CN111040959B - 具有特定病原微生物拮抗能力的草鱼源乳酸菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本实验公开了具有特定病原微生物拮抗能力的草鱼源乳酸菌及其应用，本发明草鱼源乳酸菌从草鱼肠道中分离获得，菌株名为植物乳杆菌Y190430 Lactobacillus plantarum Y190430，保藏编号为CCTCC NO：M 2019659。本发明分离乳酸菌发酵性能、产酸性能良好，能够耐受高温、强酸、高渗，具有较好的益生功能和抗逆性；而且对病原菌如铜绿假单胞菌、舒伯特气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、维氏气单胞菌有抑制作用，具有应用在水产养殖和病原研究的潜质。

Description

具有特定病原微生物拮抗能力的草鱼源乳酸菌及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及具有特定病原微生物拮抗能力的草鱼源乳酸菌及其应用。

背景技术

我国是世界上最主要的水产养殖国家，随着水产养殖业的快速发展，近年来养殖水产病害频发、水产养殖过程中抗生素等药物滥用、养殖水体污染环境等问题也日益严重。

为缓解和解决水环境污染问题，着手寻找可以代替抗生素等抑菌药物、对水产品无害的益生菌成为近些年来较热门的研究方向。其中，乳酸菌不仅具有抑制病原微生物的生长和繁殖的能力，而且还具有调节动物机体肠道菌群平衡、提高动物机体免疫力的作用。

乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是一类代谢终产物为乳酸，具有相似的生理特点、形态特性的革兰氏阳性菌，属于兼性厌氧型细菌,包括乳酸乳球菌和乳酸杆菌。由于不同乳酸菌的生存环境不同，代谢时可以利用不同的糖类产生乳酸、乙酸等有机酸，这些有机酸和乳酸菌分泌的细菌素对消化道其他病原微生物具有一定的抑制作用。乳酸菌分布广泛，绝大多数乳酸菌对人和动物都具有益生作用，具有重要生理功能，是一类必不可少的共生微生物。

乳酸菌对动物的益生功能与其自身的代谢是相关的。乳酸菌能够利用动物消化道内不能被利用的营养物质，促进营养物质的消化吸收、减缓乳糖不耐症、减少食物过敏。乳酸菌可以产生分泌细菌素、类细菌素、过氧化氢和有机酸等抑菌物质，抑制消化道中的病原微生物的生长繁殖，维持肠道的微生态环境平衡。乳酸菌代谢产生的有机酸等物质可以提高动物机体对钙、铁、磷等微量元素的吸收；此外，乳酸菌具有提高机体的特异性和非特异性免疫能力、抗高血压、调节血糖、抗肿瘤、降低血脂浓度、抗衰老等作用。乳酸菌及其发酵制品在动物生产中也被广泛使用，如青储饲料、鱼塘调水等。

若能够筛选得到具有优良发酵性能和产酸性能的耐受菌株，为后期建立草鱼其他组织细胞系和进行病毒研究奠定扎实的基础。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种功能型草鱼源乳酸菌。

本发明的次要目的在于提供草鱼源乳酸菌的构建方法。

本发明的再一目的在于提供草鱼源乳酸菌的应用。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明第一方面，提出了一种草鱼源乳酸菌植物乳杆菌Y190430Lactobacillusplantarum Y190430。所述草鱼源乳酸菌植物乳杆菌Y190430Lactobacillus plantarumY190430于2019年8月23日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019659。

本发明第二方面，提出了含有草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarum Y190430的菌剂。根据本发明的实施例，所述菌剂是由前面所描述的草鱼源乳酸菌Lactobacillusplantarum Y190430制备得到。

本发明第三方面，提出了前面所描述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备抗菌或抗病毒制剂中的应用。

根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌对舒伯特气单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌有明显抑制作用。

根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌对草鱼呼肠孤病毒有明显抑制作用。

本发明第四方面，提出了含有前面所述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备草鱼源乳酸菌活载体疫苗中的应用。根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌活载体疫苗能够改善草鱼源乳酸菌抑制菌或病毒的能力。

