CN111208217A - 一种儿童回春颗粒的质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种儿童回春颗粒的质量检测方法。本发明提供了儿童回春颗粒的质量检测方法，质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定。所述质量检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制儿童回春颗粒的质量，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。

Description

一种儿童回春颗粒的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种儿童回春颗粒的质量控制，属于药品技术的领域。
背景技术
儿童回春颗粒。处方为：黄连、水牛角浓缩粉、羚羊角、人中白(煅)、淡豆豉、大青叶、荆芥(去粗梗)、羌活、葛根、地黄、川木通、赤芍、黄芩、前胡、桔梗、玄参(去芦)、柴胡、西河柳、升麻和牛蒡子(炒)；
制法：取以上十二味药材(1/5倍)，取羚羊角与水牛角浓缩粉，研碎成细粉备用，其余药材除黄连外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加6倍量的水，煎煮2小时；第二次加4倍量的水，煎煮1小时；第三次加3倍量的水，煎煮30分钟，合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液浓缩至相对密度1.35～1.38(80℃)的稠膏；另取黄连，加水同法煎煮三次，合并煎液，将上述两种清膏混匀，取混匀后的清膏，与适量糊精、蔗糖粉和羚羊角与水牛角混合粉混匀，加乙醇适量制成颗粒，干燥，喷以适量的香精，混匀，制成颗粒1000g，即得规格(1)。
取以上十二味药材，取羚羊角研碎成细粉备用，其余药材除水牛角浓缩粉外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加6倍量的水，煎煮2小时；第二次加4倍量的水，煎煮1小时；第三次加3倍量的水，煎煮30分钟，合并三次煎液，静置24小时后，滤取上清液浓缩至相对密度1.35～1.38(80℃)的稠膏；取水牛角浓缩粉，羚羊角粉与上述稠膏混匀，置真空干燥箱内真空干燥后取出，粉碎成细粉，加蔗糖850g制成颗粒，干燥，整粒，分装成1000袋，即得规格(2)。
性状：规格(1):本品为黄色或黄棕色颗粒；气微香，味甜，微苦。规格(2):本品为棕色至深褐色的颗粒；气微香，味微苦、略麻。功能与主治：清热解毒，透表豁痰。用于急性惊风，伤寒发热，临夜发烧，小便带血，麻疹隐现不出而引起身热咳嗽；赤痢，水泻，食积腹痛。为了更好控制儿童回春颗粒的质量，确保临床药效，本发明提供一种儿童回春颗粒的质量检测方法。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种儿童回春颗粒的质量检测方法。本发明具有准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物临床药效的特点。
本发明的技术方案：一种儿童回春颗粒的质量检测方法,所述儿童回春颗粒按照重量份计，由黄连25份、水牛角浓缩粉50份、羚羊角25份、人中白25份、淡豆豉25份、大青叶50份、荆芥50份、羌活50份、葛根50份、地黄50份、川木通50份、赤芍50份、黄芩50份、前胡75份、桔梗75份、玄参75份、柴胡37.5份、西河柳37.5份、升麻20份和牛蒡子75份按下述A或B的方法进行制备：
A、取以上二十味药材，取羚羊角与水牛角浓缩粉，研碎成细粉备用，其余药材除黄连外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮，静置，滤取上清液浓缩得稠膏；另取黄连，加水煎煮，合并煎液，将上述两种清膏混匀，取混匀后的清膏，与适量糊精、蔗糖粉和羚羊角与水牛角混合粉混匀，加乙醇适量制成颗粒，干燥，喷以适量的香精，混匀，制成颗粒1000g，即得规格Ⅰ；
B、取以上二十味药材，取羚羊角研碎成细粉备用，其余药材除水牛角浓缩粉外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮，静置，滤取上清液浓缩得稠膏；取水牛角浓缩粉，羚羊角粉与上述稠膏混匀，干燥后取出，粉碎成细粉，加蔗糖制成颗粒，干燥，整粒，分装成1000袋，即得规格Ⅱ；
其特征在于：所述儿童回春颗粒的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述黄连的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，超声处理，滤过；滤液水浴蒸干，残渣加乙醇使溶解并浓缩，作为供试品溶液；另取黄连对照药材，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7:1:2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述葛根的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加入乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述黄芩的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加甲醇，超声处理，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用稀盐酸调pH值为1.9-2.1；用乙酸乙酯振摇提取1-3次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另黄芩对照药材，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于带状同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述玄参和赤芍的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加水饱和正丁醇超声处理，滤过滤液蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取玄参对照药材加水饱和正丁醇超声处理，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成对照品溶液；吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点带状于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝5:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述牛蒡子的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，超声处理，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1-3次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡子对照药材，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述大青叶的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，加热回流，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，加乙醚振摇提取2-4次，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮＝5：4：2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述荆芥的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加石油醚，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至，作为供试品溶液；另取荆芥对照药材，加石油醚同法制成对照品药材溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯＝3：1为展开剂，展开，取出，晾干喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述黄芩的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸＝47:53为流动相；检测波长为278nm，流速1ml/min，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含黄芩苷15μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约2g规格Ⅰ、0.2g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液，超声处理，放冷，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述黄连的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸＝24:76为流动相；检测波长为265nm，流速1ml/min，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含盐酸小檗碱4μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇溶液，超声处理，放冷，用盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述葛根的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝10:90为流动相；检测波长为250nm，流速1ml/min，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备；取葛根素对照品适量，精密称定，加30％乙醇溶液制成每1ml含葛根素10μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液，超声处理，放冷，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
分别精密吸取对照品溶液10μl、规格Ⅰ供试品溶液20μl、规格Ⅱ供试品溶液10μl、注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的儿童回春颗粒的质量检测方法中，所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定；具体如下所示：
性状；规格Ⅰ:本品为黄色或黄棕色颗粒；气微香，味甜，微苦；
规格Ⅱ：本品为棕色至深褐色的颗粒；气微香，味微苦、略麻；
鉴别：(1)黄连的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过；滤液水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解并浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取黄连对照药材1g，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7:1:2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)葛根的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加入乙酸乙酯50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)黄芩的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值为1.9-2.1；用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于带状同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)玄参和赤芍的鉴别方法为：取本品内容物25g规格Ⅰ或5g规格Ⅱ，研细，加80ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取玄参对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成1mg/ml作对照品溶液；吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点带状于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝5:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)牛蒡子的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡子对照药材0.1g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)大青叶的鉴别方法为：取本品内容物30g规格Ⅰ或6g规格Ⅱ，研细，加乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，每次15ml，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，每次15ml，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮＝5：4：2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7)荆芥的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，在60-90℃下加石油醚50ml，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取荆芥对照药材0.12g，在60-90℃下加石油醚20ml同法制成对照品药材溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯＝3：1为展开剂，展开，取出，晾干喷以1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：符合中国药典颗粒剂项下的各项规定；
含量：照中国药典高效液相色谱法测定；
(8)黄芩的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸＝47:53为流动相；检测波长为278nm，流速1ml/min，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含黄芩苷15μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约2g规格Ⅰ、0.2g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-20分钟，放冷，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(9)黄连的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸＝24:76为流动相；检测波长为265nm，流速1ml/min，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含盐酸小檗碱4μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-30分钟，放冷，用1％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(10)葛根的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝10:90为流动相；检测波长为250nm，流速1ml/min，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备；取葛根素对照品适量，精密称定，加30％乙醇溶液制成每1ml含葛根素10μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-30分钟，放冷，用30％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
分别精密吸取对照品溶液10μl、规格Ⅰ供试品溶液20μl、规格Ⅱ供试品溶液10μl、注入液相色谱仪，测定，即得。
发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述质量检测方法的研究
实验例：质量检测方法方法研究
儿童回春颗粒收载于国家药品监督管理局局颁标准，现有标准号为：WS3-B-227697-1、WS3-B-227697-2，以下简称“标准1”、“标准2”。该制剂由黄连、黄芩、葛根、玄参、牛旁子、大青叶、等十二味药组成，WS3-B-227697-1(标准1)仅有黄芩薄层色谱鉴别现增加葛根素、玄参、赤芍、牛旁子、大青叶、荆芥薄层色谱鉴别及黄芩、黄连、葛根中的黄芩苷、盐酸小檗碱、葛根素含量测定，WS3-B-227697-2(标准2)中有以盐酸小檗碱、葛根素、牛蒡子药材，黄芩苷、玄参的薄层色谱鉴别及黄芩苷含量测定，现增修订盐酸小檗碱、葛根素、牛蒡子药材，黄芩苷、玄参赤芍、大青叶、荆芥薄层色谱鉴别及黄芩苷黄芩苷、盐酸小檗碱、葛根素含量测定。在2015年度国家药品标准提高工作中，国家药典会专家对儿童回春颗粒提出如下意见：
根据本次标准提高行动任务书的要求，我所对儿童回春颗粒的质量标准重新进行了修订。具体标准中各项检验项目起草说明如下：
1.【处方】未作修订
2.【制法】未作修订
3.【性状】规格1：未作修订
规格2：将原标准现状描述“本品为深深褐色颗粒”改为“本品为棕色至深褐色颗粒”。
4.【鉴别】
4.1原黄连的薄层鉴别，标准1、标准2均以盐酸小檗碱为对照品，为全面控制黄连的质量，薄层方法中增加黄连对照药材，又因标准1、标准2样品提取方法复杂，故修订黄连薄层鉴别方法，具体方法如下：
取本品2袋，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过。滤液水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解并浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材1g，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
黄连薄层方法验证：
4.1.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；黄连对照药材(0913-0301)、盐酸小檗碱(110713-20212)均来源于中国药品生物制品检验所：硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板(批号：20160908)及自制硅胶G薄层板；试剂：乙醇、正丁醇、冰醋酸均为分析纯，水为纯化水。
4.1.2专属性
取儿童回春颗粒样品、缺黄连阴性对照，按正文所述方法制得供试品溶液及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液点样、展开、置紫外光(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图1)
4.1.3耐用性
4.1.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图1、图2)
4.1.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图3、图4)
4.1.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图5、图6)
Figure BDA0002346793560000111
Figure BDA0002346793560000121
Figure BDA0002346793560000122
Figure BDA0002346793560000131
图5：湿度18％ 图6：湿度72％
载体：硅胶G预制板 4：黄连对照药材
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2) 5：贵州景诚(批号：20160126)
检视：置紫外光灯(365nm)下检视 6：贵州景诚(批号：20160910)
湿度：湿度18％：高湿72％ 7：贵州景诚(批号：20161117)
1：贵州景诚制药有限公司阴性 8：贵州汉方(批号：3646013)
2：贵州汉方药业有限公司阴性 9：贵州汉方(批号：3646014)
3：盐酸小檗碱 10：贵州汉方(批号：3646015)
4.1.4方法学考察
提取方法：取本品2袋，加乙醇50ml，研细，超声处理30分钟，滤过。滤液水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解并浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材1g，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。(见图7)
Figure BDA0002346793560000132
由分析图谱可见盐酸小檗碱，黄连药材在供试品色谱图中，斑点位置适中，分离效果好，其Rf值能达到标准检测要求，样品处理方法简便，故方法为黄连薄层鉴别方法.
