CN114839027A - 一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
为解决现有的骨髓脱钙液在对骨髓组织进行脱钙时浸泡的时间长导致骨髓组织成分被破坏的技术问题，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途，骨髓脱钙组合物由如下质量分数的组分组成：HCl5.0％‑8％；甲酸13％‑15％；醋酸4.0‑4.5％；余量为中性缓冲甲醛液。制备方法包括：将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到骨髓脱钙组合物；本发明实施例缩短了骨髓组织的浸泡时间；提高了脱钙效率；避免了现有的骨髓脱钙液对骨髓组织脱钙后HE染色时细胞核发红、免疫组化抗原丢失严重、DNA浓度低等问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途。
背景技术
骨组织标本是病理科常见标本之一，骨组织与其他组织相比最大的特点是细胞基质中有大量的钙盐沉积，从而使骨组织成为很坚硬的组织。
骨髓穿刺标本作为骨组织中的一种，含有少量的骨质成分，需要进行脱钙后才能进行下一步的组织病理制片。但是临床常用的酸类骨髓脱钙液在对骨髓组织脱钙时，需要浸泡6-8小时才能完成对骨髓组织的脱钙，然而，长时间的浸泡会对骨髓组织成分产生破坏，容易出现HE染色细胞核发红，免疫组化抗原破坏，分子检测DNA浓度低、达不到最低检测下限等现象。
发明内容
为解决现有的骨髓脱钙液在对骨髓组织进行脱钙时浸泡的时间长导致骨髓组织成分被破坏的技术问题，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途。
本发明实施例通过下述技术方案实现：
第一方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：
HCl 5.0％-8％；
甲酸 13％-15％；
醋酸 4.0-4.5％；
余量为中性缓冲甲醛液。
进一步的，所述骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：
HCl 6.0％-6.4％；
甲酸 14.6％-14.8％；
醋酸 4.0-4.3％；
余量为中性缓冲甲醛液。
进一步的，所述组合物中醋酸的质量分数为4.2％。
第二方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到所述的骨髓脱钙组合物。
第三方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：
质量分数为36-38％的盐酸：13-15mL；
质量分数为88％的甲酸：13-15mL；
质量分数为99.5％的醋酸：3-5mL；
余量为中性缓冲甲醛液。
进一步的，每100mL的骨髓脱钙组合物中含有体积为14mL的盐酸；体积为14mL的甲酸；体积为4mL的醋酸以及体积为68mL的中性缓冲甲醛液。
第四方面，本发明实施例的一种骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
进一步的，所述盐酸的质量分数为36-38％；甲酸的质量分数为88％，醋酸的质量分数为99.5％。
第五方面，本发明实施例提供一种所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途。
进一步的，所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途，所述骨髓组织于所述骨髓脱钙组合物中浸泡时间为30-60分钟。
本发明实施例与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
本发明实施例的一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途，通过HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液制成骨髓脱钙组合物，缩短了骨髓组织的浸泡时间；与现有技术所需的6-8小时的浸泡时间相比，本发明实施例仅需30-60分钟即可完成骨髓组织的脱钙，提高了脱钙效率；另外发明人发现，本发明实施例中的醋酸对细胞核能起到一定保护作用，避免了现有的骨髓脱钙液对骨髓组织脱钙后HE染色时细胞核发红、DNA浓度低等问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明示例性实施方式的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为现有的骨髓脱钙液对抗体CD3脱钙后染色情况示意图。
图2为实施例6的骨髓脱钙组合物对抗体CD3脱钙后染色情况示意图。
图3为现有的骨髓脱钙液对抗体KI-67脱钙后染色情况示意图。
