CN111278442A

CN111278442A - 用于治疗进行性纤维化间质性肺病(pf-ild)的活性剂的新组合

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Publication number: CN111278442A
Application number: CN201880068509.6A
Authority: CN
Inventors: F·E·赫尔曼; P·尼克劳斯; S·L·M·沃林
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2017-10-23
Filing date: 2018-10-12
Publication date: 2020-06-12
Anticipated expiration: 2038-10-12
Also published as: IL309150A; EP3700529A1; MX2020004173A; PH12020550452A1; US20230405010A1; BR112020003973A2; AU2018357775A1; TW201929858A; TWI700088B; JP2021500362A; CL2020000627A1; EA202090977A1; CN111278442B; CA3079299A1; US20220378793A1; AU2018357775B2; US11813266B2; JP7196169B2; KR20200075864A; MA50441A

Abstract

本申请涉及一种用于PF‑ILD治疗的新颖组合治疗/组合药剂，该新颖组合治疗/组合药剂包含：作为第一组合搭配物的治疗有效量的尼达尼布或其药学上可接受的盐；及作为第二组合搭配物的治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂，其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且其中R为Cl，且其中R可位于环A的对位、间位或邻位，其中S*为表示手性中心的硫原子；或其药学上可接受的盐。由此，该第二组合搭配物优选地为治疗有效量的该式III的PDE4B抑制剂。

Description

用于治疗进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的活性剂的新组合

1.发明背景

间质性肺病(ILD)包括200多种肺病及呼吸道疾病的大量多样化群体，其特征在于间质的炎症及纤维化，肺气囊之间的组织及间隙(参见例如du Bois,Nat.Rev.DrugDiscov.2010,9,129-140)。ILD涉及肺泡上皮、肺毛细血管内皮、基底膜、血管周围及外淋巴组织。当肺损伤引发异常的愈合反应时可能发生ILD。通常，身体会产生适量的组织以修复损伤。但在ILD中，修复过程出错，且气囊周围的组织(肺泡)出现瘢痕且变厚。这使得氧气更难以进入血流。

延长的ILD可能导致肺纤维化，但情况并非总是如此。

因此，ILD亦包括所谓的进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)。

在进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)中，纤维化ILD中对肺损伤的反应包括纤维化的发展，其变得进行性，自我维持并且独立于原始临床关联或触发。据推测，在此阶段，需要靶向抗纤维化疗法来减缓疾病的进展。

基于其生物学及临床行为(亦即自我维持性纤维化及肺功能以及早期死亡率的进行性下降)的相似性，将患有PF-ILD的患者分组在一起是合理的，无论原始ILD诊断如何。

患有不同纤维化ILD(例如特发性非特异性间质性肺炎(iNSIP)或慢性过敏性肺炎(CHP))的患者数量类似于或低于患有IPF的患者数量；每组中患有进行性表型的患者数量虽然仍然显著，但更低。因此，将患有PF-ILD的患者分组在一起被认为是为所有患有进行性纤维化间质性肺病的患者提供有效治疗的唯一可行方式。

尽管如医生评估在临床实践中使用未经批准的药物治疗以治疗ILD，但若医生为该患者诊断出患有间质性肺病(ILD)并且在首次就诊于医生后24个月内满足以下渐进性纤维性间质性肺病标准中的至少一项，则患者患有PF-ILD，(临床实践中用于治疗ILD的未经批准的药物包括但不限于皮质类固醇、硫唑嘌呤、霉酚酸酯(MMF)、n-乙酰半胱氨酸(NAC)、利妥昔单抗、环磷酰胺、环孢灵、他克莫司)：

·基于相对下降≥10％预测的强迫肺活量(FVC)％的临床显著下降

·基于相对下降≥5至<10％预测的FVC％的微小下降，以及呼吸系统症状恶化

·基于相对下降≥5至<10％预测的FVC％的微小下降以及胸部成像上纤维化改变程度的增加

·呼吸系统症状的恶化以及胸部成像上纤维化改变程度的增加。由此，必须排除可归因于例如感染、心脏衰竭的合并症的改变。

·高分辨率计算机断层摄影(HRCT)上的纤维化肺部疾病，定义为伴有或不伴有蜂窝状的牵拉性支气管扩张的网状异常，疾病程度>10％，在首次就诊于医生后12个月内表达出来。

·对于患有潜在结缔组织疾病(CTD)的患者：在首次就诊于医生前6周内由未开始新疗法或停止CTD治疗所定义的稳定CTD。

·在首次就诊于医生时针对血红素(Hb)校正的一氧化碳扩散能力(DLCO)≥30％且<80％，在第二次就诊于医生时预测正常。

·在第二次就诊于医生时预测FVC≥45％。

PF-ILD的实例为特发性肺纤维化(IPF)、特发性非特异性间质性肺炎(iNSIP)、过敏性肺炎(HP)、不可分类特发性间质性肺炎、类风湿性关节炎ILD(RA-ILD)、斯耶格伦氏

综合征ILD、全身性红斑狼疮ILD(SLE-ILD)、多发性肌炎及皮肌炎ILD(PM/DM-ILD)、混合结缔组织疾病ILD(MCTD-ILD)、全身性硬化症ILD(SSc-ILD)、其他结缔组织疾病ILD(CTD-ILD)、类肉瘤病、石棉沉着病、硅粉沉着病。

最突出的PF-ILD为特发性肺纤维化(IPF)及全身性硬化症间质性肺病(SSc-ILD)。特发性肺纤维化(IPF)为一种PF-ILD，其中没有明显的原因可被识别(其为“特发性”的定义)，并且与典型的放射学(基底及胸膜纤维化伴蜂窝状)及病理学(时间及空间异质性纤维化，组织病理学蜂窝状以及纤维母细胞病灶)发现相关联。

特发性肺纤维化(IPF)为一种慢性纤维化不可逆且最终致命的肺病，其特征在于肺间质中的进行性纤维化，导致肺容量减少及进行性肺功能不全。IPF的特征亦在于称为常见间质性肺炎(UIP)的特定组织病理学模式(Raghu等人,Am.J.Respir.Crit.CareMed.183:788-824.)。患有由IPF或任何其他PF-ILD引起的肺纤维化的患者的肺功能经判定为强迫肺活量(FVC)。

术语IPF意味着肺组织出现瘢痕，并且为呼吸困难(呼吸短促)恶化的原因。IPF通常与预后不良相关联，诊断后中位存活时间为2-3年。IPF被认为是异常伤口愈合过程的结果，该过程包括/涉及肺间质中胶原蛋白(纤维化)的异常及过度沉积，伴有最小的相关联炎症(Harari S,Caminati A(2010)."IPF:new insight on pathogenesis and treatment".Allergy.65(5):537-553)。

纤维母细胞在对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的发病机制中起重要作用，并且若干因素影响其增殖及其细胞外基质(ECM)合成。在ILD中，这些间叶细胞在增殖、迁移、细胞外基质(ECM)合成及对纤维生成细胞介素的反应方面具有增加的活性。来自活化的纤维母细胞(称为“肌纤维母细胞”)的ECM沉积增加造成肺组织的硬化及肺泡氧交换区域的破坏，从而导致进行性呼吸困难并最终导致死亡。

基于PF-ILD及IPF的潜在病理生理学及临床过程的类似性，预期靶向IPF中进行性肺纤维化的基本过程的治疗活性剂将在PF-ILD中引发相当的治疗效果。

2014年，美国食品及药物管理局(FDA)批准了美国首批用于治疗IPF的药物：Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc.的尼达尼布(OFEV)及InterMune Inc.的吡非尼酮(Pirfenidone)(ESBRIET)。吡非尼酮当时在欧洲、日本及其他几个国家已被批准用于对IPF进行治疗，且2015年1月，尼达尼布在欧洲被批准用于治疗IPF。