4.1.5黄连薄层鉴别原标准色谱图(见图8、图9)
Figure BDA0002346793560000141
4.2原标准2【鉴别】(2)为葛根，牛蒡子的薄层鉴别,以葛根素，牛蒡子药材为对照，其展开剂中含易制毒试剂-三氯甲烷.根据国家药品标准提高行动计划任务书，尝试以毒性较小的试剂二氯甲烷替代三氯甲烷，实验过程中我们发现牛蒡子，葛根Rf值达不到标准检测要求，贵州汉方药业有限公司牛蒡子薄层鉴别中斑点较淡，故将葛根，牛蒡子分别鉴别，鉴别(2)为葛根鉴别，葛根薄层鉴别提取方法无变化、展开剂以毒性较小的试剂二氯甲烷替代三氯甲烷，修订牛蒡子薄层鉴别方法，牛蒡子薄层鉴别定为鉴别(5)，具体牛蒡子薄层鉴别方法见4.5项。葛根薄层鉴别具体方法如下：
取本品2袋，研细，加入乙酸乙酯50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:0.5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
葛根薄层方法学验证：
4.2.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；葛根素(110752-200912)均来源于中国药品生物制品检验所：硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板(批号：20160908)及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均为分析纯，水为纯化水。
4.2.2专属性
取样品、缺葛根阴性对照，按正文所述方法制得供试品溶液及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液点样、展开、置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图10)
4.2.3耐用性
4.2.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图10、图11)
4.2.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性试品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图12、图13)
4.2.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图14、图15)
Figure BDA0002346793560000151
Figure BDA0002346793560000161
Figure BDA0002346793560000162
Figure BDA0002346793560000163
4.2.4葛根展开剂考察
4.2.4.1展开剂的选择
(1)二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1)溶剂极性4.49,所得色谱图(见图16)
(2)二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:0.5)溶剂极性4.28,所得色谱图(见图17)
图16：展开剂1 图17：展开剂2
1：阴性 1：阴性
2：葛根素 2：葛根素
3：贵州汉方(批号：20160126) 3：葛根药材
4：贵州景诚(批号：20160126) 4：贵州景诚(批号：20160126)
5：贵州汉方(批号：20160126)
由上述分析图谱可见，葛根素在色谱图17中斑点位置适中，其Rf值能达到标准检测要求样品在葛根素处斑点对应，葛根药材其他斑点处无有效斑点，故葛根薄层只以葛根素为对照的薄层鉴别方法，葛根素展开剂为二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:0.5展开剂中)。
4.2.5葛根、牛蒡子薄层鉴别以葛根素展开剂色谱图(见图18、19)，牛蒡子Rf值达不到标准检测要求，故将葛根，牛蒡子分别鉴别。
Figure BDA0002346793560000171
4.3原标准2【鉴别】(3)为黄芩的薄层鉴别以黄芩苷为对照，保留原标准,同时为全面控制黄芩的质量在薄层方法中增加黄芩对照药材及黄芩苷对照，具体方法如下：
取本品2袋，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值约为2。用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于(带状)同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
黄芩薄层方法学验证：
4.3.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；黄芩药材(120955-201008)、黄芩苷(110715-201117)均来源于中国药品生物制品检验所：硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板(批号：20170216)及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、丁酮、乙醇、三氯化铁、甲酸、盐酸、乙酸乙酯均为分析纯，水为纯化水。
4.3.2专属性
取样品、缺黄芩阴性对照，按正文所述方法制得供试品溶液及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液点样、展开、喷以1％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图20)
4.3.3耐用性
4.3.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图20、图21)
4.3.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图22、图23)
4.3.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图24、图25)
Figure BDA0002346793560000181
Figure BDA0002346793560000191
Figure BDA0002346793560000192
Figure BDA0002346793560000193
Figure BDA0002346793560000201
图24：耐用性-湿度-低湿18％ 图25：耐用性-湿度-高湿72％
载体：硅胶G预制板 4：黄芩对照药材
展开剂：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1) 5：贵州景诚(批号：20160126)
检视：喷1％三氯化铁乙醇溶液检视 6：贵州景诚(批号：20160910)
温度：19℃；湿度58％ 7：贵州景诚(批号：20161117)
1：贵州景诚制药有限公司阴性 8：贵州汉方(批号：3646013)
2：贵州汉方药业有限公司阴性 9：贵州汉方(批号：3646014)
3：黄芩苷 10：贵州汉方(批号：3646015)
4.4原标准2【鉴别】(4)为玄参的薄层鉴别,以玄参药材为对照，在实验过程中发现贵州汉法药业有限公司样品无斑点，故将玄参薄层鉴别方法进行修订，同时为全面控制玄参的质量在薄层方法中增加哈巴俄苷对照，在实验过程中发现玄参的薄层鉴别方法中含有芍药苷，故将玄参的薄层鉴别与赤芍以芍药苷为对照的薄层鉴别合并为同一个鉴别方法，具体方法如下：
取样品5袋，研细，加80ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取玄参对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成1mg/ml作对照品溶液。吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点(带状)于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(5:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
玄参、赤芍薄层方法学验证
4.4.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；玄参药材(1008-9702)、哈巴俄苷(111730-200604)、芍药苷(110736-201136)均来源于中国药品生物制品检验所：硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的高效G薄层板(批号：20180203)硅胶G板(20170216)及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、正丁醇、三氯甲烷、均为分析纯，水为纯化水。
4.4.2专属性
取样品、缺玄参阴性对照，缺赤芍阴性对照、按正文所述方法制得样品及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液点样、展开、喷5％香草醛硫酸溶液105加热至斑点显色清晰检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图26)
4.4.3耐用性
4.4.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板、硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图26、图27、图28)
4.4.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图29、图30)
4.4.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图31、图32)
Figure BDA0002346793560000211
Figure BDA0002346793560000221
图27耐用性—薄层-硅胶G预制板 图28耐用性—薄层-硅胶G自制版
载体：硅胶G预制板、硅胶G自制版 6：贵州景诚(批号：20160910)
展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(5:1:0.1) 7：贵州景诚(批号：20161117)
检视：喷5％香草醛硫酸溶液、加热检视 8：贵州汉方(批号：3646013)
温度：18℃；湿度60％ 9：贵州汉方(批号：3646014)
1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性 10：贵州汉方(批号：3646015)
2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性 11：芍药苷
3：哈巴俄苷 12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性
4：玄参对照药材 13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性
5：贵州景诚(批号：20160126)
图29耐用性-温度-高温 图30耐用性-温度-低温
载体：高效G预制板 6：贵州景诚(批号：20160910)
展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(5:1:0.1) 7：贵州景诚(批号：20161117)
检视：喷5％香草醛硫酸溶液、加热检视 8：贵州汉方(批号：3646013)
温度：高温40℃；低温3℃ 9：贵州汉方(批号：3646014)
1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性 10：贵州汉方(批号：3646015)
2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性 11：芍药苷
3：哈巴俄苷 12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性
4：玄参对照药材 13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性
5：贵州景诚(批号：20160126)
图31耐用性-湿度-高湿 图32耐用性-湿度-低湿
载体：高效G预制板 6：贵州景诚(批号：20160910)
展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(5:1:0.1) 7：贵州景诚(批号：20161117)
检视：喷5％香草醛硫酸溶液、加热检视 8：贵州汉方(批号：3646013)
湿度：高湿72％；低湿18％ 9：贵州汉方(批号：3646014)
1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性 10：贵州汉方(批号：3646015)
2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性 11：芍药苷
3：哈巴俄苷 12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性
4：玄参对照药材 13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性
5：贵州景诚(批号：20160126)
4.4.4玄参原标准2样品色谱图(见图33)，如图33色谱图可见样品斑点较淡，药材分离度差；
Figure BDA0002346793560000231
4.4.5玄参提取方法考察
参考药典提取方法1：取本品2袋,研细,加甲醇50ml，浸泡1h,超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液，另取玄参对照药材2g,同法制成对照药材溶液。(见图34)
提取方法2：取本品10袋,研细,加乙醇50ml，回流1h,，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml溶解，乙醚提取2次，每次20ml，弃乙醚液，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，另取玄参对照药材2g,同法制成对照药材溶液。(见图35)
提取方法3：取样品5袋，研细、加50ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解供试品溶液。另对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，另哈巴俄苷加甲醇各制成1mg/ml作对照品溶液。(见图36)
Figure BDA0002346793560000242
Figure BDA0002346793560000241
由上述分析图谱可见提取方法3分析图谱36中样品与药材有2个斑点对应,阴性无干扰.Rf值适中，故将方法3作为玄参薄层鉴别方法。
4.4.6赤芍提取方法考察
参考药典提取方法1：取样品2袋，研细、加乙醇50ml振摇5min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另对照芍药苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图37)
提取方法2:取样品2袋，研细，加无水乙醇100ml，加热回流2小时，趁热滤过，滤液蒸干，残液加水30ml使溶解，加入氯化钠使成饱和溶液，充分搅拌，滤过。滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，加在中性氧化铝柱(200-300目，5g，内径为1～1.5cm)上，用乙酸乙酯-甲醇(3：1)混合溶液30ml洗脱，弃去洗脱液，用乙酸乙酯-甲醇(1：1)混合溶液50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。(见图38)
提取方法3:取样品5袋，研细、加50ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解供试品溶液。另对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，另哈巴俄苷加甲醇各制成1mg/ml作对照品溶液。(见图39)
Figure BDA0002346793560000251
Figure BDA0002346793560000252
由上分析图谱37中可见样品与对照药材及对照品无斑点对有应，故方法不成立.分析图谱38中样品与药材及对照品在芍药苷处斑点对应,故赤芍薄层鉴别只考虑芍药苷，但方法处理复杂，斑点较淡故不考虑次方法分析图谱39中样品在芍药苷处斑点对应,阴性无干扰，处理方法简单，Rf值适中，故将方法3作为赤芍薄层鉴别方法，又因此方法与玄参薄层鉴别一致，故将玄参，赤芍定为薄层(4)鉴别。
4.5修订标准2中牛蒡子的薄层鉴别方法,同时为全面控制牛蒡子的质量在薄层方法中增加牛蒡苷对照，具体方法如下：
取本品2袋，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡子对照药材0.1g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
牛蒡子薄层鉴别方法学验证
4.5.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；牛蒡子(120903-200608)、牛旁苷(110819-201309)、均来源于中国药品生物制品检验所：硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的高效G薄层板(批号：20180203)硅胶G板(20150708)及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯均为分析纯，水为纯化水。
4.5.2专属性
