CN110982895B - 一种检测人类红细胞abo血型基因分型的引物组、试剂盒及应用 - Google Patents
一种检测人类红细胞abo血型基因分型的引物组、试剂盒及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及其在试剂中的应用，所述引物组包括24组，所述的24组引物组的序列表如SEQ ID No.1‑72所示；所述试剂盒包含所述的24组引物组中的至少22组引物组；所述试剂包括24组引物组或所述试剂盒。引物经过了优化设计，具有相似的退火温度，能够实现24组引物在相同的PCR扩增条件下同时扩增，每个PCR反应体系的体积只有1.15μL，DNA模板只需5～10ng，大大增加了检测效率和反应灵敏度；应用该引物组进行检测，具有速度快、成本低、灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及应用。
背景技术
自1900年奥地利著名医学家Karl Landerstainer发现人类ABO血型系统后，截止到目前由国际输血协会(ISBT)认可的血型系统共有39种。ABO血型系统是人类血型系统中免疫原性最强的血型系统，也是经典的人类遗传标记，因此在输血医学、亲子鉴定、人类学研究、法医物证检验具有重要作用。
人类ABO基因位于9号染色体上(9q34.1-9q34.2)，由A、B和O三个复等位基因控制，包含28bp-691bp长度不等的7个外显子和约19514bp长度的6个内含子，其DNA序列高度保守，基因编码的产物是糖基转移酶，多数编码序列位于第6和第7外显子上，这些转移酶控制ABO血型抗原的生物合成，从而决定其血型。ABO血型差异主要与基因变化有关，ABO血型基因上存在丰富的单核苷酸多态性，通过分子生物学方法检测ABO血型基因的SNP位点，可以确定A、B、O或AB表型。
人类ABO血型检测方法主要有两种：一是经典的血清学方法，二是基因分型方法。目前常规检测方法是传统的血清学方法，该方法易受抗原活性、抗原多态性、抗体特异性、自身抗体、不规则抗体、微生物、疾病等因素影响，使得表型鉴定不准确，且在异常表达和遗传学分析时受到无法克服的局限性。随着分子生物学技术的发展，ABO血型基因分型的方法也越来越多，目前最主要的方法有限制性片段长度多态性PCR法(PCR-RFLP)、单链构象多态性PCR(PCR-SSCP)、特异序列引物PCR法(PCR-SSP)、实时荧光定量PCR法(RT-PCR)、测序法等。PCR-SSP方法需要进行多管扩增，多条带电泳，还存在判读易混淆所导致分型错误的分险。PCR-SBT分型方法最大的缺陷是操作过程非常繁琐，工作量大，难以实现高通量操作。ABO基因不同区域的扩增有不同的扩增条件，不仅需要的样本量大，同时增加了试剂耗材的消耗，且需要占用更多的仪器设备资源。综上所述，目前常见的这些方法存在以下几点问题：第一点实验操作复杂，步骤繁琐；第二点结果判读仍是人工方式；第三点样本通量较低；第四点成本较高。这些缺陷直接导致了ABO基因分型无法实现高通量的精准分型，难以适应将来越来越高的医疗需求。
因此，研发一种简单、便捷、快速、高通量、易于判读的ABO血型基因分型产品是具有重要意义的。
发明内容
本发明第一个目的在于提供一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组；本发明的第二个目的在于提供一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒及其制备方法；本发明的第三个目的在于提供引物组或试剂盒在制备用于检测人类红细胞ABO血型基因分型试剂中的应用。从而实现能够快速、低成本、高灵敏度、同时多位点联合检测地对人类血液进行ABO血型进行基因分型，适于临床应用。
本发明采用的技术方案如下：本发明针对ABO血型系统查阅大量相关文献及积累的实验数据，确定了所检测的10种常见的中国人群ABO血型亚型，及其对应的24个复等位基因SNP位点信息A101，A102(467C>T)，A201(467C>T,1061delC)，A205(467C>T,1009A>G)，B101(297A>G,526C>G,657C>T,703G>A,796C>A,803G>C,930G>A,1096G>A)，O01(261delG),
O02(106G>T,188G>A,189C>T,220C>T,261delG,646T>A,681G>A,771C>T,829G>A)，O03(53G>T,220C>T,297A>G,526C>G,802G>A)，O04(261delG,579)，O07(261delG,297A>G,646T>A,681G>A,721C>T,771C>T,829G>A)，本发明基于竞争性等位基因特异性PCR原理，设计了24对引物组，用于同时检测人类红细胞ABO血型系统的24个遗传基因位点组合信息。
一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，所述引物组包括24组，所述的24组引物组的序列表如SEQ ID No.1-72所示。
进一步的，所述的24组引物组及其对应的检测位点分别为：
第一组引物如序列表SEQ ID No.1-3所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的106(rs688976)位点；
第二组引物如序列表SEQ ID No.4-6所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的188(rs549446)位点；
第三组引物如序列表SEQ ID N o.7-9所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的189(rs549443)位点；
第四组引物如序列表SEQ ID No.10-12所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的220(rs512770)位点；
第五组引物如序列表SEQ ID No.13-15所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的261(rs8176719)位点；
第六组引物如序列表SEQ ID No.16-18所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的297(rs8176720)位点；
第七组引物如序列表SEQ ID No.19-21所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的467(rs1053878)位点；
第八组引物如序列表SEQ ID No.22-24所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的526(rs7853989)位点；
第九组引物如序列表SEQ ID No.25-27所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的579(rs55764262)位点；
第十组引物如序列表SEQ ID No.28-30所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的646(rs8176740)位点；
第十一组引物如序列表SEQ ID No.31-33所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的657(rs8176741)位点；
