CN110959830A

CN110959830A - 一种蜂产品及其制备方法

Info

Publication number: CN110959830A
Application number: CN201911306141.5A
Authority: CN
Inventors: 季进军
Original assignee: NINGBO J&S BOTANICS Inc
Current assignee: NINGBO J&S BOTANICS Inc
Priority date: 2019-12-18
Filing date: 2019-12-18
Publication date: 2020-04-07

Abstract

本发明公开了一种蜂产品及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)溶解：称取原料蜂产品，加入60％～80％乙醇加热溶解至全部溶解，得蜂产品浆液；(2)超声萃取：将蜂产品浆液，加入萃取剂，超声萃取至分层完好；(3)分液：分离出上层，将上层减压浓缩后存放待用；(4)干燥：将下层进行浓缩，干燥，收集产物。本发明在解决蜂产品塑化剂超标的同时，蜂产品重量收率≥90％，能把有效成分保留，几乎没有损失，成本低廉，操作方便。

Description

一种蜂产品及其制备方法

技术领域

本发明涉及蜂产品制备技术领域，具体涉及一种蜂产品及其制备方法。

背景技术

蜂产品是蜜蜂的产物，按其来源和形成的不同可分为三大类：蜜蜂的采制物，如蜂蜜、蜂花粉、蜂胶等；蜜蜂的分泌物，如蜂王浆、蜂毒、蜂蜡等；蜜蜂自身生长发育各虫态的躯体，如蜜蜂幼虫、蜜蜂蛹等。

蜂产品具有广泛的药理学活性，如抗菌、抗病毒、抗病原虫、抗氧化、抗癌、麻醉、创伤修复、消炎、免疫调节、预防龋齿、心血管保护等。蜂产品具有多重药理活性，现已广泛应用于医药、保健食品、化妆品等领域。

塑化剂又名增塑剂，是工业上广泛使用的增强柔韧性的高分子材料助剂。商品化的增塑剂品种繁多，以原料来源于石油化工的邻苯二甲酸酯(PAEs)为最多。人类长期暴露于PAEs可能引起生殖系统异常，甚至有造成畸胎、癌症的风险。2011年6月1日，卫生部将17种邻苯二甲酸酯类物质列为违法添加的非食用物质。卫生部办公厅关于通报食品及食品添加剂邻苯二甲酸酯类物质最大残留量的函(卫办监督函〔2011〕551号)明确规定：食品、食品添加剂中的邻苯二甲酸二 (α-乙基已酯)(DE-HP)、邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)和邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)最大残留量分别为1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。

蜂产品的塑化剂吸附能力特别强大，在生产过程中会有不可避免的接触到塑料制品的环节，会导致最终产物中塑化剂含量超标。

目前，有些厂家采用活性炭脱除塑化剂和过树脂脱除塑化剂，该方法有效成分收率偏低，塑化剂脱除不彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服蜂产品在生产过程中迁移带入塑化剂的技术缺陷，提供一种蜂产品及其制备方法。本发明在解决蜂产品塑化剂超标的同时，蜂产品重量收率≥90％，能把有效成分保留，几乎没有损失，成本低廉，操作方便。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：称取原料蜂产品，加入60％～80％乙醇加热溶解至全部溶解，得蜂产品浆液；

