CN111122732B - 一种功劳木药材质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种功劳木药材质量检测方法，所述检测方法具体为：用薄层色谱法鉴别功劳木中的β‑谷甾醇、表丁香脂素，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β‑谷甾醇含量。经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明本发明具有重现性好、耐用性好等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种功劳木药材质量检测方法。
背景技术
功劳木质量标准原载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)中与《中国药典》2015年版中，为小檗科植物阔叶十大功劳Ma/icmia bealei(Fort.)Carr.或细叶十大功劳Mahonia fortunei(Lindl.)Fedde的干燥茎。全年均可采收，切块片，干燥。原质量标准中记载了盐酸小檗碱的含量检测方法、中国药典记载了性状、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的定性鉴别、总灰分及水分的检查、浸出物、非洲防己碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的含量测定方法，但并未记载β-谷甾醇、表丁香脂素的定性鉴别方法，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量方法。
功劳木淸热燥湿，泻火解毒。用于湿热泻痢，黄疸尿赤，目赤肿痛，胃火牙痛，疮布痈肿。是贵州景峰注射剂有限公司的产品金鸡丸中主要原药材之一，根据当地用药习惯和《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)、《贵州苗族医药研究与开发》、《中药大辞典》，结合《国家药品标准技术规范》及《贵州省中药、民族药质量标准》编写大纲要求，为了更好的控制药材质量，对《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)、《中国药典》2015所载的功劳木质量标准重新修订。在之前的基础上，增加了β-谷甾醇、表丁香脂素的定性鉴别方法，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量方法，以进一步有效的控制功劳木质量，从而保证临床用药疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种功劳木药材质量检测方法，以克服之前的质量检测方法中无β-谷甾醇、表丁香脂素的定性鉴别方法及高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量方法的技术问题，从而进一步有效的控制功劳木质量，保证临床用药疗效。
本发明所述的一种功劳木药材质量检测方法具体为：用薄层色谱法鉴别功劳木中的β-谷甾醇、表丁香脂素，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量。
本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加50～85％的乙醇25～35ml,加热回流1～3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20～30ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理30～50分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加60～80％的乙醇28～32ml,加热回流1.5～2.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20～30ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理35～45分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
进一步优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加75％的乙醇30ml,加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈25ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理40分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇10～30ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理20～40分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇15～25ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理25～35分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
进一步优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇20ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理30分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为20～35℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理20～50分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
优选的，本发明所述用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为23～32℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理25～45分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
进一步优选的，本发明所述用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为25℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
本发明具有以下有益效果：
一、现有技术的问题：
原质量标准中记载了盐酸小檗碱的含量检测方法、中国药典记载了性状、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的定性鉴别、总灰分及水分的检查、浸出物、非洲防己碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的含量测定方法，但并未记载β-谷甾醇、表丁香脂素的定性鉴别方法，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量方法，药材质量不能有效的控制，临床疗效需进一下提高。
二、本发明解决的技术问题及达到的技术效果
1、本发明在《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)及《中国药典》2015年版的检测方法基础上，增加了β-谷甾醇、表丁香脂素的定性鉴别方法，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量方法，解决了未对β-谷甾醇进行定性、定量鉴别及表丁香脂素的定性鉴别，以达到进一步有效的控制功劳木质量，从而保证临床用药疗效。
2、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好。
3、通过线性试验考察，y＝1081.x+1.219,相关系数R2＝0.999，表明β-谷甾醇在0.069121～0.518942μg范围内线性关系良好。
4、通过仪器精密度试验，计算RSD％(β-谷甾醇)值为0.40％，表明仪器精密度良好。
5、通过重复性试验，RSD值0.46％，表明此β-谷甾醇的测定方法具有良好的重复性
6、通过稳定性试验，RSD％为0.29％，表明β-谷甾醇在10h内相对稳定。
7、通过回收率试验，平均回收率为98.98％。
8、通过对10批样品进行测试，测得β-谷甾醇(C6H11NO3S)平均含量为0.0355％，平均值的70％设限，暂定本品含β-谷甾醇不得少于0.0249％含量测定标准。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
