CN111094287A - 经取代的咪唑并喹啉 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及咪唑并喹啉衍生物并涉及含有咪唑并喹啉衍生物的药物组合物。本发明的咪唑并喹啉衍生物可用作toll样受体激动剂，特别是TLR7的激动剂，并促进特定细胞因子的诱导。

Description

经取代的咪唑并喹啉
技术领域
本发明涉及咪唑并喹啉衍生物和含有咪唑并喹啉衍生物的药物组合物。咪唑并喹啉衍生物可用作toll样受体激动剂，特别是TLR7的激动剂，并促进某些细胞因子的诱导。
背景技术
Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)目前包含13种具有不同特异性的受体的基因家族，其中11种在人类中发现，其是细胞病原体模式识别系统的一部分，该系统已进化为防御多种感染(细菌、病毒、真菌)。TLR的激活导致细胞因子反应，例如释放干扰素以及激活特定的免疫细胞。组织中选定的TLR的功能表达差异很大。部分受体位于细胞表面，例如在例如上皮细胞上的TLR4(受大肠杆菌脂多糖LPS刺激)，或者位于特定免疫细胞的内体膜上的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9。后者都被核酸激活，但是识别不同类型的核酸。例如，TLR9被包含CpG子序列的单链DNA激活，TLR7和TLR8被单链RNA激活，而TLR3被双链RNA激活。
已经鉴定出一些小分子(SMOL)TLR7或TLR8激动剂。这些激动剂可分为嘌呤样分子，例如7-硫代-8-氧鸟嘌呤(TOG，isatoribine)或基于咪唑并喹啉的化合物(如咪喹莫特(imiquimod))。咪喹莫特是迄今为止唯一批准的确定TLR7激动剂，以5％乳膏销售(由Aldara)。其产生约80％的浅表基底细胞癌(全球最常见的癌症)的5年清除率。咪喹莫特激活TLR7。TLR7的功能性表达似乎仅限于特定的免疫细胞，即在人中，已知类浆细胞样树突状细胞、B细胞以及可能的嗜酸性粒细胞被TLR7激动剂激活。
最近几年，全世界一直在努力开发利用TLR7、TLR8或TLR9激动剂诱导的强大免疫激活来治疗癌症。然而，癌症免疫疗法经历了很长的失败历史。但是，近年来，有关癌症免疫监视和免疫细胞亚群功能的知识得到了极大的改善。TLR7、TLR8或TLR9激动剂正处于临床开发，以用于癌症的单一疗法或联合疗法或作为疫苗佐剂。
用于癌症免疫疗法的TLR激动剂方法不同于使用例如细胞因子、干扰素或单价疫苗接种的早期工作。TLR激动剂介导的免疫激活是通过特定的免疫细胞(主要是树突状细胞和B细胞，其次是其他细胞)的多效性的，其产生先天性和适应性免疫应答。而且，不是诱导仅一种干扰素，而是许多不同的同工型一起，并且不仅是I型(α、β)，而且还(间接地)诱导II型(γ、NK细胞)。至少对于局部施用，Aldara提供了出色的概念证明。这表明抗原是由肿瘤释放的，并且免疫疗法原则上可用于癌症适应症，甚至是在单一疗法中。但是，对于全身施用途径，TLR7激动剂的临床POC尚待定。对于晚期癌症和全身施用(特别是皮下或静脉内施用途径)，显然这种TLR激动剂与其他治疗性干预措施结合可以提供更强的(即协同的)功效。
在癌症的早期阶段，情况可能会有所不同。肿瘤转移是患者中肿瘤发展的严重方面，主要是因为在已经发生转移时已经太晚检测到肿瘤。已建立的肿瘤疗法主要包括具有较窄治疗窗口的细胞毒性药物。因此，对于仍可能抑制转移扩散的早期肿瘤阶段的治疗，对具有良好耐受性和安全性的新疗法的需求很高。
免疫系统的激活，特别是Toll样受体(TLR)信号转导的激活提供了新的有前途的方法。在鼠Renca肺转移模型中测试了TLR9激动剂CpG-ODN(如H2006或H1826)和TLR7激动剂(如鸟苷衍生物艾沙托立宾(isatoribine)或咪喹莫德衍生物)。所有测试的分子以良好的耐受性几乎完全抑制了肺转移的出现。这为用于抑制癌症转移的此类分子的临床开发提供了令人信服的理由，并指出了此类药物的全身施用的可能性。然而，与核酸类型TLR9激动剂相比，SMOL类型TLR7激动剂具有建立的和成本有效的合成的优势，并且非常适合局部施用。
US-B-6,573,273描述了含有脲、硫脲、酰脲、磺酰脲或氨基甲酸酯官能团的咪唑并喹啉和四氢咪唑并喹啉化合物。据说所述化合物可用作免疫调节剂。
US-B-6,677,349描述了在1-位含有磺酰胺官能团的咪唑并喹啉和四氢咪唑并喹啉化合物。据说所述化合物可用作免疫调节剂。
US-A-2003/0144283和WO-A-00/76505描述了在1-位含有酰胺官能团的咪唑并喹啉和四氢咪唑并喹啉化合物。据说所述化合物可用作免疫调节剂。
WO-A-2005/051324描述了在1位被肟或特殊的N-氧化物官能团取代的咪唑并喹啉、吡啶和萘啶环体系。据说所述化合物可用作免疫调节剂。
WO-A-2009/118296描述了咪唑并喹啉化合物。所述化合物被描述为toll氧受体激动剂/TLR7激活剂。
发明内容
本发明提供了如下文进一步描述的具有某些特定取代基的咪唑并喹啉-4-胺化合物，其生理功能性衍生物、溶剂合物和盐。所述化合物是TLR7的激动剂或激活剂，并且可用作细胞因子诱导化合物。所述化合物具有通式(I)：
Figure BDA0002400952140000031
其中：R1、R2、R3和n如下文所限定。
在另一方面，本发明提供了如下文进一步详细描述的用于制备某些式(I)的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐的方法。
在另一方面，本发明提供了如下文进一步详细描述的用于治疗或预防某些医学病症的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用式(I)的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐。
在另一方面，本发明提供了如下文进一步详细描述的式(I)的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐在制备用于治疗或预防某些医学病症的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了如下文进一步详细描述的式(I)的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，它们用作药物，特别是用于治疗或预防某些医学病症。
在另一方面，本发明提供了包含式(I)的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐以及一种或更多种可药用赋形剂的药物组合物。
式(I)的化合物例如用作TLR7激活剂。
发明详述：
已经发现，下文更详细描述的式(I)的咪唑并喹啉衍生物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐是特别有效的TLR7激动剂，并具有出人意料和特别有利的性质。
本发明提供了式(I)的化合物或其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐：
Figure BDA0002400952140000041
其中
R1选自-H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基、C6-10-芳基、C6-10-芳基-C1-2-烷基和5至10元杂芳基，其中所述C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基、C6-10-芳基-C1-2-烷基和5至10元杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN；
R2选自-CO-R5、-CONH-R5和-COO-R5；
R3是四氢吡喃-4-基，其任选地被一个或更多个独立地选自C1-4-烷基、-OH和卤素的基团取代，
R4各自独立地选自H和C1-4-烷基；
n是3至6的整数；并且
R5选自-H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基和5至10元杂芳基，其中所述C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基和5至10元杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN。
在本发明的特定实施方案中，R1选自C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，特别是C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，其中所述C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基或C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代。
甚至更特别地，R1选自乙基、甲基、丙基、丁基、甲氧基乙基和乙基氨基甲基，其各自任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代，甚至更特别地，其各自是未经取代的。
甚至更特别地，R1选自乙基、丙基、丁基、甲氧基乙基和乙基氨基甲基，其各自任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代，甚至更特别地，其各自是未经取代的。
甚至更特别地，R1选自乙基、甲氧基乙基和乙基氨基甲基，其各自任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代，甚至更特别地，其各自是未经取代的。
甚至更特别地，R1是未经取代的甲氧基乙基。
还甚至更特别地，R1是未经取代的乙基氨基甲基。
在本发明的特定实施方案中，R2选自-CO-R5和-CONH-R5，更特别是-CO-R5。
在本发明的特定实施方案中，R3是未经取代的四氢吡喃-4-基。
在本发明的特定实施方案中，R4各自独立地选自H和甲基，更特别是H。
在本发明的特定实施方案中，n是4。
在本发明的特定实施方案中，R5选自H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、苯基、5至6元杂环烷基、C5-6-环烷基和5至6元杂芳基，更特别地H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、苯基和C5-6-环烷基，甚至更特别地H、C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、苯基、5至6元杂环烷基、C5-6-环烷基和5至6元杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-2-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN，更特别地C1-2-烷基、-OH、卤素、NH2、-COMe、-COOH、-COOMe和-CN，甚至更特别地甲基、-OH和卤素。
更特别地，R5选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，甚至更特别地H、甲基或乙基，甚至更特别地H或甲基。
在本发明的特定实施方案中，R2是-CO-R5，其中R5选自C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-4-烷基和C1-3-烷氧基-C1-3-烷基，更特别地R5是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-2-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN，更特别地C1-2-烷基、-OH、卤素、NH2、-COMe、-COOH、-COOMe和-CN，甚至更特别地甲基、-OH和卤素。在一个实施方案中，R2是-CO-R5，其中R5选自C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-4-烷基和C1-3-烷氧基-C1-3-烷基，更特别地R5是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基是未经取代的。
在本发明的特定实施方案中，R2是-CONH-R5，其中R5选自H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地H和C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-2-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN，更特别地C1-2-烷基、-OH、卤素、NH2、-COMe、-COOH、-COOMe和-CN，甚至更特别地甲基、-OH和卤素。在一个实施方案中，R2是-CONH-R5，其中R5选自H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地H和C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基是未经取代的。
在一个实施方案中，R2是-CONH2、-CO-Me、-COOMe或-COOH，特别是-CONH2、-CO-Me或-COOMe，更特别是-CONH2或-CO-Me。
在本发明的特定实施方案中，R1选自C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，其中所述C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基或C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代；R2是-CO-R5，其中R5选自C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-4-烷基和C1-3-烷氧基-C1-3-烷基，更特别地R5是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-2-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN，更特别地C1-2-烷基、-OH、卤素、NH2、-COMe、-COOH、-COOMe和-CN，甚至更特别地甲基、-OH和卤素。在一个实施方案中，R2是-CO-R5，其中R5选自C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-4-烷基和C1-3-烷氧基-C1-3-烷基，更特别地R5是C1-3-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基是未经取代的。在这些实施方案中，优选地R3是未经取代的四氢吡喃-4-基和/或n是4。
在本发明的特定实施方案中，R1选自C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，其中所述C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基或C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代；并且R2是-CONH-R5，其中R5选自H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地H和C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自以下的取代基取代：C1-2-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN，更特别地C1-2-烷基、-OH、卤素、NH2、-COMe、-COOH、-COOMe和-CN，甚至更特别地甲基、-OH和卤素。在一个实施方案中，R2是-CONH-R5，其中R5选自H、C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，更特别地H和C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基是未经取代的。在这些实施方案中，优选地R3是未经取代的四氢吡喃-4-基和/或n是4。
以下定义旨在进一步定义在本发明的上下文中使用的某些术语。如果没有特别地定义本文中使用的特定术语，则不应认为该术语是不确定的。相反地，这些术语应根据本发明所属领域中，特别是有机化学、药学和医学领域中的技术人员通常理解的含义来解释。
术语“四氢吡喃-4-基”是指下式的基团，其中间断的键指定了与中心部分的连接点。
Figure BDA0002400952140000081
本文中使用的术语“烷基”和前缀“alk”包括直链和支链基团两者，并且包括相应的链烷基、烯基和炔基。显而易见的是，烯基和炔基不能仅由单个碳单元组成，并且这样的不存在的基团不包括在本发明中；因此，在逻辑上，诸如C1-x-烷基的术语(其中x是在相应上下文中指定的整数)包括相应的C1-x-链烷基、C2-x-烯基和C2-x-炔基。特定的烷基具有总共最多5个，特别是最多4个，更特别是最多3个碳原子。在特定实施方案中，烷基选自-CH3、-C2H5、-CH＝CH2、-C≡CH、-C3H7；-CH(CH3)2、-CH2-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH2、-CH＝CH-CH3、-C≡C-CH3、-CH2-C≡CH、-C4H9、-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C2H5、-C(CH3)3、-C5H11、-C6H13、-C2H4-CH＝CH2、-CH＝CH-C2H5、-CH＝C(CH3)2、-CH2-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-CH＝CH2、-C2H4-C≡CH、-C≡C-C2H5、-CH2-C≡C-CH3、-C≡C-CH＝CH2、-CH＝CH-C≡CH、-C≡C-C≡CH、-C2H4-CH(CH3)2、-CH(CH3)-C3H7、-CH2-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-CH(CH3)2、-C(CH3)2-C2H5、-CH2-C(CH3)3、-C3H6-CH＝CH2、-CH＝CH-C3H7、-C2H4-CH＝CH-CH3、-CH2-CH＝CH-C2H5、-CH2-CH＝CH-CH＝CH2、-CH＝CH-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-CH2-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH-CH＝CH2、-CH＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH＝CH-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH＝C(CH3)2、C(CH3)＝C(CH3)2、-C3H6-C≡CH、-C≡C-C3H7、-C2H4-C≡C-CH3、-CH2-C≡C-C2H5、-CH2-C≡C-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH-C≡CH、-CH2-C≡C-C≡CH、-C≡C-CH＝CH-CH3、-CH＝CH-C≡C-CH3、-C≡C-C≡C-CH3、-C≡C-CH2-CH＝CH2、-CH＝CH-CH2-C≡CH、-C≡C-CH2-C≡CH、-C(CH3)＝CH-CH＝CH2、-CH＝C(CH3)-CH＝CH2、-CH＝CH-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH-C≡CH、-CH＝C(CH3)-C≡CH、-C≡C-C(CH3)＝CH2、-C3H6-CH(CH3)2、-C2H4-CH(CH3)-C2H5、-CH(CH3)-C4H9、-CH2-CH(CH3)-C3H7、-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)2、-CH(CH3)-CH(CH3)-C2H5、-CH2-CH(CH3)-CH(CH3)2、-CH2-C(CH3)2-C2H5、-C(CH3)2-C3H7、-C(CH3)2-CH(CH3)2、-C2H4-C(CH3)3、-CH(CH3)-C(CH3)3、-C4H8-CH＝CH2、-CH＝CH-C4H9、-C3H6-CH＝CH-CH3、-CH2-CH＝CH-C3H7、-C2H4-CH＝CH-C2H5、-CH2-C(CH3)＝C(CH3)2、-C2H4-CH＝C(CH3)2、-C4H8-C≡CH、-C≡C-C4H9、-C3H6-C≡C-CH3、-CH2-C≡C-C3H7、和-C2H4-C≡C-C2H5，甚至更特别地甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基，甚至更特别地甲基、乙基、正丙基和异丙基，甚至更特别地甲基和乙基。在一个实施方案中，术语“烷基”仅是指链烷基(即，不包括烯基和炔基)，特别是上面所示的那些链烷基(即，-CH3、-C2H5、-C3H7等)。除非另有说明，否则所有上述烷基均如本发明的实施方案中详述的那样被任选地取代，即一个或更多个氢原子任选地被所述相应实施方案中指出的取代基代替。尤其特别地，除非另有说明，否则所述烷基是未经取代的。
烷基的一种特定形式是卤代烷基，其是如上定义的烷基，其中烃链上的一个或更多个，特别是至少一半，更特别是所有氢原子被卤素原子代替。卤代烷基特别选自-C(R7)3、-CH2-C(R7)3、-C(R7)2-CH3，-C(R7)2-C(R7)3，-C(R7)2-CH(R7)2、-CH2-CH(R7)2、-CH(R7)-C(R7)3、-CH(R7)-CH3和-C2H4-C(R7)，更特别地-C(R7)，其中R7代表卤素，特别是F。更特别地，卤代烷基选自-CF3、-CHF2、-CH2CF3和-CF2Cl，甚至更特别地，卤代烷基是-CF3。
此外，术语“炔基”特别是指具有至少两个碳原子并且包含碳-碳三键的烷基。经取代的炔基如上定义。术语“烯基”特别是指具有至少两个碳原子并且包含碳-碳双键的烷基。
如本文所用，杂芳基基团特别表示芳族单环或双环烃环体系，其中一个或更多个碳原子被独立地选自O、N和S的杂原子代替，其中在单环杂芳基的情况下，所述单环杂芳基可任选地与环烷基或杂环烷基环稠合，并且其中杂芳基中的环原子总数为5至10，更特别地为5或6。所述杂芳基与中心部分的连接点可以位于单环或双环烃环体系上或任选稠合的环烷基或杂环烷基环上。杂芳基的实例是噻二唑、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、异噻唑-3-基、异噻唑-4-基、异噻唑-5-基、