(2)超声萃取：将蜂产品浆液，加入萃取剂，超声萃取至分层完好；

(3)分液：分离出上层，将上层减压浓缩后存放待用；

(4)干燥：将下层进行浓缩，干燥，收集产物。

优选地，所述步骤(1)中，所述蜂产品包括蜂胶、蜂王浆冻干粉、蜂花粉中的任意一种。

优选地，所述步骤(1)中，按质量体积比，所述乙醇的加入量为所述原料蜂产品的4～8倍；质量体积比为1是指原料1000g，乙醇的加入量为1000ml。

优选地，所述步骤(2)中，所述萃取剂为甲苯或二氯甲烷。

优选地，所述步骤(2)中，按体积比，所述萃取剂的加入量为所述蜂产品浆液的1～3倍。

优选地，所述步骤(2)中，所述超声萃取的条件为30～50℃， 20kHz～40kHz。

更优选地，所述步骤(2)中，所述超声萃取的条件为40℃，40kHz。

优选地，所述步骤(3)中，所述分离出上层在步骤(2)所述超声萃取至分层完好后1h进行。

优选地，所述步骤(3)中，将所述分离出上层后留下的下层重复步骤(2)2次，合并所述上层。

优选地，所述步骤(3)中，所述减压浓缩的条件为50～70℃， -0.06～-0.1MPa。

优选地，所述步骤(4)中，当所述原料为蜂胶时，所述步骤(4) 步骤如下：将下层进行浓缩，70～90℃鼓风干燥产物4～6h，之后转入 -18℃冷冻4～6h，收集产物；当所述原料为蜂王浆冻干粉或蜂花粉时，所述步骤(4)步骤如下：将下层进行浓缩，在-20℃预冻16～28h后，放入真空冷冻干燥机抽真空24～40h，然后20℃升温干燥30～120min，收集产物。

一种蜂产品，采用如上所述制备方法制备得到。

上述技术方案中，所述％为质量百分含量。

本发明通过大量的试验，发现只有采用本发明如上所述的特定技术方案才可能实现本发明特定的技术效果，其他技术方案均无法实现本发明特定的技术效果。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明采用超声萃取，塑化剂处理彻底，塑化剂未检出(塑化剂含量低于0.3ppm视为未检出)，符合卫办监督函〔2011〕551号相关规定；蜂产品重量收率≥90％，能把有效成分保留，几乎没有损失，成本低廉，操作方便；

(2)本发明在整个操作过程中，避免塑料制品的使用；

(3)本发明简单易操作，安全高效。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于对本发明进一步说明，而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明所述的内容后，该领域的技术人员对本发明作出一些非本质的改动或调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：称取1000g原料蜂胶块，加入4倍量60％乙醇加热溶解至全部溶解；

(2)超声萃取：将1步中的蜂胶液，加入1倍量甲苯，30℃，20kHz 超声萃取至分层完好；

(3)分液：1h后，分离出上层，即有机层，下层即母液重复2 步骤2次，最后合并有机层，在50℃，-0.1MPa减压浓缩，回收有机层，待用；

(4)干燥：将下层母液浓缩后，70℃鼓风干燥产物6h，之后转入-18℃冷冻6h，干燥后收集产物，得产品。

实施例2

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：称取1000g原料蜂王浆冻干粉，加入8倍量80％乙醇加热溶解至全部溶解；

(2)超声萃取：将1步中的蜂王浆液，加入2倍量甲苯，50℃， 28kHz超声萃取至分层完好；

(3)分液：1h后，分离出上层，即有机层，下层即母液重复2 步骤2次，最后合并有机层，在70℃，-0.08MPa减压浓缩，回收有机层，存放待用；

(4)干燥：将下层母液浓缩后，在-20℃预冻24h后，放入真空冷冻干燥机抽真空24h，然后20℃升温干燥30min，得产品。

实施例3

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(1)溶解：称取1000g原料蜂花粉，加入6倍量70％乙醇加热溶解至全部溶解；

(2)超声萃取：将1步中的蜂花粉浆液，加入1.5倍量二氯甲烷， 40℃，40kHz超声萃取至分层完好；

(3)分液：1h后，分离出上层，即有机层，下层即母液重复2 步骤2次，最后合并有机层，在60℃，-0.09MPa减压浓缩，回收有机层存放待用；

对比例1

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(2)活性炭吸附：将1步中的蜂胶液，加入蜂胶液0.03倍的活性炭(m/v)于60℃加热搅拌溶解1h；

(3)抽滤：将2步的蜂胶液反复减压抽滤，至蜂胶液无活性炭残留为止；

(4)干燥：将3步的蜂胶液母液浓缩后，70℃鼓风干燥产物6h，之后转入-18℃冷冻6h，干燥后收集产物，得产品。

对比例2

一种蜂产品的制备方法，包括如下步骤：

(2)树脂吸附：将1步中的蜂胶液，过800mL DM21树脂，收集流出液；

(3)浓缩：将2步的流出液，减压浓缩为婆美度15；

(4)干燥：将3步浓缩液，70℃鼓风干燥产物6h，之后转入-18℃ 冷冻6h，干燥后收集产物，得产品。

效果实施例

一、蜂胶中的胶含量的测定方法

1仪器与用具：分析天平、干燥皿、电热鼓风干燥箱、100ml烧杯、超声波仪、玻璃棒、250ml锥形瓶、称量纸70mm×35mm、玻璃漏斗 Φ60mm。

2试药

乙醇：分析纯(≥95％)；

定量滤纸Φ12.5cm。

3操作方法：称取经过粉碎处理的蜂胶样品约5g，称定重量，置 100ml的烧杯中，精密加入95％乙醇100ml，密塞，超声处理，将上清液倒入事先干燥称重过的滤纸及玻璃漏斗过滤到锥形瓶中，反复数次，直至完全溶解，再用少量乙醇洗涤烧杯及滤纸数次。然后将残渣及滤纸与玻璃漏斗在50℃下干燥至恒重。在相同条件下作平行实验。

