CN110982745A - 一种戊糖片球菌z-1、戊糖片球菌细菌素z-1及戊糖片球菌细菌素z-1的生产方法 - Google Patents

一种戊糖片球菌z-1、戊糖片球菌细菌素z-1及戊糖片球菌细菌素z-1的生产方法 Download PDF

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Abstract

综上，本发明公开了一种戊糖片球菌Z‑1、戊糖片球菌细菌素Z‑1及戊糖片球菌细菌素Z‑1的生产方法。戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）Z‑1的菌种保藏编号为(CGMCC NO.17820)，该菌株从浙江金华传统火腿中分离得到，其能够在MRS培养基里发酵产生一种新型的细菌素，新型细菌素通过两步纯化方式最后经鉴定得到。本发明提供的细菌素可抑制食品中其他常见的革兰氏阳性细菌、阴性菌，同时对热及pH稳定，可以被蛋白酶降解，因此安全性较高，不会在人体内残留，可作为食品防腐剂和抗菌剂而应用于食品和医药领域。整个工艺过程操作方便，能耗低，具有良好的应用前景。

Description

一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细 菌素Z-1的生产方法
技术领域
本发明涉及一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素Z-1的生 产方法,属于食品微生物领域。
背景技术
乳酸菌作为世界公认的食品级微生物，其在食品工业中已得到广泛应用。乳酸菌细菌素 是乳酸菌生长代谢产生有抑菌活性的蛋白或多肽类物质。乳酸菌细菌素具有抑菌谱广、在人 体内无残留、能作为天然防腐剂等优点而倍受国内外研究者的广泛关注。其中乳酸链球菌素 (Nisin)已广泛应用于食品工业中，但随着研究的深入，发现Nisin存在抑菌能力不稳定、 抑菌谱窄、抑菌时效短等诸多不足，限制了其在食品防腐领域的应用，寻找应用范围广的新 型生物防腐剂已经成为食品防腐领域的研究热点之一。
金华火腿是我国典型的传统发酵肉制品，研究报道不同地区的金华火腿中微生物菌群均 具有较高的丰富度和多样性，蕴含丰富的发酵微生物，其中优势菌属包括葡萄球菌属 (Staphylococcus)、普氏菌属(Prevotella)和丙酸菌属(Propionibacterium)等，目前，从金华火腿中筛选产细菌素乳酸菌的研究未见报道。
为了获得高纯度的细菌素，首先需要将细菌素从无细胞发酵液中提取出来，细菌素的提 取方法有很多，根据细菌素自身的特性，提取的方法主要有超声破壁法、酸沉淀法、等电点 沉淀法、微波法等。目前，常用的细菌素提取方法主要有硫酸铵盐析法、有机溶剂萃取法和 菌体吸附法。溶剂萃取法和盐析沉淀法易造成有机溶剂或重金属残留，且易降低细菌素活性、 且不利于后期的分离纯化。
其次，需要将杂蛋白去除，由于乳酸菌代谢产生的抑菌物质比较复杂，甚至还包含很多 的未知成分，且不同乳酸菌代谢的抑菌物质不同，所使用的纯化方法也不尽相同。但所有细 菌素分离纯化的方法都是基于细菌素的自身性质，如带电性、分子量等。目前细菌素纯化的 方法多采用凝胶过滤色谱、离子交换层析、反相高效液相色谱等技术相结合进一步纯化，去 除其中大量杂质，从而提高细菌素样品的纯度。
虽然国内外对不同来源的乳酸菌产细菌素研究较多，但在食品工业中实际应用较少，究 其原因是其中一些细菌素抑菌谱窄、抑菌效果不稳定。因此，充分利用我国金华火腿中的微 生物资源，筛选出新型产细菌素的乳酸菌，分离纯化出抑菌范围广、抑菌效果稳定的新型乳 酸菌细菌素，具有十分广阔的前景和价值。
发明内容
本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足，目的之一提供一株具有广谱抑菌活性 的戊糖片球菌；目的之二在于提供该菌株所产细菌素的制备方法。
本发明是由以下技术手段实现的：一种戊糖片球菌Z-1，其特征在于，一株戊糖片球菌 Z-1(Pediococcus pentosaceus)的保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2019年5月16日；保 藏编号为17820。
一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，将戊糖片球菌Z-1发酵，得到细菌素，采用pH 吸附法对细菌素进行粗提，通过纤维素DEAE-52离子交换层析柱和葡聚糖G-50分子筛对细菌 素进行分离纯化得到戊糖片球菌细菌素Z-1，经MALDI-TOF-MS分析确定戊糖片球菌细菌素的 分子量为8227.35Da。
所述戊糖片球菌细菌素Z-1同时抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
所述戊糖片球菌细菌素Z-1抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的任一种或多种；
其中，革兰氏阳性菌包括植物乳杆菌、清酒乳杆菌、弯曲乳杆菌、肠膜明串珠菌、腐生 葡萄球菌、乳酸乳球菌、单核增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌；
革兰氏阴性菌包括鼠伤寒沙门氏菌、波茨坦沙门氏菌、大肠杆菌。
所述戊糖片球菌细菌素Z-1具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，其特征在于，包括下列步骤：
(1)将保藏号为17820的戊糖片球菌Z-1(Pediococcus pentosaceus)以1％(v/v)的接种 量接种到无菌MRS液体培养基中，30℃恒温培养18-24h，然后在4℃条件下8000×g离心30min， 取其上清液用无菌0.22μm滤膜过滤，得到无细胞发酵上清液；
(2)无细胞发酵上清液在70℃条件下水浴30min，凉至室温，调至pH值6.0，磁力搅拌使细菌素吸附于细胞表面，然后在4℃条件下8000×g离心30min，收集菌体细胞，用50mM磷酸钠缓冲液洗涤2次去除杂质，然后重新悬浮于100mM NaCl溶液中，调pH＝2.0，磁力搅拌解吸附，离心取上清，0.22μm滤膜过滤，取滤液进行透析，经透析冻干之后得到细菌素粗提物；
(3)细菌素粗提物按设定比例溶于缓冲液种，经过DEAE-52纤维素柱洗脱和葡聚糖G-50 层析柱之后，得到成分均一、稳定的戊糖片球菌细菌素Z-1。
步骤(3)中，所述的DEAE-52纤维素柱的径高比为1:15；
所述的DEAE-52纤维素柱中细菌素的上样量为柱体积的5％，上样流速为1mL/min；
所述的DEAE-52纤维素柱所用的体积分数为0-0.6M，氯化钠水溶液的用量为柱体积的28 倍，流速为1mL/min。
步骤(3)中，所述的葡聚糖G-50层析柱的径高比为1:23；
所述的葡聚糖G-50层析柱的上样量为柱体积的5％；
所述的葡聚糖G-50层析柱平衡和洗脱的流速均为1mL/min，收集方式为每3min收集一管， 在OD254 nm处测量吸光值。
本发明的有益效果：
本发明首次提供了一种产新型乳酸菌细菌素的戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)Z-1 菌株。戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1分离自浙江金华传统火腿，是中国著名的传 统干腌肉制品，具有悠久的食用历史，因此戊糖片球菌发酵所产的细菌素应用到食品工业安 全系数高。
戊糖片球菌所产细菌素对多种革兰氏阳性细菌、阴性菌均具有很高的抑菌活性，具有广 谱抑菌活性，可用于制备抗菌或/和防腐产品，延长食品的保质期。同时戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1所产的细菌素，性质比较稳定，在pH 2-10的范围内，110℃以下均有较好的抑菌作用；此外，这个细菌素可以被所测试的所有蛋白酶，包括胃蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶等快速水解而完全失去活性，因此该细菌素产品随食品摄入人体后，不会在体内残留产生不利影响而导致人体的抗药性增强，有利于其在食品工业的 应用。
本发明先采用菌体吸附法对细菌素进行粗提，采用DEAE-52离子柱和葡聚糖凝胶G-50分离 纯化细菌素，其对细菌素得纯度可以达到96％以上，且细菌素的纯化率可达到50％以上。具 有简便、快速、成本低等的优点。
本发明采用的戊糖片球菌是被公认为GRPS，已经在食品工业中得到了广泛的应用，而戊 糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1所产的细菌素属于天然抗菌肽，具有较高的安全性， 可作为食品防腐剂和抗菌剂而应用于食品和医药领域，具有良好的应用前景。
综上，本发明公开了一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素 Z-1的生产方法。戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1的菌种保藏编号为(CGMCC NO.17820)，该菌株从浙江金华传统火腿中分离得到，其能够在MRS培养基里发酵产生一种 新型的细菌素，新型细菌素通过两步纯化方式最后经鉴定得到。本发明提供的细菌素可抑制 食品中其他常见的革兰氏阳性细菌、阴性菌，同时对热及pH稳定，可以被蛋白酶降解，因 此安全性较高，不会在人体内残留，可作为食品防腐剂和抗菌剂而应用于食品和医药领域。 整个工艺过程操作方便，能耗低，具有良好的应用前景。
附图说明
图1是细菌素样品图。
图2是DEAE-52分离纯化细菌素图。
图3是DEAE-52分离纯化各成分抑菌活性图。
图4是葡聚糖G-50分离纯化细菌素图。
图5是葡聚糖G-50分离纯化各成分抑菌活性图。
图6是戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1所产的细菌素MALDI-TOF-MS图。
图7是戊糖片球菌素Z-1的酸碱稳定性图。
图8是戊糖片球菌素Z-1的热稳定性图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步解释：
实施例1：
产细菌素乳酸菌的筛选和鉴定；
1.乳酸菌的分离纯化；在无菌操作的环境下，用经过高温灭菌的镊子和剪刀从传统自然 发酵火腿上三签点取样(大小：1cm×1cm×1cm)，剪碎后备用。采用无菌生理盐水适当稀释 样品，选取不同稀释度分别涂布MRS平板上，在培养箱中37℃培养48h。再挑取符合要求 的单菌落进一步划线分离纯化，纯菌进行革兰氏染色，进行接触酶和葡萄糖产气试验，筛选 的乳酸菌用无菌MRS液体培养基加20％甘油(W/V)-80℃保存。
2.指示菌浓度的确定；
将活化好的指示菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分别接种于液体LB培养基中，30℃恒温培 养12h。将培养完成的菌悬液作为原液进行梯度稀释，取100μL稀释液涂布于PCA计数平板上， 利用稀释平板法计数。同时进行抑菌实验。根据抑菌圈直径、边缘整齐程度和清晰度，确定 指示菌的最佳浓度。
3.具有抑菌效果的乳酸菌的初筛；
将2次活化后的乳酸菌以1％(v/v)的接种量接种到无菌MRS液体培养基中，30℃恒温 培养18-24h，4℃，8000×g离心30min，取其上清液用无菌0.22μm滤膜过滤，得到无细胞发酵上清液，利用双层琼脂平板法和浊度法检测其抑菌活性。选取有抑菌效果的菌株进行复 筛。
4.具有抑菌效果的乳酸菌的复筛；
(1)有机酸抑菌作用的排除；
以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，乳酸乳球菌为阳性对照，pH＝6.0的乙酸和乳酸 为阴性对照。用0.1M和2M的无菌NaOH调发酵上清液pH＝6.0排除乙酸和乳酸的抑菌影响， 经过0.22μm滤膜过滤排除残留菌体细胞，得到无细胞上清液，用双层琼脂平板法做抑菌实验， 游标卡尺十字交叉法测量抑菌圈直径。
(2)过氧化氢对抑菌作用的排除；
过氧化氢抑菌浓度的确定：将2mL过氧化氢放入8mL无菌水试管中，进行梯度稀释，使最终体积比浓度分别为2×10-1、2×10-2、2×10-3、2×10-4、2×10-5、2×10-6v/v，分别取100μL 做牛津杯抑菌实验，确定本研究过氧化氢应采用的最佳抑菌浓度。
(3)酶解排除过氧化氢；
将过氧化氢酶溶解于50mM的磷酸盐缓冲中，加入无细胞发酵上清液最终浓度为5mg/mL，37℃水浴反应2h后进行抑菌试验，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌；乳酸 乳球菌为阳性对照，以未经过氧化氢酶作用的发酵上清液和过氧化氢酶液为阴性对照，做抑菌实验。
(4)抑菌物质的蛋白酶检测；
将排除过氧化氢以后仍有抑菌效果的菌株作为继续试验的对象。分别用胰蛋白酶、木瓜 蛋白酶和蛋白酶K对排除有机酸和过氧化氢之后的菌株发酵上清液进行酶解实验。取发酵液 分别加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K，最终浓度为1mg/mL，且37℃水浴加热2h， 用牛津杯双层平板法法检测抑菌活性。
表1产细菌素乳酸菌初筛结果
Figure BDA0002334214440000051
表2有机酸排除pH确定试验
Figure BDA0002334214440000052
表3有机酸排除试验结果
Figure BDA0002334214440000053
Figure BDA0002334214440000061
表4不同浓度过氧化氢的抑菌效果
Figure BDA0002334214440000062
表5排除过氧化氢试验结果
Figure BDA0002334214440000063
表6蛋白酶检测试验结果
Figure BDA0002334214440000064
5.产细菌素乳酸菌的鉴定
生理生化鉴定：根据《伯杰氏细菌鉴定手册》和《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》对筛 选出来的菌株进行革兰氏染色及生理生化特征鉴定。
表7L5菌株的糖发酵鉴定结果
Figure BDA0002334214440000065
Figure BDA0002334214440000071
6.菌株16S rDNA鉴定；
对L5菌株应用16S rDNA进行测序鉴定，得到约1200bp的PCR扩增产物，条带明亮且单一， PCR产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。将所测得的基因序列结果在 NCBI网站中应用BLAST软件在基因库中进行同源性搜索，目的菌株与戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus M58834.1的相似度最高为98％，其结果与生理生化鉴定一致，确认目的菌株为戊 糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)，将其命名为戊糖片球菌Z-1(Pediococcus pentosaceus Z-1)。
实施例2
新型乳酸菌细菌素的鉴定；
1.乳酸菌细菌素的提取：将活化后的戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1以1％的接 种量将目的菌株种子液接种于MRS液体培养基中，30℃培养20h。发酵液70℃水浴30min，凉 至室温，调至pH值6.0，磁力搅拌使细菌素吸附于细胞表面，4℃，8000×g，离心30min，收 集菌体细胞，用50mM磷酸钠缓冲液洗涤2次去除杂质，然后重新悬浮于100mMNaCl溶液中， 调pH＝2.0，磁力搅拌解吸附，离心取上清，0.22μm滤膜过滤，取滤液进行透析，冻干；即得 细菌素粗提物。
2.乳酸菌细菌素的分离纯化：称取100mg冻干浓缩后的细菌素粗提物溶于50mLPBS缓冲 液中，过0.22μm膜并超声脱气，添加的样品体积约为柱体积的5％(5mL)。采用阶段洗脱的 方法，将恒流泵的一端插入洗脱液体积要更换添加NaCl的磷酸盐缓冲液中，NaCl的添加量分 别为0.2、0.4、0.6M，收集流出液，每5min收集一管，洗脱速度为1mL/min，每管收集5min， 在245nm下检测蛋白吸收峰；在透析袋中装入20-30mL离子交换后收集的含蛋白的氯化钠溶 液，放入盛有蒸馏水的烧杯中，并用磁力搅拌器不断搅拌，加速透析过程。透析48h，每6h 换一次水。透析后的样品进行冻干处理并根据牛津杯法测抑菌活性；收集经过DEAE-52离子交 换层析分离出的抑菌活性组分，经透析除盐，冷冻干燥之后，称取150mg溶于磷酸盐中，进 行Sephadex G-50凝胶色谱进行进一步分离。所用缓冲液为磷酸盐缓冲液，平衡和洗脱的流速 均为1mL/min，收集方式为每3min收集一管，在OD254 nm处测量吸光值，经透析除盐、冻干 后检测活性峰。经鉴定后，纯度为96.62％。
3.乳酸菌细菌素的鉴定；
将经过Tricine-SDS-PAGE电泳纯化后的蛋白采用5800超高分辨飞行时间质谱仪进行 MALDI-TOF-MS分析(扫描范围1-500KDa)。离子源为基质辅助激光解吸电离(MALDI)，离子加速电压设为20KV，正离子线性高分子模式。测定其分子量为8227.35Da的小肽类物质，其氨基酸序列为 MAITLKTELLDQKMTEVFDCSNDQTPLRDAMCNHVMDDNGHDTMKTIAEAKKWENMNDAE。
实施例3
新型乳酸菌细菌素的抗菌活性；
1.戊糖片球菌素Z-1的酸碱稳定性。
将纯化后得到的细菌素纯品与Nisin分别溶于PBS中形成蛋白溶液，最终蛋白浓度均为 0.9mg/mL。取0.5mL分装于离心管中，将其pH分别调节为2、3、4、5、6、7、8、9、10， 37℃水浴加热30min后，将pH调回中性。处理完毕后，以金黄色葡萄球菌为指示菌，取100 μL做抑菌圈实验，检测片球菌素Z-1和Nisin抑菌活性，用游标卡尺十字交叉法测量抑菌圈 直径。
2.戊糖片球菌素Z-1的热稳定性
将纯化后得到的细菌素纯品与Nisin分别溶于PBS中形成蛋白溶液，最终蛋白浓度均为 0.9mg/mL。取0.5mL分装于离心管中，将离心管按标记分别于温度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃(高压)的条件下处理30min。处理完毕后，置于室温备用。以 20℃为空白对照，以金黄色葡萄球菌为指示菌，利用双层琼脂平板法检测戊糖片球菌素Z-1 和Nisin抑菌活性。
3.戊糖片球菌素Z-1的酶敏感性试验
分别将蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶等酶溶于缓冲液中，最终浓度为1mg/mL，并用2M HCl和NaOH调至各个酶的最适反应pH值，如：胰蛋白酶(pH 7.6)、胃蛋白酶(pH 2.0)、 木瓜蛋白酶(pH 5.6)、脂肪酶酶(pH 5.6)和蛋白酶K(pH 8.7)等，以未加蛋白酶处理的 样品为对照，37℃水浴2h后，将pH调回中性，最终浓度为1mg/mL金黄色葡萄球菌为指 示菌，检测其抑菌活性。
表8戊糖片球菌素Z-1的酶敏感性
Figure BDA0002334214440000081
Figure BDA0002334214440000091
4.戊糖片球菌素Z-1的抑菌谱
将纯化得到的细菌素分别选用表9所述的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌为指示菌株，测 定其抑菌活性。结果表明，戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Z-1所产的细菌素对革兰 氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较好的抑菌效果。
表9戊糖片球菌素Z-1的抑菌谱
Figure BDA0002334214440000092
SEQ ID NO.1
MAITLKTELLDQKMTEVFDCSNDQTPLRDAMCNHVMDDNGHDTMKTIAEAKKWENMNDAE
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下， 可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范 围，其包括所述每个因素的等同替换。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种戊糖片球菌Z-1、戊糖片球菌细菌素Z-1及戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 60
<212> PRT
<213> 戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)
<400> 1
Met Ala Ile Thr Leu Lys Thr Glu Leu Leu Asp Gln Lys Met Thr Glu
1 5 10 15
Val Phe Asp Cys Ser Asn Asp Gln Thr Pro Leu Arg Asp Ala Met Cys
20 25 30
Asn His Val Met Asp Asp Asn Gly His Asp Thr Met Lys Thr Ile Ala
35 40 45
Glu Ala Lys Lys Trp Glu Asn Met Asn Asp Ala Glu
50 55 60

Claims (8)

1.一种戊糖片球菌Z-1，其特征在于，一株戊糖片球菌Z-1（Pediococcus pentosaceus）的保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2019年5月16日；保藏编号为17820。
2.一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，将戊糖片球菌Z-1发酵，得到细菌素，采用pH吸附法对细菌素进行粗提，通过纤维素DEAE-52离子交换层析柱和葡聚糖G-50分子筛对细菌素进行分离纯化得到戊糖片球菌细菌素Z-1，经MALDI-TOF-MS 分析确定戊糖片球菌细菌素的分子量为 8227.35 Da。
3.根据权利要求2所述的一种戊糖片球菌细菌素，其特征在于，所述戊糖片球菌细菌素Z-1同时抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
4.根据权利要求2所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，所述戊糖片球菌细菌素Z-1抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的任一种或多种；
其中，革兰氏阳性菌包括植物乳杆菌、清酒乳杆菌、弯曲乳杆菌、肠膜明串珠菌、腐生葡萄球菌、乳酸乳球菌、单核增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌；
革兰氏阴性菌包括鼠伤寒沙门氏菌、波茨坦沙门氏菌、大肠杆菌。
5.根据权利要求2所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1，其特征在于，所述戊糖片球菌细菌素Z-1具有 SEQ ID NO.1 所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求2或5所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，其特征在于，包括下列步骤：
（1）将保藏号为17820的戊糖片球菌Z-1（Pediococcus pentosaceus）以1%（v/v）的接种量接种到无菌MRS液体培养基中，30℃恒温培养18-24h，然后在4℃条件下8000× g离心30min，取其上清液用无菌0.22 μm滤膜过滤，得到无细胞发酵上清液；
（2）无细胞发酵上清液在70℃条件下水浴30 min，凉至室温，调至pH值6.0，磁力搅拌使细菌素吸附于细胞表面，然后在4℃条件下8000× g离心30 min，收集菌体细胞，用50 mM磷酸钠缓冲液洗涤2次去除杂质，然后重新悬浮于100 mM NaCl溶液中，调pH=2.0，磁力搅拌解吸附，离心取上清，0.22 μm滤膜过滤，取滤液进行透析，经透析冻干之后得到细菌素粗提物；
（3）细菌素粗提物按设定比例溶于缓冲液种，经过DEAE-52纤维素柱洗脱和葡聚糖G-50层析柱之后，得到成分均一、稳定的戊糖片球菌细菌素Z-1。
7.根据权利要求6所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，步骤（3）中，所述的DEAE-52纤维素柱的径高比为1:15；
所述的DEAE-52纤维素柱中细菌素的上样量为柱体积的5%，上样流速为1 mL/min；
所述的DEAE-52纤维素柱所用的体积分数为0-0.6 M，氯化钠水溶液的用量为柱体积的28倍，流速为1 mL/min。
8.根据权利要求6所述的一种戊糖片球菌细菌素Z-1的生产方法，步骤（3）中，所述的葡聚糖G-50层析柱的径高比为1:23；
所述的葡聚糖G-50层析柱的上样量为柱体积的5%；
所述的葡聚糖G-50层析柱平衡和洗脱的流速均为1 mL/min，收集方式为每3min收集一管，在OD254 nm处测量吸光值。
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