CN110150121A - 绣球花实生苗繁育的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种绣球花实生苗繁育的方法。所述方法包括以下步骤：选择绣球花开花后40‑80天的未成熟果实，经冷藏和消毒处理后将种子接种至培养基，培养得到无菌苗；将所述无菌苗移栽到基质上进行移栽培育，得到绣球花实生苗。本申请提供的绣球花实生苗繁育的方法，利用绣球花种子败育之前的未成熟种子，结合组培技术，使未成熟种子在当年即可萌发繁育出实生苗，提高了育苗效率。同时采用温室种植方式和自动喷雾管理模式，无需练苗，种植成活率近100％，大大提高了绣球花实生苗繁育效率。

Description

绣球花实生苗繁育的方法

技术领域

本发明涉及育苗领域，尤其涉及一种绣球花实生苗繁育的方法。

背景技术

绣球花，又名八仙花、紫阳花、七变花、粉团花、洋绣球等，原产于中国四川一带及日本。为虎耳草科绣球属(学名：Hydrangea macrophylla)落叶灌木，株高0.5-1米。叶椭圆形或倒卵形，边缘具钝齿。伞房花序顶生，球状。观赏性非常好，具有很大的市场前景。

要培育我国自主知识产权的绣球花植物新品种，必须要首先培育出杂交后代。然而，绣球花种子败育现象严重，尤其是观赏栽培品种，可育花少且结实难，种子结实率低下，结实后存在种子小，肉眼难以观察，萌发困难，使用传统方法利用种子很难快速繁育出实生苗，严重阻碍了绣球花新品种的培育，阻碍了绣球花产业化进程。

此外，常规实生苗繁育方法基本上是将绣球花果实碾碎一起撒入育苗基质中，但在新品种培育过程中往往获得种子数量比较少，采用传统育苗方法就会导致种子浪费严重，育苗效率低下，并且当年生种子并不能在当年培育出实生苗，延长了育苗周期；而且利用传统组培方法得到无菌苗后一般需要经过炼苗过程，育苗周期长、操作复杂，而且成活率较低。

鉴于此，特提出本申请。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绣球花实生苗繁育的方法，利用绣球花种子败育之前的未成熟种子，在当年即可萌发繁育出实生苗，培育过程无需练苗，种植成活率近100％，大大提高了绣球花实生苗繁育效率，缩短了育苗周期。

为实现以上目的，本发明还提供一种绣球花实生苗繁育的方法，包括以下步骤：

选择绣球花开花后40-80天的未成熟果实，冷藏处理后将种子接种至培养基，培养得到无菌苗；

将所述无菌苗移栽到基质上进行移栽培育，得到绣球花实生苗。

采集时间一般为7月上旬至9月中下旬，不同绣球花品种采种时间存在较大差异，具体采集时间因绣球花种子败育情况而定，像栎叶绣球和银边绣球等种子败育比较早，采集时间在7月上旬即可采集，像粉色回忆、精灵、罗斯等绣球花品种种子败育较晚，可以晚一点采集。果实采集时间的早晚对未成熟种子发芽时间和发芽率有一定影响，采集时间较早，胚发育不完全，会延长发芽时间、降低发芽率，在种子不败育情况下延长果实生长时间有利于提高种子发芽率。如果未成熟种子采集时间小于40天，果实还处于生长期，果实内的胚发育不完全，比较幼嫩，有些还未成形，未成熟种子很难与果皮分离，难以处理，另外发芽时间比较长，有可能会形成愈伤组织，发芽率比较低。如果采集时间过晚，超过了80天，果实中种子的败育率增加，获得种子实生苗数量减少。

对采集到的果实进行冷藏处理，未成熟果实会轻微失水，从而使果实内种子和果皮分离，有利于种子从果实中分离。

优选地，所述冷藏处理为：用吸水纸包裹所述未成熟果实，在2-8℃条件下保存2-3天。

温度不宜低于2℃，低于2℃未成熟种子容易被伤害，高于8℃，未成熟果实保存效果不佳，外果皮容易变黑被破坏。保存时间方面，如果保存时间低于2天，内果皮和种子只是轻微脱水，不利于种子分离，脱水时间超过3天，可能导致脱水过度，未成熟种子发生萎缩，会影响未成熟种子的发芽效率。

