CN111197019B - 一种通过糖多孢红霉菌sace_1906基因途径提高红霉素产量的方法 - Google Patents

一种通过糖多孢红霉菌sace_1906基因途径提高红霉素产量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种通过糖多孢红霉菌SACE_ 1906基因途径提高红霉素产量的方法，通过基因工程途径在糖多孢红霉菌中失活SACE_1906基因，并过量表达其靶基因SACE_1905获得糖多孢红霉菌红霉素高产工程菌株，用所得的菌株发酵生产红霉素，用所述技术获得的菌株发酵可以提高红霉素产量。

Description

一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量 的方法
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法。
背景技术
原核生物基因组中存在着多种家族转录调控因子，例如MarR、TetR、AsnC、Lrp、GntR等家族转录调控因子。其中TetR家族转录调控因子(TetR family transcriptionalregulators，TFRs)是常见的单组分原核信号转导系统,存在于多种细菌的基因组中，其中土壤栖息的细菌编码最多。该家族转录调控因子TetR首先在大肠杆菌中被发现，是该家族的创始成员，以后发现的与其结构跟功能类似的调控因子都归到TetR家族中。TFRs可以调节的细胞生理过程非常多，包括碳氮代谢和细胞间信号转导、细胞分裂、次级代谢、生物膜的形成等。近年来发现了多种参与抗生素产量和放线菌形态分化的TFRs。
糖多孢红霉菌是一种栖息于土壤中的革兰氏阳性细菌，隶属于放线菌，最早于1952年被Waksman等人分离得到。红霉素是由糖多孢红霉菌产生的一种大环内酯类抗生素。红霉素包括红霉素A(Er-A)、红霉素B(Er-B)、红霉素C(Er-C)、红霉素D(Er-D)，而红霉素A因其抑菌活性最高被广泛应用于临床。以红霉素为基础又衍生出了地红霉素、克林霉素、阿奇霉素、罗红霉素、泰利霉素等新型药物，都被广泛的应用于临床。如何提高红霉素的产量，满足当前需求是人们急需解决的问题。通过基因工程途径改造糖多孢红霉菌，获得红霉素高产的菌株，具有可控制、操作简单、经济省时等优点，有很好的前景。
红霉素的生物合成基因在糖多孢红霉菌内是成簇存在于基因组中，但合成基因簇中不存在调控基因。糖多孢红霉菌全基因组的测序于2007年完成，发现在糖多孢红霉菌中共有101个TFRs。目前已报道的糖多孢红霉菌中的TFRs如SACE_3986、SACE_3446、SACE_5754、SACE_7301和SACE_3396，可以调控红霉素的生物合成。这表明糖多孢红霉菌中TFRs对红霉素生物合成产量具有重要的作用。
发明内容
本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法，通过基因工程途径在糖多孢红霉菌的原始菌株A226和红霉素高产工业菌株WB中失活SACE_1906基因，构建ΔSACE_1906和WBΔSACE_1906突变株。同时在突变株WBΔSACE_1906中过表达靶基因SACE_1905获得红霉素高产工程菌株，用所得的菌株发酵生产红霉素。基因SACE_1906的产物可以负调控红霉素的生物合成。
所述方法中以糖多孢红霉菌SACE_1906基因或其表达产物为出发点，寻找到与红霉素生物合成相关的新基因或蛋白，通过对寻找到的相关基因进行增加拷贝、提高表达量的办法在糖多孢红霉菌中构建红霉素高产菌株，用于发酵生产红霉素或其中间产物和衍生物。
本发明的优点是：本发明研究中筛选到了红霉素生物合成负调控子SACE_1906，通过基因工程途径失活糖多孢红霉菌染色体上SACE_1906基因，并在SACE_1906缺失突变株中，过量表达其靶基因SACE_1905，能够获得红霉素高产工程菌株，为工业生产提高红霉素产量提供技术支持。
糖多孢红霉菌A226中失活SACE_1906基因后，红霉素产量提高了71％。而在ΔSACE_1906突变株中回补SACE_1906基因，红霉素产量得到恢复，表明SACE_1906能负调控红霉素的生物合成。利用红霉素高产工业菌株WB作为出发菌株，失活SACE_1906基因，红霉素产量提高20％。在失活SACE_1906基因的工业菌株中过表达靶基因SACE_1905,红霉素产量增加了60％。
附图说明
图1：SACE_1906基因及周边邻近基因在染色体上的位置信息
