CN111135124A - 含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有蔗糖、吲哚‑3‑乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物，更加详细地，作为有效成分含有蔗糖、吲哚‑3‑乙酸以及玫瑰果提取物的混合物，从而具有提高皮肤保湿力、促进皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的皮肤外用剂组合物。

Description

含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外 用剂组合物
技术领域
本发明涉及一种含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物，更加详细而言，涉及一种作为有效成分含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物，从而用于提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的皮肤外用剂组合物。
背景技术
角质细胞是在表皮最下层持续增殖(proliferation)的基底细胞(basal cell)按阶段进行形态以及功能上的变化，并上升到皮肤表面的特征细胞，经过一定时间后，老的角质细胞会从皮肤上脱落，新的角质细胞代替其功能，这种反复性的一系列的变化过程被称为“表皮细胞的分化”或者“角质化(keratinization)”。角质化过程中，角质形成细胞生成天然保湿因子(Natural Moisturizing Factor；NMF)和细胞间脂质(神经酰胺、胆固醇、脂肪酸)的同时形成角质层，使角质层具有牢固性和柔软性，从而拥有作为皮肤屏障(skinbarrier)的功能。
随着老龄化人口的急速增多，角质层的生成-脱落速度(turnover rate)变慢，角质形成细胞的脂质合成能力降低，或者在表皮上不能顺利进行细胞的正常分裂、成熟以及分化，由此导致角质层的保湿因子和脂质的量减少而呈现不能维持角质层的正常功能的状态，即，存在具有皮肤屏障功能被瓦解状态的皮肤的人逐渐增多的趋势。
由于表皮细胞的非正常分裂、分化，诱发皮肤的皮肤干燥症、特应性皮炎以及牛皮廯等多种皮肤疾病，对于所述皮肤疾病，仅靠本身只具有补水功能的通常的保湿剂虽然可以稍微减轻其症状，然而无法期待根治，这是实情。
人类的皮肤随着年龄的增长，不仅皮肤的厚度变薄，皱纹变多，弹性减弱，而且皮肤血色也变暗淡，常发生皮肤过敏，黄褐斑、雀斑以及老年斑也增多等而引起多种变化。
随着老化，作为构成皮肤的物质的胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸以及糖蛋白的含量以及排列会发生变换或者减少的症状，而且因自由基以及活性氧自由基而受到氧化压力。另外，由于老化的进行或者紫外线，而在构成皮肤的大部分的细胞中，环氧合酶-2(Cox-2,cyclooxygenase)的生物合成增加，所述环氧合酶-2被公知为是生成引起炎症的促炎细胞因子(proinflammatory cytokine)的酶，由于该炎症性因子而作为用于分解皮肤组织的酶的金属蛋白酶(MMP，matrix metalloproteinase)的生物合成增加，由于iNOS(诱生型-氧化氮合酶：inducible nitric oxide synthase)而NO(一氧化氮：nitric oxide)的生成增加。
以1969年麦克德和弗雷德维奇发现作为清除超氧自由基(superoxide radical)的酶的SOD(超氧化物歧化酶：superoxide dismutase)为契机，生物体内的活性氧的发生、生物毒性以及防御清除设备备受关注，由此认真地研究起抗氧化剂。
因外部压力、紫外线、吸烟、药物、活性氧等而在身体内生成如超氧自由基的自由基，而且对细胞构成成分的脂质、蛋白质、糖、核酸(例如，DNA)等进行非选择性且不可逆的破坏作用，从而不仅是老化，还引起癌症、中风、帕金森病等脑疾病和心脏病、心肌缺血、动脉硬化、皮肤病、消化系统疾病、炎症、风湿病、自身免疫疾病等各种疾病。如此，自由基因对细胞的氧化性破坏而引起各种功能障碍，由此，也成为导致老化和疾病的原因。
最近，对各种疾病以及老化等，活性氧以及超氧自由基起到直接原因的事实被公开，由此，对抗氧化剂的研究，从作为化妆品添加物的抗氧剂的开发研究转变为寻找作为抑制老化以及疾病治疗剂的抗氧化剂的研究。
水通道蛋白(Aquaporin)作为在细胞膜中将水分子主动移动到细胞内的运输蛋白质(transporter)，存在于细胞膜中(Zeuthen et al.,J Biol Chem.,274(31):21631-6,1999；de Groot et al.,Curr Opin Struct Biol.,15(2):176-83,2005)。目前为止，哺乳类中公开有13种水通道蛋白，其中，水通道蛋白-3(AQP3)是使水分子和甘油(glycerol)选择性通过的水甘油通道蛋白(aquaglyceroporin)的一种，周知对皮肤的保湿和伤口治疗起到重要作用(Sougrat et al.,J Invest Dermatol.,118(4):678-85,2002；Hara-Chikumaet al.,J Mol Med.,86(2):221-31,2008)。
