CN111110840B - 一种动物疫苗用水包油佐剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种动物疫苗用水包油佐剂及其制备方法，属于生物制品类动物疫苗技术领域，一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：80.7％‑89.5％的矿物油，2.1％‑2.5％的司盘80，3.0％‑5.3％的吐温85，1.5％‑3.5％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，0.5％‑4.7％的聚甘油‑6辛酸酯，2.2％‑3.6％的聚氧乙烯蓖麻油。本发明水包油佐剂制备简单、方便易得、成本低；制备的疫苗粘度低、易注射、质量稳定、注射安全、粒度小可达纳米级别，可诱导短期和长期的免疫，是一类可用于禽类、畜类疫苗的安全佐剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品类动物疫苗技术领域，具体涉及一种动物疫苗用水包油佐剂及其制备方法。
背景技术
佐剂在免疫学和生物制品学上又称免疫佐剂，传统概念为当一种物质先于抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥其辅助作用的物质。最新的概念为凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质，其作用特点是：①能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答；②用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体可产生足够的免疫应答和高滴度的抗体，在血流或黏膜表面能够维持较长的时间，发挥持久的效果。
油乳佐剂是一类由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂，如弗氏佐剂。该类佐剂能使抗原在注射部位持续稳定释放，为抗原在淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的形成和积累，提高疫苗的免疫效力，是目前国内外疫苗市场上产品最多的类型之一，常用的油乳佐剂疫苗可以分为三种剂型：油包水(W/O)型、水包油(O/W)型和水包油包水(W/O/W)型。油包水(W/O)型疫苗通常可以获得较高水平的免疫应答，且免疫保护期长，但疫苗粘度较高，不易注射，在体内不易分散代谢，粘度高导致动物副反应大。水包油包水(W/O/W)型疫苗同时具备油包水(W/O)型和水包油(O/W)型疫苗的优点，常规做法是先制备油包水(W/O)型疫苗，再经过二次乳化，将抗原分散到水相中制备而成，该类型疫苗黏度低，易于注射，且免疫水平高，免疫保护期长，但其制备技术上难度较大，疫苗稳定性较差。水包油(O/W)型疫苗通常粘度较低，注射入体内易于分散，不易残留，但是大多数水包油型疫苗难以获得满意的免疫应答水平，疫苗市场鲜有这种剂型。
水包油型佐剂制备的疫苗因其粘度接近水的粘度，常被称为水性佐剂。传统的疫苗鲜有水包油剂型，但新的动物疫苗层出不穷，食品安全促使疫苗行业更加重视注射残留问题，一些经济类动物由于注射疫苗引起较大的副反应而延长出栏期，一些对注射疫苗应激反应较强烈的动物，仍需用水性佐剂制备的疫苗进行免疫。目前市场应用较多的为进口水包油佐剂，进口佐剂价格高，货期长，不易获得；一些疫苗厂家也自配佐剂来制备疫苗，通常将亲水性乳化剂溶于抗原，亲油性乳化剂溶于矿物油，油相和水相混合乳化制备疫苗，制备工艺复杂，仅适用于本公司生产制备疫苗，不能大规模推广应用；同时又出现一些新型水性佐剂代替传统水包油佐剂，如赛比克水性佐剂MontanideTM GEL，该佐剂制备疫苗，实际是一种抗原的稀释过程，通常佐剂占疫苗的10％左右，抗原用量较多，增加了疫苗的成本；水性佐剂中的抗原稀释剂，往往需要添加免疫增强剂，多用于弱毒冻干疫苗的稀释；铝胶佐剂也是以往常用的水性佐剂，但其制备疫苗后注射动物副反应大，已经很少使用。
专利CN201510153978.6所发明的水性佐剂，其组分中含有MontanideTM GEL 01，需依赖进口佐剂来制备；专利CN201710597663.X所发明的水性佐剂，其组分中含有细菌DNA，荚膜多糖等，制备技术要求高，含生物成分，运输和储存条件苛刻；专利CN201610908926.X所发明的水包油佐剂，其佐剂外观性状为乳浊液，且制备时需高压均质，过滤除菌，充氮罐装保存，制备和存储方法相对复杂；专利CN108704130.A所提出的复方水佐剂，其组成含有化合物类免疫增强剂，中药类免疫增强剂，生物类免疫增强剂，多组分，成分跨度大，其中的化合物类增强剂安全范围窄，中药类和生物类增强剂不易制备，原料成分纯度，成本及产量不易控制。
发明内容
