CN111254177A - 一种提取骨髓中蛋白质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取骨髓中蛋白质的方法，包括以下步骤：将骨髓组织放在低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；将获得的骨髓蛋白质浸提液进行浸提；将骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；使用离心设备对沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行离心，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；对获得的盐蛋白进行无菌式烘干，即获得骨髓蛋白质。本发明的整个过程及操作步骤简便，有利于实现对骨髓中蛋白质的快速提取，有利于进行推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白质提取技术领域，尤其涉及一种提取骨髓中蛋白质的方法。
背景技术
骨髓为存在于骨松质腔隙和长骨骨髓腔内，由多种类型的细胞和网状结缔组织构成，根据其结构不同分为红骨髓和黄骨髓，为柔软富有血液的组织。在对骨髓进行研究的过程中，涉及到对骨髓中蛋白质的提取，传统提取蛋白质的方法在应用到骨髓蛋白质的提取时，存在着操作麻烦、不便，以及不利于实现骨髓蛋白质的快速提取的问题。为此，我们提出了一种提取骨髓中蛋白质的方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种提取骨髓中蛋白质的方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种提取骨髓中蛋白质的方法，包括以下步骤：
S1：将骨髓组织收集至容器内，并放在0-10摄氏度的低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；
S2：向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；
S3：进一步的向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，待骨髓浆液的PH值处于8-10时，停止碱性蛋白酶的加入，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；
S4：将步骤S3获得的骨髓蛋白质浸提液处在46-52摄氏度下进行浸提，浸提时间为40-60分钟，此时骨髓蛋白质浸提液中的蛋白质被浸出；
S5：调节蛋白质被浸出的骨髓蛋白质浸提液呈酸性，此时骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；
S6：使用离心设备对步骤S5中沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行10000-12000r/min的离心，在持续5-7分钟的离心后获得离心液，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；
S7：对步骤S6获得的盐蛋白在50-60摄氏度下进行无菌式烘干，待盐蛋白烘干至恒重后，即获得骨髓蛋白质。
进一步的，在步骤S1中骨髓组织内细胞的灭杀时间持续8-12小时，且在冷冻灭杀的过程中，骨髓组织处于真空状态。
进一步的，在步骤S2开始进行的过程中，先将冷冻灭杀后的骨髓组织内细胞在25摄氏度的环境下放置60-120分钟。
进一步的，在步骤S2中，盐溶液为氯化钠溶液，且氯化钠溶液的浓度为2.1％-2.3％，且氯化钠溶液与骨髓浆液的体积比为10ml：2ml。
进一步的，在步骤S5中，呈酸性的骨髓蛋白质浸提液的PH值为4-5，且在步骤S5进行的过程中，温度为26-30摄氏度，沉淀时间为50-70分钟。
本发明提出的一种提取骨髓中蛋白质的方法，有益效果在于：本方案在应用于骨髓中蛋白质的提取时，整个过程及操作步骤简便，有利于实现对骨髓中蛋白质的快速提取，且能够降低提取过程中的提取成本，以及避免在提取过程中对操作提取环境产生污染，进而有利于进行推广应用。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种提取骨髓中蛋白质的方法，包括以下步骤：
S1：将骨髓组织收集至容器内，并放在0摄氏度的低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；
S2：向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；
S3：进一步的向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，待骨髓浆液的PH值处于8时，停止碱性蛋白酶的加入，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；
S4：将步骤S3获得的骨髓蛋白质浸提液处在46摄氏度下进行浸提，浸提时间为40分钟，此时骨髓蛋白质浸提液中的蛋白质被浸出；
S5：调节蛋白质被浸出的骨髓蛋白质浸提液呈酸性，此时骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；
S6：使用离心设备对步骤S5中沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行10000r/min的离心，在持续5分钟的离心后获得离心液，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；
S7：对步骤S6获得的盐蛋白在50摄氏度下进行无菌式烘干，待盐蛋白烘干至恒重后，即获得骨髓蛋白质。
在步骤S1中骨髓组织内细胞的灭杀时间持续8小时，且在冷冻灭杀的过程中，骨髓组织处于真空状态。
在步骤S2开始进行的过程中，先将冷冻灭杀后的骨髓组织内细胞在25摄氏度的环境下放置60分钟。
在步骤S2中，盐溶液为氯化钠溶液，且氯化钠溶液的浓度为2.1％，且氯化钠溶液与骨髓浆液的体积比为10ml：2ml。
在步骤S5中，呈酸性的骨髓蛋白质浸提液的PH值为4，且在步骤S5进行的过程中，温度为26摄氏度，沉淀时间为50分钟。
实施例2
一种提取骨髓中蛋白质的方法，包括以下步骤：