优选地，所述移栽培育的过程中包括保湿处理：自然光照条件下，控制温度20-28℃，初始阶段，每两小时对叶片喷雾1-2min，一周后早、晚分别进行喷水。

在研发过程中发现，如果省去炼苗过程，植株容易发生失水问题导致成活率大幅降低，因此需要喷水保湿，但喷水次数过多会导致基质中水分多，透气性差，过少叶片又不能有效形成水膜，易失水，这些都不利于生根。

优选地，所述冷藏处理之后、接种至培养基之前，还包括消毒步骤：

先用水冲洗冷藏处理后的未成熟果实，然后用酒精浸泡，再用无菌水清洗，最后再快速火燎。

进一步优选地，所述酒精的体积分数为70-75％，所述浸泡的时间为60-90s，所述清洗的次数为3-6次，所述火燎的次数为2-3次。

低于70％酒精浓度或低于60s会降低消毒效果，用无菌水清洗3～6次，低于3次可能导致酒精未清洗干净；在酒精灯上快速火燎2～3次，利用火燎法进行消毒，次数过多可能使果实温度过高，对种子有伤害。

优选地，所述基质包括泥炭土、珍珠岩和蛭石，所述泥炭土、所述珍珠岩和所述蛭石的体积比为1-1.5:0.5-1:0.5-1。

基质高于或低于该比例会导致幼苗生根数量减少，生长速度减缓，严重时导致幼苗根部腐烂。

进一步优选地，所述泥炭土、所述珍珠岩和所述蛭石的体积比为1:1:1。

优选地，所述将种子接种至培养基的过程包括：

用无菌解剖刀沿着冷藏处理后的所述未成熟果实纵切或者沿所述未成熟果实的顶端横切，然后将种子转移到培养基上。

优选地，所述培养的温度为22-24℃，昼夜周期为16:8，培养周期为28-32天。

可选地，所述培养基的制备方法为：

在Ms培养基中加入琼脂和蔗糖，然后调整pH值至5.5-6.0，灭菌即可；

所述琼脂的用量为0.5-1.0g/100ml培养基，所述蔗糖的用量为2-4g/100ml培养基。

培养基配置不当，会导致整体成活率的下降。

本发明的有益效果：

1.提供了绣球花使用种子进行实生苗培养过程中对于种子的选择、处理的方法；

2.发现并解决了炼苗过程中所存在的、导致成活率不高的问题，无需炼苗，即可实现成活率接近100％的目标；

3.提高了绣球花实生苗繁育效率，为后续绣球花应用尤其是新品种培育打下了良好的基础。

具体实施方式

如本文所用之术语：

“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。

当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。

在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。

“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。

下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

未成熟种子采集与处理：在绣球花开花后40天～80天，采集含有绣球花未成熟种子的果实，用吸水纸包裹放入2℃冰箱内保存3天。

培养基配制与灭菌：在Ms培养基中按照0.5g/100ml培养基的用量加入琼脂，4g/100ml培养基的用量加入蔗糖，加热融化后定容，调整培养基pH值至5.5，分装到组培瓶中，每个组培瓶中约分装40mL，然后121℃高压蒸汽灭菌20min。

超净工作台消毒：用体积分数为70％的消毒酒精和酒精棉对超净工作台进行消毒后，放入灭菌后凝固好的加入培养基的组培瓶，组培瓶表面喷洒体积分数为70％的消毒酒精，然后打开超净工作台的紫外灯照射灭菌30min。

种子消毒：从冰箱取出含有绣球花未成熟种子的未成熟果实，首先用自来水冲洗表面，再利用体积分数为70％的消毒酒精中浸泡90s，用无菌水清洗3次，最后在酒精灯上快速火燎3次。

接种与培养：用无菌解剖刀沿着绣球花果实纵切或者沿果实顶端横切，将果实分为两部分，用镊子夹住果实，将种子抖入组培瓶中或者借助接种针将种子转移到组培瓶中，在22℃组培室中培养，昼夜周期为16:8，绣球花种子8天开始萌发，28-30天即可长出无菌苗。

