CN111217741B - 氟取代单咔唑类衍生物、其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物化学领域，涉及一种氟取代单咔唑类衍生物，为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)所示化合物中的一种或多种，或式(Ⅰ)、式(Ⅱ)所示化合物形成的医学上可接受的可溶性盐中的一种或多种。本申请获得的氟取代单咔唑类衍生物，可用于制备DNA甲基转移酶抑制剂或组蛋白去甲基化酶抑制剂。本发明的氟取代单咔唑类衍生物对癌细胞增值有抑制作用，可用于制备治疗和/或预防癌症方面的药物。经体外癌细胞增殖抑制试验表明，本发明所得到的氟取代单咔唑类化合物表现出对人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)、人胃癌细胞(MNK‑45)、人肝癌细胞(HepG2)、RPMI‑8226和Karpas 299的抗增殖活性。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，涉及一种氟取代单咔唑类衍生物、其制备方法及应用。
背景技术
目前，国内外研究发现的DNMT小分子抑制剂主要可分为核苷类似物和非核苷类似物两大类，核苷类抑制剂主要通过模拟胞嘧啶结构与DNA结合，进而捕获DNMT形成共价复合物抑制其甲基化DNA，包括阿扎胞苷(5-azacytidine,Vidaza)、地西他滨(5-aza-2’-deoxycytidine,Dacogen)、5-氟-2-脱氧胞苷(5-Fluoro-2'-deoxycytidine,FdCyd)、折布拉林(Zebularine)、二氢-5-氮杂胞苷(5,6-dihydro-5-azacytidine)、Guadecitabine(SGI-110)和2-(对硝基苯基)-乙氧羰基阿扎胞苷(NPEOC-DAC)等，其中，阿扎胞苷和地西他滨已作为上市药物被用于治疗急性骨髓性白血病(AML)、慢性髓细胞白血病(CML)和MDS等血液系统恶性肿瘤。然而，核苷类似物选择性差，毒副作用大，这可能与它们能渗入DNA或RNA有关。大部分核苷类似物只能作用于非实体瘤，在抑制DNMT的同时，也会对着丝粒卫星DNA等进行低甲基化，影响染色体的整体稳定性。而非核苷类似物的化学结构比较多样，但大多数选择性不高且活性较差。
发明内容
本发明的目的在于提供一系列氟取代单咔唑类衍生物及其制备方法和应用，以解决上述问题中的一个或几个。
根据本发明的一个方面，提供了一种氟取代单咔唑类衍生物，为式(Ⅰ)、式(Ⅱ)所示化合物中的一种或多种，或式(Ⅰ)、式(Ⅱ)所示化合物形成的医学上可接受的可溶性盐中的一种或多种：
R1为H或F，R2为H或F，且R1、R2至少有一个为F，R3为下述基团中的一种：
R4为氮杂环，R5为色胺基；R16从L型或D型氨基酸出发，理论上可以是20种常见氨基酸的取代基及其衍生化形式，常见的有：甲基，乙基，异丙基，异丁基，2-丁基，苄基，对羟基苄基，羟甲基，羟乙基，甲醛基，甲氧基甲基，羧酸等；R17可以是H，叔丁氧羰基(-BOC)，C1-C6的烷基，如：甲基，乙基，丙基，环丙基，丁基，2-丁基，叔丁基，环丁基，还可以是C6-C20的芳香基团，如：苯基，苄基等，还可以是C1-C6的氘取代的烷基，还可以是C7-C20多个脂肪链、脂肪环和芳环单一或相互的组合。
具体地，R4为1-aza或2-aza，即氮原子处于1位或2位的氮杂环。
具体地，R1、R2中有一个为F、另一个为H时，R3为下述基团中的一种：
具体地，R1、R2均为F时，R3为下述所列基团中的一种：
应当说明的是，本发明中“化合物形成的医学上可接受的可溶性盐”可以是：1)化合物与无机酸形成的医学上可接受的并且具有对应化合物的药理活性的可溶性盐，所述无机酸如盐酸、硫酸、硝酸等；2)化合物与有机酸形成的医学上可接受的并且具有对应化合物的药理活性的可溶性盐，有机酸如甲酸、甲磺酸等。
另外，本发明还提供了制备上述氟取代单咔唑类衍生物的中间体，为式(III)、或式(IV)所示的化合物：
其中，R1为H或F、R2为H或F，且R1、R2至少有一个为F，R4为1-aza或2-aza。
本发明所提供的氟取代单分子咔唑衍生物的合成技术路线简述如下：
当R1、R2中任一个为H，另一个为F时，单氟取代单分子咔唑衍生物制备过程如下：以2-氯苯胺为原料，与对氟溴苯经Buchwald-Hartwig偶联反应，再通过过渡金属催化C-C偶联关环生成3位氟取代咔唑，然后与环氧氯丙烷经N-烷基化，得到环氧化中间体(如式a4所示)，最后与各种胺类化合物进行碱性条件的亲核取代反应而成；合成路线如下：
其中，上述系列反应中，条件a原料为对氟溴苯，条件c原料为环氧氯丙烷，条件d原料为胺类化合物。
当R1、R2均为F时，双氟取代单分子咔唑衍生物制备过程如下：以2-氯-4-氟苯胺为原料，与对氟溴苯经Buchwald-Hartwig偶联反应，再通过过渡金属催化C-C偶联关环生成3,6位氟取代咔唑，然后与环氧氯丙烷经N-烷基化，得到环氧化中间体(如式b4所示)，最后与各种胺类化合物进行碱性条件的亲核取代反应制备而成。合成路线如下：
其中，上述系列反应中，条件a原料为对氟溴苯，条件c原料为环氧氯丙烷，条件d原料为胺类化合物。
其中：
(e8，L构型)经以下路线制备：
而
(e10)利用e5经以下路线制备：
终产物1：
终产物2：
也可以：
同时，还提供了D构型的对应产物：
的制备路线：
当R4为1-aza或2-aza时，制备步骤如下：分别以化合物α-咔啉或β-咔啉为原料，与环氧氯丙烷经N-烷基化，得到环氧化中间体(如式(IV)所示)，最后与色胺在碱性条件进行亲核取代反应制备而成。
上述制备过程如下：
其中，条件e原料为环氧氯丙烷；条件f原料为色胺。
根据本发明的还一个方面，提供了上述氟取代单咔唑类衍生物在制备DNA甲基转移酶抑制剂或组蛋白去甲基化酶抑制剂中的应用。经酶活性抑制试验验证，本发明提供的氟取代单分子咔唑衍生物对DNMT1、DNMT3A/3L具有较强的抑制活性，对LSD1有抑制活性，可用于制备DNMT1抑制剂、DNMT3A/3L抑制剂和LSD1抑制剂。
根据本发明的还一个方面，提供了上述氟取代单咔唑类衍生物在制备治疗癌症药物方面的应用，其中癌症为肝癌、肺癌、胃癌或结肠癌。
根据本发明的还一个方面，提供了一种药物组合物，包括至少一种上述的氟取代单分子咔唑衍生物，和至少一种药学上可接受的赋形剂。
附图说明
图1～图2分别为中间体a2的核磁共振氢谱图、碳谱图；
图3～图4分别为中间体a3的核磁共振氢谱图、碳谱图；
图5～图7分别为中间体a4的质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图；
图8～图9分别为中间体b2的核磁共振氢谱图、碳谱图；
图10～图11分别为中间体b3的核磁共振氢谱图、碳谱图；
图12～图13分别为中间体b4的核磁共振氢谱图、碳谱图；
图14～图16分别为化合物e1的质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图；
图17～图21分别为化合物1的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图22～图26分别为化合物2的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图27～图31分别为化合物3的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图32～图36分别为化合物4的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图37～图41分别为化合物5的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图42～图46分别为化合物6的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图47～图51分别为化合物7的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图52～图56分别为化合物8的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图57～图61分别为化合物9的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图62～图65分别为化合物10的红外谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图66～图69分别为化合物11的红外谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图70～图74分别为化合物12的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图75～图79分别为化合物13的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图80～图84分别为化合物14的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图85～图89分别为化合物15的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图90～图94分别为化合物16的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图95～图99分别为化合物17的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图100～图104分别为化合物18的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图105～图109分别为化合物19的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图以及DEPT135度谱图；
图110～图112为化合物20的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图；
图113～图115为化合物21的红外谱图、质谱图、核磁共振氢谱图；
图116～图118为化合物22的质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图；
图119～图121为化合物23的质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图；
图122～图124为中间产物e5的质谱图、核磁共振氢谱图、碳谱图；
图125为本发明合成的化合物1-21浓度为50μM时对DNMT1的抑制率；
图126为本发明合成的化合物1-21浓度为100μM时对DNMT1的抑制率；
图127为化合物1、化合物12、化合物13和化合物19对不同酶选择性对比图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步详细的说明。但并不对本发明造成任何限制。
下述实施例中涉及的物料，除特别注明的物料外，均可从商业渠道获得。对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。
本发明中，室温是指温度为20～30℃，碱性催化剂可以为KOH、NaOH、LiOH、Ba(OH)2等无机碱，或者三乙胺、吡啶、2,2-二羟甲基丙酸中的一种或多种，其中，优选为KOH；干燥剂可以为无水(anhyd.)硫酸钠、无水硫酸镁、无水碳酸钾、无水氯化钙等干燥剂中的一种或多种，其中，优选为无水硫酸钠。“反应过夜”是指反应时间为8～18h。
本发明中，式(III)、式(IV)所示的中间体与不同胺类化合物进行碱性条件的亲核取代反应制备本发明目标化合物时，反应温度可以为30～80℃，优选为60℃。“加热回流反应”的温度可以为80～130℃，优选为110℃。
单氟取代单分子咔唑衍生物的合成过程中，中间产物化合物a2、化合物a3、化合物a4的制备方法如下：
1、中间体a2通过下述方法制备：
取24.00g(250.0mmol)叔丁醇钠(NaOtBu)(在其他实施方式中，还可以为叔丁醇钾等)，1.02g(3.5mmol)四氟硼酸三叔丁基膦([HPtBu3][BF4])，560.0mg(2.5mmol)催化剂醋酸钯(Pd(OAc)2)(在其他实施方式中，催化剂还可以为其他钯类催化剂，如二氯化钯、双(二亚芐基丙酮)钯)至500mL圆底烧瓶，加入200mL溶剂甲苯(在其他实施方式中，溶剂还可以为苯、二甲苯或四氢呋喃等)搅拌均匀。分别取6.40g(50.0mmol)2-氯苯胺(a1)和8.75g(50.0mmol)对氟溴苯，N2置换3次后保护，内温110℃加热回流3～6h(优选回流4h)。TLC检测(PE:EA＝20:1展开)原料消失，放置冷却，加100mL水淬灭，用200mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得黑色液体粗产品12.60g。经柱层析(100％PE)洗脱纯化，得淡黄色液体10.30g，收率93.21％。
对产物进行质谱、氢谱和碳谱核磁分析，其氢谱图和碳谱图如图1和图2所示，质谱、氢谱和碳谱数据如下：
Liquid.HRMS-ESI calcd for C12H10FNCl[M+H]+222.0486,found 222.0533.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.40(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.17(td,J＝7.7,7.2,1.5Hz,1H),7.15–7.08(m,5H),6.86(ddd,J＝8.8,6.3,1.6Hz,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ157.62(d,J＝237.3Hz),141.33,139.45(d,J＝2.2Hz),130.43,128.27,122.63,121.54,121.37(d,J＝7.8Hz),117.85,116.12(d,J＝22.3Hz).