本发明第五方面，提出了含有前面所述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备改善鱼类肠道环境产品中的应用。根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌的菌剂通过产酸改善鱼类肠道酸碱环境。

本发明的有益效果是：

本实验从草鱼肠道分离获得的植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌Y190430Lactobacillus plantarum Y190430，结果表明分离乳酸菌发酵性能、产酸性能良好，具有较宽泛的适应培养温度，耐受强酸、高渗条件，具有较好的益生功能和抗逆性；而且对病原菌如铜绿假单胞菌、舒伯特气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、维氏气单胞菌有抑制作用，可应用在水产养殖和病原研究中。

附图说明

图1为分离菌株的菌落形态观察；

图2为分离菌株的革兰氏染色形态观察；

图3为16S rRNA扩增序列电泳图；

图4为本发明Lactobacillus plantarum Y190430乳酸菌和植物乳杆菌标准菌株ATCC 8014的生长曲线；

图5为本发明Lactobacillus plantarum Y190430乳酸菌和植物乳杆菌标准菌株ATCC 8014的产酸变化曲线；

图6为抗生素敏感实验，其中2.氯霉素；3.氨苄西林；4.青霉素；6.四环素；7.氟苯尼考；8.多西环素；9.红霉素；10.林可霉素。

图7为本发明Lactobacillus plantarum Y190430乳酸菌和植物乳杆菌标准菌株ATCC 8014酸碱耐受性实验；

图8为本发明Lactobacillus plantarum Y190430乳酸菌和植物乳杆菌标准菌株ATCC 8014渗透压耐受性实验。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明中的技术方案进行清楚、完整的说明，但并不局限于此。

本发明第一方面，提出了一种草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarum Y190430。所述草鱼源乳酸菌植物乳杆菌Y190430Lactobacillus plantarum Y190430于2019年8月23日保存于中国典型培养物保藏中心，中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2019659。该菌株发酵性能、产酸性能良好，具有较宽泛的适应培养温度，耐受强酸、高渗条件，具有较好的益生功能和抗逆性。另外，对病原菌有抑制作用，可应用在水产养殖和病原研究中。

本发明第二方面，提出了含有草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarum Y190430的菌剂。根据本发明的实施例，所述菌剂是由前面所描述的草鱼源乳酸菌Lactobacillusplantarum Y190430制备得到。

本发明第三方面，提出了前面所描述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备抗菌或抗病毒制剂中的应用。说明本发明草鱼源乳酸菌能够抑制危害草鱼的主要病原微生物。

根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌对舒伯特气单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌有抑制作用。说明本发明草鱼源乳酸菌能够抑制危害草鱼的主要病原微生物。

根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌对草鱼呼肠孤病毒有抑制作用。说明本发明草鱼源乳酸菌能够抑制危害草鱼的主要病原微生物呼肠孤病毒，在草鱼养殖生产过程中具有更好的使用前景。

本发明第四方面，提出了含有前面所述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备草鱼源乳酸菌活载体疫苗中的应用。根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌活载体疫苗能够改善草鱼源乳酸菌抑制菌或病毒的能力。

本发明第五方面，提出了含有前面所述草鱼源乳酸菌Lactobacillus plantarumY190430的菌剂在制备改善鱼类肠道环境产品中的应用。根据本发明的实施例，所述草鱼源乳酸菌的菌剂通过产酸改善鱼类肠道酸碱环境。本发明草鱼源乳酸菌具有良好的产酸性能，能够快速产酸，调节环境pH值，协同其他益生菌生长，抑制病原菌生长，改善环境菌群平衡。

实验动物

草鱼，体长15～20cm，购于广州市花都区某鱼种繁育场。

菌种

舒伯特气单胞菌、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、无乳链球菌均由珠江水产研究所水生经济动物病害防治研究中心实验室分离保存。

