CN111139189A - 曲霉wbx-38及其在生产环匹阿尼酸中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种曲霉WBX‑38及其在生产环匹阿尼酸中的应用，将曲霉WBX‑38和肺冢村氏菌TP‑B0596分别进行发酵培养，将发酵液混合，在25‑32℃、160‑200rpm条件下共培养5‑8d，将共培养液分离纯化，获得环匹阿尼酸。本发明曲霉WBX‑38与肺冢村氏菌TP‑B0596共培养，制备得到环匹阿尼酸化合物，产量为20mg/L。

Description

曲霉WBX-38及其在生产环匹阿尼酸中的应用
技术领域
本发明涉及一种环匹阿尼酸的制备方法，特别涉及一种海洋来源曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38与细菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596共培养生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)的方法，本发明属于微生物发酵技术领域。
背景技术
自然界可以生产大量新颖和不寻常的分子骨架，其创造力是无与伦比的。在天然产物中，微生物次级代谢产物又是一个非常重要的组成部分，相当数量的天然产物药物或其先导物都是由微生物或微生物与宿主的相互作用产生的。开启抗生素时代的青霉素，后续的大环内酯类抗生素红霉素，都是由微生物生产的。但近些年，随着研究的深入，在微生物次级代谢产物中发现众多具有价值的化合物的同时，筛选获得的微生物资源的重复率不断上升，发现具有新结构、新活性化合物的几率逐年下降。
在实验室培养条件下，微生物的次级代谢产物产生途径不被表达或抑制。针对这一困境，科学研究者们提出了一系列的解决方案，其中一种策略就是共培养，模拟自然环境中微生物之间，微生物与环境之间的相互作用，促进微生物生长。在自然界中，不同的微生物群形成了复杂的微生物群落。因此，科学工作者们普遍认为，相较于纯培养，共培养可以更有效地产生次生代谢产物，因为两种不同的微生物共培养能够更好地模拟自然环境中微生物之间的不断相互作用。
发明内容
本发明的目的是提供一株新菌株--海洋曲霉WBX-38，以及利用海洋来源曲霉WBX-38与细菌TP-B0596共同发酵培养在生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)中的应用，解决了环匹阿尼酸化合物生产的需求问题。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一株新菌株，曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo：3.676，保藏日期为：2019年12月13日，地址广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编510070。
本发明还提供一种所述曲霉WBX-38在生产环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)中的应用，所述的应用方法为：将曲霉WBX-38和肺冢村氏菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596分别进行发酵培养，将发酵液混合，在25-32℃、160-200rpm条件下共培养5-8d，将共培养液分离纯化，获得环匹阿尼酸。
进一步，所述曲霉WBX-38发酵培养条件为：将曲霉WBX-38接种至PDB培养基中，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d(优选30℃、180rpm培养2d)，获得曲霉WBX-38发酵液；所述PDB培养基组成：200g/L马铃薯，20g/L葡萄糖，溶剂为水，pH自然。
进一步，所述肺冢村氏菌TP-B0596发酵培养条件为：将肺冢村氏菌TP-B0596接种至细菌培养基，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d(优选30℃、180rpm培养2d)，获得肺冢村氏菌TP-B0596发酵液；所述细菌培养基组成为：20g/L淀粉、20g/L甘油、5g/L葡萄糖、15g/L酪蛋白胨、3g/L酵母提取物，溶剂为水，pH自然。
进一步，所述曲霉WBX-38在发酵前先接种至PDA培养基，30℃培养5d，得到曲霉WBX-38菌株平板，再将曲霉WBX-38菌株平板接种至PDB培养基进行发酵；PDA平板培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。
进一步，所述肺冢村氏菌TP-B0596在发酵前先接种于细菌平板培养基上，30℃培养5d，得到细菌TP-B0596菌株平板，再将菌株平板接种至细菌培养基发酵；所述细菌平板培养基组成：淀粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖5g/L，酪蛋白胨15g/L，酵母提取物3g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。
进一步，所述曲霉WBX-38发酵液和肺冢村氏菌TP-B0596发酵液以体积比1:1混合，优选30℃、180rpm条件下共培养5d。
进一步，所述分离纯化方法为：(1)将共培养液离心(4-25℃、8000-12000rpm、10-15min；更优选为：20℃、10000rpm、10min)，收集上清；