Figure BDA0002400952140000091
唑-2-基、
Figure BDA0002400952140000092
唑-4-基、
Figure BDA0002400952140000093
唑-5-基、异
Figure BDA0002400952140000094
唑-3-基、异
Figure BDA0002400952140000095
唑-4-基、异
Figure BDA0002400952140000096
唑-5-基、1，2，4-
Figure BDA0002400952140000097
二唑-3-基、1，2，4-
Figure BDA0002400952140000098
二唑-5-基、1，2，5-
Figure BDA0002400952140000099
二唑-3-基、苯并
Figure BDA00024009521400000910
唑-2-基、苯并
Figure BDA00024009521400000911
唑-4-基、苯并
Figure BDA00024009521400000912
唑-5-基、苯并异
Figure BDA00024009521400000913
唑-3-基、苯并异
Figure BDA00024009521400000914
唑-4-基、苯并异
Figure BDA00024009521400000915
唑-5-基、1，2，5-
Figure BDA00024009521400000916
二唑-4-基、1，3，4-
Figure BDA00024009521400000917
二唑-2-基、1，2，4-噻二唑-3-基、1，2，4-噻二唑-5-基、1，3，4-噻二唑-2-基、异噻唑-3-基、异噻唑-4-基、异噻唑-5-基、苯并异噻唑-3-基、苯并异噻唑-4-基、苯并异噻唑-5-基、1，2，5-噻二唑-3-基、1-咪唑基、2-咪唑基、1，2，5-噻二唑-4-基、4-咪唑基、苯并咪唑-4-基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-吡喃基、3-吡喃基、4-吡喃基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、吡啶-5-基、吡啶-6-基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、2-吡嗪基、1-吡唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、1，2，3-三唑-4-基、1，2，3-三唑-5-基、1，2，4-三唑-3-基、1，2，4-三唑-5-基、1H-四唑-2-基、1H-四唑-3-基、四唑基、吖啶基、吩嗪基、咔唑基、吩
Figure BDA0002400952140000101
嗪基(phenoxazinyl)、吲哚嗪、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基、1-异吲哚基、3-异吲哚基、4-异吲哚基、5-异吲哚基、6-异吲哚基、7-异吲哚基、2-吲哚啉基、3-吲哚啉基、4-吲哚啉基、5-吲哚啉基、6-吲哚啉基、7-吲哚啉基、苯并[b]呋喃基、苯并呋喃烷(benzofurazane)、苯并噻吩并呋喃烷(benzothiofurazane)、苯并三唑-1-基、苯并三唑-4-基、苯并三唑-5-基、苯并三唑-6-基、苯并三唑-7-基、苯并三嗪、苯并[b]噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹唑啉基、喹
Figure BDA0002400952140000102
唑啉基、噌啉(cinnoline)、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、嘌呤、酞嗪、蝶啶、硫杂四氮茚基(thiatetraazaindene)、硫杂三氮茚基(thiatriazaindene)、异噻唑并吡嗪、6-嘧啶基、2，4-二甲氧基-6-嘧啶基、苯并咪唑-2-基、1H-苯并咪唑基、苯并咪唑-4-基、苯并咪唑-5-基、苯并咪唑-6-基、苯并咪唑-7-基、四唑、四氢噻吩并[3，4-d]咪唑-2-酮、吡唑并[5，1-c][1，2，4]三嗪、异噻唑并嘧啶、吡唑并三嗪、吡唑并嘧啶、咪唑并哒嗪、咪唑并嘧啶、咪唑并吡啶、咪唑并三嗪、三唑并三嗪、三唑并吡啶、三唑并吡嗪、三唑并嘧啶或三唑并哒嗪。除非另有说明，否则所有上述杂芳基基团均如本发明的实施方案中所详述地任选地被取代，即一个或更多个氢原子任选地被所述相应实施方案中指出的取代基取代。尤其特别地，除非另有说明，否则所述杂芳基是未经取代的。
如本文所用，环烷基特别是指非芳香族的单环或双环的完全饱和或部分不饱和的烃环体系，包括双环体系，其中一个环为苯环，例如1，2，3，4-四氢萘。所述环烷基特别是单环的。所述环烷基特别是完全饱和的。所述环烷基包含3至10个碳原子，更特别地5至7个碳原子。甚至更特别地，所述环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、1-降冰片基、2-降冰片基、7-降冰片基、1-金刚烷基、2-金刚烷基、1，2-二氢萘基、1，2，3，4-四氢萘基、2，3-二氢茚基、1，6-二氢戊烯基、1，6a-二氢戊烯基，甚至更特别地，所述环烷基选自环丙基、环戊基、环己基和金刚烷基。除非另有说明，否则所有上述环烷基均如本发明的实施方案中所述被任选地取代，即，一个或更多个氢原子任选地被所述相应实施方案中指出的取代基取代。尤其特别地，除非另有说明，否则所述环烷基是未经取代的。
如本文所用，杂环烷基特别是指非芳族单或双环完全饱和或部分不饱和的烃环体系，其中一个或更多个碳原子被独立地选自N、O和S的杂原子代替。所述杂环烷基特别地不包含任何芳环。所述杂环烷基特别是单环的。所述杂环烷基特别是完全饱和的。所述杂环烷基特别地包含总共4至10个环原子，更特别地总共5至10个环原子，甚至更特别地总共5至7个环原子，甚至更特别地总共5或6个环原子。甚至更特别地，所述杂环烷基选自吗啉基、哌啶基、二
Figure BDA0002400952140000111
烷基、哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃基、异
Figure BDA0002400952140000112
唑啉基、硫代吗啉基、四氢硫呋喃基和四氢吡喃基，更特别地选自吗啉基、哌啶基、二
Figure BDA0002400952140000113
烷基、哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基和吡咯烷基。除非另有说明，否则所有上述的杂环烷基如本发明的实施方案中详述的被任选地取代，即一个或更多个氢原子任选地被所述相应的实施方案中指出的取代基代替。尤其特别地，除非另有说明，否则所述杂环烷基是未经取代的。
如本文所用，卤素或卤素基团特别表示氟、氯、溴或碘，特别是氯或氟。
如本文所用，烷氧基表示O-烷基，其中烷基如上文所定义。烷氧基特别选自甲氧基、乙氧基和丙氧基，更特别是甲氧基。所述前述烷氧基任选地被一个或更多个卤素原子，特别是被一个或更多个氟原子取代。
如本文所用，烷硫基表示-S-烷基，其中烷基如上文所定义，特别是甲硫基。所述的前述烷硫基任选地被一个或更多个卤素原子，特别是被一个或更多个氟原子取代。
如本文所用，烷氧基烷基是指被O-烷基取代的烷基，其中烷基如上文所定义，特别地选自甲氧基乙基、乙氧基甲基、甲氧基甲基、丙氧基甲基和甲氧基丙基，更特别地甲氧基乙基。所述的前述烷氧基烷基任选地被一个或更多个卤素原子，特别是一个或更多个氟原子取代。
如本文所用，烷硫基烷基表示被S-烷基取代的烷基，其中所述烷基如上文所定义，特别地选自甲硫基乙基、乙硫基甲基、甲硫基甲基、丙硫基甲基和甲硫基丙基，更特别地甲硫基乙基。所述的前述烷硫基烷基任选地被一个或更多个卤素原子，特别是一个或更多个氟原子取代。
如本文所用，烷基氨基烷基表示连接至NH-烷基或N-二烷基的烷基，其中烷基如上文所定义，特别选自甲基氨基乙基、乙基氨基甲基、甲基氨基甲基、丙基氨基甲基和甲基氨基丙基，更特别地乙基氨基甲基。所述的前述烷基氨基烷基任选地被一个或更多个卤素原子，特别是被一个或更多个氟原子取代。
如本文所用，芳基特别是指芳族单环或双环烃环体系，其中芳基中的环原子总数为6至10，特别是6。芳基的实例是苯基和萘基，更特别是苯基。除非另有说明，否则所有上述芳基基团如本发明的实施方案中详述的被任选地取代，即一个或更多个氢原子任选地被如所述相应实施方案中指出的取代基取代。尤其特别地，除非另有说明，否则所述芳基是未经取代的。
芳基烷基，通常也称为芳烷基，特别是指被如本文定义的芳基取代的如本文定义的直链或支链烷基。示例性的芳基烷基包括苯乙烯基、苄基、苯乙基、1-(萘-2-基)乙基，特别地芳基烷基是苯乙烯基或苄基，更特别地是苄基。所述的前述芳基烷基任选被取代，特别是在其芳基部分上，如上文对芳基所定义的。
应当理解，对于“烷基”、“芳基”、“芳基烷基”、“杂环烷基”、“环烷基”、“杂芳基”、“烷氧基”、“烷硫基”、“烷氧基烷基”、“烷硫基烷基”、“烷基氨基烷基”等的定义在适用的范围内也指本发明的实施方案中指出的所述基团的特定成员。例如，“烷基”的定义在适用的范围内也指所述基团的成员，例如“C1-6-烷基”、“C1-4-烷基”、“C1-2-烷基”、甲基、乙基等。这意味着，例如，“烷基”涵盖“链烷基”、“烯基”和“炔基”的定义在细节上作必要修改后适用于“C1-2-烷基”，因此涵盖了甲基、乙基、乙烯基和乙炔基。
如本文所定义的氮杂原子(N)，例如在“杂芳基”、“杂环烷基”和“杂环”的情况下，可包括N-氧化物，特别是从稳定性和/或化学价规则的观点看在化学上可行的情况下。
如本文所定义的硫杂原子(S)，例如在“杂芳基”、“杂环烷基”和“杂环”的情况下，可包括氧化硫和/或二氧化硫，特别是从稳定性和/或化学价规则的观点看在化学上可行的情况下。
本文中使用的术语“经......取代”或“被......取代”是指与化学基团或实体的碳原子或杂原子连接的一个或更多个氢原子分别与取代基交换；例如经取代的芳基包括4-羟基苯基，其中苯基的4-位上的H原子与羟基交换。所述待替换的氢原子可以连接至碳原子或杂原子，并且在特定的式中，例如在-NH-基团中可以明确地显示，或者可以不明确地显示但固有地存在，例如在通常用于表示例如烃的典型的“链”符号中。技术人员将容易理解，特别排除了导致化合物不稳定和/或不能通过本领域已知的合成方法获得的取代基或取代基模式。特定的取代基可选自C1-4-烷基、-OH、卤素、-CO-N(Ri)2、-N(Ri)2、-CO-Ri、-COO-Ri、-N3、-NO2和-CN，其中Ri各自独立地选自H和C1-4-烷基。
除非另有说明，否则提及本发明的化合物包括本文所述的其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，以及所述生理功能性衍生物的盐，盐和生理功能性衍生物的溶剂合物，以及任选地生理功能性衍生物的盐的溶剂合物。
如本文所用，根据本发明的化合物的术语“生理功能性衍生物”是例如所述化合物的前药，其中以下基团中的至少一个被如下衍生化：羧酸(-COOH))基团被衍生为酯(具有例如式-COOR8，其中R8选自-H、烷基(例如C1-6-烷基)、烷氧基(例如C1-6-烷氧基)、烷氧基烷基(例如C1-3-烷氧基-C1-3-烷基)、烷硫基(例如C1-6-烷硫基)、烷硫基烷基(例如C1-3-烷硫基-C1-3-烷基)、烷基氨基烷基(例如C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基)、芳基(例如C6-10-芳基)、杂环烷基(例如4至10元杂环烷基)、环烷基(例如C3-10-环烷基)和杂芳基(例如5至10元杂芳基)，其中所述烷基、烷氧基、烷氧基烷基、烷硫基、烷硫基烷基、烷基氨基烷基、芳基、杂环烷基、环烷基和杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4-烷基、-OH、卤素、-CO-N(R9)2、-N(R9)2、-CO-R9、-COO-R9、-N3、-NO2和-CN，其中R9各自独立地选自H和C1-4-烷基)；羟基(-OH)被衍生为酯(具有如上定义的式-COOR8)；羧酸被衍生为酰胺(具有式-CONH-R8，其中R8如上所定义)；胺(-NH2)被衍生为酰胺(具有式-CONH-R8，其中R8如上所定义)；并且羟基被衍生为磷酸酯(具有例如式-OP(O)(OR10)2，其中R10各自独立地选自H和C1-4-烷基)。
本发明的化合物应理解为包括其所有互变异构形式，即使没有在本文所述的式(包括式(I))的中明确显示。
除非另有说明，否则如本文所定义的式(I)化合物应理解为在适用时涵盖所述化合物的所有立体异构体。本文中使用的术语“立体异构体”是指具有至少一个立体异构中心的化合物，其可以是如根据IUPAC规则所定义的R-或S-构型，并且涵盖本领域技术人员通常理解的对映异构体和非对映异构体。应当理解，在具有多于一个立体异构中心的化合物中，每个单独的立体异构中心可以彼此独立地是R-或S-构型。本文中使用的术语“立体异构体”还指本文所述的化合物与旋光酸或碱的盐。本发明还包括与比例无关的上述立体异构体的所有混合物，包括外消旋体。
在本发明中，根据本发明的化合物的盐特别是根据本发明的化合物的可药用盐。可药用盐是本领域技术人员通常认为适合于医学应用的盐，例如因为其对可以用所述盐治疗的对象无害，或在相应治疗中引起可耐受的副作用。通常，所述可药用盐是监管当局认为可接受的盐，例如美国食品和药物管理局(US Food and Drug Administration，FDA)、欧洲药品管理局(European Medicines Agency，EMA)或日本医药品和医疗器械局(JapaneseMinistry of Health，Labor and Welfare Pharmaceuticals and Medical DevicesAgency，PMDA)。但是，本发明原则上也包括根据本发明的化合物的本身不是可药用的盐，例如作为生产根据本发明的化合物或其生理功能性衍生物的中间体，或者作为生产根据本发明的化合物或其生理功能性衍生物的可药用盐的中间体。所述盐包括水不溶性盐和特别地水溶性盐。
在每种情况下，技术人员可以容易地确定根据本发明的某些化合物或其生理功能性衍生物是否可以形成盐，即，根据本发明的所述化合物或其生理功能性衍生物是否具有可以携带电荷的基团，例如氨基、羧酸基等。
本发明化合物的示例性盐是酸加成盐或与碱的盐，特别是通常用于制药的无机和有机酸和碱的可药用盐，其是不溶于水或特别地水溶性酸加成盐。取决于本发明化合物的取代基，与碱的盐也可能是合适的。酸加成盐可以例如通过将本发明化合物的溶液与可药用酸例如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸的溶液混合而形成。同样，可药用碱加成盐可包括碱金属盐(例如钠或钾盐)；碱土金属盐(例如钙盐或镁盐)；以及与合适的有机配体(例如使用抗衡阴离子如卤化物、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的铵、季铵和胺阳离子)形成的盐。可药用盐的说明性实例包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、依地酸钙、樟脑酸盐(camphorate)、樟脑磺酸盐(camphorsulfonate)、樟脑磺酸盐(camsylate)、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二葡萄糖酸盐、二盐酸盐、十二烷基硫酸盐、依地酸盐(edetate)、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、半乳酸盐、半乳糖醛酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、羟萘甲酸盐(hydroxynaphthoate)、碘化物、异丁酸盐、异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲基磺酸盐(甲磺酸盐)、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、泛酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、邻苯二甲酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、辛二酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等(参见，例如，S.M.Berge et al.，″Pharmaceutical Salts″，J.Pharm.Sci.，66，pp.1-19(1977))。
非可药用的并且可以例如以工业规模在根据本发明的化合物的制备过程中作为加工产物获得的盐也包括在本发明中，并且如果需要，其可以通过本领域技术人员已知的方法将其转化为可药用盐。
根据专家的知识，本发明的化合物以及其盐在以结晶形式分离时可包含例如不同量的溶剂。因此，本发明范围内包括了本发明化合物的溶剂合物，特别是水合物，以及本发明化合物的盐和/或生理功能性衍生物的溶剂合物，特别是水合物。更特别地，本发明涵盖了根据本发明的化合物、盐和/或生理功能性衍生物的水合物，相对于其化学计量，其可包含一个、两个或一个半水分子
除非另外说明，否则本文中使用的术语“室温”、“rt”或“r.t.”是指20至25℃，特别是约22℃的温度。
本文中使用的术语“稳定的”是指当这样的化合物：当将化合物在约-80℃至约+40℃，特别是约-80℃至+25℃的温度下在没有光、水分或其他化学反应条件的情况下储存至少一周，特别是至少一个月，更特别至少六个月，甚至更特别至少一年时化学结构不改变的化合物；和/或在IUPAC标准条件下在没有光、水分或其他化学反应条件的情况下维持其结构完整性足够长的时间以可用于对患者进行治疗性或预防性施用(即至少一周)的化合物。不是如上所述稳定的化合物特别地不包括在本发明中。特别地，在IUPAC标准条件下在小于一天的时间内自发分解的此类化合物被认为不是稳定的化合物。基于本领域的专业技术常识，本领域技术人员将容易认识到哪些化合物以及哪种取代方式将得到稳定的化合物。
如果化合物、特别是式(I)的化合物能够与预定靶标(特别是TLR7)结合并且对其发挥活性(特别是激动剂活性)，而不能与其他靶标结合以及对其发挥激动剂活性(特别是激动剂和拮抗剂活性)，即在标准测定中不能对其他靶标发挥显著的激动剂活性，则化合物、特别是式(I)的化合物对于所述预定靶标具有选择性。根据本发明，如果式(I)的化合物能够对TLR7发挥激动剂活性，但是不(基本上不)能对其他靶标(特别是TLR8)发挥激动剂活性，则式(I)的化合物对TLR7具有选择性。优选地，如果对于这样的其他靶标(特别是TLR8)的激动剂活性不会显著超过对于TLR无关蛋白(例如LDL受体、胰岛受体好转铁蛋白受体或任何其他指定的多肽)的激动剂活性，则化合物、特别是式(I)的化合物对TLR7具有选择性。优选地，如果化合物、特别是式(I)的化合物对于预定靶标(特别是TLR7)的激动剂活性(EC50)比其对于其没有选择性的靶标(特别是TLR8)的激动剂活性低至少2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍或103倍，则其对于预定靶标(特别是TLR7)具有选择性。例如，对于化合物具有选择性的靶标，如果化合物的EC50、特别是式(I)的化合物的EC50为1μM，则对于所述化合物没有选择性的靶标的EC50将为至少2μM、3μM、4μM、5μM、10μM、15μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM、45μM、50μM、60μM、70μM、80μM、90μM、100μM或1mM。
应该理解，本发明涵盖了上文提及的取代基的所有组合。特别地，本发明涵盖上述特定基团的所有组合。
包含双键的本发明化合物及其盐可以作为E异构体和Z异构体存在。所述两种异构体均包含在本发明中。Z异构体是其中通过双键连接的碳原子各自在双键的同一侧具有两个最高等级基团的几何异构体。E异构体是其中通过双键连接的碳原子各自在双键的相对侧具有两个最高等级基团的几何异构体。
根据本发明的一些化合物和盐可以以不同的结晶形式(多晶型物)存在，所有这些都在本发明的范围内。
在下文中，除非另有明确说明，否则术语“化合物”应理解为涵盖本文定义的生理功能性衍生物、溶剂合物和盐。
本文中使用的术语“治疗”包括完全或部分治愈疾病，预防疾病，减轻疾病或停止给定疾病的进展。
术语“医学病症”、“疾病”和“障碍”在本文中可互换使用，并且是指任何病理状态，包括增生性疾病，例如癌症，特别是本文所述的那些病理状态(包括癌症形式)。优选地，疾病的特征在于可以通过激动TLR7来治疗。
如本文所用，“增生性疾病”包括以异常调节的细胞生长、增殖、分化、黏附和/或迁移为特征的疾病。增生性疾病的一个具体实例是癌症。“癌细胞”是指通过快速的不受控制的细胞增殖而生长，并且在引发新生长的刺激停止后继续生长的异常细胞。
本文中使用的术语“药物”包括以纯的形式向对象施用的本文所述的式(I)化合物、其可药用盐或生理功能性衍生物，以及适合向对象施用的包含至少一种本发明的化合物、其可药用盐或生理功能性衍生物的组合物。
根据本发明的化合物及其可药用盐和生理功能性衍生物可以如下施用于动物，特别是哺乳动物，并且特别是人：本身作为治疗剂，以彼此的混合物或特别地以药物制剂或组合物的形式，其允许经肠(例如经口)或胃肠外施用，并且包含作为活性成分的治疗有效量的至少一种根据本发明的化合物或其盐或生理功能性衍生物，以及例如一种或更多种选自以下的组分：常规辅料、可药用赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂、溶剂、分散剂、乳化剂、增溶剂、胶凝剂、软膏基质、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、填充剂、黏合剂、增稠剂、络合剂、崩解剂、渗透促进剂、聚合物、润滑剂、包衣剂、抛射剂、张力调节剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂、甜味剂、染料和/或其他常规药用助剂。
根据本发明的药物组合物、医学用途和治疗方法可包含多于一种根据本发明的化合物。
