CN111175395A - 一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及毒品检测技术领域，提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法。本发明通过对卡芬太尼大鼠体内代谢研究，确证卡芬太尼代谢物为吸毒后主要检测生物标志物，建立了卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的快速灵敏检测方法，可指导人用吸毒检测。本发明提供的卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法检出限较低，其中卡芬太尼的检出限为0.20ng/mL，卡芬太尼代谢物的检出限为0.01ng/mL。而且，本发明提供的方法可在大鼠尾静脉注射卡芬太尼50μg/kg后七天，在大鼠尿液中仍可检测到一定浓度的卡芬太尼代谢物，说明本发明提供的方法灵敏度较高，可指导人用吸毒检测。

Description

一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法
技术领域
本发明涉及毒品检测技术领域，尤其涉及一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法。
背景技术
卡芬太尼是一种超强力合成阿片类镇痛药，与原型药芬太尼同属一类。目前，人们对人体药理学、毒理学或生物样品中卡芬太尼的分析知之甚少。虽然卡芬太尼未用于人类临床医学，但是卡芬太尼作为兽药用于大型动物镇静，具有较好的效果，比吗啡的镇痛强10000倍。卡芬太尼是EC50最低的芬太尼类似物，卡芬太尼可能的作用机制是其具有高亲油性、易于通过血脑屏障(BBB)、受体功效高、能够高选择性和特异性结合μ-opioid受体，μ-opioid受体产生阿片类药物的效果，如镇痛和兴奋，然而卡芬太尼也具有副作用和潜在毒性，如肌肉僵硬、呼吸衰竭和呼吸暂停。
近年来，芬太尼的致死率逐年上升，引发严重的安全问题，其中卡芬太尼迅速蔓延，成为新一代街头毒王，而且卡芬太尼是EC50最低的芬太尼类似物。由于卡芬太尼吸食剂量极低，卡芬太尼在体内吸食后的检测成为监控的难点。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，本发明提供的方法能够灵敏、准确地检测出待测样品中的卡芬太尼和卡芬太尼代谢物，可以用于指导人用吸毒检测。
本发明提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，包括以下步骤：
(1)对待测样品进行固相萃取，得到前处理样品，所述固相萃取包括以下步骤：
(a)依次采用甲醇和磷酸盐缓冲溶液对萃取柱进行活化平衡处理；
(b)将待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液混合，得到待测液，然后将待测液上样；
(c)依次采用甲酸水溶液和甲醇水溶液对萃取柱进行清洗，然后采用氨水和甲醇的混合溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(d)将洗脱液浓缩后，再用甲醇水溶液复溶，离心取上清液，得到前处理样品；
(2)将前处理样品进行液相色谱-串联质谱检测，分别测试得到卡芬太尼峰面积和卡芬太尼代谢物峰面积，根据卡芬太尼浓度-峰面积标准曲线以及卡芬太尼代谢物浓度-峰面积标准曲线，得到待测样品中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的质量含量；
所述液相色谱-串联质谱的色谱条件包括：
流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；所述流动相B为甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；
所述洗脱方式采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如表1所示：
表1梯度洗脱程序
Figure BDA0002359740670000021
所述液相色谱-串联质谱的质谱条件包括：
采用三重四级杆串联质谱；毛细管电压3000～4000V；毛细管温度为200～350℃；干燥气流速为5～10L/min；雾化气电压20～30psi。
优选的，所述步骤(a)磷酸盐缓冲溶液的pH值为6，所述甲醇和磷酸盐缓冲溶液的体积比为1:1；所述萃取柱为Waters Oasis PRiME MCX柱。
优选的，所述步骤(b)内标工作液为普萘洛尔水溶液，所述普萘洛尔水溶液的浓度为5μg/mL；所述待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液的体积比为1:1:1。
优选的，所述步骤(c)甲酸水溶液中甲酸的体积分数为1～2％，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为40～70％，所述氨水和甲醇的混合溶液中氨水的体积分数为1～10％；所述氨水的体积浓度为1～10％。