图2：本发明的染色体同源重组技术示意图及缺失突变株的PCR验证
硫链丝菌肽抗性基因(tsr)替换了糖多孢红霉菌染色体上SACE_1906基因，SACE_1906基因(561bp)被tsr(1360bp)替换后长度增加到了1558bp；M,5000bp DNA Marker。
图3：突变株ΔSACE_1906的红霉素产量分析及生物量检测
(A)出发菌株A226、缺失突变株ΔSACE_1906、缺失回补菌株ΔSACE_1906/pIB139-1906和过表达菌株A226/pIB139-1906在R5液体发酵培养基中30℃发酵7天产物HPLC分析“*”表示p<0.05；“**”表示p<0.01
(B)出发菌株A226及缺失突变株ΔSACE_1906发酵过程中菌体干重的分析
图4：载体pET22b-1906的成功构建与SACE_1906蛋白的表达及其纯化
(A)pET22b-1906质粒的双酶切验证，M：5000bp DNA Marker
(B)SDS-PAGE检测SACE_1906蛋白的诱导表达及纯化：5泳道显示的为纯化后的目的蛋白；1-4泳道显示的是不同浓度咪唑洗脱后的洗脱液
图5：SACE_1906蛋白的EMSA分析
(A)SDS-PAGE分析纯化后SACE_1906蛋白及分子大小
(B)EMSA分析SACE_1906蛋白与邻近基因间隔区PSACE_1905-1906的结合情况。
(C)EMSA分析SACE_1906蛋白分别与eryAI启动子区以及ermE启动子区的结合情况。
图6：ΔSACE_1906与出发菌株A226中邻近基因SACE_1905转录分析“***”表示p<0.001。
图7：靶基因SACE_1905过量表达及过表达菌株的生物量测定
(A)SACE_1905过量表达对红霉素产量的影响“**”表示p<0.01
(B)SACE_1905过量表达对菌体的生长有影响
图8：红霉素工业高产菌株WB中失活SACE_1906和过量表达SACE_1905的红霉素产量HPLC分析
“*”表示p<0.05；“***”表示p<0.001。
具体实施方式
实施例
1材料与方法：
1.1菌株、质粒与生长条件
实施例中使用到的菌株和质粒见表1。大肠杆菌培养于37℃的液体LB培养基或添加1.25％琼脂的无抗或者相应抗性的LB固体平板。红霉素产生菌糖多孢红霉菌及其工程菌株在30℃胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)培养基或含有2.2％琼脂的无抗或者相应抗性的R3M固体平板上培养。
1.2材料、DNA操作与测序
PEG3350、溶菌酶、TES、酪蛋氨基酸、硫链丝菌肽、安普霉素从Sigma公司购买。TSB、酵母提取物、蛋白胨购买于Oxoid公司。甘氨酸、琼脂粉、氯化钠和其它生物学试剂都购于试剂公司。大肠杆菌和糖多孢红霉菌的一般操作技术按照标准操作。引物的合成和DNA测序由合肥通用生物公司完成。
表1实验中使用到的菌株和质粒
Figure GDA0003443747240000041
Figure GDA0003443747240000051
表2实验中使用到的引物
Figure GDA0003443747240000052
Figure GDA0003443747240000061
1.3SACE_1906基因缺失突变体的构建
本实验中合成的引物序列见表2。pUCTSR质粒是在pUC18的BamHI和SmaI酶切位点之间插入1360bp的硫链丝菌肽抗性基因(tsr)。使用1906-up_F/1906-up_R和1906-down_F/1906-down_R为引物、糖多孢红霉菌A226基因组为模板，PCR扩增SACE_1906基因的上、下游各约1.5kb的同源臂，用以失活糖多孢红霉菌中的SACE_1906基因。
分别将上述两个上下游同源臂分别连接到pUCTSR的tsr抗性基因序列两侧，完成构建质粒pUCTSRΔ1906；以1906-up_F和1906-down_R为引物、pUCTSRΔ1906质粒为模板，PCR扩增1906的Up-tsr-Down大片段，利用染色体片段同源重组技术将该大片段转化糖多孢红霉菌原生质体中，根据硫链丝菌肽抗性筛选阳性突变株，获得SACE_1906基因被tsr替换的基因工程菌株。以1906-C_F和1906-C_R作为鉴定引物，以质粒pUCTSRΔ1906为阳性模板，A226基因组为阴性模板进行PCR鉴定，阳性缺失突变体命名为ΔSACE_1906(见图2)。1.4SACE_1906基因回复菌株的构建
