CN111227103A - 利用亚临界萃取与酶解制备南极磷虾酶解液的方法 - Google Patents

利用亚临界萃取与酶解制备南极磷虾酶解液的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用亚临界萃取与酶解制备南极磷虾酶解液的方法,以冷冻南极磷虾为原料,主要包括原材料预处理、萃取、萃取产物收集处理和分步连续酶解等步骤。该方法采用亚临界脱脂技术与分步酶解技术相联合,同时实现南极磷虾的脱脂与酶解,得到的南极磷虾酶解液营养价值高、口感较佳,且整个操作过程无毒、无害、无污染,运行成本低,可工业化大规模生产。

Description

利用亚临界萃取与酶解制备南极磷虾酶解液的方法
技术领域
本发明属于食品加工技术领域,涉及活性肽的加工与利用,具体涉及一种采用亚临界萃取技术与多级酶解相结合制备高营养价值的鲜甜味南极磷虾酶解液的方法。
背景技术
南极磷虾生物资源量约为6.5~10.0亿吨,是全球海洋中最大的单种可捕生物资源。因其巨大的生物量和潜在的渔业资源价值,以及在南极生态系统中所占据的特殊地位而日益受到人们的注意。南极磷虾不但资源巨大,而且营养价值高, 具有高蛋白、低脂肪、丰富的矿物质元素及DHA和EPA。同时,也是虾青素、磷脂、壳聚糖等热敏性物质的来源,享有“地球上最大的动物蛋白库”美誉。
由于南极磷虾中富含丰富的营养物质。因此,近年来从南极磷虾中提取油脂成为研究热点。目前常见的提取方法主要有压榨法、浸提法及亚临界萃取法,相较于前两者方法而言,后者处理条件更温和,温度更低,萃取物更加干净无污染,并且不破坏热敏性的营养成分,更易保存原料的蛋白质等营养成分。然而,南极磷虾经过上述提取处理后其加工副产物大多是简单加工成动物或水产饲料,产品的附加值低,未对处理后的南极磷虾进行进一步的深入研究,提高产品的加工效率和产品附加值。另一方面,单酶水解时间及水解程度控制不佳会导致酶解液苦涩味偏重,因此合理的采用酶解技术也是提高南极磷虾附加值的关键问题。
发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷,本发明的目的在于提供一种利用亚临界萃取与多步酶解耦合技术制备氨基酸组成营养价值高且具有鲜甜滋味酶解液的方法。可避免油脂提取过后,造成蛋白质损失等利用价值低的现象。本发明首先采用低温亚临界技术萃取冷冻南极磷虾体内的油脂,在保留其蛋白质等营养价值的同时采用分级酶解技术对脱脂后的水系南极磷虾肉糜进行分步酶解,极大的提高了南极磷虾加工及蛋白酶解的效率,使得大量鲜甜味氨基酸得到释放,可获得较高的多肽得率及水解度且氨基酸组成营养价值高并具有良好鲜甜味的南极磷虾酶解液。相比于传统萃取技术可能造成的有机溶剂残留、萃取不完全的缺陷,本发明提取效率高,无有机溶剂残留,整个加工过程绿色、环保无污染、提高了南极磷虾加工利用率,响应了国家节能减排的环保理念。
为了达到上述技术目的,本发明具体通过以下技术方案实现:
(1)原料的预处理:将冷冻南极磷虾解冻后,采用搅拌机搅拌至糜状,加入0.001~1.0wt%的表面活性剂形成超临界胶束体系,所述的表面活性剂为聚甘油脂肪酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯中的一种或两种混合物;
(2)装料:将经过预处理的南极磷虾装入套好尼龙网筛的支架中,密封安置在萃取设备中的萃取罐中,所用的尼龙网筛为20~200目;
(3)萃取:加入萃取剂后启动萃取装置对南极磷虾进行萃取,单次萃取时间为5~30min,萃取1~5次;单次萃取后加入破乳剂与絮凝剂和0.2wt%丙烷/ 丁烷溶液,进行反萃;萃取温度为30~60℃,萃取时间为30~45min;
(4)脱溶:萃取完成后,脱溶回收萃取剂;
(5)循环:重复步骤(3),循环萃取2~4次;
(6)萃取产物收集处理:蒸发罐中的油水混合萃取产物经过6000~ 12000rpm的高速离心,上层油相为热敏性南极磷虾油,下层为水层;从萃取罐取出脱脂脱水南极磷虾粉沉淀;
(7)分步连续酶解法处理沉淀:将步骤(6)所得水相和沉淀混合得混合液,调节混合液pH值为7.0~8.0,按照总酶活为2000U/g加入风味蛋白酶、菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶中的一种单酶,恒温酶解2~4h,酶解结束后加热至98~ 100℃,沸水浴灭酶10~15min;按照总酶活为2000U/g加入质量比为1:100的胰蛋白酶和胃蛋白酶,恒温酶解2~4h,酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却,离心分离,得到鲜甜味南极磷虾酶解液。