ABCA12(ATP结合盒亚家族A成员12：ATP Binding Cassette Subfamily A Member12)横穿细胞膜，起到搬运多种分子的作用。尤其，ABCA12蛋白质向构成作为皮肤的最外层的表皮的细胞运输脂质(lipid)而起到重要作用。通过该脂质运输，防止水分流失(脱水)，并维持正常发育所需的表皮内的脂质层，起到强化皮肤屏障功能的作用(Uitto J,TrendsMol Med.,11(8):341-3,2005；Akiyama M.,Biochim Biophys Acta.,1841(3):435-40,2014)。
CASPASE14(含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶14：Caspase 14)参与到角质形成细胞的分化，从而在皮肤屏障功能中起到重要作用。尤其，公知其参与到对皮肤屏障的正常功能起到非常重要作用的丝聚蛋白(filaggrin)的成熟过程(Eckhart et al.,J InvestDermatol.,115(6):1148-51,2000；Pistritto et al.,Cell Death Differ.,9(9):995-1006,2002；Renl et al.,J Invest Dermatol.,119(5):1150-5,2002；Denecker et al.,Nat Cell Biol.,9(6):666-74.2007；Devos et al.,J Invest Dermatol.,132(12):2857-60,2012；Choi et al.,Arch Dermatol Res.309(10):795-803,2017)。
存在多个与含有玫瑰果提取物的皮肤外用剂组合物有关的现有技术(参考以下专利文献1以及2)。然而，没有报道过与以下内容有关的研究结果：作为皮肤外用剂组合物的有效成分，在皮肤(皮肤细胞)上使用蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物，从而确认有意义的活性改善。
【现有技术文献】
【专利文献】
(专利文献1)韩国授权专利第10-1448732号(授权日：2014年10月1日)
(专利文献2)韩国公开专利第10-2014-0073432号(公开日：2014年6月16日)
发明内容
本发明的主要目的在于，提供一种与蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物有关的皮肤外用剂组合物，优选为确认作为化妆品组合物或者药学组合物的原料的功效，并使用该原料的具有优秀功能的化妆品组合物或者药学组合物。
本发明为了开发用于改善皮肤状态的皮肤外用剂组合物而不断努力地结果，发现了含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的组合物其提高皮肤的保湿力、增强抗氧化以及抗老化功效的效果卓越。
基于该发现，本发明提供一种，
作为有效成分含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物，优选为作为有效成分含有所述混合物而用于提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的药学组合物以及化妆品组合物。
另外，本发明提供蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，尤其提供作为皮肤角质细胞的保湿力增强剂、抗氧化增强剂(抗氧化剂)和/或抗老化剂的用途，其用于制造提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的药学组合物以及药品。
另外，本发明提供蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，尤其提供作为皮肤角质细胞的保湿力增强剂、抗氧化增强剂(抗氧化剂)和/或抗老化剂的用途，其用于制造提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的化妆品组合物以及化妆品。
根据本发明的含有蔗糖、吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic Acid,IAA)以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物其提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的功效优秀，因此，作为需要功能性或者复合功能性的医药品以及化妆品的有效成分乃至功能性材料非常有用。
附图说明
图1是示出根据本发明的实施例的由蔗糖(sucrose)、吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic Acid,IAA)以及玫瑰果提取物(Rose-Hip,Rosa canina fruit extract)而成的混合物(ppm浓度：100ppm)的高自由基清除活性和由此提升的抗氧化效果的图表。
图2是示出根据本发明的比较例的混合物(ppm浓度：100ppm)的自由基清除活性的图表。
图3是示出因根据本发明的一实施例(实施例2)的由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物(ppm浓度：3.125～100ppm)的高自由基清除功效而被提升的抗氧化效果的图表。
图4是示出因根据本发明的一实施例(实施例2)的由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物(ppm浓度：1500～6000ppm)的高活性氧清除功效而被提升的抗氧化效果的图表。
