CN103858771A - 一种玉米转基因组培苗的移栽方法 - Google Patents

一种玉米转基因组培苗的移栽方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种玉米转基因组培苗的移栽方法。该方法是:(1)将组培苗加无菌水于培养室中炼苗1-2天;(2)取出洗净后,将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入含有甲基硫菌灵和硫酸铜钙的溶液中浸1分钟;(3)将组培苗种植于营养土中,营养土的组分为腐殖质土、草木灰和蛭石,添加甲基硫菌灵和硫酸铜钙;再加入生物有机肥,覆盖薄膜静置2-3天;(4)移栽后的第5-7天和第10-12天,各喷雾1次喹啉铜溶液。利用本发明提供的玉米组培苗的移栽方法,玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上,移栽后玉米植株生产旺盛,能够正常的开花结实,平均每株结实25-40粒;改进了营养土的配置和灭菌方法,节省经济及人工成本。

Description

一种玉米转基因组培苗的移栽方法
技术领域
本发明涉及一种玉米转基因组培苗的移栽方法,属于玉米转基因组织培养技术领域。
背景技术
玉米是我国重要的粮食作物和经济作物,2012年我国玉米种植面积在5.24亿亩,平均亩产1400斤左右,2012年总产在4000亿斤左右。我国玉米在育种、栽培、植保、加工等领域的研究均处于国际领先水平。现代转基因技术的发展对提高玉米抗性、改良玉米品质等发挥重要的作用,玉米的转基因育种也逐渐在育种领域占有一席之地。由于玉米转基因育种所选择的自交系为易受侵染的自交系,抗逆性差,易感多种病虫害,且在恒温组培室里的遗传转化前期周期较长,导致玉米转基因组培苗适应性差,移栽成活率较低。通过转基因技术得到的具有优良性状的玉米再生苗,不能保证以高成活率移栽,限制了玉米组织培养和转基因技术的发展。因此,提高阳性苗的成活率至关重要。
现有玉米转基因组培苗的移栽方法包括炼苗、灭菌水洗净培养基、移栽至经过高压蒸汽灭菌的成品营养土中等步骤,此移栽方法有两个弊端:1、除短时间炼苗外没有提高组培苗抗逆性和适应性的措施,转基因玉米苗移栽成活率稍低,成活率约为60%-80%,平均每株结实20-30粒;2、对营养土的处理为高压蒸汽灭菌,不仅需要购买灭菌仪器,还需人工对营养土进行分装、灭菌、晾晒,增加经济和人工成本。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足,提供了一种玉米转基因组培苗的移栽方法。采用该方法,玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上,移栽后玉米植株生产旺盛,能够正常的开花结实。
本发明的技术方案是:一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,依次包括以下步骤:
(1)将生长在1/2MS生根培养基中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口,在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,培养室中炼苗1-2天;
(2)用镊子将组培苗从培养瓶中取出,灭菌水洗净培养基;然后将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒,吸水纸上晾干;所述浸根液具体为:每1kg水加入4.5-5.5g甲基硫菌灵(有效成分含量为70%)和4.5-5.5g硫酸铜钙(有效成分含量为77%);
(3)将组培苗种植于营养土中(营养土需覆盖过根茎连接处1cm);培养室内的湿度为65-75%,光照强度为4500-5500Lx,温度为27-29℃;
所述的营养土为:将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀,按照每20升营养土(非压缩体积)添加甲基硫菌灵(有效成分含量为70%)和硫酸铜钙(有效成分含量为77%)各1克的比例添加并混合均匀,加水至手捏成团、松手即散,室温覆盖塑料薄膜静置,第2天加入20g生物有机肥(加水溶解),混合均匀,室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cm×15cm-20cm×20cm带吸水孔的塑料营养钵中;所述生物有机肥的N+P2O5+K2O≥5%,有机质≥45%,有益微生物≥10亿/克;
(4)移栽后的第5-7天和第10-12天,各喷雾1次0.03%的喹啉铜溶液,每次用量为100棵苗用8-12ml0.03%的喹啉酮溶液;
(5)移栽7天之内不浇水,防止污染及烂根,之后一周浇水一次;
(6)移栽三周之后,待转基因玉米苗芯叶长出、长势良好,即可移至大田或植物生长室,此后同普通玉米管理方法一致。
与现有技术相比,本发明具有如下优点和显著的进步:
1、利用本发明提供的玉米组培苗的移栽方法,玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上,移栽后玉米植株生产旺盛,能够正常的开花结实,平均每株结实25-40粒。
2.改进了营养土的配置和灭菌方法,节省经济及人工成本。
具体实施方式
实施例1玉米组培苗的移栽
(1)配制营养土
在玉米组培苗移栽前,将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀,按照每20升土(非压缩体积)添加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和77%硫酸铜钙可湿性粉剂各1克的比例添加并混合均匀,加水至手捏成团、松手即散,室温覆盖塑料薄膜静置,第2天加入10g生物有机肥(N+P2O5+K2O≥5%,有机质≥45%,有益微生物≥10亿/克,使用时加水溶解),混合均匀,室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cm×15cm的带吸水孔的塑料营养钵中。
(2)炼苗
将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口,在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天;
(3)取出组织苗
移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出,取时要用镊子小心地操作,切勿把根系损坏,然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉,在浸根液中浸根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位1分钟,吸水纸上晾干;所述浸根液具体为:每1kg水加入5g70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和和5g77%硫酸铜钙可湿性粉剂;
(4)移栽
移栽时将营养土挖一个深10cm,宽10cm的小孔,然后再将植株种植下去,让根舒展开,并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土,以覆盖过根茎连接处1cm为宜,以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽35株综31玉米转基因组培苗。在移栽苗周围打圈轻浇少量水,保证室内空前湿度保持在70%,培养室内光照强度为5000Lx,温度为28℃。
(5)移栽后的第5天和第11天,喷雾1次0.03%的喹啉酮溶液,每次用量为每100棵苗10ml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周内不浇水,一周后每周浇一次水,水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽18天后移栽至日光大棚培养,34株转基因苗在日光大棚生长正常,移栽成活率为97.1%。收获后,平均每株结实25-30粒。
实施例2玉米组培苗的移栽
(1)配制营养土
在玉米组培苗移栽前,将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀,按照每20升土(非压缩体积)添加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和77%硫酸铜钙可湿性粉剂各1克的比例添加并混合均匀,加水至手捏成团、松手即散,室温覆盖塑料薄膜静置,第2天加入10g生物有机肥(N+P2O5+K2O≥5%,有机质≥45%,有益微生物≥10亿/克,使用时加水溶解),混合均匀,室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cm×20cm的带吸水孔的塑料营养钵中。
(2)炼苗
将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口,在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天;
(3)取出组织苗
移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出,取时要用镊子小心地操作,切勿把根系损坏,然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉,在浸根液中浸根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位1分钟,吸水纸上晾干。所述浸根液具体为:每1kg水加入5g70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和5g77%硫酸铜钙可湿性粉剂;
(4)移栽
移栽时将营养土挖一个深12cm,宽10cm的小孔,然后再将植株种植下去,让根舒展开,并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土,以覆盖过根茎连接处1cm为宜,以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽41株综31转基因玉米组培苗。在移栽苗周围打圈轻浇少量水,保证室内空间湿度保持在70%。光照强度为5000Lx,温度为28℃。
(5)移栽后的第5天和第10天,喷雾1次0.03%的喹啉酮溶液,每次用量为100棵苗10ml0.03%的喹啉酮溶液。移栽后一周内不浇水,一周后每周浇一次水,水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽24天后移栽至大田培养,40株转基因苗在大田生长正常,移栽成活率达到97.5%。秋天收获后,平均每株结果30-40粒。
对比例:玉米组培苗的移栽(常规方法)
(1)配制营养土
在玉米组培苗移栽前,将市售营养土、珍珠岩按2:1的质量比混合均匀,高压蒸汽灭菌,加水至手捏成团、松手即散,装入15cm×15cm的带吸水孔的塑料营养钵中。
(2)炼苗
将生长在1/2MS生根培养基培养瓶中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口,在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,炼苗2天;
(3)取出组织苗
移栽时首先将组培苗从培养瓶中取出,取时要用镊子小心地操作,切勿把根系损坏,然后把根部粘附的琼脂用无菌水全部漂洗掉;
(4)移栽
移栽时将营养土挖一个深12cm,宽10cm的小孔,然后再将植株种植下去,让根舒展开,并防止弄伤幼苗。轻轻覆盖营养土,以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。共移栽30株综31转基因玉米组培苗。轻浇透水,保证室内空间湿度保持在70%。光照强度为5000Lx,温度为28℃。
(5)移栽后一周内不浇水,一周后每周浇一次水,水量以24小时内底盘的水可被吸收为宜。移栽23天后移栽至大田培养,22株转基因苗在大田生长正常,移栽成活率达到73.3%。秋天收获后,平均每株结果20粒左右。