进一步地,步骤(1)中的表面活性剂为聚甘油脂肪酸酯、双乙酰酒石酸单双甘酯混合物,两者质量比为6~7:8,表面活性剂的添加量为南极磷虾质量的 0.005~0.5wt%。
进一步地,步骤(2)中的尼龙网筛优选为60~80目。
进一步地,步骤(3)中的萃取剂是体积比为3:2~9的丙烷与丁烷的混合气;萃取剂添加质量为南极磷虾的10~35倍,循环热水为35~45℃,萃取时间为30~45min,搅拌速度为20~1200rpm。
进一步地,步骤(3)中的破乳剂是质量比为3~5:7的氯化钠与氯化钙组合物,其添加量为南极磷虾质量的0.015~0.5%。
进一步地,步骤(3)中的絮凝剂是质量比为6:10~15:7~10的壳聚糖、单宁酸以及海藻酸钠组合物,絮凝剂添加量为南极磷虾质量的0.005~0.25wt%。
进一步地,所述的步骤(4)中的脱溶时间为30~45min,控制温度为30℃~ 35℃。
进一步地,步骤(5)中的循环次数为1~3。
进一步地,步骤(6)中的离心速度为5000~10000rpm。
进一步地,步骤(7)中的pH值用30%柠檬酸调节。离心条件为8000r/min 下离心10min,过滤得酶解液。所得酶解液于﹣80℃冰箱中静置24h后于﹣40℃下冷冻干燥48h,得南极磷虾蛋白肽。
本发明的有益效果为:
(1)本发明采用低温亚临界萃取技术处理原材料,整个过程都是在低温密闭无氧条件下操作且无需干燥处理,湿法萃取南极磷虾油脂,更好的保留了原材料的热敏性营养物质不易流失,蛋白质等副产物无损失。
(2)本发明采用分步酶解的方法对南极磷虾进行酶解,首先用单酶对南极磷虾蛋白进行水解,使大分子蛋白分解为小分子物质,释放风味物质,加入复配酶对水解液进行再次酶解,使未完全水解的南极磷虾蛋白彻底水解。不同酶在不同作用时间对南极磷虾蛋白水解作用位点不同,因此混合使用可以优化酶解效果,减少苦味肽与疏水性氨基酸的生成,增加可溶性蛋白的含量。
(3)亚临界萃取技术耦合分步酶解法连续降解南极磷虾制备高营养价值的鲜甜味南极磷虾酶解液,整个生产过程,绿色、安全、无污染,符合国家的绿色环保的发展理念。同时,也增加了产品的附加值,变废为宝。
附图说明
图1南极磷虾油萃取装置简图。
图2为亚临界萃取耦合分步酶解技术制备南极磷虾鲜甜味酶解液的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本说明进行进一步描述,但本发明的保护范围不限于此方式。
实施案例1:
本发明中的萃取装置包括萃取部分以及萃取剂脱除部分,其结构如说明书附图中的图1所示。
参考图2所示的,亚临界萃取耦合分步酶解技术制备南极磷虾鲜甜味酶解液的制备方法,所述的方法包括以下步骤。
(1)原料的预处理:将冷冻南极磷虾解冻,使用搅拌机搅拌切碎至糜状,添加南极磷虾质量0.35%的聚甘油脂肪酸酯与双乙酰酒石酸单双甘油酯质量比为4:5的混合表面活性剂。
(2)装料:将经过预处理的南极磷虾装入套好尼龙网筛的支架中,密封安置在萃取设备中的萃取罐中,所用的尼龙网筛为80目。
(3)萃取:启动萃取装置对南极磷虾进行萃取,所用的萃取剂为丁烷与丙烷体积比为2:3的组合物,萃取剂添加质量为磷虾的15倍,循环热水为40℃,萃取时间为40min,搅拌速度1000rpm。单次萃取后加入南极磷虾质量0.4%的破乳剂,所述破乳剂为氯化钠与氯化钙质量比为4:7的组合物,继续在夹带剂罐中添加南极磷虾质量为0.25%的蛋白絮凝剂,所述絮凝剂为壳聚糖、单宁酸与海藻酸钠质量比为6:15:10的组合物,继续向夹带剂罐中加入0.2wt%丙烷溶剂,进行反萃。
(4)脱溶:萃取完成后,水浴加热30℃,加速萃取剂蒸发。
(5)循环萃取:重复上述萃取步骤,循环萃取2次。
(6)萃取产物收集处理:首先对萃取产物油水混合物进行离心:打开蒸发罐中的油水混合萃取产物,将油水混合萃取物经过8000rpm的高速离心后,收集上清液即为热敏性南极磷虾油,下层即为水层。其次,打开萃取罐取出脱脂脱水的南极磷虾粉。分别得到水相、油相和沉淀相;