主要试剂

MRS肉汤培养基、MRS固体培养基购于广东环凯微生物科技公司；脑心浸出液肉汤(BHI)培养基购于北京陆桥技术有限责任公司。

磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、氯化氢、氢氧化钠均购自广州化学试剂厂。

3％过氧化氢溶液、氧化酶试纸、新型微生物微量生化鉴定管均购于广东环凯微生物科技公司；革兰氏染色试剂盒购于北京索莱宝有限公司；标准药敏片购于杭州微生物试剂有限公司。

实施例1

草鱼肠道乳酸菌的分离与纯化

(1)乳酸菌的分离

将草鱼断脊柱处理后，在鱼腹部沿着腹正中线剪开，暴露其腹腔。用灭菌镊子剥离去除在草鱼肠道的周围的肝脏、胆囊、胰脏以及脂肪组织。用灭菌PBS溶液将肠道冲洗3次，去除肠道上的腹腔液。用灭菌镊子剥离肠系膜，横断剪下6-8cm的肠道，挤掉肠道内容物，再用灭菌眼剪纵向剪开肠道，用1mL的灭菌PBS溶液冲洗去除肠道残余的粪便内容物。将取下的肠道平均分为二份，分别放入两支1.5mL灭菌离心管中。用灭菌眼剪将采集的组织剪碎，加入1mL无菌PBS溶液，在高通量组织研磨器中50Hz匀浆180s。吸取匀浆后的液体加入至分别装有9mL的乳酸菌选择培养基MRS培养基的灭菌试管中，分别放置于28℃和37℃恒温培养箱中静置培养。培养至试管内菌液出现浑浊后取出，用灭菌PBS溶液十倍倍比稀释，取100uL每个稀释梯度的菌液涂布于MRS固体培养基上，分别在28℃和37℃恒温培养箱中培养。

(2)乳酸菌的纯化。

挑取具有典型乳酸菌菌落形态(白色，边缘光滑，中间隆起的小菌落)、孤立的菌落接种在MRS液体培养基中扩大培养，将扩大后的菌液在固体培养基上划线，放置于对应的温度下培养，重复三次以上，直至肉眼观察到MRS固体培养基上长出菌落大小、形态一致时为止。

实施例2草鱼源乳酸菌的形态学观察

(1)菌落形态观察：

利用平板划线法，挑取单个菌落在MRS固体培养基上划线，37℃培养24h后，肉眼直接观察固体培养基上生长的菌落的大小、颜色、边缘光滑度等特性。

(2)菌体形态观察：

通过革兰氏染色观察分离草鱼源乳酸菌菌体形态。挑取单个菌落，接种于MRS肉汤中培养至对数生长期，用接种环挑取一环菌液于载玻片上，涂抹均匀成一层薄膜。载玻片有菌液面向上，在酒精灯外焰上快速来回移通过，使其固定在载玻片上。将草酸铵结晶紫染色液滴于涂片菌膜上，初染1min，倾斜载玻片，水洗至冲下的水呈无色。滴1-2滴碘液于菌膜上，媒染1min，然后水洗。滴加95％的酒精脱色20-30s，立即水洗。最后滴加革兰氏番红染色液滴于菌膜上，复染1min后，水洗。用吸水纸吸掉载玻片上的水分，待其干后放置在光学显微镜下观察分离菌株革兰氏染色情况，是否有芽孢，菌体形态。

结果：通过从鱼体肠道分离共获得八株分离菌株，分别编号为C13、C14、C15、C16、C17、C18、C20、C35。从菌落形态来看，八株分离菌株的菌落形态均为乳白色、不透明，边缘整齐光滑，呈圆形，有光泽，质地粘稠，单菌落较小、直径约1mm。菌落形态如图1所示，八株分离菌株革兰氏染色均呈紫色，为革兰氏阳性菌，呈短杆状，无芽孢，显微镜下的菌体形态如图2。以上试验初步判定分离菌株为乳酸菌。