经分析，中间体a2结构式为：
为2-氯-N-(4-氟苯基)苯胺。
2、中间体a3通过下述方法制备：
取21.87g(227.8mmol)NaOtBu(在其他实施方式中，还可以为叔丁醇钾等)，925.0mg(3.2mmol)[HPtBu3][BF4]，510.0mg(2.3mmol)催化剂Pd(OAc)2(在其他实施方式中，催化剂还可以为其他的钯类催化剂，如二氯化钯、双(二亚芐基丙酮)钯)至500mL圆底烧瓶，加入250mL溶剂二氧六环(在其他实施方式中，溶剂还可以为甲苯、苯、二甲苯或四氢呋喃等)搅拌均匀。取10.07g(45.5mmol)a2加入，N2置换3次后保护，内温110℃加热回流过夜。TLC检测(PE:EA＝20：1展开)反应完全，放置冷却，加100mL水淬灭，用200mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得黑色半固体10.20g。经柱层析(PE:EA＝100:1→20:1)洗脱纯化，得灰黄色固体5.60g粗产品，用石油醚打浆后过滤，得白色固体3.80g，收率45.08％。
对产物进行质谱、氢谱和碳谱核磁分析，其氢谱图和碳谱图如图3和图4所示，质谱、氢谱和碳谱数据如下：
m.p.134-136℃.HRMS-ESI calcd for C12H9FN[M+H]+186.0719,found 186.0767.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.30(s,1H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),7.95(dd,J＝9.4,2.6Hz,1H),7.53–7.45(m,2H),7.40(ddd,J＝8.2,7.0,1.2Hz,1H),7.23(td,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.19–7.09(m,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.83(d,J＝232.2Hz),141.23,136.63,126.57,123.29(d,J＝9.8Hz),122.62(d,J＝4.2Hz),121.10,118.89,113.60(d,J＝25.3Hz),112.22(d,J＝9.3Hz),111.66,106.17(d,J＝23.6Hz).
经分析，中间体a3结构式为：
为3-氟-9H-咔唑。
3、中间体a4通过下述方法制备：
取2.40g(13.0mmol)a3至100mL圆底烧瓶，加入有机溶剂(本实施例中为DMF，在其他实施例中有机溶剂还可以为DMSO(二甲基亚砜)等非质子性的溶剂)约50mL溶解，再加入0.80g(14.3mmol)碱性催化剂(如KOH)，冰浴下搅拌5min冷却。分批次滴加2.40g(26.0mmol)环氧氯丙烷，滴完后转至室温搅拌反应2～6h(优选3h)。TLC检测(PE:EA＝5:1展开)原料消失，加入50mL水，用50mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得黑色液体3.80g。经柱层析(PE:EA＝80:1→20:1)纯化，得棕色固体1.90g，收率60.70％。对产物进行质谱、氢谱和碳谱核磁分析，如图5～图7所示，质谱、氢谱和碳谱具体数据如下：
m.p.39-41℃.HRMS-ESI calcd for C15H13FNO[M+H]+242.0971,found 242.1030.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.16(d,J＝7.8Hz,1H),8.01(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.70–7.63(m,2H),7.51–7.44(m,1H),7.31(td,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.24–7.16(m,1H),4.80(dd,J＝15.8,3.1Hz,1H),4.42(dd,J＝15.9,5.8Hz,1H),3.31(dq,J＝5.8,3.1Hz,1H),2.79–2.73(m,1H),2.57(dd,J＝5.1,2.6Hz,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.71(d,J＝232.9Hz),141.22,136.86,126.34,122.60(d,J＝9.9Hz),121.74(d,J＝4.1Hz),120.69,118.97,113.26(d,J＝25.4Hz),110.68(d,J＝9.2Hz),109.92,105.86(d,J＝23.8Hz),50.31,44.64,44.35.
经分析中间体a4结构式为：
为3-氟-9-(环氧乙烷-2-甲基)-9H-咔唑。
双氟取代单分子咔唑衍生物合成过程中，中间体b2、化合物b3、化合物b4的制备：
1、中间体b2通过下述方法制备：
取24.00g(250.0mmol)NaOtBu(在其他实施方式中，还可以为叔丁醇钾等)，1.02g(3.5mmol)[HPtBu3][BF4]，560.0mg(2.5mmol)催化剂Pd(OAc)2(在其他实施方式中，催化剂还可以为其他的钯类催化剂，如二氯化钯、双(二亚芐基丙酮)钯)至500mL圆底烧瓶，加入200mL溶剂甲苯(在其他实施方式中，溶剂还可以为苯、二甲苯或四氢呋喃等)搅拌均匀。分别取6.40g(50.0mmol)2-氯-4-氟苯胺(化合物b1)和8.75g(50.0mmol)对氟溴苯，N2置3次后保护，内温110℃加热回流3～6h(优选回流4h)。TLC检测(PE:EA＝20:1展开)原料消失，放置冷却，加100mL水淬灭，用200mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得黑色液体粗产品12.10g。经柱层析(100％PE)洗脱纯化，得淡黄色液体10.00g，收率83.68％。对产物进行质谱、氢谱和碳谱核磁分析，其氢谱图和碳谱图如图8～图9所示，质谱、氢谱和碳谱数据如下：
Liquid.HRMS-ESI calcd for C12H9F2NCl[M+H]+240.0392,found 240.0440.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.42(dd,J＝8.6,3.0Hz,1H),7.18(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.13–7.03(m,3H),7.01–6.94(m,2H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ157.21(d,J＝236.3Hz),156.71(d,J＝240.6Hz),140.35(d,J＝2.1Hz),137.91(d,J＝2.7Hz),124.61(d,J＝10.6Hz),120.79(d,J＝8.4Hz),119.86(d,J＝7.8Hz),117.45(d,J＝25.6Hz),116.11(d,J＝22.3Hz),115.29(d,J＝21.8Hz).
经分析，中间体b2结构式为
为2-氯-4-氟-N-(4-氟苯基)苯胺。
2、中间体b3通过下述方法制备：
取20.08g(209.2mmol)NaOtBu(在其他实施方式中，还可以为叔丁醇钾等)，849.7mg(2.9mmol)[HPtBu3][BF4]，468.0mg(2.1mmol)催化剂Pd(OAc)2(在其他实施方式中，催化剂还可以为其他的钯类催化剂，如二氯化钯、双(二亚芐基丙酮)钯)至500mL圆底烧瓶，加入250mL溶剂二氧六环(在其他实施方式中，溶剂还可以为甲苯、苯、二甲苯或四氢呋喃等)搅拌均匀。取10.00g(41.8mmol)b2加入，N2置换3次后保护，内温110℃加热回流过夜。TLC检测(PE:EA＝20:1展开)反应完全，放置冷却，加100mL水淬灭，用200mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得黑色半固体10.20g。经柱层析(PE:EA＝100:1→20:1)洗脱纯化，得灰黄色固体3.20g粗产品，用溶剂(PE:DCM＝5:1)30mL打浆后过滤，得白色固体2.74g，收率32.26％。
对产物进行质谱、氢谱和碳谱核磁分析，其氢谱图和碳谱图如图10～图11所示，质谱、氢谱和碳谱数据如下：
m.p.149-151℃.HRMS-ESI calcd for C12H8F2N[M+H]+204.0625,found 204.0672.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.34(s,1H),7.97(dd,J＝9.4,2.6Hz,2H),7.49(dd,J＝8.8,4.4Hz,2H),7.26(td,J＝9.1,2.6Hz,2H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.63(d,J＝232.4Hz),137.69,122.96(dd,J＝10.0,4.3Hz),114.39(d,J＝25.5Hz),112.62(d,J＝9.2Hz),106.53(d,J＝23.8Hz).
