CN110946864A

CN110946864A - 阿魏酸哌嗪片的应用

Info

Publication number: CN110946864A
Application number: CN202010004906.6A
Authority: CN
Inventors: 陈剑平; 王佛长; 刘新辉; 黄诗莹; 郑平; 郑琳; 张尚斌; 李顺民
Original assignee: Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital
Current assignee: Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital
Priority date: 2020-01-03
Filing date: 2020-01-03
Publication date: 2020-04-03
Anticipated expiration: 2040-01-03
Also published as: CN110946864B; WO2021135071A1

Abstract

本发明公开了阿魏酸哌嗪片在制备防治贫血药物中的应用。阿魏酸哌嗪片可显著提高促红细胞生成素的含量，进而促使骨髓产生红细胞，说明阿魏酸哌嗪片可用于防治慢性肾脏病引起的贫血。

Description

阿魏酸哌嗪片的应用

技术领域

本发明涉及医药的技术领域，尤其涉及阿魏酸哌嗪片的应用。

背景技术

贫血是慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)的常见并发症，其典型特征是促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)生成不足。EPO能够促使骨髓产生红细胞，红细胞随后将氧气输送到全身；当CKD发展到中后期，由于肾脏患病或受损不能产生足够的EPO，骨髓产生红细胞减少，导致贫血。贫血的发生在临床上受到很大的关注，因为它使患者易患心血管疾病，并导致患者出现生活质量低下、住院率增加、认知能力受损和高死亡率等恶劣情况。

目前临床上治疗贫血的药物包括红系细胞刺激剂(Erythropoiesis-stimulatingagent,ESA)、脯氨酰羟化酶(Prolyl hydroxylase,PHD)抑制剂、重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)和铁剂。然而，贫血的病因是多因素的。部分患者对ESA类药物反应性低，使用高剂量的ESA常常伴随高血压、血栓、肝毒性、水肿、过敏反应等不良反应；PHD抑制剂还处于临床测试阶段，安全性未知；rHuEPO价格昂贵，长期使用不合理；铁剂常常作为辅助的治疗手段。因此，目前仍迫切需要进一步研究贫血的发病机制、寻找有效的干预策略。

EPO的生成受到低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF2α)信号通路的影响。HIF2α在低氧条件下稳定表达，进而激活靶基因EPO，诱导肾脏合成EPO。因此，稳定HIF2α的表达是治疗贫血新途径。

阿魏酸哌嗪(perazine ferulate,PF)是由阿魏酸和六水合哌嗪合成的化学药，其化学名称为3-甲氧基-4-羟基桂皮酸哌嗪。药理研究证实PF具有改善心肌缺血，抗血小板聚集，减少尿蛋白，升高血浆蛋白，促进肾脏微循环等作用；临床上，PF主要用于治疗心血管疾病和肾脏疾病，在中国已被用于治疗不同类型的肾小球疾病，包括肾炎和肾病综合征。但未见报道其具有治疗贫血作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种阿魏酸哌嗪片用于治疗贫血的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：阿魏酸哌嗪片在制备防治贫血药物中的应用。

本发明的有益效果在于：发明人在动物实验中发现，阿魏酸哌嗪片可显著提高促红细胞生成素的含量，进而促使骨髓产生红细胞，说明阿魏酸哌嗪片可用于防治慢性肾脏病引起的贫血。

附图说明

图1为本发明实施例一的假手术组、模型对照组和阿魏酸哌嗪片组针对大鼠肾脏HIF2α蛋白表达的影响对比图；

图2为本发明实施例一的假手术组、模型对照组和阿魏酸哌嗪片组针对大鼠肾脏EPO蛋白表达的影响对比图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：阿魏酸哌嗪片在制备防治贫血药物中的新应用，该防治贫血药物能够有效防治贫血。

请参照图1和图2，阿魏酸哌嗪片在制备防治贫血药物中的应用。

本发明的工作原理简述如下：阿魏酸哌嗪片能够显著提高促红细胞生成素的含量，进而促使骨髓产生红细胞，预防或治疗因慢性肾脏病引起促红细胞生成素降低，而导致的贫血。

从上述描述可知，本发明的有益效果在于：发明人在动物实验中发现，阿魏酸哌嗪片可显著提高促红细胞生成素的含量，进而促使骨髓产生红细胞，说明阿魏酸哌嗪片可用于防治慢性肾脏病引起的贫血。