图5是通过处理根据本发明的一实施例(实施例2)的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物(ppm浓度：50，100ppm)而示出角质细胞的AQP3 mRNA表达水平的图表。
图6是通过处理根据本发明的一实施例(实施例2)的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物(ppm浓度：50，100ppm)而示出角质细胞的ABCA12 mRNA表达水平的图表。
图7是通过处理根据本发明的一实施例(实施例2)的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物(ppm浓度：50，100ppm)而示出角质细胞的CASP14 mRNA表达水平的图表。
具体实施方式
没有以其他方式进行定义的情况下，本说明书中使用的所有技术以及科学术语具有与本领域技术人员通常所理解的含义相同的含义。一般，本说明书中使用的命名法使用本技术领域中周知的通常的命名法。
以下，针对本发明，进行更加具体的说明。
本说明书中用于表现长度、面积、体积、时间(期间)、浓度、含量、温度等而使用的术语“约”是指在该数值或者数值范围内最大存在10％的允许误差。
本发明在一观点上，涉及作为有效成分含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物，优选为作为有效成分含有所述混合物而用于提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化的药学组合物以及化妆品组合物。
所述混合物可以是以ppm浓度为基准，以1～50：0.1～9.0：10～90混合蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物，优选为以9～50：0.3～8.5：45～90，最优选为以9～50：0.4～0.9：45～90进行混合。
在制作所述玫瑰果提取物时使用的提取溶剂可以是通常所使用的水、有机溶剂或者其混合物，优选为水。作为水，优选使用离子交换水、蒸馏水等净化水。
在制作所述玫瑰果提取物时使用的提取温度可以为50～100℃，优选为80～90℃。当所述提取温度低于50℃时，可以发生提取收获量降低的问题，当超过100℃时，相比上升温度，含有所收获的玫瑰果提取物的组合物其提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化效果增加不大。
所述组合物考虑到剂型稳定性和与化妆品以及医药品等的安全有关的规则中规定的使用限量，所述组合物中蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物总含量以组合物的总重量为基准，可以含有0.001～30重量％，优选为0.01～25重量％，更加优选为0.01～20重量％，最优选为0.1～15重量％。当所述混合物的含量以组合物的总重量为基准，低于0.001重量％时，不能显示作为外用剂所需的提高皮肤保湿力、增强皮肤抗氧化或者皮肤抗老化功效，当所述混合物的含量以组合物的总重量为基准，超过30重量％时，不能充分溶解到剂型中，而不能与药物(医药)或者化妆品剂型的其他成分稳定混合，而且使用在皮肤上时，因过度刺激皮肤等而可能具有安全上的问题。
所述组合物可以提高编码皮肤细胞的AQP3(水通道蛋白3：Aquaporin 3)的基因的表达水平，可以提高编码ABCA12(ATP结合盒亚家族A成员12：ATP Binding CassetteSubfamily A Member 12)的基因的表达水平，可以提高编码CASPASE14(含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶14：Caspase 14)的基因的表达水平。
所述组合物可以是液状、固状，尤其是粉末或者珠状的剂型，然而并不局限于此。
所述医学组合物可以进一步含有防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或者乳化促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂等药剂学助剂以及其他对治疗有用的物质(载体(基体)、赋形剂、稀释剂等)，通过通常的方法，可以以非口服剂(涂敷剂)形态成为剂型化。
术语“载体(carrier)”被定义为是容易向细胞或者组织内附加化合物的化合物。例如，二甲基亚砜(DMSO)是使有机化合物容易进入到生物体的细胞或者组织内的通常使用的载体。
术语“赋形剂(excipient)”是在提纯或者丸药等的制药过程中主药的量少时，为了方便吃药或者使其具有某种颜色和形态而添加的物质，主要使用乳糖或者淀粉。
术语“稀释剂(diluent)”被定义为是不仅能够稳定对象化合物的生物学活性形态，还能溶解化合物的被水稀释的化合物。在本领域中，溶解在缓冲溶液中的盐作为稀释剂来使用。通常使用的缓冲溶液是磷酸盐缓冲生理盐水，因为其在模仿人类溶液的盐状态。缓冲盐在低浓度下能够控制溶液的pH值，因此，缓冲稀释剂改变化合物的生物学活性的情况很少发生。
所述药学组合物可以作为其本身投给(涂敷)人类患者，或者如在结合疗法上，与其他活性成分一起或者与合适的载体或者赋形剂一起作为混合的医药组合物，投给(涂敷)人类患者。
作为可以在所述药学组合物中含有的载体、赋形剂以及稀释剂，可以举出乳糖、葡萄糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、甲基羟苯酸酯、丙基羟苯酸酯、滑石粉、硬脂酸镁以及矿物油。