经分析，中间体b3结构式为：
为3,6-二氟-9H-咔唑。
3、中间体b4通过下述方法制备：
取2.70g(13.3mmol)b3至100mL圆底烧瓶，加入有机溶剂(本实施例中为DMF，其他实施例中还可以为)约50mL溶解，再加入0.82g(14.6mmol)碱性催化剂(本实施例中为KOH，其他实施例中还可以为NaOH等无机碱，或者三乙胺、吡啶、2,2-二羟甲基丙酸中的一种或多种)，冰浴下搅拌5min冷却。分批次滴加2.46g(26.6mmol)环氧氯丙烷，滴完后转至室温搅拌反应4h。TLC检测(PE:EA＝5:1展开)原料消失，加入50mL水，用50mL乙酸乙酯萃取两次，合并的有机相依次经饱和食盐水水洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除溶剂，得棕色固体4.32g。经柱层析(PE:EA＝80:1→20:1)纯化，得白固体2.25g，收率65.41％。对产物进行质谱、氢谱、碳谱核磁分析，其氢谱图和碳谱图如图12～图13所示，质谱、氢谱、碳谱数据如下：
m.p.121-123℃.HRMS-ESI calcd for C15H12F2NO[M+H]+260.0887,found260.0932.
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.03(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.68(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.34(td,J＝9.2,2.6Hz,2H),4.82(dd,J＝15.9,3.0Hz,1H),4.41(dd,J＝15.9,5.8Hz,1H),3.30(ddd,J＝5.7,2.8,0.9Hz,1H),2.76(dd,J＝5.0,4.1Hz,1H),2.56(dd,J＝5.1,2.6Hz,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.98(d,J＝233.3Hz),138.22,122.58(dd,J＝10.1,4.1Hz),114.53(d,J＝25.5Hz),111.55(d,J＝9.1Hz),106.70(d,J＝24.0Hz),50.79,45.08,45.01.
经分析，中间体b4结构式为：
为3,6-二氟-9-(环氧乙烷-2-甲基)-9H-咔唑。
本发明共合成21种化合物，这21种化合物的具体制备方法及表征如实施例1～21。
实施例1化合物1的合成与表征
取120.0mg(0.5mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入318.7mg(2.0mmol)色胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.37g。经柱层析(PE:EA＝1:1)纯化，得白色固体64.0mg，收率32.10％。对化合物1进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁和DEPT谱分析，如图17～21所示，其中红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3273,2930,1487,1459,1439,1351,1281,1170,889,795,727.
m.p.137-139℃.HRMS-ESI[M+H]+402.1982,found402.1962.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),8.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(d,J＝8.9Hz,1H),7.67–7.55(m,2H),7.52(d,J＝7.9Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(t,J＝8.1Hz,1H),7.20–7.11(m,2H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),5.02(s,1H),4.46(dd,J＝14.9,5.0Hz,1H),4.27(dd,J＝14.8,6.8Hz,1H),3.98(s,1H),2.83(dd,J＝22.5,6.5Hz,4H),2.61(ddd,J＝44.5,11.8,5.5Hz,2H),1.99(brs,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.48(d,J＝232.7Hz),141.45,137.15,136.24,127.29,126.08,122.58,122.38(d,J＝9.9Hz),121.61(d,J＝4.4Hz),120.79,120.53,118.52,118.30,118.10,112.99(d,J＝25.4Hz),112.59,111.31,110.72(d,J＝8.9Hz),110.01,105.62(d,J＝23.8Hz),68.87,52.98,50.35,47.19,25.57.
经分析，化合物1化学式为C25H24FN3O，分子量为401.1903，其结构式为
为1-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)胺)-3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
实施例2化合物2的合成与表征
取120.0mg(0.5mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入277.0mg(2.0mmol)4-氟苯乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.35g。经柱层析(PE:EA＝1:1)纯化，得白色固体94.0mg，收率49.67％。
对化合物2进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图22～26所示，其中红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3059,2822,1603,1511,1486,1465,1279,1224,1168,890,743.
m.p.109-111℃.HRMS-ESI calcd for C23H23F2N2O[M+H]+381.1778,found381.1762.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),7.59–7.56(m,2H),7.43(t,J＝8.2Hz,1H),7.29–7.23(m,3H),7.17(t,J＝7.4Hz,1H),7.09(t,J＝8.9Hz,2H),5.04(s,1H),4.43(dd,J＝14.8,5.0Hz,1H),4.25(dd,J＝14.8,6.8Hz,1H),3.95(t,J＝5.9Hz,1H),2.77–2.67(m,4H),2.57(ddd,J＝38.6,5.6Hz,2H),1.99(brs,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ160.67(d,J＝240.8Hz),156.50(d,J＝232.6Hz),141.45,137.15,136.64(d,J＝3.2Hz),130.37(d,J＝8.0Hz),126.10,122.40(d,J＝9.9Hz),121.62(d,J＝4.1Hz),120.57,118.56,114.84(d,J＝20.8Hz),113.02(d,J＝25.4Hz),110.72(d,J＝9.2Hz),110.01,105.67(d,J＝23.7Hz),68.84,52.93,51.19,47.17,35.08.
经分析，化合物2化学式为C23H22F2N2O，分子量为380.1700，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-((4-氟苯乙基)胺)-2-丙醇。
实施例3化合物3的合成与表征
取158.0mg(0.7mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入359.5mg(2.6mmol)对羟基苯乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.39g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体119.0mg，收率47.98％。
对化合物3进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图27～31所示，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2932,1597,1518,1488,1465,1465,1271,1245,1169,888,739.
m.p.140-142℃.HRMS-ESI calcd for C23H24FN2O2[M+H]+379.1822,found379.1802.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.14(brs,1H),8.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.97(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.60-7.58(m,2H),7.44(t,J＝7.7Hz,1H),7.26(td,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.17(t,J＝7.4Hz,1H),7.00(d,J＝8.3Hz,2H),6.67(d,J＝8.4Hz,2H),4.98(brs,1H),4.44(dd,J＝14.8,5.0Hz,1H),4.25(dd,J＝14.8,6.8Hz,1H),3.96(p,J＝5.6Hz,1H),2.72–2.63(m,2H),2.63–2.57(m,2H),2.53(dd,J＝11.9,6.1Hz,1H),1.88(s,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.96(d,J＝232.7Hz),155.90,141.91,137.61,130.83,129.91,126.57,122.86(d,J＝9.9Hz),122.08(d,J＝4.0Hz),121.02,119.01,115.47,113.49(d,J＝25.1Hz),111.20(d,J＝8.9Hz),110.49,106.12(d,J＝23.7Hz),69.25,53.38,51.97,47.64,35.54.
经分析，化合物3化学式为C23H23FN2O2，分子量为378.1744，其结构式为
为4-(2-((3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-羟丙基)胺)乙基)苯酚。
实施例4化合物4的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入277.1mg(1.6mmol)2-甲氧基苯氧基乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.38g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体69.0mg，收率40.83％。
对化合物4进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图32～36，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3352,1591,1507,1490,1467,1255,1221,1124,1017,745.
m.p.55-57℃.HRMS-ESI calcd for C24H26FN2O3[M+H]+409.1927,found409.1901.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.67–7.61(m,2H),7.44(t,J＝8.1Hz,1H),7.27(td,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),6.99–6.93(m,2H),6.92–6.84(m,2H),5.13(s,1H),4.47(dd,J＝14.8,5.1Hz,1H),4.29(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),4.02(hept,J＝5.5,5.0Hz,3H),3.74(s,3H),3.43–3.34(m,1H),2.88(t,J＝5.6Hz,2H),2.68(dd,J＝11.8,4.7Hz,1H),2.60(dd,J＝11.8,6.3Hz,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.52(d,J＝232.4Hz),149.17,148.06,141.46,137.16,126.14,122.42(d,J＝9.9Hz),121.65(d,J＝4.1Hz),121.05,120.72,120.58,118.57,113.61,113.06(d,J＝25.4Hz),112.20,110.76(d,J＝9.2Hz),110.02,105.67(d,J＝23.7Hz),68.82,68.22,55.45,52.90,48.45,47.14.
经分析，化合物4化学式为C24H25FN2O3，分子量为408.1849，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-((2-(2-甲氧基苯氧基)乙基)胺)-2-丙醇。
实施例5化合物5的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入217.1mg(1.6mmol)3-丁氧基丙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.39g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体91.0mg，收率59.09％。
对化合物5进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图37～41，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3257,2931,2862,1575,1487,1466,1281,1167,1111,887,738.
m.p.71-73℃.HRMS-ESI calcd for C22H30FN2O2[M+H]+373.2291,found373.2270.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.66–7.60(m,2H),7.45(t,J＝8.3Hz,1H),7.28(td,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.04(s,1H),4.45(dd,J＝14.8,4.9Hz,1H),4.27(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),3.96(p,J＝5.6Hz,1H),3.40(t,J＝6.4Hz,2H),3.33(t,J＝6.5Hz,2H),2.59–2.51(m,4H),1.86(s,1H),1.64(p,J＝6.6Hz,2H),1.50–1.41(m,2H),1.30(h,J＝7.4Hz,2H),0.86(s,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.51(d,J＝232.7Hz),141.48,137.18,126.09,122.40(d,J＝9.9Hz),121.64(d,J＝3.9Hz),120.57,118.55,113.01(d,J＝25.3Hz),110.75(d,J＝9.1Hz),110.02,105.67(d,J＝23.7Hz),69.67,68.83,68.41,53.25,47.26,46.72,31.37,29.79,18.91,13.79.