第十二组引物如序列表SEQ ID No.34-36所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的681(rs8176742)位点；
第十三组引物如序列表SEQ ID No.37-39所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的703(rs8176743)位点；
第十四组引物如序列表SEQ ID No.40-42所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的721(rs781957267)位点；
第十五组引物如序列表SEQ ID No.43-45所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的771(rs8176745)位点；
第十六组引物如序列表SEQ ID No.46-48所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的796(rs8176746)位点；
第十七组引物如序列表SEQ ID No.49-51所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的803(rs8176747)位点；
第十八组引物如序列表SEQ ID No.52-54所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的829(rs8176748)位点；
第十九组引物如序列表SEQ ID No.55-57所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的930(rs8176749)位点；
第二十组引物如序列表SEQ ID No.58-60所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1009(rs566015043)位点；
第二十一组引物如序列表SEQ ID No.61-63所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1061(rs56392308)位点；
第二十二组引物如序列表SEQ ID No.64-66所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1096(rs8176751)位点；
第二十三组引物如序列表SEQ ID No.67-69所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的53(rs55876802)位点；
第二十四组引物如序列表SEQ ID No.70-72所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的802(rs41302905)位点。
进一步的，所述的24组引物组中每组引物组包含两条基于等位基因序列差异而设计的引物和一条共用配对引物。
更进一步的，第一组引物中检测106G的引物对为序列表SEQ ID No.1和SEQ IDNo.3，检测106T的引物对为序列表SEQ ID No2和SEQ ID No.3；
第二组引物中检测188G的引物对为序列表SEQ ID No.4和SEQ ID No.6，检测188A的引物对为序列表SEQ ID No.5和SEQ ID No.6；
第三组引物中检测189C的引物对为序列表SEQ ID No.7和SEQ ID No.9，检测189T的引物对为序列表SEQ ID No.8和SEQ ID No.9；
第四组引物中检测220C的引物对为序列表SEQ ID No.10和SEQ ID No.12，检测220T的引物对为序列表SEQ ID No.11和SEQ ID No.12；
第五组引物中检测261G的引物对为序列表SEQ ID No.13和SEQ ID No.15，检测261delG的引物对为序列表SEQ ID No.14和SEQ ID No.15；
第六组引物中检测297A的引物对为序列表SEQ ID No.16和SEQ ID No.18，检测297G的引物对为序列表SEQ ID No.17和SEQ ID No.18；
第七组引物中检测467C的引物对为序列表SEQ ID No.19和SEQ ID No.21，检测467T的引物对为序列表SEQ ID No.20和SEQ ID No.21；
第八组引物中检测526C的引物对为序列表SEQ ID No.22和SEQ ID No.24，检测526G的引物对为序列表SEQ ID No.23和SEQ ID No.24；
第九组引物中检测579T的引物对为序列表SEQ ID No.25和SEQ ID No.27，检测579C的引物对为序列表SEQ ID No.26和SEQ ID No.27；
第十组引物中检测646T的引物对为序列表SEQ ID No.28和SEQ ID No.30，检测646A的引物对为序列表SEQ ID No.29和SEQ ID No.30；
第十一组引物中检测657C的引物对为序列表SEQ ID No.31和SEQ ID No.33，检测657T的引物对为序列表SEQ ID No.32和SEQ ID No.33；
第十二组引物中检测681G的引物对为序列表SEQ ID No.34和SEQ ID No.36，检测681A的引物对为序列表SEQ ID No.35和SEQ ID No.36；
第十三组引物中检测703G的引物对为序列表SEQ ID No.37和SEQ ID No.39，检测703A的引物对为序列表SEQ ID No.38和SEQ ID No.39；
第十四组引物中检测721C的引物对为序列表SEQ ID No.40和SEQ ID No.42，检测721T的引物对为序列表SEQ ID No.41和SEQ ID No.42；
第十五组引物中检测771C的引物对为序列表SEQ ID No.43和SEQ ID No.45，检测771T的引物对为序列表SEQ ID No.44和SEQ ID No.45；
第十六组引物中检测796C的引物对为序列表SEQ ID No.46和SEQ ID No.48，检测796A的引物对为序列表SEQ ID No.47和SEQ ID No.48；
第十七组引物中检测803G的引物对为序列表SEQ ID No.49和SEQ ID No.51，检测803C的引物对为序列表SEQ ID No.50和SEQ ID No.51；
第十八组引物中检测829G的引物对为序列表SEQ ID No.52和SEQ ID No.54，检测829A的引物对为序列表SEQ ID No.53和SEQ ID No.54；
第十九组引物中检测930G的引物对为序列表SEQ ID No.55和SEQ ID No.57，检测930A的引物对为序列表SEQ ID No.56和SEQ ID No.57；
第二十组引物中检测1009G的引物对为序列表SEQ ID No.58和SEQ ID No.60，检测1009A的引物对为序列表SEQ ID No.59和SEQ ID No.60；
第二十一组引物中检测1061C的引物对为序列表SEQ ID No.61和SEQ ID No.63，检测1061delC的引物对为序列表SEQ ID No.62和SEQ ID No.63；
第二十二组引物中检测1096G的引物对为序列表SEQ ID No.64和SEQ ID No.66，检测1096A的引物对为序列表序列表SEQ ID No.65和SEQ ID No.66；