包含根据本发明的化合物或可药用盐或生理功能性衍生物的药物组合物可以任选地包含一种或更多种不是根据本发明的式(I)化合物的治疗活性物质。本文中使用的术语“治疗活性物质”是指在施用后可在对象中诱导医学效果的物质。所述医学效果可以包括本文对于本发明式(I)化合物描述的医学效果，但是在与本发明化合物共施用的治疗活性物质的情况下，也可以包括其他医学物质，例如但不限于伊立替康(irinotecan)、奥沙利铂(oxaliplatin)、吉西他滨(gemcitabine)、卡培他滨(capecitabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、西妥昔单抗(cetuximab(Erbitux))、帕尼单抗(panitumumab(Vectibix))、贝伐单抗(bevacizumab(Avastin))、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)、紫杉醇(taxol)、安吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊苷(teniposide)、放线菌素(actinomycin)、蒽环类(anthracyclines)、阿霉素(doxorubicin)、戊柔比星(valrubicin)、伊达柔比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、博来霉素(bleomycin)、普拉霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)、二氯甲基二乙铵(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、异环磷酰胺(ifosfamide)、硼替佐米(bortezomib)、伊马替尼(imatinib)、阿法替尼(afatinib)、阿昔替尼(axitinib)、博舒替尼(bosutinib)、考比替尼(cobimetinib)、达沙替尼(dasatinib)、厄洛替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、索拉非尼(sorfenib)、舒尼替尼(sunitinib)、维罗非尼(vemurafenib)和其他激酶抑制剂，伏立诺他(vorinostat)、帕比司他(panobinostat)、贝利司他(belinostat)和其他组蛋白脱乙酰基酶抑制剂。
术语“可药用”是技术人员周知的，并且特别是指相应实体对于施用实体或包含实体的组合物的对象无害，所述实体是稳定的并且所述实体与相应药物组合物的其他成分是化学相容的(即非反应性)。
包含至少一种根据本发明的化合物或其可药用盐或生理功能性衍生物的根据本发明的药物和药物组合物包括适合于经口、直肠、支气管、鼻、局部、颊、舌下、阴道或肠胃外(包括经皮、皮内、皮下、肌内、肺内、血管内、颅内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑内、眼内、胸骨内、冠内状动脉、经尿道、注射或输注)施用的那些，或者适合于通过吸入或吹入(包括粉末或液体气溶胶施用)，或通过控释(例如持续释放、pH控制的释放、延迟释放、重复作用释放、延长释放、延伸释放)系统施用的形式的那些。控释系统的合适实例包括含有本发明化合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质可以是成形制品的形式，例如膜或微胶囊或胶体药物载体，例如聚合物纳米颗粒或控释固体剂型，例如核心片剂或多层片剂。本发明中的特定施用途径是静脉内施用。
根据本发明的化合物可以特别地配制用于肠胃外施用(例如通过注射，例如推注注射或连续输注)，并且可以以单位剂型存在于具有添加的防腐剂的安瓿、预填充注射器、小体积输注或多剂量容器中。组合物可以采取诸如在油性或水性载剂中的混悬剂、溶液剂或乳剂的形式，并且可以包含诸如助悬剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。或者，活性成分可以是通过无菌固体的无菌分离或通过从溶液中冻干获得的粉末形式，用于在使用前用合适的载剂(例如无菌无热原的水)重构。
也可以使用任何其他常规剂型，例如片剂、锭剂、肠胃外制剂、糖浆剂、乳膏剂、软膏剂、气溶胶制剂、透皮贴剂、透黏膜贴剂等。根据本发明的药物组合物可以被配制成例如片剂、包衣片剂(锭剂)、丸剂、扁囊剂、胶囊剂(囊片)、颗粒剂、散剂、栓剂、溶液剂(例如无菌溶液剂)、乳剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、油剂、凝胶剂、喷雾剂和贴剂(例如透皮治疗系统)。另外，药物组合物可以例如制备成例如脂质体递送系统，其中活性化合物与单克隆抗体偶联的系统以及其中活性化合物与聚合物(例如可溶性或可生物降解的聚合物)偶联的系统。
片剂、包衣片剂(锭剂)、丸剂、扁囊剂、胶囊剂(囊片)、颗粒剂、溶液剂、乳剂和混悬剂是例如适合经口施用。特别地，所述制剂可以调整从而表现为例如肠溶形式、立即释放形式、延迟释放形式、重复剂量释放形式、延长释放形式或持续释放形式。所述形式可以例如通过将片剂包衣、将片剂分成由在不同条件(例如pH条件)下崩解的层分开的数个隔室或通过将活性化合物偶联至可生物降解的聚合物而获得。
特别地通过使用气溶胶进行吸入施用。气溶胶是液气分散体、固气分散体或液/固气混合分散体。
气溶胶颗粒(固体、液体或固/液颗粒)的粒径特别小于100μm，更特别地为0.5至10μm，甚至更特别地为2至6μm(ID50值，通过激光衍射测量)。
可以通过气溶胶产生装置例如干粉吸入器(dry powder inhaler，DPI)、加压定量吸入器(pressured metered dose inhaler，PMDI)和喷雾器产生气溶胶。取决于要施用的活性化合物的种类，气溶胶产生装置可以包含粉末、溶液或分散体形式的活性化合物。粉末可包含例如以下助剂中的一种或更多种：载体、稳定剂和填料。溶液除溶剂外还可包含例如以下助剂中的一种或更多种：抛射剂、增溶剂(助溶剂)、表面活性剂、稳定剂、缓冲剂、张力调节剂、防腐剂和矫味剂。除了分散剂之外，分散体还可包含例如以下助剂中的一种或更多种：抛射剂、表面活性剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂和矫味剂。载体的实例包括但不限于糖，例如乳糖和葡萄糖。抛射剂的实例包括但不限于氟代烃，例如1，1，1，2-四氟乙烷和1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷。
可用于吸入施用的特定气溶胶产生装置包括但不限于
Figure BDA0002400952140000191
Figure BDA0002400952140000201
Figure BDA0002400952140000202
和
Figure BDA0002400952140000203
吸入器。气溶胶产生装置可以与隔离器或膨胀器例如
Figure BDA0002400952140000204
和
Figure BDA0002400952140000205
组合，以提改善吸入效率。
包含根据本发明的化合物的药物或药物组合物的生产及其应用可以根据医学从业者熟知的方法进行。
用于制备包含根据本发明的化合物、其可药用盐或生理功能性衍生物的药物组合物或药物的可药用载体可以是固体或液体。包含根据本发明的化合物、其可药用盐或生理功能性衍生物的固体形式药物组合物包括散剂、片剂，丸剂、胶囊剂、小袋、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以包含一种或更多种组分，所述组分还可以充当稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、黏合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。
在散剂中，载体是细小的固体，其与细小活性成分混合。在片剂中，将活性成分与具有必要结合能力的载体以合适的比例混合，并压制成期望的形状和大小。可以将制锭混合物制粒、过筛、压制或直接压制。合适的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括具有作为载体的包封材料的活性化合物的制剂，所述载体提供胶囊，其中具有或不具有载体的活性组分被载体包围，因此与之缔合。类似地，包括小袋和锭剂。片剂、散剂、胶囊剂、丸剂、小袋和锭剂可以用作适合经口施用的固体形式。
为了制备栓剂，首先将低熔点的蜡(例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)熔化，并通过搅拌将活性组分均匀地分散在其中。然后将熔化的均匀混合物倒入尺寸合适的模具中，使其冷却，然后固化。适用于阴道施用的组合物可以以阴道栓剂(peccary)、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式存在，除活性成分外，其还包含本领域已知的合适载体。液体制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，例如水或水-丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制剂可以配制成在聚乙二醇水溶液中的溶液。
适合经口施用的水溶液可以通过将活性成分溶解在水中并根据需要添加例如合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。可以通过将细小的活性成分与黏性物质(例如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他周知的助悬剂)分散在水中来制备适合经口使用的水性混悬剂。
还包括了旨在于临施用前转化为用于经口施用的液体形式制剂的固体形式制剂。这样的液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。这些制剂除活性成分外还可包含例如着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
在本发明的一个实施方案中，药物以例如经皮治疗系统(例如贴剂)或局部制剂(例如脂质体、乳膏剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、分散体、混悬剂、喷雾剂、溶液剂、泡沫、粉末)的形式局部施用。这可能适合于降低可能的副作用，并在适当的情况下将必要的治疗限于那些受影响的区域。
特别地，药物可以包含载体材料或赋形剂，包括但不限于亲脂相(例如凡士林、石蜡、甘油三酸酯、蜡、聚烷基硅氧烷)、油(橄榄油、花生油、蓖麻油、甘油三酸酯油)、乳化剂(例如卵磷脂、磷脂酰甘油、烷基醇、十二烷基硫酸钠、聚山梨酯、胆固醇、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸甘油和酯、泊洛沙姆)、防腐剂(例如苯扎氯铵、氯丁醇、对羟基苯甲酸酯或硫柳汞)、矫味剂、缓冲物质(例如乙酸、柠檬酸、硼酸、磷酸、酒石酸、氨丁三醇(trometamole)或三醇胺的盐)、溶剂(例如聚乙二醇、甘油、乙醇、异丙醇或丙二醇)或增溶剂、用于实现储库效果的试剂、用于改变渗透压的盐、用于贴剂的载体材料(例如聚丙烯、乙烯-乙酸乙烯酯-共聚物、聚丙烯酸酯、硅)或抗氧化剂(例如抗坏血酸酯、生育酚、丁基羟基茴香醚、没食子酸酯或丁基羟基甲苯)。
例如，软膏剂和乳膏剂可以用水性或油性基质配制，并添加合适的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常还将包含一种或更多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。
适用于口腔局部施用的组合物包括：锭剂，其包含在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性剂；糖果锭剂，其包含在惰性基质(例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性剂；以及漱口剂，其包含在合适的液体载体中的活性成分。
溶液剂或混悬剂可以通过常规装置(例如滴管、移液管或喷雾器)直接施用于鼻腔。所述组合物可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或移液管的后一种情况下，这可以通过患者施用适当的预定体积的剂或混悬剂来实现。在喷雾的情况下，这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。
还可以通过气溶胶制剂实现向呼吸道的施用，其中将活性成分与合适的抛射剂(例如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳、或其他合适的气体提供在加压包装中。气溶胶还可方便地包含表面活性剂，例如卵磷脂。可以通过提供计量阀来控制药物的剂量。
或者，可以以干燥粉末的形式提供药物，例如在合适的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物例如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的化合物的粉末混合物。粉末载体将方便地在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂型存在，例如在例如明胶的胶囊或药筒中或泡罩包装中，可以通过吸入器从中施用粉末。
在用于呼吸道的组合物，包括鼻内组合物中，化合物通常具有较小的粒度，例如约5微米或更小。这样的粒度可以通过本领域已知的方法获得，例如通过微粉化。
需要时，可以使用适于使活性成分持续释放的组合物。
药物制剂特别是单位剂型。以这种形式，将制剂细分为包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散量的制剂，例如包装的片剂、胶囊剂以及小瓶或安瓿中的粉末。另外，单位剂型本身可以是胶囊剂、片剂、小袋或锭剂，或者可以是适当数量的任意这些包装形式。用于经口施用的片剂或胶囊剂以及用于静脉内施用和连续输注的液体是特定的组合物。
有关配制和施用技术的更多详细信息可在第21版Remington′s PharmaceuticalSciences(Maack Publishing Co.Easton，Pa.)中找到。
本发明的化合物可以与放射疗法组合使用，或者与放射疗法和已经已知用于治疗本文公开的医学病症的其他活性化合物组合使用，从而注意到有利的累加或放大作用。
为了制备药物制剂，可以使用药学上惰性的无机或有机赋形剂。为了制备丸剂、片剂、包衣片剂和硬明胶胶囊，可以使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等。软明胶胶囊和栓剂的赋形剂是例如脂肪、蜡、半固体和液体多元醇、天然或硬化油等。用于生产溶液和糖浆的合适赋形剂是例如水、蔗糖、转化糖、葡萄糖、多元醇等。用于生产注射溶液的合适的赋形剂是例如水、醇、甘油、多元醇或植物油。
术语“治疗有效量”是指足以诱导治疗作用(例如激活TLR7)的化合物的量。这可能导致细胞因子诱导、抗肿瘤活性和/或抗病毒活性。尽管用于本发明的药物组合物中的活性化合物的确切量将根据本领域技术人员已知的因素(例如化合物的物理和化学性质以及载体的性质和预期的剂量方案)而变化，但预期本发明的组合物将包含足够的活性成分以向对象提供合适的剂量。所述剂量可以在宽的范围内变化并且适合于每个个体病例的个体情况。对于本发明的医学应用，合适的剂量将根据施用方式、待治疗的特定病症和期望的效果而变化。但是，一般而言，在本发明化合物的约1ng/kg至100mg/kg对象体重，特别是100ng/kg至10mg/kg，更特别是1μg/kg至1mg/kg的剂量率下，将实现令人满意的结果。剂量可以方便地每两周一次、每周一次或多次、或每天最多2至4次以分剂量或持续释放形式施用。
出人意料的是，本申请的化合物是TLR7的选择性激动剂(特别是相对于TLR8)。特别地，本申请的发明人已经发现，式(I)的氨基NR2R3的双取代与TLR7选择性相关，而式(I)的氨基NR2R3的单取代(即，其中R2为H)导致对TLR8具有选择性的化合物。因此，在一个实施方案中，本申请的化合物适用于治疗可通过激动TLR7来治疗的医学病症、疾病或障碍。
本发明的化合物优选适用于治疗病毒性疾病和增生性疾病，特别是过度增生性疾病，例如瘤形成的良性和恶性形式，包括癌症。
在本发明的上下文中，癌症的示例性类型是肝癌、肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症(包括AIDS相关淋巴瘤)、肛门癌、基底细胞癌、胆管癌、骨癌、脑肿瘤(包括脑干神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、恶性神经胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、伯基特淋巴瘤、胃肠道癌、未知原发部位的癌、中枢神经系统淋巴瘤、宫颈癌、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、结直肠癌、胃癌、皮肤T细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、卵巢生殖细胞瘤、眼癌(包括眼内黑色素瘤和视网膜母细胞瘤)、胆囊癌、胃肠道类癌瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、神经胶质瘤、儿童脑干神经胶质瘤、头颈癌、血液癌、成人和儿童(原发性)肝细胞癌、下咽癌、胰岛细胞或胰腺癌、肾癌、喉癌、急性淋巴细胞白血病、成人和儿童急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、毛细胞白血病、唇和口腔癌、肝癌、肺癌(包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、瓦氏巨球蛋白血症、默克尔细胞癌、间皮瘤、具有隐匿性原发部位的转移性鳞状颈癌、多发性内分泌瘤形成综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞瘤、蕈样肉芽肿病(mycosis fungoides)、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增生性疾病、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨的恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢恶性程度低的潜在肿瘤、胰腺癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤(pineoblastoma)和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤(pleuropulmonaryblastoma)、前列腺癌、直肠癌、肾盂和输尿管癌、移行细胞癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤因氏肉瘤、卡波西肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤、塞扎里综合征(sezary syndrome)、皮肤癌(包括黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌)、小肠癌、鳞状细胞癌、胃癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、胸腺瘤(thymoma和thymic carcinoma)、甲状腺癌、滋养细胞肿瘤、妊娠、子宫内膜癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌和肾母细胞瘤(Wilms′tumor)。
在本发明的一个更具体的实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗以下癌症类型：前列腺、膀胱、肾脏(即肾)、肌肉、卵巢、皮肤、胃、胰腺、乳腺、宫颈、结肠、肝、结缔组织、胎盘、骨骼、脑、子宫、唾液腺或睾丸。
示例性癌症包括但不限于乳腺癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、中枢神经系统和外周神经系统癌、结肠癌、内分泌腺癌、食管癌、子宫内膜癌、生殖细胞癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、喉癌和下咽癌、间皮瘤、肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、小肠癌、软组织癌、睾丸癌、胃癌、皮肤癌、输尿管癌、阴道和外阴癌；遗传性癌症、视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤；白血病、淋巴瘤、非霍奇金病、慢性和急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、霍奇金病、多发性骨髓瘤和T细胞淋巴瘤；骨髓增生异常综合症、浆细胞瘤、副肿瘤综合症、未知原发部位的癌症和AIDS相关恶性肿瘤。
特别地，TLR7激动剂将用于治疗皮肤癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌或肾癌。给定癌症对TLR7激活的敏感性可通过但不限于测量以下来评估：原发性或转移性肿瘤负荷降低(轻微、部分或完全消退)、血相(hemogram)改变、血液中激素或细胞因子浓度改变、肿瘤负荷进一步增加的抑制、患者中疾病的稳定、评估与疾病相关的生物标志物或替代标志物、患者的总体生存率延长、到达患者疾病进展的时间延长、患者的无进展生存期延长、患者的无病生存期延长、患者生活质量改善或疾病共病的调节(例如但不限于疼痛、恶病质、动员、住院、血相变化、体重减轻、伤口愈合、发烧)。
本发明的化合物可以在治疗方案中作为单一治疗剂施用，或者可以彼此和/或与其他活性剂(包括其他抗癌剂、免疫应答调节剂、抗病毒剂、抗生素、退热药等)组合施用。
根据本发明的药物组合物可以包含一种或更多种根据本发明的化合物，特别是一种或两种根据本发明的化合物，更特别地一种根据本发明的化合物。同样，本发明的医学应用可涉及一种或更多种根据本发明的化合物，特别是一种或两种根据本发明的化合物，更特别地一种根据本发明的化合物。
包含活性化合物和至少一种助剂的药物组合物可以以本领域技术人员已知的方式来制备，例如通过溶解、混合、制粒、制糖衣丸、磨碎、乳化、包封、包埋或冻干过程。
在局部施用的情况下，合适的药物制剂是例如软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、粉末、溶液剂、乳剂、混悬剂、油剂、喷雾剂和贴剂(例如透皮治疗系统)。
对于肠胃外施用方式，例如静脉内、动脉内、肌内、皮下、皮内、腹膜内和胸骨内施用，特别地使用溶液(例如无菌溶液、等渗溶液)。其尤其通过注射或输注技术施用。
在鼻内施用的情况下，例如，喷雾剂和以滴剂形式施用的溶液剂是特定制剂。
对于眼内施用，以滴剂形式施用的溶液剂、凝胶剂和软膏剂是示例性制剂。
通常，可以施用根据本发明的药物组合物以使活性化合物的剂量在TLR7活化剂常规的范围内。特别地，每周的活性化合物的剂量为0.001至200mg，特别地0.01mg至20mg，更特别地0.1mg至4mg，甚至更特别地0.2mg至2mg，特别是基于体重为70公斤的普通成年患者。在这方面，应注意剂量取决于例如所用的具体化合物，所治疗的物种，治疗对象的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食，施用方式和时间，排泄率，待治疗疾病的严重程度和药物组合。
可以通过施用根据本发明的化合物诱导的细胞因子通常包括干扰素(IFN)和/或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及某些白介素(IL)。可通过本发明的化合物诱导其生物合成的细胞因子包括IFN-α、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12，以及多种其他细胞因子。除其他作用外，细胞因子抑制病毒产生和肿瘤细胞生长，使该化合物可用于治疗肿瘤和病毒性疾病。
除了诱导细胞因子产生的能力之外，本发明的化合物还影响先天免疫应答的其他方面。例如，可以刺激自然杀伤细胞活性，其作用可能是由于细胞因子诱导。化合物还可以激活巨噬细胞，继而刺激一氧化氮的分泌和其他细胞因子的产生。此外，所述化合物可引起T和/或B淋巴细胞的增殖和分化。
化合物的免疫应答调节作用使其可用于治疗多种疾病。由于具有诱导细胞因子如IFN-α和/或TNF-α以及IL-12产生的能力，这些化合物在治疗病毒性疾病和肿瘤中特别有用。这种免疫调节活性表明本发明的化合物可用于治疗疾病，例如但不限于病毒性疾病，包括生殖器疣；普通疣；跖疣；乙型肝炎；丙型肝炎；单纯疱疹I型和II型；传染性软疣(molluscum contagiosum)；HIV；CMV；VZV；上皮内瘤形成，例如宫颈上皮内瘤形成；人乳头瘤病毒(HPV)和相关瘤形成；真菌疾病，例如念珠菌、曲霉和隐球菌性脑膜炎；肿瘤性疾病，例如基底细胞癌、毛细胞白血病、卡波西肉瘤、肾细胞癌、鳞状细胞癌、骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤和其他癌症；寄生虫病，例如卡氏肺孢子虫(pneumocystis carnii)、隐孢子虫病、组织胞浆菌病、弓形虫病、锥虫感染和利什曼病；以及细菌感染，例如肺结核和鸟分枝杆菌。
本发明还提供了在动物中治疗病毒感染的方法，其包括向该动物施用有效量的式(I)的化合物。有效治疗或预防病毒感染的量是导致与未治疗的对照动物相比病毒感染的一种或更多种临床表现(例如病毒病灶、病毒载量，病毒产生率和死亡率)降低的量。精确的量将根据本领域已知的因素而变化，但是预期是如上文关于TLR7的激活所指示的剂量，或约100ng/kg至约50mg/kg，特别是约10μg/kg至约5mg/kg的剂量。有效治疗赘生性疾病的量是将导致肿瘤大小或肿瘤灶数目减少的量。同样，精确的量将根据本领域已知的因素而变化，但是预期是如上文关于TLR7的活化所指示的剂量，或约100mg/kg至约50mg/kg，特别是约10mg/kg至约5mg/kg的剂量。
根据本发明的化合物可以例如如下所述并且根据以下指定的反应步骤备，或者特别地以在以下实施例中举例描述的方式来制备。
以本身已知的方法分离和纯化根据本发明的化合物，例如通过在真空中蒸馏出溶剂并使获得的残余物从合适的溶剂中重结晶或者使其经受常规纯化方法之一，例如在合适载体材料上的柱色谱法。
可以通过将游离化合物溶解在包含期望的酸或碱或者随后向其中添加期望的酸或碱的合适溶剂(例如，酮，如丙酮、甲基乙基酮或甲基异丁基酮，醚，如二乙醚、四氢呋喃或二氧六环，氯代烃，如二氯甲烷或氯仿，或低分子量脂族醇，如甲醇、乙醇或异丙醇)中来获得根据本发明的式(I)的化合物的盐。所述酸或碱可用于以等摩尔定量比或与其不同的比来用于盐的制备，这取决于是涉及一元还是多元酸或碱以及取决于期望哪一种盐。通过过滤、再沉淀、用盐的非溶剂沉淀或通过蒸发溶剂来获得盐。可以将获得的盐转化为游离化合物，然后将其转化为盐。以这种方式，可以通过本领域技术人员已知的方法将例如作为工业规模生产中的加工产品获得的不可药用的盐转化为可药用盐。
根据本发明的式(I)化合物可以例如借助于甲醇中的过氧化氢或借助二氯甲烷中的间氯过氧苯甲酸转化为其N-氧化物。本领域技术人员熟悉进行N-氧化的反应条件。
可以例如通过不对称合成，通过在合成中使用手性起始化合物以及通过拆分合成中获得的对映体和非对映体混合物来获得以这样的立体异构体形式存在的本发明化合物和盐的纯非对映异构体和纯对映体。
可以通过本领域技术人员已知的方法将对映体和非对映体混合物分离为纯对映体和纯非对映体。特别地，通过结晶，特别是分级结晶或色谱法分离非对映体混合物。可以例如通过用手性助剂形成非对映体，拆分获得的非对映体并除去手性助剂来分离对映体混合物。作为手性助剂，例如，可以使用手性酸来分离对映体碱，并且可以使用手性碱来通过形成非对映体盐来分离对映体酸。此外，分别使用手性酸或手性醇作为手性助剂，可以由醇的对映体混合物或酸的对映体混合物分别形成非对映体衍生物，例如非对映体酯。另外，非对映体复合物或非对映体包合物可用于分离对映体混合物。或者，可使用色谱中的手性分离柱分离对映体混合物。用于分离对映异构体的另一种合适方法是酶分离。
如本领域技术人员将理解的，本发明不限于本文描述的特定实施方案，而是涵盖了在所附权利要求所限定的本发明的精神和范围内的所述实施方案的所有修改。
下列实施例更详细地说明了本发明，但不限制本发明。可以以类似的方式制备未明确描述其制备的本发明的其他化合物。
实施例中提及的化合物代表本发明的特定实施方案。
在适当时，本文中使用的术语“包括”应理解为包括但不限于此。
实施例：
本发明化合物的制备
通用
缩写：CH2Cl2表示二氯甲烷，DMF表示N，N-二甲基甲酰胺，DMA表示N，N-二甲基乙酰胺，DMSO表示二甲基亚砜，THF表示四氢呋喃，CH3CN表示乙腈，EtOAc表示乙酸乙酯，MeOH表示甲醇，EtOH表示乙醇，AcOH表示乙酸，HCO2H表示甲酸，HCl表示盐酸，NaOH表示氢氧化钠，LiOH表示氢氧化锂，NaHCO3表示碳酸氢钠，DIPEA表示N，N-二异丙基乙胺或N-乙基-N-异丙基丙-2-胺，RT表示室温，STAB表示三乙酰氧基硼氢化钠，PPA表示丙酸，TBDMS表示叔丁基二甲基甲硅烷基，Boc表示叔丁氧羰基，Cbz表示苄氧羰基，Me表示甲基，Et表示乙基，HPLC表示高压液相色谱法，MS表示质谱法，TLC表示薄层色谱法。
微波化学是使用
Figure BDA0002400952140000281
Initiator Robot Sixty系统进行的。除非另有说明，否则所有TLC均在SiO2板(涂有荧光指示剂F254的硅胶)上进行，并且所有制备型反相HPLC/MS纯化均在XTerra RP18 5μm 19×150mm柱上使用梯度系统0.1％HCO2H/H2O/15→95％CH3CN进行。使用DMSO/AcOH/H2O1/1/1或CH3CN/MeOH/DMF 80/15/5将样品加载到反相柱上。除非另有说明，否则所有HCl、NaOH、KOH或LiOH溶液均为水性的。
化合物通过质子NMR在300MHz或400MHz NMR仪器(Bruker)上在d6-二甲基亚砜或d-氯仿中进行表征，并通过质谱法进行表征，通常通过HPLC/MS以快速的梯度在C18材料上并使用ESI(电喷雾电离)或APCI(大气压化学电离)模式进行记录。[M+H]+或[M-H]-的值是在质子化或去质子化之后特定化合物的相应HPLC/MS色谱图中发现的值。发现所有这些值均在对于计算的精确质量值的+/-0.2的可容许范围内。
核磁共振谱特性(NMR)是指以百万分之一(ppm)表示的化学移位(δ)。1H NMR谱中移位的相对面积对应于分子中特定功能类型的氢原子数目。就多重性而言，移位的性质表示为单峰(s)、宽单峰(br s)、双峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、五重峰(quint.)和多重峰或块(massif)(m)。
中间体和构件单元的制备
方案1：制备物A至C的合成
Figure BDA0002400952140000291
制备物A
Figure BDA0002400952140000301
4-氯-3-硝基喹啉
步骤1：将4-羟基喹啉(250g，1.72mol)溶解在丙酸(200mL)中，并将混合物在125℃下搅拌。然后逐滴添加硝酸(158mL，3.79mol，2.2当量)，同时将反应温度保持在125℃。添加完成之后，将反应混合物在125℃下搅拌60分钟，并随后冷却至室温。过滤出所得沉淀物，并依次用乙醇、水和最后的乙醇洗涤。剩余的固体从热乙醇中重结晶，冷却，过滤出并在减压下干燥，以得到为米色固体的252.3g(77％)的3-硝基喹啉-4-醇。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.96(brs，1H)，9.17(s，1H)，8.25(dd，1H)，7.83-7.68(m，2H)，7.51(m，1H)；MS(ESI+)m/z 191.1[M+H]+
步骤2：将POCl3(661mL，7.21mol，18.3当量)在60℃下加热，并分批添加3-硝基喹啉-4-醇(75g，0.39mol)。然后将所得的混悬液在120℃下搅拌3小时，并随后冷却至室温，并在减压下除去溶剂。将粗制剩余物倒在冰(1kg)和CH2Cl2(500mL)的混合物上。弃去水层，并在蒸发期间从有机相中结晶固体。过滤出所得固体，并用CH2Cl2洗涤，以得到40.4g(50％)为浅米色固体的期望的物质。没有另外的纯化。
MS(ESI+)m/z 209.0 211.0[M+H]+
步骤2的替代条件：
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、3-硝基喹啉-4-醇(41.82g，219.90mmol)、无水CH2Cl2(1.05L)和无水DMF(8.51mL，109.95mmol，0.5当量)以获得米色的混悬液。添加亚硫酰氯(34.01g，285.87mmol，1.3当量)之后，将反应混合物回流5小时。通过TLC(石油醚/EtOAc 1∶1)并且通过HPLC/MS监测反应过程。然后将反应混合物冷却至室温，并像这样用于下一步。
MS(ESI+)m/z 208.9 210.8[M+H]+
制备物B
Figure BDA0002400952140000311
1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉
步骤1：将4-氯-3-硝基喹啉(制备物A)(15g，71.91mmol)溶解在CH2Cl2(100mL)中，并在室温下分批添加三乙胺(19.99mL，143.81mmol，2当量)。向所得溶液中逐滴添加4-氨基-1-丁醇(8.68mL，93.48mmol，1.3当量)(小心！放热反应！)，并随后将反应混合物在回流下搅拌2小时，并随后在室温下搅拌过夜。通过HPLC/MS监测的反应表明完全反应。将溶液在CH2Cl2和饱和氯化铵水溶液之间分配，将层分离，并将水层用CH2Cl2萃取一次。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到12.8g(68％)为深黄色固体的期望的物质。该物质在没有另外纯化的情况下使用。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.14-9.00(m，2H)，8.52(d，1H)，7.99-7.74(m，2H)，7.58(m，1H)，7.28(br s，1H)，3.65(m，2H)，3.41(t，2H)，1.75(m，2H)，1.49(m，2H)；MS(ESI+)m/z262.1[M+H]+
步骤2：在室温下逐滴添加4-((3-硝基喹啉-4-基)氨基)丁-1-醇(42.8g，163.80mmol)和4-二甲基氨基吡啶(800mg，6.54mmol，0.04当量)在氯仿(350mL)三乙胺(34.2mL，245.70mmol，1.5当量)中的溶液，然后分批添加叔丁基二甲基氯硅烷(32.1g，212.94mmol，1.3当量)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。通过HPLC/MS监测的反应表明完全反应。将混合物在减压下浓缩，将剩余物混悬在乙酸乙酯中，并随后过滤。将滤液在乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液之间分配，将层分离，并将水层用乙酸乙酯萃取一次。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到54.7g(88％)为黄绿色固体的标题化合物。该物质在没有另外纯化的情况下使用。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.14-8.95(m，2H)，8.51(d，1H)，7.94-7.77(m，2H)，7.58(m，1H)，3.67(m，2H)，3.57(t，2H)，1.75(m，2H)，1.51(m，2H)，0.81(s，9H)，-0.02(s，6H)；MS(ESI+)m/z 376.1[M+H]+
步骤3：在500mL PARR容器(压力容器，Parr Instrument GmbH，Germany)中装入N-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-3-硝基喹啉-4-胺(35.6g，94.79mmol)、5％铂炭催化剂(platinum on carbon)(18.5g，4.74mmol，0.05当量)和甲苯(150mL)。将容器置于PARR摇床上，并用氢加压至50psi(3.5kg/cm2)。通过TLC(CH2Cl2/MeOH 100∶5)监测反应，并在一小时之后判断反应完成。通过经由
Figure BDA0002400952140000322
Hyflo Supercel的小垫进行的过滤来除去催化剂。滤饼用甲苯(3×100mL)洗涤，并合并滤液。在减压下除去挥发物，以得到31.65g(96％)为深色油状物的期望的产物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.36(s，1H)，7.99(m，1H)，7.72(m，1H)，7.33(m，2H)，5.31-4.45(m，3H)，3.54(t，2H)，3.19(m，2H)，1.52(m，4H)，0.82(s，9H)，-0.02(s，6H)；MS(ESI+)m/z 346.1[M+H]+
步骤4：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、N4-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)喹啉-3，4-二胺(8.99g，26.02mmol)、原丙酸三乙酯(9.17g，52.03mmol，2当量)和甲苯(76mL)。将反应在回流下加热以促进乙醇副产物的去除，直到20小时之后TLC监测(苯/甲醇/丙酮1∶1∶8)和HPLC/MS表明完全转化。将反应物冷却，并在减压下除去挥发物，以得到9.97g(定量的)为稠的深褐色油状物的1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.30(s，1H)，8.27(dd，1H)，8.19(dd，1H)，7.64(m，2H)，4.57(t，2H)，3.71(t，2H)，3.01(q，2H)，2.06(m，2H)，1.73(m，2H)，1.55(t，3H)，0.87(s，9H)，0.04(s，6H)；MS(ESI+)m/z 384.2[M+H]+
制备物C
Figure BDA0002400952140000321
4-(2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-醇
在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、N4-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)喹啉-3，4-二胺(5.00g，14.47mmol)、3-甲氧基丙酸(1.81g，17.36mmol，1.2当量)、2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲阳离子六氟磷酸盐(V)(HATU，6.60g，17.36mmol，1.2当量)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(DIPEA，2.24g，17.36mmol，1.2当量)和无水1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP，60mL)。将所得溶液在120℃下搅拌直到20小时之后TLC监测(苯/甲醇/丙酮1∶1∶8)表明完全反应。通过HPLC/MS检测期望的产物的质量。然后将反应混合物用十倍量的水稀释，并使用液-液萃取器用乙酸乙酯萃取。在减压下浓缩有机层，并将粗制物质通过快速色谱法在二氧化硅上纯化(CH2Cl2/MeOH 95∶5至90∶10)，以得到9.48g(定量的，仍然含有杂质)的微红褐色油状物。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 300.0[M+H]+
方案2：制备物D的合成
Figure BDA0002400952140000331
制备物D
Figure BDA0002400952140000332
4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-胺
在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、市售的叔丁基(4-((3-氨基喹啉-4-基)氨基)丁基)氨基甲酸酯(3.00g，9.08mmol)、原丙酸三乙酯(3.20g，18.16mmol，2当量)和甲苯(50mL)。将反应在回流下加热以促进乙醇副产物的去除，直到24小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。然后将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将剩余物溶解在无水1，4-二氧杂环己烷(50mL)中，添加4N HCl/1，4-二氧杂环己烷(50mL)，并将反应物在室温下搅拌过夜。然后将混合物在真空中浓缩并将剩余物溶解在饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中，冷冻并冻干。用无水乙醇(3×100mL)萃取冻干物。过滤合并的萃取物，并在减压下浓缩，以得到2.146g(88％)为微红黄色油状物的4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-胺。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.30(s，1H)，8.28(m，1H)，8.18(m，1H)，7.64(m，2H)，4.55(t，2H)，3.01(q，2H)，2.79(t，2H)，2.02(m，2H)，1.72-1.49(m，5H)；MS(ESI+)m/z 269.4[M+H]+
方案3：制备物E的合成
Figure BDA0002400952140000341
制备物E
Figure BDA0002400952140000351
苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯
步骤1：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、市售的叔丁基(4-((3-氨基喹啉-4-基)氨基)丁基)氨基甲酸酯(40.00g，121.05mmol)、2-{[(苄氧基)羰基](乙基)氨基}乙酸(Cbz-N-Et-Gly-OH，34.46g，145.27mmol，1.2当量)、2-(3H-[1，2，3]三唑[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲阳离子六氟磷酸盐(V)(HATU，55.23g，145.27mmol，1.2当量)、三乙胺(36.75g，363.16mmol，3当量)、4-二甲基氨基吡啶(1.48g，12.11mmol，0.1当量)和无水DMF(800mL)，以得到微红黄色溶液。将反应混合物在室温下搅拌直到约10至12小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明几乎完全转化。在减压下蒸发溶剂，并随后将剩余物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，并用水(3×300mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗制的深黄色中间体溶解在冰乙酸(400mL)中，并将混合物在回流下加热36小时，并通过HPLC/MS进行监测。然后将反应混合物通过在减压下蒸馏甲苯-乙酸共沸物来浓缩，并将剩余物混悬在饱和NaHCO3水溶液(200mL)中并过滤。滤液用氯仿(3×200mL)萃取，通过添加3M NaOH将水层调节至pH 10至11，并用氯仿(9×100mL)萃取。弃去滤饼和水层。依次用盐水(400mL)洗涤收集的有机层，并经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。剩余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(CHCl3/MeOH/32％氨溶液290∶9∶1)，以得到13.82g(24％)为微红黄色油状物的苄基((1-(4-乙酰氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯和8.75g(约80％纯度，16％)为微红黄色油状物的苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.28(s，1H)，8.28(dd，1H)，8.08(dd，1H)，7.67(m，2H)，7.43-7.28(m，5H)，6.00(br s，1H)，5.22(s，2H)，4.92(s，2H)，4.61(br s，2H)，3.43(q，2H)，3.22(m，2H)，1.94(s，3H)，1.92-1.59(m，4H)，1.10(t，3H)；MS(ESI+)m/z 474.2[M+H]+
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、回流冷凝器、苄基((1-(4-乙酰氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(13.20g，27.87mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.68g，5.57mmol，0.2当量)和四氢呋喃(420mL)以得到黄色溶液。添加二碳酸二叔丁酯(18.25g，83.62mmol，3当量)，并将混合物加热至回流16小时。TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明不完全转化。需要另外的二碳酸二叔丁酯(6.08g，27.87mmol，1当量)和进一步回流2小时以获得完全转化。添加甲醇(420mL)和一水合肼(11.16g，222.98mmol，8当量)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。根据TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS，需要另外的一水合肼(2.79g，55.75mmol，2当量)和进一步搅拌过夜以获得完全转化。然后将反应混合物倒入二氯甲烷(800mL)中，依次用1N HCl(250mL)、10％硫酸铜(II)水溶液(250mL)和饱和NaHCO3水溶液(250mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。然后将剩余物溶解在1，4-二氧杂环己烷(400mL)中，并在室温下处理4N HCl/1，4-二氧杂环己烷(200mL)60分钟，直到TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)表明完全反应。然后将反应混合物用水(600mL)稀释，通过添加3M NaOH将pH调节至10至11，并且将混合物用CH2Cl2(3×250mL)萃取。合并的有机层在减压下浓缩。将剩余物与水层合并，并通过在减压下蒸馏仲丁醇-水共沸物进行浓缩。用含有10％无水乙醇的二氯甲烷(2×500mL)萃取粗制产物。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到12.80g(80至90％纯度，定量的)为深黄色油状物的苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。该物质在没有任何另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 432.2[M+H]+
方案4：实施例1的合成
Figure BDA0002400952140000371
实施例1
Figure BDA0002400952140000381
N-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺
步骤1：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉(参见制备物B)(9.97g，25.99mmol)和氯仿(130mL)。在15分钟内向溶液中分批添加固体3-氯苯并过氧酸(4.93g，28.59mmol，1.1当量)，并将混合物在室温下搅拌1小时。在另外添加3-氯苯并过氧酸(1.35g，7.80mmol，0.3当量)并再搅拌30分钟之后，TLC监测(苯/甲醇/丙酮1∶1∶8)和HPLC/MS表明起始物质的完全消耗。然后将反应混合物在氯仿和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配，并将层分离。有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到9.64g(93％)为米褐色固体的1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 400.1[M+H]+
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物(9.64g，24.12mmol)、氯仿(100mL)和氨溶液(32％，100mL)。将4-甲基苯-1-磺酰氯(5.52g，28.95mmol，1.2当量)一次添加至双相混合物中，并在室温下剧烈搅拌反应物，直到2小时之后TLC监测(苯/甲醇/丙酮1∶1∶8)和HPLC/MS表明完全转化。然后将混合物在氯仿(150mL)和盐水(250mL)之间分配。将有机层与水层分离，并用盐水(2×150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸发，以得到8.57g(89％)为锈褐色固体的1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 399.1[M+H]+
步骤3：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、1-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(8.57g，21.50mmol)、四氢呋喃(90mL)、水(90mL)和乙酸(270mL)，并且所得的微红色溶液在60℃下搅拌直到16小时之后TLC监测(苯/甲醇/丙酮1∶1∶8)和HPLC/MS表明完全转化。然后将反应混合物冷却至0℃，并通过逐滴添加10MNaOH(约333mL)将其调节至pH 8。用乙酸乙酯和乙醇的混合物(5×200mL)萃取水层。合并有机层，在减压下浓缩，并将所得固体用DMF萃取以除去乙酸钠盐。将萃取液在真空中浓缩，以得到6.78g(92％)为米褐色固体的4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-醇乙酸酯。
MS(ESI+)m/z 285.1[M+H]+
步骤4：将亚硫酰氯(7.04g，59.20mmol，3当量)添加至4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-醇乙酸酯(6.78g，19.73mmol)在二氯乙烷(300mL)中的混悬液中，并将米黄色混合物在室温下搅拌过夜。HPLC/MS监测显示完全转化。将混合物冷却至0℃，并缓慢添加甲醇(25mL)。在减压下除去挥发物，并将剩余物依次用丙酮和乙醚洗涤，并在高真空下干燥，以得到5.021g(75％)为米黄色固体的1-(4-氯丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺盐酸盐。将洗涤溶液过滤并沉淀，依次用丙酮和乙醚洗涤并在高真空下干燥，以得到0.401g(6％)第二级分产物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.88(s，1H)，8.74(br s，2H)，8.26(d，1H)，7.83(d，1H)，7.72(t，1H)，7.58(t，1H)，4.62(m，2H)，3.71(m，2H)，3.02(q，2H)，1.94(m，4H)，1.41(t，3H)；MS(ESI+)m/z 303.1[M+H]+
步骤5：向1-(4-氯丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺盐酸盐(150mg，0.442mmol)在无水DMA(4mL)中的混悬液添加DIPEA(229mg，1.79mmol，4当量)和四氢-2H-吡喃-4-胺(134mg，1.326mmol，3当量)，并将混合物在100℃下搅拌4.5天。HPLC/MS监测表明期望的物质的形成。将混合物在真空中浓缩并将剩余物通过制备型HPLC纯化，以得到67mg(42％)为黄米色固体的2-乙基-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.06(dd，1H)，7.62(dd，1H)，7.42(ddd，1H)，7.26(ddd，1H)，6.53(brs，2H)，4.54(t，2H)，3.84(m，2H)，3.25(dd，2H)，2.96(q，2H)，2.85(m，1H)，2.75(t，2H)，1.93-1.73(m，4H)，1.63(m，2H)，1.38(t，3H)，1.33(m，2H)；MS(ESI+)m/z 368.1[M+H]+
步骤6：在梨形烧瓶中装入磁力搅拌棒、2-乙基-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(43mg，0.117mmol；通过离子交换色谱法在AgilentStratoSpheres PL-HCO3MP树脂上制备，以除去痕量甲酸)、2M NaOH(88μL，0.176mmol，1.5当量)和水(1mL)以得到浅黄色混悬液。在添加乙酸酐(22μL，0.234mmol，2当量)之后，将所得混合物在RT下搅拌直到2天后TLC监测(CH2Cl2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS表明起始物质的完全消耗。然后将反应混合物直接进行制备型TLC(SiO2 20cm2，CH2Cl2/MeOH 9∶1)，以得到10.4mg(22％)灰白色固体。
1H NMR(300MHz，CD3OD)(mixture of rotamers)δ8.09(m，1H)，7.71(d，1H)，7.50(t，1H)，7.35(t，1H)，4.59(quint.2H)，4.28(m，0.4H)，4.01-3.77(m，2.6H)，3.42(m，2H)，3.28(m，2H)，3.03(m，2H)，2.11(s，1.8H)，2.07(s，1.2H)，2.02-1.54(m，8H)，1.53-1.43(m，3H)；MS(ESI+)m/z 410.1[M+H]+
方案5：实施例2和4的合成
Figure BDA0002400952140000411
实施例2
Figure BDA0002400952140000412
1-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲
步骤1：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-胺(参见制备物D)(1.430g，5.329mmol)、四氢-4H-吡喃-4-酮(533mg，5.329mmol，1当量)和1，2-二氯乙烷(30mL)。在添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.581g，7.460mmol，1.4当量)和乙酸(320mg，5.329mmol，1当量)之后，将混合物在室温下搅拌过夜。通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)进行的反应监测显示起始物质的完全消耗。将反应混合物用1M NaOH(30mL)淬灭，将层分离，并将水相用1，2-二氯乙烷(3×30mL)萃取。将合并的有机层在真空中浓缩，并将油状剩余物通过在减压下并随后在高真空下蒸馏甲苯-水共沸物进行干燥。将粗制产物在硅胶上进行柱色谱法(CHCl3/MeOH/32％氨溶液440∶9∶1至190∶9∶1)，以得到1.652g(88％)为深黄色油状物的N-(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)四氢-2H-吡喃-4-胺。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.30(s，1H)，8.27(m，1H)，8.19(m，1H)，7.64(m，2H)，4.55(t，2H)，3.96(m，2H)，3.37(m，2H)，3.00(q，2H)，2.72(t，2H)，2.63(m，1H)，2.03(m，2H)，1.79(m，2H)，1.68(m，2H)，1.54(t，3H)，1.39(m，2H)；MS(ESI+)m/z 353.4[M+H]+
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、N-(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)四氢-2H-吡喃-4-胺(824mg，2.338mmol)、三乙胺(473g，4.675mmol，2当量)和1，2-二氯乙烷(15mL)以得到黄色溶液。在添加二碳酸二叔丁酯(510mg，2.338mmol，1当量)之后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)进行的反应监测显示起始物质的完全消耗。将反应混合物用5％柠檬酸(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以产生1.006g(95％)为红褐色油状物的叔丁基(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸酯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.30(s，1H)，8.28(dd，1H)，8.13(dd，1H)，7.64(m，2H)，4.54(t，2H)，3.98(m，2H)，3.39(t，2H)，3.16(m，2H)，3.00(q，2H)，1.95(m，2H)，1.82-1.49(m，9H)，1.40(s，9H)；MS(ESI+)m/z 453.6[M+H]+
步骤3：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、叔丁基(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基]丁基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸酯(1.002g，2.214mmol)和二氯甲烷(15mL)以得到深黄色溶液。在5分钟的时间内，向溶液中分批添加固体3-氯苯并过氧酸(0.955g，5.535mmol，2.5当量)，并在室温下搅拌反应物直到3小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全反应。向溶液中添加氨溶液(32％，15mL)，然后是对甲苯磺酰氯(1.013g，5.313mmol，2.4当量)，并将两相混合物在室温下剧烈搅拌过夜。通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)进行的反应监测显示起始物质的完全消耗。分离两层，并将水相用CH2Cl2(50mL)萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液(饱和碳酸氢钠溶液∶水＝1∶1，1×50mL)洗涤，并在真空中浓缩。将剩余物在硅胶上进行柱色谱法(CHCl3/MeOH/32％氨溶液540∶9∶1)，以得到613mg(59％)为米黄色固体的叔丁基(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸酯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(mixture of rotamers)δ7.90(dd，1H)，7.82(dd，1H)，7.50(ddd，1H)，7.30(ddd，1H)，5.42(br s，2H)，4.46(t，2H)，3.98(m，2.5H)3.39(t，2H)，3.18(2.4H)，2.94(q，2H)，1.93(m，2H)，1.82-1.53(m，6H)，1.48(t，3H)，1.41(s，9H)；MS(ESI+)m/z 468.3[M+H]+
步骤4：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、叔丁基(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸酯(602mg，1.287mmol)和无水1，4-二氧杂环己烷(10mL)以得到米黄色混悬液。添加4N HCl/1，4-二氧杂环己烷(10mL)，并将反应物在室温下搅拌2.5天。通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)进行的反应监测显示起始物质的完全消耗。将所得沉淀物过滤出，用无水Et2O(3×20mL)洗涤，并通过离子交换色谱法在Agilent StratoSpheres PL-HCO3 MP SPE芯(聚合物支撑的季胺(HCO3 -形式)装置，用于通过固相萃取(solid phase extraction，SPE)去除TFA或HCl盐-Agilent，订购号PL3540-G603)上进行去离子化以分离游离胺。通过快速色谱法在硅胶上纯化粗制物质(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)，以得到363mg为黄米色固体的2-乙基-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.97(d，1H)，7.82(d，1H)，7.50(dt，1H)，7.31(dt，1H)，5.39(br s，2H)，4.48(t，2H)，3.95(m，2H)，3.37(dt，2H)，2.94(q，2H)，2.70(t，2H)，2.63(m，1H)，2.01(m，2H)，1.79(m，2H)，1.65(m，2H)，1.48(t，3H)，1.37(m，2H)；MS(ESI+)m/z 368.2[M+H]+
步骤5：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、2-乙基-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(367mg，0.999mmol)、三乙胺(101mg，0.999mmol，1当量)和无水氯仿(5mL)。将黄色溶液在冰浴中冷却至0至4℃，添加三甲基甲硅烷基异氰酸酯(127mg，1.099mmol，1.1当量)，并将混合物在室温下搅拌。1小时之后通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)进行的反应监测显示起始物质的不完全消耗。在接下来的5小时期间，每30分钟添加另外的三甲基甲硅烷基异氰酸酯(127mg，1.099mmol，1当量)以获得完全转化。在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型TLC纯化剩余物(SiO220cm2，CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)，以得到273mg(67％)的灰白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.02(dd，1H)，7.61(dd，1H)，7.41(ddd，1H)，7.25(ddd，1H)，6.41(br s，2H)，5.76(br s，2H)，4.49(t，2H)，3.96(m，1H)，3.85(dd，2H)，3.29(m，2H)，3.07(t，2H)，2.95(q，2H)，1.79(m，2H)，1.71-1.53(m，4H)，1.44(m，2H)，1.38(t，3H)；MS(ESI+)m/z 411.2[M+H]+
实施例4
Figure BDA0002400952140000441
1-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲
步骤1至5：如实施例2中所述地制备，使用苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(参见制备物E)(3.5g，8.11mmol)作为起始物质，以产生249mg(5个步骤的总产率，5％)为褐色油状物的苄基((4-氨基-1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。
MS(ESI+)m/z 574.4[M+H]+
步骤6：在配备有隔膜进样口冲洗适配器的圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、苄基((4-氨基-1-(4-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)(脲基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(245mg，0.427mmol)和甲醇(2mL)，以得到浅黄色溶液。在添加10％Pd/C(45mg，0.470mmol)之后，将设备连接到充满氢的气球上，并交替抽空并填充氢3次。然后使氢进入该系统中，并将反应混合物在大气压下在室温下搅拌过夜。根据HPLC/MS监测，在接下来的20小时内添加另外的10％Pd/C(270mg，2.82mmol，6当量)以获得完全转化。然后用氩净化设备，并通过经由
Figure BDA0002400952140000451
的薄垫进行的过滤来除去催化剂。将滤饼用甲醇洗涤，直到将所有产物从过滤器中洗出，并将滤液合并，在减压下浓缩并在高真空中干燥。剩余物通过制备型TLC进行纯化(SiO2 20cm2，CHCl3/MeOH/32％氨溶液100∶10∶1)以得到54mg(28％)白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.03(d，1H)，7.61(dd，1H)，7.43(ddd，1H)，7.26(ddd，1H)，6.46(br s，2H)，5.77(br s，2H)，4.61(t，2H)，4.04(s，2H)，4.02-3.79(m，3H)，3.34(m，2H)，3.09(t，2H)，2.63(q，2H)，1.85(m，2H)，1.74-1.53(m，4H)，1.46(m，2H)，1.06(t，3H)；MS(ESI+)m/z 440.3[M+H]+
方案6：实施例3的合成
Figure BDA0002400952140000461
实施例3
Figure BDA0002400952140000462
N-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺
步骤1：给三颈2-L圆底烧瓶配备50mm×21mm八边形KOMETTM磁力搅拌棒、连接矿物油鼓泡器的回流冷凝器和两个玻璃塞。装入N-Boc-腐胺(56.41g，299.65mmol，1.5当量)、CH2Cl2(500mL)和分子筛
Figure BDA0002400952140000471
粉末＜5微米(Aldrich)(90g)，并将混合物在室温下搅拌5分钟。分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(84.68g，399.53mmol，2当量)，并将所得的混合物在搅拌下于40℃下加热5分钟。快速添加
Figure BDA0002400952140000472
烷-4-酮(20.00g，199.77mmol)在CH2Cl2(500mL)中的溶液，并将所得混合物回流过夜。通过TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)监测反应进程，并通过用茚三酮试剂和氯/邻联甲苯胺试剂进行的处理来检测斑点。在接下来的两天期间添加另外的
Figure BDA0002400952140000473
烷-4-酮(4.00g，39.96mmol，0.2当量)以获得完全转化。然后将反应混合物冷却至室温，添加三乙胺(75.80g，749.12mmol，3.75当量)和乙酸酐(45.89g，449.47mmol，2.25当量)，并将混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)监测反应进程。然后将反应混合物倒入冷水(1.4L)中，通过过滤除去分子筛，并将二氯甲烷层与水层分离。用二氯甲烷(3×250mL)萃取水层，并将合并的有机层用盐水(2×250mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化粗制物质(CHCl3/MeOH/32％氨溶液440∶9∶1)，以获得62.8g(定量的)为橙色油状物的叔丁基(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)氨基甲酸酯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(mixture of rotamers)δ4.81-4.43(m，1.6H)，4.01(m，2H)，3.71(m，0.4H)，3.56-3.30(m，2H)，3.29-3.02(m，4H)，2.20-2.00(m，3H)，1.93-1.35(m，17H).
未进行LC-MS，因为该化合物在紫外线下不可检测。
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、叔丁基(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)氨基甲酸酯(62.81g，199.76mmol)在二氯甲烷(1.3L)中的溶液。小心地添加4NHCl/1，4-二氧杂环己烷(1.3L)溶液，并将所得混合物在室温下搅拌过夜。通过TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液240∶9∶1)监测反应进程，并通过用茚三酮试剂进行的处理来观察斑点。将反应混合物在真空中浓缩，并将所得固体用乙醚研磨，过滤，用乙醚洗涤并在真空中干燥，以得到51.46g为米色固体的N-(4-氨基丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺盐酸盐。该物质在没有任何另外纯化的情况下用于下一步。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)(mixture of rotamers)δ7.93(m，3H，NH3 +)，4.25(m，0.45H)，3.99-3.71(m，2.55H)，3.45-3.24(m，2H)，3.23-3.03(m，2H)，2.88-2.65(m，2H)，2.06(s，1.6H)，2.01(s，1.4H)，1.89-1.63(m，2H)，1.63-1.33(m，6H).
未进行LC-MS，因为该化合物在紫外线下不可检测。
步骤3：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、N-(4-氨基丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺盐酸盐(粗制，51.46g，199.91mmol)、三乙胺(121.37g，1199.43mmol，6当量)和二氯甲烷(2.1L)，并将所得的浅黄色溶液在冰浴中冷却至0至4℃。小心地添加先前步骤中制备的4-氯-3-硝基喹啉(参见制备物A)(45.87g，219.90mmol)在CH2Cl2(1.05L)中的溶液，将所得混合物在0至4℃下搅拌10分钟，并随后在室温下搅拌过夜。通过TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液80∶18∶2和240∶9∶1)并且通过HPLC/MS监测反应进程，并且通过用茚三酮试剂进行的处理来观察斑点。然后将反应混合物在水(6L)与二氯甲烷和甲醇的混合物(9∶1，1L)之间分配。将水层与有机层分离，并用二氯甲烷和甲醇的混合物(9∶1，3×1L)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法在硅胶上纯化粗制物质(CHCl3/MeOH/32％氨溶液540∶9∶1)，以得到72.89g(94％)为红黄色油状物的N-(4-((3-硝基喹啉-4-基)氨基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺。
MS(ESI+)m/z 387.0[M+H]+
步骤4：在250mL PARR容器(压力容器，Parr Instrument GmbH，Germany)中装入N-(4-((3-硝基喹啉-4-基)氨基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺(16.89g，43.71mmol)、5％铂炭催化剂(8.60g，2.19mmol，5mol％)和甲苯(90mL)。将容器放置在PARR摇床上，并加压至50psi(3.5kg/cm2)。反应通过TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液240∶9∶1)来监测，并在一小时之后完成。通过经由
Figure BDA0002400952140000481
Hyflo Supercel的小垫进行的过滤来除去催化剂，将滤饼用乙醇洗涤数次，并合并滤液。在减压下除去挥发物，并将粗制物质通过快速色谱法在硅胶上进行纯化(CHCl3/MeOH/32％氨溶液240∶9∶1至140∶9∶1)，以得到14.28g(92％)为红橙色油状物的N-(4-((3-氨基喹啉-4-基)氨基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(旋转异构体混合物)δ8.49(s，0.4H)，8.45(s，0.6H)，8.02-7.92(m，1H)，7.91-7.73(m，1H)，7.53-7.38(m，1H)，4.55(m，0.6H)，4.16-3.05(m，11.4H)，2.14(s，1.8H)，2.04(s，1.2H)，1-90-1.44(m，8H)；MS(ESI+)m/z 357.0[M+H]+
步骤5：向圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、N-(4-((3-氨基喹啉-4-基)氨基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺(1.00g，2.81mmol)、N-Boc-N-乙基甘氨酸(0.68g，3.37mmol，1.2当量)、2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲阳离子六氟磷酸盐(V)(HATU，1.28g，3.37mmol，1.2当量)、三乙胺(0.85g，8.42mmol，3当量)、4-二甲基氨基吡啶(0.03g，0.28mmol，0.1当量)和无水DMF(20mL)以得到红黄色溶液。将反应混合物在室温下搅拌直到在约10至12小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。然后在减压下除去溶剂，并将溶解在乙酸乙酯中的剩余物用水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将剩余物溶解在乙醇(20mL)中，添加2M NaOH(4.91mL，9.82mmol，3.5当量)，并将所得混合物回流直到18小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。将反应物在真空中浓缩并将剩余物在二氯甲烷(100mL)和1M HCl(50mL)之间分配。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。粗制产物通过快速色谱法在硅胶上进行纯化(CHCl3/MeOH/32％氨溶液240∶9∶1)，以得到1.24g(84％)为橙黄色油状物的叔丁基乙基((1-(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)氨基甲酸酯。
MS(ESI+)m/z 524.8[M+H]+
步骤6：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、叔丁基乙基((1-(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)氨基甲酸酯(1.24g，2.37mmol)和氯仿(100mL)。在15分钟的时间内，将固体3-氯苯并过氧酸(1.02g，5.92mmol，2.5当量)分批添加至溶液，并将反应物在室温下搅拌过夜，直到TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。然后将溶液在氯仿(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)之间分配，并将层分离。有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，然后在减压下浓缩，以得到1.33g(定量的)为红褐色油状物的2-(((叔丁氧基羰基)(乙基)氨基)甲基)-1-(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物。该物质在没有任何另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 540.0[M+H]+
步骤7：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、2-(((叔丁氧基羰基)(乙基)氨基)甲基)-1-(4-(N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物(1.33g，2.46mmol)、氯仿(30mL)和氨溶液(32％，30mL)。将对甲苯磺酰氯(0.47g，2.46mmol，1当量)一次添加至双相混合物中，并将反应混合物在室温下剧烈搅拌过夜，直到TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。然后将反应混合物用氯仿(70mL)稀释，并将相分离。用2M HCl将水层调节至pH 7，并用氯仿(2×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将剩余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(CHCl3/MeOH/32％氨溶液240∶9∶1)，以得到430mg米黄色固体。将后者与热溶剂(依次为乙酸乙酯、丙酮和甲醇)一起研磨，冷却并过滤以除去副产物。将一部分固体溶解在氯仿(25mL)中，并在室温下用4N HCl/1，4-二氧杂环己烷(25mL)的溶液处理过夜以除去Boc-保护基。在真空中蒸发挥发物之后，将剩余物通过快速色谱法在硅胶上纯化(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)，以得到202mg灰白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(旋转异构体混合物)δ7.91(t，1H)，7.83(m，1H)，7.52(m，1H)，7.33(t，1H)，5.42(brs，2H)，4.59(m，2.4H)，4.10(s，2H)，4.01(m，2H)，3.71(m，0.6H)，3.42(m，2H)，3.25(dt，2H)，2.79(q，2H)，2.13(s，1.8H)，2.09(s，1.2H)，1.98(m，2H)，1.86-1.53(m，6H)，1.18(t，3H)；MS(ESI+)m/z 439.3[M+H]+
方案7：实施例5和6的合成
Figure BDA0002400952140000511
实施例5
Figure BDA0002400952140000512
N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺
步骤1：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、4-(2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-醇(参见制备物C)(9.48g粗制物质，对应于约14.47mmol起始物质)和二氯乙烷(400mL)以得到黄褐色溶液。添加亚硫酰氯(6.89mL，95.00mmol，6.5当量)之后，将混合物在室温下搅拌12小时直到TLC监测(CH2Cl2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS表明完全反应。在减压下除去挥发物，将剩余物溶解在二氯甲烷中，用三乙胺(7.45g，73.67mmol，5当量)碱化，并通过快速色谱法在硅胶上纯化(CH2Cl2/MeOH 95∶5)，以得到3.35g(72％，基于14.47mmol起始物质)为微红褐色油状物的1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉。
MS(ESI+)m/z 317.9 319.8[M+H]+
步骤2：在反应烧瓶中装入磁力搅拌棒、1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉盐酸盐(3.35g，9.46mmol)和水(300mL)以得到微红褐色混悬液。在添加单过氧邻苯二甲酸镁六水合物(MMPP)(4.68g，9.46mmol，1当量)之后，将混合物在60℃下搅拌。在2小时的反应时间之后，添加单过氧邻苯二甲酸镁六水合物(4.68g，9.46mmol，1当量)，并将混合物在60℃下进一步搅拌90分钟，直到TLC监测(CH2Cl2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS表明完全反应。反应混合物用氯仿(3×100mL)萃取，并将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(1×50mL)洗涤。碳酸氢盐层用氯仿(3×50mL)萃取，合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到1.75g(55％)为深黄色油状物的1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 333.9 335.8[M+H]+
步骤3：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物(1.75g，5.24mmol)、氯仿(50mL)和氨溶液(32％，50mL)。将4-甲基苯-1-磺酰氯(1.20g，6.29mmol，1.2当量)一次添加至双相混合物中，并将反应物在室温下剧烈搅拌过夜。TLC监测(CH2Cl2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS表明完全反应和期望的产物的形成。将混合物用氯仿(100mL)和盐水(150mL)稀释。将有机层与水层分离，并用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸发。剩余的黄褐色油状物通过制备型HPLC纯化，以得到586mg(34％)为黄色固体的1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。
MS(ESI+)m/z 332.9 334.8[M+H]+
步骤4：在密封的小瓶中，将1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(150mg，0.451mmol)、碘化钠(68mg，0.451mmol，1当量)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(116mg，0.901mmol，2当量)、4-氨基四氢吡喃(137mg，1.352mmol，3当量)和分子筛
Figure BDA0002400952140000531
粉末＜5微米(Aldrich)(750mg)在无水DMA(4.5mL)中的混合物在100℃下搅拌4天，直到HPLC/MS监测表明完全反应和期望的物质的形成。将反应混合物过滤并在减压下浓缩，以得到302mg为褐色剩余物的2-(2-甲氧基乙基)-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 398.0[M+H]+
步骤5：在梨形烧瓶中装入磁力搅拌棒、2-(2-甲氧基乙基)-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(302mg，0.760mmol)、2N NaOH溶液(3.799mL，7.597mmol，10当量)和水(5mL)以得到黄色溶液。在添加乙酸酐(0.776g，7.597mmol，10当量)之后，将反应混合物在室温下搅拌24小时，并通过HPLC/MS监测反应进程。然后添加2N NaOH溶液(15.194mL，30.388mmol，40当量)和乙酸酐(3.102g，30.388mmol，40当量)，并将混合物在室温下再进一步搅拌24小时。过滤反应混合物，并通过制备型HPLC分离产物，以得到89mg(27％)的黄褐色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.02(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.42(t，1H)，7.24(t，1H)，6.42(s，2H)，4.54(m，2H)，4.24-3.68(m，5H)，3.45-3.09(m，9H)，2.01(d，3H)，1.89-1.34(m，8H)；MS(ESI+)m/z 439.9[M+H]+
实施例6
Figure BDA0002400952140000541
1-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲
在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、2-(2-甲氧基乙基)-1-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(在实施例5，步骤1至4中获得)(281mg，0.706mmol)、三乙胺(71mg，0.706mmol，1当量)和无水氯仿(5mL)以得到黄色溶液。将溶液在冰浴中冷却至0至4℃，并在添加三甲基甲硅烷基异氰酸酯(89mg，0.776mmol，1.1当量)之后，将反应物在室温下搅拌。通过HPLC/MS和TLC(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)进行的反应监测显示在1小时之后起始物质的不完全消耗。在接下来的3.5小时期间每30分钟添加另外的三甲基甲硅烷基异氰酸酯(81mg，0.706mmol，1当量)以获得完全转化。然后通过添加水(5mL)淬灭反应，并随后在室温下搅拌30分钟。将混合物用100mL的无水乙醇稀释，并随后在减压下浓缩至约一半的体积。添加另外的100mL无水乙醇，并将溶液在真空中蒸发。粗制物质通过TLC进行纯化(SiO2 20cm2，CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)以得到91mg(29％)的灰白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.02(dd，1H)，7.61(dd，1H)，7.42(ddd，1H)，7.25(ddd，1H)，6.42(s，2H)，5.77(br s，2H)，4.52(t，2H)，4.04-3.76(m，5H)，3.38-3.24(m，5H)，3.19(t，2H)，3.08(t，2H)，1.88-1.53(m，6H)，1.45(m，2H)；MS(ESI+)m/z 441.5[M+H]+
方案8：实施例7至11的合成(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000551
实施例7(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000552
N-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺
步骤1：将4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁-1-胺(参见制备物D)(10.4g，38.7mmol)混悬在MeOH/THF(1∶1.5v/v，150mL)中，并逐滴添加三乙胺(51.9mL，373.5mmol，9.65当量)在MeOH/THF(1∶1v/v，20mL)中的溶液。然后分批添加3-溴硫杂环丁烷1，1-二氧化物(9.3g，50.3mmol，1.3当量)并将所得溶液在70℃下搅拌，直到18小时之后TLC监测(CH2CI2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS表明几乎完全转化。然后将反应混合物冷却至室温，并在减压下浓缩。将褐色剩余物在CH2Cl2和水之间分配，并将有机相用水洗涤数次，并将合并的水相用CH2Cl2萃取数次。合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并蒸发。然后将所得固体依次用EtOAc和石油醚洗涤，并在真空下干燥，以得到为米色固体的3-((4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物(5.68g，39％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.14(s，1H)，8.36(m，1H)，8.14(m，1H)，7.69(m，2H)，4.60(t，2H)，4.25(m，2H)，3.85(m，2H)，3.58(m，1H)，3.01(q，2H)，2.50(m，2H)，1.87(m，2H)，1.57(m，2H)，1.42(t，3H)；MS(ESI+)m/z 373.1[M+H]+