(2)取步骤(1)得到的上清，加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，再次加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，混合两次收集得到的乙酸乙酯层，减压蒸馏除去乙酸乙酯后得到粗提取物；
(3)将所述粗提取物用甲醇溶解后进行反相高效液相色谱分离；
反相高效液相色谱的条件：采用Agilent Eclipse XDB-C18反相色谱柱；流动相为甲醇和水；洗脱时间为30min，流速为3mL/min；洗脱过程中，0-5min甲醇比例为10％；5-15min甲醇在流动相中的体积百分比从10％线性上升至90％；15-20min甲醇在流动相中的体积百分比从90％线性上升至100％；20-40min 100％甲醇；检测波长为210nm；收集峰值的保留时间为24min的峰的洗脱液，减压蒸干后，得到所述环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid)。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明提供一株新菌株--曲霉WBX-38，将该菌株与肺冢村氏菌TP-B0596采用共培养技术培养，制备得到环匹阿尼酸化合物，产量为20mg/L。
附图说明
图1为曲霉WBX-38在平板培养基上30℃生长5d时的菌落照片。
图2为细菌TP-B0596在平板培养基上30℃生长5d时的菌落照片。
图3为化合物环匹阿尼酸的MS图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限于本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到。
细菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596购自北纳生物购买，产品编号为BNCC202793。
实施例1、曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38的筛选及验证
1、初筛
菌株获得样品为浙江省舟山普陀山岛沙滩泥土样品。采用涂布平板法分离微生物菌株。取0.5g泥土样品，加入4.5mL无菌水，为样品1，混匀后静止2h。取0.5mL样品1加入4.5mL无菌水，为样品2，混匀后静止2h。取0.5mL样品2加入4.5mL无菌水，为样品3，混匀后静止2h。取样品1，2，3进行涂布平板接种于YP、MM及察氏固体培养基中，于30℃恒温培养箱中培养7d，每个菌株保存3个平板待用。观察菌株形态并记录。
YP培养基：蛋白胨5g/L，酵母提取物1g/L，去离子水1L，pH 7.4。
MM培养基：K2SO4 2g/L，K2HPO4 3g/L，NH4Cl 5g/L，MgSO4·7H2O 80mg/L，CaCl2100mg/L，葡萄糖2.5g/L，去离子水1L，pH 7.4。
察氏培养基：NaNO3 2g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，蔗糖30g/L，去离子水1L，pH 7.4。
2、复筛
挑取初筛中菌落成型且单一的菌体至PDA培养基平板上，30℃培养3d。
PDA平板培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然，制备方法：将马铃薯先洗净去皮，切成小块后称取200g，加水煮烂(煮沸20～30min能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，加入葡萄糖20g，加入琼脂20g，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1L，pH自然。
3、鉴定
挑选PDA培养基平板上生长较好，菌体为绿色，表面疏松的菌株WBX-38，接种至PDA培养基，在30℃培养36h，提取DNA，用通用引物对菌株进行PCR扩增，并对扩增后的产物进行测序(16sRNA如SEQ ID NO.1所示)。根据测序结果及菌株生理生化特征比对出菌株WBX-38属于曲霉(Aspergillus sp.)，将其命名为曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：3.676。
测序结果如下：
TGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCgAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATC。
实施例2曲霉WBX-38与细菌TP-B0596共培养制备化合物
1、接种平板的制备
(1)将曲霉WBX-38划线接种于PDA平板培养基上，30℃培养5d，得到曲霉WBX-38菌株平板。
PDA平板培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然，制备方法：将马铃薯先洗净去皮，切成小块后称取200g，加水煮烂(煮沸20～30min能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，加入葡萄糖20g，加入琼脂20g，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1L，pH自然。
(2)将细菌TP-B0596划线接种于平板培养基上，30℃培养5d，得到细菌TP-B0596菌株平板。
平板培养基组成：淀粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖5g/L，酪蛋白胨15g/L，酵母提取物3g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。
2、发酵