第二十三组引物中检测53G的引物对为序列表SEQ ID No.67和SEQ ID No.69，检测53T的引物对为序列表SEQ ID No.68和SEQ ID No.69；
第二十四组引物中检测802G的引物对为序列表SEQ ID No.70和SEQ ID No.72，检测802A的引物对为序列表SEQ ID No.71和SEQ ID No.72。
优选地，所述SEQ ID No.1、SEQ ID No.4、SEQ ID No.7、SEQ ID No.10、SEQ IDNo.13、SEQ ID No.16、SEQ ID No.19、SEQ ID No.22、SEQ ID No.25、SEQ ID No.28、SEQ IDNo.31、SEQ ID No.34、SEQ ID No.37、SEQ ID No.40、SEQ ID No.43、SEQ ID No.46、SEQ IDNo.49、SEQ ID No.52、SEQ ID No.55、SEQ ID No.58、SEQ ID No.61、SEQ ID No.64、SEQ IDNo.67、SEQ ID No.70携带通用标签序列GAAGGTCGGAGTCAACGGATT；所述SEQ ID No.2、SEQID No.5、SEQ ID No.8、SEQ ID No.11、SEQ ID No.14、SEQ ID No.17、SEQ ID No.20、SEQID No.23、SEQ ID No.26、SEQ ID No.29、SEQ ID No.32、SEQ ID No.35、SEQ ID No.38、SEQID No.41、SEQ ID No.44、SEQ ID No.47、SEQ ID No.50、SEQ ID No.53、SEQ ID No.56、SEQID No.59、SEQ ID No.62、SEQ ID No.65、SEQ ID No.68、SEQ ID No.71携带通用标签序列GAAGGTGACCAAGTTCATGCT。
一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1～5任一项所述的24组引物组中的至少22组引物组。
优选地，所述的试剂盒包括至少26个芯片反应池，至少2个定位点，每个所述芯片反应池中包被有一组引物组。针对每个样本的芯片反应均设有1个内对照质控、1个空白对照以及1个阳性质控。
优选地，所述芯片反应池中的引物组中三条引物积之和相等，均为0.05μL。
一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
a)从24个位点中选检测人类红细胞ABO血型基因分型中的22个位点，将选的22个位点特异引物组制定孔位表，分别将22组等位基因引物按照孔位表包被至芯片基板22个芯片反应池中，得到芯片半成品；
b)制备PCR扩增试剂；所述PCR扩增试剂中包含携带有HEX和FAM荧光基团的通用探针、dNTPs、Mg2+、DNA聚合酶和反应缓冲液。
c)配备相应数量封口膜、对照品；
d)将芯片半成品、PCR扩增试剂以及封口膜、对照品按照检测人份组装成一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒。
本发明利用微流控芯片技术和KASP技术，每个检测指标设置于单独的反应池，先将ABO血型复等位基因具有区别性的特异性位点信息设计成带有通用Tag标签序列的引物组，再将上述引物组印制在基因芯片反应池中，在每个反应池中，引物组与探针、PCR扩增试剂、TE缓冲液、模板DNA形成独立的PCR反应体系，扩增反应结束后通过读取荧光信号来获得基因位点信息。竞争性等位基因特异性PCR扩增结束后，对PCR产物进行荧光信号检测，根据读取的荧光信号判断对应位点等位基因信息，后根据多位点等位基因信息对样本进行基因型分型。以此实现多位点联合检测，可以达到低成本高效率的检测人类红细胞ABO血型基因分型的目的。
一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型试剂，包括权利要求1～5任一项所述的引物组或权利要求6～9任一项所述试剂盒。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)本发明所涉及的引物在设计时经过了一系列优化过程，第一，为了确保引物特异性，在引物设计时以及引物设计后对引物进行分析，与基因组序列比对，保证设计的引物只和目标序列完全匹配，在基因组上没有相似扩增产物；第二，为了实现24组引物在相同条件下扩增，引物设计时综合考虑引物长度、GC含量、引物二级结构和引物之间互补性等因素，使24组引物在扩增时具有相似的退伙温度(Tm值)和扩增效率；第三，经过评估有一半的引物设计为正常的序列，无过多的GC含量或过少的GC含量，引物设计困难较低；另外一半左右位点有较多的GC含量，AT含量或引物设计处有较多的二级结构，这些位点需要经过详细的分析后才能进行引物设计和确认，针对这些位点通过多次尝试和优化，才获得效果良好的引物组；
(2)与现有技术相比，根据本发明的用于同时检测人类红细胞ABO血型系统24个种遗传基因位点的引物组，这些引物经过了优化设计，具有相似的退火温度，能够实现24组引物在相同的PCR扩增条件下同时扩增，每个PCR反应体系的体积只有1.15μL，DNA模板只需5～10ng，大大增加了检测效率和反应灵敏度；应用该引物组进行检测，具有速度快、成本低、灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优点；
(3)本发明不仅能实现样本在不同反应腔体的均匀分配，杜绝不同反应孔之间的交叉污染，便于软件判读，而且避免了样品浪费，大大节约实验成本，从而实现了高通量、高灵敏度和稳定高效的多基因位点联合检测，使ABO血型基因分型更加精准化。
附图说明
图1为24个位点检测信息及对应的荧光表达图；
图2为试剂盒芯片基片图；
图3为4例不同ABO血型组合样本基因芯片荧光表达图；
图4为基因分型为A101/O02样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图5为基因分型为A102/O01样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图6为基因分型为A102/O02样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图7为基因分型为B101/B101样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图8为基因分型为B101/O01样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图9为基因分型为B101/O02样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图10为基因分型为O01/O01样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图11为基因分型为O01/O02样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图12为基因分型为O02/O02样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图13为基因分型为A101/B101样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图；
