CN111044716A - 封闭剂及封闭方法 - Google Patents
封闭剂及封闭方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111044716A CN111044716A CN201911264758.5A CN201911264758A CN111044716A CN 111044716 A CN111044716 A CN 111044716A CN 201911264758 A CN201911264758 A CN 201911264758A CN 111044716 A CN111044716 A CN 111044716A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- buffer
- bsa
- blocking agent
- blocking
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000007789 sealing Methods 0.000 title abstract description 11
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims abstract description 52
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 42
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 36
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 36
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 14
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000565 sealant Substances 0.000 abstract 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 16
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 8
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 7
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 7
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 7
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 7
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 5
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O XPFJYKARVSSRHE-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种封闭剂，其包括BSA和缓冲液，所述缓冲液的pH值为3.8～5.0。该封闭剂能够克服常规封闭剂中存在的缺陷。此外，本发明还涉及封闭方法。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，具体涉及固相载体的封闭方法。
背景技术
在免疫分析过程中，固相载体常用于与特定的免疫分析物结合，从而作为捕获组分对样本中存在的某一(些)物质进行测定。在结合了特定的免疫分析物后，需要对固相载体未结合的位置(位点)进行封闭，以避免非特异性结合对测定所带来的干扰。
目前，常用的固相载体封闭剂有BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等。
脱脂奶粉含有多种不同分子量的蛋白，其最大的优点在于价钱便宜，但其成分相对复杂，而且自身含有生物素，因此在使用生物素-亲和素系统时，会使得高背景或本底水平增高，所以使用范围相对较窄。另外，用脱脂奶粉封闭后的载体也不易长期保存。
BSA是另一种常见的封闭剂，其来源于牛血清，特点在于成分单一，因此适合对特异性要求较高的实验。但是BSA中会存在抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，使得本底水平增高，从而影响检测结果。
酪蛋白与BSA作用类似，但酪蛋白不易溶解，配置较为困难。
综上所述，当前免疫分析领域中所使用的封闭剂或多或少存在一些缺陷，从而为测试本身带来一定负面影响，故存在着对于改善封闭剂的效果的强烈需求。
发明内容
为了克服已有封闭剂所存在的缺陷，本发明人对常见的BSA封闭剂的参数进行了研究，从而完成本发明。
据此，在第一方面，本发明提供了一种封闭剂，其包括BSA和缓冲液，并且所述缓冲液的pH值为约3.8～约5.0。
对固相载体进行封闭后，与常规的BSA封闭剂相比，本发明的封闭剂显著地减少了本底信号值。不希望受到理论的束缚，我们推测，这是由于在pH约3.8～约5.0的缓冲体系下，能够减少BSA中残留的抗体所发生的交叉反应。由于本底信号值的降低，本发明的封闭剂提高了免疫分析试剂的线性范围。进一步地，采用本发明的封闭剂在较高温度的条件(如水浴)下仍具有封闭效果，提高封闭效率的同时，还能保证封闭效果的稳定性，从而利于准确的检测结果。
