CN111253434B - 一种二棕榈酰磷脂酸的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种人工合成磷脂二棕榈酰磷脂酸(DPPA)的方法，该方法以1,2‑二棕榈酰‑sn‑甘油为原料，发生酯化反应，然后再发生水解反应，所得产物经过溶解、过滤、重结晶得到高纯度的二棕榈酰磷脂酸。本发明所述方法制备得到的二棕榈酰磷脂酸(DPPA)可作为药用辅料用于脂质体、乳化剂、胶囊等各类型药物。

Description

一种二棕榈酰磷脂酸的制备方法
技术领域
本发明属于医药化工领域，特别涉及合成磷脂二棕榈酰磷脂酸的制备方法和应用。
背景技术
二棕榈酰磷脂酸，化学名1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸钠盐，英文缩写DPPA，CAS号为169051-60-9，是一种重要的人工合成磷脂，主要应用于抗肿瘤药物脂质体、乳化剂、胶囊等的制备，人工合成的二棕榈酰磷脂酸纯度高，稳定性好，抗氧化能力强，制备脂质体效果非常理想。
现有技术中常见的制备二棕榈酰磷脂酸的方法有多种，其中有天然物提取，萃取后纯度相对较高，但收率较低，萃取剂通常为乙腈、乙醇等，选择性低，物料浪费严重。化学合成方法有以甘油磷酸酯与棕榈酰氯反应，该方法所得产物为非钠盐磷脂酸，且会有大量棕榈酸杂质残留，纯化过程较繁琐，收率较低。
发明内容
本发明克服了现有技术下二棕榈酰磷脂酸的制备方法条件苛刻，后处理程序繁琐，收率较低，生产成本高等缺点，提供了一种二棕榈酰磷脂酸的纯化及制备方法，本发明以1,2-二棕榈酰-sn-甘油为原料，发生酯化反应，然后再发生水解反应，所得产物经过溶解、过滤、重结晶得到高纯度的二棕榈酰磷脂酸，原料廉价、反应条件温和，操作安全，后处理简单，收率高，适合工业化生产。
为了实现上述目的，本发明所提供的主要技术方案如下：
一种二棕榈酰磷脂酸的纯化方法，其特征在于将二棕榈酰磷脂酸粗品使用溶剂1和溶剂2的混合溶剂加热溶解，趁热滤去不溶物，滤液低温下析出固体，过滤干燥得二棕榈酰磷脂酸，溶剂1和溶剂2选自甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、甲基叔丁基醚中的任意两种。
优选的，所述溶剂1为甲醇，溶剂2为三氯甲烷。优选甲醇与三氯甲烷的体积比为1：4-7，更优选为1：6。
优选的，使用溶剂1和溶剂2混合溶剂加热溶解温度为20-60℃，优选40℃。
优选的，析晶温度为-5—5℃，优选0℃。
本发明另一目的在于提供一种二棕榈酰磷脂酸的制备方法，包括如下步骤：
(1)以1,2-二棕榈酰-sn-甘油(式1化合物)为原料，酯化反应得到二氯化磷酸二棕榈酸酯(式2化合物)，再经过水解反应得到二棕榈酰磷脂酸(式3化合物)。
Figure BDA0002407427910000021
(2)采用本发明所述的纯化方法纯化步骤(1)得到的粗品。
优选的，步骤(1)所用酯化反应试剂选自磷酸、三氯氧磷、二氯化磷酸乙酯、四氯三氧化二磷、二甲基氯氧化磷中的一种或几种，优选三氯氧磷。
优选的，步骤(1)酯化反应溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、二氧六环、乙酸乙酯或N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种，优选为四氢呋喃。
优选的，步骤(1)水解反应为碱水解，碱选自碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、甲醇钠、氢化钠中的一种或几种，优选碳酸钠。
本发明一个优选的方案，步骤(1)的反应溶剂选自四氢呋喃，所述酯化反应试剂选自三氯氧磷，所述碱选自碳酸钠。
本发明的一个优选方案包括如下步骤：向三口反应瓶中加入1,2-二棕榈酰-sn-甘油，四氢呋喃，三乙胺。磁力搅拌，将三氯氧磷滴加入反应体系。反应结束后，滴加碳酸钠水溶液，搅拌水解12h，体系中析出大量固体，过滤烘干得粗品，粗品用甲醇和三氯甲烷(1：6，V/V)混合溶液加热溶解，趁热过滤不溶物，降温析晶，过滤干燥得二棕榈酰磷脂酸。
本发明另一目的在于提供采用被发明所述的方法制备而得的二棕榈酰磷脂酸，其纯度≥99.0％。
本发明所得到的的合成磷脂二棕榈酰磷脂酸可用于制备脂质体或药用辅料。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1.本发明提纯二棕榈酰磷脂酸的工艺纯化效率高、可控性好、可操作性强、成本大大降低，克服了现有技术收率低，成本高的缺点，易于大规模工业化生产，具有很高的经济效益，收率可达85％以上，纯度≥99％。
2.本发明直接将1,2-二棕榈酰-sn-甘油经过酯化和水解两步反应，反应得到二棕榈酰磷脂酸，原料廉价，反应条件温和，操作安全。
3.本发明中所得的产品质量稳定，经过除菌及真空干燥，满足乳化剂等药用辅料标准。
附图说明
图1为实施例1所得产品HPLC谱图。
图2为实施例1所得产品MS谱图。
图3为实施例1所得产品1H-NMR谱图。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1