步骤2：在0℃下向3-((4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物(3.14g，8.42mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中添加溶解在CH2Cl2(5mL)中的三乙胺(3.5mL，25.3mmol，3当量)和溶解在CH2Cl2(5mL)中的乙酸酐(3.1mL，33.7mmol，4当量)。将混合物在0℃下搅拌1小时，并随后在室温下搅拌18小时，直到HPLC/MS监测表明完全转化。过滤反应物，并将滤液在CH2Cl2和水之间分配。将有机相用水洗涤三次，并将合并的水相用CH2Cl2洗涤两次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。然后将所得固体依次用EtOAc和石油醚洗涤，并在真空下干燥，以得到为灰白色固体的N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)-N-(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)乙酰胺(2.16g，62％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.14(s，1H)，8.35(m，1H)，8.15(m，1H)，7.69(m，2H)，4.72-4.12(m，7H)，3.39(t，2H)，3.02(q，2H)，2.03(s，3H)，1.76(m，4H)，1.42(t，3H)；MS(ESI+)m/z 415.0[M+H]+
步骤3：在室温下，向磁性搅拌的N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)-N-(4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)乙酰胺(330mg，0.796mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中添加过氧乙酸(在乙酸中38％至40％，398μL，2.388mmol，3当量)，然后将所得混合物在回流下搅拌3小时。通过HPLC/MS分析监测转化的完成。然后将混合物冷却至室温，用水(40mL)稀释并搅拌5分钟。然后蒸发有机溶剂，并将所得水相冻干，以得到为白色粉末的粗制1-(4-(N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺基)丁基)-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉5-氧化物(340mg)(MS(ESI+)m/z 430.8[M+H]+)。将固体溶解在CH2Cl2(15mL)中，并添加过量的32％氢氧化铵溶液(1mL)。然后在室温下向剧烈搅拌的混合物中添加在CH2Cl2(3mL)中的甲苯磺酰氯(151mg，0.790mol，1当量)，并继续搅拌直到1.5小时之后TLC(CH2Cl2/MeOH 9∶1)和HPLC/MS监测表明完全转化。然后将混合物在减压下浓缩并将剩余物在MeOH(5mL)中声处理。过滤所得固体，并用MeOH进行洗涤，以得到160mg(47％)白色粉末。或者，两个连续的化学反应可以以一锅法(one-pot)进行，而无需分离N-氧化物中间体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.02(d，1H)，7.62(dd，1H)，7.42(ddd，1H)，7.25(ddd，1H)，6.43(br s，2H)，4.93-4.13(m，7H)，3.39(m，2H)，2.95(q，2H)，2.03(s，3H)，1.74(m，4H)，1.38(t，3H)；MS(ESI+)m/z 430.2[M+H]+
实施例8(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000571
甲基(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯
如实施例7中所述地制备，从600mg(1.61mmol)3-((4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物(来自步骤1)开始，并使用氯甲酸甲酯(2当量)形成氨基甲酸酯，以产生190mg(3个步骤的总产率，23％)为灰白色固体的甲苯磺酸盐。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.08(d，1H)，7.72(d，1H)，7.55(t，1H)，7.47(d，0.8H，甲苯磺酸盐的2xCH)，7.40(t，1H)，7.10(d，0.8H，甲苯磺酸盐的2xCH)，4.62-4.24(m，7H)，3.60(s，3H)，3.33(m，2H)，2.98(q，2H)，2.28(s，1.2H，甲苯磺酸盐的CH3)，1.84-1.57(m，4H)，1.39(t，3H)；MS(ESI+)m/z 446.0[M+H]+
实施例9(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000581
1-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)脲
如实施例7中所述地制备，从80mg(0.215mmol)3-((4-(2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物(来自步骤1)开始，并使用三甲基甲硅烷基异氰酸酯(4当量)形成脲，以产生8.5mg(3个步骤的总产率，9％)的米色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)(旋转异构体混合物)δ8.17(d，1H)，8.08(br s，0.5H)，7.77(d，1H)，7.64(t，1H)，7.50(t，1H)，6.14(br s，2H)，5.39(br s，1.5H)，4.67-4.14(m，7H)，3.50(m，2H)，2.99(m，2H)，1.78(m，2H)，1.66(m，2H)，1.40(m，3H)；MS(ESI+)m/z 431.2[M+H]+
实施例10(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000591
N-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺
步骤1至3：如实施例7中所述地制备，使用苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(参见制备物E)(1g，2.317mmol)作为起始物质，以产生261mg(3个步骤，19％)为灰白色泡沫的苄基((4-氨基-1-(4-(N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.85(m，2H)，7.53(ddd，1H)，7.43-7.28(m，6H)，5.46(brs，2H)，5.23(s，2H)，4.84(s，2H)，4.66-4.19(m，7H)，3.55-3.22(m，4H)，2.07(s，3H)，1.97-1.56(m，4H)，1.10(t，3H)；MS(ESI+)m/z 573.3[M+H]+
步骤4：在配备有隔膜进样口冲洗适配器的圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、苄基((4-氨基-1-(4-(N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(261mg，0.440mmol)和甲醇(20mL)，以得到无色溶液。在添加10％钯/活性炭(469mg，0.440mmol，1当量)之后，将设备连接到充满氢的气球上，并交替抽空并填充氢3次。然后使氢进入该系统中，并将反应混合物在大气压下在室温下搅拌过夜。TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)和HPLC/MS表明不完全转化。需要另外的10％钯/活性炭(0.469g，0.440mmol)和进一步搅拌过夜以获得完全转化。然后用氩净化设备，并通过在部分粗孔隙度(孔隙度＝16至40μm)的玻璃过滤漏斗上经由
Figure BDA0002400952140000592
HyfloSupercel的薄垫进行的过滤来除去催化剂。滤饼用甲醇(3×50mL)洗涤，合并的滤液通过0.45μm PTFE膜过滤以除去催化剂剩余物，并在减压下浓缩。剩余物通过制备型TLC纯化(SiO2 20cm2，CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)，以得到108mg(53％)的灰白色固体。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ7.86(m，2H)，7.53(ddd，1H)，7.34(ddd，1H)，5.70(br s，2H)，4.64(t，2H)，4.61-4.21(m 5H)，4.10(s，2H)，3.42(t，2H)，2.79(q，2H)，2.10(s，3H)，2.03(m，2H)，1.78(m，2H)，1.17(t，3H)；MS(ESI+)m/z 459.2[M+H]+
实施例11(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000601
甲基(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯
如实施例10中所述地制备，从1g(0.317mmol)苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(参见制备物E)开始，并使用氯甲酸甲酯(1当量)形成氨基甲酸酯，以产生131mg(4个步骤的总产率，12％)的灰白色固体。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ7.86(m，2H)，7.52(ddd，1H)，7.33(ddd，1H)，5.62(br s，2H)，4.60(t，2H)，4.54-4.35(m，3H)，4.33-4.18(m，2H)，4.09(s，2H)，3.73(s，3H)，3.39(t，2H)，2.78(q，2H)，1.99(m，2H)，1.73(m，2H)，1.17(t，3H)；MS(ESI+)m/z 475.2[M+H]+
方案9：实施例12的合成(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000611
实施例12(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000621
1-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)脲
步骤1：在配备有回流冷凝器的50mL两口圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、苄基((1-(4-氨基丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(参见制备物E)(1.000g，2.317mmol)、1，1-二氧代硫杂环丁-3-基甲磺酸酯(557mg，2.781mmol，1.2当量)、DIPEA(1.797g，13.904mmol，6当量)和THF/水的混合物(4∶1v/v，20mL)以得到黄色混悬液，将其在回流下加热直到2小时之后TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液90∶9∶1)和HPLC/MS表明起始物质的完全消耗。然后将反应混合物冷却至室温。接下来添加二碳酸二叔丁酯(Boc2O)(506mg，2.317mmol，1当量)、N，N-二异丙基乙胺(599mg，4.635mmol，2当量)和4-二甲基氨基吡啶(28mg，0.232mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌。18小时之后，TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明不完全转化。添加另外的Boc2O(506mg，2.317mmol，1当量)，并将反应混合物在60℃下进一步搅拌过夜。TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS仍表明转不完全化。在接下来的4小时内每80分钟添加另外的Boc2O(1.011g，4.635mmol，2当量)和DIPEA(599mg，4.635mmol，2当量)，并将反应混合物在60℃下进一步搅拌以获得完全转化。然后将反应混合物在减压下浓缩，将剩余物溶解在CH2Cl2(100mL)中，并依次用10％CuSO4水溶液(2×50mL)和饱和NaHCO3水溶液(2×50mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到1.48g(定量的，粗制的)为微红黄色油状物的叔丁基(4-(2-((((苄氧基)羰基)(乙基)氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯，其在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 636.4[M+H]+
步骤2：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、粗制叔丁基(4-(2-((((苄氧基)羰基)(乙基)氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯(1.480g，2.328mmol)和CH2Cl2(20mL)以得到微红黄色溶液。在5分钟内分批添加固体3-氯苯并过氧酸(1.004g，5.820mmol，2.5当量)，并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。向溶液中添加氨溶液(32％，20mL)，随后添加对甲苯磺酰氯(1.065g，5.587mmol，2.4当量)，并将两相混合物在室温下剧烈搅拌过夜。TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。分离两层，并将有机层用水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到1.515g为微红黄色油状物的叔丁基(4-(4-氨基-2-((((苄氧基)羰基)(乙基)氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯，其在没有另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 651.4[M+H]+
步骤3：在具有隔膜和氩进样口的圆底烧瓶中装入粗制叔丁基(4-(4-氨基-2-((((苄氧基)羰基)(乙基)氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯(1.515g，2.328mmol)和CH2Cl2(20mL)以得到微红黄色溶液。然后添加三乙胺(283mg，2.793mmol，1.2当量)、4-二甲基氨基吡啶(28mg，0.233mmol，0.1当量)和氯甲酸苄酯(477mg，2.793mmol，1.2当量)，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。在接下来的3小时内分批添加另外的氯甲酸苄酯(2.54g，14.89mmol，6.4当量)和三乙胺(1.51g，14.89mmol，6.4当量)，并将反应混合物在室温下进一步搅拌过夜，直到TLC监测(CHCl3/MeOH/32％氨溶液140∶9∶1)和HPLC/MS表明完全转化。然后将反应混合物倒入饱和NH4Cl水溶液(100mL)中，并用二氯乙烷(3×50mL)萃取。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。剩余物通过快速色谱法在二氧化硅上纯化(在含2％浓氨溶液的石油醚中的30％EtOAc/EtOH 3∶1)，以得到257mg(14％)为黄色油状物的苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-((叔丁氧羰基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。
MS(ESI+)m/z 785.6[M+H]+
步骤4：在配备有磁力搅拌棒的10mL圆底烧瓶中装入苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-((叔丁氧羰基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(257mg，0.327mmol)和无水1，4-二氧杂环己烷(5mL)以得到黄色溶液。添加4N HCl/1，4-二氧杂环己烷(2.5mL)之后，将反应混合物在室温下搅拌60分钟。TLC监测(含2％浓氨溶液的石油醚中的50％EtOAc/EtOH 3∶1)表明完全转化。然后将反应混合物在真空中浓缩，将剩余物溶解在甲醇中，并通过离子交换色谱法在AgilentStratoSpheres PL-HCO3 MP SPE芯(见上文)上进行去离子化，以分离230mg(定量的，粗制的)为黄色油状物的苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-((1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。该物质在没有另外纯化的情况下用于下一实验。
MS(ESI+)m/z 685.4[M+H]+
步骤5：在圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-((1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(230mg，0.336mmol)、三乙胺(47μL，0.336mmol，1当量)和无水氯仿(5mL)，并将所得黄色溶液在冰浴中冷却至0至4℃。在添加三甲基甲硅烷基异氰酸酯(46μL，0.336mmol，1当量)之后，将反应物在室温下搅拌。通过TLC(含2％浓氨溶液的石油醚中的70％EtOAc/EtOH 3∶1)和通过HPLC/MS监测反应进程。在45分钟的反应时间之后，添加另外的三甲基甲硅烷基异氰酸酯(一滴)，并且需要在室温下进一步搅拌2小时以获得完全转化。然后通过添加水(1mL)淬灭反应，并随后在室温下搅拌30分钟。然后将混合物用无水乙醇(20mL)稀释，并在减压下浓缩至约一半体积(约10mL)。添加无水乙醇(20mL)，并将溶液在真空中蒸发。将剩余物溶解在少量甲醇中，加载至
Figure BDA0002400952140000641
NT(订货号1.15092.1000，Merck KGaA)，并通过快速色谱法在硅胶上进行纯化(含2％浓氨溶液的石油醚中的40％EtOAc/EtOH 3∶1)以得到110mg(45％)为浅黄色固体的苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-(1-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)脲基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯。
MS(ESI+)m/z 728.4[M+H]+
未进行NMR测量，因为该化合物在普通NMR溶剂中的不溶性。
步骤6：在配备有隔膜进样口冲洗适配器和活塞的圆底烧瓶中装入磁力搅拌棒、苄基((4-(((苄氧基)羰基)氨基)-1-(4-(1-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)脲基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-2-基)甲基)(乙基)氨基甲酸酯(97mg，0.133mmol)和甲醇(20mL)以得到无色混悬液。在添加10％钯/活性炭(142mg，0.133mmol，1当量)之后，将设备连接到充满氢的气球上，并交替抽空并填充氢3次。然后使氢进入该系统中，并将反应混合物在大气压下在室温搅拌过夜。TLC监测(含2％浓氨溶液的石油醚中70％EtOAc/EtOH 3∶1)和HPLC/MS表明起始物质的完全消耗。用氩净化设备，并通过在部分粗孔隙度(孔隙度＝16至40μm)的玻璃过滤漏斗上经由
Figure BDA0002400952140000651
Hyflo Supercel的薄垫进行的过滤来除去催化剂。滤饼用MeOH(3×50mL)洗涤，并将合并的滤液通过0.45μm PTFE膜过滤以除去催化剂剩余物，并在减压下浓缩以得到30mg(49％)米黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.03(dd，1H)，7.61(dd，1H)，7.43(ddd，1H)，7.27(ddd，1H)，6.46(s，2H)，6.12(s，2H)，4.60(t，2H)，4.56-4.37(m，3H)，4.33-4.19(m，2H)，4.03(s，2H)，3.25(m，2H)，2.63(q，2H)，1.83(m，2H)，1.66(m，2H)，1.06(t，3H)；MS(ESI+)m/z 460.1[M+H]+
方案10：实施例13至15的合成(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000661
实施例13(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000671
N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)乙酰胺
步骤1：向1-(4-氯丁基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(在实施例5，步骤1至3中获得)(286mg，0.859mmol)在无水DMA(10mL)中的溶液中添加碘化钠(129mg，0.859mmol，1当量)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(449μL，2.578mmol，3当量)、硫杂环丁-3-胺盐酸盐(341mg，2.578mmol，3当量)和分子筛
Figure BDA0002400952140000672
粉末＜5微米(Aldrich)(1.5g)。将黄色反应混合物在100℃下搅拌，直到4天之后HPLC/MS监测表明完全反应和期望的物质的形成。将反应混合物过滤并在减压下浓缩，以得到504mg(粗制)为褐色剩余物的2-(2-甲氧基乙基)-1-(4-(硫杂环丁-3-基氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。该粗制物质在没有任何另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 385.9[M+H]+