进一步的，所述防治贫血药物用于预防和/或治疗促红细胞生成素生成不足导致的贫血。

由上述描述可知，防治贫血药物能够显著提升促红细胞生成素的水平，治疗因促红细胞生成素不足而导致的贫血。

进一步的，所述防治贫血药物用于升高红细胞、血红蛋白和红细胞比容。

进一步的，所述防治贫血药物用于增加血清和肾脏中的促红细胞生成素。

由上述描述可知，

进一步的，所述防治贫血药物用于上调肾脏中的HIF2α蛋白表达从而促进促红细胞生成素的转录。

由上述描述可知，HIF2α蛋白含量上升，能够在低氧环境下稳定、快速地进行表达，激活靶基因EPO，合成EPO。

进一步的，所述防治贫血药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、预乳剂、混悬剂、糖浆剂或注射剂。

由上述描述可知，多种防治贫血药物的形式可满足病患的多种治疗需求。

实施例一

请参照图1和图2，本发明的应用是经过以下试验研究获得的，但不作为对本发明的限制，具体实验如下：

一、实验材料

(一)、仪器与设备

JJ3000动物电子秤(G&G公司)；BS224S电子天平(德国SARTORIUS)；5424型高速离心机(德国Eppendorf公司)；-80℃超低温冰箱(美国Thermo公司)；Varsoskan Flash多功能酶标仪(美国Thermo公司)；2120i全自动血液分析仪(德国SIEMENS公司)；7020型全自动生化分析仪(日本日立公司)；Cytomics FC 500MPL流式细胞仪(美国BECKMAN COULTER公司)；倒置显微镜(德国蔡司公司)；凝胶成像系统(上海天能公司)；超纯水机(美国艾科浦)。

(二)、药品与试剂

阿魏酸哌嗪片购于湖南千金湘江药业股份有限公司；

RIPA裂解液购于CST公司；

4×上样缓冲液、封闭专用脱脂奶粉和ECL发光液购于美国伯乐公司；

兔多克隆抗体EPO、兔多克隆抗体HIF2α购于Abcam公司；

辣根酶过氧化物酶标记山羊抗兔IgG和蛋白Marker(10-180kDa)购于LifeTechnologies公司产品；

NC膜购于Millipore公司；

牛血清白蛋白购于广州赛国生物科技有限公司；

血清EPO测定试剂盒购于Life Technologies公司。

二、实验内容：

1、实验方法

1.1、实验动物

SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～220g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(粤)2008－0002，实验动物质量合格证号№44007200054294。动物实验环境:广东省中医药工程技术研究院SPF级动物实验室，设施使用许可证号SYXK(粤)2015-0059。

1.2、实验分组

取SPF级大鼠30只，雌雄各半，按体重分层随机均分为3组，分别为假手术组、模型对照组、阿魏酸哌嗪片组，每组6只。

1.3、造模与给药

SD大鼠先适应性喂养7天，随机分为假手术组、模型对照组、阿魏酸哌嗪片组(6只)。之后以10％水合氯醛腹腔注射麻醉动物，常规消毒铺巾，从右背部切口，打开腹腔。静脉夹夹住肾蒂后用高频电刀切除右肾上下极(切除2/3)，止血后复位肾脏。2周后进行第2次手术，切除左侧肾脏。假手术组采取同样步骤打开腹腔，暴露肾脏后复位，避免牵拉肾脏。本模型通过去除肾脏降低肾脏EPO生成，影响红细胞生成，造模4个月后出现贫血状态，治疗组以10mL/kg(以蒸馏水配制成所需浓度)的给药体积给予阿魏酸哌嗪片(54.00mg/kg/d)，假手术组和模型对照组给予相同体积的生理盐水，连续灌胃给药6周。

1.4、取材

大鼠每次给药后24小时，收集尿液、称重以及腹主动脉取血，样本留作两份，一份3000rpm离心15min，分离血清，-80℃贮存备用；一份全血待血常规检测用。从腹部分离肾脏，一部分置于10％中性福尔马林溶液中待作病理形态学观察；另一部分置液氮及-80冷藏待Western bolt检测。

