CN111238904A - 一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及病理检测领域。目的在于提供一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为0.8~1.2:1.2~0.8的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14;所述乙溶液由盐酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14。本发明脱钙速度快、脱钙效果好,利于后期染色的正常进行,能够有效的防止脱钙的过程中出现抗原丢失的情况,免疫组化染色阳性部位定位精准,表达良好。
Description
技术领域
本发明涉及病理检测领域,具体涉及一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液及其使用方法。
背景技术
骨髓活检是病理检查重要的组成部分之一,其诊断报告是血液科等临床科室疾病诊疗的重要依据。骨组织在骨髓活检组织中非常的常见,由于骨组织质地坚硬,如不能有效去除其中的钙质,病理技术室很难制作出优质切片或直接无法制作切片,故组织标本脱钙处理,亦即是组织标本的软化处理即成为此类切片制作的关键。如何在较短时间内进行标本固定、脱钙处理,同时制成的切片又能与常规处理的不含骨组织切片一样,不影响切片的染色,还能保证组织抗原不丢失,免疫组化染色效果好,从而有助于病理医师对病变组织的镜下诊断,一直是本领域的重大难题。目前,常用的硝酸类脱钙液在对活检组织进行脱钙处理时,存在以下几个问题:1、脱钙的时间长,降低了检测的效率;2、脱钙效果差,制得切片的成功率较低;3、脱钙液造成抗原丢失,影响检测的准确性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,脱钙速度快、脱钙效果好,且保持了活检组织的完整性。
为实现上述发明目的,本发明所采用的技术方案是:一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为0.8~1.2:1.2~0.8的甲溶液和乙溶液;
所述甲溶液由甲酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14;
所述乙溶液由盐酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14。
优选的,所述甲溶液中甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
优选的,所述乙溶液中盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
优选的,所述脱钙液还包括渗透剂,所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1~2:100。
优选的,所述脱钙液还包括渗透剂,所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
优选的,所述渗透剂为15%体积百分比的氮酮-甲醛溶液。
优选的,所述脱钙液的使用方法如下:
A、将骨髓穿刺标本放入洁净的玻璃西林瓶内,然后向西林瓶内加入固定液固定处理240±30min,固定液加入量以完全淹没标本为准;
B、固定完成后将固定液倒出,然后加入脱钙液脱钙处理120±60min,脱钙液的加入量以完全淹没标本为准;
C、脱钙完成后将标本取出,用蒸馏水冲洗3-5遍。
优选的,所述固定液为8~12%体积百分比的中性甲醛溶液。
本发明的有益效果集中体现在:
1、脱钙速度快,与传统硝酸类脱钙液相比,脱钙时间缩短一半以上。
2、脱钙效果好,便于制片,经本脱钙液处理的标本切片完整率达到95%以上。
3、利于后期染色的正常进行,染色清晰率达到97%以上。
4、能够有效的防止脱钙的过程中出现抗原丢失的情况,免疫组化染色阳性部位定位精准,表达良好。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明进行完整的阐述。
实施例1
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为0.8:1.2的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16;所述乙溶液由盐酸与8%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16。
实施例2
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1.2:0.8的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与8%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14。
实施例3
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与12%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14;所述乙溶液由盐酸与12%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为8:14。
实施例4
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6:16。
实施例5
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
实施例6
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂,所述渗透剂为15%体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为2:100。
实施例7
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂,所述渗透剂为15%体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