图14为基因分型为A102/B102样本软件判读及对应芯片荧光表达示例图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，即所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1引物设计
依据美国国立生物技术信息中心基因库(NCBI Gene Bank)公开的ABO等位基因参考序列，通过查阅大量ABO血型系统相关文献及积累的实验数据，确定了所检测的10种ABO血型亚型，后根据血型抗原突变数据库中这10种ABO血型亚型对应的24个复等位基因SNP位点信A101，A102(467C>T)，A201(467C>T,1061delC)，A205(467C>T,1009A>G)，B101(297A>G,526C>G,657C>T,703G>A,796C>A,803G>C,930G>A,1096G>A)，O01(261delG)，O02(106G>T,188G>A,189C>T,220C>T,261delG,646T>A,681G>A,771C>T,829G>A)，O03(53G>T,220C>T,297A>G,526C>G,802G>A)，O04(261delG,579)，O07(261delG,297A>G,646T>A,681G>A,721C>T,771C>T,829G>A)进行引物设计。
基于竞争性等位基因特异性PCR原理，对SNPs或者特定位点上DNA片段缺失插入(InDels)进行精准的双等位基因判断，设计了24对引物组用于同时检测人类红细胞ABO血型的24个遗传基因位点组合信息，每组引物包含两条基于等位基因序列位点差异而设计的引物和一条共用配对引物。24对引物组的基因序列如SEQ ID No.1-72所示。
实施例2试剂盒制备
将这24组引物用于制备一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒。
试剂盒中每组引物组中三条引物积相等均为0.05μL，提前包被于芯片反应池中，样本基因组DNA0.25μL、PCR扩增试剂0.5μL以及1*TE缓冲液0.25μL组成一个PCR反应体系，每个PCR反应体系的总体积为1.15μL，其中基因组DNA浓度为10-50ng/μL，A260/A280 OD值为1.6-2.0；PCR扩增试剂为包含携带有HEX或FAM荧光基团的通用探针、dNTPs、Mg2+、DNA聚合酶和反应缓冲液的2xMasterMix。
通过竞争性等位基因特异性PCR扩增，最后对PCR产物进行荧光信号检测，根据荧光信号分组即可对样本进行基因型分型。利用这些引物组能够实现多位点联合检测，可以达到低成本高效率的检测人类红细胞ABO血型基因分型的目的(说明书附图1)。
基于竞争性等位基因特异性PCR的原理进行SNP分型的试剂盒，其中PCR反应在微流控芯片(北京博奥晶典生物技术有限公司，产品编号G020010，说明书附图2)上完成，制备方法步骤为：
(1)从24个位点中优选了检测人类红细胞ABO血型基因分型中的22个位点，将优选的22个位点特异引物组制定孔位表(见表1)，分别将22组等位基因引物SEQ ID No.1-66按照孔位表包被至芯片基板22个芯片反应池中，制成试剂盒中的芯片半成品。
每张芯片可检测4个样本，针对每个样本均设有1个内对照质控、1个空白对照以及1个阳性质控(即：表1中的内对照质控、空白对照以及阳性质控)。
表1芯片反应池对应检测指标
(2)将多种普通生物化学试剂(探针、酶、dNTPs等)按一定量比例进行混合并充分混匀，形成PCR扩增试剂(PCR预混液、1×TE缓冲液)。依据试剂盒检测人份对试剂半成品进行分装，PCR扩增试剂900μL/管/24人份，1×TE缓冲液500μL/管/24人份；
(3)依据试剂盒检测人份配备相应数量封口膜(1张/4人份)、对照品(人类基因组DNA 50μL/管/24人份)
(4)将制备成的上述芯片半成品、试剂半成品以及封口膜、对照品按照检测人份组装成一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒。
实施例3 22个SNP基因位点检测
1.采集260位无血缘关系的献血者的血液，提取基因组DNA：本试剂盒适用的样品为从全血中提取的人基因组DNA。被检基因组DNA需满足浓度为10ng/μL-50ng/μL。提取后的人基因组DNA需进行浓度测定，如果浓度高于50ng/μL，需经稀释后满足上述要求方可进行后续实验；浓度低于10ng/μL需重新提取直至符合要求方可。
2.用上述所制备的专用试剂盒检测260人份22个SNP位点信息，按照使用操作流程进行如下操作：
2.1分装PCR扩增试剂
在试剂存储和准备区内，根据样品数目，准备相应数量的0.2mL离心管，并在管上标记样品编号。从试剂盒中取出PCR扩增试剂，室温使其充分融化(自然解冻)，涡旋振荡，使其完全混匀，瞬时离心至管底。将融化后混匀的PCR扩增试剂按30μL/管(20μL PCR扩预混液+10μL 1×TE缓冲液)分装到同一样品编号的0.2mL离心管中，然后将其转移至标本制备区。
2.2混样
在样本制备区，样本DNA在使用前需室温解冻，然后混匀并瞬时离心；向含有PCR扩增试剂的0.2mL离心管中加入待测样品DNA各10μL，每份PCR反应体系总体积为40μL，每份样品PCR扩增体系组成见表2。
表2反应体系
2.3芯片加样
在样本制备区，从试剂盒中取出芯片使其恢复至室温。在洁净工作台内打开包装，将芯片水平放置，用移液器吸取38μL上述配制好的PCR扩增体系，从芯片右侧进样孔垂直将液体打入芯片，直至液体经进样通道到达左侧出样孔，此时应立即停止加样，然后用无尘纸擦去进出样孔残留的液体，最后用封口膜封闭进出样孔。
2.4芯片离心
打开离心机电源，将加样后的芯片固定在离心机上并配平，放置时，芯片反应池朝下，缺角在上，以4000rpm离心60秒后取下，如果芯片反应池中仍有气泡，可适当延长离心时间，直至气泡消失。
2.5芯片热封
打开热封仪电源，待温度稳定后，将托盘拉出，将芯片反应池朝上，芯片缺角位于左上角，插入托盘(每次可插入4张芯片)，推托盘进仓后，进行热封，待界面显示热封完毕后，即可取出芯片。
2.6PCR扩增
将芯片置于PCR扩增仪中，按表3中的热循环程序进行PCR扩增反应。
表3.核酸扩增反应程序
3.芯片扫描
使用ABO血型基因分型检测分析软件进行扫描、信号读取及结果判读。具体判读原则见表4。
根据结果判读标准，判读界面中内对照质控正常、空白对照正常以及阳性质控正常时，则芯片质控正常，表明本次检验结果有效。而判读界面中任一质控显示异常时，则判定本次样品检测结果无效，需要进行重检(说明书附图4)。
表4.荧光信号对应的ABO血型基因分型判读原则
4、检测结果及基因分型结果
根据检测分析软件进行扫描、信号读取及结果判读(如图4-14)，可知260例样本中基因分型结果见表5，按照判读原则中的45种基因分型组合检出18种，另外对260例样本进行血清学检测以及基因测序检测，将结果进行对比后，通过基因分型结果判读的基因表型和血清学以及基因测序结果100％相符。
表5人类红细胞ABO血型基因分型结果
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。
序列表
<110> 河南兴龙生物技术有限公司
<120> 一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组合、试剂盒及应用
<130> AJ1957309
<141> 2019-12-31
<160> 72