1.5、血液学检查

大鼠全血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)，血清EPO均由新南方药物安全评性价中心检测。

1.6、组织病理学观察

肾脏组织经10％中性福尔马林溶液固定48h后，常规脱水，石蜡包埋切片，行MASSON染色。在光学显微镜下进行组织病理学检查。

1.7、蛋白质印迹法(又称：免疫印迹试验，即Western Blot)

肾脏组织用RIPA试剂(18-25mg组织，加裂解液360～500μL)抽提可溶性蛋白，制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶，电泳后湿转至NC膜上。5％(TBST稀释)脱脂奶粉室温振荡封闭1h后TBST洗膜，一抗HIF2α(1∶200)或EPO(1∶500)或β-actin(1∶5000)4℃过夜。TBST洗膜，辣根酶标记山羊抗兔IgG(1∶1000)室温孵育1h，洗膜后加入ECL反应1min，采用凝胶成像系统观察印迹结果。

1.8、统计学分析

应用SPSS 22.0软件对数据进行分析处理，各组数据以均数±标准差

来表示，以P<0.05作为统计学具有显著性差异的标准。

2、实验结果

2.1、阿魏酸哌嗪片改善5/6Nx大鼠贫血相关参数，结果见表1；

表1阿魏酸哌嗪片提高5/6Nx大鼠RBC、HGB和HCT水平的影响(n＝6)

注：与假手术组比较，表1中的***表示P＜0.001；与模型对照组比较，表1中的###表示P＜0.001。

实验结果表明，与假手术组相比，模型对照组中大鼠血液中RBC、HGB和HCT水平显著降低(P＜0.001)；与模型对照组相比，阿魏酸哌嗪片组大鼠血液中RBC、HGB和HCT水平明显升高(P＜0.001)。以上结果揭示阿魏酸哌嗪片对5/6Nx大鼠贫血具有改善作用。

2.2、阿魏酸哌嗪片增加肾脏中HIF2α蛋白表达，结果见表2和图1。

表2阿魏酸哌嗪片增加肾脏中HIF2α蛋白表达的影响(n＝6)

注：与模型对照组比较，表2中的#表示P＜0.05。

实验结果表明，与假手术组相比，模型对照组中大鼠肾脏HIF2α水平略有升高，无显著性差异；与模型对照组相比，阿魏酸哌嗪片组大鼠肾脏HIF2α水平显著升高(P＜0.05即具有显著性)。以上结果揭示阿魏酸哌嗪片能提高大鼠肾脏HIF2α蛋白表达。

2.3、阿魏酸哌嗪片增加血清和肾脏中EPO蛋白表达，结果见表3和图2。

表3阿魏酸哌嗪片增加血清和肾脏中EPO蛋白表达的影响(n＝6)

注：与模型对照组比较，表3中的#表示P＜0.05，表3中的###表示P＜0.001。

实验结果表明，与假手术组相比，模型对照组中大鼠血清和肾脏EPO水平略有升高，无显著性差异；与模型对照组相比，阿魏酸哌嗪片组大鼠血清和肾脏EPO水平显著升高(P＜0.001或P＜0.05)。以上结果揭示阿魏酸哌嗪片通过提高体内EPO水平改善贫血。

综上所述，本发明提供的阿魏酸哌嗪片应用，发明人在动物实验中发现，阿魏酸哌嗪片可显著提高促红细胞生成素的含量，进而促使骨髓产生红细胞，说明阿魏酸哌嗪片可用于防治慢性肾脏病引起的贫血。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.阿魏酸哌嗪片在制备防治贫血药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治贫血药物用于预防和/或治疗促红细胞生成素生成不足导致的贫血。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治贫血药物用于升高红细胞、血红蛋白和红细胞比容。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治贫血药物用于增加血清和肾脏中的促红细胞生成素。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述防治贫血药物用于上调肾脏中的HIF2α蛋白表达从而促进促红细胞生成素的转录。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治贫血药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、预乳剂、混悬剂、糖浆剂或注射剂。