CN111035816B - 一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物及应用。所述组合物以芽孢杆菌发酵液为基质,含有质量分数在0.1%至0.5%的脱羧肌肽、以及3%至10%的可溶性茯苓多糖。由于采用芽孢杆菌天然发酵制备的发酵液调节至特定pH值范围作为基底,可在不添加增稠剂、化学抑菌剂的情况下抑制菌群繁殖并较长时间的保持脱羧肌肽不被氧化分解,添加脱羧肌肽和可溶性茯苓多糖,使得在还原性条件下女性下生殖系统免疫细胞受到双向调节,综合以上效果使得菌群异常的皮肤表面微环境趋向于正常,从而维护女性下生殖系统微生态平衡。本发明能应用于制备女性下生殖系统日用品、抗妇科炎症药物、以及预防性传播疾病的药物。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,更具体地,涉及一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物及应用。
背景技术
阴道是一个开放的生态环境,是人体内重要微生态区,阴道微生态对于女性生殖健康和生理健康具有重要的意义。现代医学证明,阴道微生态是一个非常灵敏的系统,在受到内源性和外源性因素影响时,很容易发生改变,继而导致疾病的发生。
阴道内正常菌群是阴道微生态研究的核心内容。在1892年,Dederlein首次发表了关于人类阴道微生态菌群的研究。人们发现健康女性的阴道菌群由多种厌氧菌和需氧菌构成。阴道分泌物中已分离到29种之多的微生物,其中最重要的是乳杆菌,它在健康女性的阴道排出物标本中分离率高达50%~80%。现已确定定植于正常阴道内的微生物群主要由细菌、真菌、原虫和病毒组成,它们主要栖居于阴道的侧壁黏膜皱褶中,其次是穹隆,部分在宫颈。细菌主要有革兰阳性需氧菌及兼性厌氧菌、革兰阴性需氧菌及兼性厌氧菌有大肠杆菌。正常状态下,阴道内厌氧菌与需氧菌的比例为5∶1,二者处于动态平衡状态。此外,还有一些病原体,如活动弯曲杆菌、支原体及念珠菌等。
在正常阴道菌群中,乳杆菌占优势。乳杆菌为革兰阳性大杆菌,微需氧,但在厌氧环境下生长更好,最适生长温度为35~38℃,每克阴道分泌物含有107~108CFU乳杆菌。健康妇女阴道内可分离出20多种乳杆菌。阴道内正常存在的乳杆菌对维持阴道正常菌群起着关键的作用。阴道鳞状上皮细胞内的糖原经乳杆菌的作用,分解成乳酸,使阴道局部形成弱酸性环境(pH≤4.5,多在3.8~4.4),可以抑制其他寄生菌的过度生长。此外,乳杆菌通过替代、竞争排斥机制阻止致病微生物粘附于阴道上皮细胞。同时,分泌过氧化氢、细菌素、类细菌素和生物表面活性剂等抑制致病微生物生长,从而维持阴道微生态环境的平衡。
由于年龄的增加、衰老的出现、性生活状况、以及生理卫生习惯等等原因,阴道的酸性环境被破坏,使白色假丝酵母菌、棒状杆菌和乳杆菌减少,相反阴道内B族链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌升高,阴道菌群失调,最终导致宫颈糜烂等妇科病,甚至诱发宫颈癌的更严重疾病。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求,本发明提供了一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物及应用,其目的在于通过优势菌中的产物对于阴道致病菌种的天然抑制能力,配合免疫激发剂,维护女性下生殖系同的微生态平衡,避免菌群异常从而制备抗妇科炎症药物或预防性传播疾病药物,由此解决女性下生殖系统微生态平衡被打破菌群异常的问题。
为实现上述目的,按照本发明的一个方面,提供了一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,以芽孢杆菌发酵液为基质,含有质量分数在0.1%至0.5%的脱羧肌肽、以及3%至10%的可溶性茯苓多糖。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其所述组合物含有唾液酸5%至8%。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其含有质量分数再0.05%至0.15%的N25多肽,所述N25多肽序列为:甲硫氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-丙氨酸-天门冬氨酸-色氨酸-精氨酸-谷氨酸-缬氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其所述芽孢杆菌发酵液,pH值在3.5至4.0之间,优选pH值为3.8。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其所述芽孢杆菌发酵液,其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其所述芽孢杆菌发酵液按照如下方法制备:(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种种子液加入按照体积比例5%接种量,接入培养基进行培养,所述培养基包括:75-80g/L甘油,15-20(18.4)g/L柠檬酸钠,20-25(23)g/L谷氨酸钠,8g/L氯化铵,0.5g/L磷酸氢二钾,0.15g/L氯化钙,0.5g/L硫酸镁,0.04g/L氯化铁,0.04g/L硫酸锰;
