡沫剂、汤剂、合剂、糖浆剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂中的一种或几种。
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