另外，所述非口服剂(涂敷剂)例如可以为注射剂、点滴剂、软膏、乳液、凝胶、霜、喷雾、悬浮剂、乳剂、栓剂、贴片等剂型，然而并不局限于此。
根据本发明的一实施例的所述药学组合物可以通过非口服、直肠、局部、硬皮等投入(涂敷)。根据本发明的一实施例的药学组合物例如可以在头皮上局部投入(涂敷)。
另外，所述活性成分的药剂学上可允许的容量，即投入量(涂敷量)可以根据接受治疗的对象的年龄、性别、体重和所要治疗的特定疾病或者病状、疾病或者病状的严重程度、投入路径(涂敷路径)以及处方人的判断而不同。针对基于所述因子决定的投入量(涂敷量)，在本领域技术人员的水平内。针对投入量(涂敷量)，例如，每日以每1kg体重按0.01～5000mg，优选为0.1～2000mg，更加优选为0.5～500mg，最优选为1～100mg的量投入(涂敷)，并分成1至多次来投入(涂敷)，然而所述投入量(涂敷量)并不通过某一方式来限定本发明的范围。
本发明中适合使用的药学组合物中含有如下组合物，其为了达成所意图的目的而以有效的量含有活性成分，所述活性成分中含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物。更加具体而言，治疗有效量是指延长所要治疗的个体的生存，或者对防止、减轻或者缓和疾病症状有效的化合物的量。对治疗有效量的决定，尤其，在此处提供的详细公开内容方面，其在本领域技术人员的能力范围内。
针对在本发明的方法中使用的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物，以及作为有效成分含有其的组合物(化合物)的治疗有效量，可以在初期从细胞培养分析中进行测定。例如，剂量(dose)可以是为了获得循环浓度范围而在动物模型中进行计算，所述循环浓度范围包括在细胞培养中决定的IC50(半抑制浓度：half maximal inhibitoryconcentration)或者EC50(半数有效浓度：half maximal effective concentration)。所述信息可以在更加准确地决定对人类有用的剂量时使用。
针对此处记载的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物，或者作为有效成分含有其的组合物(化合物)的毒性和治疗有效性，例如，为了决定LD50(对于50％群集的致死量)、ED50(针对50％群集具有治疗效果的剂量)、IC50(针对50％群集具有抑制治疗效果的剂量)，可以根据细胞培养或者实验动物中的标准毒性、药物动力学和/或药效动力学分析过程进行计算。毒性和治疗效果之间的剂量比为治疗指数，其可以由LD50和ED50(或者IC50)之间的比率来表示。优选为显示高的治疗指数的化合物。从其细胞培养分析中获取的数据可以用于算出用于人类的剂量的范围。优选为，所述化合物的投入量(用量：dosage)或者涂敷量在完全没有毒性或者几乎没有毒性的状态下，属于包含ED50(或者IC50)的循环浓度的范围内。
优选为，所述药学组合物的剂型选自由软膏、乳液、凝胶、霜、喷雾、悬浮剂、乳剂以及贴片而成的群中的一种。当在药学组合物中使用根据本发明的组合物时，可以将所述组合物作为有效成分，添加常用的无机或者有机载体，并制剂化为固体、半固体或者液状形态。如果按照商法实施本发明的有效成分，则可以容易进行制剂化，可以适当使用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香辛料、稳定剂、防腐剂、保存剂、可湿性粉剂、乳化促进剂、悬浮剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂、其他常用的助剂。
所述化妆品组合物，其特征在于，选自由柔软性化妆水、收敛性化妆水、营养性化妆水、乳液、眼霜、营养霜、按摩霜、洁面霜、洁面乳、卸妆水、粉、精华以及面膜而成的群中的一种而成为剂型化。
所述组合物中可以含有保湿剂(多元醇等)、粘度调节剂、增粘剂、pH调节剂、脂肪、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂、凝胶剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foamingagent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型乳化剂、非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封锁剂、螯合剂、保存剂、维生素、润湿剂、油、染料、颜料、亲水性活性剂、亲油性活性剂、脂囊泡或者与医药品以及化妆品中通常使用的任意其他成分相同的医学、药学、化妆品学或者皮肤科学领域中通常使用的助剂。所述助剂可以投入医学、药学、化妆品学或者皮肤科学领域中通常使用的量。另外，所述组合物为了增加皮肤状态改善效果，可以含有皮肤吸收促进物质。
以下，通过实施例更加详细说明本发明。所述实施例仅是用于示例本发明，本领域技术人员应理解本发明的范围并不限于所述实施例。
<蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的制造>
原料：葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖以及吲哚-3-乙酸是从西格玛奥德里奇(SigmaAldrich)公司购入，苹果(Pyrus malus)、柠檬(Citrus limon)以及玫瑰果(Rose-Hip,Rosacanina fruit)是从零售商购入。
