CN1110139A

CN1110139A - 丹酚酸a用于治疗肿瘤新用途

Info

Publication number: CN1110139A
Application number: CN 94103933
Authority: CN
Inventors: 甄永苏; 黎莲娘; 粟俭; 薛玉川
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Priority date: 1994-04-15
Filing date: 1994-04-15
Publication date: 1995-10-18

Abstract

丹酚酸A属酚酸类化合物是从中药丹参提取得到并确定结构的水溶性新化合物，药理研究报道有抗氧化作用和抗胃溃疡形成作用，丹酚酸A具有抑制肿瘤细胞核苷转运活性，对癌细胞有杀伤作用，丹酚酸A可明显增强各种抗癌药物包括5-氟脲嘧啶、氨甲蝶呤和丝裂霉素C等的抗肿瘤活性，动物体内试验，丹酚酸A可增强抗癌药物的疗效，但不相应增高药物的毒性，本项发明为丹酚酸A开拓了新的用途，预期丹酚酸A应用于临床肿瘤治疗将可取得更优的疗效。

Description

本发明属于酚酸类化合物。丹酚酸A是从中药丹参提取得到并确定结构的水溶性新化合物。我们的研究发现，丹酚酸A具有抑制肿瘤细胞核苷转运活性，它对多种抗肿瘤药物有增效作用，将可应用于肿瘤治疗。

丹参是目前临床常用治疗冠心病的一种中药，其活性成分引起医药研究者的重视，中国医学科学院药物研究所黎莲娘从丹参中提取水溶性成分，得到丹酚酸A，并首先确定其化学结构，证明为新化合物。其化学结构如下：

对丹酚酸A的药理研究表明，它有抗胃酸分泌作用，在大鼠实验模型有抗胃溃疡形成作用;它有抗氧化作用，对于过氧化所致的生物膜损害有保护作用。有一篇报道丹酚酸A可降低阿霉素对大鼠的心脏线粒体毒性，并提到丹酚酸A不降低阿霉素在小鼠的抗肿瘤作用（Free Radical biology and Medicine，1992;12：347）。迄今尚未见关于丹酚酸A增强抗癌药物的疗效以及丹酚酸A具有抗肿瘤作用的研究报道。核苷酸是构成核酸大分子的基本单位物质，细胞内核苷酸的合成通过“从头合成途径”以及“补救途径”，已有研究表明，癌细胞的“补救途径”相关酶活性比正常细胞高;目前用于治疗肿瘤的抗代谢药如氨甲蝶呤、5-氟脲嘧啶等可抑制肿瘤细胞的核苷酸从头合成，但不能阻断“补救途径”;由于肿瘤细胞通过“补救途径”合成核苷酸，将可抵消抗代谢药的疗效。因此，阻断“补救途径”在肿瘤化疗中具有重要意义。核苷转运（nucleoside transport）是核苷酸合成“补救途径”的第一步，抑制核苷转运将能阻断核苷酸合成“补救途径”。潘生丁（dipyridamole）具有抑制核苷转运作用。中国医学科学院医药生物技术研究所甄永苏首次研究证明，潘生丁可阻断外源性核苷的抵消作用，增强抗代谢药的抗肿瘤活性;据此在第13届国际肿瘤会议提出了利用核苷转运抑制剂增强抗癌药疗效的设想（Proceedings of 13th International Cancer Congress，Seattle，U.S.A.，1982;p.644）。近年各国学者对于潘生丁进行研究结果，已提示核苷转运抑制物质用于肿瘤的可行性，但是由于潘生丁在体内大部分与血浆蛋白结合，往往影响治疗效果;因此研制新的抑制核苷转运药物并用于肿瘤治疗具有重要意义。恶性肿瘤严重威胁人类健康和生命，当前迫切需要有较好的治疗药物和治疗方法。

