CN110972943A - 一种绣球花高效无菌播种方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种绣球花高效无菌播种方法，包括如下步骤：1)人工授粉或自然授粉后3个月左右后，摘取饱满的果实，清洗干净备用；2)在超净工作台上将果实用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗干净；3)在超净工作台上用变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，并覆盖滤纸；4)将灭菌过的果实凉干，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上培养皿盖子，放入干燥器中，进行干燥；5)充分干燥后，在超净工作台上将果实取出，用刀将果实顶部切开，用镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀散于萌发培养基中培养；6)培养一段时间后，将萌发的幼苗转入生根培养基中培养；7)培养一段时间后，苗形成发达的根系，置于温室驯化；8)驯化一段时间后，将苗清洗干净，进行炼苗。该方法操作简单、污染率低、成苗率高、育苗周期短，适用于大叶绣球、圆锥绣球和蜡莲绣球等多数绣球属的种和品种。

Description

一种绣球花高效无菌播种方法

技术领域

本发明属于植物培育繁殖技术领域，具体是一种绣球花高效无菌播种方法。

背景技术

绣球花为虎耳草科(Saxifragaceae)绣球属(Hydrangea)，又称八仙花，因其花色紫、红、蓝、白、绿等色系丰富，球状、簇状、柱状等形态多样，多年生、花期长，且品种繁多、适应性强，具有耐寒、耐荫、抗性强、病虫害少和易于养护等特点，深受业界推崇，在世界广为栽培。

已有的绣球品种多数为国外品种，国内培育出的品种较少，播种效率低下是重要原因之一。传统播种受到到种子成熟度、基质、水份和病虫害等多种原因影响，成苗率低、周期长。无菌播种是解决这些问题的有效方法。国内外已报道的绣球无菌播种研究都采用果实切片或人工剥离种子，由于绣球种子非常微小，已有的无菌播种方法操作难度大、污染率高、萌发率低，无法为绣球新品种的培育提供大量的材料。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，目的在于设计提供一种绣球花高效无菌播种方法，该方法操作简单、污染率低、成苗率高、育苗周期短，适用于大叶绣球、圆锥绣球和蜡莲绣球等多数绣球属的种和品种。

本发明的技术方案如下：

一种绣球花高效无菌播种方法，其特征在于包括如下步骤：

1)人工授粉或自然授粉后3个月左右后，摘取饱满的果实，清洗干净备用；

2)在超净工作台上将果实用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗干净；

3)在超净工作台上用变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，并覆盖滤纸；

4)将灭菌过的果实凉干，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上培养皿盖子，放入干燥器中，进行干燥；

5)充分干燥后，在超净工作台上将果实取出，用刀将果实顶部切开，用镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀散于萌发培养基中培养；

6)培养一段时间后，将萌发的幼苗转入生根培养基中培养；

7)培养一段时间后，苗形成发达的根系，置于温室驯化；

8)驯化一段时间后，将苗清洗干净，进行炼苗。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤1)中：人工授粉所用母本为容器苗，在4月至5月进行，授粉后将母本置入温室，开放授粉为容器苗或地栽培苗，置于室外，授粉后，施用奥绿A2缓释肥3-5g，每隔7d整株喷洒500倍-700倍多菌灵溶液，3个月左右后，当萼片失水干燥、果实膨大未干燥时，采集饱满的果实，采集的果实，用酒精棉球将擦拭干净，放入洗洁剂、10％次氯酸钠混合溶液中，在磁力搅拌器上搅拌20-30min，再用自来水冲洗0.5-1h备用。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤2)中：75％酒精浸泡10-15s，倒掉酒精后，0.1％的升汞溶液浸泡20-30min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，用无菌水冲洗5次。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤3)中：将变色硅胶干燥剂、滤纸和培养皿进行高温灭菌，灭菌后将变色硅胶干燥剂放入烘箱中充分干燥，至变为蓝紫色，充分冷却，在超净工作台上，将变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，厚度为培养皿高度的三分之一，并覆盖滤纸。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤4)中：将灭菌后的果实晾干1-2h，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上盖子，用撕拉膜封口，放入干燥器中，干燥1-3d。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤5)中：在超净工作台上将干燥后的果实取出，用无菌刀将果实顶部切开，用无菌镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀撒入萌发培养基中进行萌发培养；萌发培养基为MS基本培养基添加0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.8；培养室中培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光强2500Lx。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤6)中：种子培养10-15d后，开始萌发，30-40d后，萌发率达到最大，当幼苗高度达到0.5cm以上，将幼苗接入生根培养基进行生根培养，生根培养基为MS基本培养基添加0.1-0.2mg·L^-1萘乙酸、0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.8。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤7)中：在生根培养基中培养40-50d后，幼苗主根发达，并具有3-6个须根，当75％幼苗高度达到1.5cm以上，将组培瓶苗置于温室苗床上驯化，75％遮荫。