【参考例1】玫瑰果提取物(Rose-Hip,Rosa canina fruit extract)的制造
玫瑰果提取物是将玫瑰果在约85℃的温度下进行热水提取来获取得到的。更加详细而言，所述提取物是将玫瑰果以及净化水以重量为基准，以约1：1进行混合后，在约85℃的温度下进行提取，然后进行过滤，去除固体物后获取得到的。
【参考例2】苹果提取物(Pyrus malus extract)的制造
苹果提取物是将苹果在85℃的温度下进行热水提取来获取得到的。更加详细而言，所述提取物是将苹果以及净化水以重量为基准，以1：1进行混合后，在约85℃的温度下进行提取，然后进行过滤，去除固体物后获取得到的。
【参考例3】柠檬提取物(Citrus limon extract)的制造
柠檬提取物是将柠檬在85℃的温度下进行热水提取来获取得到的。更加详细而言，所述提取物是将柠檬以及净化水以重量为基准，以1：1进行混合后，在约85℃的温度下进行提取，然后进行过滤，去除固体物后获取得到的。
使用所述原料以及参考例1～3等来准备以下表1～7的组合物(单位：ppm)。
【表1】
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
麦芽糖 - - - - -
乳糖 - - - - -
蔗糖 16.53 11.70 9.95 49.75 39.84
吲哚-3-乙酸 0.83 0.58 0.50 0.50 0.40
玫瑰果热水提取物 82.64 87.72 89.55 49.75 59.76
苹果提取物 - - - - -
柠檬提取物 - - - - -
【表2】
比较例1 比较例2 比较例3 比较例4 比较例5 比较例6
麦芽糖 100.00 - - - - -
乳糖 - 100.00 - - - -
蔗糖 - - 100.00 - - -
吲哚-3-乙酸 - - - 100.00 - -
玫瑰果热水提取物 - - 100.00 -
苹果提取物 - - - - - 100.00
柠檬提取物 - - - - - -
【表3】
Figure BDA0002127211220000121
【表4】
比较例12 比较例13 比较例14 比较例15 比较例16
麦芽糖 - - - - -
乳糖 - - - - -
蔗糖 16.53 11.70 9.95 49.75 39.84
吲哚-3-乙酸 0.83 0.58 0.50 0.50 0.40
玫瑰果热水提取物 - - - - -
苹果提取物 82.64 87.72 89.55 49.75 59.76
柠檬提取物 - - - - -
【表5】
比较例17 比较例18 比较例19 比较例20 比较例21
麦芽糖 - - - - -
乳糖 - - - - -
蔗糖 16.53 11.70 9.95 49.75 39.84
吲哚-3-乙酸 0.83 0.58 0.50 0.50 0.40
玫瑰果热水提取物 - - - - -
苹果提取物 - - - - -
柠檬提取物 82.64 87.72 89.55 49.75 59.76
【表6】
比较例22 比较例23 比较例24 比较例25 比较例26
麦芽糖 16.53 11.70 9.95 49.75 39.84
乳糖 - - - - -
蔗糖 - - - - -
吲哚-3-乙酸 0.83 0.58 0.50 0.50 0.40
玫瑰果热水提取物 82.64 87.72 89.55 49.75 59.76
苹果提取物 - - - - -
柠檬提取物 - - - - -
【表7】
比较例27 比较例28 比较例29 比较例30 比较例31
麦芽糖 - - - - -
乳糖 16.53 11.70 9.95 49.75 39.84
蔗糖 - - - - -
吲哚-3-乙酸 0.83 0.58 0.50 0.50 0.40
玫瑰果热水提取物 82.64 87.72 89.55 49.75 59.76
苹果提取物 - - - - -
柠檬提取物 - - - - -
【试验例1】通过由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物，评价抗氧 化功效
为了评价抗氧化功效，进行了自由基清除试验(非酶性抗氧化效果试验)和活性氧清除试验(酶性抗氧化效果试验)。
(1)自由基清除试验
通过DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼；1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)测验(assay)，确认了根据实施例1～5以及比较例1～31的组合物的自由基清除功效。
即，为了确认根据实施例1～5以及比较例1～31的组合物的自由基清除效果，进行了如下方法：通过还原作为自由基的DPPH(抗氧化剂被氧化)时产生的吸光度的变化，比较检测DPPH氧化抑制功效，从而评价抗氧化功效(作为阳性对照群，使用了作为抗氧化剂的L-抗坏血酸(L-ascorbic acid，维生素C：Vitamin C))。
具体地，在190μL的100μM DPPH溶液(作为溶剂使用乙醇)中分别加入10μL的作为试剂的实施例1～5的组合物、比较例1～31的组合物或者阳性对照群，制造出反应液，然后在约37℃下反应约30分钟后，在540nm中检测了吸光度。
其结果，如图1～3所示，确认到以ppm为基准，以9～50：0.4～0.9：45～90的混合比含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的实施例1～5的组合物相比比较例1～31，因高的自由基清除效果，而抗氧化力较高(图1：实施例1、2、3和4的组合物显示70％以上的自由基清除效果，实施例5的组合物显示约38％的自由基清除效果。)。