取曲霉WBX-38平板中2×2cm的琼脂块加入500ml PDB培养基中，30℃、180rpm振荡培养2d，获得曲霉WBX-38发酵液。
取细菌TP-B0596平板中2×2cm的琼脂块加入500ml细菌培养基中，30℃、180rpm振荡培养2d，获得细菌TP-B0596发酵液。
PDB培养基组成：200g/L马铃薯，20g/L葡萄糖，溶剂为水，pH自然。121℃灭菌15min。
细菌培养基组成：20g/L淀粉、20g/L甘油、5g/L葡萄糖、15g/L酪蛋白胨、3g/L酵母提取物，溶剂为水，pH自然。121℃灭菌15min。
3、共培养
取步骤2中得到的曲霉WBX-38发酵液与细菌TP-B0596发酵液以体积比1:1直接混合，在30℃、180rpm下培养5d，将培养液20℃、10000rpm离心10min，取上清液。
4、分离纯化化合物
取步骤3得到的上清液，加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，再次加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，混合两次收集得到的乙酸乙酯层，减压蒸馏除去乙酸乙酯后得到粗提取物。
将粗提取物用甲醇重新溶解，过滤去除不溶物后进行反向高效液相色谱。
反相高效液相色谱的条件：采用Agilent Eclipse XDB-C18反相色谱柱；流动相为甲醇和水；洗脱时间为30min，流速为3mL/min；洗脱过程中，0-5min甲醇比例为10％；5-15min甲醇在流动相中的体积百分比从10％线性上升至90％；15-20min甲醇在流动相中的体积百分比从90％线性上升至100％；20-40min 100％甲醇；检测波长为210nm；收集峰值的保留时间为24min的峰的洗脱液，减压蒸干后得到化合物环匹阿尼酸，产量为20mg/L。
4、化合物环匹阿尼酸的表征
(1)外观
步骤3制备得到的化合物为黄色固体。
(2)溶解性
步骤3制备得到的化合物可溶于甲醇。
(3)质谱数据
化合物环匹阿尼酸的ESI-MS质谱数据为m/z 335.1[M-H]+，见图3。
(4)核磁共振谱数据
化合物的归属情况如表1：
表1：
Figure BDA0002366565730000061
Figure BDA0002366565730000071
由以上结果确定化合物为环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)，分子式为C20H20N2O3，分子量为336，结构为：
Figure BDA0002366565730000072
序列表
<110> 浙江工业大学
<120> 曲霉WBX-38及其在生产环匹阿尼酸中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 569
<212> DNA
<213> 曲霉(Aspergillus sp.)
<400> 1
tgcggaagga tcattaccga gtgtagggtt cctagcgagc ccaacctccc cacccgtgtt 60
tactgtacct tagttgcttc ggcgggcccg ccattcatgg ccgccggggg ctctcagccc 120
cgggcccgcg cccgccggag acaccacgaa ctctgtctga tctagtgaag tctgagttga 180
ttgtatcgca atcagttaaa actttcaaca atggatctct tggttccggc atcgatgaag 240
aacgcagcga aatgcgataa ctagtgtgaa ttgcagaatt ccgtgaatca tcgagtcttt 300
gaacgcacat tgcgccccct ggtattccgg ggggcatgcc tgtccgagcg tcattgctgc 360
ccatcaagca cggcttgtgt gttgggtcgt cgtcccctct ccggggggga cgggccccaa 420
aggcgagcgg cggcaccgcg tccgatcctc gagcgtatgg ggctttgtca cccgctctgt 480
aggcccggcc ggcgcttgcc gaacgcaaat caatcttttc caggttgacc tcggatcagg 540
tagggatacc cgctgaactt aagcatatc 569

Claims (9)

1.曲霉(Aspergillus sp.)WBX-38，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo：3.676，保藏日期为：2019年12月13日，地址广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，邮编510070。