在一些实施方式中，BSA的浓度为约20～约200mg/mL。
在优选的实施方式中，BSA的浓度为约80～约120mg/mL。
通过选择约80～约120mg/mL的BSA浓度范围，本发明进一步降低了本底信号值，从而有利于提高检测试剂的线性范围；同时，BSA的使用浓度控制在较低水平，有利于降低检测试剂的成本。
在更优选的实施方式中，本发明的BSA的浓度为约100mg/mL。
在一些实施方式中，本发明的缓冲液由弱酸配制的缓冲液。
在示例性的实施方式中，本发明的缓冲液选自乙酸缓冲液和柠檬酸缓冲液。
在具体的实施方式中，本发明的缓冲液为乙酸缓冲液。
在优选的实施方式中，本发明的缓冲液的pH值为约4.4～约4.9。
通过选择约4.4～约4.9的pH范围，本发明能够进一步降低封闭后的本底信号值，从而有利于提高检测试剂的线性范围。
在更优选的实施方式中，缓冲液的pH值为约4.5～约4.7。
在第二方面，本发明提供了一种免疫检测试剂，其包括本发明的封闭剂。
在第三方面，本发明提供了一种用于免疫检测的试剂盒，其包括本发明的封闭剂。
在第四方面，本发明提供了一种封闭方法，包括将固相载体与封闭剂混合进行孵育，其中，所述封闭剂包括BSA和缓冲液，并且所述缓冲液的pH值为约3.8～约5.0。
在一些实施方式中，BSA的浓度为约20～约200mg/mL。
在优选的实施方式中，BSA的浓度为约80～约120mg/mL。
在更优选的实施方式中，本发明的BSA的浓度为约100mg/mL。
在一些实施方式中，本发明的缓冲液由弱酸配制的缓冲液。
在示例性的实施方式中，所述缓冲液选自乙酸缓冲液和柠檬酸缓冲液。
在具体的实施方式中，本发明的缓冲液为乙酸缓冲液。
在优选的实施方式中，本发明的缓冲液的pH值为约4.4～约4.9。
在更优选的实施方式中，缓冲液的pH值为约4.5～约4.7。
在一些实施方式中，孵育在大于等于33℃且小于等于37℃的温度下进行20min至3天。
在具体的实施方式中，孵育在约37℃的温度下进行20min至3天。
在一些实施方式中，孵育在大于37℃且小于等于45℃的温度下进行20min至1天。
在具体的实施方式中，孵育在45℃的温度下进行20min至1天。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
如本文所使用的，“BSA(牛血清白蛋白)”又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白。
在本发明中，BSA的浓度可以为约20～约200mg/mL，例如，可以为约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL或190mg/mL。
在本发明中，“缓冲液”是指当加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用(缓冲作用)的溶液。
根据常用缓冲液的pH范围，本领域技术人员能够选择适用于本发明的缓冲液，示例性缓冲液可以是弱酸缓冲液，如乙酸缓冲液和/或柠檬酸缓冲液等。
如本文所使用的，术语“弱酸”是指电离常数(Ka)小于0.0001(即酸度系数pKa大于4)的酸。
如本文所使用的，术语“乙酸缓冲液”又称醋酸缓冲液，是指使用乙酸作为H+供体的缓冲液。例如，乙酸缓冲液可由乙酸配制而成。又例如，乙酸缓冲液可由乙酸和乙酸钠配制而成。
如本文所使用的，术语“柠檬酸缓冲液”是指使用柠檬酸作为H+供体的缓冲液。例如，柠檬酸缓冲液可由柠檬酸配制而成。又例如，柠檬酸缓冲液可由柠檬酸和柠檬酸钠配制而成。再例如，柠檬酸缓冲液可由柠檬酸和磷酸二氢钠配制而成。
本领域技术人员可以根据所选择的缓冲液种类和所需要pH值来配制合适的缓冲液。例如，当使用pH为4.0的乙酸缓冲液时，可以使用约1.8mL的0.2M乙酸钠和约8.2mL的0.2M的乙酸混合来进行配制。又例如，用pH为4.0的乙酸缓冲液时，可以先使用16.4g/L的乙酸钠、13mL的冰醋酸和950mL的水混合，再使用冰醋酸将pH值调节至4.0。再例如，当使用pH为4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液时，可以使用约9.2mL的0.1M的柠檬酸和约10.8mL的0.1M的柠檬酸钠来进行配制。
在本发明中，缓冲液的pH值可以为约3.8～约5.0，例如可以为约3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8或4.9。
在本发明中，“固相载体”、“固相支持物”、“固体支持物”和“固体载体”可以互换使用，其是指可以附着抗原或抗体或它们的片段的固体表面。对用于本发明的固相载体没有特别的限制，商品化的固相载体及任何可用于免疫分析的固相载体均可用于本发明。示例性的固相载体可以是磁珠(如生物素磁珠、羧基磁珠等)、酶标板、塑料板、塑料管、乳胶珠、琼脂糖珠、玻璃、硝酸纤维素膜、尼龙膜、二氧化硅板或微芯片，但本发明不限于此。
在本发明中，使用封闭剂封闭固相载体时的孵育时间可例如为0至3天，如约20min、30min、1h、2h、6h、1天或2天。
在本发明中，使用封闭剂封闭固相载体时的孵育温度可例如为约33～45℃，如约34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃或44℃。