(7)分步连续酶解法处理沉淀:将上述所得水相和沉淀相,相互混合得混合液,使用30%柠檬酸将pH值调为7,加入风味蛋白酶,总酶活2000U/g,50℃恒温酶解1h;酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,继续加入总酶活2000U/g复合酶,30℃恒温酶解2h;其中,复合酶按照胰蛋白酶与胃蛋白酶质量比为1:50的比例加入。酶解结束后加热至98~ 100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,在8000r/min下离心10min,﹣60℃冰箱冷冻24h后,于﹣40℃下真空冷冻干燥机干燥48h。
实施案例2:
本发明中的萃取装置包括萃取部分以及萃取剂脱除部分,其结构如说明书附图中的图1所示。
参考图2所示亚临界萃取耦合分步酶解技术制备南极磷虾鲜甜味酶解液的制备方法,所述的方法包括以下步骤。
(1)原料的预处理:将冷冻南极磷虾解冻,使用搅拌机搅拌切碎至糜状,添加南极磷虾质量0.5%的聚甘油脂肪酸酯与双乙酰酒石酸单双甘油酯质量比为 7:9的混合表面活性剂。
(2)装料:将经过预处理的南极磷虾装入套好尼龙网筛的支架中,密封安置在萃取设备中的萃取罐中,所用的尼龙网筛为100目。
(3)萃取:启动萃取装置对南极磷虾进行萃取,所用的萃取剂为丙烷与丁烷体积比为3:2的组合物,萃取剂添加质量为磷虾的20倍,循环热水为30℃,萃取时间为50min,搅拌速度500rpm。单次萃取后加入南极磷虾质量0.3%的破乳剂,所述破乳剂为氯化钠与氯化铝质量比为5:6的组合物,继续在夹带剂罐中添加南极磷虾质量0.2%的蛋白絮凝剂,所述絮凝剂为壳聚糖、单宁酸与海藻酸钠质量比为6:10:8的组合物,继续向夹带剂罐中加入0.2wt%丁烷溶剂,进行反萃。
(4)脱溶:萃取完成后,水浴加热45℃,加速萃取剂蒸发。
(5)循环萃取:重复上述萃取步骤,循环萃取1次。
(6)萃取产物收集处理:首先对萃取产物油水混合物进行离心:打开蒸发罐中的油水混合萃取产物,将油水混合萃取物经过6000rpm的高速离心后,收集上清液即为热敏性南极磷虾油,下层即为水层。其次,打开萃取罐取出脱脂脱水南极磷虾粉。分别得到水相、油相和沉淀相三相。
(7)分步连续酶解法处理沉淀:将上述所得水相和沉淀相,相互混合得混合液,使用30%柠檬酸将pH值调为7,加入菠萝蛋白酶,总酶活2000U/g,50℃恒温酶解2h;酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,使用0.05mol/L氢氧化钠调节pH值为8,继续加入总酶活2400U/g复合酶,40℃恒温酶解2.5h;其中,复合酶按照,胰蛋白酶与胃蛋白酶质量比为1: 100的比例加入。酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,在8000r/min下离心10min,﹣60℃冰箱冷冻24h后,于﹣40℃下真空冷冻干燥机干燥48h。
实施例3:
本发明中的萃取装置包括萃取部分以及萃取剂脱除部分,其结构如说明书附图中的图1所示。
参考图2所示的,亚临界萃取耦合分步酶解技术制备南极磷虾鲜甜味酶解液的制备方法,所述的方法包括以下步骤。
(1)原料的预处理:将冷冻南极磷虾解冻,使用搅拌机搅拌切碎至糜状,添加南极磷虾质量0.35%的表面活性剂聚甘油脂肪酸酯。
(2)装料:将经过预处理的南极磷虾装入套好尼龙网筛的支架中,密封安置在萃取设备中的萃取罐中,所用的尼龙网筛为200目。
(3)萃取:启动萃取装置对南极磷虾进行萃取,所用的萃取剂为丁烷与丙烷体积比为3:7的组合物,萃取剂添加质量为磷虾的30倍,循环热水为50℃,萃取时间为30min,搅拌速度800rpm。单次萃取后加入南极磷虾质量0.55%的破乳剂,所述破乳剂为氯化钠、氯化钾以及氯化镁5:9:10的组合物,继续在夹带剂罐中添加南极磷虾质量0.15%的蛋白絮凝剂,所述絮凝剂为壳聚糖、单宁酸质量比为6:15的组合物,继续向夹带剂罐中加入0.2wt%丙烷溶剂,进行反萃。
(4)脱溶:萃取完成后,水浴加热50℃,加速萃取剂蒸发。
(5)循环萃取:重复上述萃取步骤,循环萃取1次。
(6)萃取产物收集处理:首先对萃取产物油水混合物进行离心:打开蒸发罐中的油水混合萃取产物,将油水混合萃取物经过10000rpm的高速离心后,收集上清液即为热敏性南极磷虾油,下层即为水层。其次,打开萃取罐取出脱脂脱水南极磷虾粉。分别得到水相、油相和沉淀相;