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cattagactt ctggggctta ggac 24
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gcattagact tctggggctt aggaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gggaccaaca ggcagtcttc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aacctgacca tctgcagcg 19
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aacctgacca tctgcagca 19
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<211> 20
<212> DNA
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actgaaggga ggcactgaca 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
acattatacc ttggcaacga gacg 24
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<211> 24
<212> DNA
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<400> 8
acattatacc ttggcaacga gaca 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
tctcctgtgt tctcattctg cagc 24
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<211> 20
<212> DNA
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<400> 10
cacggtgtca gcacctttgg 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cacggtgtca gcacctttga 20
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ggcggcgctt tgtgcttg 18
<210> 13
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gaaggatgtc ctcgtggtg 19
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ggaaggatgt cctcgtggta 20
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
ggccacctca ctgacttact 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cattgtctgg gagggcaca 19
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
cattgtctgg gagggcacg 19
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
cacagttaac ccaatggtgg tg 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ctatgtcttc accgaccagc c 21
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ctatgtcttc accgaccagc t 21
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agcgtcacgc ggggcac 17
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
cagctgtcag tgctggaggt gc 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cagctgtcag tgctggaggt gg 22
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<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
cgtcctgcca gcgcttg 17
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccgcatggag atgatcagt 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gccgcatgga gatgatcagc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaagcgccgc tcgcagaa 18
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
tggacgtgga catggagt 18
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
gtggacgtgg acatggaga 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtcaggatc tccacgccc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aggatctcca cgcccacg 18
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcaggatctc cacgcccaca 20
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtggacgtgg acatggag 18
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgtggagatc ctgactccg 19
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcgtggagat cctgactcca 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcccggctgc ttccgtagaa g 21
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttcggcaccc tgcaccccg 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gttcggcacc ctgcacccca 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
ctcgtaggtg aaggcctc 18