(1)向干净干燥的3000ml三口瓶中加入100g1,2-二棕榈酰-sn-甘油，1000mL四氢呋喃，36g三乙胺。磁力搅拌均匀。15-20℃下将50g三氯氧磷滴加至反应体系。保温反应2h。TLC检测原料反应完全，停止反应。
(2)向反应液中滴加1200ml饱和碳酸钠水溶液，搅拌水解12小时，有大量固体产生，过滤，滤饼真空干燥24小时，得二棕榈酰磷脂酸粗品。
(3)将二棕榈酰磷脂酸粗品溶解于2300ml甲醇和三氯甲烷混合溶液中(甲醇：三氯甲烷＝1:6)，加热至40℃，搅拌溶解1小时，趁热过滤，滤液缓慢降温至0℃析晶12小时，过滤，滤饼室温下真空干燥24小时，得二棕榈酰磷脂酸，进行HPLC检测含量≥99％，无溶剂残留，色谱图如图1所示，本发明制得的二棕榈酰磷脂酸，保留时间为13.741min，HPLC含量为100％。产物所测MS谱图如图2所示(上图为ES-，下图为ES+)，1H-NMR谱图如图3所示。
色谱条件：用硅胶为填充剂(色谱柱250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(85:15:0.35:0.05，V/V/V)为流动相A，以正己烷-异丙醇-流动相A(20:45:30，V/V/V)为流动相B；柱温40℃；按表1进行梯度洗脱；检测器为蒸发光散射检测器。
表1
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 10 90
20 30 70
35 95 5
36 10 90
40 10 90
实施例2
参照实施例1的方法，步骤(1)选择不同酯化反应溶剂，其他条件不变，考察不同酯化反应溶剂对收率的影响。结果如表2所示。
表2
Figure BDA0002407427910000031
Figure BDA0002407427910000041
实施例3
参照实施例1的方法，步骤(1)选择不同酯化试剂，其他条件不变，考察不同酯化反应溶剂对收率的影响。结果如表3所示。
表3
酯化试剂 收率(％)
磷酸 63.58
三氯氧磷 87.33
二氯化磷酸乙酯 6.38
四氯三氧化二磷 12.22
二甲基氯氧化磷 9.33
实施例4
参照实施例1的方法，步骤(1)选择不同水解反应所用碱，其他条件不变，考察不同碱对收率的影响。结果如表4所示。
表4
碱 收率(％)
饱和碳酸氢钠水溶液 56.79
饱和碳酸钠水溶液 87.33
5％氢氧化钠水溶液 46.29
甲醇钠固体 22.35
氢化钠固体 12.86
确定步骤(1)的最优方案为：反应溶剂选自四氢呋喃，酯化试剂选自三氯氧磷，水解所用碱选自碳酸钠。
实施例5
在确定步骤(1)最优方案之后，考察步骤(2)不同析晶溶剂对收率和含量的的影响，溶剂1与溶剂2的体积比为1：6。结果如表5所示。
表5
溶剂1 溶剂2 收率(％) 含量(％)
甲醇 二氯甲烷 89.22 96.6
甲醇 三氯甲烷 87.33 100.0
甲醇 丙酮 75.65 88.6
甲醇 甲基叔丁基醚 68.96 92.3
甲醇 四氢呋喃 77.35 93.6
乙醇 二氯甲烷 89.36 98.2
乙醇 三氯甲烷 88.36 98.8
乙醇 丙酮 82.96 92.1
乙醇 甲基叔丁基醚 84.64 88.6
乙醇 四氢呋喃 78.92 90.1
确定步骤(2)的最优方案为：溶剂1为甲醇，溶剂2为三氯甲烷。
在确定了步骤(2)的优选溶剂后，考察了甲醇和三氯甲烷的不同体积比对收率和含量的影响。结果如表6所示。
表6
甲醇与三氯甲烷体积比 收率(％) 含量(％)
1:4 68.36 100.0
1:5 80.33 99.8
1:6 87.33 100.0
1:7 89.68 95.3
确定步骤(2)的最优方案为：甲醇：三氯甲烷＝1:6。

Claims (4)

1.一种二棕榈酰磷脂酸的纯化方法，其特征在于将二棕榈酰磷脂酸粗品使用甲醇和三氯甲烷加热溶解，趁热滤去不溶物，滤液低温下析出固体，过滤干燥得二棕榈酰磷脂酸
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，甲醇与三氯甲烷的体积比为1:5-6。
2.根据权利要求 1 所述的方法，其特征在于加热溶解温度为20-60℃，滤液在-5-5℃析出固体。
3.一种二棕榈酰磷脂酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）以 1,2-二棕榈酰-sn-甘油为原料，发生酯化反应，再进行水解，得到二棕榈酰磷脂酸，酯化反应试剂选自磷酸和/或三氯氧磷，酯化反应溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃中的一种或几种，水解反应使用碱为碳酸钠；
（2）采用如权利要求 1或2所述的纯化方法纯化步骤（1）得到的粗品。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤（1）的酯化反应溶剂选自四氢呋喃，酯化试剂选自三氯氧磷。
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