经分析，化合物5化学式为C22H29FN2O2，分子量为372.2213，其结构式为
为1-((3-丁氧丙基)胺)-3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
实施例6化合物6的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入124.5mg(1.6mmol)S-2-氨基丙醇，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.24g。经二氯甲烷重结晶及制备板纯化，得白色固体74.0mg，收率56.49％。
对化合物6进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图42～46，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3305,1586,1488,1463,1170,950,791,743.
m.p.118-120℃.HRMS-ESI calcd for C18H22FN2O2[M+H]+317.1665,found317.1649.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.16(d,J＝7.8Hz,1H),7.99(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.70–7.63(m,2H),7.47(t,J＝7.5Hz,1H),7.30(td,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),5.39(s,1H),4.82(s,1H),4.46(dd,J＝14.9,5.1Hz,1H),4.34(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),4.13(q,J＝4.6Hz,1H),3.85–3.77(m,1H),2.79(dd,J＝12.1,4.0Hz,1H),2.71(dd,J＝12.1,7.3Hz,1H),2.62(dd,J＝12.0,3.9Hz,1H),2.57–2.51(m,1H),1.06(d,J＝6.2Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ157.02(d,J＝232.7Hz),141.89,137.58,126.62,122.94(d,J＝9.8Hz),122.15(d,J＝4.1Hz),121.07,119.12,113.54(d,J＝25.4Hz),111.25(d,J＝9.1Hz),110.51,106.18(d,J＝23.6Hz),68.08,64.54,56.59,52.61,47.50,21.86.
经分析，化合物6化学式为C18H21FN2O2，分子量为316.1587，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-((2-羟丙基)胺)-2-丙醇。
实施例7化合物7的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入124.5mg(1.6mmol)D-氨基丙醇，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.26g。经溶剂(PE:DCM＝2:1)7mL重结晶，得白色固体100.0mg，收率76.33％。
对化合物7进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图47～51，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3415,2976,1487,1468,1283,1168,1052,885,856,742.
m.p.119-121℃.HRMS-ESI calcd for C18H22FN2O2[M+H]+317.1665,found317.1650.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝7.5Hz,1H),7.98(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),7.67–7.61(m,2H),7.45(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.29(td,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.07(d,J＝5.1Hz,1H),4.57(t,J＝5.4Hz,1H),4.44(dd,J＝14.9,4.8Hz,1H),4.28(dd,J＝14.9,7.0Hz,1H),3.99–3.89(m,1H),3.30(dt,J＝9.6,4.5Hz,1H),3.25–3.18(m,1H),2.67(dd,J＝11.4,4.7Hz,1H),2.56(dt,J＝11.5,6.3Hz,1H),2.48(d,J＝7.1Hz,1H),1.91(s,1H),0.87(d,J＝6.3Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.96(d,J＝232.3Hz),141.94,137.64,126.55,122.86(d,J＝9.6Hz),122.09(d,J＝4.0Hz),121.02,119.01,113.47(d,J＝25.1Hz),111.29(d,J＝9.2Hz),110.56,106.12(d,J＝23.8Hz),69.89,65.95,55.37,51.39,47.95,17.74.
经分析，化合物7化学式为C18H21FN2O2，分子量为316.1587，其结构式为
为2-((3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-羟丙基)胺)-1-丙醇。
实施例8化合物8的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入168.0mg(1.6mmol)三乙胺、286.0mg(1.6mmol)(R)-β-甲基苯乙胺盐酸盐，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.31g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体83.0mg，收率53.21％。
对化合物8进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图52～56，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2960,1589,1486,1462,1279,1162,1099,884,793,700.
m.p.100-102℃.HRMS-ESI calcd for C24H26FN2O[M+H]+377.2029,found377.2006.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),7.61–7.53(m,2H),7.47–7.41(m,1H),7.31–7.21(m,5H),7.20–7.15(m,2H),5.01(s,1H),4.42(dd,J＝14.8,5.1Hz,1H),4.23(dd,J＝14.8,6.7Hz,1H),3.93(p,J＝5.7Hz,1H),2.87(h,J＝7.0Hz,1H),2.68(dd,J＝11.5,7.1Hz,1H),2.62(dd,J＝11.5,7.1Hz,1H),2.56(dd,J＝11.9,5.1Hz,1H),2.51(d,J＝6.7Hz,1H),1.82(s,1H),1.22(d,J＝7.0Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.96(d,J＝232.7Hz),146.26,141.90,137.59,128.73,127.55,126.57,126.45,122.85(d,J＝9.5Hz),122.07(d,J＝4.0Hz),121.02,119.01,113.48(d,J＝25.4Hz),111.17(d,J＝9.1Hz),110.46,106.12(d,J＝23.7Hz),69.18,57.33,53.43,47.55,39.73,20.25.
经分析，化合物8化学式为C24H25FN2O，分子量为376.1951，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-(((R)-2-苯丙基)胺)-2-丙醇。
实施例9化合物9的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入207.5mg(1.6mmol)对氟苄胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.30g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体84.0mg，收率55.26％。
对化合物9进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图57～61，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2924,1606,1587,1516,1487,1223,1171,889,790,740.
m.p.130-132℃.HRMS-ESI calcd for C22H21F2N2O[M+H]+367.1622,found367.1608.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),7.61(dd,J＝8.7,4.3Hz,2H),7.48–7.41(m,1H),7.36(dd,J＝8.5,5.8Hz,2H),7.28(td,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),7.12(t,J＝8.9Hz,2H),5.10–4.96(m,1H),4.47(dd,J＝14.9,4.6Hz,1H),4.28(dd,J＝14.9,7.1Hz,1H),3.99(s,1H),3.74–3.61(m,2H),2.60–2.52(m,2H),2.38(brs,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ161.53(d,J＝241.6Hz),156.96(d,J＝232.7Hz),141.93,137.63,137.41(d,J＝2.8Hz),130.29(d,J＝7.9Hz),126.55,122.86(d,J＝9.9Hz),122.10(d,J＝4.1Hz),121.02,119.01,115.26(d,J＝21.0Hz),113.47(d,J＝25.2Hz),111.23(d,J＝9.1Hz),110.51,106.12(d,J＝23.7Hz),69.37,53.08,52.82,47.81.
经分析，化合物9化学式为C22H20F2N2O，分子量为366.1544，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-((4-氟苄基)胺)-2-丙醇。
实施例10化合物10的合成与表征
制备化合物10所用的胺类原料化合物e1合成路线如下：
化合物e1具体合成路线为：
化合物e2的制备(L-丝氨酸→e2)：取50.00g(476.0mmol)L-丝氨酸至1000mL反应瓶中，加入甲醇250mL，在冰水浴条件下，滴加226.67g(1904.8mmol)SOCl2，滴加完成后室温反应过夜，反应液白色混浊，减压蒸除溶剂得到白色固体71.86g，直接用于下一步反应。
化合物e3的制备(e2→e3)：取71.86g(464.0mmol)化合物e2至1000mL反应瓶中，加入水250mL溶解，在盐冰浴条件下，加入93.54g(1113.6mmol)NaHCO3，冷却搅拌5min。滴加57.68g(510.4mmol)ClCH2COCl溶液(溶于200mL二氯甲烷)，产生大量气体，滴加完成后室温搅拌反应6h。反应液用120mL二氯甲烷萃取三次，合并的有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸除溶剂，得淡黄色液体80.37g，收率88.80％，直接用于下一步反应。
化合物e4的制备(e3→e4)：取36.00g(185.0mmol)化合物e3至500mL反应瓶中，加入甲醇180mL溶解，在冰浴条件下，加入56.06g(555.0mmol)三乙胺，冷却搅拌5min。再分批加入23.75g(222.0mmol)苄胺，加料完成后加热回流反应过夜。反应液加40mL乙酸乙酯后-30℃冷藏析出固体，过滤，得白色固体3150g。将所得固体用溶剂(MeOH:EA＝150:90)溶解，搅拌半小时，放置4℃冰箱冷却析出固体，得纯白色固体24.00g，收率55.44％。
化合物e5的制备(e4→e5)：取无水THF约200mL至500mL圆底烧瓶中，在冰水浴条件下，加入12.35g(324.9mmol)LiAlH4搅拌5min，分批次加入20.00g(85.5mmol)e4后，N2保护下，室温搅拌30分钟，80℃加热回流3～6h(优选4h)。TLC检测(EA:MeOH＝20:1展开)原料消失，反应淬灭，过滤，母液用30mL二氯甲烷萃取三次，合并的有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸除溶剂，得黄色液体17.85g。
对化合物e5进行质谱、核磁共振氢谱分析和碳谱分析，如图122-124，数据如下：
HRMS(ESI+)calcd for C12H18N2191.1543(M+H)+,found 191.1542.
1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ7.37–7.28(m,5H),7.24(tt,J＝5.7,3.1Hz,1H),3.52–3.44(m,2H),2.98–2.90(m,2H),2.86(ddd,J＝9.5,6.3,2.9Hz,1H),2.76(ddd,J＝11.2,7.5,2.4Hz,2H),2.06–1.94(m,1H),1.66(t,J＝10.5Hz,1H),1.00(d,J＝6.3Hz,3H).
13C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ138.06,129.14,128.11,126.92,63.38,61.33,53.66,50.46,45.88,19.98.
化合物e6的制备(e5→e6)：取17.85g(87.0mmol)e5至250mL圆底烧瓶，加入75mL二氯甲烷溶解，在冰浴条件下搅拌，加入9.67g(95.7mmol)三乙胺，滴加(Boc)2O(二碳酸二叔丁酯)溶液，20.86g(95.7mmol)溶于75mL二氯甲烷，滴加完成后室温反应过夜。TLC检测(PE:EA＝5:1展开)原料消失，加水100mL，用100mL二氯甲烷萃取两次，合并的有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸除溶剂，粗重25.00g。经柱层析(PE:EA＝10:1→2:1)纯化，得淡黄色液体16.60g，收率62.41％。
化合物e1的制备(e6→e1)：取16.30g(53.3mmol)e6至250mL圆底烧瓶中，加入甲醇150mL溶解，加入Pd/C(钯碳催化剂)1.6g和Pd(OH)20.8g，加入8滴冰醋酸，置换气体3次，在H2下室温搅拌4～8h(优选为5h)。TLC检测(EA:MeOH＝5:1展开)反应完全，过滤，母液减压蒸除溶剂，得黄白蜡样固体10.60g，收率92.10％。
化合物e1的质谱、核磁共振氢谱分析和碳谱分析，如图14～16所示，数据如下：
m.p.85-87℃.HRMS-ESI calcd for C10H21N2O3[M+H]+217.1552,found 217.1553.