优选的，所述步骤(d)甲醇水溶液中甲醇的体积分数为5～20％。
优选的，所述色谱条件包括：
色谱柱：CAPCELLPAKMGII C18色谱柱；
色谱柱规格：2.0mm×50mm，3.0μm；
柱温：25℃；
进样体积：10μL；
流速：0.4mL/min。
优选的，所述卡芬太尼、卡芬太尼代谢物和内标物的质谱条件如表2所示：
表2质谱条件
Figure BDA0002359740670000031
优选的，所述步骤(1)中的待测样品为尿液。
有益效果
本发明提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，本发明提供的方法通过卡芬太尼大鼠体内代谢研究，确证卡芬太尼代谢物为吸毒后主要检测生物标志物，建立了卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的快速灵敏检测方法，可指导人用吸毒检测。本发明提供的卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法检出限较低，其中卡芬太尼的检出限为0.20ng/mL，卡芬太尼代谢物的检出限为0.01ng/mL。而且，本发明提供的方法可在大鼠尾静脉注射卡芬太尼50μg/kg后七天，在大鼠尿液中仍可检测到一定浓度的卡芬太尼代谢物，说明本发明提供的方法灵敏度较高，可指导人用吸毒检测。
附图说明
图1为卡芬太尼标准曲线图；
图2为卡芬太尼代谢物标准曲线图；
图3为卡芬太尼标准品一级质谱图；
图4为卡芬太尼标准品二级质谱图；
图5为卡芬太尼代谢物标准品一级质谱图；
图6为卡芬太尼代谢物标准品二级质谱图；
图7为大鼠尿样中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物每日排泄量图；
图8为大鼠尿样中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物累积排泄量图；
图9为卡芬太尼的尿样图谱；
图10为卡芬太尼代谢物的尿样图谱。
具体实施方式
本发明提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，包括以下步骤：
(1)对待测样品进行固相萃取，得到前处理样品，所述固相萃取包括以下步骤：
(a)依次采用甲醇和磷酸盐缓冲溶液对萃取柱进行活化平衡处理；
(b)将待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液混合，得到待测液，然后将待测液上样；
(c)依次采用甲酸水溶液和甲醇水溶液对萃取柱进行清洗，然后采用氨水和甲醇的混合溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(d)将洗脱液浓缩后，再用甲醇水溶液复溶，离心取上清液，得到前处理样品；
(2)将前处理样品进行液相色谱-串联质谱检测，分别测试得到卡芬太尼峰面积和卡芬太尼代谢物峰面积，根据卡芬太尼浓度-峰面积标准曲线以及卡芬太尼代谢物浓度-峰面积标准曲线，得到待测样品中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的质量含量；
所述液相色谱-串联质谱的色谱条件包括：
流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；所述流动相B为甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；所述洗脱方式采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如表1所示；
所述液相色谱-串联质谱的质谱条件包括：
采用三重四级杆串联质谱；毛细管电压3000～4000V；毛细管温度为200～350℃；干燥气流速为5～10L/min；雾化气电压为20～30psi。
本发明提供了一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，所述卡芬太尼的结构如式I所示；所述卡芬太尼代谢物的结构如式II所示：
Figure BDA0002359740670000051
本发明对待测样品进行固相萃取，得到前处理样品，所述固相萃取包括依次采用甲醇和磷酸盐缓冲溶液对萃取柱进行活化平衡处理。
在本发明中，所述磷酸盐缓冲溶液pH值优选为6，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度优选为0.1mol/L；所述甲醇和磷酸盐缓冲溶液的体积比优选为1:1；所述萃取柱优选为WatersOasis PRiME MCX柱，所述萃取柱的规格优选为3cc/60mg，萃取柱内填料的粒径优选为30μm。本发明采用甲醇和磷酸盐缓冲溶液对萃取柱进行活化平衡处理，通过萃取柱中小分子填料与这两种溶液充分接触，使得小分子的填料达到活化平衡的效果，有利于提高填料与卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的结合作用。