(7)分步连续酶解法处理沉淀:将上述所得水相和固体沉淀相,相互混合得混合液,使用30%柠檬酸将pH值调为7,加入木瓜蛋白酶,总酶活2000U/g, 50℃恒温酶解0.5h;酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,使用0.05mol/L氢氧化钠调节pH值为8,继续加入总酶活2800U/g 复合酶,35℃恒温酶解3h;其中,复合酶按照胰蛋白酶与胃蛋白酶质量比为1: 150的比例加入。酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却后,在8000r/min下离心10min,﹣60℃冰箱冷冻24h后,于﹣40℃下真空冷冻干燥机干燥48h。
对比例1:
步骤1、将利用传统有机溶剂浸提法得到的脱脂南极磷虾粉与水按料液比为 1:4混合均匀,用30%柠檬酸溶液,将pH值调为7.0;
步骤2、在脱脂南极磷虾中加入总酶活2800U/g胰蛋白酶,50℃恒温酶解3 小时;
步骤3、酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;
步骤4、待酶解液冷却后,在8000r/min下离心10min,﹣60℃冰箱冷冻24h 后,于﹣40℃下真空冷冻干燥机干燥48h。
对比例2:
对比例2与对比例1的不同之处在于:用浓度为30%柠檬酸溶液调节pH至 3.0,35℃条件下恒温酶解,用胃蛋白酶代替胰蛋白酶。其他均与对比例1相同。
对比例3:
对比例3与对比例1的不同之处在于:用中性蛋白酶代替胰蛋白酶。其他均与对比例1相同。
对比例4:
对比例4与对比例1的不同之处在于:不调节溶液pH,在溶液原始pH8.6 下,用碱性蛋白酶代替胰蛋白酶。其他均与对比例1相同。
将实施例1~3和对比例1~4制得酶解液的进行感官评价、多肽得率、水解度进行检测,结果如表1、表2所示。
感官评价标准,评定小组由10位经感官评价培训的人员组成,对酶解液进行感官评定,评定成员每评定一个样品前用蒸馏水漱口,取待评定样品1~2mL 置于口中,10s后吐出,漱口取参比液品尝,鲜味参比样为谷氨酸钠溶液,其浓度为(0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20mg/mL对应的鲜味评分值为1、 2、3、4、5、6、7、8、9和10)对不同组分进行感官评价。
表1实施例1~3和对比例1~4不同组分酶解液的感官评分表
Figure BDA0002385489920000081
表2实施例1~3和对比例1~4不同组分酶解液的多肽得率及水解度
Figure BDA0002385489920000082
Figure BDA0002385489920000091
综合感官评价、多肽得率、水解度分析结果可得,通过添加外源酶辅助酶解可改善滋味。单一外源酶作用效果虽各有优点,但酶解作用效果有限,各自单独作用效果无法同时达到滋味和酶解效率最优。因此,选用分级酶解进行先单酶酶解后复配酶解,可优化酶解滋味及效果。
采用高效液相色谱(HPLC)对本实施例1~3酶解液进行氨基酸分析,结果如表3、表4、表5所示。
表3实施例1的游离氨基酸组成(mg/100mL)
Figure BDA0002385489920000092
注:苦味氨基酸(◆),鲜味氨基酸(●),甜味氨基酸(▲),必需氨基酸(EAA),非必需氨基酸(EAA),鲜甜味氨基酸(SUAA),总氨基酸(AA)。
表4实施例2的游离氨基酸组成(mg/100mL)
Figure BDA0002385489920000101
注:苦味氨基酸(◆),鲜味基酸(●),甜味氨基酸(▲),必需氨基酸(EAA),非必需氨基酸(EAA),鲜甜味氨基酸(SUAA),总氨基酸(AA)。
表5实施例3的游离氨基酸组成(mg/100mL)
Figure BDA0002385489920000102
Figure BDA0002385489920000111
注:苦味氨基酸(◆),鲜味氨基酸(●),甜味氨基酸(▲),必需氨基酸(EAA),非必需氨基酸(EAA),鲜甜味氨基酸(SUAA),总氨基酸(AA)。
实施例1结果表明,游离氨基酸占总氨基酸91.27%,游离苦味氨基酸占总氨基酸的28.56%,游离鲜甜味氨基酸占总氨基酸24.73%,游离鲜甜味氨基酸占总鲜甜味氨基酸的88.57%。总氨基酸中ΣEAA/ΣAA为61.84%。