1H-NMR(600MHz,Chloroform-d)δ4.00(s,1H),3.84(d,J＝5.4Hz,3H),3.17(d,J＝12.1Hz,2H),3.08(s,2H),2.95(d,J＝11.1Hz,1H),2.85(dd,J＝12.2,4.2Hz,1H),2.69(td,J＝12.1,3.7Hz,1H),1.43(s,9H).
13C-NMR(151MHz,Chloroform-d)δ155.50,80.11,63.80,51.23,46.99,45.63,28.49.
经分析，化合物e1结构式为：
为(R)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
化合物10制备方法如下：
取200.0mg(0.8mmol)化合物a4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入367mg(1.7mmol)化合物e1，60℃加热反应。TLC检测(DCM:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.71g。经柱层析(DCM:MeOH＝20:1)纯化，得白色固体111.0mg，收率29.29％。
对化合物10进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，其红外光谱、氢谱以及碳谱和DEPT135度的谱图如图62～65，具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3387,1667,1487,1465,1416,1281,1166,1129,859,799,721.
m.p.71-73℃.HRMS-ESI calcd for C25H33FN3O4[M+H]+458.2455,found--.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.14(t,J＝6.8Hz,1H),7.98(ddd,J＝9.2,6.6,2.6Hz,1H),7.70–7.58(m,2H),7.45(dt,J＝16.1,7.7Hz,1H),7.28(dtd,J＝20.9,9.2,2.6Hz,1H),7.18(td,J＝7.4,4.8Hz,1H),5.13–4.60(m,2H),4.49(dd,J＝14.9,3.0Hz,1H),4.34–4.23(m,1H),3.99(dd,J＝77.4,27.9Hz,2H),3.84–3.67(m,2H),3.47(s,1H),3.23–2.93(m,2H),2.78(dd,J＝72.6,7.9Hz,1H),2.47–2.29(m,2H),2.09–1.90(m,2H),1.40(s,9H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.52(d,J＝232.3Hz),141.71,137.40,126.09,122.45(d,J＝9.7Hz),121.68(d,J＝4.2Hz),120.51,118.53,112.99(d,J＝24.7Hz),111.06(d,J＝9.1Hz),110.34,105.60(d,J＝23.7Hz),78.75,67.63,66.69,62.10,53.88,53.25,53.04,52.18,47.69,28.10.
经分析，化合物10化学式为C25H32FN3O4，分子量为457.2377，其结构式为
为(2S)-4-(3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-羟基丙基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。
实施例11化合物11的合成与表征
取201.0mg(0.4mmol)化合物10至10mL封管中，加入2N盐酸-二氧六环5mL，室温搅拌反应2小时。TLC检测(DCM:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.21g。经制备板纯化，得白色固体120.0mg，收率76.92％。
对化合物11进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，其红外光谱、氢谱以及碳谱和DEPT135度的谱图如图66～69，具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3311,2925,1629,1585,1486,1463,1322,1282,886,799,721.
m.p.35-37℃.HRMS-ESI calcd for C25H33FN3O4[M+H]+458.2455,found--.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(dd,J＝9.2,2.5Hz,1H),7.69–7.57(m,2H),7.45(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(td,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.31(s,1H),5.12(s,1H),4.45(dt,J＝14.8,4.5Hz,1H),4.31(dd,J＝14.9,6.7Hz,1H),4.07(s,1H),3.53(s,2H),3.47(dt,J＝18.3,5.6Hz,1H),3.13–3.02(m,2H),2.95–2.77(m,3H),2.47–2.34(m,2H),2.30(q,J＝11.0,10.0Hz,1H),2.16(q,J＝12.5,12.1Hz,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.54(d,J＝232.6Hz),141.53,137.23,126.13,122.46(d,J＝9.9Hz),121.69(d,J＝4.1Hz),120.60,118.62,113.06(d,J＝25.3Hz),110.98(d,J＝9.0Hz),110.22,105.70(d,J＝23.7Hz),67.16,61.36,59.81,56.09,54.99,50.29,47.53,42.99.
经分析，化合物11化学式为C20H24FN3O2，分子量为357.1853，其结构式为
为1-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-3-((S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-基)-2-丙醇。
实施例12化合物12的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入247.0mg(1.5mmol)色胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.30g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得米黄色固体63.0mg，收率38.89％。
对化合物12进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图70～74，红外光谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱图具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3285,1735,1492,1470,1146,1124,854,797,787,732.
m.p.130-132℃.HRMS-ESI calcd for C25H24F2N3O[M+H]+420.1887,found420.1867.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),7.99(dd,J＝9.2,2.7Hz,2H),7.59(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.52(d,J＝7.9Hz,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.29–7.22(m,2H),7.15(s,1H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),5.01(s,1H),4.45(dd,J＝14.9,4.8Hz,1H),4.27(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),3.95(s,1H),2.90–2.75(m,4H),2.60(ddd,J＝46.7,11.8,5.6Hz,2H),1.88(brs,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.27(d,J＝232.7Hz),138.04,136.24,127.29,122.60,121.89(d,J＝10.0,4.2Hz),120.79,118.31,118.10,113.78(d,J＝25.4Hz),112.62,111.32,111.13(d,J＝9.0Hz),105.99(d,J＝23.8Hz),68.94,52.92,50.36,47.35,25.58.
经分析，化合物12化学式为C25H23F2N3O，分子量为419.1809，其结构式为
为1-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-3-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
实施例13化合物13的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入212.0mg(1.5mmol)对羟基苯乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.30g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体51.0mg，收率33.33％。
对化合物13进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图75～79，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2934,1586,1494,1471,1269,1247,1189,1148,849,788.
m.p.143-145℃.HRMS-ESI calcd for C23H23F2N2O2[M+H]+397.1728,found397.1709.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),7.99(dd,J＝9.2,2.7Hz,2H),7.59(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.29(td,J＝9.1,2.7Hz,2H),7.00(d,J＝7.9Hz,2H),6.67(d,J＝7.9Hz,2H),5.01(s,1H),4.43(dd,J＝14.9,4.8Hz,1H),4.25(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),3.93(t,J＝5.8Hz,1H),2.72–2.62(m,2H),2.63–2.56(m,3H),2.53(d,J＝6.2Hz,1H),1.96(s,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.28(d,J＝232.9Hz),155.41,138.03,130.44,129.44,121.90(dd,J＝9.8,4.2Hz),114.99,113.80(d,J＝25.5Hz),111.14(d,J＝9.0Hz),106.00(d,J＝23.8Hz),68.89,52.89,51.54,47.35,35.14.
经分析，化合物13化学式为C23H22F2N2O2，分子量为396.1649，其结构式为
为4-(2-((3-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-2-羟基丙基)氨基)乙基)苯酚。
实施例14化合物14的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入215.0mg(1.5mmol)对氟苯乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.25g。经柱层析(PE:EA＝1:1)纯化，得白色固体36.0mg，收率23.38％。
对化合物14进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图80～84，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2819,1511,1491,1470,1145,938,825,788.
m.p.114-116℃.HRMS-ESI calcd for C23H22F3N2O[M+H]+399.1684,found399.1658.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.58(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.32–7.24(m,4H),7.10(t,J＝8.9Hz,2H),5.03(s,1H),4.43(dd,J＝14.9,4.8Hz,1H),4.25(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),3.93(t,J＝5.9Hz,1H),2.76–2.68(m,4H),2.60(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),2.55–2.52(m,1H),1.92(s,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ161.10(d,J＝241.1Hz),156.72(d,J＝232.8Hz),138.46,137.08(d,J＝2.9Hz),130.80(d,J＝7.8Hz),122.34(dd,J＝10.0,4.3Hz),115.26(d,J＝21.0Hz),114.23(d,J＝25.4Hz),111.55(d,J＝9.0Hz),106.46(d,J＝23.8Hz),69.33,53.30,51.62,47.78,35.52.
经分析，化合物14化学式为C23H21F3N2O，分子量为398.1606，其结构式为
为1-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-3-((4-氟苯乙基)氨基)-2-丙醇。
实施例15化合物15的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入168.8mg(1.5mmol)苯乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:2展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.25g。经溶剂(PE:EA＝10:1)5mL重结晶，得白色固体75.0mg，收率51.02％。
对化合物15进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图85～89，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2846,1585,1491,1478,1298,1181,1142,936,855,784.
m.p.91-93℃.HRMS-ESI calcd for C23H23F2N2O[M+H]+381.1778,found381.1757.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.59(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.33–7.26(m,4H),7.25–7.20(m,2H),7.18(t,J＝7.3Hz,1H),5.03(s,1H),4.43(dd,J＝14.9,4.8Hz,1H),4.26(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),3.94(s,1H),2.78–2.67(m,4H),2.60(dd,J＝11.8,5.2Hz,1H),2.53(dd,J＝11.8,6.0Hz,1H),1.87(s,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.27(d,J＝232.8Hz),140.48,138.02,128.41(d,J＝65.3Hz),125.80,121.89(dd,J＝10.0,4.3Hz),113.79(d,J＝25.4Hz),111.12(d,J＝9.1Hz),106.01(d,J＝23.9Hz),68.89,52.87,51.22,47.33,36.02.