取样品、缺牛蒡子阴性对照，按正文所述方法制得样品及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液点样、展开、喷10％硫酸乙醇溶液105加热至斑点显色清晰检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图40)
4.5.3耐用性
4.5.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板和硅胶G自制板，展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图40，图41)
4.5.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图42、图43)
4.5.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于高效G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开、显色、检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图44、图45)
Figure BDA0002346793560000271
Figure BDA0002346793560000272
Figure BDA0002346793560000281
图42：耐用性-温度-高温 图43：耐用性-温度-低温
载体：高效G板 4：牛蒡子对照药材
展开剂：二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1) 5：贵州景诚(批号：20160126)
检视：喷10％硫酸乙醇溶液，加热检视 6：贵州景诚(批号：20160910)
温度：高温40℃；低温3℃ 7：贵州景诚(批号：20161117)
1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性 8：贵州汉方(批号：3646013)
2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性 9：贵州汉方(批号：3646014)
3：牛蒡苷 10：贵州汉方(批号：3646015)
图44：耐用性—湿度-高湿 图45：耐用性—湿度-低湿
载体：高效G板 4：牛蒡子对照药材
展开剂：二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1) 5：贵州景诚(批号：20160126)
检视：喷10％硫酸乙醇溶液，加热检视 6：贵州景诚(批号：20160910)
湿度：高湿72％；低湿18％ 7：贵州景诚(批号：20161117)
1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性 8：贵州汉方(批号：3646013)
2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性 9：贵州汉方(批号：3646014)
3：牛蒡苷 10：贵州汉方(批号：3646015)
4.5.4牛蒡子“原标准2”色谱图(见图46)，由下图可见样品斑点较淡；
Figure BDA0002346793560000282
4.5.5牛蒡子提取方法考察
参考药典提取方法1：取样品2袋，研细、加乙醇50ml超声处理30min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g加20ml乙醇同法制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
提取方法2：取样品2袋，研细，加乙醇乙酸乙酯50ml超声处理30min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g加20ml乙醇同法制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
提取方法3：取样品2袋，研细、加乙醇50ml回流1h，滤过滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g方法1制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
提取方法4：取样品2袋，研细、加三氯甲烷50ml回流1h，滤过滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g加20ml乙醇同方法1制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
提取方法5：取样品2袋，研细、加乙醇50ml超声处理30min，滤过滤液蒸干，残渣加20ml水溶解乙酸乙酯提取2次，每次25ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g加20ml乙醇同方法1制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
提取方法6：取样品2袋，研细、加乙醇50ml超声处理30min，滤过滤液浓缩至1ml，加中兴氧化铝2g水浴搅拌，过柱(100-200目，3g,内径1.0-1.5cm)乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另对照牛蒡子药材0.1g加20ml乙醇同法制成对照药材溶液，另取牛旁苷加乙醇制成1ml/1mg溶液作对照品溶液。(见图47)
Figure BDA0002346793560000291
Figure BDA0002346793560000301
由上述分析图谱可见提取方法5斑点清晰，分离效果好，故选择此方法作为牛蒡子的提取方法。
4.5.6牛蒡子展开剂考察
4.5.6.1展开剂的选择
(1)二氯甲烷-甲醇-水(40:8:1)溶剂极性4.06，所得色谱图(见图48)
(2)二氯甲烷-甲醇-水(20:4:1)下层溶剂为展开剂,溶剂极性4.18，所得色谱图(见图49)
(3)二氯甲烷-甲醇-水(20:5:1)下层溶剂为展开剂，溶剂极性4.32,所得色谱图(见图50)
(4)二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1)下层溶剂为展开剂，溶剂极性4.50,所得色谱图(见图51)
Figure BDA0002346793560000302
Figure BDA0002346793560000303
由上述分析图谱中可见，牛蒡子在分析图谱51中斑点位置适中，分离效果好，其Rf值能达到标准检测要求，二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1)为最佳展开溶剂。
4.5.7牛蒡子薄层板的考察
将现行质量中所用到的薄层板：硅胶G板、高效硅胶G板做对比，高效硅胶G板所得色谱图较好，选择高效硅胶G薄层板，(见图52、53)薄层板的考察。
Figure BDA0002346793560000311
4.5.8牛蒡子对照药材点样量的确定
将现行质量中按样品处理方法同法制成对照药材，点样(见图54)，药材点样量为2μl与样品斑点一：
Figure BDA0002346793560000312
4.6应国家药品标准提高行动计划本品增修订项目任务书要求，拟增加大青叶的薄层鉴别，具体方法如下：
取样品6袋，研细、加乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，每次15ml，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，，每次15ml，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷之城每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮(5：4：2)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
大青叶薄层方法学验证：
4.6.1试剂与试药
样品由生产厂家(贵州景诚制药有限公司、贵州汉方药业有限公司)提供；靛玉红(110717-200202)来源于中国药品生物制品检验所；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G板(20170216)及自制硅胶G薄层板；试剂：环己烷、丙酮、氨水、三氯甲烷、乙醚均为分析纯，水为纯化水。
4.6.2专属性
取样品、缺大青叶阴性对照，按正文所述方法制得样品及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液点样，展开，取出，晾干日光检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图55)
4.6.3耐用性
4.6.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图55，图56)
4.6.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图57、图58)
4.6.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图59、图60)
Figure BDA0002346793560000321
Figure BDA0002346793560000331
Figure BDA0002346793560000332
图57：耐用性—温度-高温 图58：耐用性—温度-低温
载体：硅胶G预制板 4：贵州景诚(批号：20160126)
展开剂：环己烷-三氯甲烷-丙酮(5：4：2) 5：贵州景诚(批号：20160910)
检视：日光检视 6：贵州景诚(批号：20161117)
温度：高温40℃；低温3℃ 7：贵州汉方(批号：3646013)
1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性 8：贵州汉方(批号：3646014)
2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性 9：贵州汉方(批号：3646015)
3：靛玉红
图59：耐用性—湿度-高湿 图60：耐用性—湿度-低湿
载体：硅胶G预制板 4：贵州景诚(批号：20160126)
展开剂：环己烷-三氯甲烷-丙酮(5：4：2) 5：贵州景诚(批号：20160910)
检视：日光检视 6：贵州景诚(批号：20161117)
湿度：高湿72％；低湿18％ 7：贵州汉方(批号：3646013)
1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性 8：贵州汉方(批号：3646014)
2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性 9：贵州汉方(批号：3646015)
3：靛玉红
4.6.4大青叶方法的建立
4.6.4.1提取方法的考察
参考药典提取方法1：取本品6袋，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取大青叶1g，加三氯甲烷20ml同法制成对照品药材溶液。(见图61)
提取方法2：取样品6袋，研细、加乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，每次15ml，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，每次15ml，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷之城每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。(见图62)
Figure BDA0002346793560000341
Figure BDA0002346793560000342
Figure BDA0002346793560000351
分析图61中样品与对在照药材及对照品无斑点对有应，故方法不成立.分析图62中样品与药材及对照品在靛玉红处斑点对应,靛玉蓝对照退色快，肉眼观察样品无靛玉蓝斑点，故大青叶薄层鉴别只考虑靛玉红。将方法2作为大青叶薄层鉴别方法，阴性无干扰，Rf值适中。
4.7应国家药品标准提高行动计划本品增修订项目任务书，拟增加荆芥的薄层鉴别。具体方法如下：
取本品2袋，加石油醚(60-90℃)50ml，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取荆芥药材0.12g，加石油醚(60-90℃)20ml同法制成对照品药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯3：1)为展开剂，展开，取出，晾干喷以1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
荆芥薄层方法学验证：
4.7.1试剂与试药
样品由生产厂家提供；荆芥药材(120911-200709)来源于中国药品生物制品检验所；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G板(20170216)及自制硅胶G薄层板；试剂：正己烷、乙酸乙酯、石油醚(60-90℃)、均为分析纯，水为纯化水。
4.7.2专属性
取样品、缺荆芥阴性对照、按正文所述方法制得供样品及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液点样，展开，取出，晾干日光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的主斑点，斑点分离较好，阴性无干扰。(见图63)
4.7.3耐用性
4.7.3.1薄层板：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液分别点于硅胶G板预制板和硅胶G自制版，展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图63、图64)
4.7.3.2温度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液分别点于硅胶G板预制板，于低温3℃和高温40℃下展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图65、图66)
4.7.3.3湿度：按正文所述色谱条件，取样品、阴性供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液分别点于硅胶G板预制板，于高湿72％和低湿18％下展开，显色，检视，结果斑点分离较好，阴性无干扰。(见图67、图68)
Figure BDA0002346793560000361
Figure BDA0002346793560000362
图65：耐用性—温度-高温 图66：耐用性—温度-低温
载体：硅胶G预制板 4：贵州景诚(批号：20160126)
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(3:1) 5：贵州景诚(批号：20160910)
检视：喷1％香草醛硫酸溶液，加热检视 6：贵州景诚(批号：20161117)
高温40℃；低温3℃ 7：贵州汉方(批号：3646013)
1：贵州景诚制药有限公司荆芥阴性 8：贵州汉方(批号：3646014)
2：贵州汉方药业有限公司荆芥阴性 9：贵州汉方(批号：3646015)
3：荆芥对照药材
图67：耐用性—湿度-高湿 图68：耐用性—湿度-低湿
载体：硅胶G预制板 4：贵州景诚(批号：20160126)
展开剂：正己烷-乙酸乙酯(3:1) 5：贵州景诚(批号：20160910)
检视：喷1％香草醛硫酸溶液，加热检视 6：贵州景诚(批号：20161117)
湿度：高湿72％；低湿18％ 7：贵州汉方(批号：3646013)
1：贵州景诚制药有限公司缺荆芥阴性 8：贵州汉方(批号：3646014)
2：贵州汉方药业有限公司缺荆芥阴性 9：贵州汉方(批号：3646015)
3：荆芥对照药材
4.7.4方法的建立
4.7.4.1提取方法的考察
参考药典提取方法：取本品2袋，加石油醚(60-90℃)50ml，放置过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取荆芥药材0.12g，加石油醚(60-90℃)20ml同法制成对照品药材溶液(见图69)。
Figure BDA0002346793560000371
分析图谱69中药材与样品有一个斑点对应，阴性无干扰，Rf值向下，因样品只有一个斑点并与药材对应，故将此方法定为荆芥薄层鉴别方法，药材对样量5μl时与样品斑点一致，故药材点样量定为5μl。
4.7.4.2展开剂考察
(1)正己烷-乙酸乙酯(3:1)，所得色谱图(见图70)。
Figure BDA0002346793560000381
分析图谱70中溶剂极性，Rf值适中，故荆芥的最适展开剂为正己烷-乙酸乙酯(3:1)。
4.7.4.3薄层板考察
将现行质量中所用到的薄层板：硅胶G板、硅胶H板做对比，硅胶G板与H板所得色谱图无差异，选择效硅胶G薄层板，(见图71、72)薄层板的考察。
Figure BDA0002346793560000382
5.8尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别
5.8.1前胡提取方法的考察
参考药典提取方法1：取样品5g，研细，加三氯甲烷30ml超声处理10min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取前胡对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。(见图73、74、75)
提取方法2：取样品5g，研细，加水适量煮30mlmin，滤过滤液浓缩至15ml，加乙酸乙酯20ml。提取2次，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液，另取前胡对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。(见图73、74、75)