(2)在厌氧发酵8h至10小时后,开始以不超过0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束,其中硝酸钠溶液浓度为50g/L;
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物,过滤后取滤液高温灭菌,加入盐酸和/或硝酸调节pH值在3.5至4.0之间。
优选地,所述维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其所述可溶性茯苓多糖,按照如下方法制备:
第一步:将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛,得到粒度均匀的茯苓粉;
第二步:将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源,对其进行辐照,辐照剂量为9kGy~27kGy;
第三步:以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物,加入乙醇溶液进行溶胀;所述乙醇溶液浓度为85%,溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5~7∶1之间;
第四步:溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应,反应结束后,冷却;碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3~0.4倍;加入氢氧化钠之后进行搅拌,碱化反应0.5~1h,反应温度为40~60℃;反应结束后,应进行冷却,冷却至温度10~30℃;
第五步:加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应,得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。
按照本发明的另一个方面提供了一种所述的组合物的应用,其应用于制备女性下生殖系统日用品,例如人体润滑液。
按照本发明的另一个方面提供了一种所述的组合物的应用,其应用于制备抗妇科炎症药物尤其是抗宫颈糜烂药物。
按照本发明的另一个方面提供了一种所述的组合物的应用,其应用于制备预防性传播疾病的药物。
总体而言,通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比,由于采用芽孢杆菌天然发酵制备的发酵液调节至特定pH值范围作为基底,可在不添加增稠剂、化学抑菌剂的情况下抑制菌群繁殖并较长时间的保持脱羧肌肽、N25肽不被氧化分解,添加脱羧肌肽和可溶性茯苓多糖,使得在还原性条件下女性下生殖系统免疫细胞受到双向调节,综合以上效果使得菌群异常的皮肤表面微环境趋向于正常,从而维护女性下生殖系统微生态平衡。优选技术方案,添加唾液酸能有效保护菌群异常的女性下生殖系统的微生态,减小唾液酸苷酶的不利影响;添加N25肽有效抑制炎症反应。
附图说明
图1是本发明实施例5的受试者施用实施例1提供的凝胶前后内窥检查照片;
图2是本发明实施例6的受试者施用实施例4提供的凝胶前后内窥检查照片。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明提供的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,以芽孢杆菌发酵液为基质,含有质量分数在0.1%至0.5%的脱羧肌肽、以及3%至10%的可溶性茯苓多糖,优选含有质量分数唾液酸5%至8%;优选含有质量分数再0.05%至0.15%的N25多肽,所述N25多肽序列为:甲硫氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-丙氨酸-天门冬氨酸-色氨酸-精氨酸-谷氨酸-缬氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸。。
所述芽孢杆菌发酵液,pH值在3.5至4.0之间,优选pH值为3.8,其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上,其制备方法如下:
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种(于2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M208065)种子液加入按照体积比例5%接种量,接入培养基进行培养,所述培养基包括:75-80g/L甘油,15-20(18.4)g/L柠檬酸钠,20-25(23)g/L谷氨酸钠,8g/L氯化铵,0.5g/L磷酸氢二钾,0.15g/L氯化钙,0.5g/L硫酸镁,0.04g/L氯化铁,0.04g/L硫酸锰;