实施例3草鱼源乳酸菌的生化鉴定

将实施例1纯化后的菌株接种于MRS肉汤中，培养过夜，分开三份进行以下实验。

(1)过氧化氢酶试验：

取1mL菌液于1.5mL离心管中，3000r离心5min，用移液枪将上清液吸取干净后，吸取3％过氧化氢溶液500uL于离心管内，观察是否有气泡产生。

(2)氧化酶试验：

3000r离心5min，弃去上清液，用枪头挑取菌体，点至氧化酶试纸表面，观察菌体色变化。阳性变为红色，阴性不变色。

(3)硝酸盐还原试验：

取培养过夜的菌液50uL接种于硝酸盐还原生化反应管中，放置于37℃恒温培养箱中培养18-24h。转移到新试管后，依次滴加硝酸盐还原甲液、乙液1-2滴，观察颜色变化，若混合溶液变红为阳性，不变色为阴性。

其中甲液：氨基苯磺酸8g/L；醋酸5mol/L；

乙液：α-萘胺5g/L；醋酸5mol/L。

(4)糖发酵试验：

将培养过夜的菌液3000r离心5min，用0.85％无菌生理盐水重悬并稀释至0.5McFa-rland，分别吸取50uL稀释菌悬液加入至不同糖(苦杏仁苷、阿拉伯糖、纤维二糖、七叶苷、果糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖酸盐、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘露糖、松三糖、蜜二糖、棉子糖、鼠李糖、D-核糖、水杨素、山梨糖、蔗糖、蕈糖和木糖)发酵鉴定管中，在37℃培养箱中培养24h，观察生化鉴定管颜色变化。

八株分离菌株的氧化氢酶、氧化酶和硝酸盐还原反应结果，如表1所示：八株分离菌株对过氧化氢酶、氧化酶和硝酸盐还原反应均为阴性，初步判定这八株分离菌株均为乳酸菌。

表1分离菌株的初步判断结果

对这八株乳酸菌进行进一步的生化鉴定，结果如表2所示，这八株乳酸菌均属于植物乳杆菌。

表2分离乳酸菌菌株生化反应结果

注：+为阳性，-为阴性，八株菌均发酵苦杏仁苷、阿拉伯糖、纤维二糖、七叶苷、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、甘露糖、松三糖、蜜二糖、D-核糖、水杨素、蔗糖、蕈糖，不发酵葡萄糖酸盐、棉子糖、鼠李糖、山梨糖和木糖。

实施例4草鱼源乳酸菌16SrRNA鉴定

草鱼源乳酸菌基因组提取的具体方法：

1.溶菌酶处理：取1mL新鲜培养的菌液，12000rpm离心1min，弃上清，加入去离子水，重悬菌体沉淀，12000rpm离心1min，弃上清。以溶菌酶溶液重悬菌体，37℃水浴1h，至产生絮状沉淀。12000rpm离心1min，弃上清。

2.提取基因组：以溶菌酶作用后的菌体沉淀作为模板，将实施例1纯化后的菌株进行16SrRNA鉴定，27F和1472R为上下游引物，进行菌落PCR扩增细菌16S rRNA序列，反应体系如表3所示，PCR反应过程如表4所示：

表3分离菌株16S rRNA PCR反应体系

表4PCR反应程序

结果：通过菌落PCR对八株分离菌株进行16S RNA鉴定，八株分离菌株的PCR产物在1500bp位置均有特异性条带(图3)。将八株菌16S rRNA的PCR产物进行测序分析，16S RNA序列比对结果表明分离菌属于植物乳杆菌的菌株。命名为Lactobacillus plantarumY190430。

对本发明制备的乳酸菌做进一步效果检测。

发酵性能测定

将分离纯化的乳酸菌活化后，接种于MRS肉汤培养基中，培养过夜后测定OD600吸光值，用MRS肉汤将每株分离乳酸菌菌液浓度调到一致，以3％的接种量接种于MRS肉汤中，分装到试管中，放置于37℃培养箱中培养24h，每隔2h取出一支试管，测定其OD600吸光值。以OD600吸光值为纵坐标，时间为横坐标绘制乳酸菌的生长曲线。

