CN111118171A - 一种鉴别鱼翅种的dna条形码引物对、试剂盒及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。本发明的引物对的上、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示,利用该引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增,然后对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列,将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定,从而确定待测鱼翅样品的种属。本发明的引物对能够鉴别13种鱼翅物种,分子系统发育树显示,同一个物种的不同个体基本都能形成单系,节点支持率为99%~100%,聚类分析显示,同一物种都位于同一个分支,且不同个体的鱼类的COI序列相似度均大于95%;该方法可为市场流通的鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域,具体涉及一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。
背景技术
鱼翅作为著名的养生保健佳品,一直深受消费者的喜爱,价格一度水涨船高。市场流通多为加工后的干鱼翅制品,但由于鲨鱼物种种类繁多,相似物种之间外观形态差异小,通过传统形态学鉴定难以保证干鱼翅制品标识的准确性,造成不良商家以次充好,更有不法生产者从濒危鲨鱼上采集鱼翅。
DNA条形码技术是利用生物体线粒体DNA中一段保守片段对物种进行快速而准确的分子生物学水平的鉴定。2005年,国际已开始合作实施鱼类生命条形码计划(FISH-BOL),该计划是以电子数据库形式构建含有DNA条形码图像和地理坐标的全球鱼类参考标准数据库。Ward等人利用条形码方法对澳大利亚超过200种海洋鱼类和印度洋沿岸35种鱼类进行分析,研究表明南非与澳洲海域的鱼类之间存在较大差异,地域群系之间种内差异性显著,通过建立N-J进化树的分析结论表明,能够使用线粒体细胞色素氧化酶亚基I(CytochromeOxidase subunit I,COI)作为海洋鱼类的DNA条形码标准序列。DNA条形码技术近年在海洋鱼类的鉴定上取得较好的鉴定效果,但鉴定对象多为新鲜或是冰冻鱼类,这些鱼类大多细胞组织保存完好,而针对市售鱼翅的DNA条形码鉴定鲜有报道。
并且,由于鱼翅制品属于致密结缔组织,自身含有丰富的硫酸多糖,多糖的去除一直是DNA提取过程中面临的主要难题,传统提取方法获得的DNA纯度低,往往造成后续分子生物学实验的失败,所以高效的提取鱼翅DNA也是DNA条形码技术顺利进行的前提。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法,本发明的试剂及方法提取的DNA含量高,更适合作为鱼翅的DNA条形码技术中的DNA提取方法;本发明的DNA条形码能准确鉴别市场上流通的干鱼翅的种属,为鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础。
本发明的第一个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对,所述的引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述的引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明的第二个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码试剂盒,所述的试剂盒包含所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对。
优选,所述的试剂盒还包含DNeasy mericon Food Kit DNA提取试剂盒。该DNeasymericon Food Kit DNA提取试剂盒是QIAGEN公司生产的。
本发明的第三个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码方法,包括以下步骤:
a.提取待测鱼翅样品的DNA;
b.利用所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增;
c.对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列,将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定,确定待测鱼翅样品的种属。
优选,所述的鱼翅种包括低鳍真鲨、大青鲨、尖吻鲭鲨、尖吻斜锯牙鲨、路氏双髻鲨、犁头鳐、丝鲨、无沟双髻鲨、尖齿柠檬鲨、舒氏星鲨、高鳍真鲨、浅海长尾鲨和沙拉真鲨。
优选,所述的步骤a中利用DNeasy mericon Food Kit DNA提取试剂盒提取待测鱼翅样品的DNA。