本发明的目的是利用丹酚酸A对于抗癌药物的增效作用，与各种抗癌药物联合使用，在临床肿瘤治疗中取得更优的疗效。

本项发明的内容与要点是：（1）用放射性同位素标记的核苷进行检测，药物与肿瘤细胞预先接触5分钟，加入标记的核苷后保温30秒，确定丹酚酸A对肿瘤细胞的核苷转运有显著抑制作用。在艾氏腹水癌细胞检测，丹酚酸A对胸苷转运的IC50（50%抑制转运的浓度）为18.1μM，对尿苷的IC50为17.1μM（附图1）。本研究首次证明，丹酚酸A对核苷转运的抑制作用，是具有新特点的、可用于肿瘤治疗的活性物质。（2）体外培养人体癌细胞，用克隆形成测定法检测，药物与癌细胞接触6天，研究证明丹酚酸A对肿瘤细胞有杀伤作用，对口腔鳞癌KB细胞的IC50（50%抑制克隆形成的浓度）为44.7μM（附图2）。（3）体外培养人体癌细胞，用克隆形成测定法检查，按药物相互作用系数（Coefficient of drug interaction，简称CDI）判断结果，CDI＜1表示两药协同作用，CDI＜0.7表示显著协同作用。研究证明，丹酚酸A与抗肿瘤抗代谢药5-氟脲嘧啶、氨甲蝶呤等有协同作用，联合使用可明显增强这些抗代谢药对肿瘤细胞的杀伤活性，CDI＜0.7，P＜0.01（附图3，图4）。（4）研究还证明，丹酚酸A对于非抗代谢药丝裂霉素C有协同作用，联合使用可明显增强丝裂霉素C对肿瘤细胞的杀伤活性（附图5）。（5）体外培养人胚肺细胞，观察药物的细胞毒性，研究证明，丹酚酸A不增强5-氟脲嘧啶对人胚肺2BS细胞的细胞毒性，表明在非肿瘤细胞丹酚酸A与抗癌药物的协同作用不明显（附表1）。

附表1 丹酚酸A对5-氟脲嘧啶的人胚肺2BS细胞毒性的影响

吸光度A₄₀₅(x±SD) 抑制率(%)

对照 0.695±0.023 -

丹酚酸A 0.557±0.013 19.7

5-氟脲嘧啶 0.327±0.010 52.9

丹酚酸A+5-氟脲嘧啶 0.335±0.014 51.8

丹酚酸A为40μM，5-氟脲嘧啶为400μM。

NAG酶反应测定。

（6）动物体内试验，在BALB/c小鼠皮下接种结肠癌26，腹腔内注射5-氟脲嘧啶和丹酚酸A，每天1次，共10次，按肿瘤重量计算抑制率，按目前国内采用标准，肿瘤抑制率超过30%，P＜0.05为有效。本研究证明丹酚酸A能明显增强5-氟脲嘧啶对小鼠结肠癌26的疗效;5-氟脲嘧啶治疗组的肿瘤抑制率为28.1%，而丹酚酸A与5-氟脲嘧啶联合组的肿瘤抑制率为61.3%，P＜0.01（附表2）。

附表2 丹酚酸A与5-氟脲嘧啶联合对小鼠结肠癌26的抑制作用

剂量体重变化瘤重(g) 抑制率

(mg/kg) (g) x±SD (%)

对照 - +0.20 1.64±0.41 -

丹酚酸A 90 -1.58 1.34±0.28 17.9

5-氟脲嘧啶 10 -0.73 1.18±0.25 28.1

丹酚酸A+5-氟脲嘧啶 90+10 -1.59 0.63±0.22 61.3*

＊CDI＝0.66，P＜0.01;n＝6

骨髓造血抑制是5-氟脲嘧啶的主要毒性，检查骨髓有核细胞数，联合给药组与5-氟脲嘧啶组无差别（附表3）;对心、肺、肝、脾、肾、小肠等脏器进行病理组织学检查，治疗组动物均未见毒性病变。这说明丹酚酸A明显增强5-氟脲嘧啶疗效时，不增高5-氟脲嘧啶的毒性。