因此，今天IPF的标准治疗为吡非尼酮治疗(US 3,974,281B)或尼达尼布治疗(US6,762,180B；P05-1275)(https://consultqd.clevelandclinic.org/2015/09/pirfenidone-and-nintedanib-novel-agents-in-the-treatment-of-idiopathic-pulmonary-fibrosis/)。

然而，对于患有IPF具有轻度或中度FVC损伤(预测≥50％)的患者，目前批准的药剂吡非尼酮及尼达尼布根据疾病缓慢进展仅可缩减FVC的下降，但两者均不能够阻止或甚至逆转或治愈IPF的症状(Tzouvelekis等人Ther.Clin.Risk Management 2015,11,359-370)

尽管如此，吡非尼酮或尼达尼布的两种治疗选项在减IPF缓疾病进展上展示显著的有利效果。

与尼达尼布及吡非尼酮相关联的最显著的副作用为肠胃问题，尤其是腹泻、恶心、呕吐、腹痛、食欲减退及体重减轻。在出现肠胃副作用的状况下，通常通过治疗中断、剂量减少或肠胃副作用的对症治疗来控制(参见Mazzei等人,Ther.Adv.Respir.Dis.2015,第9[3]卷,第121-129页)。

由于一方面吡非尼酮且另一方面尼达尼布的这些“累积肠胃副作用”，通过吡非尼酮及尼达尼布的组合来组合地治疗IPF并未频繁地使用。研究表明，吡非尼酮及尼达尼布的组合治疗会导致肠胃副作用增加，尤其是腹泻、恶心、呕吐及上腹部疼痛(Vancheri等人,Nintedanib with Add-on Pirfenidone in Idiopathic Pulmonary Fibrosis:Resultsof the INJOURNEY Trial.Am J Respir Crit Care Med.2017,在付印之前以电子文件公开)。

因此，由于目前批准用于治疗IPF的两种活性药物：吡非尼酮及尼达尼布当单独给予时不能阻止或治愈IPF，而只能在一定程度上减缓IPF疾病进展(Tzouvelekis等人Ther.Clin.Risk Management 2015,11,359-370)的事实，并且由于另外尼达尼布及吡非尼酮都显示出显著的肠胃副作用(当这两种化合物组合时，肠胃副作用会累积)的事实，仍存在对用于IPF治疗/PF-ILD治疗的改良药剂的显著医学需求，特别是对于改良的组合治疗/组合药剂，其包含作为第一组合搭配物的IPF尼达尼布或吡非尼酮中的一种批准的药剂(已证实在IPF治疗中的功效)及另一合适的第二组合搭配物，其在IPF/PF-ILD治疗中起作用且具有可接受的耐受性(但其不同于吡非尼酮或尼达尼布)。因此，提供具有良好/改良的治疗功效及可接受的耐受性的新药剂组合将为非常有益的，特别是在肠胃副作用方面。

因此，本发明的问题在于提供用于PF-ILD治疗/IPF治疗的新的组合治疗/组合药剂，其包含：作为第一组合搭配物的IPF中目前批准的药物中的一者：尼达尼布或吡非尼酮；及第二组合搭配物(其与尼达尼布或吡非尼酮不同)，其中与单独使用第一组合搭配物的PF-ILD/IPF治疗相比，此组合治疗/组合药剂得到改良。

此问题通过提供用于PF-ILD治疗/IPF治疗的组合治疗/组合药剂得以解决，该组合治疗/组合药剂包含：作为第一组合搭配物的治疗有效量的尼达尼布或其药学上可接受的盐；及作为第二组合搭配物的治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐。

本文中，第二组合搭配物优选地为治疗有效量的式II或式III的PDE4B抑制剂

或其药学上可接受的盐；

更优选地第二组合搭配物为式III的PDE4B抑制剂

或其药学上可接受的盐。

上文所提及的此用于PF-ILD治疗/IPF治疗的新的组合治疗/组合药剂包含作为第一组合搭配物的尼达尼布及作为第二组合搭配物的式I的PDE4B抑制剂，优选地为式II或III的PDE4B抑制剂，尤其为式III的PDE4B抑制剂，相较于单独运用尼达尼布的治疗或相较于单独运用以上PDE4B抑制剂的治疗，该新的组合治疗/组合药剂在PF ILD/IPF-治疗中展示改良的治疗功效。

如第6章(实验数据)中所描述的实验A)及B)以实验方式展示了包含式III的PDE4B抑制剂及尼达尼布的组合展示：

a)对“纤维母细胞至肌纤维母细胞转变”的明显抑制作用(其对应于“对于PF-ILD共同的纤维化过程的第二层级的发病机制”，而尼达尼布(用于IPF治疗的已经批准的药剂)对于“纤维母细胞至肌纤维母细胞转变”不展示对应的抑制作用(因此式III的PDE4B抑制剂对尼达尼布展示“互补治疗效果”，其指示式III的PDE4B抑制剂与尼达尼布的组合相比于单独运用尼达尼布的治疗应具有较强优点)及

b)对“纤维母细胞增殖”的明显“超加和的协同抑制作用”(其对应于对于PF-ILD共同的纤维化过程的第三层级的发病机制”，经测试的其他PDE4抑制剂/尼达尼布组合罗氟司特(Roflumilast)/尼达尼布及阿普司特(Apremilast)/尼达尼布出乎意料地并未展示该抑制作用)。

上文所提及的本发明的用于PF-ILD治疗、尤其用于IPF-治疗的此组合治疗/组合药剂包含作为第一组合搭配物的尼达尼布及作为新的第二组合搭配物的式I的PDE4B抑制剂，优选地为式II或III的PDE4B抑制剂，尤其为式III的PDE4B抑制剂，该组合治疗/组合药剂在PF-ILD治疗中进一步展示可接受的耐受性。

“可接受的耐受性”在此内容背景中是指运用尼达尼布与式I、优选地式II及III、尤其式III的PDE4B抑制剂的组合的治疗的耐受性优于组合尼达尼布及吡非尼酮的耐受性，优选地仅略差些，更优选地相较于单独运用尼达尼布的治疗并不显著较差，且因此患者应该会很好地忍受。

US 6762180 B1(WO 01/27081)中描述式A的化合物：尼达尼布(游离碱)，US6762180 B1特此以引用的方式并入。

US 7119093B(WO 2004/013099)公开式A的此化合物的单乙磺酸盐；US2009/0318471 A(WO 2007/141283)中呈现其他的盐形式。

US 7119093B及US 2009/0318471 A两者特此以引用的方式并入。

尼达尼布为血管内皮生长因子受体(VEGFR)，血小板源生长因子受体(PDGFR)及纤维母细胞生长因子受体(FGFR)的一种高效、口服生物可用的抑制剂。其竞争性地结合这些受体的三磷酸腺苷(ATP)结合袋并阻断细胞内信号传导。另外，尼达尼布抑制Fms样酪氨酸蛋白激酶3(Flt 3)、淋巴细胞特异性酪氨酸蛋白激酶(Lck)、酪氨酸蛋白激酶lyn(Lyn)及原癌基因酪氨酸蛋白激酶src(Src)(Hilberg等人,Cancer Res.2008,68,4774-4782)。最近，发现尼达尼布亦抑制群落刺激因子1受体(CSF1R)(Tandon等人.,Am J Respir Crit CareMed 2017；195:A2397)。