结果：对分离乳酸菌的发酵性能进行评价，每隔2小时测量乳酸菌的吸光度，并根据测定结果，以时间为横坐标，OD600值为纵坐标，绘制乳酸菌的生长曲线。如图4所示，在接种后第2小时菌株进入对数生长期，在接种后10小时进入平台期，菌株发酵的最大OD600为2.0-2.2。从中可知，本发明分离菌株有较高的发酵速率和较好的发酵性能，可以实现高浓度发酵，更适合未来在实际生产中进行应用，操作方便。

产酸性能测定

将分离纯化的乳酸菌活化后，接种于MRS肉汤培养基中，培养过夜后测定OD600吸光值。用MRS肉汤将每株分离乳酸菌菌液浓度调到一致，以3％的接种量将菌液接种于MRS肉汤中，分装到试管中，每支试管装15mL菌液。放置于37℃培养箱中培养24h，每隔2h取出一支试管，测定pH值。以pH值为纵坐标，时间为横坐标绘制乳酸菌的产酸速率曲线。

结果：通过对菌株的产酸速率进行测量来评价分离乳酸菌的产酸性能。接种后每隔2h测定一次菌液pH值，并根据测定结果绘制产酸速率曲线，如图5所示。

接种后0h植物乳杆菌Y190430的pH为5.85；在细菌的对数生长期产酸速率最快：接种后2h，分离乳酸菌菌液pH为5.54；接种后第8h，乳酸菌菌液pH为4.07，分离乳酸菌发酵液能够达到的最小pH为3.63。对本发明分离菌株培养环境的pH测定可知，本发明分离菌株接种后2h，培养环境pH快速降低，本发明分离菌株具有良好的产酸性能，能够快速产酸，调节环境pH值，协同其他益生菌生长，抑制病原菌生长，改善环境菌群平衡。

抗生素敏感试验

将处在生长对数期(分离菌株接种后OD600吸光值在0.4～1.8之间，细菌接种后2～6小时)的乳酸菌菌液MRS肉汤稀释至OD600吸光值为0.08～0.10，取100uL菌液涂布在MRS固体培养基上，待干后，贴放标准药敏纸片后置于37℃培养箱中培养24h，测量并记录抑菌圈直径。

结果：用多种抗生素的微生物药敏片对植物乳杆菌Y190430的抗生素敏感性进行评价。如表5所示，分离的乳酸菌对青霉素、氨苄西林、多西环素、四环素、氯霉素、氟苯尼考、红霉素、林可霉素敏感。

表5植物乳杆菌的抗生素敏感实验结果

图6是抗生素敏感实验，其中1.卡那霉素；2.氯霉素；3.氨苄西林；4.青霉素；5.链霉素；6.四环素；7.氟苯尼考；8.多西环素；9.红霉素；10.林可霉素；11.万古霉素；12.多粘菌素B。

说明了：本发明分离菌株具有良好的发酵性能，发酵迅速，按3％接种2小时候即可进入对数生长期，6～8小时可达到平台期；发酵浓度高，最大发酵OD600值在2.2左右。适合在实际生产中应用。

本发明分离菌株对氯霉素、红霉素等常见抗生素敏感，具有作为生物工程进行基因工程操作的潜力。同时不携带抗生素耐药性基因，对人和环境不具有潜在的危害。

抑菌与抗病毒分析

维氏气单胞菌、舒伯特气单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是危害草鱼的主要病原微生物，通过抑菌试验和抗病毒实验对分离获得草鱼源乳酸菌的抑菌和抗病毒能力进行评价。

将维氏气单胞菌、舒伯特气单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌作为指示菌活化后，均匀涂布于BHI固体培养基上，将被测菌液加入琼脂孔中，以生理盐水作为对照。测量并记录抑菌圈直径，每个样品重复三组，计算三组抑菌圈直径的平均值，同时以植物乳杆菌标准株ATCC 8014株作为参考。