提取方法3：取样品5g，研细，加硅胶土3g加三氯甲烷30ml超声处理20min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取前胡对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。(见图73、74、75)
提取方法4：取样品5g，研细，加三氯甲烷30ml，浸泡超声，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取前胡对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。(见图73、74、75)
提取方法5：取样品5g，研细，加石油醚(60-90)40ml超声处理30min，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取前胡对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。(见图73、74、75)
Figure BDA0002346793560000391
Figure BDA0002346793560000392
Figure BDA0002346793560000401
Figure BDA0002346793560000402
分析图谱73中对照药材斑点明显，样品与阴性无点；图谱74中对照药材与样品斑点明显，RF值适中，斑点分离度清晰，但均有阴性干扰，方法5无斑点；分析图谱75中对照药材与样品斑点明显，RF值适中，斑点分离度差，药材有效斑点多但与样品对应的有效斑点少，阴性干扰，经试验，上述方法中阴性样品色谱与供试品色谱中斑点基本一样，有效斑点少。故未能建立前胡鉴别方法。
5.8.2桔梗提取方法的考察
参考药典提取方法1：取样品10g，研细,加7％硫酸乙醇-水(1：3)混合溶液50ml，加热回流1h，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解供试品溶液。另取桔梗对照药材1g同法制成对照药材溶液。(见图76)
提取方法2：取样品10g，研细、加乙醇50ml,加热回流1h,放冷，用水饱和正丁醇提取2次，每次25ml,合并正丁醇液，加水洗涤2次，每次20ml,三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解供试品溶液。另取桔梗对照药材1g同法制成对照药材溶液。(图77、78)
Figure BDA0002346793560000411
Figure BDA0002346793560000412
分析图谱76中对照药材与样品有斑点对应，斑点分离度差，阴性有干扰；图谱77、78中10％磷目酸乙酸溶液检视，药材中部有一个斑点，样品与阴性中部无斑点，药材上部有一个斑点与样品对应，但阴性有干扰，对照品未展开。365nm紫外检视，对照品无荧光，药材中部有一个荧光斑点，样品与阴性在上部有一个相同荧光斑点，阴性有干扰。经试验，上述方法中阴性样品色谱与供试品色谱中斑点基本一样，有效斑点少。故未能建立桔梗鉴别方法。
黄芩及黄连,葛根含量测定方法学验证附
1黄芩含量测定
1.1仪器与试药
高效液相色谱仪：戴安Μltimate3000液相色谱仪；KQ-500DA型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)；儿童回春颗粒由贵州汉方药业有限公司及贵州景诚医药有限公司提供；黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定院提供，批号为(110715-201318，含量以93.3％计)；试剂：甲醇(色谱纯、分析纯)，乙醇(分析纯)，水(ΜPW-50N型超净水器制备超纯水)，磷酸(分析纯)。
1.2测定方法
1.2.1色谱条件选择：
(1)色谱柱：参照2015年版药典黄芩药材含量测定选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子进行考察。结果表明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子分离效果较好。
(2)流动相：经过实验摸索，采用甲醇-0.2％磷酸溶液(47∶53)为流动相，待测成分黄芩苷及其他杂质可得到较好分离。
(3)检测波长：精密称取适量黄芩苷对照品溶于70％乙醇溶液，取60％乙醇作为空白溶液，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描波长，黄芩苷在278nm处有吸收，(见图79)，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典黄芩药材含量测定项，因而确定黄芩苷的检测波长为278nm。
(4)检测波长：精密称取适量黄芩苷对照品溶于70％乙醇溶液，另取本品适量，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。开启PAD扫描，190nm～400nm
所得结果见图79紫外光谱扫描图-对照、图80紫外光谱扫描图-景诚样品、图81紫外光谱扫描图-汉方样品，图82紫外光谱扫描图-景诚阴性，图83紫外光谱扫描图-汉方阴性，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典黄芩药材含量测定项，因而确定黄芩苷的检测波长为287nm。
(5)理论塔板数：参照2015年版药典黄芩药材含量测定，理论塔板数按黄芩苷峰计算，应不低于2500。
1.2.2供试品溶液的制备
取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约(规格1)2g、(规格2)0.2g，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)20分钟，放冷，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得。
1.2.3对照品溶液的制备
精密称黄芩苷对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含15μg的溶液，摇匀，即得。
1.3方法验证
1.3.1专属性
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)及阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰，见附件1黄芩苷专属性色谱图(第1-2页)。
1.3.2重复性试验
取同一批儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646015)，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件测定黄芩苷的含量，结果见表1-4-1、表1-4-2及附件2黄芩苷重复性色谱图(第3-5页)，说明有较好重复性。
表1-4-1贵州景诚重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000431
表1-4-2贵州汉方重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000432
1.3.3准确度试验
取已测定含量的儿童回春颗粒(贵州景诚20160910)(平均含量3.5239mg/g)0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液(0.0154953mg/ml)50ml，(贵州汉方3646015)(平均含量0.2469mg/g)1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液(0.0114744mg/ml)50ml,按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定黄芩苷的含量，计算回收率，结果见表1-5-1、表1-5-2及附件3黄芩苷准确度色谱图(第6-8页)，说明有较好回收率。
表1-5-1景诚回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000441
表1表1-5-2汉方回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000442
1.3.4精密度试验
精密量取同一黄芩苷对照品溶液(14.5μg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图结果表1-6及附件4黄芩苷精密度色谱图(第9页)，说明有较好精密度。
表1-6精密度试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000451
1.3.5线性关系考察
按上述色谱条件，精密取黄芩苷对照品86.1293μg/ml，51.6776μg/ml，34.4517μg/ml，17.2259μg/ml，8.6129μg/ml，4.3065μg/ml10μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线(图84)，得出线性回归方程为：y＝550.7x-0.243,R＝0.9980。结果见表1-8，黄芩苷在4.3065μg～86.1293μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。见附件13黄芩苷线性色谱图(第10页)。
表1-8黄芩苷对照品线性关系
浓度(μg/ml) 峰面积值
86.1293 47.956
51.6776 26.735
34.4517 18.909
17.2259 9.337
8.6129 4.766
4.3065 2.31
1.3.6范围
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910)样品，研细，混合均匀，取3份，每份各取约0.1g，0.2g，0.3g，0.4g(贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取3份，每份各取约0.5g，1g，2g，3g精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，分别超声(频率34KHZ，功率250W)处理20分钟，取出，放冷，用70％乙醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，分别取10μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表1-9-1、表1-9-2及附件6黄芩苷范围色谱图(第11-13页)。
表1-9-1景诚范围测定结果
Figure BDA0002346793560000461
表1-9-2汉方范围测定结果
Figure BDA0002346793560000462
1.4耐用性
1.4.1样品提取方法的选择
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取2份，景诚每份约0.2g，汉方每份约2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，其中一份超声(频率34KHZ，功率250W)处理20分钟，另一份回流提取20分钟，取出，放冷，用70％乙醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，分别取10μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表1-10及附件7黄芩苷耐用性色谱图(第14-16页)，超声回流提取方法无较大差异，故选择超声提取。
表1-10提取方法的选择
Figure BDA0002346793560000463
1.4.2样品提取溶剂的选择
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，各取8份，景诚每份约0.2g，汉方每份约2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别加入25％乙醇，50％乙醇，60％乙醇，70％乙醇，80％乙醇，90％乙醇，100％乙醇，70％甲醇，各50ml，超声(频率34KHZ，功率250W)处理20分钟，取出，放冷，用相应溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，得供试品溶液，分别取上述16份溶液10μ注入液相色谱仪，计算，结果见表1-11及附件7黄芩苷耐用性色谱图(第17～19页)，说明本品采用70％乙醇作为提取溶剂，含量提取更完全。
表1-11提取溶剂的选择
Figure BDA0002346793560000471
1.4.3样品提取时间影响
取儿童回春颗粒(景诚20160910)(汉方3646013)样品，研细，混合均匀，各取6份，景诚每份约0.2g，汉方每份约2g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，分别超声(频率34KHZ，功率250W)处理10、15、20、25、30、40分钟，取出，放冷，用70％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，分别取10μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表1-12及附件7黄芩苷耐用性色谱图(9～22页)。
表1-12提取时间影响
Figure BDA0002346793560000472
Figure BDA0002346793560000481
1.4.4不同品牌柱子的影响
采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646015)黄芩苷的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。色谱图见耐用性色谱图，含量测定结果见表1-13及附件7黄芩苷耐用性色谱图(第23～28页)。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
表1-13不同品牌色谱柱的测定结果
Figure BDA0002346793560000482
1.4.5不同仪器的影响
采用不同仪器，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646015)黄芩苷的含量含量，考察不同品牌的高效液相色谱仪的影响。色谱图见附件7黄芩苷耐用性色谱图(第29～39页)，含量测定结果见表1-14。结果表明不同品牌高效液相色谱仪对含量测定无明显影响。
表1-14不同仪器的测定结果
Figure BDA0002346793560000491
1.4.6样品稳定性试验
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646015)，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定黄芩苷的含量，结果见表1-15及附件7黄芩苷耐用性色谱图(第40～42页)。
表1-15样品稳定性试验
Figure BDA0002346793560000492
1.4.7流动相比例的影响
在不改变流动相成分条件下，改变流动相比例，考察不同比例流动相的影响。色谱图见附件7黄芩苷耐用性色谱图(第43～50页)，结果在选定[甲醇-0.2％磷酸(47-53)]流动相比例，样品分离度较好，含量测定结果见表1-16。
表1-16流动相比例测定结果
Figure BDA0002346793560000493
Figure BDA0002346793560000501
1.5样品测定
按上述条件，分别测定了15批样品，结果见表1-17样品测定结果及附件8黄芩苷15批样品色谱图(第51～60页)。
表1-17-1样品测定结果
贵州景诚制药 贵州汉方制药业
贵州景诚制药 平均含量 贵州汉方制药 平均含量
批号 (mg/袋) 批号 (mg/袋)
20180124 3.50 3646012 4.03
20180137 3.56 3647001 1.55
20180147 3.62 3647002 1.41
20180125 3.30 3647016 1.45
20180106 3.50 3646011 3.78
20180138 3.45 3647003 1.20
20180122 3.65 3647005 1.16
20180104 3.69 3646010 4.02
20180123 4.04 3647006 1.27
20180105 3.22 3647004 1.05
20180139 3.50 3647022 1.25
20180140 3.53 3647019 1.75
20160126 3.50 3646013 2.01
20160910 3.41 3646015 1.48
20161117 3.60 3646014 1.97
根据以上15批样品实验测定结果，暂定本品每袋含黄芩以黄芩苷计〔规格(1)〕不得少于Xmg/袋、〔规格(2)〕不得少于1.2mg/袋。
2盐酸小檗碱含量测定
2.1仪器与试药
高效液相色谱仪：戴安Μltimate3000液相色谱仪；KQ-500DA型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)；儿童回春颗粒由贵州汉方药业有限公司及贵州景诚制药有限公司提供；盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定院提供，批号为(110713-201212，含量以86.7％计)；试剂：甲醇(分析纯)，盐酸(分析纯)，水(ΜPW-50N型超净水器制备超纯水)，磷酸(分析纯),乙腈(色谱纯)。
2.2测定方法
2.2.1色谱条件选择