尼达尼布展示为能够抑制或减弱细胞增殖(其促进血管生成)(Hilberg等人.,Cancer Res.2008,68,4774-4782)，以及肺纤维母细胞增殖、迁移(Hostettler等人,RespirRes.2014,15,157)及向肌纤维母细胞的转化(Wollin等人,Eur.Respir J 2015,45,1434-1445.)，造成肺纤维化(例如IPF)、SSc-ILD及RA-ILD。此外，其公开了肺纤维化模型中的抗纤维化及抗炎活性(Wollin等人,Eur.Respir J 2015,45,1434-1445；Wollin等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.2014,394,209-220)。另外，尼达尼布在SSc细胞模型中证明了以下能力：抑制纤维母细胞迁移、增殖及向肌纤维母细胞转化；减弱SSc及SSc-ILD动物模型中的皮肤及肺纤维化(Huang等人,Ann.Rheum.Dis.2016,74,883-890、Huang等人,Ann RheumDis.2017,在付印之前以电子文件公开)；减弱RA-ILD动物模型中的肺纤维化(Redente等人,Am J Respir Crit Care Med 2016,193,A4170)；及在类似于HP的方面的过敏性肺损伤的慢性小鼠模型中减轻肺纤维化(Lee等人Exp Lung Res.2017，在付印之前以电子文件公开)。

US 9907756B(WO 2009/147212)及US 2011/0190318(WO 2009/147220)中公开包含尼达尼布的药剂剂量形式且所述药剂剂量形式以引用的形式并入本文中。另外，已经描述用于吸入的干粉调配物(Vartiainen等人,在都柏林举行的国际肺及气道纤维化学术讨论会上的海报展示,2016年9月)。

WO 2006/067165中描述了用于治疗多种疾病的尼达尼布的用途、治疗纤维化疾病的用途以及许多其他用途。

作为特发性肺纤维化的单一治疗的尼达尼布通常每天给药两次，每次150mg(对于轻度肝损伤患者，每天两次，每次100mg)。

此外，WO 2006/067165公开尼达尼布可与多种不同组合搭配物组合。在许多其他组合搭配物之间，WO 2006/067165亦提议将尼达尼布与诸如罗氟司特的PDE4抑制剂组合。

然而，与尼达尼布(其同时已被批准用于治疗IPF)相比，PDE4抑制剂罗氟司特(最初在US 5,712,298 B中公开)从未被研发或批准用于治疗增殖性纤维化疾病，诸如PF-ILD或尤其是IPF。相反，罗氟司特同时被批准仅用于治疗慢性阻塞性肺病(COPD)，其为一种不涉及任何纤维化症状的呼吸道疾病。在接下来的几年中在市场上出现的其他PDE4抑制剂，例如阿普司特(最初在US 6020358B中公开)从未被考虑被研发或批准用于治疗增殖性纤维化疾病，诸如PF-ILD或尤其是IPF，但替代地，阿普司特仅被批准用于治疗牛皮癣(皮肤病)。

除罗氟司特及阿普司特外，亦发布了关于其他具有改良属性的PDE4/PDE4B抑制剂的许多其他专利申请：

·WO 2006/056607、WO 2006/058869、WO 2006/058868及WO 2006/058867中作为PDE4抑制剂的喋啶。

·WO 2006/111549、WO 2007/118793及WO 2009/050242中的作为PDE4抑制剂的哌嗪子基-二氢噻吩并嘧啶。

·WO 2009/050248及WO 2013/026797中的作为PDE4B抑制剂的哌啶基-二氢噻吩并嘧啶。

US 8609670B(WO 2013/026797)中公开了以下PDE4B抑制剂(US 8609670B特此以引用的方式并入)：

式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

尤其为以下式II及式III的PDE4B抑制剂

2.一般术语及定义

未在本文中特定地定义的术语应被赋予本领域技术人员依据本发明及上下文将对其赋予的含义。然而，除非相反地规定，否则如本说明书中所使用，以下术语具有指定的含义且将遵守以下约定。

词组“药学上可接受”在本文中用于指彼等化合物、物质、组合物及/或剂型，其在合理医学判断的范畴内，适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，且与合理益处/风险比率相匹配。

如本文中所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制得其酸盐或碱盐而改性。药学上可接受的盐的实施例包括(但不限于)碱性残基(诸如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱盐或有机盐；及其类似物。

如本文中所使用，术语“治疗(treatment/treating)”涵盖治疗性(亦即治愈性及/或缓解性)及预防性(亦即防治性)治疗两者。

治疗性治疗是指已罹患呈明显急性或慢性形式的所述病状中的一或多者的患者的治疗。治疗性治疗可为对症治疗，其为了减轻特定病症的症状，或可为病因治疗，其为了逆转或部分逆转病症的病状或阻止或减缓疾病的进展。

预防性治疗(“预防”)是指对处于罹患所述病状中的一或多者的风险下的患者的治疗，该治疗系在疾病的临床发作之前以便缩减该风险。

术语“治疗(treatment/treating)”包括给予一或多种活性化合物以便预防或延迟症状或并发症的发作，且预防或延迟罹患疾病、病状或病症，及/或以便消除或控制疾病、病状或病症，以及缓解与疾病、病状或病症相关联的症状或并发症。

术语“治疗有效量”是指(i)治疗或预防具体疾病或病状，(ii)减轻、改善或消除具体疾病或病状的一或多个症状，或(iii)预防或延迟本文中所描述的具体疾病或病状的一或多个症状的发作的本发明化合物的量。

3.发明详述

本申请涉及一种治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法，其包含向有需要的患者给予治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子

或其药学上可接受的盐

及治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

在上文所提及的方法的一个优选的实施方案中，式I的PDE4B抑制剂以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至2000nMol/L之间、更优选在1nMol/L与1000nMol/L之间的式I化合物的经估计人类游离分数(human free fraction)。

在上文所提及的方法的一个优选的实施方案中，进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)或全身性硬化症ILD(SSc-ILD)。

在上文所提及的方法的另一个优选的实施方案中，上文所提及的式I的PDE4B抑制剂与选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别给予。

在上文所提及的方法的另一个优选的实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在上文所提及的方法的另一更优选的实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

在上文所提及的方法的一更优选的实施方案中，式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在上文所提及的方法的一个尤其优选的实施方案中，式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在上文所提及的方法的另一个尤其优选的实施方案中，式I的PDE4B抑制剂为式III化合物且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至2000nMol/L之间、更优选在1nMol/L至1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离分数。

此外，本申请涉及一种式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐，

式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，所述方法包括向有需要的患者给予治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂以及治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

在一个优选的实施方案中，上文定义的进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)为特发性肺纤维化(IPF)抑或全身性硬化症ILD(SSC-ILD)，更优选为IPF。

在另一个优选的实施方案中，上文所提及的式I的PDE4B抑制剂与酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别给予，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

在另一个优选的实施方案中，上文所提及的酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在另一更优选的实施方案中，上文所提及的酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

在一更优选的实施方案中，上文所提及的式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

在一个尤其优选的实施方案中，上文所提及的式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在另一个尤其优选的实施方案中，上文所提及的式I的PDE4B抑制剂为式III化合物且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至2000nMol/L之间、更优选在1nMol/L至1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离血浆分数。

此外，本申请涉及一种选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，所述方法包括向有需要的患者给予治疗有效量的所述酪氨酸激酶抑制剂组合治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子

或其药学上可接受的盐。

在一个优选的实施方案中，以上一或多个进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)将为特发性肺纤维化(IPF)或全身性硬化症ILD(SSC-ILD)，更优选为IPF。

在另一个优选的实施方案中，上文所提及的酪氨酸激酶抑制剂与式I的PDE4B抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

在另一更优选的实施方案中，上文所提及的方法酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

或其药学上可接受的盐。

本申请涉及以下式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐的用途

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子，

其用于制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物，其中治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐将组合治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂给予至有需要的患者，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

在一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的式I的PDE4B抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)或全身性硬化症ILD(SSC-ILD)，更优选为IPF。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的式I的PDE4B抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂将与酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的式I的PDE4B抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在上文所提及的用途的另一更优选的实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

在一更优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的式I的PDE4B抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

在一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的式I的PDE4B抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在另一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂为式III化合物且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至2000nMol/L之间、更优选在1nMol/L至1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离血浆分数。