将最小毒力剂量的分离菌株、参考标准菌株和GCRV病毒液等量混合，28℃培养90min后接种于草鱼鳔细胞系(GSB-F)，每个菌株进行三个平行孔，同时设正常细胞对照组和病毒对照组。应用RT-qPCR法评价各组菌株对GCRV感染的抑制作用。

结果：抑菌结果如表6所示，本发明分离获得的草鱼源植物乳杆菌对大多数能够感染草鱼常见致病菌具有较强的抑制作用。与参考标准植物乳杆菌菌株相比较，分离菌株对嗜水气单胞菌菌和铜绿假单胞菌的抑菌优势最明显；对舒伯特气单胞菌和迟缓爱德华也具有一定抑菌优势；分离菌株和标准菌株对维氏气单胞菌的抑制作用均不明显。

表6分离菌株抑菌能力评价

抗病毒结果如表7所示，草鱼呼肠孤病毒是目前能够引起草鱼感染并导致死亡的最主要病原，对渔业影响较大。体外抗病毒实验结果表明，与对照组相比，较植物乳杆菌对GCRV感染增殖均具有一定抑制作用；与植物乳杆菌标准株相比较，草鱼源分离株Y190430对GCRV感染的抑制能力更强，在草鱼养殖生产过程中具有更好的使用前景。

表7分离菌株抗病毒能力评价

环境压力测定

(1)温度压力耐受试验

将活化分离的乳酸菌菌液按照1％的比例接种于MRS肉汤培养基中，放置在42℃环境中培养，连续转接三代，通过紫外分光光度计测量不同菌株培养后的OD600值。

结果：分别将乳酸菌在42℃条件下进行连续传代培养，检测乳酸菌在高温条件下的生长情况，42℃条件下植物乳杆菌发酵的最高OD600值为：1.328。这表明植物乳杆菌对高温具有一定耐受性，在42℃条件下能够继续生长，但是与37℃培养条件相比较，发酵能力有所降低。

(2)酸碱耐受试验

培养菌液至相应浓度(OD600＝0.08-0.10)后，将不同菌株以1％的接种量分别接种于pH为2.0、2.5、3.0、4.0、5.6、7.0、8.0、8.5的MRS肉汤培养基中37℃培养10h，梯度稀释后涂布于MRS固体培养基中，37℃培养24h后进行菌落计数。

结果：将乳酸菌分别接种在不同pH环境的MRS液体培养基中，在37℃条件下培养，pH为2.0时，植物乳杆菌均无存活。结果如图7所示，分离乳酸菌能够耐受的最小pH值为3.0，分离菌株培养的最适pH值范围为5.6～7.0。

(3)渗透压耐受实验

将相同浓度(OD600＝0.08-0.10)的不同菌株以1％的接种量分别接种在NaCl浓度为0、2％、4％、6％和8％的MRS肉汤培养基中37℃培养10h，稀释后涂布于MRS固体培养基中，37℃培养24h后进行菌落计数。

结果：将乳酸菌分别接种在不同NaCl浓度的MRS液体培养基中，37℃条件下培养。结果如图8所示，菌株对高渗环境具有一定耐受性，在8％NaCl培养环境中，虽然发酵能力减弱，但是仍可生长。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种草鱼源乳酸菌植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）Y190430于2019年8月23日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019659。

2.含有权利要求1所述草鱼源乳酸菌的菌剂。

3.含有权利要求1所述草鱼源乳酸菌的菌剂在制备抑制菌或病毒制剂中的应用；其中，所述菌为舒伯特气单胞菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、铜绿假单胞菌；所述病毒为草鱼呼肠孤病毒。

4.含有权利要求1所述的草鱼源乳酸菌的菌剂在制备草鱼源乳酸菌活载体疫苗中的应用。

5.含有权利要求1所述的草鱼源乳酸菌的菌剂在制备改善鱼类肠道环境产品中的应用。

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