尤其，确认到含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的组合物(实施例1-5)相比各自含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的试剂(比较例3、4、5)、含有蔗糖以及吲哚-3-乙酸的试剂(比较例8的组合物)、含有吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的试剂(比较例9的组合物)以及含有蔗糖以及玫瑰果提取物的试剂(比较例10的组合物)，因显著高的自由基清除功效，而具有被提高的抗氧化效果。
一方面，在分别含有植物提取物的试剂(比较例5～7)中，单独含有玫瑰果提取物的试剂(比较例5)显示最高的抗氧化力，然而在玫瑰果提取物中仅混合蔗糖或者吲哚-3-乙酸时(比较例9～10)，确认到因低的自由基清除功效而抗氧化效果降低。
进一步地，确认到单独含有蔗糖的试剂(比较例3)相比单独含有麦芽糖的试剂(比较例1)或者单独含有乳糖的试剂(比较例2)，因高的自由基清除功效而抗氧化力高，当为单独含有吲哚-3-乙酸的试剂(比较例4)时，因稍低的自由基清除功效而抗氧化力显示较低。
另外，维持实施例1～5的由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物的ppm混合比为9～50：0.4～0.9：45～90，然后将玫瑰果提取物分别用苹果提取物或者柠檬提取物代替，从而制造出含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及苹果提取物的混合物的试剂(比较例12～16)，或者含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及柠檬提取物的混合物的试剂(比较例17～21)，并对其确认了自由基清除功效。其结果，比较例12～16的试剂具有与比较例6几乎相同的水平而显示低的自由基清除效果，比较例17～21具有与比较例7几乎相同的水平而显示低的自由基清除效果，因此，确认到比较例12～21的试剂相比实施例1～5的试剂显示显著低的抗氧化力(未提供数据)。
同时，维持实施例1～5的由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物的ppm混合比为9～50：0.4～0.9：45～90，然后分别使用与蔗糖不同的作为二糖的麦芽糖或者乳糖，从而制造出含有麦芽糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的试剂(比较例22～26)，或者含有乳糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的试剂(比较例27～31)，并对其确认了自由基清除功效。其结果，比较例22～31的试剂具有与比较例10几乎相同的水平而显示低的自由基清除效果，从而确认到相比实施例1～5的试剂显示显著低的抗氧化力(未提供数据)。
一方面，对按步骤稀释显示最优秀的抗氧化活性的实施例2的组合物时所发挥的自由基清除功效进行了确认。
具体地，针对以ppm浓度为基准，以蔗糖：吲哚-3-乙酸：玫瑰果提取物＝11.70：0.58：87.72的混合比制造的混合物(实施例2：100ppm)以及其的稀释物(3.125～50ppm)，比较了自由基清除效果。
其结果，如图3所示，确认到与阳性对照群的L-抗坏血酸进行比较时，蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物随着浓度比例，基于自由基清除的抗氧化效果在逐渐增加。
(2)活性氧清除试验
在所述自由基清除试验中，将显示最优秀的抗氧化活性的实施例2的组合物的含量设为不同，并确认了活性氧清除功效。
具体地，利用基于黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(xanthine/xanthine oxidase，Sigma)的酶反应产生的活性氧，并利用基于活性氧的氮蓝四唑(nitroblue tetrazolium,NBT)的氧化，测定吸光度变化，从而对活性氧的清除功效进行了确认。
更加具体而言，混合24mL的碳酸钠(Na2CO3)、0.1mL的黄嘌呤、0.1mL的EDTA(乙二胺四乙酸：ethylenediamine tetraacetic acid)、0.1mL的BSA(牛血清白蛋白：bovine serumalbumin)、0.1mL的NBT以及0.1mL的试剂(由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物的最终浓度：1500ppm、3000ppm、6000ppm)准备出反应物。然后，将所述反应物在约25℃下搁置约10分钟之后，添加0.1mL的黄嘌呤氧化酶，在约25℃下反应约20分钟后，添加适量的6mM铜(CuCl2)使反应停止后，利用酶标仪(UVT-06685，Thermo max，USA)，在540nm的波长范围测定了吸光度。
针对所述活性氧清除试验中的对照群，用净化水(蒸馏水等)代替试剂，并通过相同的方法进行了测定，设定为添加净化水来代替黄嘌呤氧化酶，从而获得对试剂和对照群的各自的颜色校正值。
其结果，如图4所示，确认到与对照群进行比较时，蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物在1500～6000ppm浓度范围内，基于活性氧清除的抗氧化效果在增加。