使用设计的引物1906-C_F和1906-C_R扩增出SACE_1906基因片段，经电泳纯化后回收，使用Nde I和Xba I内切酶分别对回收到的SACE_1906基因片段与pIB139进行双酶切并回收，通过T4 DNA连接酶将SACE_1906基因片段连接到pIB139上，成功获得整合型质粒pIB139-1906。然后通过PEG介导的原生质体转化方法将pIB139-1906导入ΔSACE_1906原生质体中。通过安普霉素初步筛选，以安普霉素抗性基因(apr)为对象进行PCR鉴定，获得的回复菌株命名为ΔSACE_1906/pIB139-1906。
1.5糖多孢红霉菌A226中过量表达SACE_1906基因
pIB139-1906通过PEG介导的原生质体转化技术导入糖多孢红霉菌A226中，以安普霉素抗性基因(apr)为对象进行PCR鉴定，获得菌株命名为A226/pIB139-1906。
1.6糖多孢红霉菌发酵产物检测
接种糖多孢红霉菌出发菌株及其衍生菌株于TSB培养基，在30℃振荡培养2天后，转接R5液体培养基30℃振荡培养7天。发酵结束后对红霉素进行萃取和HPLC检测。
1.7SACE_1906蛋白表达纯化及EMSA实验
使用设计的引物1906-22b_F和1906-22b_R扩增出SACE_1906基因，使用Nde I和Hind III酶进行双酶切并回收，插入到pET22b的Nde I和Hind III酶切位点之间，构建出质粒pET22b-1906，然后将其导入到BL21(DE3)感受态中，得到蛋白表达宿主BL21(DE3)-1906。
将得到的蛋白表达菌种BL21(DE3)-1906以1％的接种量接种到摇管中进行过夜培养，再以2％的接种量接种到50ml液体LB(已加入氨苄抗生素)摇瓶中，37℃培养至OD600达到0.4-0.5时加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG，并于16℃诱导20h，培养结束后取适量菌液热变性后进行SDS-PAGE分析，检测目的蛋白是否成功表达。
成功表达后的目的蛋白进行镍柱纯化，先使用适量浓度的梯度咪唑缓冲液洗脱杂蛋白，最后用60mM咪唑缓冲液将目的蛋白洗脱下来，即得到纯化后的目的蛋白。取适量上述纯化的目的蛋白分别与SACE_1906邻近基因间隔区序列(包括SACE_1906与SACE_1905间隔区及两端延伸基因内部的94bp)、eryAI启动子区以及ermE启动子区进行混合，加入一定量的结合缓冲液，于30℃孵育10min，进行活性PAGE分析，观察蛋白与DNA的结合情况。
1.8ΔSACE_1906中邻近基因SACE_1905的转录分析
收集24h的ΔSACE_1906和出发菌株A226的发酵液，提取获得所需RNA，反转成cDNA后，使用实时荧光定量PCR仪上机检测，如图6所示。
1.9糖多孢红霉菌A226中过量表达SACE_1905基因
参考上述1.5方法，构建糖多孢红霉菌A226中SACE_1905基因过表达菌株，命名为A226/pIB139-1905。
2.0红霉素工业高产菌株WB中缺失SACE_1906和过量表达SACE_1905
在红霉素工业高产菌株WB中缺失SACE_1906，验证正确后该菌株被命名为WBΔSACE_1906。进一步将pIB139-1905通过PEG介导的原生质转化方法导入WBΔSACE_1906中，得到的改造菌株命名为WBΔSACE_1906/pIB139-1905。突变株构建过程参考上述1.3和1.5方法。
2结果分析：
2.1ΔSACE_1906比出发菌株A226红霉素产量提高
SACE_1906和临近基因在糖多孢红霉菌染色体上的位置及编码氨基酸序列参见NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/？term＝SACE_1906、及https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/133911104)(见图1)。SACE_1906基因缺失的突变株ΔSACE_1906的构建过程(见图2)。在含有硫链丝菌肽的R3M平板上筛选缺失SACE_1906基因的突变子并通过PCR证实(见图2)。ΔSACE_1906突变株在R5液体培养基中发酵7天，萃取浓缩后经HPLC分析，其红霉素产量比出发菌株A226的产量提高了70.6％(见图3)，表明SACE_1906可能是参与红霉素生物合成的负调控因子。同时取7天发酵的菌体进行生物量测定，结果显示ΔSACE_1906与A226的菌体量差异不大(见图3)，暗示着SACE_1906的缺失并未影响菌株的菌体生长。