实施例2结果表明,游离氨基酸占总氨基酸90.96%,游离苦味氨基酸占总氨基酸的27.63%,游离鲜甜味氨基酸占总氨基酸25.11%,游离鲜甜味氨基酸占总鲜甜味氨基酸的91.03%。总氨基酸中ΣEAA/ΣAA为63.22%。
实施例3结果表明,游离氨基酸占总氨基酸91.55%,游离苦味氨基酸占总氨基酸28.62%,游离鲜甜味氨基酸占总氨基酸24.70%,游离鲜甜味氨基酸总鲜甜味氨基酸的1.05。总氨基酸中ΣEAA/ΣAA为63.29%。

Claims (9)

1.利用亚临界萃取与酶解制备南极磷虾酶解液的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)原料的预处理:将冷冻南极磷虾解冻后,采用搅拌机搅拌至糜状,加入0.001~1.0wt%的表面活性剂形成超临界胶束体系,所述的表面活性剂为聚甘油脂肪酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯中的一种或两种混合物;
(2)装料:将经过预处理的南极磷虾装入套好尼龙网筛的支架中,密封安置在萃取设备中的萃取罐中,所用的尼龙网筛为20~200目;
(3)萃取:加入萃取剂后启动萃取装置对南极磷虾进行萃取,单次萃取时间为5~30min,萃取1~5次;单次萃取后加入破乳剂与絮凝剂和0.2wt%丙烷/丁烷溶液,进行反萃;萃取温度为30~60℃,萃取时间为30~45min;
(4)脱溶:萃取完成后,脱溶回收萃取剂;
(5)循环:重复步骤(3),循环萃取2~4次;
(6)萃取产物收集处理:蒸发罐中的油水混合萃取产物经过6000~12000rpm的高速离心,上层油相为热敏性南极磷虾油,下层为水层;从萃取罐取出脱脂脱水南极磷虾粉沉淀;
(7)分步连续酶解法处理沉淀:将步骤(6)所得水相和沉淀混合得混合液,调节混合液pH值为7.0~8.0,按照总酶活为2000U/g加入风味蛋白酶、菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶,恒温酶解2~4h,酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;按照总酶活为2000U/g加入质量比为1:100的胰蛋白酶和胃蛋白酶,恒温酶解2~4h,酶解结束后加热至98~100℃,沸水浴灭酶10~15min;待酶解液冷却,离心分离,得到鲜甜味南极磷虾酶解液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中的表面活性剂为聚甘油脂肪酸酯、双乙酰酒石酸单双甘酯混合物,两者质量比为6~7:8,表面活性剂的添加量为南极磷虾质量的0.005~0.5wt%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中的萃取剂是体积比为3:2~9的丙烷与丁烷的混合气;萃取剂添加质量为南极磷虾的10~35倍,循环热水为35~45℃,萃取时间为30~45min,搅拌速度为20~1200rpm。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中的破乳剂是质量比为3~5:7的氯化钠与氯化钙组合物,其添加量为南极磷虾质量的0.015~0.5%。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中絮凝剂是质量比为6:10~15:7~10的壳聚糖、单宁酸和海藻酸钠组合物,絮凝剂添加量为南极磷虾质量的0.005~0.25wt%。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中的脱溶时间为30~45min,温度为30℃~35℃。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(7)中pH值用30%柠檬酸调节。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(7)中将酶解液8000r/min离心10min,过滤得酶解液。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(7)所得酶解液于﹣80℃冰箱中静置24h后于,﹣40℃下冷冻干燥48h,得南极磷虾蛋白肽。
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