【鉴别】(1)取本品粉末2g，加50％的乙醇25ml,加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理30分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品粉末1.5g，加甲醇10ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理20分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为20℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈20ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理20～50分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
实施例2
【鉴别】(1)取本品粉末2g，加85％的乙醇35ml,加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈30ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理50分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品粉末1.5g，加甲醇30ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理40分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为35℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈40ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理50分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
实施例3
【鉴别】(1)β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加60％的乙醇28ml,加热回流1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理35分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇15ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理25分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为23℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
实施例4
【鉴别】(1)取本品粉末2g，加80％的乙醇32ml,加热回流2.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈30ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理45分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品粉末1.5g，加甲醇25ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理35分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为32℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
实施例5
【鉴别】(1)取本品粉末2g，加75％的乙醇30ml,加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈25ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理40分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品粉末1.5g，加甲醇20ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理30分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为25℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
实验例：为了证明本发明检测方法的科学性与合理性，进行了以下实验研究：
一、功劳木中-β谷甾醇鉴别方法试验
1、方法一
取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液；取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液；另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各l0μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，对照品无斑点，故不列入本发明的检测方法中。
1.1.方法考察试验
方法来源：依据《中国药典》功劳木项下的薄层鉴别法，进行试验。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203
对照品来源：中国食品药品检定研究院，批号：100181-201501。
供试品溶液制备：取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液。
对照品溶液制备：另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
对照药材的制备：同供试品溶液制备方法。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μ1。
展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)
展距：15cm
显色及检视：显相同颜色的斑点，紫外光灯(365nm)下检视。
结果：在此方法项下，对照品无斑点，样品无法判断，考虑更换方法即尝试更换展开剂及其比例。
2.方法二
取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液；取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液；另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各l0μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(4:5:1.5:1.5:0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，对照品无斑点，故不列入本发明的检测方法中。
2.1方法考察试验
方法来源：依据《中国药典》功劳木项下的薄层鉴别法，进行试验。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203
对照品来源：中国食品药品检定研究院，批号：100181-201501。
供试品溶液制备：取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液。
对照品溶液制备：另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
对照药材的制备：同供试品溶液制备方法。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μ1。
展开剂：甲酸-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(4:5:1.5:1.5:0.5)。
展距：15cm。
显色及检视：显相同颜色的斑点，紫外光灯(365nm)下检视。
结果：在此方法项下，对照品无斑点，样品无法判断，考虑更换方法。
3、方法三：取本品粉末2g，加75％的乙醇30ml,加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈25ml，在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理40分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.4.1方法学研究
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司对功劳木研究的实际情况而制定了本方法。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203、贵阳20170204、福泉20170205、玉屏20170206、江口20170207、麻江20170208、从江20170209、锦屏201702010。
对照药材来源：经贵州中医药大学药学院教授对药材植物鉴定后，自制的功劳木对照药材。
供试品溶液制备：
薄层板：硅胶G(规格：200×200mm)
点样量：供试品溶液和对照药材溶液、对照品溶液各5μ1。
展开剂：甲酸-乙腈-水(1:3:2)
展距：15cm
结果：供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法处理10批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表1：