针对上述水性佐剂存在的缺陷，本发明提出了一种动物疫苗用水包油佐剂及其制备方法，一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：80.7％-89.5％的矿物油，2.1％-2.5％的司盘80，3.0％-5.3％的吐温85，1.5％-3.5％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，0.5％-4.7％的聚甘油-6辛酸酯，2.2％-3.6％的聚氧乙烯蓖麻油。
本申请的技术方案中，佐剂原材料均采用医药级的矿物油和非离子型乳化剂，成分安全、纯度较高，制备的成品佐剂成本相对较低；佐剂中乳化剂占比10％-20％，降低了因乳化剂过多而产生副反应的风险，多种乳化剂的配比，可减少乳化剂的用量，同时能保证疫苗的稳定性；其中司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油为乳化剂，各乳化剂HLB值(亲水亲油平衡值)的和在10.5-12.5之间，这样的乳化剂HLB值更适合乳化白油形成水包油疫苗，且使形成的水包油疫苗很稳定；推荐本发明佐剂和抗原在室温条件下，按照体积比15:85-25:75用搅拌机低速搅拌乳化制备疫苗，制备工艺和设备可规模化持续生产，较现有的赛比克15A推荐的乳化质量比15:85有更大的应用范围，可减少抗原的用量，降低疫苗生产成本；佐剂制备的疫苗粘度低，约为5厘泊左右(水的粘度约为3厘泊)，在4℃保存12个月以上稳定，37℃保存6个月以内稳定，室温保存12个月稳定，稳定性优于国内外同类产品，疫苗粒度小，中位粒径(D50)小于200nm，粒度小且分布集中，有利于疫苗的稳定性及抗原的摄取，同时可达到缓释效果，提高二次免疫水平。
优选的，所述矿物油为医药级的白油，乳化剂为医药级的非离子型表面活性剂。
优选的，一种动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
更优选的，步骤(2)的搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为20-30分钟。
更优选的，步骤(2)中将矿物油加热到35-40℃。
更优选的，步骤(3)的搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为20-30分钟。
更优选的，步骤(3)中对反应罐内的产物冷却至室温。
更优选的，步骤(4)的搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为30-40分钟。
更优选的，步骤(5)中的薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。
本发明佐剂采用采用医药级原材料，制备工艺简单，使用便捷，即开即用；通过改变水包油佐剂中乳化剂的占比及佐剂与抗原的乳化比例，室温下低速搅拌即可大规模生产，制备的疫苗具有粘度小、易注射、粒径小、稳定性好、注射安全有效、无可见残留等特点。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)成本低：本发明佐剂，原材料易于购买，成分安全、纯度较高，保证产品质量的同时，成品佐剂价格较进口佐剂低，可降低疫苗生产原材料成本；疫苗生产工艺和设备简单，便于规模化持续生产，可降低疫苗生产成本；
(2)质量稳定：本发明佐剂制备的疫苗粘度低，约为5厘泊左右(水的粘度约为3厘泊)，在4℃保存12个月以上稳定，37℃保存6个月以内稳定，室温保存12个月稳定，稳定性优于国内外同类产品，该佐剂制备的疫苗粒度小，中位粒径(D50)小于200nm，粒度小且分布集中，有利于疫苗的稳定性及抗原的摄取，同时可达到缓释效果，提高二次免疫水平；
(3)制备方法简单：本发明佐剂采用剂在油中法制备佐剂，即将亲水性和亲油性的乳化剂均溶解在矿物油中，成品佐剂可用0.45微米的薄膜过滤除菌或在121℃湿热灭菌30分钟，在阴凉避光处储存，使用前混匀即可，成品佐剂制备方法简单；使用时将本发明佐剂与抗原按照体积比15:85-25:75在室温下低速搅拌乳化生产疫苗，无需严格控制乳化温度，无需高压均质机，均化器等大型生产设备，制备疫苗工艺简单；
(4)安全有效：本发明佐剂制备的水包油型疫苗粘度小，易于注射和扩散，粒度小，易于抗原摄取和吸收，佐剂中乳化剂的含量仅为10％-20％，原材料均为医药级，易于代谢，无可见残留，未见因注射引起的死亡或明显的局部反应或全身不良反应，为疫苗注射安全性和经济动物的食用安全性提供了有力支持。应用例通过小动物安检试验和仔猪安检试验阐述了本发明佐剂的安全性，通过注射仔猪的对比试验阐述了本发明佐剂的有效性；
(5)应用广泛：本发明佐剂可产生较高免疫水平，是从佐剂本身出发，不添加免疫增强剂，可以佐助抗原达到较高的免疫刺激效果，可商品化使用制备疫苗，也可作为疫苗生产厂家的基础佐剂，添加适合自身需求的免疫刺激物，以符合实际需求。同时它是一种制剂剂型，可溶解水溶性药品，油溶性药品，从而制备具有缓释效果的动物注射用乳剂。
附图说明
图1是本发明水包油佐剂制备的乳液粒度特征图；
图2是某进口水包油佐剂制备的乳液粒度特征图；
图3是肌肉注射疫苗对小鼠体重的影响图；