经分析，化合物15化学式为C23H22F2N2O，分子量为380.1700，其结构式为
为1-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-3-(苯乙基氨基)-2-丙醇。
实施例16化合物16的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入258.0mg(1.5mmol)2-甲氧基苯氧基乙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.24g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体77.0mg，收率46.95％。
对化合物16进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图90～94，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3375,1586,1508,1493,1471,1255,1221,1126,865,747.
m.p.93-95℃.HRMS-ESI calcd for C24H25F2N2O3[M+H]+427.1833,found427.1815.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.65(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.30(td,J＝9.2,2.6Hz,2H),6.96(td,J＝7.4,1.9Hz,2H),6.88(dtd,J＝17.0,7.4,1.8Hz,2H),5.10(s,1H),4.46(dd,J＝14.9,4.9Hz,1H),4.29(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),4.06–3.96(m,3H),3.73(s,3H),2.87(t,J＝5.4Hz,2H),2.66(dd,J＝11.8,4.9Hz,1H),2.58(dd,J＝11.8,6.2Hz,1H),2.23(s,1H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.77(d,J＝232.7Hz),149.61,148.54,138.51,122.39(dd,J＝10.0,4.3Hz),121.48,121.17,114.30(d,J＝25.4Hz),114.02,112.65,111.63(d,J＝9.0Hz),106.50(d,J＝23.8Hz),69.38,68.73,55.90,53.33,48.95,47.76.
经分析，化合物16化学式为C24H24F2N2O3，分子量为426.1755，其结构式为
为1-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-3-((2-(2-甲氧基苯氧基)乙基)氨基)-2-丙醇。
实施例17化合物17的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入202.0mg(1.5mmol)3-丁氧基丙胺，60℃加热反应。TLC检测(PE:EA:MeOH＝5:20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.36g。经柱层析(PE:EA＝1:2)纯化，得白色固体52.0mg，收率34.44％。
对化合物17进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图95～99，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3261,2931,2863,2820,1586,1492,1475,1146,939,844,789.
m.p.94-96℃.HRMS-ESI calcd for C22H29F2N2O2[M+H]+391.2197,found391.2179.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.64(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.31(td,J＝9.1,2.6Hz,2H),5.02(s,1H),4.45(dd,J＝14.9,4.7Hz,1H),4.27(dd,J＝14.9,6.9Hz,1H),3.94(p,J＝5.7Hz,1H),3.40(t,J＝6.4Hz,2H),3.33(t,J＝6.5Hz,3H),2.59–2.51(m,3H),1.93(s,1H),1.64(p,J＝6.6Hz,2H),1.51–1.41(m,2H),1.30(h,J＝7.4Hz,2H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.76(d,J＝232.8Hz),138.53,122.38(dd,J＝10.0,4.3Hz),114.26(d,J＝25.4Hz),111.61(d,J＝9.0Hz),106.50(d,J＝23.9Hz),70.13,69.39,68.87,53.68,47.89,47.19,31.83,30.29,19.37,14.25.
经分析，化合物17化学式为C22H28F2N2O2，分子量为390.2119，其结构式为
为1-((3-丁氧基丙基)氨基)-3-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
实施例18化合物18的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入116.0mg(1.5mmol)S-2-氨基丙醇，60℃加热反应。TLC检测(DCM:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.33g。经二氯甲烷重结晶纯化，得白色固体80.0mg，收率62.01％。
对化合物18进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图100～104，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3300,2968,1585,1494,1478,1147,1099,938,865,788.
m.p.130-132℃.HRMS-ESI calcd for C18H21F2N2O2[M+H]+335.1571,found335.1554.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.7Hz,2H),7.64(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.32(td,J＝9.1,2.7Hz,2H),5.05(s,1H),4.52(s,1H),4.45(dd,J＝14.9,4.9Hz,1H),4.28(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),3.95(p,J＝5.5Hz,1H),3.71(h,J＝6.1Hz,1H),2.57(dd,J＝11.8,4.9Hz,1H),2.54–2.51(m,1H),2.41(d,J＝5.8Hz,2H),2.05(s,1H),1.05(d,J＝6.2Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.76(d,J＝232.8Hz),138.50,122.38(dd,J＝10.0,4.3Hz),114.29(d,J＝25.5Hz),111.61(d,J＝8.9Hz),106.51(d,J＝23.9Hz),69.29,65.70,57.89,53.50,47.76,22.04.
经分析，化合物18化学式为C18H20F2N2O2，分子量为334.1493，其结构式为
为1-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-3-((2-羟基丙基)氨基)-2-丙醇。
实施例19化合物19的合成与表征
取100.0mg(0.4mmol)化合物b4至10mL封管中，加入无水乙醇5mL，加入116.0mg(1.5mmol)D-氨基丙醇，60℃加热反应。TLC检测(DCM:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.35g。经二氯甲烷重结晶纯化，得白色固体97.0mg，收率75.19％。
对化合物19进行红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱核磁分析和DEPT谱分析，如图105～109，红外光谱、质谱、氢谱以及碳谱具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:2977,1490,1473,1300,1177,1149,1049,846,793,786.
m.p.136-138℃.HRMS-ESI calcd for C18H21F2N2O2[M+H]+335.1571,found335.1558.
1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,2H),7.65(dd,J＝9.0,4.3Hz,2H),7.32(td,J＝9.1,2.7Hz,2H),5.07(s,1H),4.58(s,1H),4.44(dd,J＝14.9,4.5Hz,1H),4.28(dd,J＝14.9,7.1Hz,1H),3.92(s,1H),3.30(dd,J＝10.7,4.8Hz,1H),3.22(d,J＝7.4Hz,1H),2.67(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H),2.55(h,J＝6.3Hz,1H),2.49–2.43(m,1H),1.97(s,1H),0.88(d,J＝6.3Hz,3H).
13C-NMR(151MHz,DMSO-d6)δ156.76(d,J＝232.8Hz),138.52,122.38(dd,J＝9.9,4.1Hz),114.26(d,J＝25.4Hz),111.70(d,J＝9.0Hz),106.49(d,J＝23.8Hz),69.92,65.91,55.37,51.29,48.10,17.71.
经分析，化合物19化学式为C18H20F2N2O2，分子量为334.1493，其结构式为
为2-((3-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-2-羟基丙基)氨基)-1-丙醇。
实施例20化合物20的合成与表征
取200.0mg(1.2mmol)化合物β-咔啉至10mL封管中，加入73.0mg(1.3mmol)碱性催化剂(如KOH，在其他实施方式中，碱性催化剂还可以为NaOH、LiOH或Ba(OH)2，或者三乙胺、吡啶、2,2-二羟甲基丙酸中的一种或多种)，有机溶剂(本实施例中采用无水DMF，在其他实施方式中有机溶剂还可以为DMSO等非质子性的溶剂)5mL，加入220.0mg(2.4mmol)环氧氯丙烷，室温反应。TLC检测(DCM:EA＝1:1展开)原料消失，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.56g，不经纯化直接用于下一步反应。取粗产品200mg，加入无水乙醇5mL，加入284.0mg(1.8mmol)色胺，60℃加热反应。TLC检测(EA:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.12g。经制备板纯化，得米黄色固体44.0mg，收率26.99％。
对化合物20进行红外光谱、质谱、氢谱分析，如图110～图112，具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3051,2921,1625,1454,1329,1217,1033,742,730.
m.p.85-87℃.HRMS-ESI calcd for C24H25N4O[M+H]+385.2028,found 385.2025.
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H),9.07(s,1H),8.36(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),8.12(d,J＝5.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.62–7.47(m,2H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),7.15(d,J＝2.2Hz,1H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),5.14(s,1H),4.57(dd,J＝14.8,4.4Hz,1H),4.41(dd,J＝14.8,7.1Hz,1H),4.05(t,J＝5.9Hz,1H),2.87(s,4H),2.78–2.62(m,2H).
经分析，化合物20化学式为C24H24N4O，分子量为384.1950，其结构式为
为1-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-3-(9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-9-基)-2-丙醇。
实施例21化合物21的合成与表征
取200.0mg(1.2mmol)化合物α-咔啉至10mL封管中，加入73.0mg(1.3mmol)碱性催化剂(本实施例为KOH，在其他实施方式中，碱性催化剂还可以为NaOH、LiOH或Ba(OH)2，或者三乙胺、吡啶、2,2-二羟甲基丙酸中的一种或多种)，有机溶剂(本实施例中采用无水DMF，在其他实施方式中，有机溶剂还可以为DMSO等非质子性的溶剂)5mL，加入220.0mg(2.4mmol)环氧氯丙烷，室温反应。TLC检测(DCM:EA＝20:1展开)原料消失，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.50g，不经纯化直接用于下一步反应；取粗产品100mg，加入无水乙醇5mL，加入140.0mg(0.9mmol)色胺，60℃加热反应。TLC检测(EA:MeOH＝20:1展开)反应完全，加水，乙酸乙酯萃取，有机相经sat.NaCl水洗，anhyd.Na2SO4干燥，减压蒸馏除溶剂，得粗产品0.06g。经制备板纯化，得米黄色固体16.0mg，收率17.39％。
对化合物21进行红外光谱、质谱、氢谱分析，如图113～图115，具体数据如下：
IR(KBr),ν,cm-1:3359,3293,2920,1592,1573,1464,1415,1213,772,732.
m.p.107-109℃.HRMS-ESI calcd for C24H25N4O[M+H]+385.2028,found385.2020.
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.88(s,1H),8.56(d,J＝7.6Hz,1H),8.45(d,J＝4.5Hz,1H),8.21(d,J＝7.7Hz,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.52(t,J＝8.5Hz,2H),7.34(d,J＝8.1Hz,1H),7.31–7.21(m,2H),7.16(d,J＝2.2Hz,1H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),5.62(s,1H),4.50(d,J＝5.7Hz,2H),4.33(s,1H),2.95(ddt,J＝27.8,21.8,9.8Hz,6H).