对萃取柱活化平衡完成后，本发明将待测液上样，所述待测液为待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液的混合溶液。在本发明中，所述待测样品优选为尿液，本发明通过检测尿液中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物含量，可以快速准确的判断卡芬太尼毒品的吸食情况。在本发明中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值优选为6；所述内标工作液优选为普萘洛尔水溶液，所述普萘洛尔水溶液的浓度优选为5μg/mL；所述待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液的体积比优选为1:1:1。
上样后，本发明依次采用甲酸水溶液和甲醇水溶液对萃取柱进行清洗，然后采用氨水和甲醇的混合溶液进行洗脱，得到洗脱液。在本发明中，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数优选为1～2％，更优选为2％，所述甲酸水溶液与萃取柱的体积比优选为1:2；所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数优选为40～70％，更优选为60％，所述甲醇水溶液与萃取柱的体积比优选为1:2。本发明采用甲酸水溶液进行清洗，能够除去待测液中的酸性物质，采用甲醇水溶液进行清洗，有利于去除待测液中的杂质。清洗完成后，本发明采用氨水和甲醇的混合溶液进行洗脱，得到洗脱液；所述氨水和甲醇的混合溶液中氨水的体积分数优选为1～10％，更优选为5％，所述氨水的体积浓度优选为1～10％，更优选为5％；所述氨水和甲醇的混合溶液与萃取柱的体积比优选为1:2。清洗完成后，卡芬太尼或卡芬太尼代谢物与萃取柱中的填料仍结合在一起，使用洗脱液将卡芬太尼或卡芬太尼代谢物洗脱出来，得到的洗脱液中含有卡芬太尼或卡芬太尼代谢物。
得到洗脱液后，本发明将洗脱液浓缩，然后用甲醇水溶液复溶，离心取上清液，得到前处理样品。本发明优选采用真空离心的方式将洗脱液浓缩至粘稠状态，然后加甲醇水溶液复溶为溶液状态，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数优选为5～20％，更优选为15％。复溶后，本发明离心取上清液，所述离心的时间优选为30s，离心得到的上清液为前处理样品。
得到前处理样品后，本发明将前处理样品进行液相色谱-串联质谱检测，分别测试得到卡芬太尼峰面积和卡芬太尼代谢物峰面积，根据卡芬太尼浓度-峰面积标准曲线以及卡芬太尼代谢物浓度-峰面积标准曲线，得到待测样品中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的质量含量。
在本发明中，所述液相色谱-串联质谱的色谱条件包括：
流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％，优选为0.1～0.15％，更优选为0.1％；所述流动相B为甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％，优选为0.1～0.15％，更优选为0.1％；
所述洗脱方式采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如表1所示；
在本发明中，所述色谱条件优选还包括：
色谱柱：日本资生堂CAPCELLPAKMGII C18色谱柱；
色谱柱规格：2.0mm×50mm，3.0μm；
柱温：25℃；
进样体积：10μL；
流速：0.4mL/min。
本发明在上述色谱条件下，待测液和内标实现基线分离。
在本发明中，所述液相色谱-串联质谱的质谱条件包括：
采用三重四级杆串联质谱；毛细管电压3000～4000V，优选为3500～4000V，更优选为4000V；毛细管温度为200～350℃，优选为250～350℃，更优选为350℃；干燥气流速为5～10L/min，优选为6～10L/min，更优选为10L/min；雾化气电压20～30psi，优选为25～30psi，更优选为30psi。
在本发明中，所述卡芬太尼、卡芬太尼代谢物和内标物的质谱条件优选如表2所示：
表2质谱条件
Figure BDA0002359740670000071
表2中内标物为普萘洛尔。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实验试剂：
Figure BDA0002359740670000081
实验器材：
Figure BDA0002359740670000082
实施例中液相色谱-串联质谱的液相色谱条件：