组培苗移栽：当实生苗长出4片真叶时并且根系生长良好时，可以直接移栽到32穴扦插盘上，基质为泥炭土、珍珠岩和蛭石，体积比为1:1:1。用镊子取出组培苗，在清水中洗净组培苗根部培养基，利用镊子在扦插盘基质上插一小洞，将组培苗根部放入洞中，做到使根部舒展为宜，然后轻轻按压基质，浇透压根水。

苗期管理：将移栽苗放在温室内培养，自然光照，温度控制在20℃，采用自动喷雾装置进行保湿，从早上6:00开始到下午18:00结束，每两小时喷雾1min，喷雾次数可以根据叶片状况进行调整，以保证叶片不脱水为宜，一周后改为早晚各喷水一次，以浇透水为宜。

实施例2

未成熟种子采集与处理：在绣球花开花后40天～80天，采集含有绣球花未成熟种子的果实，用吸水纸包裹放入8℃冰箱内保存2天。

培养基配制与灭菌：在Ms培养基中按照1.0g/100ml培养基的用量加入琼脂，2g/100ml培养基的用量加入蔗糖，加热融化后定容，调整培养基pH值至6.0，分装到组培瓶中，每个组培瓶中约分装40mL，然后121℃高压蒸汽灭菌20min。

超净工作台消毒：用体积分数为75％的消毒酒精和酒精棉对超净工作台进行消毒后，放入灭菌后凝固好的加入培养基的组培瓶，组培瓶表面喷洒体积分数为75％的消毒酒精，然后打开超净工作台的紫外灯照射灭菌30min。

种子消毒：从冰箱取出含有绣球花未成熟种子的未成熟果实，首先用自来水冲洗表面，再利用体积分数为75％的消毒酒精中浸泡60s，用无菌水清洗6次，最后在酒精灯上快速火燎2次。

接种与培养：用无菌解剖刀沿着绣球花果实纵切或者沿果实顶端横切，将果实分为两部分，用镊子夹住果实，将种子抖入组培瓶中或者借助接种针将种子转移到组培瓶中，在24℃组培室中培养，昼夜周期为16:8，绣球花种子8天开始萌发，28-30天即可长出无菌苗。

组培苗移栽：当实生苗长出4片真叶时并且根系生长良好时，可以直接移栽到32穴扦插盘上，基质为泥炭土、珍珠岩和蛭石，体积比为1.5:0.5:0.5。用镊子取出组培苗，在清水中洗净组培苗根部培养基，利用镊子在扦插盘基质上插一小洞，将组培苗根部放入洞中，做到使根部舒展为宜，然后轻轻按压基质，浇透压根水。

苗期管理：将移栽苗放在温室内培养，自然光照，温度控制在28℃，采用自动喷雾装置进行保湿，从早上6:00开始到下午18:00结束，每两小时喷雾2min，喷雾次数可以根据叶片状况进行调整，以保证叶片不脱水为宜，一周后改为早晚各喷水一次，以浇透水为宜。

实施例3

未成熟种子采集与处理：在绣球花开花后40天～80天，采集含有绣球花未成熟种子的果实，用吸水纸包裹放入4℃冰箱内保存2天。

培养基配制与灭菌：在Ms培养基中按照0.8g/100ml培养基的用量加入琼脂，3g/100ml培养基的用量加入蔗糖，加热融化后定容，调整培养基pH值至6.0，分装到组培瓶中，每个组培瓶中约分装40mL，然后120℃高压蒸汽灭菌25min。

超净工作台消毒：用体积分数为72％的消毒酒精和酒精棉对超净工作台进行消毒后，放入灭菌后凝固好的加入培养基的组培瓶，组培瓶表面喷洒体积分数为72％的消毒酒精，然后打开超净工作台的紫外灯照射灭菌30min。

种子消毒：从冰箱取出含有绣球花未成熟种子的未成熟果实，首先用自来水冲洗表面，再利用体积分数为73％的消毒酒精中浸泡75s，用无菌水清洗5次，最后在酒精灯上快速火燎3次。

接种与培养：用无菌解剖刀沿着绣球花果实纵切或者沿果实顶端横切，将果实分为两部分，用镊子夹住果实，将种子抖入组培瓶中或者借助接种针将种子转移到组培瓶中，在23℃组培室中培养，昼夜周期为16:8，绣球花种子8天开始萌发，28-30天即可长出无菌苗。