步骤2：在梨形烧瓶中装入磁力搅拌棒、粗制2-(2-甲氧基乙基)-1-(4-(硫杂环丁-3-基氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(504mg，1.3mmol)、2M NaOH(6.536mL，13.07mmol，10当量)和水(5mL)以得到褐色混悬液。在添加乙酸酐(1.22mL，13.07mmol，10当量)之后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。HPLC/MS监测表明起始物质的完全消耗。过滤反应混合物，并通过制备型HPLC分离产物，以得到91mg(16％)为黄米色固体的N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(硫杂环丁-3-基)乙酰胺。
MS(ESI+)m/z 427.9[M+H]+
步骤3：在梨形烧瓶中装入磁力搅拌棒、N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(硫杂环丁-3-基)乙酰胺(91mg，0.213mmol)、氯仿(5mL)和甲醇(5mL)以得到浅黄色溶液。向溶液中分批添加固体3-氯苯并过氧酸(110mg，0.638mmol，3当量)，并将反应物在室温下搅拌过夜。HPLC/MS监测表明不完全反应。需要另外的3-氯苯并过氧酸(73mg，0.426mmol，2当量)和进一步搅拌过夜以获得起始物质的完全转化。将溶液在氯仿(50mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)之间分配。将层分离，将有机层依次用饱和NaHCO3水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。粗制物质通过制备型HPLC纯化，以得到6.4mg(7％)的灰白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.03(d，1H)，7.64(dd，1H)，7.46(ddd，1H)，7.30(ddd，1H)，6.42(s，2H)，4.66-4.16(m，7H)，3.84(t，2H)，3.39(t，2H)，3.30(s，3H)，3.20(t，2H)，2.03(s，3H)，1.86-1.62(m，4H)；MS(ESI+)m/z 459.8[M+H]+
实施例14(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000681
甲基(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)氨基甲酸酯
步骤1：将N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(1，1-二氧代硫杂环丁-3基)乙酰胺(实施例13)(440mg，0.95mmol)混悬在甲醇(12mL)中，然后添加浓HCl(2.5mL)。将混合物在微波辐射下在100℃下搅拌，直到2.5小时之后HPLC/MS监测表明几乎完全转化。然后将反应物用CH2Cl2(200mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将水相用CH2Cl2萃取两次，并将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到380mg(87％)为浅黄色无定形固体的3-((4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物盐酸盐，其在没有任何另外纯化的情况下用于下一步。
MS(ESI+)m/z 418.4[M+H]+
步骤2：在室温下向3-((4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物盐酸盐(114mg，0.27mmol)和K2CO3(94mg，0.81mmol，3当量)在H2O(3mL)中的混悬液中添加氯甲酸甲酯(21μL，0.27mmol，1当量)，并将混合物在室温下搅拌过夜。HPLC/MS监测表明不完全转化。需要另外的氯甲酸甲酯(21μL，0.27mmol，1当量)和进一步搅拌1小时以获得起始物质的完全消耗。然后将反应混合物用CH2Cl2(200mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。弃去水相，并将有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将该粗制物质进行制备型TLC(SiO2 20cm2，CH2Cl2/甲醇/32％氨溶液190∶9∶1至230∶18∶2，然后是CH2Cl2/甲醇/32％氨溶液150∶9∶1)以获得50mg(38％)白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.0(d，1H)，7.62(dd，1H)，7.42(ddd，1H)，7.26(ddd，1H)，6.43(s，2H)，4.59-4.24(m，7H)，3.83(t，2H)，3.59(s，3H)，3.33(t，2H)，3.30(s，3H)，3.18(t，2H)，1.69(m，4H)；MS(ESI+)m/z 476.5[M+H]+
实施例15(用于举例说明的目的)
Figure BDA0002400952140000691
1-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(1，1-二氧代硫杂环丁-3-基)脲
将3-((4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)氨基)硫杂环丁烷1，1-二氧化物盐酸盐(在实施例14，步骤1中获得)(270mg，0.64mmol)和三乙胺(404μL，2.91mmol，4.5当量)在氯仿(10mL)中混合。在0℃下添加三甲基甲硅烷基异氰酸酯(96μL，0.71mmol，1.1当量)，并将混合物在室温下搅拌2小时。通过TLC(CH2Cl2/CHCl3/甲醇/32％氨溶液100∶80∶18∶2)和HPLC/MS监测反应。需要另外的三甲基甲硅烷基异氰酸酯(192μL，1.40mmol，2.2当量)和在室温下进一步搅拌过夜以获得起始物质的完全消耗。然后将反应混合物过滤并将滤液用CH2Cl2(200mL)稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。然后将水相用CH2Cl2萃取两次，并将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型TLC(CH2Cl2/甲醇/32％氨溶液150∶9∶1然后是180∶18∶2)纯化粗制物质，以得到34mg(11％)的灰白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.04(d，1H)，7.63(d，1H)，7.44(t，1H)，7.29(t，1H)，6.57(br s，2H)，6.13(s，2H)，4.73-4.17(m，7H)，3.84(t，2H)，3.30(m，5H)，3.19(t，2H)，1.78(m，2H)，1.65(m，2H)；MS(ESI+)m/z 461.4[M+H]+
实施例A-体外分析：
1)IFN-α诱导测定-在人PBMC中通过TLR激动剂进行的IFN-α诱导
缩写：BSA＝牛血清白蛋白；PBS＝pH 7.4的磷酸盐缓冲液；PE＝藻红蛋白；EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐。
材料和设备：Bio Plex 200Luminex装置和BioPlex Manager软件；多筛滤板(Millipore，MABVN1250)；1.5mL的低结合反应小瓶(Sarstedt，72,706,600)；激活缓冲液：0.1M磷酸二氢钠，pH 6.2的0.1M磷酸氢二钠；磺基-NHS(N-羟基磺基琥珀酰亚胺)溶液：在水中50mg/mL(新鲜制备的)；EDC溶液：在水中50mg/mL(新鲜制备的)；偶联缓冲液：PBS；洗涤缓冲液：PBS+0.05％Tween20；封闭缓冲液：PBS+10mg/mL BSA+0.05％叠氮化钠；测定缓冲液：PBS+10mg/mL BSA；
其他材料和设备(移液管，反应容器，摇床等)是标准实验室设备；水为MilliQ级质量，缓冲液在使用之前无菌过滤。
细胞的(预)孵育：
在96孔U型底板的每个孔中，将200,000个PBMC在37℃和5％CO2下在培养基(RPMI1640-Gibco#61870-044+10％FBS+1％L-谷氨酰胺)中预孵育5小时，然后分别添加本发明的化合物或对照。添加本发明的化合物或对照之后，将细胞在37℃和5％CO2下再孵育24小时。
Luminex测定，步骤1：抗体与珠的偶联：
-将约500万个MicroPlex微球(＝珠)的混悬液(如制造商所提供的，将珠存储在缓冲液中)转移到低结合反应小瓶中
-将珠混悬液在10,000g下离心1分钟，弃去上清液并将沉淀物重悬于160μl激活缓冲液中，重复一次
-添加20μl磺基-NHS溶液和20μl EDC溶液，涡旋
-在没有光的情况下孵育20分钟
-将珠混悬液在10,000g下离心1分钟，弃去上清液并将沉淀物重悬于500
μl偶联缓冲液中，重复一次
-添加捕获抗体(CaptureAK eBioscience#BMS 160，每1Mio珠5μg)
-在没有光的情况下在RT下孵育2小时同时摇晃
-将珠混悬液在10,000g下离心1分钟，弃去上清液并将沉淀物重悬于500μl洗涤缓冲液中，重复一次
-将珠混悬液在10,000g下离心1分钟，弃去上清液并将沉淀物重悬于100μl封闭缓冲液中
Luminex测定，步骤2：测量
-在每个滤板孔中添加100μl测定缓冲液(用胶带密封任何未使用的孔)，然后除去缓冲液
-每个分析物每孔添加混悬在50μL测定缓冲液中的约2,000个珠(每个分析物，使用具有不同荧光颜色的不同珠类型)
-除去缓冲液并且每孔用100μl洗涤缓冲液洗涤两次
-每孔，添加50μl来自以下的样品溶液：(预)孵育步骤(细胞上清液)或标准液(IFN-α标准eBioscience#BMS216MST-浓度梯度，最高标准浓度2500pg/mL)或测定缓冲液(作为空白)
-摇晃板
-在没有光的情况下在RT下将板孵育2小时，同时摇晃板
-每孔用100μl洗涤缓冲液洗涤3次
-每孔添加在测定缓冲液中的25μl抗体检测混合物(1∶1000稀释的DetctionAKeBioscience#BMS 1016BT)，然后涡旋板
-在没有光的情况下在RT下将板孵育1小时，同时摇晃板
-每孔用100μl洗涤缓冲液洗涤3次
-每孔添加50μl链霉亲和素/PE(在测定缓冲液中1∶200稀释)，然后涡旋板
-在没有光的情况下在RT下将板孵育10分钟，同时摇晃板
-每孔用100μl洗涤缓冲液洗涤3次
-每孔添加100μl测定缓冲液，然后涡旋板
-根据制造商的说明开始Luminex测量，每个分析物每孔测量至少50个珠
使用半对数稀释在8种不同浓度(1μM，0.3μM，0.1μM，0.03μM，0.01μM，0.003μM，0.001μM，0.0003μM)下测试化合物。干扰素-α(IFN-α)的释放在稀释窗口内呈钟形(bell-shaped)分布，并且以pg/mL测量。浓度-响应分布的最高点(即钟形曲线的最大值)表示IFN-α的最大释放。在所有受试化合物中，最大刺激发生在不同浓度下。
本实施例1至6的化合物显示以下结果：
表1
Figure BDA0002400952140000731
Figure BDA0002400952140000741
作为比较，在WO-A-2009/118296中作为实施例III所描述的比较化合物3-{乙酰基[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]氨基}-2，5-酐-1，3，4-三脱氧基戊糖醇仅显示出本实施例1的最大IFN-α释放的约50％。此外，如可根据表2中的数据所表明的，在R3位置具有2-甲基四氢呋喃-3-基基团而不是四氢吡喃-4-基基团的相应比较化合物表现出低得多的最大IFN-α释放。
表2
Figure BDA0002400952140000751
2)TLR刺激测定：
通过在分别用人TLR7和TLR8稳定转染并共表达NFkB/AP-1诱导型SEAP报道基因的细胞系中分析的报道基因表达，分别测试了化合物对人TLR7和TLR8的刺激。用TLR配体进行的刺激导致NFkB/AP-1激活以及SEAP的上调和分泌，这可用QuantiBlueTM检测系统(InvivoGen)在上清液中进行测量。
使用的细胞系是HEK-Blue-hTLR7(InvivoGen#hkb-htlr7)或HEK-Blue-hTLR8(InvivoGen#hkb-htlr8)。按照制造商的说明书培养细胞。
测定：
-在不含抗生素的培养基(DMEM 4，5g/l葡萄糖，2至4mM L-谷氨酰胺+10％FBS)中以Nv＝0.11×106个细胞/mL制备每个细胞系的细胞混悬液(Nv＝活细胞数目)
-在96孔平底细胞培养板的每孔中添加180μl混悬液(coster，#3506)
-在37℃和5％CO2下孵育板过夜
-在DMSO中制备为溶液的样品和对照：R848，CL075(InvivoGen的TLR 7/8激动剂)和Guardiquimod，各自的最终浓度为10μM，ODN2006(InvivoGen)和ODN2216(InvivoGen)，各自的最终浓度为2μM；本发明的化合物以最终浓度为30μM、10μM、3μM、1μM等的稀释系列来应用。
-向孔中添加20μl稀释的化合物和对照(参见上文)
-在37℃和5％CO2下孵育板20至24小时
-按照制造商的说明书制备QuantiBlueTM(InvivoGen#10H19-MM)溶液：将一小袋的粉末溶解在100mL MilliQ级水中，在37℃的水浴中加热约30分钟，用滤纸过滤溶液
-在平底96孔板的每个孔中添加100μl制备的QuantiBlueTM溶液
-每孔添加来自诱导的细胞的25μl细胞培养上清液
-在37℃下将板孵育1至1.5小时(直到已形成深蓝色)
-用读板器在620nm下读取OD
-根据数据点计算EC50
实施例1的化合物在TLR7报道基因测定中显示出44nM的EC50。相比之下，在WO-A-2009/118296中作为实施例III所描述的比较化合物3-{乙酰基[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]氨基}-2，5-酐-1，3，4-三脱氧基戊糖醇在TLR7报道基因测定中显示出十倍高的为440nM的EC50。
此外，实施例1的化合物在上述TLR8报道基因测定中未显示出对TLR8的活性。但是，在位置R2处缺少乙酰基的相应的比较化合物(即在WO-A-2009/118296中作为实例V所描述的2-乙基-1-(4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)丁基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺)在同一TLR8报道基因测定中显示出对TLR8的活性，但在上述TLR7报道基因测定中在多至30μM浓度下未表现出对TLR7的任何活性。因此，这些数据证明本申请的化合物是相对于TLR8，TLR7的选择性激动剂。特别地，本申请的发明人已经发现，式(I)的氨基NR2R3的双取代与TLR7选择性相关，而式(I)的氨基NR2R3的单取代(即，其中R2为H)导致对TLR8具有选择性的化合物。
实施例B-体内分析：
在以下研究中，在体内食蟹猴模型中检查了根据本发明的化合物。评价该化合物是否以及在何种施用剂量下引起IFN-α的分泌。
特别地，通过三十分钟的输注将确定的单剂量测试化合物静脉内施用于食蟹猴。在静脉内化合物施用开始之后的数个时间点，从动物的前臂头静脉或隐静脉收集血液样品(对于约0.25mL血浆，0.5mL)到K3EDTA管中。在离心之前，将血液样品存储在碎冰上。通过在4℃和约1800g下离心10分钟获得血浆，并将其等分到经标记的微管中，并冷冻保存在-70℃或更低的温度下。将血浆样品解冻，稀释并用于使用IFN-αElisa试剂盒(例如VeriKineTM食蟹猴/猕猴IFN-αELISA试剂盒)根据制造商的说明书来进行的IFN-α水平确定。
结果表明，本发明的化合物在食蟹猴中在体内引起IFN-α分泌，而载剂的应用未导致可测量的IFN-α水平。IFN-α的血浆峰值浓度通常在化合物的施用开始之后约150分钟达到。特别地，分别施用1、3和10mg/kg单剂量本发明实施例1的化合物导致约80,000至约100,000pg/mL的峰值血浆IFN-α浓度。对实施例1的化合物测试的最小剂量为0.1mg/kg，导致多至约15,000pg/mL的IFN-α分泌，而0.3mg/kg的剂量导致约40,000至约80,000pg/mL的IFN-α峰值血浆浓度。施用10、3或1mg/kg单剂量的本发明实施例5的化合物分别导致约40,000至约120,000pg/mL、约12,000至约110,000pg/mL和约12,000至约120,000pg/mL的峰值血浆IFN-α浓度。对实施例5的化合物测试的最小剂量是0.03mg/kg，导致约390至约10,800pg/mL的峰值血浆IFN-α浓度。

Claims (12)

1.具有通式(I)的化合物或其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐：
Figure FDA0002400952130000011
其中
R1选自-H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基、C6-10-芳基、C6-10-芳基-C1-2-烷基和5至10元杂芳基，其中所述C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基、C6-10-芳基-C1-2-烷基和5至10元杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN；
R2选自-CO-R5、-CONH-R5和-COO-R5；
R3是四氢吡喃-4-基，其任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4-烷基、-OH和卤素，
R4各自独立地选自H和C1-4-烷基；
n是3至6的整数；并且
R5选自-H、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基和5至10元杂芳基，其中所述C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-6-烷硫基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基、C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基、C6-10-芳基、4至10元杂环烷基、C3-10-环烷基和5至10元杂芳基任选地被一个或更多个独立地选自以下的基团取代：C1-4烷基、-OH、卤素、-CO-N(R4)2、-N(R4)2、-CO-R4、-COO-R4、-N3、-NO2和-CN。
2.根据权利要求1所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其中R1选自C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，特别是C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基和C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基，其中所述C1-6-烷基、C1-3-烷氧基-C1-3-烷基、C1-3-烷硫基-C1-3-烷基或C1-3-烷基氨基-C1-3-烷基任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其中R1选自乙基、甲基、丙基、丁基、甲氧基乙基和乙基氨基甲基，其各自任选地被一个或更多个独立地选自-OH和卤素的基团取代。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其中R2选自-CO-R5和-CONH-R5，特别地R2是-CO-R5。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其中R3是未经取代的四氢吡喃-4-基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其中n是3至5的整数，特别地n是4。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐，其选自：
N-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺；
1-(4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲；
N-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺；
1-(4-(4-氨基-2-((乙基氨基)甲基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲；
N-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺；
1-(4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-基)丁基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)脲；
及其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐。
8.药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐以及一种或更多种可药用赋形剂。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐或者根据权利要求8所述的药物组合物，其用作药物。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐或者根据权利要求8所述的药物组合物，其用于治疗或预防选自增生性疾病的医学病症，所述增生性疾病特别是癌症。
11.治疗或预防选自增生性疾病的医学病症的方法，所述增生性疾病特别是癌症，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐或者根据权利要求8所述的药物组合物。
12.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其生理功能性衍生物、溶剂合物或盐在制备用于治疗或预防选自增生性疾病的医学病症的药物中的用途，所述增生性疾病特别是癌症。
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