(1)色谱柱：参照2015年版药典黄连药材含量测定选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子进行考察。结果表明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子分离效果较好。
(2)流动相：经过实验摸索，采用甲醇-0.05％磷酸溶液(24∶76)为流动相，待测成分盐酸小檗碱及其他杂质可得到较好分离。
(3)检测波长：精密称取适量盐酸小檗碱对照品溶于1％盐酸甲醇溶液，取1％盐酸甲醇溶液作为空白溶液，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描波长，盐酸小檗碱在265nm处有吸收，见图85，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典黄连药材含量测定项，因而确定盐酸小檗碱的检测波长为265nm。
(4)检测波长：精密称取适量盐酸小檗碱对照品溶于1％盐酸甲醇溶液，另取本品适量，景诚取0.6g，汉方取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用1％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。开启PAD扫描，190nm～400nm。
所得结果见图85紫外光谱扫描图对照、图86紫外光谱扫描图景诚样品、图87紫外光谱扫描图汉方样品、图88紫外光谱扫描图景诚阴性、图89紫外光谱扫描图汉方阴性，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典黄连药材含量测定项，因而确定盐酸小檗碱检测波长为265nm。
(5)理论塔板数：参照2015年版药典黄连药材含量测定，理论塔板数按盐酸小檗碱计算，应不低于5000。
2.2.2供试品溶液的制备
取本品内容物适量，研细，贵州景诚取0.6g，贵州汉方取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用1％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3对照品溶液的制备：
精密称盐酸小檗碱对照品适量，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含4μg的溶液，摇匀，即得。
2.3方法验证
2.3.1专属性
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)及阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰，见附件9盐酸小檗碱专属性色谱图(第61～62页)。
2.3.2重复性试验
取同一批儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，结果见表2-4-1、表2-4-2及附件10盐酸小檗碱重复性色谱图(第63～65页)，说明有较好重复性。
表2-4-1景诚重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000521
表2-4-1汉方重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000522
Figure BDA0002346793560000531
2.3.3准确度试验
取已测定含量的儿童回春颗粒(贵州景诚20160126)(平均含量0.5907mg/g)0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.00385364mg/ml)50ml，(贵州汉方3646013)(平均含量0.0598mg/g)1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.00191850mg/ml)50ml,按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算回收率，结果见表2-5-1、表2-5-2及附件11盐酸小檗碱准确度色谱图(第66～68页)，说明有较好回收率。
表2-5-1景诚回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000532
表2-5-2汉方回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000533
Figure BDA0002346793560000541
2.3.4精密度试验
精密量取同一盐酸小檗碱对照品溶液(3.85μg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图，结果表2-6及附件12盐酸小檗碱精密度色谱图(第69页)，说明有较好精密度。
表2-6精密度试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000542
2.3.5线性关系考察
按上述色谱条件，精密取盐酸小檗碱对照品(19.26821μg/ml)依次进20，10，5，3，2，1μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线(图90)，得出线性回归方程为：y＝1846.5866x-61.1751,R＝1。结果见表2-8，盐酸小檗碱在19.26821μg～385.3642μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。见附件13盐酸小檗碱线性色谱图(第70页)。
表2-8盐酸小檗碱对照品线性关系
Figure BDA0002346793560000543
2.3.6范围
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160126)样品，研细，混合均匀，取3份，每份各取约0.4g，0.6g，0.8g，(贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取3份，每份各取约2g，3g，4g精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50ml，分别超声(频率34KHZ，功率250W)处理30分钟，取出，放冷，用1％盐酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，分别取20μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表2-9-1、表2-9-2及附件14盐酸小檗碱范围色谱图(第71～73页)。
表2-9-1景诚范围测定结果
Figure BDA0002346793560000551
表2-9-2汉方范围测定结果
Figure BDA0002346793560000552
2.4耐用性
2.4.1样品提取方法的选择
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取2份，景诚每份约0.6g，汉方每份约3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50ml，其中一份超声(频率34KHZ，功率250W)处理30分钟，另一份回流提取30分钟，取出，放冷，用1％盐酸甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，分别取20μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表2-10及附件15盐酸小檗碱耐用性色谱图(第74～76页)，超声回流提取方法无较大差异，故选择超声提取。
表2-10提取方法的选择
Figure BDA0002346793560000561
2.4.2样品提取溶剂的选择
取儿童回春颗粒(景诚20160126)(汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取2份，景诚每份约0.6g，汉方每份约3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别加入1％盐酸甲醇，甲醇各50ml，超声(频率34KHZ，功率250W)处理30分钟，取出，放冷，用相应溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，得供试品溶液，分别取上述4份溶液20μ注入液相色谱仪，计算，结果见表2-11及附件15盐酸小檗碱耐用性色谱图(第77～79页)，说明本品采用1％盐酸甲醇作为提取溶剂，含量提取更完全。
表2-11提取溶剂的选择
溶剂 贵州景诚含量(mg/g) 贵州汉方含量(mg/g)
1％盐酸甲醇 0.5824 0.0611
甲醇 0.5380 0.0544
2.4.3不同品牌柱子的影响
采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)盐酸小檗碱的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。色谱图见耐用性色谱图，含量测定结果见表2-12及附件15盐酸小檗碱耐用性色谱图(第80～88页)。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
表2-12不同品牌色谱柱的测定结果
Figure BDA0002346793560000562
Figure BDA0002346793560000571
2.4.4不同仪器的影响
采用不同仪器，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)盐酸小檗碱的含量含量，考察不同品牌的高效液相色谱仪的影响。色谱图见附件15盐酸小檗碱耐用性色谱图(第89～99页)，含量测定结果见表2-13。结果表明不同品牌高效液相色谱仪对含量测定无影响。
表2-13不同仪器的测定结果
Figure BDA0002346793560000572
2.4.5样品稳定性试验
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160126、贵州汉方3646013)，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，结果见表2-14及附件15盐酸小檗碱耐用性色谱图(第100～102页)。
表2-14样品稳定性试验
Figure BDA0002346793560000573
Figure BDA0002346793560000581
2.5样品测定
按上述条件，分别测定了15批样品，结果见表2-15样品测定结果及附件16盐酸小檗碱15批样品色谱图(第103～117页)。
表2-15样品测定结果
贵州景诚制药 贵州汉方制药业
贵州景诚制药 平均含量 贵州汉方制药 平均含量
批号 (mg/袋) 批号 (mg/袋)
20160126 0.59 3646013 0.15
20160910 0.28 3646014 0.15
20161117 0.23 3646015 0.13
20180123 0.42 3646011 0.32
20180124 0.38 3647002 0.42
20180104 0.39 3647004 1.15
20180105 0.30 3647006 0.12
20180106 0.39 3647016 0.40
20180137 0.37 3647019 0.28
20180138 0.41 3646010 0.33
20180125 0.39 3646012 0.29
20180122 0.46 3647001 0.61
20180139 0.42 3647005 0.42
20180140 0.43 3647022 0.57
20180147 0.43 3647003 0.19
根据以上15批样品实验测定结果，暂定本品每袋含黄连以盐酸小檗碱计〔规格(1)〕不得少于0.1mg/袋、〔规格(2)〕不得少于0.2mg/袋。
3葛根含量测定
3.1仪器与试药
高效液相色谱仪：戴安Μltimate3000液相色谱仪；KQ-500DA型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)；儿童回春颗粒由贵州汉方药业有限公司及贵州景诚制药有限公司提供；葛根素对照品由中国药品生物制品检定院提供，批号为(110752-201514，含量以95.5％计)；试剂：乙腈(色谱纯、)，乙醇(分析纯)，水(ΜPW-50N型超净水器制备超纯水)。
3.2测定方法
3.2.1色谱条件选择：
(1)色谱柱：参照2015年版药典葛根药材含量测定选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子进行考察。结果表明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子分离效果较好。
(2)流动相：经过实验摸索，采用乙腈-水(10∶90)为流动相，待测成分葛根素及其他杂质可得到较好分离。
(3)检测波长：精密称取适量葛根素对照品溶于30％乙醇溶液，取30％乙醇作为空白溶液，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描波长，葛根素在250nm处有吸收，见图91，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典葛根药材含量测定项，因而确定葛根素的检测波长为250nm。
(4)检测波长：精密称取适量葛根素对照品溶于30％乙醇溶液，另取本品适量，景诚取0.6g，汉方取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。开启PAD扫描，190nm～400nm
所得结果见图91紫外光谱扫描图对照、图92紫外光谱扫描图景诚样品、图93紫外光谱扫描图汉方样品、图94紫外光谱扫描图景诚阴性、图95紫外光谱扫描图汉方阴性，以此为检测波长可获得较高的灵敏度和良好的选择，且参照2015年版药典葛根药材含量测定项，因而确定葛根素的检测波长为250nm。
(5)理论塔板数：参照2015年版药典葛根药材含量测定，理论塔板数按葛根素峰计算，应不低于4000。
3.2.2供试品溶液的制备
取本品内容物适量，研细，贵州景诚取0.6g，贵州汉方取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用30％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.2.3对照品溶液的制备
精密称葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含10μg的溶液，摇匀，即得。
3.3方法验证
3.3.1专属性
取儿童回春颗粒(景诚20160910)及阴性样品和(汉方3646013)及阴性样品按供试品溶液制备方法制备样品溶液及阴性样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰，见附件17葛根素专属性色谱图(第118～119页)。
3.3.2重复性试验
取同一批儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)，按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件测定葛根素的含量，结果见表3-4-1、表3-4-2及附件18葛根素重复性色谱图(第120～122页)，说明有较好重复性。
表3-4-1景诚重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000601
表3-4-2汉方重复性试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000602
Figure BDA0002346793560000611
3.3.3准确度试验
取已测定含量的儿童回春颗粒(贵州景诚20160910)(平均含量1.2904mg/g)0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入葛根素对照品溶液(0.00875926mg/ml)50ml，(贵州汉方3646013)(平均含量0.0719mg/g)1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入葛根素对照品溶液(0.00197685mg/ml)50ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定葛根素的含量，计算回收率，结果见表3-5-1、表3-5-2及附件19葛根素准确度色谱图(第123～126页)，说明有较好回收率。
表3-5-1景诚回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000612
表3-5-2汉方回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002346793560000613
Figure BDA0002346793560000621
3.3.4精密度试验
精密量取同一葛根素对照品溶液(9.88μg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图，结果表3-6及附件20葛根素精密度色谱图(第127页)，说明有较好精密度。
表3-6精密度试验(n＝6)
Figure BDA0002346793560000622
3.3.5线性关系考察
按上述色谱条件，精密取葛根素对照品(9.88425μg/ml)依次进30，25，20，10，5，2，1μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线(图96)，得出线性回归方程为：y＝749.2669x–7.4032,R＝1。结果见表3-8，葛根素在9.88425μg～296.5275μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。见附件21葛根素线性色谱图(第128页)。
表3-8葛根素对照品线性关系