最终，预想到根据本发明的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物不仅具有高的抗氧化增强效果，而且由于降低成为皮肤老化的主要原因的自由基以及活性氧的活性的抗氧化力，而在皮肤上使用蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物时，还能发挥皮肤抗老化效果。
【试验例2】通过由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物，评价皮肤 的保湿力强化功效以及抗老化功效
通过测定参与皮肤保湿的基因，即测定AQP3、ABCA12以及CASPASE14的mRNA表达水平，对由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物的皮肤保湿效果进行了确认。
具体地，通过测定参与皮肤保湿的AQP3、ABCA12以及CASPASE14的mRNA表达水平，对以ppm浓度为基准，以实施例2的蔗糖：吲哚-3-乙酸：玫瑰果提取物＝11.70：0.58：87.72的混合比制造的混合物的皮肤保湿强化效果进行了确认。
AQP3、ABCA12以及CASPASE14的表达量测定方法：将皮肤角质细胞(humankeratinocyte)的HaCaT细胞使用添加有10％胎牛血清(FBS)的细胞培养基(DMEM)，在60mm细胞培养皿(cell culture dish)上以1.25×106细胞/皿(cells/dish)分株后，在37℃/5％CO2的保温箱中培养至完成约80％程度的融合(confluency)。然后，在培养的HaCaT细胞中以0.15％(v/v)的处理浓度处理实施例2的试剂进行培养后，去除培养基并添加1ml的试剂盒(Trizol，英杰公司：Invitrogen)，根据英杰公司的RNA分离法分离出RNA。利用紫外线检测机(惠普：Hewlett Packard)在260nm下进行RNA的定量后，实施RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应：Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)。为了对各个试剂的相对性表达形式进行分析，以RPLP0(酸性核糖体磷蛋白大亚基P0抗体：60S acidicribosomal protein P0)的mRNA的表达量为基准进行了校正。
针对所述皮肤的保湿力强化功效以及抗老化功效评价试验中的对照群，添加净化水(蒸馏水等)来代替试剂，并通过相同的方法进行了测定，而且以RPLP0mRNA的表达量为基准进行了校正。
其结果，如图5～7所示，确认到在50ppm以及100ppm处理浓度下，在HaCaT细胞中处理以实施例2的组合物中含有的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的ppm混合比制造的混合物时，将AQP3的mRNA表达量在50ppm处理浓度下增加了(相对控制(control))约1.32倍，在100ppm处理浓度下增加了约1.52倍，将ABCA12的mRNA表达量在50ppm处理浓度下增加了约1.42倍，在100ppm处理浓度下增加了约1.52倍，将CASPASE14的mRNA表达量在50ppm处理浓度下增加了约1.40倍，在100ppm处理浓度下增加了约2.15倍。
最终，确认到根据本发明的由蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物而成的混合物显著提高皮肤细胞(HaCaT)的AQP3、ABCA12以及CASPASE14各自的mRNA表达量，从而强化皮肤保湿功能的效果非常优秀。
一方面，公认皮肤老化是因皮肤内存在的胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸等细胞外基质(extracellular matrix)成分的含量降低而产生的，然而当伴随有皮肤水分含量减少时，有报道称会加快皮肤老化(例如，皮肤弹力减少等)，因此，预想到根据本发明的蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物还具有如下效果：通过防止如上所述皮肤水分的流失，发挥皮肤抗老化效果(参考Papakonstantinou et al.,Dermatoendocrinol.,4(3):253-8,2012)。
根据本发明的作为有效成分含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的皮肤外用剂组合物可以以多种剂型成为产品化(医药品、化妆品等)，考虑到所要体现的产品的功能性、成本以及其他条件，可以以适当的含量比进行控制。
【剂型例1】软膏的制造
混合含有乳状成分和水状成分的表8的成分，制造出根据本发明的含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的软膏。
【表8】
混合成分 含量(重量％)
净化水 残量
蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物 10.0
辛酸/癸酸甘油三酯 10.0
液状石蜡 10.0
山梨坦倍半油酸酯 6.0
辛基十二醇聚醚-25 9.0
鲸蜡醇乙基己酸酯 10.0
角鲨烷 1.0
水杨酸 1.0
甘油 15.0
山梨糖醇 10.0
【剂型例2】营养性化妆水(牛奶润肤乳)的制造