4计算：

按式(1)计算：X₁＝(M₁-M₂)/M₁×100％ (1)

其中X₁-样品中乙醇提取物含量，％；

M₁-样品质量，单位为克(g)；

M₂-残渣质量，单位为克(g)；

平行实验允许误差不超过1.5％，取三次测定的平均值。

二、蜂胶中的总黄酮含量的测定方法

1对照品溶液的制备

取芦丁对照品10.0mg，精密称定(十万分之一)，置50ml容量瓶中，加乙醇溶液约40ml，置超声处理使溶解，取出，放冷至室温；加乙醇溶液定容至刻度，摇匀，制成每1ml含芦丁0.20mg的对照品溶液，即得。

2标准曲线的制备

取10ml吸管，精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、 6ml，分别置25ml容量瓶中，各加去离子水至6ml(5ml、4ml、3ml、2ml、1ml、0ml)，取1ml吸管各加入5％亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，取1ml吸管各加入10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，取10ml吸管，各加入氢氧化钠试液10ml，再各加入去离子水至刻度，摇匀，放置15分钟；另取25ml容量瓶，加入去离子水6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加去离子水至刻度，摇匀，放置15分钟，作为“空白溶液”。在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3供试品溶液的制备

取本品0.15g，精密称定(十万分之一)置25ml容量瓶中，加入稀乙醇定容至刻度，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过(中速定性滤纸)，取2ml移液管，精密量取续滤液2ml，置25ml 容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

4测定法

取2ml移液管，精密量取供试品溶液2ml，置25ml容量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀，作为“空白溶液”；取2ml移液管，精密量取供试品溶液2ml，置25ml容量瓶中；取5ml移液管，精密量取去离子水4ml 至容量瓶中；取1ml移液管，精密量取5％亚硝酸钠溶液1ml至容量瓶中，混匀，放置6分钟；取1ml移液管，精密量取10％硝酸铝溶液1ml 至容量瓶中，摇匀，放置6分钟；取10ml移液管，精密量取氢氧化钠试液10ml至容量瓶中，再加去离子水至刻度，摇匀，放置15分钟；以 “空白溶液”为空白，在500nm波长处测定吸光度，在标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的量，计算，即得。

5计算

C_样：照标准曲线得待测样总黄酮的浓度(mg/mL)；

M_样：待测样质量(mg)；

V_样：待测样体积(mL)。

三、蜂王浆中的10-羟基-2-葵烯酸的测定方法(按照 GB/T9697-2008方法)

1试剂

本试验所用水为重蒸馏水。

a)甲醇：紫外光谱纯或在检测波长处透光率大于30％的分析纯。

b)无水乙醇：优级纯。

c)内标物：对羟基苯甲酸甲酯，含量99.0％。

d)10-HAD标准品：99.0％以上。使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h。

e)10-HAD标准溶液：取干燥后的10-HAD标准品约25mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入25ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含10-HAD约1mg。

f)内标溶液：取已干燥过的对羟基苯甲酸甲酯约650mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。

g)盐酸(c＝0.03mol/L)：量取0.1mol/L盐酸100ml，加入200ml 重蒸馏水中。

h)流动相∮(CH₃OH+0.03mol/L HCL+H₂O)＝55+10+35。

2仪器

a)高效液相色谱仪：配置紫外检测器，记录仪或微处理器；

b)色谱柱：4.6mm×250mm不锈钢柱，填充无定形硅胶C₁₈键合相，5μm或10μm；

c)超声波清洗仪；

d)旋涡混匀器；

e)分析天平：感量0.0001g。

3步骤

3.1试样处理

样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5g，置于已称定的50ml 容量瓶中，精密称定，加0.03mol/L盐酸1mL和水2mL，置旋涡混匀器上混合使试样溶解，加无水乙醇30mL，边加入边轻轻摇动，再精密加入内标溶液10mL，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，立即置超声波浴中超声15min，或置旋涡混匀器上振荡15min，取出，在 3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定，应放置在冰箱中冷藏待测。