2.2SACE_1906基因回复
为了确认突变株ΔSACE_1906的红霉素产量的增加是完全由于SACE_1906基因缺失引起的,本发明设计了SACE_1906基因回补实验。pIB139-1906包含有红霉素抗性基因强启动子PermE*以及完整的SACE_1906基因,用于回补突变株ΔSACE_1906。经发酵和HPLC检测，ΔSACE_1906/pIB139-1906的红霉素产量恢复到与出发菌株A226的相一致水平(见图3)。
2.3A226中过表达SACE_1906基因引起红霉素产量降低
为了进一步验证SACE_1906在宿主糖多孢红霉菌中的功能，确认其与红霉素产量的关系，本发明同时设计了SACE_1906过表达实验，将表达载体pIB139-1906导入到A226中构建过表达菌株A226/pIB139-1906。经发酵和HPLC检测，发现其红霉素产量与A226相比，产量降低了30％(见图3)，综上结果证实了SACE_1906是糖多孢红霉菌中红霉素生物合成的负调控基因，通过基因工程途径缺失糖多孢红霉菌中SACE_1906基因可以提高红霉素的产量。
2.4SACE_1906蛋白的表达纯化及EMSA分析
依据1.8中方法步骤对目的蛋白进行表达与纯化，将5mM、30mM、40mM、50mM、60mM咪唑依次洗脱下来的蛋白溶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析，结果如图(见图4)所示。结果显示，目的蛋白在60mM咪唑浓度下被洗脱出来，并利用蛋白定量试剂盒对纯化后的SACE_1906融合蛋白进行定量。
EMSA分析显示，SACE_1906蛋白与P1905-1906有明显的体外结合作用，而与PeryAI及PermE却并无结合现象(见图5)，说明SACE_1906对邻近的编码乙醇脱氢酶的SACE_1905基因具有直接的调控作用，暗示着SACE_1906对红霉素生物合成的调控是间接的。
2.5ΔSACE_1906突变株中SACE_1905基因的转录量增加
与出发菌株A226相比，ΔSACE_1906突变株中的邻近基因SACE_1905的转录量上升了916倍。说明SACE_1906对邻近的编码乙醇脱氢酶的SACE_1905基因的转录具有直接的调控作用(见图6)。
2.6A226中过表达SACE_1905基因引起红霉素产量提高
为了验证SACE_1905对红霉素产量的影响，将表达载体pIB139-1905导入到A226中构建过表达菌株A226/pIB139-1905。经发酵和HPLC检测，发现其红霉素产量与A226相比，产量提高159％(见图7)，结果证实了提高SACE_1905基因的拷贝可以显著提高红霉素的产量。
2.7改造的工业高产菌株WBΔSACE_1906/pIB139-1905红霉素产量显著提高
将突变株WBΔSACE_1906、WBΔSACE_1906/pIB139-1905与对照菌株WB涂板活化，然后分别接入工业种子培养基的摇瓶中，30℃转速220rpm下培养2天后，转接工业发酵培养基中，继续培养7天。发酵结束后萃取浓缩经HPLC分析，相比较出发菌株WB，WBΔSACE_1906和WBΔSACE_1906/pIB139-1905的红霉素产量分别提高了20％和60％(见图8)。
序列表
<110> 安徽大学
<120> 一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 591
<212> DNA
<213> 糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)
<400> 1
cccaagcttc cgaaacccag caggtcgtct agtctagacg ccttcgccgc gatggccggg 60
gtaccgtggc ggagtcggca ggcacgagct cctgggcgcg ggcttctgca aacatatgtg 120
cgtgcaggac tcgttggcaa atctagagat ccggcttcag accgccgccg gaattcttgg 180
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gcagtgcggc tcaccggttt cggcaaatct agatcatgcc gtctcggccc ccgggatgac 300
gacggagtgc atatggtgca atacgaatgg cgaaaagctc aaagcttcag ccaatcgact 360