(2)在厌氧发酵8h至10小时后,开始以不超过0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束,其中硝酸钠溶液浓度为50g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度,发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L。发酵48h结束,聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上。
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物,过滤后取滤液高温灭菌,加入盐酸和/或硝酸调节pH值在3.5至4.0之间。
所述脱羧肌肽,具有显著的抗氧化作用,用于提供持续的还原环境。
所述可溶性茯苓多糖,在还原环境下表现出分布于宫颈、阴道以及外阴的复层扁平上皮朗格汉斯细胞的活性具有双向调节作用,按照如下方法制备:
第一步:将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛,得到粒度均匀的茯苓粉;
第二步:将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源,对其进行辐照,辐照剂量为9kGy~27kGy;
第三步:以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物,加入乙醇溶液进行溶胀;所述乙醇溶液浓度为85%,溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5~7∶1之间。
第四步:溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应,反应结束后,冷却;碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3~0.4倍;加入氢氧化钠之后进行搅拌,碱化反应0.5~1h,反应温度为40~60℃;反应结束后,应进行冷却,冷却至温度10~30℃;
第五步:加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应,得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地,羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8~1.2倍,使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3~4h,反应温度为50~70℃,反应完毕后,用冰乙酸调至pH至5.0~6.0,用体积分数80~90%的乙醇洗涤3~5次,除去多余氯离子,并洗至白色或淡黄色,在50℃温度条件下干燥。
所述唾液酸,即N-乙酰神经氨糖酸(SA),为唾液酸酶的底物。
所述N25肽,含有质量分数再0.05%至0.15%的N25多肽,所述N25多肽序列为:甲硫氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-丙氨酸-天门冬氨酸-色氨酸-精氨酸-谷氨酸-缬氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸。按照如下方法制备:
S1、在质粒中引入编码N25肽的cDNA:
酶切大肠杆菌质粒,酶切后的质粒在琼脂糖胶中分离、纯化,用于以后的连接反应;从胶中回收DNA片段,编码小鼠p55PIK全长蛋白的cDNA来源于小鼠睾丸组织cDNA文库(美国Stratagene公司,目录号为:937308),克隆到pcDNA3(购于Invitrogen公司,目录号为:V79020);
S2、扩增带有编码N25肽序列的质粒:
用于扩增N25 cDNA的PCR引物序列为:
引物1:5′TTTTGAATTCTATGGACCGCGATGACGCAGA
引物2:5′TTTTGGATCCATTTCAATATAAAATATCAGT
PCR条件:94℃2分钟;94℃1分钟、55℃1分钟、72℃2分钟共25个循环;72℃延伸5分钟。采用PCR试剂盒扩增,测序筛选后大规模纯化制备质粒。
S3、DNA构建体表达融合蛋白的检测:采用常规的DNA转染实验检测融合蛋白的表达。
本发明中芽孢杆菌发酵液为大量芽孢杆菌代谢物,由于芽孢杆菌的大量存在因此抑制其他微生物的繁殖,其灭活的发酵液同样具备抑制细菌即其他微生物繁殖的能力,其pH值在3.5至4.0之间,对于正常的女性下生殖系统微生态环境优势菌种乳酸杆菌的抑制作用不明显,而对于B族链球菌、金黄色葡萄球菌等致病菌,具有较为明显的抑制作用。尤其是对于女性下生殖系统pH值上升导致的致病风险增加,有着较为良好的预防作用。在性生活后阴道的PH值可上升至7.2左右,并维持6-8小时;阴道灌洗导致阴道pH值明显上升等情况下,女性下生殖系统自净作用减弱,免疫系统较为脆弱,经性传播途径感染或其他致病菌治病的风险增加。另外,本发明提供的组合物,粘腻且具有润滑作用,因此特别适合作为性生活润滑液使用,具有预防性病传播及降低妇科疾病发生几率的作用。