流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1％；所述流动相B为甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的体积分数为0.1％；
所述洗脱方式采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如表1所示；
色谱柱：日本资生堂CAPCELLPAKMGII C18色谱柱；
色谱柱规格：2.0mm×50mm，3.0μm；
柱温：25℃；
进样体积：10μL；
流速：0.4mL/min。
实施例中液相色谱-串联质谱的质谱条件：
采用三重四级杆串联质谱；毛细管电压4000V；毛细管温度350℃；干燥气流速为10L/min；雾化气电压30psi；所述卡芬太尼、卡芬太尼代谢物和内标物的质谱条件如表2所示。
卡芬太尼和卡芬太尼代谢物标准曲线绘制：
在每个离心管中分别加入2mL大鼠空白尿液，分别加入卡芬太尼及卡芬太尼代谢物20μL，内标普萘洛尔(5μg/mL)20μL，制成含有系列浓度卡芬太尼及卡芬太尼代谢物和相同浓度内标的标准尿液样本，卡芬太尼终浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、8.0、12.0、20.0ng/mL，卡芬太尼代谢物终浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、2、10、50ng/mL。按照实施例中的液相色谱-串联质谱条件进行检测，绘制标准曲线。卡芬太尼标准曲线如图1所示，卡芬太尼代谢物标准曲线如图2所示。其中卡芬太尼的线性范围0.20～20ng/mL，批内标准曲线1/x2加权条件下R2＝0.995，卡芬太尼的标准曲线方程为：y1＝0.273366x1-0.037781；卡芬太尼代谢物的检出线性范围为0.01～50ng/mL，批内标准曲线1/x2加权条件下R2＝0.998，卡芬太尼代谢物的标准曲线方程为：y2＝4.752535x2-0.024721。
标准品的质谱图
卡芬太尼标准品的一级质谱图如图3所示，卡芬太尼标准品的二级质谱图如图4所示；
卡芬太尼代谢物标准品的一级质谱图如图5所示，卡芬太尼标准品的二级质谱图如图6所示。
实施例1
(1)实验动物与药品配置
取适量卡芬太尼储备液(1mg/mL，溶剂为水)，用注射用水稀释，配制浓度为50μg/mL的卡芬太尼制剂，取适量纳洛酮储备液(10mg/mL，溶剂为水，用于保护大鼠，对检测结果无影响)，用注射用水稀释，配制浓度为20μg/mL的纳洛酮制剂。以上溶液均在给药当天新鲜配制使用。
雄性SD大鼠，体重180～210g，由北京维通利华公司提供，动物合格证号：SCXK(京)2016-0006。动物在室温环境饲养，每笼5只，每12h日夜交替，日光灯照明，自由饮食。
(2)排泄实验
取雄性SD大鼠6只，肌肉注射纳洛酮(20μg/kg)15min后，尾静脉注射卡芬太尼(50μg/kg)，于卡芬太尼给药后8h、12h、24h、36h、2-7day收集尿液。
(3)检测
按照上述固相萃取技术对尿液进行前处理，然后按照上述液相色谱-串联质谱条件对尿样进行检测，结果如表3所示：
表3大鼠尿液中卡芬太尼及卡芬太尼代谢物浓度(Mean±SD,n＝6)
Figure BDA0002359740670000101
“NA”：未检测出浓度
由表3可知，大鼠注射卡芬太尼后7天，尿样中仍能检测到一定浓度的卡芬太尼代谢物；只有在注射卡芬太尼36h后，尿样中能够检测到卡芬太尼。
对大鼠每日排泄量进行统计，结果如表4所示：
表4大鼠尿液中原型及代谢产物每日排泄量(Mean±SD,n＝6)
Figure BDA0002359740670000111
对大鼠累积排泄量进行统计，结果如表5所示：
表5大鼠尿液中原型及代谢产物累积排泄量(Mean±SD,n＝6)
Figure BDA0002359740670000112
Figure BDA0002359740670000121
将表4绘制成柱状图，结果如7所示；将表5绘制成柱状图，结果如图8所示。
不同时间收集的卡芬太尼的尿样图谱如图9所示。图9中A为空白图谱(卡芬太尼含量为0ng/mL)、B为定量下限图谱(卡芬太尼含量为0.20ng/mL)、C中卡芬太尼含量为1.0ng/mL，根据质谱检测结果可知，图9中出峰时间为3.57min，方框框起来的峰代表卡芬太尼。
不同时间收集的卡芬太尼代谢物的尿样图谱如图10所示。图10中A为空白图谱(卡芬太尼代谢物含量为0ng/mL)、B为定量下限图谱(卡芬太尼代谢物含量为0.01ng/mL)、C中卡芬太尼代谢物含量为0.1ng/mL，根据质谱检测结果可知，图10中出峰时间为2.63min，方框框起来的峰代表卡芬太尼代谢物。
图9和图10中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的出峰时间和峰面积如表6所示：
表6图9和图10中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的色谱数据
Figure BDA0002359740670000122