本申请涉及用于制备药物组合物的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中治疗有效量的所述酪氨酸激酶抑制剂将组合治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐给予至有需要的患者

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子。

在一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)或全身性硬化症ILD(SSC-ILD)，更优选为IPF。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中所述酪氨酸激酶抑制剂将与式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在一更优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物；

及其药学上可接受的盐。

在一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及用于制备药物组合物的选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在另一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的用于制备药物组合物的酪氨酸激酶抑制剂的用途，该药物组合物用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，其中式I的PDE4B抑制剂为式III化合物且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至2000nMol/L之间、更优选在1nMol/L至1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离血浆分数。

在另一实施方案中，本申请涉及一种药物组合物，其包含：

·式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐

·酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，及

·任选的一或多种药学上可接受的载剂及/或赋形剂。

在一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的药物组合物，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在上文所提及的药物组合物的另一更优选的实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

在一个优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的药物组合物，其中式I的PDE4-B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

在一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的药物组合物，其中式I的PDE4-B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

在另一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的药物组合物，其中式I的PDE4-B抑制剂为呈一定剂量的式III化合物，该剂量导致在1nMol/L与2000nMol/L之间、优选地在1nMol/L与1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离血浆分数。

在另一实施方案中，本申请涉及一种试剂盒，其包含：

·第一药物组合物或剂型，其包含式I的PDE4B抑制剂

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐，

及任选的一或多种药学上可接受的载剂及/或赋形剂

及

·第二药物组合物或剂型，其包含选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的酪氨酸激酶抑制剂，及

任选的一或多种药学上可接受的载剂及/或赋形剂。

在一个优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其用于治疗一或种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中。

在一更优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其用于治疗特发性肺纤维化(IPF)或全身性硬化症ILD(SSc-ILD)的方法中。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其用于治疗一或多种PF-ILD的方法中，其中该第一药物组合物或剂型与第二药物组合物或剂型同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

在另一个优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其中第二药物组合物或剂型的酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

在上文所提及的试剂盒的另一更优选的实施方案中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布且以一定剂量给予，该剂量将导致在1nMol/L至300nMol/L之间、更优选在10nMol/L至100nMol/L之间的尼达尼布单乙磺酸盐的经估计人类游离分数。

在一更优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其中该第一药物组合物或剂型包含选自以下的式I的PDE4B抑制剂：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物；

及其药学上可接受的盐。

在一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒，其中该第一药物组合物或剂型包含式III的PDE4B抑制剂化合物

或其药学上可接受的盐。

在另一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文所提及的试剂盒，其中第一药物组合物或剂型中的式I的PDE4-B抑制剂为呈一定剂量的式III化合物，该剂量导致在1nMol/L与2000nMol/L之间、优选地在1nMol/L与1000nMol/L之间的式III化合物的经估计人类游离血浆分数。

在一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒中的任一者，其进一步包含

·药品说明书，其包含用于同时、同步、依序、连续、交替或分别使用第一及第二药物组合物或剂型以治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的印刷说明。

在另一个尤其优选的实施方案中，本申请涉及上文定义的试剂盒中的任一者，其进一步包含

·药品说明书，其包含用于同时、同步、依序、连续、交替或分别使用第一及第二药物组合物或剂型以治疗特发性肺纤维化(IPF)的印刷说明。

·药品说明书，其包含用于同时、同步、依序、连续、交替或分别使用第一及第二药物组合物或剂型以治疗全身性硬化症ILD(SSc-ILD)的印刷说明。

4.附图说明

图1：

实验A1)：

通过式III化合物(实心圆，黑线；IC₅₀＝210nMol/L)或式III化合物与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰线；IC₅₀＝110nMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β刺激的α-SMA蛋白质表达的浓度相关抑制。

□表示在单独存在100nM尼达尼布的情况下对纤维母细胞的α-SMA蛋白质表达的经测量抑制，其未展示抑制作用。

数据以n＝5个供体的±SEM表示。将数据标准化为未治疗(未受激的)对照细胞(＝100％抑制)及TGF-β治疗的细胞(＝0％抑制)。

图2：

实验A2)：

通过阿普司特(实心圆，黑线；IC₅₀＝3μMol/L)或阿普司特与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰线；IC₅₀＝2μMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β刺激的α-SMA蛋白质表达的浓度相关抑制。

图3：

实验A3)：

通过罗氟司特N-氧化物(实心圆，黑线；IC₅₀＝14nMol/L)或罗氟司特N-氧化物与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰线；IC₅₀＝8.5nMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β刺激的α-SMA蛋白质表达的浓度相关抑制。

图4：

实验B1)：

通过式III化合物(实心圆，黑色实线；IC₅₀＝255nMol/L)或式III化合物与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰色实线；IC₅₀＝23nMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的FGF加上IL-1β刺激的增殖的浓度相关抑制。两种药物的组合的经计算加和曲线系由空三角形及虚线表示。

□表示来自患有IPF的仅通过100nM尼达尼布的患者的人类肺纤维母细胞的FGF加上IL-1β刺激的增殖。

数据以n＝5个供体的±SEM表示。将数据标准化为未治疗(未受激的)对照细胞(＝100％抑制)及FGF+IL-1β治疗的细胞(＝0％抑制)。

图5：

实验B2)：

通过阿普司特(实心圆，黑色实线；IC₅₀＝1.8μMol/L)或阿普司特与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰色实线；IC₅₀＝1.6μMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的FGF加上IL-1β刺激的增殖的浓度相关抑制。两种药物的组合的经计算加和曲线系由空三角形及虚线表示。

图6：

实验B3)：

通过罗氟司特N-氧化物(实心圆，黑色实线；IC₅₀＝440pMol/L)或罗氟司特N-氧化物与100nMol/L尼达尼布(空心圆，灰色实线；IC₅₀＝534pMol/L)的组合对来自患有IPF的患者的人类肺纤维母细胞的FGF加上IL-1β刺激的增殖的浓度相关抑制。

两种药物的组合的经计算加和曲线系由空三角形及虚线表示。

5.实验数据

6.1.对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的发病机制

目前尚不完全了解对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的发病机制。

IPF的主要特性为上皮细胞及间叶细胞的改变以及这些细胞之间的相互作用，而目前认为炎症过程仅起次要作用[Lehtonen等人,Respiratory Research(2016)17:14]。一个被广泛接受的解释IPF发病机制的假设假定肺泡上皮损伤导致伤口愈合反应过度，其中过度释放生长及转录因子以及细胞介素随后纤维母细胞活化及转化成分泌肌纤维母细胞表型，导致过度细胞外基质(ECM)蛋白质的产生[King TE,Jr,Pardo A,Selman M.,.Lancet.2011；378:1949-1961]。纤维母细胞灶为IPF的典型组织学特征，其为特定的细胞聚集体，特别是由受损及增生的上皮细胞覆盖的纤维母细胞及肌纤维母细胞，以及由肌纤维母细胞产生的ECM的细胞聚集体[Kuhn C,McDonald JA.,.Am J Pathol.1991；138:1257-1265]。研究表明，具有大量纤维母细胞病灶的IPF患者的存活期缩短[Kaarteenaho R.,Respir Res.2013；14(1):43]。另外，作为肌纤维母细胞标记物的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在IPF患者肺部的表达程度已展示与患者存活率呈负相关[Waisberg DR,Parra ER,Barbas-Filho JV,Fernezlian S,Capelozzi VL]。增加的纤维母细胞端粒酶表达在特发性肺纤维化中肌纤维母细胞α-平滑肌肌动蛋白表达之前[Clinics(Sao Paulo)2012；67:1039-1046]。