脱羧肌肽具有良好的抗氧化性能,提供稳定的还原环境,在芽孢杆菌发酵液的的及脱羧肌肽的提供的还原性酸性环境下,可溶性茯苓多糖,发挥提高女性生殖系统的免疫能力,其影响分布于宫颈、阴道以及外阴的复层扁平上朗格汉斯细胞的活性,可以双向调节其免疫活性。而唾液酸是厌氧菌分泌的唾液酸酶的底物,5%至8%的唾液酸添加能有效保护生殖系统内环境不受唾液酸酶的破坏,维护微生态平衡。另外N25肽具备抑制炎症反应的作用。。
上述成分在女性下生殖系统微生态中协同发挥维护微生态平衡的作用,可用作女性下生殖系统日用品、人体润滑液、用于制备抗妇科炎症药物尤其是抗宫颈糜烂药物、以及用于制备预防和阻断性传播疾病的药物。尤其是本发明提供的组合物原料均可用于食品,因此用作人体润滑液时,能避免由于误食导致的安全风险。
以下为实施例:
本发明实施例中使用的材料如下:芽孢杆菌发酵液购于武汉骏安生物科技有限公司;可溶性茯苓多糖购于武汉润歌生物科技有限公司;N25多肽购于武汉益承生物科技股份有限公司;唾液酸、脱羧肌肽为市售。
所述芽孢杆菌发酵液含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上,按照如下方法制备:
(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)WX-02菌种(于2008年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M208065)种子液加入按照体积比例5%接种量,接入培养基进行培养,所述培养基包括:75-80g/L甘油,15-20(18.4)g/L柠檬酸钠,20-25(23)g/L谷氨酸钠,8g/L氯化铵,0.5g/L磷酸氢二钾,0.15g/L氯化钙,0.5g/L硫酸镁,0.04g/L氯化铁,0.04g/L硫酸锰;
(2)在厌氧发酵8h至10小时后,开始以不超过0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束,其中硝酸钠溶液浓度为50g/L。开始补加硝酸钠溶液后每隔3h测定发酵液中亚硝酸盐浓度,发酵过程中亚硝酸盐最大积累量为0.02g/L。发酵48h结束,聚γ-谷氨酸钠产量为40g/L以上。
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物,过滤后取滤液高温灭菌,加入盐酸和/或硝酸调节pH值在3.5至4.0之间。
所述可溶性茯苓多糖,按照如下方法制备:
第一步:将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80或100目筛,得到粒度均匀的茯苓粉;
第二步:将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源,对其进行辐照,辐照剂量为9kGy~27kGy;
第三步:以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物,加入乙醇溶液进行溶胀;所述乙醇溶液浓度为85%,溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5~7∶1之间。
第四步:溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应,反应结束后,冷却;碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3~0.4倍;加入氢氧化钠之后进行搅拌,碱化反应0.5~1h,反应温度为40~60℃;反应结束后,应进行冷却,冷却至温度10~30℃;
第五步:加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应,得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。具体地,羧甲基化反应中所述氯乙酸的加入量为茯苓粉质量的0.8~1.2倍,使茯苓粉和氯乙酸在过量的氢氧化钠下进行醚化反应3~4h,反应温度为50~70℃,反应完毕后,用冰乙酸调至pH至5.0~6.0,用体积分数80~90%的乙醇洗涤3~5次,除去多余氯离子,并洗至白色或淡黄色,在50℃温度条件下干燥。
实施例配方如下表:
人体实验:
使用实施例1与实施例4提供的组合物(商品名“嫦娥寡肽凝胶”)分别对患有宫颈糜烂的妇女施用2周,每天2次,每次5ml;使用前后进行内窥检查及妇科分泌物检验下生殖系统微生态。
实施例5
受试者,年龄28岁,已婚已育;受试前内窥检查如图1左图,出现大面积的红肿发炎,重度宫颈糜烂,菌种情况检验结果如下:
菌种情况:
菌群密集度:+++
菌群多样性:少许
优势菌:革兰阳性小杆菌G+b
病原体:滴虫感染;-
真菌感染:菌丝:-;孢子:+;芽生孢子:+;WBC/油镜:>10
过氧化氢:弱阳性(±);唾液酸苷酶:阴性;白细胞酯酶:阳性(+);β-葡萄糖醛酸酶:阴性;乙酰氨基葡萄糖苷酶:阳性(+);PH值:4.60。
微生态分析结论:菌群异常。
施用实施例1提供的“嫦娥寡肽凝胶”2周后,内窥检查如图1右图,消肿褪红,菌种情况检验结果如下:
菌种情况:
菌群密集度:++
菌群多样性:+
优势菌:革兰阳性大杆菌G+b(L)
病原体:滴虫感染;-