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcgtaggtga aggcctcccg 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcgtaggtga aggcctccca 20
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ctgttcggca ccctgcacc 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tagaaatcgc cctcgtcctt g 21
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtagaaatcg ccctcgtcct ta 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggaggccttc acctacgagc 20
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gacgagggcg atttctacta cc 22
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ggacgagggc gatttctact aca 23
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cgaccatcat ggcctggtg 19
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caccgacccc ccgaagaacc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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caccgacccc ccgaagaacg 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cttcacctac gagcgccg 18
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggtcggtgc aagagg 16
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggggtcggtg caagaga 17
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttcaggtggc tctcgtcgtg 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccacctgaac aagtacctg 19
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gccacctgaa caagtaccta 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctggtcccac aagtactcgg 20
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cagtgaacct cagcttcct 19
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<212> DNA
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gcagtgaacc tcagcttccc 20
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccgagtactt gtgggaccag 20
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aggcggtccg gaacccgt 18
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aggcggtccg gaaccgt 17
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cctcccagag cccctggc 18
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ggggacgggg ctgcc 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggggacggg gctgct 16
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccaccaggcg gtccggaac 19
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaaaaccaaa atgccacgca cttcg 25
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gaaaaccaaa atgccacgca cttct 25
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<400> 69
ccaggccagc ctcgatggtc 20
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gcgatttcta ctacctgggg g 21
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gcgatttcta ctacctgggg a 21
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
tggcaggccc tggtgagc 18
Claims (10)
1.一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，其特征在于，所述引物组包括24组，24组引物组的序列表如SEQ ID No.1-72所示。
2.根据权利要求1所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，其特征在于，所述的24组引物组及其对应的检测位点分别为：
第一组引物如序列表SEQ ID No.1-3所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的106（rs688976）位点；
第二组引物如序列表SEQ ID No .4-6所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的188（rs549446）位点；
第三组引物如序列表SEQ ID N o.7-9所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的189（rs549443）位点；
第四组引物如序列表 SEQ ID No .10-12所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的220（rs512770）位点；