以下通过实施例更详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1制备具有不同pH的缓冲液的封闭剂
第一步，根据下表1中的记载分别配制pH3.8、pH4.6和pH5.0乙酸缓冲液。
表1
| 投料顺序 | 原料名称 | 浓度 | 备注 |
| ① | 无水乙酸钠 | 16.4g/L | / |
| ② | 纯化水 | 950mL/L | 完全溶解 |
| ③ | 冰醋酸 | 约13mL/L | 使用冰醋酸调pH |
第二步，将100mg/mL的BSA分别溶解于第一步所配制的乙酸缓冲液中，制得下表2所示的封闭剂。
表2
| 封闭剂1 | 封闭剂2 | 封闭剂3 | |
| 乙酸缓冲液pH值 | 3.8 | 4.6 | 5.0 |
实施例2具有不同pH的缓冲液的封闭剂对本底信号的影响
实验材料：
磁珠：购自四川迈克生物新材料技术有限公司，货号XCL1026(链霉亲和素磁珠)。
维生素D测定试剂盒，其配制方式如下表3所示。
表3
维生素D校准品，其配制方式如下表4所示。
表4
实验步骤：
1)取500μL封闭剂与含1mg链霉亲和素磁珠进行混合，37℃封闭1天；按说明书的记载进行洗涤后；得到封闭的链霉亲和素磁珠；
2)使用步骤1)得到的封闭的磁珠按照按照表3配制试剂R1，同时按照表3和表4配制试剂R2和维生素D浓度为0mg/mL的校准品；接着按试剂R1:试剂R2:维生素D校准品体积比1:1:1混合；并孵育10min后，加入发光底物；
3)使用迈克生物化学发光自动分析仪i3000测量发光值。
分别使用实施例1中制备的封闭剂1～3以及常规BSA封闭剂(Tris缓冲液，pH7.3)，按照上述步骤1)至3)共进行五次测定，其中采用未封闭的磁珠作为对照，结果如下表5所示。
表5
由表5可知，在经历相同的封闭条件和水浴后，与常规的BSA封闭剂相比，本发明的封闭剂能够显著地降低本底信号。另外，当本发明的封闭剂pH为4.6时，本底信号的降低效果最佳。
实施例3制备含不同浓度BSA的封闭剂
第一步，根据下表6中的记载配制pH4.6之间的乙酸缓冲液。
表6
第二步，将不同含量的BSA分别溶解于第一步所配制的乙酸缓冲液中，制得下表7所示的封闭剂。
表7
| 封闭剂4 | 封闭剂5 | 封闭剂6 | 封闭剂7 | |
| BSA浓度 | 5mg/mL | 20mg/mL | 50mg/mL | 120mg/mL |
实施例4具有不同BSA含量的封闭剂对本底信号的影响
分别使用实施例1所制备的封闭剂2和实施例3所制备封闭剂4～7，按照实施例2中的方法进行测定，其中以未封闭的磁珠作为对照，结果如下表8所示。
表8
由表8可知，使用本发明的BSA封闭剂并经历1天37℃水浴后，本底信号值随着BSA浓度的增加而降低。
实施例5封闭条件对本底信号的影响
为考察不同封闭条件对本底信号的影响，进一步使用封闭剂2，按照实施例2中的实验方法进行测定，其中封闭条件分别为37℃，1天；37℃，3天；和45℃，1天。结果如下表9所示。
表9
| 37℃，1天 | 37℃，3天 | 45℃，1天 |
| 1560 | 816 | 628 |
| 1317 | 807 | 654 |
| 1422 | 848 | 598 |
| 1406 | 886 | 655 |
| 1492 | 854 | 721 |
由表9可知，在45℃的封闭温度下，本发明的封闭剂具有更低的本底信号。另外，在37℃下，将封闭时长延长至3天有利于进一步降低本底信号。
实施例6水浴后，本发明封闭剂对试剂盒测试效果的影响
实验步骤：
1)取500μL封闭剂2与含1mg的链霉亲和素磁珠进行混合，37℃封闭1天，按说明书的记载进行洗涤后，得到封闭的链霉亲和素磁珠；
2)使用步骤1)处理后的封闭的磁珠按照表3配制试剂R1，将试剂R1在2～8℃下保存，或在37℃下水浴7天；同时按照表3和表4配制试剂R2、试剂R3和维生素D校准品Cal 1～5；接着按试剂R1:试剂R2:维生素D校准品体积比1:1:1混合；并孵育10min后；在加入1体积份试剂R3，孵育10min后，以与标准品中的维生素D竞争，加入发光底物；
3)使用迈克生物化学发光自动分析仪i3000测量发光值。
其中，以未封闭的磁珠作为对照，结果如下表8所示。
表8
由表8可知，在2～8℃的条件下，与对照组相比，使用本发明的封闭剂并未不改变原发光值。而在37℃水浴7天的情况下，采用本发明的封闭剂封闭的磁珠信号保留率变化趋势基本一致，说明能够降低水浴后磁珠的非特异性吸附，使曲线达到平移，达到理想状态。而对照组的磁珠在水浴后信号保留率呈逐渐上升的趋势，曲线变形，难以获得准确的检测结果。
实施例7采用柠檬酸缓冲液配制封闭剂对本底信号的影响
将100mg/mL的BSA加入到pH为4.6的柠檬酸水溶液中使其完全溶解，记为封闭剂8。
按照实施例2中的实验材料和实验方法进行测试，结果如下表9所示。
表9
由表9可知，采用柠檬酸缓冲液的封闭剂8，在37℃水浴1天后可以将本底信号降低至2400左右。
Claims (10)
1.一种固相载体的封闭剂，包括BSA和缓冲液，所述缓冲液的pH值为3.8～5.0。
2.如权利要求1所述的封闭剂，其中，所述BSA的浓度为20～200mg/mL，优选为80～120mg/mL。
3.如权利要求1或2所述的封闭剂，所述缓冲液为使用弱酸配制的缓冲液，例如，所述缓冲液选自乙酸缓冲液和柠檬酸缓冲液。
4.如权利要求1或2所述的封闭剂，其中，所述缓冲液的pH值为4.4～4.9，优选为4.5～4.7。