真菌感染:菌丝:-;孢子:-;芽生孢子:-;WBC/油镜:<10
过氧化氢:阴性;唾液酸苷酶:阴性;白细胞酯酶:阴性;β-葡萄糖醛酸酶:阴性;乙酰氨基葡萄糖苷酶:阴性;PH值:4.20。
微生态分析结论:正常菌群。
实施例6
受试者,年龄30岁,已婚已育;受试前内窥检查如图1左图,重度宫颈糜烂,局部出现损伤出血,菌种情况检验结果如下:
菌种情况:
菌群密集度:++
菌群多样性:++
优势菌:革兰阴性短杆菌G-b(s)
病原体:滴虫感染;-
真菌感染:菌丝:-;孢子:+;芽生孢子:+;WBC/油镜:>10
过氧化氢:阳性(+);唾液酸苷酶:弱阳性(±);白细胞酯酶:阳性(+);β-葡萄糖醛酸酶:阴性;乙酰氨基葡萄糖苷酶:阳性(+);PH值:4.20。
微生态分析结论:VVC(念珠菌性阴道炎);BV(细菌性阴道炎)。
施用实施例4提供的“嫦娥寡肽凝胶”2周后,内窥检查如图1右图,消肿褪红,损伤得到修复,菌种情况检验结果如下:
菌种情况:
菌群密集度:+
菌群多样性:+
优势菌:革兰阳性大杆菌G+b(L)
病原体:滴虫感染;-
真菌感染:菌丝:-;孢子:-;芽生孢子:-;WBC/油镜:<10
过氧化氢:阴性;唾液酸苷酶:阴性;白细胞酯酶:阴性;β-葡萄糖醛酸酶:阴性;乙酰氨基葡萄糖苷酶:阴性;PH值:3.90。
微生态分析结论:菌群正常。
本领域的技术人员容易理解,以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,以芽孢杆菌发酵液为基质,含有质量分数在0.1%至0.5%的脱羧肌肽、质量分数3%至10%的可溶性茯苓多糖、质量分数唾液酸5%至8%、以及质量分数在0.05%至0.15%的N25多肽,所述N25多肽序列为:甲硫氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-丙氨酸-天门冬氨酸-色氨酸-精氨酸-谷氨酸-缬氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸。
2.如权利要求1所述的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,所述芽孢杆菌发酵液,pH值在3.5至4.0之间。
3.如权利要求2所述的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,所述芽孢杆菌发酵液,pH值为3.8。
4.如权利要求2所述的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,所述芽孢杆菌发酵液,其含有分子量在1200kDa以上的聚γ-谷氨酸40g/L以上。
5.如权利要求2所述的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,所述芽孢杆菌发酵液按照如下方法制备:(1)将活化后的地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)WX-02菌种种子液加入按照体积比例5%接种量,接入培养基进行培养,所述培养基包括:75-80g/L甘油,15-20g/L柠檬酸钠,20-25g/L谷氨酸钠,8g/L氯化铵,0.5g/L磷酸氢二钾,0.15g/L氯化钙,0.5g/L硫酸镁,0.04g/L氯化铁,0.04g/L硫酸锰;
(2)在厌氧发酵8h至10小时后,开始以不超过0.25g/(L·h)的速度流加硝酸钠溶液至发酵结束,其中硝酸钠溶液浓度为50g/L;
(3)将步骤(2)中获得的发酵产物,过滤后取滤液高温灭菌,加入盐酸和/或硝酸调节pH值在3.5至4.0之间。
6.如权利要求1所述的维护女性下生殖系统微生态平衡的组合物,其特征在于,所述可溶性茯苓多糖,按照如下方法制备:
第一步:将干燥过的茯苓菌核进行粉碎过80 或100目筛,得到粒度均匀的茯苓粉;
第二步:将第一步获得的茯苓粉以60Co-γ为辐照源,对其进行辐照,辐照剂量为9kGy~27kGy;
第三步:以辐照后的茯苓粉作为羧甲基化反应底物,加入乙醇溶液进行溶胀;所述乙醇溶液浓度为质量分数85%,溶胀料液比为酒精溶液与茯苓粉的料液比在5~7∶1之间;
第四步:溶胀后加入氢氧化钠进行碱化反应,反应结束后,冷却;碱化反应中所述的氢氧化钠加入的量为茯苓粉质量的0.3~0.4倍;加入氢氧化钠之后进行搅拌,碱化反应0.5~1h,反应温度为40~60℃;反应结束后,应进行冷却,冷却至温度10~30℃;
第五步:加入氯乙酸和过量的氢氧化钠与茯苓全粉进行羧甲基化反应, 得到所述取代度在0.69至0.73的羧甲基茯苓多糖。
7.一种如权利要求1至6任意一项所述的组合物的应用,其特征在于,应用于制备女性下生殖系统日用品。
8.如权利要求7所述的组合物的应用,其特征在于,应用于制备人体润滑液。
9.一种如权利要求1至6任意一项所述的组合物的应用,其特征在于,应用于制备抗妇科炎症药物。
10.如权利要求9所述的组合物的应用,其特征在于,应用于制备抗宫颈糜烂药物。
11.一种如权利要求1至6任意一项所述的组合物的应用,其特征在于,应用于制备预防性传播疾病的药物。
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