2.一种权利要求1所述曲霉WBX-38在生产环匹阿尼酸中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：将曲霉WBX-38和肺冢村氏菌(Tsukamurellapulmonis)TP-B0596分别进行发酵培养，将发酵液混合，在25-32℃、160-200rpm条件下共培养5-8d，将共培养液分离纯化，获得环匹阿尼酸。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述曲霉WBX-38发酵培养条件为：将曲霉WBX-38接种至PDB培养基中，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d，获得曲霉WBX-38发酵液；所述PDB培养基组成：200g/L马铃薯，20g/L葡萄糖，溶剂为水，pH自然。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述肺冢村氏菌TP-B0596发酵培养条件为：将肺冢村氏菌TP-B0596接种至细菌培养基，在25-32℃、160-200rpm条件下振荡培养1-3d，获得肺冢村氏菌TP-B0596发酵液；所述细菌培养基组成为：20g/L淀粉、20g/L甘油、5g/L葡萄糖、15g/L酪蛋白胨、3g/L酵母提取物，溶剂为水，pH自然。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述曲霉WBX-38在发酵前先接种至PDA培养基，30℃培养5d，得到曲霉WBX-38菌株平板，再将曲霉WBX-38菌株平板接种至PDB培养基进行发酵；PDA平板培养基组成：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述肺冢村氏菌TP-B0596在发酵前先接种于细菌平板培养基上，30℃培养5d，得到细菌TP-B0596菌株平板，再将菌株平板接种至细菌培养基发酵；所述细菌平板培养基组成：淀粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖5g/L，酪蛋白胨15g/L，酵母提取物3g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述曲霉WBX-38发酵液和肺冢村氏菌TP-B0596发酵液以体积比1:1混合。
9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述分离纯化方法为：(1)将共培养液离心，收集上清；
(2)取步骤(1)得到的上清，加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，再次加入等体积的乙酸乙酯，搅拌20min，静置分层后收集乙酸乙酯层，混合两次收集得到的乙酸乙酯层，减压蒸馏除去乙酸乙酯后得到粗提取物；
(3)将所述粗提取物用甲醇溶解后进行反相高效液相色谱；反相高效液相色谱的条件：采用Agilent Eclipse XDB-C18反相色谱柱；流动相为甲醇和水；洗脱时间为30min，流速为3mL/min；洗脱过程中，0-5min甲醇比例为10％；5-15min甲醇在流动相中的体积百分比从10％线性上升至90％；15-20min甲醇在流动相中的体积百分比从90％线性上升至100％；20-40min 100％甲醇；检测波长为210nm；收集峰值的保留时间为24min的峰的洗脱液，减压蒸干后，得到所述环匹阿尼酸。
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Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000001232A1 (en) * 1998-07-06 2000-01-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture BIOLOGICAL CONTROL OF AFLATOXIN AND CYCLOPIAZONIC ACID CONTAMINATION OF CROPS USING NON-TOXIGENIC STRAINS OF $i(ASPERGILLUS)
CN1333837A (zh) * 1998-12-23 2002-01-30 诺维信公司 在曲霉属突变细胞中产生多肽的方法
JP2008054637A (ja) * 2006-09-04 2008-03-13 Hiroyasu Onaka 混合培養による二次代謝産物のスクリーニング方法及び製造方法
US8173179B1 (en) * 2009-02-10 2012-05-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Granular bioplastic biocontrol composition
CN102492677A (zh) * 2011-12-12 2012-06-13 江南大学 一种羧肽酶(Aus CpA)基因的克隆及重组酶的制备
CN102597241A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于生产感兴趣的化合物的经改进的宿主细胞
US20120183507A1 (en) * 2011-01-19 2012-07-19 Dorner Joe W Non-Toxigenic Strains of Aspergillus Flavus for Control of Aflatoxin Contamination in Crops
CN103183666A (zh) * 2011-12-28 2013-07-03 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种环匹阿尼酸类化合物及其制备和应用
TW201339230A (zh) * 2012-03-16 2013-10-01 Monosol Llc 包含酵素之水溶性組合物及其製備方法
CN103361431A (zh) * 2013-07-18 2013-10-23 江南大学 一种基于全基因组序列分析不产真菌毒素的真菌菌株安全性评价方法
ES2586740A1 (es) * 2015-04-15 2016-10-18 Víctor TENA PÉREZ Boramidas cíclicas con actividad antifúngica, antibiótica, antiviral y antitumoral.