表1：重现性试验结果表
3.4.2耐用性
3.4.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各10批次的样品)，结果见表2。
表2：不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(20℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表3。
表3：低温(5℃)室温(20℃)环境条件下自制板展开效果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表4。
表4：低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱，验证试验表明重现性好、耐用性好，故列入本发明方案中。
二、功劳木中表丁香脂素鉴别方法试验
1、方法一
取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液；取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液；另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各l0μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，对照品无斑点，故不列入本发明的检测方法中。
1.1.方法考察试验
方法来源：依据《中国药典》功劳木项下的薄层鉴别法，进行试验。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203
对照品来源：中国食品药品检定研究院，批号：100188-201582。
供试品溶液制备：取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液。
对照品溶液制备：另取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
对照药材的制备：同供试品溶液制备方法。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μ1。
展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)
展距：15cm
显色及检视：显相同颜色的斑点，紫外光灯(365nm)下检视。
结果：在此方法项下，对照品无斑点，样品无法判断，考虑更换方法即尝试更换展开剂。
2.方法二
取本品粉末0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液；取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液；另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各l0μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(4:5:1.5:1.5:0.5)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，对照品无斑点，故不列入本发明的检测方法中。
2.1方法考察试验
方法来源：依据《中国药典》功劳木项下的薄层鉴别法，进行试验。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203
对照品来源：中国食品药品检定研究院，批号：100181-201501。
供试品溶液制备：取本品粉0.3g，加甲醇5ml,超声处理15分钟，滤过，滤液补加甲醇至5ml，作为供试品溶液。
对照品溶液制备：另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
对照药材的制备：同供试品溶液制备方法。
薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。
点样量：供试品溶液和对照品溶液各10μ1。
展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(4:5:1.5:1.5:0.5)。
展距：15cm。
显色及检视：显相同颜色的斑点，紫外光灯(365nm)下检视。
结果：在此方法项下，对照品无斑点，样品无法判断，考虑更换方法。
3、法三：取本品粉末1.5g，加甲醇20ml,在功率250W,频率25KHZ条件下超声处理30分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.4.1方法学研究
方法来源：结合贵州景峰注射剂有限公司对功劳木研究的实际情况而制定了本方法。
样品来源：龙里20170201、六盘水20170202、凯里20170203、贵阳20170204、福泉20170205、玉屏20170206、江口20170207、麻江20170208、从江20170209、锦屏201702010。
对照药材来源：经贵州中医药大学药学院教授对药材植物鉴定后，自制的功劳木对照药材。
供试品溶液制备：
薄层板：硅胶G(规格：200×200mm)
点样量：供试品溶液和对照药材溶液、对照品溶液各5μ1。
展开剂：甲酸-氯仿-水(2:3:1)
展距：15cm
结果：供供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
用上述方法处理10批次的样品，并按规定的方法展开，结果见表5：
表5：重现性试验结果表
3.4.2耐用性
3.4.2.1不同薄层板的比较
比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶板商品板和自制含0.4％羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(各10批次的样品)，结果见表6。
表6：不同薄层板耐用性结果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两种薄层板均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.2不同温度的比较
比较了低温(5℃)和室温(20℃)环境条件下自制板展开效果，结果见表7。
表7：低温(5℃)室温(20℃)环境条件下自制板展开效果表
结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
3.4.2.3不同湿度的比较
比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果，结果见表8。
表8：低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下自制板展开效果表
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明在不同薄层板、温度、湿度条件下，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱，验证试验表明重现性好、耐用性好，故列入本发明方案中。
三、β-谷甾醇含量测定
为了有效地控制药材的质量，选取有效成分β-谷甾醇作为功劳木含量测定指标，结合功劳木的实际研究情况，制定了该含量的质量检测方法，该方法列入本发明方案中。
1、仪器与试药
高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondaSil C18 Superb 5μm250×4.6mm。
电子天平：(SHIMADZU:AUW120D；上海越平：FA1104)；HS-10260D型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)。
β-谷甾醇对照品(供含量测定用)：为成都德思特生物技术有限公司出品，批号：200187-201711含量以98％计。
甲醇为色谱纯和分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
2、方法考察试验
2.1对照品溶液的制备：
精密称取β-谷甾醇(含量以98.0％计)对照品17.68mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得母液(每1ml含173.264μg)，精密量取母液11.8ml，置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度制成每1ml含20.4452μg，摇匀，即得。
2.2供试品溶液的制备
取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。
2.3色谱条件与系统适用性试验
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为25℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.4线性试验
取β-谷甾醇对照品溶液(20.4452μg/ml)。分别精密量取4、8、16、20、30μl，注入色谱仪，按2.3项下色谱条件试验，结果见表1，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，回归方程为：