经分析，化合物21化学式为C24H24N4O，分子量为384.1950，其结构式为
为1-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)氨基)-3-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-9-基)-2-丙醇。实施例22化合物22的合成与表征
取120.6mg(0.5mmol)中间体a4至10mL封管中，加入异丙醇3mL，加入156mg(0.8mmol)e5，80℃回流加热反应过夜。TLC检测(PE:EA＝5:1展开)反应完全，减压蒸馏除溶剂，经柱层析(DCM:MeOH＝30:1)纯化，得白色固体179.7mg，即化合物22，收率83％。对化合物22进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱分析，其质谱图、核磁共振氢谱图、核磁共振碳谱图依次如图116～118所示，其中，质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的表征数据如下具体数据如下：
HRMS-ESI(m/z)C27H30FN3O[M+H]+计算值：432.2446，实测值：432.2427；
半固半液.1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ7.90(dd,J＝7.8,3.3Hz,1H),7.61(dt,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.39–7.32(m,2H),7.29(ddd,J＝8.9,4.2,1.2Hz,1H),7.22–7.05(m,7H),4.34(s,1H),4.25–4.06(m,3H),3.39–3.24(m,2H),2.78–2.24(m,7H),2.22–1.99(m,2H),0.86(dd,J＝30.0,6.3Hz,3H).
13C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ157.29(d,J＝235.5Hz),141.59,137.20,129.04,128.95,128.20,127.17,126.27,123.24(d,J＝9.4Hz),122.43,120.44,119.03(d,J＝2.0Hz),113.36(d,J＝25.5Hz),109.72(d,J＝8.9Hz),109.24,105.82(d,J＝23.7Hz),67.49,62.41,59.89,58.37,56.50,55.01,52.52,51.16,47.36.
经分析，合成的化合物22的结构式为
为1-((S)-4-苄基-2-甲基哌嗪-1-基)-3-(3-氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
上述反应的反应式如下所示：
实施例23化合物23的合成与表征
取259.3mg(1.0mmol)中间体b4至10mL封管中，加入异丙醇25mL，加入415mg(2.2mmol)e5，80℃回流加热反应过夜。TLC检测(PE:EA＝5:1展开)反应完全，减压蒸馏除溶剂，经柱层析(DCM:MeOH＝30:1)纯化，得440.6mg棕黄色半固半液状产物，即化合物23，收率98％。对化合物23进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱分析，其质谱图、核磁共振氢谱图、核磁共振碳谱图依次如图119～121所示。其中，质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的表征数据如下具体数据如下：
HRMS-ESI(m/z)C27H29F2N3O[M+H]+计算值：450.2351，实测值：450.2342；
半固半液.1H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ7.64(dd,J＝8.7,2.5Hz,2H),7.37(dd,J＝8.9,4.1Hz,2H),7.32–7.24(m,5H),7.19(td,J＝8.9,2.5Hz,2H),4.76(s,1H),4.34–4.17(m,3H),3.52–3.40(m,2H),2.88(dd,J＝25.7,11.7Hz,1H),2.79–2.70(m,2H),2.68–2.59(m,1H),2.59–2.44(m,2H),2.41(dd,J＝13.1,9.2Hz,1H),2.22(s,1H),2.02(d,J＝17.1Hz,1H),1.25(t,J＝7.1Hz,1H),1.04–0.94(m,3H).
13C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ157.16(d,J＝236.1Hz),138.03,129.04,128.28,127.28,122.76(dd,J＝9.5,4.1Hz),114.19(d,J＝25.5Hz),110.03(d,J＝8.9Hz),106.03(d,J＝23.8Hz),67.48,65.63,62.35,60.36,58.69,58.27,56.74,52.23,47.75.
经分析，合成的化合物23的结构式为
为1-((S)-4-苄基-2-甲基哌嗪-1-基)-3-(3,6-二氟-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇。
上述反应的反应式如下所示：
在化合物20和化合物21制备过程中，先以α或β-咔啉与环氧氯丙烷反应，TLC检测原料消失，生成一个荧光较强极性较原料小的主要产物点，DCM:EA＝1:1展开，Rf＝0.65，柱层析纯化时，10个柱体积的纯甲醇洗脱TLC检测也没有对应化合物比移值。这一现象说明环氧化的α或β-咔啉在硅胶中可能发生了变化。因此，通过简单萃取的后处理，不纯化直接用于下一步胺类化合物的亲核取代反应，最后薄层制备板纯化得到目标产物化合物20和化合物21。
值得说明的是，在化合物1～21制备过程中，反应得到的有机相经sat.NaCl水洗后经干燥剂无水Na2SO4干燥，本其他实施例中，干燥剂还可以为无水硫酸镁、无水碳酸钾、无水氯化钙等干燥剂中的一种或多种。
试验1化合物1～21对DNMT1抑制试验
1、试验原理
基于DNMT1的催化机理，采用大肠杆菌原核表达系统，表达DNMT1催化活性区蛋白质，建立基于检测放射性同位素原理的DNMT1抑制剂的高通量分子水平的初级筛选模型。标记甲基化供体(SAM)上甲基的H为3H，检测底物DNA上得到的甲基的放射性同位素3H的含量，通过计算DNMT1的活性，得到检测样品对DNMT1的抑制率(IC50)。
2、试验方法
依照ELISA试剂盒说明书，将DNMT1进行溶解，然后稀释200μM，待测化合物稀释成一系列浓度。分别设空白孔、标准孔、待测样品孔、对照组(先导化合物)。空白孔加样品稀释液100μL，剩余的孔分别加标准品或待测化合物100μL，轻轻震荡混匀，酶标板用封板胶封住反应孔，37℃孵育2h。每孔添加100μL生物素化抗体工作液，用新封板胶封住反应孔，37℃孵育箱孵育60min。洗板5次，每孔加入100μL酶结合工作液[3H-SAM]，然后每孔加显色底物溶液100μL，37℃避光显色15min后，加入终止液100μL/孔，混匀，于450nm波长条件下测定各孔的光密度(OD值)。
其中先导化合物申请人前期发现的对DNMT1具有选择性的抑制剂DC_05，其结构式如下：
3、试验结果
为了测试21个DNMT1抑制剂对human DNMT1抑制率，采用ELISA法，以DC_05为对照药进行测试，结果如表1所示。
表1化合物1～21咔唑衍生物对human DNMT1的抑制率情况
注：“-”标记的化合物，提高浓度抑制率只能达到60％左右，可能是化合物溶解性不行，所以测出的IC50曲线达不到饱和，拟合出的数据存在问题。
21个化合物在50μM和100μM浓度下的抑制率见图125和图126，由图中可知：
在50μM的相同浓度下，对于单分子咔唑母核Inh％＞43，抑制率优于对照药物的化合物有化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6、化合物7、化合物12、化合物13、化合物14、化合物15、化合物17、化合物18、化合物19和化合物20。
在100μM的相同浓度下，对于单分子咔唑母核Inh％＞88，抑制率优于对照药物的化合物有化合物1、化合物12、化合物13以及化合物19。因此，在综合两个不同梯度浓度下获得优于对照物的初筛化合物总计4个，化合物1、化合物12、化合物13和化合物19。
而且，与背景技术中所提到现有技术溴取代单咔唑类衍生物相比而言，化合物14(IC50为6.0)、化合物15(IC50为7.7)和化合物19(IC50为9.2)对DNMT1抑制活性要优于1-((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)胺)-3-(3,6-二溴-9H-咔唑-9-基)-2-丙醇(IC50为10.0)和4-(2-((3-(3-溴-9H-咔唑-9-基)-2-羟丙基)胺)乙基)-苯酚(IC50为9.6)；提示：
(1)在咔唑母核3、6位引入氟原子，能显著提高单咔唑类衍生物对DNMT1抑制活性；
(2)即使在咔唑母核侧链上用对氟苯乙基取代(化合物14)，其对DNMT1的抑制活性要优于该现有技术中以对羟基苯乙基所取代的4-(2-((3-(3-溴-9H-咔唑-9-基)-2-羟丙基)胺)乙基)-苯酚。
试验2化合物1～19对DNA甲基转移酶酶选择性试验
1、试验原理
除了DNMT1，细胞中仍有许多其它能和SAM结合的甲基转移酶来进行甲基化反应，通过测定氟取代目标化合物对其它重要甲基转移酶抑制活性来判断选择专一性，包括DNMT3A/3L、DNMT3B/3L以及其它腺苷甲硫氨酸依赖酶，如EZH2(Enhancer ofZeste Homolog2,果蝇zeste基因增强子的人类同源物)、LSD1、G9a。
2、试验方法
DNMT3A/DNMT3L和DNMT3B/DNMT3L放射性甲基化抑制测定与DNMT1类似，使用10nM合成生物素化DNA寡核苷酸作为底物。然后在加入底物和[3H]-SAM前，将60nM DNMT3A/3L或25nM DNMT3B/3L与各种化合物浓度在室温下预孵育15min。在室温下孵育4h后，将反应体系转移至链霉抗生物素蛋白包被的384孔微板，然后在室温下孵育1h。通过液体闪烁计数测定放射性。
3、试验结果