S1：将骨髓组织收集至容器内，并放在5摄氏度的低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；
S2：向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；
S3：进一步的向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，待骨髓浆液的PH值处于9时，停止碱性蛋白酶的加入，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；
S4：将步骤S3获得的骨髓蛋白质浸提液处在49摄氏度下进行浸提，浸提时间为50分钟，此时骨髓蛋白质浸提液中的蛋白质被浸出；
S5：调节蛋白质被浸出的骨髓蛋白质浸提液呈酸性，此时骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；
S6：使用离心设备对步骤S5中沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行11000r/min的离心，在持续6分钟的离心后获得离心液，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；
S7：对步骤S6获得的盐蛋白在55摄氏度下进行无菌式烘干，待盐蛋白烘干至恒重后，即获得骨髓蛋白质。
在步骤S1中骨髓组织内细胞的灭杀时间持续10小时，且在冷冻灭杀的过程中，骨髓组织处于真空状态。
在步骤S2开始进行的过程中，先将冷冻灭杀后的骨髓组织内细胞在25摄氏度的环境下放置90分钟。
在步骤S2中，盐溶液为氯化钠溶液，且氯化钠溶液的浓度为2.2％，且氯化钠溶液与骨髓浆液的体积比为10ml：2ml。
在步骤S5中，呈酸性的骨髓蛋白质浸提液的PH值为4.5，且在步骤S5进行的过程中，温度为28摄氏度，沉淀时间为60分钟。
实施例3
一种提取骨髓中蛋白质的方法，包括以下步骤：
S1：将骨髓组织收集至容器内，并放在10摄氏度的低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；
S2：向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；
S3：进一步的向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，待骨髓浆液的PH值处于10时，停止碱性蛋白酶的加入，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；
S4：将步骤S3获得的骨髓蛋白质浸提液处在52摄氏度下进行浸提，浸提时间为60分钟，此时骨髓蛋白质浸提液中的蛋白质被浸出；
S5：调节蛋白质被浸出的骨髓蛋白质浸提液呈酸性，此时骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；
S6：使用离心设备对步骤S5中沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行12000r/min的离心，在持续5-7分钟的离心后获得离心液，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；
S7：对步骤S6获得的盐蛋白在60摄氏度下进行无菌式烘干，待盐蛋白烘干至恒重后，即获得骨髓蛋白质。
在步骤S1中骨髓组织内细胞的灭杀时间持续12小时，且在冷冻灭杀的过程中，骨髓组织处于真空状态。
在步骤S2开始进行的过程中，先将冷冻灭杀后的骨髓组织内细胞在25摄氏度的环境下放置120分钟。
在步骤S2中，盐溶液为氯化钠溶液，且氯化钠溶液的浓度为2.3％，且氯化钠溶液与骨髓浆液的体积比为10ml：2ml。
在步骤S5中，呈酸性的骨髓蛋白质浸提液的PH值为5，且在步骤S5进行的过程中，温度为30摄氏度，沉淀时间为70分钟。
综上所述：本发明在应用于骨髓中蛋白质的提取时，整个过程及操作步骤简便，有利于实现对骨髓中蛋白质的快速提取，且能够降低提取过程中的提取成本，以及避免在提取过程中对操作提取环境产生污染，进而有利于进行推广应用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种提取骨髓中蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将骨髓组织收集至容器内，并放在0-10摄氏度的低温下进行骨髓组织内细胞的冷冻式灭杀；
S2：向进行细胞灭杀后的骨髓组织中加入盐溶液，并使用破碎机进行破碎，破碎后形成骨髓浆液；
S3：进一步的向骨髓浆液中加入碱性蛋白酶，待骨髓浆液的PH值处于8-10时，停止碱性蛋白酶的加入，进而获得可实现蛋白质浸提的骨髓蛋白质浸提液；
S4：将步骤S3获得的骨髓蛋白质浸提液处在46-52摄氏度下进行浸提，浸提时间为40-60分钟，此时骨髓蛋白质浸提液中的蛋白质被浸出；
S5：调节蛋白质被浸出的骨髓蛋白质浸提液呈酸性，此时骨髓蛋白质浸提液中浸出的蛋白质实现沉淀析出；
S6：使用离心设备对步骤S5中沉淀析出蛋白质后的骨髓蛋白质浸提液进行10000-12000r/min的离心，在持续5-7分钟的离心后获得离心液，此时使用透析膜对离心液进行透析，即得到盐蛋白；
S7：对步骤S6获得的盐蛋白在50-60摄氏度下进行无菌式烘干，待盐蛋白烘干至恒重后，即获得骨髓蛋白质。
2.根据权利要求1所述的一种提取骨髓中蛋白质的方法，其特征在于，在步骤S1中骨髓组织内细胞的灭杀时间持续8-12小时，且在冷冻灭杀的过程中，骨髓组织处于真空状态。
3.根据权利要求1所述的一种提取骨髓中蛋白质的方法，其特征在于，在步骤S2开始进行的过程中，先将冷冻灭杀后的骨髓组织内细胞在25摄氏度的环境下放置60-120分钟。
4.根据权利要求1所述的一种提取骨髓中蛋白质的方法，其特征在于，在步骤S2中，盐溶液为氯化钠溶液，且氯化钠溶液的浓度为2.1％-2.3％，且氯化钠溶液与骨髓浆液的体积比为10ml：2ml。
5.根据权利要求1所述的一种提取骨髓中蛋白质的方法，其特征在于，在步骤S5中，呈酸性的骨髓蛋白质浸提液的PH值为4-5，且在步骤S5进行的过程中，温度为26-30摄氏度，沉淀时间为50-70分钟。
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