Figure BDA0002346793560000623
Figure BDA0002346793560000631
3.4耐用性
3.4.1样品提取方法的选择
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取2份，景诚每份约0.6g，汉方每份约3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，其中一份超声(频率34KHZ，功率250W)处理30分钟，另一份回流提取30分钟，取出，放冷，用30％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，分别取景诚10μl，汉方20μl续滤液注入液相色谱仪，计算，结果见表3-9及附件22葛根素耐用性色谱图(第129～131页)，超声回流提取方法无较大差异，故选择超声提取。
表3-9提取方法的选择
Figure BDA0002346793560000632
3.4.2样品提取溶剂的选择
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取2份，景诚每份约0.6g，汉方每份约3g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别加入95％乙醇、稀乙醇、30％乙醇、25％乙醇、1％盐酸甲醇各50ml，超声(频率34KHZ，功率250W)处理30分钟，取出，放冷，用相应溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，得供试品溶液，分别取上述5份溶液景诚10μl，汉方20μ注入液相色谱仪，计算，结果见表3-10及附件22葛根素耐用性色谱图(第132～134页)，说明本品采用30％乙醇作为提取溶剂，含量提取更完全。
表3-10提取溶剂的选择
Figure BDA0002346793560000633
Figure BDA0002346793560000641
4.3样品提取时间影响
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)样品，研细，混合均匀，取4份，景诚每份约0.6g，汉方每份约3g，分别置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，分别超声(频率34KHZ，功率250W)处理20，30，60分钟及1.5h，取出，放冷，用30％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，上述4份溶液景诚10μl，汉方20μ注入液相色谱仪，计算，结果见3-11及附件22葛根素耐用性色谱图(第135～137页)。
表3-11提取时间影响
时间(分钟) 贵州景诚含量(mg/g) 贵州汉方含量(mg/g)
20 1.2854 0.0793
30 1.2930 0.0789
60 1.3200 0.0806
90 1.2445 0.0768
3.4.4不同品牌柱子的影响
采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)葛根素的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。色谱图见附件22葛根素耐用性色谱图(第138～140页)，含量测定结果见表3-12。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
表3-12不同品牌色谱柱的测定结果
Figure BDA0002346793560000642
Figure BDA0002346793560000651
3.4.5不同仪器的影响
采用不同仪器，分别测定了儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)葛根素的含量含量，考察不同品牌的高效液相色谱仪的影响。色谱图见附件22葛根素耐用性色谱图(第147～157页)，含量测定结果见表3-13。结果表明不同品牌高效液相色谱仪对含量测定无影响。
表3-13不同仪器的测定结果
Figure BDA0002346793560000652
3.4.6样品稳定性试验
取儿童回春颗粒(贵州景诚20160910、贵州汉方3646013)，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定葛根素的含量，结果见表3-14及附件22葛根素耐用性色谱图(第158～160页)。
表3-14样品稳定性试验
Figure BDA0002346793560000653
3.5样品测定
按上述条件，分别测定了15批样品，结果见表3-15样品测定结果及附件23葛根素15批样品色谱图(第161～172页)。
表3-15-1景诚样品测定结果
贵州景诚制药 贵州汉方制药业
贵州景诚制药 平均含量 贵州汉方制药 平均含量
批号 (mg/袋) 批号 (mg/袋)
20160910 1.29 3646013 0.37
20160126 1.27 3646014 0.37
20161117 1.18 3646015 0.31
20180123 1.38 3647004 0.54
20180124 1.32 3647005 0.67
20180125 1.23 3467019 1.22
20180122 1.37 3646012 0.45
20180104 1.38 3646010 0.42
20180105 1.17 3647006 0.84
20180106 1.26 3647002 0.45
20180137 1.35 3647001 0.28
20180138 1.28 3647003 0.65
20180139 1.29 3647022 1.02
20180140 1.23 3647011 0.41
20180147 1.30 3647016 1.25
根据以上15批样品实验测定结果，暂定本品每袋含葛根以葛根素〔规格(1)〕不得少于Xmg/袋、〔规格(2)〕不得少于0.5mg/袋。
综上所述：本发明的有益效果在于：本发明提供了儿童回春颗粒的质量检测方法，质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定。所述质量检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制儿童回春颗粒的质量，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
附图说明
图1是本发明的黄连薄层方法验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图2是本发明的黄连薄层方法验证中耐用性-薄层板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图3是本发明的黄连薄层方法验证中耐用性-温度-低温3℃的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图4是本发明的黄连薄层方法验证中耐用性-温度-高温40℃色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图5是本发明的黄连薄层方法验证中耐用性-湿度-湿度18％色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图6是本发明的黄连薄层方法验证中耐用性-湿度-湿度72％％色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：盐酸小檗碱、4：黄连对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图7是本发明的黄连薄层方法验证中方法学考察的色谱图；1：阴性、2：盐酸小檗碱、3：黄连对照药材、4：贵州景诚供试液(批号:20160126)、5：贵州汉方供试液(批号：3646013)；
图8是本发明的黄连薄层方法验证中黄连贵州景诚标准-色谱图；1：贵州景诚(批号：20160910)、2：盐酸小檗碱；
图9是本发明的黄连薄层方法验证中黄连贵州汉方标准1-色谱图；1：贵州汉样(批号：3464013)、2：盐酸小檗碱；
图10是本发明的葛根薄层方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图11是本发明的葛根薄层方法学验证中耐用性—薄层板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图12是本发明的葛根薄层方法学验证中耐用性—温度-低温3℃的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图13是本发明的葛根薄层方法学验证中耐用性—温度-高温40℃的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图14是本发明的葛根薄层方法学验证中耐用性-湿度-湿度18％的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图15是本发明的葛根薄层方法学验证中耐用性-湿度-湿度72％的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：葛根素、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图16是本发明的葛根薄层方法学验证中葛根展开剂1的色谱图；1：阴性、2：葛根素、3：贵州汉方(批号：20160126)、4：贵州景诚(批号：20160126)；
图17是本发明的葛根薄层方法学验证中葛根展开剂2的色谱图；1：阴性、2：葛根素、3：葛根药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州汉方(批号：20160126)；
图18是本发明的葛根薄层方法学验证中葛根(葛根展开剂)的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺葛根阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺葛根阴性、3：葛根素、4:葛根对照药材、5:贵州景诚(批号:20160126)、6:贵州汉方(批号:3646013)、7:牛旁苷、8:牛旁子药材、9：贵州景诚制药有限公司缺牛蒡子阴性、10：贵州汉方药业有限公司缺牛蒡子阴性；
图19是本发明的葛根薄层方法学验证中牛蒡子(葛根展开剂)的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺葛根阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺葛根阴性、3：葛根素、4:葛根对照药材、5:贵州景诚(批号:20160126)、6:贵州汉方(批号:3646013)、7:牛旁苷、8:牛旁子药材、9：贵州景诚制药有限公司缺牛蒡子阴性、10：贵州汉方药业有限公司缺牛蒡子阴性；
图20是本发明的黄芩薄层方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图21是本发明的黄芩薄层方法学验证中耐用性—薄层板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图22是本发明的黄芩薄层方法学验证中耐用性-温度-低温3℃的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图23是本发明的黄芩薄层方法学验证中耐用性-温度-高温40℃的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图24是本发明的黄芩薄层方法学验证中耐用性-湿度-低湿18％的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图25是本发明的黄芩薄层方法学验证中耐用性-湿度-高湿72％的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司阴性、2：贵州汉方药业有限公司阴性、3：黄芩苷、4：黄芩对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图26是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性、13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图27是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性—薄层-硅胶G预制板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图28是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性—薄层-硅胶G自制版的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图29是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性-温度-高温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性、13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图30是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性-温度-低温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性、13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图31是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性-湿度-高湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性、13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图32是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中耐用性-湿度-低湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺玄参阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺玄参阴性、3：哈巴俄苷、4：玄参对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)、11：芍药苷、12：贵州景诚制药有限公司缺赤芍阴性、13：贵州汉方药业有限公司缺赤芍阴性；
图33是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中原玄参标准2的色谱图；1：哈巴俄苷、2：玄参对照药材、3：贵州汉方(批号：3646013)、4：贵州汉方药业有限公司阴性；
图34是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中玄参提取方法考察提取方法1的色谱图；1：贵州汉方药业有限公司阴性、2：贵州汉方(批号：3646013)、3：贵州景诚(批号：20160126)、4：玄参对照药材；
图35是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中玄参提取方法考察提取方法2的色谱图；1：贵州景诚(批号：20160126)、2：玄参对照药材；
图36是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中玄参提取方法考察提取方法3的色谱图：1:贵州汉方药业有限公司阴性、2：哈巴俄苷、3：玄参对照药材、4：贵州汉方(批号：3646013)、5：贵州景诚(批号：20160126)；
图37是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中赤芍提取方法考察提取方法1的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160910)、3：赤芍药材(厂家药材)、4：赤芍对照药材、5：芍药苷；
图38是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中赤芍提取方法考察提取方法2的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160910)、3：赤芍对照药材、4：芍药苷；
图39是本发明的玄参、赤芍薄层方法学验证中赤芍提取方法考察提取方法3的色谱图；1：贵州汉方(批号：3646013)、2：贵州景诚(批号：20160910)、3：芍药苷、4：贵州汉方药业有限公司阴性、5：贵州景诚制药有限公司阴性；
图40是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图41是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图42是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中耐用性-温度-高温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图43是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中耐用性-温度-低温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图44是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中耐用性—湿度-高湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图45是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中耐用性—湿度-低湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司牛蒡子阴性、2：贵州汉方药业有限公司牛蒡子阴性、3：牛蒡苷、4：牛蒡子对照药材、5：贵州景诚(批号：20160126)、6：贵州景诚(批号：20160910)、7：贵州景诚(批号：20161117)、8：贵州汉方(批号：3646013)、9：贵州汉方(批号：3646014)、10：贵州汉方(批号：3646015)；