图4是皮下注射疫苗对小鼠体重的影响图；
图5是小鼠肌肉注射位点解剖图；
图6是小鼠肌肉注射位点切片观察(HE×200)；
图7是PRV血清中和抗体水平。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作优选的详细说明。
实施例1
一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：80.7％的矿物油，2.2％的司盘80，5.3％的吐温85，3.5％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，4.7％的聚甘油-6辛酸酯，3.6％的聚氧乙烯蓖麻油。
制备方法，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
在上述步骤中，搅拌的时间均控制在30分钟，搅拌的转速均为90转/分，矿物油加热到35℃，薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。在生产操作前，反应罐和直接接触产品的器具应洁净；原辅料和包装材料的检验应符合要求；控制生产环境符合要求，生产完后，反应罐和直接接触产品的器具应清洗，成品的检验符合要求，生产环境清洁至符合要求。
实施例2
一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：85.5％的矿物油，2.5％的司盘80，4.0％的吐温85，3.0％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，2.4％的聚甘油-6辛酸酯，2.6％的聚氧乙烯蓖麻油。
制备方法，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
在上述步骤中，搅拌的时间均控制在30分钟，搅拌的转速均为90转/分，矿物油加热到35℃，薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。在生产操作前，反应罐和直接接触产品的器具应洁净；原辅料和包装材料的检验应符合要求；控制生产环境符合要求，生产完后，反应罐和直接接触产品的器具应清洗，成品的检验符合要求，生产环境清洁至符合要求。
实施例3
一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：87.3％的矿物油，2.2％的司盘80，3.8％的吐温85，3.2％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，1.3％的聚甘油-6辛酸酯，2.2％的聚氧乙烯蓖麻油。
制备方法，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
在上述步骤中，搅拌的时间均控制在30分钟，搅拌的转速均为90转/分，矿物油加热到35℃，薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。在生产操作前，反应罐和直接接触产品的器具应洁净；原辅料和包装材料的检验应符合要求；控制生产环境符合要求，生产完后，反应罐和直接接触产品的器具应清洗，成品的检验符合要求，生产环境清洁至符合要求。
实施例4
一种动物疫苗用水包油佐剂，按质量百分比计，包括以下原料：89.5％的矿物油，2.1％的司盘80，3.2％的吐温85，1.5％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，0.5％的聚甘油-6辛酸酯，3.2％的聚氧乙烯蓖麻油。
制备方法，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
在上述步骤中，搅拌的时间均控制在30分钟，搅拌的转速均为90转/分，矿物油加热到35℃，薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。在生产操作前，反应罐和直接接触产品的器具应洁净；原辅料和包装材料的检验应符合要求；控制生产环境符合要求，生产完后，反应罐和直接接触产品的器具应清洗，成品的检验符合要求，生产环境清洁至符合要求。
应用例和应用对比例
为更直观的体现本发明的有益效果，发明人在质量特性、安全性、有效性方面对本发明水包油佐剂进行了以下阐述：
首先，为阐述本发明的质量特性，对本发明水包油佐剂和某进口水包油佐剂进行对比实验，以生理盐水代替抗原进行乳化，过程如下：
1)试验材料：本发明水包油佐剂、某进口水包油佐剂、生理盐水，以上材料均已灭菌。
2)试验仪器：搅拌机、烧杯，与产品直接接触的部分均已灭菌。
3)试验方法：
①取生理盐水85ml于烧杯中，调节四叶搅拌桨距离烧杯底部1厘米，调节搅拌转速为500r/min，达到转速后，在1min内加入15ml本发明的水包油佐剂，然后调节搅拌转速为1000r/min，计时乳化10min，将制备的乳化液放置4℃密封保存，既得本发明的水包油佐剂制备的水包油乳液。