Claims (5)

1.一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,依次包括以下步骤:
(1)将生长在1/2MS生根培养基中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口,在培养基上加2-3mm高度的无菌水,每天更换一次无菌水,培养室中炼苗1-2天;
(2)用镊子将玉米转基因组培苗从培养瓶中取出,灭菌水洗净培养基;然后将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒,吸水纸上晾干;所述浸根液具体为:每1kg水加入4.5-5.5g有效成分含量为70%的甲基硫菌灵和4.5-5.5g有效成分含量为77%的硫酸铜钙;
(3)将组培苗种植于营养土中;所述的营养土为:将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀,按照每20升营养土添加有效成分含量为70%的甲基硫菌灵和有效成分含量为77%的硫酸铜钙各1克的比例添加并混合均匀,加水至手捏成团、松手即散,室温覆盖塑料薄膜静置;第2天按照每20升营养土加入20g加水溶解的生物有机肥的比例添加生物有机肥,混合均匀,室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入带吸水孔的塑料营养钵中;
(4)移栽后的第5-7天和第10-12天,各喷雾1次0.03%的喹啉铜溶液,每次用量为每100棵苗使用8-12ml;
(5)移栽7天之内不浇水,之后一周浇水一次;
(6)移栽三周之后,待转基因玉米苗芯叶长出、长势良好,移至大田或植物生长室。
2.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,所述步骤(3)营养土覆盖过根茎连接处1cm。
3.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,所述步骤(3)培养室内的湿度为65-75%,光照强度为4500-5500Lx,温度为27-29℃。
4.如权利要求1所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,所述步骤(3)的生物有机肥的N+P2O5+K2O≥5%,有机质≥45%,有益微生物≥10亿/克。
5.如权利要求1-4中任意一项所述的一种玉米转基因组培苗的移栽方法,其特征是,所述步骤(3)塑料营养钵的规格为15cm×15cm-20cm×20cm。
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