第五组引物如序列表SEQ ID No .13-15所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的261（rs8176719）位点；
第六组引物如序列表SEQ ID No .16-18所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的297（rs8176720）位点；
第七组引物如序列表SEQ ID No .19-21所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的467（rs1053878）位点；
第八组引物如序列表SEQ ID No .22-24所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的526（rs7853989）位点；
第九组引物如序列表SEQ ID No.25-27所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的579（rs55764262）位点；
第十组引物如序列表SEQ ID No .28-30所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的646（rs8176740）位点；
第十一组引物如序列表SEQ ID No .31-33所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的657（rs8176741）位点；
第十二组引物如序列表SEQ ID No .34-36所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的681（rs8176742）位点；
第十三组引物如序列表SEQ ID No.37-39所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的703（rs8176743）位点；
第十四组引物如序列表SEQ ID No.40-42所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的721（rs781957267）位点；
第十五组引物如序列表SEQ ID No .43-45所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的771（rs8176745）位点；
第十六组引物如序列表SEQ ID No.46-48所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的796（rs8176746）位点；
第十七组引物如序列表SEQ ID No .49 - 51所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的803（rs8176747）位点；
第十八组引物如序列表 SEQ ID No .52-54所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的829（rs8176748）位点；
第十九组引物如序列表SEQ ID No .55-57所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的930（rs8176749）位点；
第二十组引物如序列表SEQ ID No .58-60所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1009（rs566015043）位点；
第二十一组引物如序列表SEQ ID No.61-63所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1061（rs56392308）位点；
第二十二组引物如序列表SEQ ID No .64-66所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的1096（rs8176751）位点；
第二十三组引物如序列表SEQ ID No .67-69所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的53（rs55876802）位点；
第二十四组引物如序列表SEQ ID No .70-72所示，用于检测ABO血型对应的遗传基因位点中的802（rs41302905）位点。
3.根据权利要求2所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，其特征在于，所述的24组引物组中每组引物组包含两条基于等位基因序列差异而设计的引物和一条共用配对引物。
4.根据权利要求3所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，其特征在于，
第一组引物中检测106G的引物对为序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.3，检测106T的引物对为序列表SEQ ID No.2和SEQ ID No.3；
第二组引物中检测188G的引物对为序列表SEQ ID No.4和SEQ ID No.6，检测188A的引物对为序列表SEQ ID No.5和SEQ ID No.6；
第三组引物中检测189C的引物对为序列表SEQ ID No.7和SEQ ID No.9，检测189T的引物对为序列表SEQ ID No.8和SEQ ID No.9；
第四组引物中检测220C的引物对为序列表SEQ ID No.10和SEQ ID No.12，检测220T的引物对为序列表SEQ ID No.11和SEQ ID No.12；
第五组引物中检测261G的引物对为序列表SEQ ID No.13和SEQ ID No.15，检测261delG的引物对为序列表SEQ ID No.14和SEQ ID No.15；
第六组引物中检测297A的引物对为序列表SEQ ID No.16和SEQ ID No.18，检测297G的引物对为序列表SEQ ID No.17和SEQ ID No.18；
第七组引物中检测467C的引物对为序列表SEQ ID No.19和SEQ ID No.21，检测467T的引物对为序列表SEQ ID No.20和SEQ ID No.21；
第八组引物中检测526C的引物对为序列表SEQ ID No.22和SEQ ID No.24，检测526G的引物对为序列表SEQ ID No.23和SEQ ID No.24；
第九组引物中检测579T的引物对为序列表SEQ ID No.25和SEQ ID No.27，检测579C的引物对为序列表SEQ ID No.26和SEQ ID No.27；
第十组引物中检测646T的引物对为序列表SEQ ID No.28和SEQ ID No.30，检测646A的引物对为序列表SEQ ID No.29和SEQ ID No.30；
第十一组引物中检测657C的引物对为序列表SEQ ID No.31和SEQ ID No.33，检测657T的引物对为序列表SEQ ID No.32和SEQ ID No.33；
第十二组引物中检测681G的引物对为序列表SEQ ID No.34和SEQ ID No.36，检测681A的引物对为序列表SEQ ID No.35和SEQ ID No.36；
第十三组引物中检测703G的引物对为序列表SEQ ID No.37和SEQ ID No.39，检测703A的引物对为序列表SEQ ID No.38和SEQ ID No.39；
第十四组引物中检测721C的引物对为序列表SEQ ID No.40和SEQ ID No.42，检测721T的引物对为序列表SEQ ID No.41和SEQ ID No.42；
第十五组引物中检测771C的引物对为序列表SEQ ID No.43和SEQ ID No.45，检测771T的引物对为序列表SEQ ID No.44和SEQ ID No.45；
第十六组引物中检测796C的引物对为序列表SEQ ID No.46和SEQ ID No.48，检测796A的引物对为序列表SEQ ID No.47和SEQ ID No.48；
第十七组引物中检测803G的引物对为序列表SEQ ID No.49和SEQ ID No.51，检测803C的引物对为序列表SEQ ID No.50和SEQ ID No.51；
第十八组引物中检测829G的引物对为序列表SEQ ID No.52和SEQ ID No.54，检测829A的引物对为序列表SEQ ID No.53和SEQ ID No.54；
第十九组引物中检测930G的引物对为序列表SEQ ID No.55和SEQ ID No.57，检测930A的引物对为序列表SEQ ID No.56和SEQ ID No.57；
第二十组引物中检测1009G的引物对为序列表SEQ ID No.58和SEQ ID No.60，检测1009A的引物对为序列表SEQ ID No.59和SEQ ID No.60；
第二十一组引物中检测1061C的引物对为序列表SEQ ID No.61和SEQ ID No.63，检测1061delC的引物对为序列表SEQ ID No.62和SEQ ID No.63；
第二十二组引物中检测1096G的引物对为序列表SEQ ID No.64和SEQ ID No.66，检测1096A的引物对为序列表SEQ ID No.65和SEQ ID No.66；
第二十三组引物中检测53G的引物对为序列表SEQ ID No.67和SEQ ID No.69，检测53T的引物对为序列表SEQ ID No.68和SEQ ID No.69；
第二十四组引物中检测802G的引物对为序列表SEQ ID No.70和SEQ ID No.72，检测802A的引物对为序列表SEQ ID No.71和SEQ ID No.72。
5.根据权利要求1~4任一项所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组，其特征在于，所述SEQ ID No.1 、SEQ ID No.4、 SEQ ID No.7、 SEQ ID No.10、 SEQ IDNo.13、 SEQ ID No.16、 SEQ ID No.19、SEQ ID No.22、SEQ ID No.25、 SEQ ID No.28、SEQ ID No.31、 SEQ ID No.34、 SEQ ID No.37、 SEQ ID No.40、SEQ ID No.43、SEQ IDNo.46、 SEQ ID No.49、 SEQ ID No.52、 SEQ ID No.55、 SEQ ID No.58、 SEQ ID No.61、SEQ ID No.64、SEQ ID No.67、SEQ ID No.70携带通用标签序列GAAGGTCGGAGTCAACGGATT；所述SEQ ID No.2 、SEQ ID No.5、 SEQ ID No.8、 SEQ ID No.11、 SEQ ID No.14、 SEQ IDNo.17、 SEQ ID No.20、SEQ ID No.23、SEQ ID No.26、 SEQ ID No.29、 SEQ ID No.32、SEQ ID No.35、 SEQ ID No.38、 SEQ ID No.41、SEQ ID No.44、SEQ ID No.47、 SEQ IDNo.50、 SEQ ID No.53、 SEQ ID No.56、 SEQ ID No.59、 SEQ ID No.62、SEQ ID No.65、SEQ ID No.68、 SEQ ID No.71携带通用标签序列GAAGGTGACCAAGTTCATGCT。
6.一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1~5任一项所述的引物组，所述引物组包括至少如序列表SEQ ID No.1-66所述的引物。
7.根据权利要求6所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括至少26个芯片反应池，至少2个定位点，每个所述芯片反应池中包被有一组引物组。
8.根据权利要求7所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒，其特征在于，每个所述芯片反应池中的引物组中三条引物积之和相等。
9.如权利要求6-8任一项所述的一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)从24个位点中选检测人类红细胞 ABO 血型基因分型中的22个位点，将选的22个位点特异引物组制定孔位表，分别将22组等位基因引物按照孔位表包被至芯片基板22个芯片反应池中，得到芯片半成品；
b)制备PCR 扩增试剂；
c)配备相应数量封口膜、对照品；
d)将芯片半成品、PCR 扩增试剂以及封口膜、对照品按照检测人份组装成一种用于检测人类红细胞 ABO 血型基因分型的试剂盒。
10.一种用于检测人类红细胞ABO血型基因分型试剂，其特征在于，包括权利要求1~5任一项所述的引物组或权利要求6~8任一项所述试剂盒。
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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| CN101403007A (zh) * | 2008-11-03 | 2009-04-08 | 深圳市血液中心 | Abo血型基因检测试剂及定型方法 |
| KR20150136558A (ko) * | 2014-05-27 | 2015-12-07 | 주식회사 시선바이오머티리얼스 | Pna 프로브 및 형광융해곡선분석을 이용한 혈액형 판별방법 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| "Missense mutations outside the catalytic domain of the ABO";Axel Seltsam;《TRANSFUSIONCOMPLICATIONS》;20051031;第1663-1669页 * |
| "番禺地区ABO 亚型基因分型研究*";谢敬文等;《中国输血杂志》;20160430;第29卷(第4期);第381-384页 * |
| ABO亚型Bel06的分子生物学鉴定;杜文竹等;《中国当代医药》;20151028(第30期);第166-170页 * |
| ABO基因启动子CpG岛甲基化与白血病的相关性;徐华等;《中国实验血液学杂志》;20080415(第02期);第240-260页 * |
| ABO血型新等位基因O61的分子生物学研究;陶苏丹等;《中国实验血液学杂志》;20101020(第05期);第1327-1330页 * |
| 运用多重PCR-直接测序法检测ABO基因型及其遗传多态性;陈峰等;《遗传》;20080615(第06期);第704-710页 * |
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