目前纤维化过程的发病机制范式表明，在暴露于内源性或外源性刺激后，肺上皮细胞启动损伤反应，导致诸如转化生长因子β-1(TGF-β1)、血小板源生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)的可溶因子与包括白介素-4(IL-4)及白介素-13(IL-13)的细胞介素的产生。这些物质促进炎症细胞的募集及间叶细胞活化，从而引起组织驻留胚胎后纤维母细胞的扩张，此被认为产生活化的肌纤维母细胞。这些细胞为伤口愈合过程的核心，但若未经调变，则沉积过多的ECM并破坏正常的肺架构。在正常的伤口愈合期间，肌纤维母细胞被瞬时活化并通过产生ECM并施加牵引力直接产生肉芽组织。一旦实现愈合，肉芽组织被再吸收并且肌纤维母细胞经历渐进式细胞死亡以恢复正常组织架构及功能[Klingberg等人,JPathol.2013；229:298-309]。在该过程的任何阶段的中断都可能导致组织病变。当愈合反应不充分时，如在急性呼吸窘迫综合征中所见，由急性损伤及弥漫性肺泡损伤主导的病变随的发生。然而，当愈合阶段占主导地位时，组织环境转向纤维化及重塑，并且看到由瘢痕组织的失调累积主导的病变。纤维母细胞及活化的肌纤维母细胞被认为是此过程的核心[Moore等人Curr Pathobiol Rep.2013年9月；1(3):199-208]。

在另一层级，IPF中的纤维母细胞及肌纤维母细胞显示出特征在于不受控制的增殖及存活的病理表型。这些细胞在肺间质中累积，其中其沉积过量的富含胶原蛋白-I的ECM并最终组织成上文所描述的成纤维母细胞病灶。随着这些区域扩张并与肺泡腔并置，其似乎首先破裂，且接着最终破坏肺泡基底膜[White等人,J Pathol.2003；201:343-354]。

此扩张很大程度上归因于对自IPF肺组织获得的原代纤维母细胞所描述的渐进式细胞死亡的抗性[Maher等人,Am J Respir Crit Care Med.2010；182:73-82及Nho等人,PLoS one 2013；8]。针对此观察提出了几种可能的机制，包括细胞凋亡途径的异常、异常的Wnt信号传导[Chang等人,J Biol Chem.2010；285；8196-8206]及有缺陷的自噬[Patel等人,PLoS One 2012；7]。

然而，多个表征良好的细胞因子，包括TGF-β，已经在受伤的肺中发现或已经自肺中移除的炎性细胞产生。此外，在肺纤维化的动物模型中，在胶原蛋白合成之前TGF-β的产生增加，并且主要由肺泡巨噬细胞产生。在晚期特发性肺纤维化中，可通过免疫组织化学染色主要在肺再生及重塑区域的上皮细胞中检测到广泛的TGF-β沉积。此表明肺病(诸如ILD、PF-ILD及IPF)的进行性纤维化特性的发病机制可为异常的修复过程(Khali等人CibaFound Symp.1991；157:194-207及Cutroneo等人,J.Cell.Physiol.211:585-589,2007)。

自此关于纤维化的背景信息可清楚地看出，ILD、PF-ILD，特别是IPF的纤维化过程的病变可划分成“纤维化过程的三种不同层级的发病机制”，其中尤其是第二及第三层级的时间次序尚未完全理解，且亦可部分并行进行。

在第一层级的纤维化过程中，在暴露于内源性或外源性刺激后，肺上皮细胞通常会引发损伤反应，从而产生可溶因子(诸如转化生长因子β-1(TGF-β1))、细胞介素及促纤维变性介体/纤维化标记物(诸如原胶原、纤维结合蛋白及MCP-1)。

接着，在纤维化过程的第二层级的发病机制中，这些促纤维化介体/纤维化标记物促进间叶细胞活化，此引起组织驻留胚胎后纤维母细胞的扩张，此被认为产生肌纤维母细胞，其为纤维母细胞的一种活化形式。这些肌纤维母细胞为伤口愈合过程的核心，但若未经调变，其会产生过量的细胞外基质材料及胶原蛋白/瘢痕组织。此“肌纤维母细胞表型”的特征还在于强α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。强烈表达α-SMA蛋白质的纤维母细胞转化/活化成肌纤维母细胞形成对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的第二层级的发病机制。

因此，α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白质表达的量化为纤维母细胞转化/活化成肌纤维母细胞的程度的合适测量，其对应于对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的第二层级的发病机制。

对于ILD、PF-ILD及IPF共同的纤维化过程的第三层级的发病机制的特征在于纤维母细胞及肌纤维母细胞的不受控制的增殖/细胞分裂以及存活，此可能由于其对渐进式细胞死亡的抗性。增殖的纤维母细胞及肌纤维母细胞在肺间质中累积，其中其沉积过量的富含胶原蛋白-I的ECM并最终组织成纤维母细胞病灶。

细胞分裂的量化(例如通过BrdU并入增殖的纤维母细胞的DNA中的量化)为纤维母细胞增殖程度的合适测量，其对应于对于ILD、PF-ILD及CTD共同的纤维化过程的第三层级的发病机制。

6.2.实验分析A)及B)的原理：

将生长在96孔板中的IPF患者的肺纤维母细胞(IPF-LF细胞)与不同浓度的PDE4抑制剂“式III化合物”、“阿普司特”或“罗氟司特-N-氧化物”或与前述PDE4抑制剂中的每一者与尼达尼布的组合的一起培育30min。

在化合物培育后，用测定相关刺激物刺激细胞，并在测试化合物存在下将培育细胞培育测定相关时间。

使用单克隆抗平滑肌肌动蛋白抗体通过Western替代测定(MSD)测定α-SMA蛋白质。

通过ELISA测定并入增殖细胞的DNA中的BrdU。

BrdU为DNA前驱体胸苷的类似物。在增殖细胞中，必须在分裂发生之前复制DNA。若BrdU经添加至细胞培养物中，则增殖细胞会将其并入至其DNA中，正如其并有胸苷一样。可用特异性抗BrdU荧光抗体检测细胞DNA中BrdU的量，然后通过流式细胞测量技术检测或通过用针对BrdU的单克隆抗体的细胞ELISA检测。

6.3.实验A)：α-SMA(平滑肌肌动蛋白)蛋白质测定(Western替代测定)

细胞接种及饥饿

将IPF-肺纤维母细胞(第5至8代)以4500个细胞/孔使用100μL/孔FBM+补充物接种于96孔细胞培养板中。接种后24h，用不含补充物的FBM培养基洗涤细胞一次，且使其饥饿24h。

实验A1)

在实验A1)中，式III的PDE4B抑制剂用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图1中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图1中的空心圆及灰色实线)。

实验A2)

在实验A2)中，阿普司特用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图2中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图2中的空心圆及灰色实线)。

实验A3)

在实验A3)中，罗氟司特-N-氧化物用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图3中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图3中的空心圆及灰色实线)。

测试化合物稀释

所有“测试化合物”(式III的PDE4B抑制剂、阿普司特或罗氟司特)在0.1mmol/LHCl或DMSO中制备1000x，并进行1:3.16系列稀释(在0.1mmol/L HCl或DMSO中)。为了获得2x浓缩的化合物-培养基，制备1:500稀释液(2μl的1000x稀释液经添加至998μl FBM加2nmol/L PGE2)。

运用测试化合物的预培育

接种后48h，吸出培养基并加入FBM(每孔100μl)。在37℃培育1h后，添加含有2x浓缩化合物(不同浓度)加上2x浓缩PGE2(2nmol/L)的90μl培养基30min。PGE2的最终浓度为1nmol/L。

刺激

在测试化合物预培育(190μL)后30min，添加10μl 20x浓缩的TGF-β，并在37℃的温度下刺激细胞48h。

为此目的，将TGF-β储备溶液(在4mmol/L无菌HCl中重构的20μg/mL)在饥饿培养基中以1:200稀释以达到100ng/mL的浓度。将10μL此TGF-β培养基或饥饿培养基添加至指定的孔中。在刺激期间维持测试化合物浓度。最终的TGF-β浓度为4ng/mL。