实施例8
一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,包括体积比为1:1的甲溶液和乙溶液;所述甲溶液由甲酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15;所述乙溶液由盐酸与10%体积百分比浓度的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。还包括渗透剂,所述渗透剂为15%体积百分比的氮酮-甲醛溶液(将氮酮溶解在甲醛中)。所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1:100。
实施例9
标本选择:
选择骨髓穿刺标本(长1cm,直径0.3-0.5cm)共815例,分为9组,1组90例、2组90例、3组90例、4组91例、5组91例、6组91例、7组91例、8组91例、9组90例;1-8组为实验组,9组为对照组。
脱钙处理:
A、将骨髓穿刺标本放入10ml洁净的玻璃西林瓶内,然后向西林瓶内加入固定液固定处理240±30min,所述固定液为8~12%体积百分比的中性甲醛溶液(甲醛溶解在蒸馏水中),其中以10%浓度的中性甲醛溶液为佳,固定液加入量以完全淹没标本为准;
B、固定完成后将固定液倒出,加入脱钙液在室温下进行脱钙处理;脱钙完成时间以大头针刺入组织无阻力感为准。
实验组:分别向1-8组中加入实施例1-7所述的脱钙液进行脱钙处理,脱钙液的加入量以完全淹没标本为准;
对照组:加入5%体积百分比的硝酸水溶液脱钙处理,脱钙液的加入量以完全淹没标本为准;
C、脱钙完成后将标本取出,用蒸馏水冲洗3-5遍。
切片
将标本进行常规脱水、石蜡包埋、连续切片3张,厚μm。切片质量评价标准:切片外观完整,厚薄均匀,镜下组织结构完整,无刀痕,可判定为质量良好;达不到以上标准则视为质量欠佳。切片完整率=切片质量良好的切片数量/切片总数
染色
将切片进行HE染色,HE染色效果判断标准为细胞核质清晰,细胞浆颜色鲜亮,对比明显,可判定为效果良好,达不到以上标准则视为效果欠佳。HE染色清晰率=染色良好的切片数量/切片总数。
疑似肿瘤病例加做免疫组织化学染色(MPO、CD3、CD20等),免疫组织化学染色采用迈新MaxVisionTM试剂盒,枸橼酸或EDTA修复,DAB显色,苏木精复染细胞核,中性树胶封固,光镜观察。所有染色均用已知阳性片做阳性对照,PBS代替一抗做阴性对照。免疫组化标记评价标准为阳性部位定位准确,表达良好,呈棕褐色,与阳性对照表达一致,可判定为良好;阳性部位定位不准确,部分抗原丢失,判定为欠佳。免疫组化标记良好率=免疫组化标记良好的切片数量/切片总数。
镜下观察
完成上述步骤后,将所有切片在光镜下观察。由4位病理医师共同对实验组1-8及对照组9使用的脱钙液进行满意度评价,满意度效果由4位病理医师一致满意为满意,1位或以上病理医师不满意则为不满意。
表1为实施例9中各数据的汇总表
根据上表,能够直观的看出,本发明所述的脱钙液,从脱钙时间上相较传统的硝酸类脱钙液具有巨大的缩短,几近缩短了一般的脱钙用时,尤其是在加入渗透剂后,脱钙速度更是得到大幅的提升。制片的总体效果优良,HE染色和免疫组化标记情况表现良好稳定,获得了病理医师的广泛认可。
Claims (8)
1.一种利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:包括体积比为0.8~1.2:1.2~0.8的甲溶液和乙溶液;
所述甲溶液由甲酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛溶液混合构成,所述甲酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14;
所述乙溶液由盐酸与体积百分比浓度为8%~12%的中性甲醛混合构成,所述盐酸与中性甲醛溶液的体积比为6~8:16~14。
2.根据权利要求1所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:所述甲溶液中甲酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
3.根据权利要求1或2所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:所述乙溶液中盐酸与中性甲醛溶液的体积比为7:15。
4.根据权利要求1所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:所述脱钙液还包括渗透剂,所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1~2:100。
5.根据权利要求1或4所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:所述脱钙液还包括渗透剂,所述渗透剂:甲溶液和乙溶液的混合液的体积比为1.5:100。
6.根据权利要求5所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液,其特征在于:所述渗透剂为15%体积百分比的氮酮-甲醛溶液。
7.如权利要求1~6中任意一项所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、将骨髓穿刺标本放入洁净的玻璃西林瓶内,然后向西林瓶内加入固定液固定处理240min±30min,固定液加入量以完全淹没标本为准;
B、固定完成后将固定液倒出,然后加入脱钙液脱钙处理120±60min,脱钙液的加入量以完全淹没标本为准;
C、脱钙完成后将标本取出,用蒸馏水冲洗3-5遍。
8.根据权利要求7所述的利于免疫组化显色的骨髓脱钙液的使用方法,其特征在于:所述固定液为8~12%体积百分比的中性甲醛溶液。
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PB01 | Publication | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
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