3.2色谱条件

测定波长：210nm；柱温度：35℃；流动相流速：1mL/min。

3.3校正因子测定

精密吸取10-HAD标准溶液0.5，1，2，3，4，5mL至10mL容量瓶中。精密加入内标溶液2mL，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取此溶液2μL，注入色谱仪，用峰面积比值计算，应程线性，求出校正因子 F。

3.4计算

蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量按式(1)计算

式中：

X₂——蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量，％；

F——校正因子

A_i——试样中被测组分峰面积；

A_S——试样中内标物峰面积；

m_s——内标物质量，单位为克(g)；

m_i——试样质量，单位为克(g)。

四、蜂花粉中的蛋白质的测定方法：按照GB/T9697-2008方法

1试剂

a)浓硫酸(ω＝95％～98％)；

b)硫酸铜与硫酸钾混合试剂：称取硫酸铜1g、硫酸钾10g，置研钵中混合均匀，研细备用；

c)混合指示剂：量取甲基红乙醇溶液(ρ＝1g/L)2份，溴甲酚绿乙醇溶液(ρ＝2g/L)3份，混匀；

d)硼酸吸收液(ρ＝20g/L：称取硼酸2.0g，置于100mL具塞量筒中，加乙醇20mL，并加蒸馏水稀释至刻度，振摇使硼酸溶解，备用；

e)氢氧化钠溶液(p＝400g/L)：称取氢氧化钠40g，加蒸馏水稀释至100ml；

f)稀硫酸：量取浓硫酸5.7ml，加蒸馏水稀释至100mL；

g)盐酸标定溶液(0.1mol/L)：按GB/T 601配制和标定。使用前准确稀释10倍。

2仪器

a)凯氏定氮法消化装置、50mL凯氏烧瓶(如使用远红外消解电炉则配用50ml消解管加曲劲漏斗)；

b)10ml酸式滴定管；

c)分析天平：感量0.0001g；

d)半微量法蒸馏装置。

3试验步骤

3.1蒸馏装置的清洗

连接蒸馏装置，A瓶中加适量蒸馏水与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒，从D漏斗加蒸馆水约50mL，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A瓶中蒸馏水。当蒸气从冷凝管尖端冷凝而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的蒸馏水反冲到B瓶中。开G 夹，放出B瓶中的蒸馏水，关B瓶及G夹。将冷凝管尖端浸入约50mL 蒸馏水中，使蒸馏水自冷凝管尖端反冲至C瓶，再冲至B瓶，如上法放去蒸馆水。如此将仪器洗涤2次～3次。

3.2消化

取蜂花粉试样约1g置已称定的滤纸上，精密称定后包好，放入凯氏烧瓶或消解管中。加入硫酸铜与硫酸钾混合试剂2g，再沿瓶壁缓缓加入浓硫酸10mL，充分混合，在瓶口放一小漏斗，使烧瓶成45° 斜置，开始用较低温度缓缓加热，使溶液温度保持在沸点以下，等泡沸停止后，逐步加大电力，待消化溶液沸腾，保持此状态但不使溶液溢出，待溶液成澄明的绿色后，继续加热30min，冷却后转移至100mL 容量瓶中，用蒸馆水稀释至刻度，摇匀备用。

3.3蒸馏

量取20g/L硼酸溶液10mL，置100mL锥形瓶中，加混合指示剂5 滴，将冷凝管尖端浸入液面下。以后，精密吸取上述消化溶液5mL，经由D漏斗移入反应管中，再加入400g/L氢氧化纳溶液10mL，用少量蒸馆水洗D漏斗数次，关G夹，加数毫升蒸馆水于D漏斗中以封闭管路。加热A瓶(瓶中的蒸馏水应滴加稀硫酸保持酸性)，进行水蒸气蒸馅，从硼酸溶液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏10min后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗1min，用少量蒸馆水淋洗尖端后，停止蒸馏。