蛋白质裂解物

刺激后48h，移除上清液并将其储存在-80℃以进行进一步的实验。

用冰冷的PBS洗涤细胞一次，且每孔添加含有1x蛋白酶抑制剂的50μl RIPA缓冲液。将裂解物在冰上培育5min，然后储存于-80℃。

α-SMA Western替代测定

解冻后，将25μl的每种裂解物转移至多数组96孔板(MSD)的膜上，并在室温下轻微振荡培育2h。培育时间后，将板用200μl 1x Tris洗涤缓冲液(MSD)洗涤3次，并添加150μl的3％阻断缓冲液1h。阻断后，用200μl 1x Tris洗涤缓冲液洗涤板3次，且添加25μl抗体溶液(每板0.75ml 3％阻断缓冲液、2.25ml 1x Tris洗涤缓冲液、1.2μl抗α-SMA抗体(1:2500)、15μl山羊抗小鼠磺基标签抗体(1:200))1h。AB培育后，用200μl 1x Tris洗涤缓冲液洗涤板3次，并每孔添加150μl 1x MSD读取缓冲液。用扇区成像器(MSD)测量板。

6.4.实验B：细胞增殖测定

细胞接种及饥饿

将IPF-肺纤维母细胞(第5至8代)以2500个细胞/孔使用100μL/孔FBM+补充物接种于96孔细胞培养板中。在接种后24h，用不具有补充物的FBM培养基洗涤细胞一次，且接着将所述细胞在此培养基中保持24h饥饿。

实验B1)

在实验B1)中，式III的PDE4B抑制剂用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图4中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图4中的空心圆及灰色实线)。

具有空三角形的虚线表示100nMol/L尼达尼布与对应浓度的式III的PDE4B抑制剂的组合治疗的“经计算加和曲线”。

实验B2)

在实验B2)中，阿普司特用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图5中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图5中的空心圆及灰色实线)。

具有空三角形的虚线表示100nMol/L尼达尼布与对应浓度的阿普司特的组合治疗的“经计算加和曲线”。

实验B3)

在实验B3)中，罗氟司特-N-氧化物用作“测试化合物”

·其独自呈上升浓度(参见图6中的完整的圆及黑色实线曲线)，或

·其与固定浓度的100nMol/L尼达尼布一起呈上升浓度(参见图6中的空心圆及灰色实线)。

具有空三角形的虚线表示100nMol/L尼达尼布与对应浓度的罗氟司特-N-氧化物的组合治疗的“经计算加和曲线”。

测试化合物稀释

所有测试化合物在0.1mmol/L HCl或DMSO中制备1000x，并进行1:3.16系列稀释(在0.1mmol/L HCl或DMSO中)。为了获得1x浓缩的化合物培养基，将1μl的1000x DMSO稀释液添加至999μl FBM。

运用测试化合物的预培育

接种后48h，通过抽吸移除培养基并添加90μl化合物或饥饿培养基30min。

刺激

在测试化合物预培育(90μL)后30min，添加10μl 10x浓缩的FGF加IL-1β，并在37℃的温度下刺激细胞92h。

出于此目的，将FGF及IL-1β储备溶液(分别为250μg/mL及10μg/mL)在饥饿培养基中稀释，以分别达到FGF及IL-1β的200ng/mL及300pg/mL的浓度。10μL此刺激培养基或饥饿培养基经添加至指定的孔中。在刺激期间维持测试化合物浓度。

最终FGF浓度为20ng/mL。最终IL-1β浓度为30pg/mL。

BrdU测定

基于DNA合成期间BrdU并入的测量，通过用于细胞增殖的量化的比色免疫测定法测定增殖。

该测定根据制造商的说明实行。

刺激后72h，在饥饿培养基中进行BrdU的1:100稀释(得到浓度100μmol/L)，且每孔添加10μl(每孔10μmol/l的最终浓度)。约18h后，通过抽吸移除BrdU培养基。将细胞固定并在室温下用FixDenat试剂变性30min。通过轻敲移除试剂并添加抗BrdU-POD工作溶液(培育时间：90min)。将板用200μL洗涤缓冲液洗涤三次，然后与底物溶液温育约10min。通过向底物溶液中添加1mol/L H₂SO₄终止反应，并用亮度计(珀金埃尔默(PerkinElmer)的EnVision2104多标记读取器)在450nm下读取板。

6.5.数据分析

自用于BrdU测定的光密度读数(OD)或自MSD单位(α-SMA测定)计算未刺激对照的倍数x。

自未刺激对照的倍数x计算％抑制值。

在不同供体的实验中的每一者中，所有抑制值一式两份或一式三份来测定。

自所有值中减去空白的平均值。

经刺激细胞的IC₅₀值如下测定：

％抑制值＝100-(Y/K1)*100

K1＝经刺激的、非化合物处理的对照孔的OD平均值减去未经刺激的、非化合物处理的对照孔的OD平均值

Y＝经刺激的化合物处理的孔的OD

使用与Graph Pad Prism软件包的可变斜率的三参数拟合计算log(抑制剂浓度)与％抑制值的非线性回归。

为了计算式III化合物、阿普司特或罗氟司特-N-氧化物与尼达尼布的加和效应，使用下式

PDE4抑制剂的作用(EB)+尼达尼布的作用(EN)＝EB+N＝EB+EN-

(EB*EN)＝虚线曲线(Poch&Holzmann,1980)。

测试化合物

将测试化合物式III化合物、阿普司特、罗氟司特-N-氧化物及尼达尼布溶解在DMSO中并储存在-20℃。在每次实验之前制备7种浓度的连续稀释液。

6.6.材料及方法

材料

细胞繁殖培养基：

FBM(纤维母细胞基础培养基，龙沙(Lonza)，目录号：CC-3131)，补充有胰岛素，FGF-2，0.5％FBS，GA-1000(均在FGM-2SingleQuots，龙沙，目录号CC-4126中)

继代培养IPF-LF细胞的试剂：

Hepes缓冲盐水溶液(龙沙，目录号CC-5022)

胰蛋白酶/EDTA(0.25mg/mL)(龙沙，CC-5012)

TNS(胰蛋白酶中和溶液，龙沙，CC-5002)

饥饿培养基：

不具有补充物的FBM

刺激培养基α-SMA测定：

FBM加4ng/mL rhTGF-β及1nmol/L PGE2

刺激培养基BrdU测定：

FBM加上20ng/mL rhbFGF加上30pg/mL rhIL-1β

6.7.实验说明

实验A)：抑制来自IPF患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达

特异性活性剂越倾向于抑制来自IPF患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达，则此活性剂在纤维化过程的第二层级的发病机制中具有治疗效果越大，纤维化过程为纤维母细胞转变为肌纤维母细胞。

因此，在此实验A)中，仿效第二层级的纤维化过程，会以实验方式判定以下各者对IPF患者的人类肺纤维母细胞的TGF-β经受激的α-SMA蛋白质表达的影响：

a)仅尼达尼布、仅式III化合物、仅阿普司特及仅罗氟司特-N-氧化物，以及

b)具有尼达尼布的式III化合物、具有尼达尼布的阿普司特及具有尼达尼布的罗氟司特-N-氧化物。

虽然浓度为100nMol/L的尼达尼布在单独给予时在此实验中展示对人类肺纤维母细胞的TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达无抑制作用(支持单独使用此浓度的尼达尼布对纤维化过程的第二层级的发病机制无治疗效果的事实)(参见图1、2及3中的□：抑制≤0)，但所有测试的PDE4抑制剂(式III化合物、阿普司特及罗氟司特-N-氧化物)当单独给予时且亦当与100nMol/L固定浓度的尼达尼布一起给予时，至少在一定浓度下展示出对人类肺纤维母细胞的TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达的浓度相关抑制，从而支持所有这些PDE4抑制剂在纤维化过程的第二层级的发病机制(活化成肌纤维母细胞)中的某一治疗效果。