CN107400138A (zh) * 2016-05-20 2017-11-28 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种cpa中间体、cpa类化合物及其制备方法和应用
CN107496420A (zh) * 2017-08-25 2017-12-22 中国科学院微生物研究所 环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途
CN108330200A (zh) * 2017-10-07 2018-07-27 中国人民解放军第三0九医院 冢村氏菌的环介导等温扩增检测方法和试剂盒
KR20180118477A (ko) * 2017-04-21 2018-10-31 서울대학교산학협력단 안전성이 검증된 장류 발효 균주 및 이를 이용하여 제조된 장
CN109414463A (zh) * 2016-02-25 2019-03-01 托马斯·朱利叶斯·波洛迪 治疗慢性传染性疾病的组合物和方法
CN109777747A (zh) * 2018-07-09 2019-05-21 山东省科学院生态研究所 一株油泥石油降解菌株及其培养方法与应用
CN110108870A (zh) * 2019-04-30 2019-08-09 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉菌代谢物环匹阿尼酸和黄曲霉毒素混合污染的量子点荧光微球层析试剂盒
CN110108871A (zh) * 2019-04-30 2019-08-09 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用
JP2019149945A (ja) * 2018-03-01 2019-09-12 国立大学法人 東京大学 プラテンシマイシンの製造方法
CN110527636A (zh) * 2018-05-25 2019-12-03 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种合成环匹阿尼酸衍生物的突变菌株及其构建方法和应用
CN111051515A (zh) * 2017-06-30 2020-04-21 米其林集团总公司 来自细菌的iii型聚酮合酶作为间苯三酚合酶的用途

Patent Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000001232A1 (en) * 1998-07-06 2000-01-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture BIOLOGICAL CONTROL OF AFLATOXIN AND CYCLOPIAZONIC ACID CONTAMINATION OF CROPS USING NON-TOXIGENIC STRAINS OF $i(ASPERGILLUS)
CN1333837A (zh) * 1998-12-23 2002-01-30 诺维信公司 在曲霉属突变细胞中产生多肽的方法
JP2008054637A (ja) * 2006-09-04 2008-03-13 Hiroyasu Onaka 混合培養による二次代謝産物のスクリーニング方法及び製造方法
US8173179B1 (en) * 2009-02-10 2012-05-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Granular bioplastic biocontrol composition
CN102597241A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于生产感兴趣的化合物的经改进的宿主细胞
US20120183507A1 (en) * 2011-01-19 2012-07-19 Dorner Joe W Non-Toxigenic Strains of Aspergillus Flavus for Control of Aflatoxin Contamination in Crops
CN102492677A (zh) * 2011-12-12 2012-06-13 江南大学 一种羧肽酶(Aus CpA)基因的克隆及重组酶的制备
CN103183666A (zh) * 2011-12-28 2013-07-03 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种环匹阿尼酸类化合物及其制备和应用
TW201339230A (zh) * 2012-03-16 2013-10-01 Monosol Llc 包含酵素之水溶性組合物及其製備方法
CN103361431A (zh) * 2013-07-18 2013-10-23 江南大学 一种基于全基因组序列分析不产真菌毒素的真菌菌株安全性评价方法
ES2586740A1 (es) * 2015-04-15 2016-10-18 Víctor TENA PÉREZ Boramidas cíclicas con actividad antifúngica, antibiótica, antiviral y antitumoral.
CN109414463A (zh) * 2016-02-25 2019-03-01 托马斯·朱利叶斯·波洛迪 治疗慢性传染性疾病的组合物和方法
CN107400138A (zh) * 2016-05-20 2017-11-28 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种cpa中间体、cpa类化合物及其制备方法和应用
KR20180118477A (ko) * 2017-04-21 2018-10-31 서울대학교산학협력단 안전성이 검증된 장류 발효 균주 및 이를 이용하여 제조된 장
CN111051515A (zh) * 2017-06-30 2020-04-21 米其林集团总公司 来自细菌的iii型聚酮合酶作为间苯三酚合酶的用途
CN107496420A (zh) * 2017-08-25 2017-12-22 中国科学院微生物研究所 环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途
CN108330200A (zh) * 2017-10-07 2018-07-27 中国人民解放军第三0九医院 冢村氏菌的环介导等温扩增检测方法和试剂盒
JP2019149945A (ja) * 2018-03-01 2019-09-12 国立大学法人 東京大学 プラテンシマイシンの製造方法
CN110527636A (zh) * 2018-05-25 2019-12-03 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种合成环匹阿尼酸衍生物的突变菌株及其构建方法和应用
CN109777747A (zh) * 2018-07-09 2019-05-21 山东省科学院生态研究所 一株油泥石油降解菌株及其培养方法与应用
CN110108870A (zh) * 2019-04-30 2019-08-09 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉菌代谢物环匹阿尼酸和黄曲霉毒素混合污染的量子点荧光微球层析试剂盒
CN110108871A (zh) * 2019-04-30 2019-08-09 中国农业科学院油料作物研究所 同步检测黄曲霉菌真菌毒素的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IŞILAY LAVKOR 等: "Determination Aflatoxins and Cyclopiazonic Acid Production Ability of Aspergillus flavus", 《BIOLOGICAL CONTROL RESEARCH INSTITUTE》 *
PERNG-KUANG CHANG 等: "Cyclopiazonic Acid Biosynthesis of Aspergillus flavus and Aspergillus oryzae", 《TOXINS》 *
田小月 等: "Mg2+对米曲霉HMP-F28 所产α-CPA及β-CPA 的调控作用", 《微生物学杂志》 *
耿青如等: "丝状真菌次级代谢产物的功能与合成调控研究进展", 《菌物学报》 *

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