图46是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子原标准2的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州汉方(批号：3646013)；
图47是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子提取方法考察的色谱图；1：阴性提取方法1、2：贵州汉方(批号：3646014)提取方法1、3：阴性提取方法2、4：贵州汉方(批号：3646014)提取方法2、5：阴性提取方法3、6：贵州汉方(批号：3646014)提取方法3、7：阴性提取方法4、8：贵州汉方(批号：3646014)提取方法4、9：阴性提取方法5、10：贵州汉方(批号：3646014)提取方法5、11：牛蒡子对照药材提取方法1-5、12：牛蒡苷、13：阴性提取方法6、14：贵州汉方(批号：3646014)提取方法6、15：牛蒡子对照药材提取方6；
图48是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子展开剂考察展开剂1的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图49是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子展开剂考察展开剂2的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图50是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子展开剂考察展开剂3的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图51是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子展开剂考察展开剂4的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图52是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子薄层板考察硅胶G板的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图53是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子薄层板考察高效G板的色谱图；1：阴性、2：牛蒡苷、3：牛蒡子对照药材、4：贵州景诚(批号：20160910)、5：贵州汉方(批号：364014)；
图54是本发明的牛蒡子薄层鉴别方法学验证中牛蒡子药材点样量确定的色谱图；1：牛蒡子对照药材0.5μl、2：牛蒡子对照药材1.5μl、3：牛蒡子对照药材2μl、4：牛蒡子对照药材3μl、5：牛蒡子对照药材4μl、6：贵州汉方(批号：364014)；
图55是本发明的大青叶薄层方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图56是本发明的大青叶薄层方法学验证中耐用性—薄层板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图57是本发明的大青叶薄层方法学验证中耐用性—温度-高温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图58是本发明的大青叶薄层方法学验证中耐用性—温度-低温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图59是本发明的大青叶薄层方法学验证中耐用性—湿度-高湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图60是本发明的大青叶薄层方法学验证中耐用性—湿度-低湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图61是本发明的大青叶薄层方法学验证中提取方法1的考察色谱图；1：大青叶、2：贵州景诚(批号：20161117)、3：贵州汉方(批号：3646013)；
图62是本发明的大青叶薄层方法学验证中提取方法2的考察色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺大青叶阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺大青叶阴性、3：靛玉红、4：贵州景诚(批号：20161117)、5：贵州汉方(批号：3646013)；
图63是本发明的荆芥薄层方法学验证中专属性、耐用性的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图64是本发明的荆芥薄层方法学验证中耐用性—薄层板的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图65是本发明的荆芥薄层方法学验证中耐用性—温度-高温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图66是本发明的荆芥薄层方法学验证中耐用性—温度-低温的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图67是本发明的荆芥薄层方法学验证中耐用性—湿度-高湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图68是本发明的荆芥薄层方法学验证中耐用性—湿度-低湿的色谱图；1：贵州景诚制药有限公司缺荆芥阴性、2：贵州汉方药业有限公司缺荆芥阴性、3：荆芥对照药材、4：贵州景诚(批号：20160126)、5：贵州景诚(批号：20160910)、6：贵州景诚(批号：20161117)、7：贵州汉方(批号：3646013)、8：贵州汉方(批号：3646014)、9：贵州汉方(批号：3646015)；
图69是本发明的荆芥薄层方法学验证中荆芥药典提取方法考察的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160126)、3：贵州汉方(批号：3646015)、4：荆芥对照药材2μl、5：荆芥对照药材3μl、6：荆芥对照药材5μl、7：荆芥对照药材10μl；
图70是本发明的荆芥薄层方法学验证中荆芥展开剂考察的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160126)、3：贵州汉方(批号：3646015)、4：荆芥对照药材；
图71是本发明的荆芥薄层方法学验证中荆芥薄层板考察-硅胶G预制板的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160126)、3：贵州汉方(批号：3646015)、4：荆芥对照药材；
图72是本发明的荆芥薄层方法学验证中荆芥薄层板考察-硅胶H预制板的色谱图；1：阴性、2：贵州景诚(批号：20160126)、3：贵州汉方(批号：3646015)、4：荆芥对照药材；
图73是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中前胡展开剂及薄层考察1的色谱图；1:贵州汉方(批号：3646013)提取方法1、2:前胡对照药材提取方法1、3:贵州汉方(批号：3646013)提取方法3、4:前胡对照药材提取方法3、5:贵州汉方(批号：3646013)提取方法4、6:前胡对照药材提取方法4、7:贵州汉方(批号：3646013)提取方法5、8:前胡对照药材提取方法5、9:阴性提取方法3；
图74是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中前胡展开剂及薄层考察2的色谱图；1:贵州汉方(批号：3646013)提取方法2、2:前胡对照药材提取方法2、3:阴性提取方法2、4:贵州汉方(批号：3646013)提取方法1、5:前胡对照药材提取方法1、6:阴性提取方法1、7:贵州汉方(批号：3646013)提取方法4、8:前胡对照药材提取方法4、9：贵州汉方(批号：3646013)提取方法5、10：前胡对照药材提取方法5；
图75是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中前胡展开剂及薄层考察3的色谱图；1：贵州汉方(批号：3646013)提取方法2、2:前胡对照药材提取方法2、3:阴性提取方法2、4:贵州汉方(批号：3646013)提取方法1、5:前胡对照药材提取方法1、4:贵州汉方(批号：3646013)提取方法3、7:前胡对照药材提取方法3、8:阴性提取方法3、9：贵州汉方(批号：3646013)提取方法4、10：前胡对照药材提取方法4、11：阴性提取方法4；
图76是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中桔梗提取方法考察1的色谱图；1：阴性、2:贵州景诚(批号：20160910)、3:桔梗对照药材；
图77是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中桔梗提取方法考察2的色谱图；1：阴性、2:贵州景诚(批号：20160910)、3：桔梗对照药材、4：桔梗皂苷；
图78是本发明的尝试增加前胡、桔梗，薄层色谱鉴别中桔梗提取方法考察2的色谱图；1：阴性、2:贵州景诚(批号：20160910)、3：桔梗对照药材、4：桔梗皂苷；
图79是本发明的黄芩含量测定中紫外光谱扫描图-对照；
图80是本发明的黄芩含量测定中紫外光谱扫描图-景诚样品；
图81是本发明的黄芩含量测定中紫外光谱扫描图-汉方样品；
图82是本发明的黄芩含量测定中紫外光谱扫描图-景诚阴性；
图83是本发明的黄芩含量测定中紫外光谱扫描图-汉方阴性；
图84是本发明的黄芩含量测定中线性关系考察-黄芩苷线性图；
图85是本发明的盐酸小檗碱含量测定中紫外光谱扫描图-对照；
图86是本发明的盐酸小檗碱含量测定中紫外光谱扫描图-景诚样品；
图87是本发明的盐酸小檗碱含量测定中紫外光谱扫描图-汉方样品；
图88是本发明的盐酸小檗碱含量测定中紫外光谱扫描图-景诚阴性；
图89是本发明的盐酸小檗碱含量测定中紫外光谱扫描图-汉方阴性；
图90是本发明的盐酸小檗碱含量测定中线性关系考察-盐酸小檗碱线性图；
图91是本发明的葛根含量测定中紫外光谱扫描图-对照；
图92是本发明的葛根含量测定中紫外光谱扫描图-景诚样品；
图93是本发明的葛根含量测定中紫外光谱扫描图-汉方样品；
图94是本发明的葛根含量测定中紫外光谱扫描图-景诚阴性；
图95是本发明的葛根含量测定中紫外光谱扫描图-汉方阴性；
图96是本发明的葛根含量测定中线性关系考察-葛根素线性图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1：
儿童回春颗粒
Ertongh μichμn keli
【处方】黄连25g、水牛角浓缩粉50g、羚羊角25g、人中白25g、淡豆豉25g、大青叶50g、荆芥50g、羌活50g、葛根50g、地黄50g、川木通50g、赤芍50g、黄芩50g、前胡75g、桔梗75g、玄参75g、柴胡37.5g、西河柳37.5g、升麻20g和牛蒡子75g；
【制法】取以上十二味药材(1/5倍)，取羚羊角与水牛角浓缩粉，研碎成细粉备用，其余药材除黄连外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加6倍量的水，煎煮2小时；第二次加4倍量的水，煎煮1小时；第三次加3倍量的水，煎煮30分钟，合并三次煎液，静置过夜，滤取上清液浓缩至相对密度1.35～1.38(80℃)的稠膏；另取黄连，加水同法煎煮三次，合并煎液，将上述两种清膏混匀，取混匀后的清膏，与适量糊精、蔗糖粉和羚羊角与水牛角混合粉混匀，加乙醇适量制成颗粒，干燥，喷以适量的香精，混匀，制成颗粒1000g，即得〔规格(1)〕。
取以上十二味药材，取羚羊角研碎成细粉备用，其余药材除水牛角浓缩粉外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加6倍量的水，煎煮2小时；第二次加4倍量的水，煎煮1小时；第三次加3倍量的水，煎煮30分钟，合并三次煎液，静置24小时后，滤取上清液浓缩至相对密度1.35～1.38(80℃)的稠膏；取水牛角浓缩粉，羚羊角粉与上述稠膏混匀，置真空干燥箱内真空干燥后取出，粉碎成细粉，加蔗糖850g制成颗粒，干燥，整粒，分装成1000袋，即得〔规格(2)〕。
【性状】规格(1):本品为黄色或黄棕色颗粒；气微香，味甜，微苦。
规格(2):本品为棕色至深褐色的颗粒；气微香，味微苦、略麻。
【鉴别】(1)取本品内容物10g〔规格(1〕)或2g〔规格(2)〕，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过。滤液水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解并浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材1g，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品内容物10g〔规格(1)〕或2g〔规格(2)〕，研细，加入乙酸乙酯50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:0.5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品内容物10g〔规格(1)〕或2g〔规格(2)〕，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值约为2。用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于(带状)同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品内容物25g〔规格(1)〕或5g〔规格(2)〕，研细，加80ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取玄参对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成1mg/ml作对照品溶液。吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点(带状)于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(5:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本品内容物10g〔规格(1)〕或2g〔规格(2)〕，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取牛蒡子对照药材0.1g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2.5:1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品内容物30g〔规格(1)〕或6g〔规格(2)〕，研细，加乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，每次15ml，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，，每次15ml，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮(5：4：2)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(7)取本品内容物10g〔规格(1)〕或2g〔规格(2)〕，研细，加石油醚(60-90℃)50ml，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取荆芥对照药材0.12g，加石油醚(60-90℃)20ml同法制成对照品药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯(3：1)为展开剂，展开，取出，晾干喷以1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2015年版通则0104)。
【含量】照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定
黄芩苷：
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸(47:53)为流动相；检测波长为278nm，流速1ml/min，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含黄芩苷15μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约2g〔规格(1)〕、0.2g〔规格(2)〕，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)20分钟，放冷，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得。
精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，〔规格(1)〕不得少于Xmg/袋、〔规格(2)〕不得少于1.2mg/袋。