y＝1081.x+1.219,相关系数R2＝0.999，表明β-谷甾醇在0.069121～0.518942μg范围内线性关系良好；见表9
表9β-谷甾醇线性试验结果
| 编号 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 进样量(μg) | 0.069121 | 0.138242 | 0.27684 | 0.345961 | 0.518942 |
| 峰面积(A) | 76.801 | 148.647 | 307.600 | 368.043 | 564.067 |
2.5仪器精密度试验
取2.1项下制备的对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定β-谷甾醇峰面积，计算RSD％(β-谷甾醇)值为0.40％，表明仪器精密度良好，测定结果见表10。
表10仪器精密度试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD％ |
| 面积(A) | 231.534 | 230.121 | 232.241 | 231.743 | 230.298 | 231.203 | 231.1874 | 0.40％ |
2.6重复性试验
精密称取同一批样品(批号20170209)6份，按上述方法测定样品中β-谷甾醇的含量，平均含量为0.353％，RSD值0.46％，表明此β-谷甾醇的测定方法具有良好的重复性；结果见表11。
表11重复性试验结果
2.7稳定性试验
按2.2项下方法制备供试品溶液(批号:20170209)一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为0.29％，表明β-谷甾醇在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表12。
表12稳定性试验结果
| 编号 | 0h | 2h | 4h | 6h | 8h | 10h | 平均值 | RSD％ |
| 峰面积(A) | 246.612 | 247.521 | 246.513 | 248.121 | 247.792 | 247.087 | 247.3118 | 0.29％ |
2.8回收率试验
采用加样回收法。取已知含量的样品(批号20170209)6份，每份精密称取0.5g，分别加入对照品溶液，按照2.2项下制备方法制备。在上述色谱条件下测定，测得其平均回收率为98.98％，RSD％值为0.07％，结果见表13。
表13加样回收试验结果表
2.9样品含量测定
按正文收载的方法对十批样品进行含量测定，结果见表14。
表14十批样品(β-谷甾醇含量)
结论：从上表数据可以得出功劳木中含β-谷甾醇(C6H11NO3S)平均值为0.0355％。以平均值的70％设限，暂定本品含β-谷甾醇不得少于0.0249％含量测定标准。
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇(C6H11NO3S)不得少于0.0249％。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种功劳木药材质量检测方法，其特征在于：所述检测方法具体为：
用薄层色谱法鉴别功劳木中的β-谷甾醇、表丁香脂素，用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量；
用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加50～85％的乙醇25～35ml，加热回流1～3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20～30ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理30～50分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇10～30ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理20～40分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为20～35℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈20～40ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理20～50分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加60～80％的乙醇28～32ml，加热回流1.5～2.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈20～30ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理35～45分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别功劳木中β-谷甾醇的方法具体为：取本品粉末2g，加75％的乙醇30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙腈25ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理40分钟，放冷，滤过，用乙腈洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加乙腈1ml使溶解，作为供试品溶液，取功劳木对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液，另取β-谷甾醇对照品，加乙腈制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为1:3:2的甲酸-乙腈-水为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇15～25ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理25～35分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别功劳木中表丁香脂素的方法具体为：取本品粉末1.5g，加甲醇20ml，在功率250W，频率25KHZ条件下超声处理30分钟，放冷，滤过，用甲醇洗涤残渣，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取功劳木对照药材3g，同法制成对照药材溶液，另取表丁香脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3:1的甲酸-氯仿-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为23～32℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25～35ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理25～45分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：用高效液相色谱仪检测功劳木中的β-谷甾醇含量具体方法为：
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为15:84:1的甲醇-乙腈-盐酸溶液为流动相；柱温为25℃；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于3500；
对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.02mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取功劳木粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈30ml；密塞，称定重量，在功率140W，频率25kHz条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含β-谷甾醇C29H50O不得少于0.0249％。
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Denomination of invention: A Quality Testing Method for Gonglaomu Medicinal Materials Effective date of registration: 20231122 Granted publication date: 20220909 Pledgee: Qingdao Qishun Investment Management Co.,Ltd. Pledgor: GUIZHOU JINGFENG INJECTION Co.,Ltd. Registration number: Y2023980066820 |