结果分析
由表3可知，大鼠静脉注射大鼠静脉注射卡芬太尼(50μg/kg)后，卡芬太尼主要在0～24h时间段的尿排泄量中含量最大，而卡芬太尼代谢物在0-8h时间段的尿排泄量中含量最大。
大鼠尾静脉注射卡芬太尼50μg/kg后，收集7天的尿液测定得到卡芬太尼与其代谢产物卡芬太尼代谢物的累积排泄量为6.33nmol，为注射卡芬太尼剂量的25％，其中卡芬太尼累积排泄量仅为卡芬太尼注射剂量的0.71％，尿排泄产物以卡芬太尼代谢物为主。卡芬太尼及卡芬太尼代谢产物的主要排泄时间段为0-1.5天，卡芬太尼代谢物在0-1.5天时间段的尿排泄量最大，36h累积排泄量占尿排泄总量的98％。
本发明提供的方法以普萘洛尔为内标，建立并确证了卡芬太尼及卡芬太尼代谢物的LC-MS/MS检测方法，方法确证结果显示尿液中内源性物质不干扰卡芬太尼及卡芬太尼代谢物及内标的测定。大鼠尿液中卡芬太尼及卡芬太尼代谢物的最低定量限分别为0.2ng/mL、0.01ng/mL，线性范围分别为0.2～20ng/mL、0.01～50ng/mL。
根据实验测得的尿样中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物浓度以及注射的卡芬太尼浓度进行计算，可以得出卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的日内准确度和精密度变异系数以及日间准确度和精密度变异系数。结果表明，卡芬太尼日内准确度和精密度变异系数分别为94.3～110.8％，2.61～6.22％，卡芬太尼日间准确度和精密度变异系数分别为85.4～110.8％，2.61～6.83％；卡芬太尼代谢物日内准确度和精密度变异系数分别为94.6～101.5％，4.19～7.05％，卡芬太尼代谢物日间准确度和精密度变异系数分别为94.6～110.8％，2.49～12.78％。
研究表明，大鼠注射卡芬太尼后，卡芬太尼在体内转化成卡芬太尼代谢物，卡芬太尼代谢物主要经由尿液排泄，且在尿液中停留时间较长。本发明提供的检测方法，在注射卡芬太尼后七天，仍可在尿液中检测出一定浓度的卡芬太尼代谢物。本发明提供的方法以卡芬太尼代谢物为吸毒后主要检测生物标志物，可以用于指导人用吸毒检测。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的检测方法，包括以下步骤：
(1)对待测样品进行固相萃取，得到前处理样品，所述固相萃取包括以下步骤：
(a)依次采用甲醇和磷酸盐缓冲溶液对萃取柱进行活化平衡处理；
(b)将待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液混合，得到待测液，然后将待测液上样；
(c)依次采用甲酸水溶液和甲醇水溶液对萃取柱进行清洗，然后采用氨水和甲醇的混合溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(d)将所述洗脱液浓缩后，再用甲醇水溶液复溶，离心取上清液，得到前处理样品；
(2)将所述前处理样品进行液相色谱-串联质谱检测，分别测试得到卡芬太尼峰面积和卡芬太尼代谢物峰面积，根据卡芬太尼浓度-峰面积标准曲线以及卡芬太尼代谢物浓度-峰面积标准曲线，得到待测样品中卡芬太尼和卡芬太尼代谢物的质量含量；
所述液相色谱-串联质谱的色谱条件包括：
流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；所述流动相B为甲酸甲醇溶液，所述甲酸甲醇溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.2％；
所述洗脱方式采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如表1所示：
表1梯度洗脱程序
Figure FDA0002359740660000011
Figure FDA0002359740660000021
所述液相色谱-串联质谱的质谱条件包括：
采用三重四级杆串联质谱；毛细管电压3000～4000V；毛细管温度为200～350℃；干燥气流速为5～10L/min；雾化气电压20～30psi。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(a)磷酸盐缓冲溶液的pH值为6，所述甲醇和磷酸盐缓冲溶液的体积比为1:1；所述萃取柱为Waters Oasis PRiME MCX柱。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(b)内标工作液为普萘洛尔水溶液，所述普萘洛尔水溶液的浓度为5μg/mL；所述待测样品、磷酸盐缓冲溶液和内标工作液的体积比为1:1:1。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)甲酸水溶液中甲酸的体积分数为1～2％，所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为40～70％，所述氨水和甲醇的混合溶液中氨水的体积分数为1～10％；所述氨水的体积浓度为1～10％。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(d)甲醇水溶液中甲醇的体积分数为5～20％。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：