自这些结果可得出结论，PDE4抑制剂至少在某些浓度范围内有可能展示对“纤维母细胞向肌纤维母细胞转变/活化”(表示对于ILD、尤其PF-ILD共同的纤维化过程的第二层级的发病机制的事件)取决于浓度的治疗效果，而根据此实验，浓度为100nMol/L的尼达尼布单独不展示对此极相同“第二层级的发病机制”的治疗效果。

因此，PDE4抑制剂相对于尼达尼布展示出对“纤维母细胞向肌纤维母细胞转变/活化”的所谓“互补作用”或“补充作用”(＝纤维化过程的第二层级的发病机制)。因此，与仅用例如尼达尼布的IPF治疗相比，给予尼达尼布连同式III的PDE4B抑制剂将展示出对治疗功效的优异效应。

若比较式III化合物(图1)、阿普司特(图2)及罗氟司特-N-氧化物(图3)对人类肺纤维母细胞的TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达的经测量抑制，则很明显，仅对于式III化合物(图1)，完整的浓度/抑制曲线位于“超过零”的抑制处，而例如对于阿普司特且尤其对于罗氟司特-N-氧化物“低PDE4抑制剂浓度(单独或与尼达尼布组合)”导致“对TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达的负抑制”(支持这些较低浓度的阿普司特且尤其罗氟司特-N-氧化物对纤维化过程的第二层级不存在治疗效果(而所有经测试浓度的式III化合物似乎展示出对TGF-β经刺激的α-SMA蛋白质表达的正抑制)。

实验B)：纤维母细胞增殖的抑制

特定活性剂倾向于抑制IPF患者的经培养人类肺纤维母细胞的增殖越多，则此活性剂在纤维母细胞增殖的纤维化过程的第三层级的发病机制中将具有更大的治疗效果。

因此，在实验B)中以实验方式判定以下各者对IPF患者的人类肺纤维母细胞的增殖的影响：

在此实验B)中，仿效纤维化过程的第三层级的发病机制(“纤维母细胞增殖”)，仅给予浓度为100nMol/L的尼达尼布已经展示出对人类肺纤维母细胞增殖的明显抑制作用(参见抑制数据点，其表示为图4、5及6中的□)。

然而，图4中的实验B1)、图5中的B2)及图6中的B3)的结果展示，不仅单独的尼达尼布对纤维母细胞增殖具有抑制作用，而且PDE4抑制剂，诸如式III化合物(参见图4B1中的实心圆及黑色实线曲线)、阿普司特(参见图5B2中的实心圆及黑色实线曲线)及罗氟司特-N-氧化物(参见图6中的B3中的实心圆及黑色实线曲线)一般展示对纤维母细胞增殖的浓度相关抑制作用且因此似乎对纤维母细胞增殖(纤维化过程的第三层级的发病机制)具有治疗效果。

由于固定浓度为100nMol/L的尼达尼布及经测试PDE4抑制剂浓度两者明显地依赖性地展示出对纤维母细胞增殖的抑制作用，因此应预期用于通过100nMol/L尼达尼布与呈各别浓度的对应的PDE4抑制剂的组合对纤维母细胞增殖的抑制的简单“加和效应”。

在图4、图5及图6中，具有空三角形的虚线曲线表示这些“经计算加和组合曲线”，其自用于100nMol/L尼达尼布的经测量抑制加上仅用于对应的呈可变浓度的PDE4抑制剂的经测量抑制的简单“相加”来计算。

然而，图4、图5及图6中具有空心圆的灰色实线曲线表示“用于包含100nMol/L尼达尼布及对应的呈可变浓度的PDE4抑制剂的组合的以实验方式测量的抑制曲线”。

出乎意料地，在展示实验B1)的结果的图4中，相较于用于尼达尼布与式III化合物的组合的对应的“经计算加和抑制曲线”(具有空三角形的虚线曲线)，用于尼达尼布与式III化合物的组合的“纤维母细胞增殖的以实验方式测量的抑制曲线”(实线灰线，空心圆)“显著地向左移位”(此是指朝向式III化合物的较低浓度)。

此显著的“左移”为100nMol/L尼达尼布与式III化合物的组合的“超加和的协同效应”的明确指示。用于尼达尼布及式III化合物的组合的此以实验方式观察到的“超加和的协同效应”是完全出乎意料的，这是尤其因为此超加和的协同效应似乎非“类效应”。

图5展示对应的实验B2)的结果，其中通过阿普司特更换了式III化合物。图5展示，相较于用于尼达尼布与阿普司特的组合的对应的“经计算加和抑制曲线”(具有空三角形的虚线曲线)，用于尼达尼布与阿普司特的组合的“以实验方式测量的抑制曲线”(实线灰线，空心圆)没有向左移动，而是向右略微移位(此意味着较高阿普司特浓度)。理论上，此“右移位”甚至可为用于通过尼达尼布及阿普司特的组合对“小于纤维母细胞增殖的加和抑制”(“抗协同效应”)的指示。然而，相较于“经计算尼达尼布/阿普司特组合曲线”，“经测量尼达尼布/阿普司特组合曲线”的此相当轻微的右移位或多或少地在误差杠内，且因此在统计学上不相关。因此，对于尼达尼布与阿普司特的组合，或多或少，可以实验方式观察到预期的正常“加和效应”。

图6展示对应的实验B3)的结果，其中式III化合物被罗氟司特-N-氧化物更换。图6展示，相较于用于尼达尼布与罗氟司特-N-氧化物的组合的对应的“经计算加和抑制曲线”(具有空三角形的虚线曲线)，用于尼达尼布与罗氟司特-N-氧化物的组合的“以实验方式测量的抑制曲线”(实线灰线，空心圆)亦向右而非向左移位。此“右移位”为用于尼达尼布与罗氟司特-N-氧化物的组合的“小于纤维母细胞增殖的加和抑制”(抗协同效应)的指示。相较于“经计算尼达尼布/罗氟司特组合曲线”，“经测量尼达尼布/罗氟司特组合曲线”的此“右移位”仅用于超出误差杠范围的极高的罗氟司特-N-氧化物浓度。因此，对于尼达尼布与罗氟司特-N-氧化物的组合，亦可以实验方式判定所预期的或多或少的“加和效应”。

对于尼达尼布与式III化合物的组合专门观察到对抑制纤维母细胞增殖的此“超加和的协同效应”亦反映在针对浓度/抑制曲线计算的IC₅₀值的巨大差异中

a)所述浓度/抑制曲线针对仅用图4中的式III化合物治疗的IPF患者的人类肺纤维母细胞测量(实线黑色曲线，255nMol/L的IC₅₀值)，且

b)所述浓度/抑制曲线针对运用包含图4中的式III化合物及尼达尼布的组合治疗的IPF患者的人类肺纤维母细胞测量(实线灰色曲线，23nMol/L的IC₅₀值)。

此处，将针对单独给予的式III化合物测量的抑制曲线的IC₅₀值与针对式III化合物与尼达尼布的组合测量的抑制曲线的IC₅₀值进行比较，大于11倍(255nMol/L/23nMol/L＝11)。

与此相反，针对单独给予的另一PDE4抑制剂阿普司特及罗氟司特-N-氧化物测量的抑制曲线相较于针对对应的PDE4抑制剂/尼达尼布组合测量的抑制曲线的IC₅₀值的对应的差要小得多(对于阿普司特大1.13倍、对于罗氟司特-N-氧化物小0.82倍)。