2.盐酸小檗碱：
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸(24:76)为流动相；检测波长为265nm，流速1ml/min，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含盐酸小檗碱4μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g〔规格(1)〕、0.6g〔规格(2)〕，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，放冷，用1％盐酸甲醇溶液补足减失的重量。摇匀，滤过，滤液即得。
精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含盐酸小檗碱(C20H18ClNO4·2H2O)计，〔规格(1)〕不得少于0.1mg/袋、〔规格(2)〕不得少于0.2mg/袋。
3.葛根素：
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(10:90)为流动相；检测波长为250nm，流速1ml/min，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备取葛根素对照品适量，精密称定，加30％乙醇溶液制成每1ml含葛根素10μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g〔规格(1)〕、0.6g〔规格(2)〕，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇溶液50ml，超声处理(功率250W，频率33KHz)30分钟，放冷，用30％乙醇溶液补足减失的重量。摇匀，滤过，滤液即得。
分别精密吸取对照品溶液10μl、规格1供试品溶液20μl、规格2供试品溶液10μl、注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含葛根素计(C21H20O9)，〔规格(1)〕不得少于Xmg/袋、〔规格(2)〕不得少于0.5mg/袋。
【功能与主治】清热解毒，透表豁痰。用于急性惊风，伤寒发热，临夜发烧，小便带血，麻疹隐现不出而引起身热咳嗽；赤痢，水泻，食积腹痛。
【用法与用量】口服，一岁以下婴儿一次服1/4袋，1～2岁服1/2袋，3～4岁服3/5袋，5～7岁服1袋。一日2～3次。
【规格】5g/袋(规格1)；1g/袋(规格2)
【贮藏】密封。

Claims (12)

1.一种儿童回春颗粒的质量检测方法，所述儿童回春颗粒按照重量份计，由黄连25份、水牛角浓缩粉50份、羚羊角25份、人中白25份、淡豆豉25份、大青叶50份、荆芥50份、羌活50份、葛根50份、地黄50份、川木通50份、赤芍50份、黄芩50份、前胡75份、桔梗75份、玄参75份、柴胡37.5份、西河柳37.5份、升麻20份和牛蒡子75份按下述A或B的方法进行制备：
A、取以上二十味药材，取羚羊角与水牛角浓缩粉，研碎成细粉备用，其余药材除黄连外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮，静置，滤取上清液浓缩得稠膏；另取黄连，加水煎煮，合并煎液，将上述两种清膏混匀，取混匀后的清膏，与适量糊精、蔗糖粉和羚羊角与水牛角混合粉混匀，加乙醇适量制成颗粒，干燥，喷以适量的香精，混匀，制成颗粒1000g，即得规格Ⅰ；
B、取以上二十味药材，取羚羊角研碎成细粉备用，其余药材除水牛角浓缩粉外,置煎煮锅内按煮提法加水煎煮，静置，滤取上清液浓缩得稠膏；取水牛角浓缩粉，羚羊角粉与上述稠膏混匀，干燥后取出，粉碎成细粉，加蔗糖制成颗粒，干燥，整粒，分装成1000袋，即得规格Ⅱ；
其特征在于：所述儿童回春颗粒的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定。
2.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述黄连的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，超声处理，滤过；滤液水浴蒸干，残渣加乙醇使溶解并浓缩，作为供试品溶液；另取黄连对照药材，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7:1:2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述葛根的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加入乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述黄芩的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加甲醇，超声处理，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用稀盐酸调pH值为1.9-2.1；用乙酸乙酯振摇提取1-3次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另黄芩对照药材，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于带状同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述玄参和赤芍的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加水饱和正丁醇超声处理，滤过滤液蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取玄参对照药材加水饱和正丁醇超声处理，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成对照品溶液；吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点带状于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝5:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述牛蒡子的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，超声处理，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1-3次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡子对照药材，加乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述大青叶的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加乙醇，加热回流，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，加乙醚振摇提取2-4次，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮＝5：4：2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述荆芥的鉴别方法为：取本品内容物规格Ⅰ或规格Ⅱ，研细，加石油醚，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至，作为供试品溶液；另取荆芥对照药材，加石油醚同法制成对照品药材溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯＝3：1为展开剂，展开，取出，晾干喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述黄芩的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸＝47:53为流动相；检测波长为278nm，流速1ml/min，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含黄芩苷15μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约2g规格Ⅰ、0.2g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液，超声处理，放冷，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述黄连的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸＝24:76为流动相；检测波长为265nm，流速1ml/min，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含盐酸小檗碱4μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇溶液，超声处理，放冷，用盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
11.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述葛根的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝10:90为流动相；检测波长为250nm，流速1ml/min，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备；取葛根素对照品适量，精密称定，加30％乙醇溶液制成每1ml含葛根素10μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇溶液，超声处理，放冷，用乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
分别精密吸取对照品溶液10μl、规格Ⅰ供试品溶液20μl、规格Ⅱ供试品溶液10μl、注入液相色谱仪，测定，即得。
12.根据权利要求1所述的儿童回春颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述鉴别方法包括对黄连、葛根、黄芩、玄参和赤芍、牛蒡子、大青叶或荆芥的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对黄芩、黄连或葛根的含量测定；具体如下所示：
性状；规格Ⅰ:本品为黄色或黄棕色颗粒；气微香，味甜，微苦；
规格Ⅱ：本品为棕色至深褐色的颗粒；气微香，味微苦、略麻；
鉴别：(1)黄连的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过；滤液水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解并浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取黄连对照药材1g，同法制成对照药材，再另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水＝7:1:2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)葛根的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加入乙酸乙酯50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)黄芩的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用稀盐酸调pH值为1.9-2.1；用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于带状同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)玄参和赤芍的鉴别方法为：取本品内容物25g规格Ⅰ或5g规格Ⅱ，研细，加80ml水饱和正丁醇超声处理30min，滤过滤液蒸干，加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液；另取玄参对照药材1g加30ml水饱和正丁醇超声处理30min，同法制得，再另取哈巴俄苷、芍药苷加甲醇制成1mg/ml作对照品溶液；吸取上述溶液各供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点带状于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝5:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)牛蒡子的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，加乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取牛蒡子对照药材0.1g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液，再取牛旁苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水＝10:2.5:1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)大青叶的鉴别方法为：取本品内容物30g规格Ⅰ或6g规格Ⅱ，研细，加乙醇100ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，加乙醚振摇提取3次，每次25ml，弃去水层，乙醚层用氨试液洗涤两次，每次15ml，弃去氨洗液，再用水洗涤两次，每次15ml，弃去水洗液，乙醚蒸干，残渣用乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-三氯甲烷-丙酮＝5：4：2为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(7)荆芥的鉴别方法为：取本品内容物10g规格Ⅰ或2g规格Ⅱ，研细，在60-90℃下加石油醚50ml，浸泡，放置过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取荆芥对照药材0.12g，在60-90℃下加石油醚20ml同法制成对照品药材溶液；照薄层色谱法-通则0502试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-乙酸乙酯＝3：1为展开剂，展开，取出，晾干喷以1％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：符合中国药典颗粒剂项下的各项规定；
含量：照中国药典高效液相色谱法测定；
(8)黄芩的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸＝47:53为流动相；检测波长为278nm，流速1ml/min，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含黄芩苷15μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约2g规格Ⅰ、0.2g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-20分钟，放冷，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(9)黄连的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05％磷酸＝24:76为流动相；检测波长为265nm，流速1ml/min，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加1％盐酸甲醇溶液制成每1ml含盐酸小檗碱4μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备:取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入1％盐酸甲醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-30分钟，放冷，用1％盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(10)葛根的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝10:90为流动相；检测波长为250nm，流速1ml/min，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备；取葛根素对照品适量，精密称定，加30％乙醇溶液制成每1ml含葛根素10μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备取装量差异项下的样品，研细混合均匀，精密称取约3g规格Ⅰ、0.6g规格Ⅱ，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇溶液50ml，超声处理-功率250W，频率33KHz-30分钟，放冷，用30％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即得；
分别精密吸取对照品溶液10μl、规格Ⅰ供试品溶液20μl、规格Ⅱ供试品溶液10μl、注入液相色谱仪，测定，即得。
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