除了DNMT1，还有其它腺苷甲硫氨酸依赖酶(AdoMet-dependent enzymes)具有相似催化结构，如DNMT3A/3L、DNMT3B/3L、EZH2、LSD1以及G9a，通过测定各个甲基转移酶抑制活性来判断其中的19个化合物酶选择专一性，结果如表2所示，结果显示：(1)19个化合物中大多数化合物对EZH2和G9a几乎没有抑制活性(Inh％＜50)，但对另外3种酶有不同程度的抑制活性；(2)化合物1～19这类单分子咔唑衍生物主要对DNMT3A/3L具有较强的抑制活性，只有化合物1、化合物12、化合物13对LSD1有抑制活性。
表2化合物1～19测试DNA甲基转移酶酶选择性试验结果
在活性筛选的基础上，获得活性高于对照物的4个化合物：化合物1、化合物12、化合物13、化合物19，对其进行酶选择性比较，结果如图127所示，由图中得知：1)在50μM浓度下，单分子咔唑衍生物化合物1、化合物12、化合物13对DNMT3A/3L、LSD1两种酶有一定抑制活性，但相对于DNMT1抑制活性偏低，而对DNMT3B/3L、EZH2和G9a几乎没有抑制活性；2)化合物19对以上5种酶都没有显著活性。
试验3咔唑类衍生物对抑制癌细胞增值试验
1、试验原理
MTT：化学名为溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑，是一种可接受氧原子的淡黄色染料，可直接加入到细胞培养基中，活细胞的线粒体在能量代谢过程当中产生的琥珀酸脱氧酶可以将MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶状产物甲瓒沉淀。在细胞内和细胞周围，死细胞不能进行此还原反应。甲瓒生成量在通常情况下与活细胞数成正比。用DMSO溶解MTT所产生的结晶，用酶标仪在490nm波长附近处测定光吸收度(OD值)，可反映活细胞的数量和代谢活力，并由此反映细胞的存活、增殖、生长情况。
2、试验方法
种板：取对数生长期的细胞，经0.25％胰蛋白酶消化后，加入2mL培养基终止消化，吹打均匀，转移至15mL离心管，1000rpm离心3min，弃上清液，取沉淀，加入2mL培养基吹打均匀，取10μL细胞悬液用血细胞计数板计数，用培养液将细胞悬液稀释至5×104个/mL。吹打均匀后，96孔板每孔接种细胞悬液100μL(细胞约5000个，细胞数要看细胞生长情况定)，共6个复孔，边缘孔加入PBS缓冲液100μL，防止边缘效应(96孔板的边缘孔水分蒸发比较快)。在37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
给药：将旧培养液吸除，每孔加入100μL药液。分为3组：空白(加培养液)、不同浓度的化合物组，阳性药组，每组6个复孔。继续培养24、48和72h。
加MTT：每孔加入浓度为5mg/mL的MTT溶液10μL(实际浓度为5μg/mL)，继续于培养箱孵育4h。去除上清液，每孔加入1～1.5mL DMSO，置微量振荡器震荡10min，使结晶彻底溶解。于酶标仪490nm处测定OD值。
根据OD值计算化合物对细胞的抑制率：细胞生长抑制率IC50％＝(空白对照孔OD值-给药孔OD值)/空白对照孔OD值×100％。
3、试验结果
为了测试化合物能否抑制肿瘤细胞增殖，通过MTT法将50μM浓度的化合物1-21分别作用于人结肠癌细胞HCT116、胃癌细胞MNK-45、人肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2四种癌细胞24、48、72h三个时间。
通过MTT法将化合物22-23按照不同梯度分别作用于RPMI-8226和Karpas299两种癌细胞72h，测定其IC50值。
结果如下：
(1)对HCT116癌细胞的抑制率
将50μM浓度的不同化合物作用于HCT116癌细胞24、48、72h三个时间，数据结果如表3所示，结果显示，化合物1、化合物12、化合物13、化合物17对HCT116敏感，细胞增殖抑制率随着时间增加显示出较强的抑制率。
表3对50μM HCT116和50μM MNK-45的抑制率
(2)对MNK-45癌细胞的抑制率
将50μM浓度的不同化合物作用于MNK-45癌细胞24h、48h、72h三个时间，数据结果如表3所示，结果显示，化合物1、化合物12、化合物13、化合物19等单分子咔唑衍生物对MNK-45不敏感。
(3)对A549癌细胞的抑制率
将50μM浓度的不同化合物作用于A549癌细胞24h、48h、72h三个时间，数据结果如表4所示，结果显示，化合物1、化合物12、化合物13、化合物14对A549敏感，细胞增殖抑制率随着时间增加显示出较强的抑制率。
表4Inh％at 50μMA549和50μM HepG2
(4)对HepG2癌细胞的抑制率
将50μM浓度的不同化合物作用于HepG2癌细胞24h、48h、72h三个时间，数据结果如表4所示，结果显示，除了化合物6、化合物9、化合物16对肝癌细胞没有很强增殖抑制作用外，剩下的化合物都有很强的活性，对HepG2敏感显示出对此类细胞的专属性。化合物1、化合物12、化合物13、化合物19与酶抑制率活性抑制，细胞增殖抑制率随着时间增加显示出较强的抑制率。
(5)对RPMI-8226和Karpas299两种癌细胞的IC50
化合物22和23对RPMI-8226和Karpas299两种癌细胞的相对IC50值如表5所示。
表5对RPMI-8226和Karpas299两种癌细胞的相对IC50(uM)值
综上所述，本发明获得4个酶抑制活性提高的化合物：化合物1、化合物12、化合物13、化合物19；相比于DNMT1，单分子咔唑衍生物具有选择性，其中化合物19活性低于其他3个化合物，但选择性和活性优于对照化合物DC_05。本发明获得的咔唑衍生物对多种癌细胞有抑制增殖活性，并对HepG2具有更高的选择性，但化合物19对MNK-45没有抑制增殖活性，化合物22和化合物23对RPMI-8226和Karpas 299的IC50值在10μM水平。
本发明合成的氟取代单咔唑类化合物对DNMT1表现出抑制活性，这可能与氟原子对苯环电子云影响和柔性侧链的多样性有关，氟取代咔唑类似物可以调整构象通过其他机制产生更好的生物活性；此外，化合物1～19这类单分子咔唑衍生物主要对DNMT3A/3L具有较强的抑制活性，化合物1、化合物12、化合物13对LSD1有抑制活性；经体外癌细胞增殖抑制试验表明，本发明所得到的氟取代单咔唑类化合物表现出对人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)、人胃癌细胞(MNK-45)、人肝癌细胞(HepG2)、RPMI-8226和Karpas 299的抗增殖活性。
同时，对上述系列化合物构效关系分析如下：
1、咔唑环3或3、6位上引入氟原子这一类吸电子取代基团，咔唑母核电子密度整体降低；
2、咔唑环上N-杂环取代改造，获得化合物20和化合物21，相比于DC_05，化合物在相同浓度下，抑制活性降低，表明咔唑母核杂环取代会降低化合物活性，其中，化合物21的1位氮原子(1-aza)取代活性降低非常明显，化合物20的2位氮原子(2-aza)取代活性稍有降低，说明1-aza位点修饰对活性影响较大，可能是氮原子引入影响9位氮原子电子密度使得环空间结构发生变化；
3、引入不同胺类侧链，活性最好的是具有色胺侧链的化合物，其次是含有苯乙胺类结构的化合物，最后是含有脂肪胺侧链结构的化合物；这可能与DNMT1底物结合位点胞嘧啶口袋空间结构有关，脂肪胺分子结构太小不能充分占领胞嘧啶口袋，但化合物6、化合物7、化合物18、化合物19四个脂肪胺侧链化合物仍有相对较好的活性，可能是羟基能与胞嘧啶口袋中的E1269残基形成氢键结合稳定。在苯乙胺类结构化合物中(化合物13、化合物14、化合物15)，苯环上能有氢键供体活性更好，而且苯乙胺直链变短(化合物2、化合物9)活性降低，这可能与DNMT1双结合位点距离有关。
以上试验所使用的材料来源如下：2-氯苯胺、2-氯-4-氟苯胺、对氟溴苯、醋酸钯Pd(OAc)2、叔丁醇钠NaOtBu、四氟硼酸三叔丁基膦、氢氧化钾、色胺、环丙胺、异丙胺来源于安耐吉化学试剂公司；环氧氯丙烷、二氧六环、二氯甲烷、乙酸乙酯购于天津大茂化学试剂公司；对羟基苯乙胺、苯乙胺购于韶远化学试剂公司；4-氟苯乙胺、2-甲氧基苯氧基乙胺、3-丁氧基丙胺、S-2-氨基丙醇、D-氨基丙醇、(R)-β-甲基苯乙胺盐酸盐、对氟苄胺购于Accela公司；α-咔啉、β-咔啉购于上海毕得医药公司；丙酮、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、甲苯购于广州化学试剂公司；三乙胺、无水硫酸钠来源于国药集团化学试剂；叔丁胺购于阿拉丁试剂公司。
所用仪器为：RV10型旋转蒸发仪(德国IKA集团)；Bruker Ascend 600M AvanceⅢHD型核磁共振仪(CDCl3或DMSO-d6为溶剂，四甲基硅烷为内标，化学位移(δ)采用ppm为单位，化学位移的表示格式：位移+多重态(s＝singlet,d＝doublet,t＝triplet,q＝quartet,m＝multiplet,br＝broad)+耦合场数(Hz)+氢数，德国Bruker公司)；LTQOrbitrap XL型高分辨液质联用仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；PerkinElmerSpectrum Two红外光谱仪(美国珀金埃尔默公司)；XT6B型显微熔点测定仪(北京市科仪电光仪器厂)；BT 125D型电子天平(德国赛多利斯公司)；C-MAG HS7磁力搅拌器(德国I KA集团)；WFH-203B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.氟取代单咔唑类衍生物，其特征在于，为式(Ⅰ)所示化合物中的一种或多种，或式(Ⅰ)所示化合物形成的医学上可接受的可溶性盐中的一种或多种：
R1、R2均为F，R3为下述基团中的一种：
2.权利要求1所述的氟取代单咔唑类衍生物的制备方法，其特征在于，
R1＝R2＝F，
3.权利要求1所述的氟取代单咔唑类衍生物在制备DNA甲基转移酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述DNA甲基转移酶抑制剂为DNMT1抑制剂。
4.权利要求1所述的氟取代单咔唑类衍生物在制备治疗癌症药物方面的应用，其特征在于，所述癌症为肝癌、肺癌、胃癌或结肠癌。
5.一种药物组合物，其特征在于，包括至少一种权利要求1所述的氟取代单分子咔唑衍生物，和至少一种药学上可接受的赋形剂。
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