ggcgagcgca cccggcggcc ggccggggtc agcttcgcca acgtactcca gcttctccgg 420
gccgccgaaa ccggtgagcg atacgggcag acttgacgtt tacggcgtgg actatgaacc 480
aggtgcagct catgtaggtg cccgccagaa ggaatcactg atcccattca cagtaggggg 540
acgcgtggcg ggacgtccat gcgagtgtcc gctgctcacc gctggatcct a 591

Claims (2)

1.一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法，其特征在于：通过基因工程途径在糖多孢红霉菌的原始菌株A226和糖多孢红霉菌工业菌株WB中失活SACE_ 1906基因，获得产红霉素工程菌株，用所述红霉素工程菌株发酵生产红霉素即可，所述SACE_1906基因的核苷酸序列如序列1所示。
2.根据权利要求1所述的一种通过糖多孢红霉菌SACE_1906基因途径提高红霉素产量的方法，其特征在于，在已失活SACE_1906的基础上过表达靶基因SACE_1905，进一步提高红霉素的产量，所述靶基因SACE_1905通过PCR扩增获得，所述扩增引物为：1905-C_F(NdeI)AAACATATGATGCGTGCAGTGCGGCTCACCGGTTTCGGC，1905-C_R(XbaI) AAATCTAGATCATGCCGTCTCGGCCCCCGGGATGACGAC，所述扩增的模板为糖多孢红霉菌A226基因组。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816814A (zh) * 2012-04-07 2012-12-12 安徽大学 通过失活糖多孢红霉菌sace_3446基因提高红霉素产量
CN103205451A (zh) * 2013-03-15 2013-07-17 安徽大学 通过糖多孢红霉菌sace_7301基因途径提高红霉素产量
CN110157756A (zh) * 2019-03-11 2019-08-23 安徽大学 一种通过改造糖多孢红霉菌sace_0303基因提高红霉素产量的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0906130D0 (en) * 2008-10-03 2009-05-20 Procrata Biosystems Ltd Transcription factor decoys
CN107868789B (zh) * 2015-12-31 2020-11-17 沈阳福洋医药科技有限公司 可利霉素生物合成基因簇

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816814A (zh) * 2012-04-07 2012-12-12 安徽大学 通过失活糖多孢红霉菌sace_3446基因提高红霉素产量
CN103205451A (zh) * 2013-03-15 2013-07-17 安徽大学 通过糖多孢红霉菌sace_7301基因途径提高红霉素产量
CN110157756A (zh) * 2019-03-11 2019-08-23 安徽大学 一种通过改造糖多孢红霉菌sace_0303基因提高红霉素产量的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Complete genome sequence of the erythromycinproducing bacterium Saccharopolyspora erythraea producing bacterium Saccharopolyspora erythraea NRRL23338";Markiyan Oliynyk et al.;《Nature Biotechnology》;20070318;第25卷(第4期);第447-453页 *
"前体代谢工程提高红霉素产量的研究进展";张万祥 等;《生物技术通讯》;20190131;第30卷(第1期);第134-139页 *
"放线菌中与抗生素合成相关TetR家族转录因子的研究进展";倪静姝 等;《微生物学通报》;20190125;第1-11页 *

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