所述的绣球花高效无菌播种方法，步骤8)中：炼苗基质配方为50％泥炭、50％珍珠岩(体积比)，充分搅拌，分装入72孔穴盘中，使用前7d浇透水，使用0.2％-0.3％高锰酸钾消毒；组培瓶驯化3-7d后，将增殖苗用自来水清洗，洗净残留培养基，将根部插入基质中，置于全光照喷雾温室中进行炼苗；全光照喷雾温室温平均温度25±2℃，调整喷雾间隔时间和持续时间，使相对湿度保持在80％-90％，每隔10d喷洒500倍多菌灵溶液；培养35-60d后，形成健壮的绣球实生苗。

本发明的绣球花高效无菌播种方法，操作简单高效，污染率低，对种子伤害小，萌发率高，每颗果实可获得200-500株实生苗，繁育周期短，有效提高绣球育种工作的效率，具有广阔的市场前景。

本申请文件中涉及的百分含量除另有说明外，均指重量百分含量。

具体实施方式

实施例对象：大叶绣球人工授粉果实

步骤1)人工授粉所用母本为容器苗，在4月至5月进行，授粉后将母本置入温室，施用奥绿A2缓释肥3g。每隔7d整株喷洒500多菌灵溶液。3个月左右后，当萼片失水干燥、果实膨大未干燥时，采集饱满的果实。采集的果实，用酒精棉球将擦拭干净，放入洗洁剂、10％次氯酸钠混合溶液中，在磁力搅拌器上搅拌30min，再用自来水冲洗1h备用；

步骤2)超净工作台上在75％酒精浸泡10-15s，倒掉酒精后，0.1％的升汞溶液浸泡25min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，用无菌水冲洗5次；

步骤3)将变色硅胶干燥剂、滤纸和培养皿进行高温灭菌，灭菌后将变色硅胶干燥剂放入烘箱中充分干燥，至变为蓝紫色，充分冷却。变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，厚度为培养皿高度的三分之一，并覆盖滤纸；

步骤4)将灭菌后的果实晾干1h，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上盖子，用撕拉膜封口，放入干燥器中，干燥1d；

步骤5)在超净工作台上将干燥后的果实取出，用无菌刀将果实顶部切开，用无菌镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀撒入萌发培养基中进行萌发培养；萌发培养基为MS基本培养基添加0.7％卡拉胶和2.0％蔗糖，pH调至5.8；培养室中培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光强2500Lx；

步骤6)种子培养10d后，开始萌发，30d后，萌发率达到最大。当幼苗高度达到0.5cm以上，将幼苗接入生根培养基进行生根培养。生根培养基为MS基本培养基添加0.1-0.2mg·L^-1萘乙酸、0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.8；

步骤7)在生根培养基中培养45d后，幼苗根系发达，75％幼苗高度达到1.5cm以上，将组培瓶苗置于温室苗床上驯化，75％遮荫；

步骤8)炼苗基质配方为50％泥炭、50％珍珠岩(体积比)，充分搅拌，分装入72孔穴盘中，使用前7d浇透水，使用0.3％高锰酸钾消毒；组培瓶驯化3d后，将增殖苗用自来水清洗，洗净残留培养基，将根部插入基质中，深度为嫩枝长度的1/3，置于全光照喷雾温室中进行炼苗；全光照喷雾温室温平均温度25±2℃，调整喷雾间隔时间和持续时间，使相对湿度保持在80％-90％，每隔10d喷洒500倍多菌灵溶液；培养50d后，形成健壮的绣球实生苗。