②取生理盐水85g于烧杯中，按照其说明书方法，调节四叶搅拌桨距离烧杯底部1厘米，调节搅拌转速为500r/min，达到转速后，在10s内缓慢加入15g进口水包油佐剂，然后调节搅拌转速为1000r/min，计时乳化10min，将制备的乳化液放置4℃密封保存，既得进口水包油佐剂制备的水包油乳液。
③将上述两种乳液恢复至室温，分别对其进行理化检验(检测其外观、剂型、粒度、粘度)、稳定性观察(观察离心稳定性，4℃保存稳定性、25℃保存稳定性、37℃保存稳定性)，结果见表1及图1-2。
4)试验结果：
由理化检测数据和稳定性观察数据可知，本发明水包油佐剂制备的乳液为外观均匀的水包油型乳液，粒度小，可达纳米级别，且粒度大小分布均匀，有利于乳液保存的稳定性，乳液4℃保存一年以上稳定，25℃保存12个月稳定，37℃保存6个月稳定，理化数据和稳定性数据较进口水包油佐剂略优。
其次，为阐述本发明佐剂的安全性，对本发明水包油佐剂和进口水包油佐剂制备的疫苗进行了动物安全性试验，抗原为猪伪狂犬基因缺失标记灭活抗原(PRV)，过程如下：
1)试验材料：本发明水包油佐剂制备的疫苗为疫苗1，注射动物为佐剂组1；进口水包油佐剂制备的疫苗为疫苗2，注射动物为佐剂组2；生理盐水注射动物为对照组。
2)试验动物：试验小鼠和豚鼠由成都达硕实验动物有限公司提供；试验仔猪及场所由四川驰阳农业开发有限公司提供。
3)试验项目：肌肉注射毒性试验、小动物安检试验、仔猪安检试验、残留试验。
4)试验方法：
①肌肉注射毒性试验：
取雌性小鼠30只，体重约为18-22g，随机分为3组，每组10只，分别经小鼠左侧股四头肌肌肉注射疫苗及生理盐水各0.5ml。给药后4h内观察小鼠的生理反应，连续14d观察小鼠体重变化及死亡率。
肌肉注射毒性试验结果显示，分别注射疫苗1和疫苗2，在给药4h内，与对照组比较，佐剂组小鼠的健康状态均未见明显变化。连续观察14d，未观察到震颤、精神不振等症状，佐剂组1小鼠体重增重略优于佐剂组2和对照组，见图3。
②小动物安检试验：
用体重350～450g的豚鼠5只，各皮下注射疫苗2m1；用体重18～22g小鼠5只，各皮下注射疫苗0.5m1，生理盐水0.5ml为对照，并记录小鼠体重变化。小动物持续观察14日，均不应出现因注射引起的死亡或明显的局部反应或全身不良反应。
小动物安检试验结果显示，分别给药疫苗1和疫苗2，与对照组比较，佐剂组小鼠的健康状态均未见明显变化。连续观察14d，未观察到震颤、精神不振等症状，佐剂组小鼠体重增重与对照组无明显差异。小鼠体重情况见图4，小动物安检结果见表2。
表2小动物安检结果
③仔猪安检试验：
用3～5周龄健康易感仔猪5头，每头猪耳根后肌肉注射疫苗4ml(2头份)，每侧2ml，分别持续观察14日，均不应出现因注射引起的死亡或明显的局部反应或全身不良反应。
仔猪安检选取的试验猪为5周龄，体重为6.5-7.5kg左右的仔猪，注射疫苗前精神活动，饮食状态良好，按照上述要求检验，注射疫苗后观察动物体温、活动情况、饮食状态、注射部位反应等情况，仔猪安检结果见表3。
表3仔猪安检结果
④残留试验：
取肌肉注射毒性试验项下的小鼠，饲养1个月后，解剖小鼠，各组小鼠腿部肌肉均未见肿胀，坏死等现象，剪开肌肉组织，未见疫苗残留；取注射位点肌肉，以4％甲醛固定、切片、HE染色，显微镜下观察，各组小鼠腿部肌纤维大小均匀，肌浆丰富，核仁清楚，肌肉组织间质无炎性细胞浸润，未出现变性、坏死、再生等病理变化。
残留试验结果显示，在本试验条件下，小鼠注射疫苗，注射部位未见疫苗残留及组织病变，解剖图见图5，各组小鼠肌肉注射位点切片观察(HE×200)情况见图6。
5)试验结果：
由动物安全性试验可知，制备的两种疫苗注射动物，通过肌肉注射毒性试验、小动物安检试验、仔猪安检试验、残留试验，观测小鼠体重增长情况、活动情况、病理切片、注射位点切片等判定佐剂的安全性，佐剂对小鼠均未产生急性毒性，注射后疫苗无可见残留，但本发明水包油佐剂制备的疫苗注射后的动物生理活动和生长情况优于进口水包油佐剂，且小动物安检和仔猪安检均符合要求，未出现因注射引起的死亡或明显的局部反应或全身不良反应。
同时，为进一步阐述本发明水包油佐剂的有效性，对本发明水包油佐剂与进口双相佐剂和国产双相佐剂进行对比试验，用猪伪狂犬基因缺失标记灭活抗原(PRV)制备疫苗，免疫仔猪，测定中和抗体含量，过程如下：
1)免疫：
取3～5周龄健康易感仔猪(PRV血清中和抗体效价不高于1：4或血清gB抗体ELISA检测阴性，且PRV抗原检测阴性)15头，随机分为3组，每组5头猪。免疫组每头猪耳根后肌肉注射疫苗2ml，一免后21日以同样剂量、同样接种方法加强免疫一次。
2)采血及抗体检测：
以上疫苗免疫猪在一免21日，二免7日、14日、21日分别采血并分离血清，持续监测血清中和抗体，血清中和抗体水平见图7。
3)结果：
由仔猪血清中和抗体结果可知，本发明水包油佐剂和进口双相佐剂能持续产生较高抗体水平，但本发明佐剂在一免21天的中和抗体结果比国产及进口双相佐剂均高，且抗体量在二免21天仍维持较高水平，解决了目前水包油佐剂难以获得满意的免疫应答水平的问题。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。