优选,所述的步骤b中PCR扩增的反应体系为:10×PCR Buffer 2.5μL,2.5mM dNTPMixture 2.0μL,10μM上、下游引物各0.5μL,Taq 0.5μL;加水补至25.0μL。
优选,所述的步骤b中PCR扩增的反应条件为:94℃预变性5min;94℃30s,55℃30s,72℃45s,35个循环;72℃延伸5min。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:
(1)本发明通过选择适合鱼翅DNA的提取方法,筛选出COI序列DNA条形码通用引物,对鱼翅DNA进行PCR扩增并测序,应用MEGA 6.0软件对64条鱼翅COI序列进行多序列比对,基于邻接法(N-J)构建进化树,并进行遗传距离分析。同时应用DNAMan构建相应COI序列的聚类同源树。结果表明,实验所建立的条形码技术能够鉴别13种鱼翅物种,分子系统发育树显示,同一个物种的不同个体基本都能形成单系,节点支持率大都为99%~100%,聚类分析显示,同一物种都位于同一个分支,且不同个体的鱼类的COI序列相似度均大于95%。该方法为流通的鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础,尤其适合应用于广东省市场流通的鱼翅干制品的物种鉴定。
(2)本发明采用DNeasy mericon Food Kit DNA试剂盒进行鱼翅样品DNA的提取,提取的DNA浓度及纯度显著提高,保证后续的实验顺利进行。
附图说明
图1为64条鱼翅的COI序列N-J进化树。
图2为64条鱼翅的COI序列的聚类同源树。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1
1、材料
本研究所用鱼翅均由广州市海味干果行业商会提供,其中用于DNA提取效果研究的6种鱼翅为市面上常见的正品鱼翅,并从形态学上进行物种鉴定,确保品质正宗,物种明确,包括:20沙青片(低鳍真鲨)、蝶勾(尖齿柠檬鲨)、牙勾(大青鲨)、8寸五羊勾(丝鲨)、10上勿骨勾(浅海长尾鲨)和白蝉片(尖吻斜锯牙鲨)。鉴定后的鱼翅作为标准样品,用于后续实验研究。
用于鱼翅DNA条形码研究的35种鱼翅来源于广东省市场流通鱼翅,其中2种鱼翅是以明胶为主要原料制作的假鱼翅,作为阴性对照。
利用经典CTAB法、广州双螺旋生物科技有限公司生产的动物组织基因组DNA提取试剂盒或QIAGEN公司生产的DNeasy mericon Food Kit提取正品鱼翅DNA,采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的鱼源性(fish)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)检测DNA提取效果。
2、仪器与设备
高速台式离心机,5418R,德国Eppendorf;基因扩增仪,L96G,杭州朗基;荧光定量PCR仪,7500,Applied Biosystems;微量移液器,1000μL、200μL、100μL、10μL,德国Eppendorf;生物安全柜,BSC-100011B2,苏净安泰;凝胶成像系统,WD-9413B,北京六一。
3、实验方法
3.1实验材料预处理
选取的干鱼翅样品,使用灭菌二次水充分清洁鱼翅表面,并使用95%的酒精对鱼翅表面进行轻柔擦拭,以清除鱼翅表面的杂质与灰尘,放置烘箱内烘干;使用灭菌手术剪刀剪下约50g鱼翅样品,尽量剪碎放入研磨机中,20000rpm研磨20min,并观察样品粉碎情况。
3.2 DNA提取
经典CTAB法参照《参考分子克隆》动物DNA提取方法,动物组织基因组DNA提取试剂盒和DNeasy mericon Food Kit均参照商品自带说明书。
采用鱼源性(fish)核酸检测试剂盒对提取DNA纯度进行分析。25μL的反应体系,其成分包括:20μL的fish反应液,酶液1μL,样品DNA、阴性质控或阳性质控各4μL。设置反应程序为:Holding Stage为95℃10min,1个循环;Cycling Stage为95℃15s,55℃1min,40个循环,并收集荧光信号。
3.3 DNA条形码PCR反应体系
利用筛选出的鱼翅COI DNA条形码引物:上游引物为SEQ ID NO.1,下游引物为SEQID NO.2。利用筛选出的上述鱼翅COI DNA条形码通用引物对提取的样品鱼翅DNA进行PCR扩增,扩增的目的片段为COI基因靠近5’末端,长度为680bp左右的序列,其中,SEQ ID NO.1:5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’,SEQ ID NO.2:5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’。
以提取的DNA为模板进行PCR扩增。25.0μL PCR反应体系如下:10×PCR Buffer2.5μL、dNTP Mixture(2.5mM)2.0μL、上下游引物(10μM)各0.5μL、Taq 0.5μL、模板用量根据PCR扩增情况有一定程度的变化,加水补至25μL。