色谱柱：CAPCELL PAK MGII C18色谱柱；
色谱柱规格：2.0mm×50mm，3.0μm；
柱温：25℃；
进样体积：10μL；
流速：0.4mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述卡芬太尼、卡芬太尼代谢物和内标物的质谱条件如表2所示：
表2质谱条件
Figure FDA0002359740660000022
Figure FDA0002359740660000031
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中的待测样品为尿液。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113219102A (zh) * 2021-05-25 2021-08-06 南开大学 一种测定污水中毒品及其代谢物含量的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101312949A (zh) * 2005-11-17 2008-11-26 马林克罗特公司 合成瑞芬太尼的方法
US20150160171A1 (en) * 2009-09-23 2015-06-11 Abt Molecular Imaging, Inc. Automated Quality Control System for Radiopharmaceuticals
CN107192788A (zh) * 2017-05-10 2017-09-22 山东省公安厅 血液中未知毒物的气相色谱‑质谱筛查方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101312949A (zh) * 2005-11-17 2008-11-26 马林克罗特公司 合成瑞芬太尼的方法
US20150160171A1 (en) * 2009-09-23 2015-06-11 Abt Molecular Imaging, Inc. Automated Quality Control System for Radiopharmaceuticals
CN107192788A (zh) * 2017-05-10 2017-09-22 山东省公安厅 血液中未知毒物的气相色谱‑质谱筛查方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DMITRIJ FOMIN ET AL.: "Human deaths from drug overdoses with carfentanyl involvement-new rising problem in forensic medicine", 《MEDICINE》 *
REBECCA L. SHANER ET AL.: "Comparison of two automated solid phase extractions for the detection of ten fentanyl analogs and metabolites in human urineusing liquid chromatography tandem mass spectrometry", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 *
TANQING WANG ET AL.: "Analysis of 13 Fentanils, Including Sufentanil and Caffentanii, In Human Urine by Liquid Chromatography-Atmospheric-Pressure Ionization-Tandem Mass Spectrometry", 《JOURNAL OF ANALYTICAL TOXICOLOGY》 *
施妍 等: "血液中20种芬太尼类物质UPLC-MS/MS法的建立及应用", 《法医学杂志》 *
董颖 等: "生物检材中芬太尼和舒芬太尼的HPLC-MS/MS分析", 《刑事技术》 *
钱振华 等: "芬太尼类物质卡芬太尼的定性检验方法研究", 《分析试验室》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113219102A (zh) * 2021-05-25 2021-08-06 南开大学 一种测定污水中毒品及其代谢物含量的方法

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