采用上述实施列无菌播种方法，获得的大叶绣球杂交后代，平均每颗果实能够成活350株杂交后代，污染率仅为0.1％，周期短，后代播种次年就能少量开花，有效缩短绣球育种效率，提高育种效率。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种绣球花高效无菌播种方法，其特征在于包括如下步骤：

1)人工授粉或自然授粉后3个月左右后，摘取饱满的果实，清洗干净备用；

2)在超净工作台上将果实用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并冲洗干净；

3)在超净工作台上用变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，并覆盖滤纸；

4)将灭菌过的果实凉干，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上培养皿盖子，放入干燥器中，进行干燥；

5)充分干燥后，在超净工作台上将果实取出，用刀将果实顶部切开，用镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀散于萌发培养基中培养；

6)培养一段时间后，将萌发的幼苗转入生根培养基中培养；

7)培养一段时间后，苗形成发达的根系，置于温室驯化；

8)驯化一段时间后，将苗清洗干净，进行炼苗。

2.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤1)中：人工授粉所用母本为容器苗，在4月至5月进行，授粉后将母本置入温室，开放授粉为容器苗或地栽培苗，置于室外，授粉后，施用奥绿A2缓释肥3-5g，每隔7d整株喷洒500倍-700倍多菌灵溶液，3个月左右后，当萼片失水干燥、果实膨大未干燥时，采集饱满的果实，采集的果实，用酒精棉球将擦拭干净，放入洗洁剂、10％次氯酸钠混合溶液中，在磁力搅拌器上搅拌20-30min，再用自来水冲洗0.5-1h备用。

3.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤2)中：75％酒精浸泡10-15s，倒掉酒精后，0.1％的升汞溶液浸泡20-30min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，用无菌水冲洗5次。

4.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤3)中：将变色硅胶干燥剂、滤纸和培养皿进行高温灭菌，灭菌后将变色硅胶干燥剂放入烘箱中充分干燥，至变为蓝紫色，充分冷却，在超净工作台上，将变色硅胶干燥剂平铺于培养皿中，厚度为培养皿高度的三分之一，并覆盖滤纸。

5.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤4)中：将灭菌后的果实晾干1-2h，均匀平铺于步骤3)中的滤纸上，盖上盖子，用撕拉膜封口，放入干燥器中，干燥1-3d。

6.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤5)中：在超净工作台上将干燥后的果实取出，用无菌刀将果实顶部切开，用无菌镊子轻柔的挤压果实，将种子挤出，将种子均匀撒入萌发培养基中进行萌发培养；萌发培养基为MS基本培养基添加0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.8；培养室中培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光强2500Lx。

7.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤6)中：种子培养10-15d后，开始萌发，30-40d后，萌发率达到最大，当幼苗高度达到0.5cm以上，将幼苗接入生根培养基进行生根培养，生根培养基为MS基本培养基添加0.1-0.2mg·L^-1萘乙酸、0.7％卡拉胶和1.0％-2.0％蔗糖，pH调至5.8。

8.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤7)中：在生根培养基中培养40-50d后，幼苗主根发达，并具有3-6个须根，当75％幼苗高度达到1.5cm以上，将组培瓶苗置于温室苗床上驯化，75％遮荫。

9.如权利要求1所述的绣球花高效无菌播种方法，其特征在于步骤8)中：炼苗基质配方为50％泥炭、50％珍珠岩(体积比)，充分搅拌，分装入72孔穴盘中，使用前7d浇透水，使用0.2％-0.3％高锰酸钾消毒；组培瓶驯化3-7d后，将增殖苗用自来水清洗，洗净残留培养基，将根部插入基质中，置于全光照喷雾温室中进行炼苗；全光照喷雾温室温平均温度25±2℃，调整喷雾间隔时间和持续时间，使相对湿度保持在80％-90％，每隔10d喷洒500倍多菌灵溶液；培养35-60d后，形成健壮的绣球实生苗。