PCR反应条件为:94℃预变性5min;94℃30s,55℃30s,72℃45s,35个循环;72℃延伸5min。
3.4 DNA条形码PCR产物分析
琼脂糖凝胶电泳检测获得的样品DNA条形码PCR产物,将在680bp位置有条带的PCR产物送至上海生工公司进行测通序列与拼接序列,获取680bp左右的COI序列。
搜索BOLD以及NCBI网站的数据库对样品的COI序列进行鉴定以及相似度比对分析,根据比对结果,自NCBI中下载相关鲨类物种COI序列。将整理后的样品COI序列与GenBank下载的相关序列应用MEGA 6.0软件进行多序列比对,基于邻接法(N-J)构建进化树,选用K2P替代模型,Bootstrap自展检测1000次。同时应用DNAMan构建相应COI序列的聚类同源树。
4、结果与分析
4.1 DNA提取及效果分析
根据鱼源性(fish)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)说明书,扩增阈值(CT值)≤40判定为检出鱼源性,表示提取鱼翅DNA成功;CT值>40判定为未检出鱼源性,表示提取鱼翅DNA失败。同一扩增条件下,CT值越小,表示初始扩增模板浓度越高;CT值越大,表示初始扩增模板浓度越低。
结果显示,利用不同的方法对6个物种明确的鱼翅样品(分别是:20沙青片(低鳍真鲨)、蝶勾(尖齿柠檬鲨)、牙勾(大青鲨)、8寸五羊勾(丝鲨)、10上勿骨勾(浅海长尾鲨)和白蝉片(尖吻斜锯牙鲨))进行DNA提取,经典CTAB法提取成功3个样品,动物组织基因组DNA提取试剂盒提取成功5个样品,DNeasy mericon Food Kit提取成功6个样品(见表1)。样品3采用经典CTAB法提取DNA的CT值小于动物组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA的CT值;而所有样品采用DNeasy mericon Food Kit提取DNA的CT值均小于采用经典CTAB法和动物组织基因组DNA提取试剂盒提取的DNA的CT值,说明DNeasy mericon Food Kit提取的DNA浓度明显高于另外两种方法提取的DNA浓度。
表1不同方法获得的DNA浓度比较结果
因此,本实施例通过鱼源性(fish)核酸检测试剂盒测定提取DNA的阈值,从而分析出提取DNA的浓度,直接分析目的基因的浓度,从而排除其他因素的干扰。实验结果表明:DNeasy mericon Food Kit提取的DNA含量明显高于另外两种方法提取的DNA含量,更适合作为鱼翅的提取方法。
4.2 DNA条形码获取序列比对结果
DNA条形码实验:
根据研究结果,对选取的广东省市场流通的用于鱼翅DNA条形码研究的35种鱼翅采用DNeasy mericon Food Kit的方法进行DNA提取。通过PCR扩增和测序,有5个干鱼翅样品(sample11、sample28、sample31、sample34和sample35)无法扩增成功,其中sample34和sample35为明胶制品(阴性对照),所以无法扩增出目的片段。而sample11、sample28和sample31用鱼源性(fish)核酸检测试剂盒检测阈值均>40,可能原因是在干鱼翅的加工过程中DNA严重降解,无法提取足量的DNA进行后续研究。
本实施例获得了30个鱼翅个体的线粒体COI基因序列。该序列是位于COI基因5’端一段约为680bp的片段。将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定,鉴定结果如下表2所示。30个鱼翅来源于13种鲨鱼物种:Carcharhinus leucas(低鳍真鲨)、Prionaceglauca(大青鲨)、Isurus oxyrinchus(尖吻鲭鲨)、Rhizoprionodon acutus(尖吻斜锯牙鲨)、Sphyrna lewini(路氏双髻鲨)、Glaucostegus cemiculus(犁头鳐科)、Carcharhinusfalciformis(丝鲨)、Sphyrna mokarran(无沟双髻鲨)、Negaprion acutidens(尖齿柠檬鲨)、Mustelus schmitti(舒氏星鲨)、Carcharhinus amboinensis(高鳍真鲨)、Alopiaspelagicus(浅海长尾鲨)、Carcharhinus sorrah(沙拉真鲨),从样品来源分析得出:6个样品来源于大青鲨,5个样品来源于丝鲨,4个样品来源于尖吻斜锯牙鲨,4个样品来源于路氏双髻鲨,其他样品的来源比较零星分散;从分类阶元分析得出:4种物种来源于真鲨属,7种物种来源于真鲨科,10种物种来源于真鲨目,说明真鲨目的鱼类适合于加工鱼翅制品,其中又以真鲨科真鲨属的鱼类采用的最多。从NCBI中下载这13种鲨鱼物种相似度达97%的基因序列共32条,另外下载市面常见鱼翅物种Isurus paucus(长鳍鲭鲨,鲭鲨属、鲭鲨科、鲭鲨目)基因序列32条,共计64条鲨鱼基因作为日常实验室检测的基因库。