混合含有乳状成分和水状成分的表9的成分，制造出根据本发明的含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的营养性化妆水。
【表9】
混合成分 含量(重量％)
净化水 残量
蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物 0.1
蜜蜡 4.0
聚山梨酯60 1.5
山梨坦倍半油酸酯 1.5
液状石蜡 0.5
Montana202(制造商：赛比克) 5.0
甘油 3.0
丁二醇 3.0
丙二醇 3.0
羧乙烯聚合物 0.1
三乙醇胺 0.2
防腐剂、色素、香料 适量
【剂型例3】按摩霜的制造
混合含有乳状成分和水状成分的表10的成分，制造出根据本发明的含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的按摩霜。
【表10】
混合成分 含量(重量％)
净化水 残量
蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物 0.1
蜜蜡 10.0
聚山梨酯60 1.5
PEG-60氢化蓖麻油 2.0
山梨坦倍半油酸酯 0.8
液状石蜡 40.0
角鲨烷 5.0
Montana202(制造商：赛比克) 4.0
甘油 5.0
丁二醇 3.0
丙二醇 3.0
三乙醇胺 0.2
防腐剂、色素、香料 适量
【剂型例4】面膜的制造
混合含有乳状成分和水状成分的表11的成分，制造出根据本发明的含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的面膜。
【表11】
配合成分 含量(重量％)
净化水 残量
蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物 0.1
聚乙烯醇 13.0
羧甲基纤维素钠 0.2
甘油 5.0
尿囊素 0.1
乙醇 6.0
PEG-12壬基苯基醚 0.3
聚山梨酯60 0.3
防腐剂、色素、香料 适量
统计处理
统计分析是两组间的重要性检查，使用了t检验(t-test)测验法，与对照群进行比较，当为*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001时，视为有效的差异(未提供数据)。
以上详细叙述了本发明内容的特定部分，本领域技术人员应明确所述具体说明仅是优选实施形态，并不由此限定本发明的范围。因此，本发明的实质上的范围应由所附权利要求及其均等物而定。

Claims (16)

1.一种皮肤外用剂组合物，其特征在于，作为有效成分含有蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物。
2.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述混合物是以ppm浓度为基准，以1～50：0.1～9.0：10～90混合蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物。
3.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述混合物的含量以组合物的总重量为基准，为0.001～30重量％。
4.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物提高编码皮肤细胞的AQP3的基因的表达水平。
5.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物提高编码皮肤细胞的ABCA12的基因的表达水平。
6.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物提高编码皮肤细胞的CASPASE14的基因的表达水平。
7.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于提高皮肤保湿力。
8.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于增强皮肤抗氧化。
9.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于皮肤抗老化。
10.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物为药学组合物或者化妆品组合物。
11.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于提高皮肤保湿力的药学组合物或者药品。
12.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于增强皮肤抗氧化的药学组合物或者药品。
13.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于皮肤抗老化的药学组合物或者药品。
14.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于提高皮肤保湿力的化妆品组合物或者化妆品。
15.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于增强皮肤抗氧化的化妆品组合物或者化妆品。
16.一种蔗糖、吲哚-3-乙酸以及玫瑰果提取物的混合物的用途，其制造用于皮肤抗老化的化妆品组合物或者化妆品。
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