附表3 丹酚酸A与5-氟脲嘧啶联合对结肠癌26荷瘤小鼠骨髓的影响

剂量有核细胞数(10⁶)/股骨相当于对照

(mg/kg) x±SD %

对照 - 8.03±2.59 100

丹酚酸A 90 6.65±2.31 82.8

5-氟脲嘧啶 10 3.88±1.12 48.3

丹酚酸A+5-氟脲嘧啶 90+10 4.24±1.01 52.8#

n＝6

＃P＞0.4，与5-氟脲嘧啶比较。

本项发明为丹酚酸A开拓了新的用途。丹酚酸A可增强抗癌药物的疗效，但不相应增高抗癌药物的毒性。预期丹酚酸A应用于临床肿瘤治疗，将可取得更好的效果。

附图1.为丹酚酸A对艾氏腹水癌细胞核苷转运的抑制作用图。

丹酚酸A与癌细胞作用5min，

加入放射性同位素标记的苷后保温30sec.

胸苷，尿苷

附图2.为丹酚酸A对KB癌细胞克隆形成的作用图。

作用时间6天

附图3.为丹酚酸A增强氨甲蝶呤对肝癌BEL-7402细胞的杀伤作用图。

克隆形成测定，药物作用时间6天，丹酚酸A为20μM。

氨甲蝶呤，丹酚酸A+氨甲蝶呤;

＊CDI＜0.7，P＜0.01

注：CDI＜1表示两药协同作用;CDI＜0.7表示显著协同作用

附图4.为丹酚酸A增强5-氟脲嘧啶对KB癌细胞的杀伤作用图。

克隆形成测定，药物作用时间6天;丹酚酸A为20μM。

5-氟脲嘧啶，丹酚酸A+5-氟脲嘧啶。

＊CDI＜0.7，P＜0.01

附图5.为丹酚酸A增强丝裂霉素C对KB癌细胞的杀伤作用图。

克隆形成测定，药物作用时间6天;丹酚酸A为20μM。

丝裂霉素C，丹酚酸A+丝裂霉素C。

＊CDI＜0.7，P＜0.01

Claims

1、丹酚酸A用于治疗肿瘤的作用，其特征是对肿瘤细胞的核苷转运有抑制作用，对肿瘤细胞有杀伤作用，可增强抗癌药物的疗效。

2、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是用放射性同位素标记的核苷进行检测，药物与肿瘤细胞预接触5分钟，加入标记的核苷后温孵30秒，在艾氏腹水癌细胞检测，丹酚酸A对胸苷转运的IC50（50%抑制转运的浓度）为18.1μM，对尿苷的IC50为17.1μM。

3、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是体外培养人体癌细胞，用克隆形成测定法检测，药物与癌细胞接触6天，对口腔鳞癌KB细胞的IC50（50%抑制克隆形成的浓度）为44.7μM。

4、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是体外培养人体癌细胞，用克隆形成测定法检测，按药物相互作用系数CDI判断，丹酚酸A与抗肿瘤抗代谢药5-氟脲嘧啶、氨甲蝶呤等有显著协同作用（CDI＜0.7，P＜0.01）。

5、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是丹酚酸A对非抗代谢的抗肿瘤药丝裂霉素C有明显协同作用。

6、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是体外培养人胚肺细胞，观察证明丹酚酸A不增强5-氟脲嘧啶对人胚肺2BS细胞的细胞毒性。

7、按照权利要求1所述的丹酚酸A的治疗肿瘤作用，其特征是动物体内试验，在BALB/c小鼠皮下接种结肠癌26，腹腔内注射5-氟脲嘧啶和丹酚酸A，每天一次，共10次，按肿瘤重量计算抑制率（按目前国内采用标准，肿瘤抑制率超过30%，P＜0.05为有效），丹酚酸A能明显增强5-氟脲嘧啶对结肠癌26的疗效，5-氟脲嘧啶治疗组的抑制率为28.1%，5-氟脲嘧啶与丹酚酸A联合治疗组的抑制率为61.3%（CDI＜0.7，P＜0.01），对心、肺、肝、脾、肾、小肠等脏器进行病理组织学检查，治疗组动物未见毒性病变，证明丹酚酸A明显增强5-氟脲嘧啶疗效时，不增高5-氟脲嘧啶的毒性。