表2不同鱼翅在NCBI数据库的鉴定结果
4.3构建进化树和同源树
构建64条鲨鱼基因的分子系统发育树显示(见图1),同一个物种的不同个体基本都能形成单系,节点支持率大都为99%~100%,但同科聚类效果不是很明显,例如真鲨目中,真鲨科的7种物种和双髻鲨科的2种物种节点支持率仅为为78%。而不同目间的遗传距离明显更大,这与传统的鲨鱼分类学结果是一致的,证明了鲨鱼线粒体COI基因种内具有高度的保守性,种间具有明显的差异性。
同时进行的64条鲨鱼基因聚类分析显示(见图2),同一物种都位于同一个分支,且不同个体的鱼类的COI序列相似度均大于95%,说明DNA条形码技术鉴别鱼类较为准确,不会随个体有较大的变化;不同鱼类物种相似度各不相同,其中真鲨科和双髻鲨科的属间相似度均为89%,而真鲨目三个属间的相似度为87%,随着分类阶元越高,相似度逐渐下降,最低相似度为76%。构建的同源树不仅能反应不同鱼类的亲缘关系,还能够直接看出不同鱼类COI序列的相似度,表明亲缘关系较近的物种,特别是聚类到一个种类的物种可以通过DNA条形码技术进行鉴别。
本实施例获得了30个鱼翅个体的线粒体COI基因序列,同时采用的聚类同源树分析显示:同种鱼翅样品的序列因分类亲和性而与相关参考序列聚在一起,形成一个聚类关系,以此可根据NCBI中参考序列的物种信息确定样品所属分类。
由此可以得出结论:本发明建立的DNA条形码方法适用于鱼翅制品的鉴定研究,且大多可以鉴定到种的水平。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例2:适合于广东省鱼翅干制品的物种鉴定的DNA条形码引物的筛选和优化
鉴于现有报道鱼类DNA条形码引物的多样化,针对实施例1中采集的33个真鱼翅样品,采用实施例1的DNA条形码引物及另外三种常用DNA条形码扩增引物进行扩增分析。表3结果表明,经优化PCR扩增条件和测序对比,结果证明引物对F1和R1(即实施例1的DNA条形码引物,上游引物为SEQ ID NO.1,下游引物为SEQ ID NO.2)在扩增成功率和测序成功率均优于其他引物,更适合应用广东省鱼翅干制品的物种鉴定。
表3候选DNA条形码扩增引物扩增获得的有效序列比例
序列表
<110> 广东省测试分析研究所(中国广州分析测试中心)
<120> 一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tcaaccaacc acaaagacat tggcac 26
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tagacttctg ggtggccaaa gaatca 26
Claims (8)
1.一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对,其特征在于,所述的引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述的引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种鉴别鱼翅种的DNA条形码试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含权利要求1所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒还包含DNeasy mericonFood Kit DNA提取试剂盒。
4.一种鉴别鱼翅种的DNA条形码方法,其特征在于,包括以下步骤:
a.提取待测鱼翅样品的DNA;
b.利用所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增;
c.对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列,将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定,确定待测鱼翅样品的种属。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的鱼翅种包括低鳍真鲨、大青鲨、尖吻鲭鲨、尖吻斜锯牙鲨、路氏双髻鲨、犁头鳐、丝鲨、无沟双髻鲨、尖齿柠檬鲨、舒氏星鲨、高鳍真鲨、浅海长尾鲨和沙拉真鲨。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的步骤a中利用DNeasy mericon FoodKit DNA提取试剂盒提取待测鱼翅样品的DNA。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的步骤b中PCR扩增的反应体系为:10×PCR Buffer 2.5μL,2.5mM dNTP Mixture 2.0μL,10μM上、下游引物各0.5μL,Taq 0.5μL;加水补至25.0μL。