Claims (9)
1.一种动物疫苗用水包油佐剂，其特征在于：按质量百分比计，包括以下原料：80.7％的矿物油，2.2％的司盘80，5.3％的吐温85，3.5％的月桂酸聚乙二醇甘油酯，4.7％的聚甘油-6辛酸酯，3.6％的聚氧乙烯蓖麻油。
2.根据权利要求1所述的一种动物疫苗用水包油佐剂，其特征在于：所述矿物油为医药级的白油，乳化剂为医药级的非离子型表面活性剂。
3.一种如权利要求1或2所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按比例分别称量矿物油、司盘80、吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油，备用；
(2)将矿物油加入反应罐内进行搅拌，加热；
(3)向反应罐内加入称量好的司盘80，继续搅拌，并对反应罐内的产物进行降温冷却处理；
(4)向反应罐内依次加入称量好的吐温85、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油-6辛酸酯、聚氧乙烯蓖麻油继续进行搅拌后静置；
(5)将静置后反应罐内的混合液体通过薄膜过滤或者湿热灭菌，即可制备该动物疫苗用水包油佐剂。
4.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为20-30分钟。
5.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中加热温度为35-40℃。
6.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)中搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为20-30分钟。
7.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)中对反应罐内的产物冷却至室温。
8.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(4)中搅拌速度为90-100转/分，搅拌时间为30-40分钟。
9.根据权利要求3所述的动物疫苗用水包油佐剂的制备方法，其特征在于：步骤(5)中的薄膜为滤孔直径为0.45微米的薄膜，湿热灭菌为121℃处理30分钟。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101843901A (zh) * | 2010-02-01 | 2010-09-29 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 以纳米乳剂为佐剂的流感病毒疫苗及其制备方法 |
| CN103610641A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-03-05 | 绵阳高新区百诺吉生物科技有限公司 | 兽用疫苗用双相油乳佐剂及其制作方法 |
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2020
- 2020-01-17 CN CN202010052685.XA patent/CN111110840B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101843901A (zh) * | 2010-02-01 | 2010-09-29 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 以纳米乳剂为佐剂的流感病毒疫苗及其制备方法 |
| CN103610641A (zh) * | 2013-11-29 | 2014-03-05 | 绵阳高新区百诺吉生物科技有限公司 | 兽用疫苗用双相油乳佐剂及其制作方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Fukanoki等.Safety and efficacy of water-in-oil-in-water emulsion vaccines containing Newcastle disease virus haemagglutinin-neuraminidase glycoprotein.《Avian Pathology》.2010,第30卷(第30期),第509-516页. * |
| 刘强等.《中药新产品开发》.中国医药科技出版社,2013,第393页. * |
| 张天胜.《表面活性剂应用技术》.化学工业出版社,2001,第221-222页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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