图4为实施例6的骨髓脱钙组合物对抗体KI-67脱钙后染色情况示意图。
图5为现有的骨髓脱钙液对抗体MPO脱钙后染色情况示意图。
图6为实施例6的骨髓脱钙组合物对抗体MPO脱钙后染色情况示意图。
图7为现有的骨髓脱钙液对抗体CD20脱钙后染色情况示意图。
图8为实施例6的骨髓脱钙组合物对抗体CD20脱钙后染色情况示意图。
图9为现有的骨髓脱钙液对骨髓组织脱钙后HE染色情况示意图。
图10为实施例6的骨髓脱钙液对骨髓组织脱钙后HE染色情况示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
在以下描述中，为了提供对本发明的透彻理解阐述了大量特定细节。然而，对于本领域普通技术人员显而易见的是：不必采用这些特定细节来实行本发明。在其他实施例中，为了避免混淆本发明，未具体描述公知的结构、电路、材料或方法。
在整个说明书中，对“一个实施例”、“实施例”、“一个示例”或“示例”的提及意味着：结合该实施例或示例描述的特定特征、结构或特性被包含在本发明至少一个实施例中。因此，在整个说明书的各个地方出现的短语“一个实施例”、“实施例”、“一个示例”或“示例”不一定都指同一实施例或示例。此外，可以以任何适当的组合和、或子组合将特定的特征、结构或特性组合在一个或多个实施例或示例中。此外，本领域普通技术人员应当理解，在此提供的示图都是为了说明的目的，并且示图不一定是按比例绘制的。这里使用的术语“和/或”包括一个或多个相关列出的项目的任何和所有组合。
在本发明的描述中，术语“前”、“后”、“左”、“右”、“上”、“下”、“竖直”、“水平”、“高”、“低”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。
实施例
为解决现有的骨髓脱钙液在对骨髓组织进行脱钙时浸泡的时间长导致骨髓组织成分被破坏的技术问题，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途。第一方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：HCl5.0％-8％；甲酸13％-15％；醋酸4.0-4.5％；余量为中性缓冲甲醛液。
其中，HCl、甲酸和醋酸均以纯物质进行配制骨髓脱钙组合物；中性缓冲甲醛液为现有技术。可选地，中性缓冲甲醛液可采用：质量分数为40％的甲醛溶液10mL与0.01mol/L、pH为7.4的PBS90mL混合得到。中性缓冲甲醛液也可采用现有的其它组成和配制方式得到。
现有的骨髓脱钙液存在有多种不同的配方。发明人之前使用的脱钙液分两步配置：
1.配制固定液：生理盐水(或蒸馏水)：40％质量分数的甲醛＝4:1；
2.取第一步配置好的固定液800mL、36-38％质量分数的盐酸80mL、质量分数为88％的甲酸70mL、氯化铝30-40g、冰醋酸5mL混合配置成脱钙液。
采用该脱钙液对骨髓组织脱钙需要6-8小时，才能完成，且存在破坏骨髓组织的情况。
为了缩短骨髓组织的脱钙时间，提高脱钙效率，并减少骨髓组织被破坏的情况，发明人经过研究发现，盐酸和甲酸的组合，可以提高骨髓脱钙的速率(30-60分钟即可脱钙完成)，同时对骨髓组织的破坏性较弱；发明人发现醋酸具有穿透能力强，沉淀核蛋白的作用，提升脱钙液中醋酸的含量，能较好地保存染色体结构，能加速脱钙效果。同时采用中性缓冲甲醛溶液作为稀释液，对骨髓组织成分起到一定的保护作用。
从而，本发明实施例的骨髓脱钙组合物通过HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液制成骨髓脱钙组合物，缩短了骨髓组织的浸泡时间；与现有技术所需的6-8小时的浸泡时间相比，本发明实施例仅需30-60分钟即可完成骨髓组织的脱钙，提高了脱钙效率。
可选地，所述骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：HCl 6.0％-6.4％；甲酸14.6％-14.8％；醋酸4.0-4.3％；余量为中性缓冲甲醛液。
发明人发现，当HCl的质量分数为6.0％-6.4％；甲酸质量分数为14.6％-14.8％；醋酸质量分数为4.0-4.3％时，在这个浓度下脱钙速度较快，同时对组织的破坏性相对较弱，醋酸具有穿透能力强，沉淀核蛋白，能较好地保存染色体结构，同时提升脱钙液中醋酸的含量，能加速脱钙效果。
进一步的，所述组合物中醋酸的质量分数为4.2％。
第二方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到所述的骨髓脱钙组合物。
为了便于配制骨髓脱钙液，在上述实施例的基础上，本发明实施例提供以下的脱钙组合物。
第三方面，本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：质量分数为36-38％的盐酸：13-15mL；质量分数为88％的甲酸：13-15mL；质量分数为99.5％的醋酸：3-5mL；余量为中性缓冲甲醛液。