组培苗移栽：当实生苗长出4片真叶时并且根系生长良好时，可以直接移栽到32穴扦插盘上，基质为泥炭土、珍珠岩和蛭石，体积比为1.2:0.8:0.6。用镊子取出组培苗，在清水中洗净组培苗根部培养基，利用镊子在扦插盘基质上插一小洞，将组培苗根部放入洞中，做到使根部舒展为宜，然后轻轻按压基质，浇透压根水。

苗期管理：将移栽苗放在温室内培养，自然光照，温度控制在25℃，采用自动喷雾装置进行保湿，从早上6:00开始到下午18:00结束，每两小时喷雾1min，喷雾次数可以根据叶片状况进行调整，以保证叶片不脱水为宜，一周后改为早晚各喷水一次，以浇透水为宜。

实施例1-3繁育绣球花实生苗的成活率均接近100％。

对比例1

与实施例1相比，不同之处在于，采集的绣球花种子为开花后40天之内的。

与实施例1相比，种子萌发时间延长至22天，发芽率降低至实施例1的21％。

对比例2

与实施例2相比，不同之处在于，采集的绣球花种子为开花后80天之后的。

与实施例2相比，由于果实中种子的败育率增加，导致发芽率降低，获得的实生苗的数量相对于实施例2减少50％左右。

对比例3

与实施例3相比，不同之处在于，冷藏处理的温度为0℃。

与实施例3相比，种子发芽率降低为实施例3的12％。

对比例4

与实施例1相比，不同之处在于，冷藏处理的时间为1天。

对比例5

与实施例1相比，不同之处在于，不做冷藏处理。

与实施例1的结果相比较，比较例4和5的果实中，内果皮和种子只是轻微脱水，种子粘连在一起，容易破坏种子，与正常处理的种子相比，发芽率降低至实施例1的15～30％。

对比例6

与实施例1相比，不同之处在于，冷藏处理时间为4天。

与实施例1的结果相比较，脱水过度，未成熟果实发生萎缩，种子发芽率降低至实施例1的40％。

比较例7

与实施例2相比，不同之处在于，采用常规炼苗方法。

与实施例2相比，比较例7使用的方法易造成苗木脱水、萎焉，产生一个缓苗期，一般会导致延迟生长6-10天，成活率只有60％-70％。

本申请提供的绣球花实生苗繁育的方法，解决了种子选取以及炼苗过程中所存在的、导致成活率不高的问题，无需炼苗，即可实现成活率接近100％的目标；提高了绣球花实生苗繁育效率，为后续绣球花应用尤其是新品种培育打下了良好的基础。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本发明的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (10)

1.一种绣球花实生苗繁育的方法，其特征在于，包括以下步骤：

选择绣球花开花后40-80天的未成熟果实，冷藏处理后将种子接种至培养基，培养得到无菌苗；

将所述无菌苗移栽到基质上进行移栽培育，得到绣球花实生苗。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷藏处理为：用吸水纸包裹所述未成熟果实，在2-8℃条件下保存2-3天。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述移栽培育的过程中包括保湿处理：自然光照条件下，控制温度20-28℃，初始阶段，每两小时对叶片喷雾1-2min，一周后早、晚分别进行喷水。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷藏处理之后、接种至培养基之前，还包括消毒步骤：

先用水冲洗冷藏处理后的未成熟果实，然后用酒精浸泡，再用无菌水清洗，最后再快速火燎。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酒精的体积分数为70-75％，所述浸泡的时间为60-90s，所述清洗的次数为3-6次，所述火燎的次数为2-3次。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基质包括泥炭土、珍珠岩和蛭石，所述泥炭土、所述珍珠岩和所述蛭石的体积比为1-1.5:0.5-1:0.5-1。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述泥炭土、所述珍珠岩和所述蛭石的体积比为1:1:1。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将种子接种至培养基的过程包括：

用无菌解剖刀沿着冷藏处理后的所述未成熟果实纵切或者沿所述未成熟果实的顶端横切，然后将种子转移到培养基上。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养的温度为22-24℃，昼夜周期为16:8，培养周期为28-32天。

10.如权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基的制备方法为：

在Ms培养基中加入琼脂和蔗糖，然后调整pH值至5.5-6.0，灭菌即可；

所述琼脂的用量为0.5-1.0g/100ml培养基，所述蔗糖的用量为2-4g/100ml培养基。