5.一种用于封闭固相载体的方法，包括将所述固相载体与封闭剂混合进行孵育，
其中，所述封闭剂包括BSA和缓冲液，并且所述缓冲液的pH值为3.8～5.0。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述BSA的浓度为20～200mg/mL，优选为80～120mg/mL。
7.如权利要求5或6所述的方法，所述缓冲液为使用弱酸配制的缓冲液，例如，所述缓冲液选自乙酸缓冲液和柠檬酸缓冲液。
8.如权利要求5或6所述的方法，其中，所述缓冲液的pH值为4.4～4.9，优选为4.5～4.7。
9.如权利要求5所述的方法，其中，所述孵育在大于33℃且小于等于45℃的温度下进行，例如，在大于等于33℃且小于等于37℃的温度或在大于37℃且小于等于45℃的温度下进行。
10.如权利要求5或9所述的方法，其中，所述孵育进行20min至3天，例如，20min至1天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911264758.5A CN111044716B (zh) | 2019-12-11 | 2019-12-11 | 封闭剂及封闭方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911264758.5A CN111044716B (zh) | 2019-12-11 | 2019-12-11 | 封闭剂及封闭方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111044716A true CN111044716A (zh) | 2020-04-21 |
| CN111044716B CN111044716B (zh) | 2023-11-14 |
Family
ID=70235585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911264758.5A Active CN111044716B (zh) | 2019-12-11 | 2019-12-11 | 封闭剂及封闭方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111044716B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117949272A (zh) * | 2024-01-31 | 2024-04-30 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种用于电化学发光检测的链霉亲和素磁珠的预处理方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07270423A (ja) * | 1994-03-30 | 1995-10-20 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫診断薬の製造方法 |
| JP2015190873A (ja) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞整列チップ、その製造方法、標的細胞の検出方法、標的細胞の検出装置および細胞捕捉不良領域の検出方法 |
| CN106399492A (zh) * | 2016-09-05 | 2017-02-15 | 清华大学 | 一种用bsa等电点封闭液构建可再生dna杂交界面的方法 |
| CN108896752A (zh) * | 2018-06-08 | 2018-11-27 | 深圳清华大学研究院 | 一种用于等离子体金芯片的封闭缓冲液 |
| CN109001453A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-12-14 | 沈阳百创特生物科技有限公司 | 一种基于胶乳免疫比浊法检测人体液样本中溶菌酶含量的试剂盒 |
| CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109781996A (zh) * | 2019-01-09 | 2019-05-21 | 吉林特研生物技术有限责任公司 | 一种肺炎克雷伯菌抗体elisa快速检测试剂盒及检测方法 |
| CN109991425A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-07-09 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法 |
-
2019
- 2019-12-11 CN CN201911264758.5A patent/CN111044716B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07270423A (ja) * | 1994-03-30 | 1995-10-20 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫診断薬の製造方法 |
| JP2015190873A (ja) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞整列チップ、その製造方法、標的細胞の検出方法、標的細胞の検出装置および細胞捕捉不良領域の検出方法 |