本发明实施例采用市售试剂进行配制得到上述实施例的类似的骨髓脱钙组合物。
进一步的，每100mL的骨髓脱钙组合物中含有体积为14mL的盐酸；体积为14mL的甲酸；体积为4mL的醋酸以及体积为68mL的中性缓冲甲醛液。
醋酸的体积用量提高至4mL,明显加速脱钙液的脱钙速度，同时醋酸能对细胞核起到一定保护作用，解决了先前脱钙后HE染色时细胞核发红，免疫组化抗原丢失严重，DNA浓度低的问题。
发明人采用本发明实施例的方式进行实验，发现当甲酸和盐酸均取14mL时，在这个浓度下所述骨髓脱钙组合物的脱钙速度较快，同时对组织的破坏性相对较弱，同时采用4mL的醋酸能较好地保存染色体结构，能加速脱钙效果。另外，采用中性缓冲甲醛溶液作为稀释液，对骨髓组织成分起到一定的保护作用。
第四方面，本发明实施例的一种骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
进一步的，所述盐酸的质量分数为36-38％；甲酸的质量分数为88％，醋酸的质量分数为99.5％。
第五方面，本发明实施例提供一种所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途。
进一步的，所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途，所述骨髓组织于所述骨髓脱钙组合物中浸泡时间为30-60分钟。
实施例1
一种骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：HCl5.0％；甲酸13％；醋酸4.0％；余量为中性缓冲甲醛液。骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到所述的骨髓脱钙组合物。
实施例2
骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：HCl6.4％；甲酸14.8％；醋酸4.3％；余量为中性缓冲甲醛液。骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到所述的骨髓脱钙组合物。
实施例3
骨髓脱钙组合物，由如下质量分数的组分组成：HCl6.2％；甲酸14.7％；醋酸4.2％；余量为中性缓冲甲醛液。骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到所述的骨髓脱钙组合物。
实施例4
一种骨髓脱钙组合物，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：质量分数为36-38％的盐酸：13mL；质量分数为88％的甲酸：13mL；质量分数为99.5％的醋酸：3mL；余量为中性缓冲甲醛液。骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
实施例5
一种骨髓脱钙组合物，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：质量分数为36-38％的盐酸：15mL；质量分数为88％的甲酸：15mL；质量分数为99.5％的醋酸：5mL；余量为中性缓冲甲醛液。骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
实施例6
本发明实施例提供一种骨髓脱钙组合物，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：质量分数为36-38％的盐酸：14mL；质量分数为88％的甲酸：14mL；质量分数为99.5％的醋酸：4mL；余量为中性缓冲甲醛液。
骨髓脱钙组合物的制备方法，包括：将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
实验例
选用现有技术的骨髓脱钙液和选用上述实施例6的骨髓脱钙组合物进行染色对比实验。现有技术的骨髓脱钙液采用发明人之前使用的脱钙液，分两步配置：1.配制固定液：生理盐水(或蒸馏水)：40％质量分数的甲醛＝4:1；2.取第一步配置好的固定液800mL、36-38％质量分数的盐酸80mL、质量分数为88％的甲酸70mL、氯化铝30-40g、冰醋酸5mL混合配置成脱钙液。
对比实验中均选用骨髓长度为0.8-1.5cm，骨质含量相差不大的组织，脱钙时间为30-60分钟。
具体实验结果参考图1-10所示。
参考图1和2可知，图1抗原丢失严重，抗原弥散组织间呈淡棕色背景着色，复染苏木素着色非常浅呈淡蓝色，图2中背景清晰，阳性部位定位准确呈深棕色，细胞核复染苏木素呈蓝色与阳性部位深棕色对比明显。
参考图3和4可知，图3中抗原丢失严重，抗原外溢造成非特异性背景着色，定位不清晰；图4中抗原保存较好，定位清晰，呈深棕色定位于细胞核；图5中抗原丢失较多，背景着色重呈浅棕色，使细胞质阳性部位与周围组织对比不清晰；图6中，抗原丢失少，阳性部位定位清晰准确，复染苏木素与阳性部位对比明显；图7中，抗原丢失严重，免疫组化染色阳性颗粒弥散组织间，细胞膜显示不清，复染苏木素后，细胞核着色较浅呈淡蓝色；图8中，抗原保存较好，免疫组化染色CD20阳性细胞膜清晰显示棕褐色，细胞核复染苏木素成蓝色；
图9中，细胞显示不清，胞核胞浆对比不清晰(红蓝对比)细胞核染色质看不清；图10中，切片显示清晰，细胞浆、细胞核对比清晰。细胞核染色质清晰可见。
从而，参考图1-10可知，采用实施例6的骨髓脱钙组合物脱钙后染色的抗体图像背景清晰，定位准确，抗体丢失少。
采用本发明实施例的骨髓脱钙液脱钙时间可缩短至30-60分钟，大大提高了骨髓组织的处理效率，减少骨髓组织在脱钙液中的浸泡时间，从而缩短脱钙液对骨髓组织成分的破坏，同时未发现组织膨胀的缺点。
2)骨髓组织脱钙后在HE染色中骨小梁结构完整，无松散，细胞核着色清晰无红染，呈深蓝色，高倍镜下可见染色质等细微结构，细胞质着浅红色，核质对比鲜明，红细胞着深红色。免疫组化中阳性率升高无抗原丢失现象。
染色后的骨髓组织中DNA提取浓度约为30ng/uL左右，超过分子检测试剂盒的最低检测下限，OD值为1.98,可满足分子试剂盒检测需求。
从而，本发明实施例通过HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液制成骨髓脱钙组合物，缩短了骨髓组织的浸泡时间；与现有技术所需的6-8小时的浸泡时间相比，本发明实施例仅需30-60分钟即可完成骨髓组织的脱钙，提高了脱钙效率；另外发明人发现，本发明实施例中的醋酸对细胞核能起到一定保护作用，避免了现有的骨髓脱钙液对骨髓组织脱钙后HE染色时细胞核发红、免疫组化抗原丢失严重，DNA浓度低等问题。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种骨髓脱钙组合物，其特征在于，由如下质量分数的组分组成：
HCl 5.0％-8％；
甲酸 13％-15％；
醋酸 4.0-4.5％；
余量为中性缓冲甲醛液。
2.如权利要求1所述骨髓脱钙组合物，其特征在于，由如下质量分数的组分组成：
HCl 6.0％-6.4％；
甲酸 14.6％-14.8％；
醋酸 4.0-4.3％；
余量为中性缓冲甲醛液。
3.如权利要求2所述骨髓脱钙组合物，其特征在于，所述组合物中醋酸的质量分数为4.2％。
4.一种骨髓脱钙组合物的制备方法，其特征在于，包括：
将纯组分的HCl、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液中混匀，得到权利要求1或2所述的骨髓脱钙组合物。
5.一种骨髓脱钙组合物，其特征在于，所述组合物为液体；每100mL组合物由如下体积的原料组成：
质量分数为36-38％的盐酸：13-15mL；
质量分数为88％的甲酸：13-15mL；
质量分数为99.5％的醋酸：3-5mL；
余量为中性缓冲甲醛液。
6.如权利要求5所述骨髓脱钙组合物，其特征在于，每100mL的骨髓脱钙组合物中含有体积为14mL的盐酸；体积为14mL的甲酸；体积为4mL的醋酸以及体积为68mL的中性缓冲甲醛液。
7.一种骨髓脱钙组合物的制备方法，其特征在于，包括：
将盐酸、甲酸、醋酸和中性缓冲甲醛液混匀，得到所述骨髓脱钙组合物。
8.如权利要求7所述骨髓脱钙组合物的制备方法，其特征在于，所述盐酸的质量分数为36-38％；甲酸的质量分数为88％，醋酸的质量分数为99.5％。
9.一种权利要求1-3任意一项或权利要求5-6任意一项所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途。
10.如权利要求9所述骨髓脱钙组合物用于骨髓组织脱钙的用途，其特征在于，所述骨髓组织于所述骨髓脱钙组合物中浸泡时间为30-60分钟。
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| CN202210636188.3A CN114839027A (zh) | 2022-06-07 | 2022-06-07 | 一种骨髓脱钙组合物、制备方法及用途 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115887771A (zh) * | 2022-11-23 | 2023-04-04 | 深圳市光明创博生物制品发展有限公司 | 一种骨修复材料的脱钙方法 |
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2022
- 2022-06-07 CN CN202210636188.3A patent/CN114839027A/zh active Pending
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