8.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的步骤b中PCR扩增的反应条件为:94℃预变性5min;94℃30s,55℃30s,72℃45s,35个循环;72℃延伸5min。
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---|---|
CN (1) | CN111118171A (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103966204A (zh) * | 2014-05-27 | 2014-08-06 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种提取高质量鱼翅制品dna的方法 |
CN104017899A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-03 | 成都中医药大学 | 海马的鉴定方法 |
CN105506069A (zh) * | 2015-06-25 | 2016-04-20 | 陈定虎 | Lamp技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒 |
CN107354226A (zh) * | 2017-09-04 | 2017-11-17 | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 | 一种瓦氏雅罗鱼dna条形码标准检测序列及其应用 |
CN109055515A (zh) * | 2018-08-28 | 2018-12-21 | 浙江海洋大学 | 一种鉴别新疆额尔齐斯河北方须鳅隐存种的分子生物学方法 |
CN109055401A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-21 | 江汉大学 | 一种寡鳞飘鱼dna条形码序列及其应用 |
US20190040354A1 (en) * | 2016-02-02 | 2019-02-07 | Benchmark Animal Health Limited | Methods of producing viruses |
-
2019
- 2019-12-31 CN CN201911421099.1A patent/CN111118171A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103966204A (zh) * | 2014-05-27 | 2014-08-06 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种提取高质量鱼翅制品dna的方法 |
CN104017899A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-09-03 | 成都中医药大学 | 海马的鉴定方法 |
CN105506069A (zh) * | 2015-06-25 | 2016-04-20 | 陈定虎 | Lamp技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒 |
US20190040354A1 (en) * | 2016-02-02 | 2019-02-07 | Benchmark Animal Health Limited | Methods of producing viruses |
CN107354226A (zh) * | 2017-09-04 | 2017-11-17 | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 | 一种瓦氏雅罗鱼dna条形码标准检测序列及其应用 |
CN109055401A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-21 | 江汉大学 | 一种寡鳞飘鱼dna条形码序列及其应用 |
CN109055515A (zh) * | 2018-08-28 | 2018-12-21 | 浙江海洋大学 | 一种鉴别新疆额尔齐斯河北方须鳅隐存种的分子生物学方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ROBERT D. WARD: "FISH-BOL, A Case Study for DNA Barcodes", 《METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY》 * |
王德莲 等: "鱼翅制品中鲨鱼源性成分的实时荧光PCR检测方法", 《现代食品科技》 * |
隋哲: "基于DNA条形码技术的鱼翅物种鉴别研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 * |
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200508 |