3.4滴定

将吸收液用0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至由蓝绿色变为灰紫色为终点。

3.5.计算

蜂花粉蛋白质含量按式(2)计算：

式中：

X₃——蜂花粉中蛋白质含量，％；

V₁——滴定试样时盐酸标准液消耗体积，mL；

V₀——滴定空白时盐酸标准溶液消耗体积，mL；

c₁——盐酸标准液的浓度，mol/L；

0.014——氮的摩尔质量，g；

m₄——样品的质量，g；

6.25——氮换算为蛋白质的系数。

五、蜂产品重量收率的计算方法：

N％＝M1/M2×100；

N％：为重量收率；

M1：烘干后的产物；

M2：处理前的产物。

实施例1、对比例1～2所述原料蜂胶块的塑化剂DE-HP为100ppm， DINP为97ppm，DBP为82ppm，其余未检出。

实施例2所述原料蜂王浆冻干粉的塑化剂DE-HP为95ppm，DINP 为86ppm，DBP为70ppm，其余未检出。

实施例3所述原料蜂花粉的塑化剂DE-HP为65ppm，DINP为 75ppm，DBP为81ppm，其余未检出。

采用如上方法对实施例1～3及对比例1～2制备得到的产品进行检测，其中实施例1制备得到的蜂产品经第三方检测机构(宁波谱尼测试技术有限公司)检测，塑化剂未检出，符合卫办监督函〔2011〕551 号相关规定；蜂胶重量收率为90％，胶含量为96％，总黄酮含量为24％。

实施例2制备得到的蜂产品经第三方检测机构(宁波谱尼测试技术有限公司)检测，塑化剂未检出，符合卫办监督函〔2011〕551号相关规定；蜂王浆冻干粉重量收率为94％，10-羟基-2-葵烯酸含量为 5.0％。

实施例3制备得到的蜂产品经第三方检测机构(宁波谱尼测试技术有限公司)检测，塑化剂未检出，符合卫办监督函〔2011〕551号相关规定；蜂花粉重量收率为95％，蛋白质含量为13％。

对比例1采用活性炭吸附塑化剂的技术方案制备得到的蜂产品经第三方检测机构(宁波谱尼测试技术有限公司)检测，塑化剂DE-HP 为1.6ppm，DINP为5.8ppm，DBP为1.3ppm，其余未检出；蜂胶重量收率为70％，胶含量为97％，总黄酮含量为24.5％。由此可见，对比例1产品损失巨大。

对比例2采用树脂吸附塑化剂的技术方案制备得到的蜂产品经第三方检测机构(宁波谱尼测试技术有限公司)检测，塑化剂DE-HP为 1.7ppm，DINP为5.4ppm，DBP为1.2ppm，其余未检出；蜂胶重量收率为80％，胶含量为98％，总黄酮含量为25％。对比例2由于蜂胶不容易洗脱，导致树脂持续利用率下降，更新树脂成本昂贵。

本发明的有益效果是：

本发明采用超声萃取法，不但能除去各种塑化剂(100％脱除)，还能把有效成分保留，几乎没有损失，成本低廉，操作方便；处理后各种塑化剂均未检出，蜂产品重量收率≥90％，采用萃取法成本低廉，操作方便。

上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种蜂产品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(3)分液：分离出上层，将上层减压浓缩后存放待用；

(4)干燥：将下层进行浓缩，干燥，收集产物。

2.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述蜂产品包括蜂胶、蜂王浆冻干粉、蜂花粉中的任意一种。

3.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，按质量体积比，所述乙醇的加入量为所述原料蜂产品的4～8倍。

4.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述萃取剂为甲苯或二氯甲烷。

5.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，按体积比，所述萃取剂的加入量为所述蜂产品浆液的1～3倍。

6.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述超声萃取的条件为30～50℃，20kHz～40kHz。

7.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述分离出上层在步骤(2)所述超声萃取至分层完好后1h进行。

8.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述减压浓缩的条件为50～70℃，-0.06～-0.1MPa。

9.如权利要求1所述的一种蜂产品的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，当所述原料为蜂胶时，所述步骤(4)步骤如下：将下层进行浓缩，70～90℃鼓风干燥产物4～6h，之后转入-18℃冷冻4～6h，收集产物；当所述原料为蜂王浆冻干粉或蜂花粉时，所述步骤(4)步骤如下：将下层进行浓缩，在-20℃预冻16～28h后，放入真空冷冻干燥机抽真空24～40h，然后20℃升温干燥30～120min，收集产物。

10.一种蜂产品，其特征在于，采用如权利要求1～9任意一种所述的一种蜂产品的制备方法制备得到。