此以实验方式判定的仅对于式III化合物与尼达尼布的组合观察到的对纤维母细胞增殖的抑制的“超加和的协同作用”显然似乎并非“类效应”，因为没有其他测试的PDE4抑制剂阿普司特或罗氟司特结合尼达尼布展示出对应的类似“超加和的协同效应”，但替代地仅展示预期的“加和抑制作用”(尼达尼布/罗氟司特-N-氧化物在较大罗氟司特-N-氧化物浓度下展示出甚至“小于加和抑制作用”)。

因此，尼达尼布与式III的PDE4B抑制剂的组合，归因于以实验方式观察到的对纤维母细胞增殖的超加和的协同抑制作用，不仅相较于用个别单一药剂治疗且亦相较于替代组合尼达尼布/罗氟司特-N-氧化物及尼达尼布/阿普司特展示出用于治疗PF-ILD患者的出乎意料的明显改良的治疗功效。

因此，实验A)及B)以实验方式展示出，包含式III的PDE4B抑制剂及尼达尼布的组合展示

1.)在用于式III的PDE4B抑制剂的经测试浓度的全部范围内对“对于PF-ILD共同的纤维化过程的第二层级的发病机制”(纤维母细胞活化成肌纤维母细胞)的明显治疗效果(其中尼达尼布单独对第二层级不展示治疗效果)且

2.)对“对于PF-ILD共同的纤维化过程的第三层级的发病机制”(纤维母细胞增殖)的出乎意料的甚至“超加和的协同治疗效果”(罗氟司特-N-氧化物/尼达尼布及阿普司特/尼达尼布组合出乎意料地并不展示该超加和的协同治疗效果)。

式III的PDE4B抑制剂与尼达尼布的组合相较于其他PDE4抑制剂/尼达尼布组合(诸如罗氟司特-N-氧化物/尼达尼布)明显地展示出的另一额外优点为其相对良好耐受性(尤其关于肠胃副作用)。

众所周知，尼达尼布以及吡非尼酮(目前两种唯一被批准用于治疗IPF的治疗剂)展示出明显的肠胃副作用，诸如腹泻、恶心、呕吐、体重减轻等，此为尼达尼布及吡非尼酮通常归因于其加和的且因此较频繁肠胃副作用而不组合在一起的主要原因。

与尼达尼布及吡非尼酮相比，式III的PDE4B抑制剂已展出在对应的大鼠实验中相对不含PDE4抑制剂-典型的肠胃副作用，诸如腹泻(参见WO2013/026797第5.3章：实验“胃排空”及“肠道转运”以及图2a(胃排空)及图2b(肠道转运))。在这些实验中，可展示，量增加的2号实施例化合物(其与本申请中的式III的PDE4B抑制剂相同)相较于未经治疗的大鼠对大鼠中的经测试膳食的胃排空及肠道转运基本没有影响。

然而，在类似的“胃排空”及“肠道转运”实验中，替代的PDE4抑制剂罗氟司特展示出展示肠胃副作用的明显趋势。

另外，自临床试验中亦众所周知，罗氟司特(其仅被授权用于治疗COPD)在人类COPD患者中展示出显著的肠胃副作用，诸如腹泻、恶心、体重减轻。

在http://www.rxlist.com/daliresp-drug.htm中，公开出以每天500μg的剂量给予COPD患者的罗氟司特导致：

所有患者中的9.5％会腹泻(相较于接收安慰剂的患者中的仅2.7％)

所有患者中的4.7％会恶心(相较于接收安慰剂的患者中的仅1.4％)

所有患者中的7.5％会体重减轻(相较于接收安慰剂的患者中的仅2.1％)且

所有患者中的4.4％会头痛(相较于接收安慰剂的患者中的仅2.1％)。

由于上文所提及的观察，相较于例如罗氟司特与尼达尼布的组合，式III的PDE4B抑制剂与尼达尼布的组合在肠胃副作用方面具有更优的耐受性。另外，式III的PDE4B抑制剂与尼达尼布的组合在治疗ILD、PF-ILD且尤其是IPF方面具有更优的治疗功效(参见图1至图6)，并且在肠胃副作用方面具有可接受的耐受性(WO 2013/026797第5.3章)。

Claims

1.用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法，所述方法包括向有需要的患者给予治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂，

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐，

以及治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

2.如权利要求1所述的方法，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述式I的PDE4B抑制剂与选自尼达尼布及其药学上可接受的盐的所述酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

4.如权利要求1至4中的任一项所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

5.如权利要求1至4中的任一项所述的方法，其中所述式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

6.如权利要求1、2、3、4中的任一项所述的方法，其中所述式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

7.一种式I的PDE4B抑制剂，

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐，

其用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，所述方法包括向有需要的患者给予治疗有效量的所述式I的PDE4B抑制剂以及治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

8.如权利要求7所述的用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的式I的PDE4B抑制剂，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)。

9.如权利要求7或8任一项的方法中所用的式I的PDE4B抑制剂，其在该方法中与酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

10.如权利要求7至9中任一项的方法中所用的式I的PDE4B抑制剂，其中在该方法中，所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

11.如权利要求7至10中任一项的方法中所用的式I的PDE4B抑制剂，其中在该方法中，所述式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

12.如权利要求7、8、9或10中任一项的方法中所用的式I的PDE4B抑制剂，其中在该方法中，所述式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

13.一种酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中，所述方法包括向有需要的患者给予治疗有效量的所述酪氨酸激酶抑制剂以及治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂，

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子；

或其药学上可接受的盐。

14.如权利要求13所述的用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)。

15.如权利要求13或14中的一项所用的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其在该方法中与所述式I的PDE4B抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

16.如权利要求13、14或15中的一项所用的酪氨酸激酶抑制剂，其中所述方法中的所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

17.如权利要求13、14、15或16中的一项所用的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其中在该方法中所述式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

18.如权利要求13、14、15或16中的一项所用的酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其中在该方法中所述式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

19.式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐在制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物中的用途，

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子，

其中将治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂组合给予至有需要的患者，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

20.如权利要求19所述的式I的PDE4B抑制剂在制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物中的用途，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)。

21.如权利要求19或20所述的式I的PDE4B抑制剂的用途，其中所述式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐将与酪氨酸激酶抑制剂同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐。

22.如权利要求19、20或21的任一项所述的PDE4B抑制剂的用途，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

23.如权利要求19、20、21或22的任一项所述的式I的PDE4B抑制剂的用途，其中所述式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物

其药学上可接受的盐，

式III化合物

及其药学上可接受的盐。

24.如权利要求19、20、21或22的任一项所述的式I的PDE4B抑制剂的用途，其中所述式I的PDE4B抑制剂为式III化合物

或其药学上可接受的盐。

25.酪氨酸激酶抑制剂在制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物中的用途，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其中将治疗有效量所述酪氨酸激酶抑制剂与治疗有效量的式I的PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐组合给予至有需要的患者，

其中环A为6元芳环，其可任选包含一个或两个氮原子，且

其中R为Cl，且

其中R可位于环A的对位、间位或邻位，

其中S*为表示手性中心的硫原子。

26.如权利要求25所述的酪氨酸激酶抑制剂在制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物中的用途，其中该进行性纤维化间质性肺病为特发性肺纤维化(IPF)。

27.如权利要求25或26所述的酪氨酸激酶抑制剂在制备用于治疗一或多种进行性纤维化间质性肺病(PF-ILD)的方法中的药物组合物中的用途，所述酪氨酸激酶抑制剂选自尼达尼布及其药学上可接受的盐，其中所述酪氨酸激酶抑制剂将与所述PDE4B抑制剂或其药学上可接受的盐同时、同步、依序、连续、交替或分别地给予。

28.如权利要求25、26或27的任一项所述的酪氨酸激酶抑制剂的用途，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为呈其单乙磺酸盐形式的尼达尼布。

29.如权利要求25、26、27或28的任一项所述的酪氨酸激酶抑制剂的用途，其中所述式I的PDE4B抑制剂选自：

式II化合物