| CN106399492A (zh) * | 2016-09-05 | 2017-02-15 | 清华大学 | 一种用bsa等电点封闭液构建可再生dna杂交界面的方法 |
| CN108896752A (zh) * | 2018-06-08 | 2018-11-27 | 深圳清华大学研究院 | 一种用于等离子体金芯片的封闭缓冲液 |
| CN109001453A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-12-14 | 沈阳百创特生物科技有限公司 | 一种基于胶乳免疫比浊法检测人体液样本中溶菌酶含量的试剂盒 |
| CN109781996A (zh) * | 2019-01-09 | 2019-05-21 | 吉林特研生物技术有限责任公司 | 一种肺炎克雷伯菌抗体elisa快速检测试剂盒及检测方法 |
| CN109738626A (zh) * | 2019-02-19 | 2019-05-10 | 上海复星长征医学科学有限公司 | Ngal胶乳免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 |
| CN109991425A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-07-09 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 肌红蛋白的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117949272A (zh) * | 2024-01-31 | 2024-04-30 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种用于电化学发光检测的链霉亲和素磁珠的预处理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111044716B (zh) | 2023-11-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4169012A (en) | Stabilized peroxidase reagent for enzyme immunoassay | |
| CN109406796B (zh) | 类风湿因子检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN108982880A (zh) | 一种睾酮磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN111044716A (zh) | 封闭剂及封闭方法 | |
| TWI832901B (zh) | 血紅素之測定試劑、測定套組及測定方法 | |
| CN112129955B (zh) | 睾酮检测试剂盒 | |
| CN115825427A (zh) | 一种降低磁珠非特异吸附的方法及其制备的磁珠和应用 | |
| CN112763703B (zh) | 一种免疫磁珠及其制备方法和应用 | |
| WO2012161226A1 (ja) | Pivka-ii測定試薬における非特異反応の抑制方法 | |
| CN109239368A (zh) | 测定孕酮的方法及试剂盒 | |
| CN115327137B (zh) | 一种人免疫球蛋白g4亚型化学发光免疫检测试剂盒 | |
| CN111007263B (zh) | 一种检测试剂盒及检测方法 | |
| CN111521832A (zh) | 一种用于测定25-羟基-维生素d的试剂盒 | |
| CN117054662A (zh) | 一种kim-1化学发光试剂盒 | |
| CN113219169B (zh) | 生物检测用封闭剂及其制备方法、包被板及应用该包被板的试剂盒 | |
| US9891214B2 (en) | Immunological assay method | |
| CN101101295B (zh) | 酶联免疫体外诊断试剂中酶结合物溶液的制备 | |
| EP4063514A1 (en) | Measurement method using anti-immunocomplex antibody | |
| CN112129933B (zh) | 一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法 | |
| JPH07198721A (ja) | 免疫測定用緩衝液 | |
| CN110894208A (zh) | 一种黄体酮半抗原、人工抗原和多克隆抗体及其制备方法和应用 | |
| CN116008562A (zh) | 磁微粒化学发光双抗原夹心法检测幽门螺杆菌抗体的方法 | |
| CN114167063B (zh) | 胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒和方法及剑麻皂素的应用 | |
| CN115166243A (zh) | 一种磁微粒化学发光法测定壳多糖3样蛋白1（chi3l1）的试剂盒 | |
| CN117368485A (zh) | T3夹心法检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |