CN110938053A - 一种银杏素的提取方法 - Google Patents
一种银杏素的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110938053A CN110938053A CN201911335815.4A CN201911335815A CN110938053A CN 110938053 A CN110938053 A CN 110938053A CN 201911335815 A CN201911335815 A CN 201911335815A CN 110938053 A CN110938053 A CN 110938053A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginkgo
- concentrate
- ginkgo biloba
- filtrate
- extracting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
- C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供一种银杏素的提取方法，具体涉及中药提取工艺技术领域，包括银杏素提取液的制备和从银杏素提取液中分离纯化银杏素，银杏素提取液的制备方法是将干燥银杏叶粉加入到去离子水中并加入纤维素酶和助溶剂，在一定温度条件下进行提取，然后过滤得到滤液，即为银杏素提取液。本发明在水中提取，有机溶剂用量少，在纤维素酶法提取过程中，加入助溶剂增加了银杏叶中低极性成分的溶解性，从而提高了银杏素的提取率，且银杏素提取液的获得的工艺条件要求低。
Description
技术领域
本发明属于中药提取工艺技术领域，具体涉及银杏素的提取方法。
背景技术
银杏素是一种3’,8’’-双芹菜素型双黄酮，在银杏叶中含量较多，对抑制肿瘤细胞活性（如卵巢腺、前列腺、肺、脑和肾等癌细胞）、抑制淋巴细胞增殖、抗病毒活性（特别是疱疹病毒HSV-1和HSV-2）、中枢神经保护、脂细胞分解、舒张血管抗血栓、抗氧化、抗炎等药用方面活性效果显著。当前，银杏素货源短缺，价格昂贵，有潜在的市场开发前景。
由于银杏素的结构复杂，化学合成法比较困难，银杏素的制备工艺主要是从植物中提取的方法。CN102399207中以刺山柑果为原料，采用石油醚和氯仿得到提取液，经聚酰胺，葡聚糖凝胶和硅胶三种柱层析法得到纯度98%的银杏素。其提取工艺中有机溶剂用量多，纯化工艺操作繁琐。CN103044378以南方红豆杉叶为原料，采用超临界萃取得到提取液，操作压力30 MPa，经树脂和聚酰胺两种柱层析法得到纯度99%的银杏素。其提取工艺条件要求高，纯化工艺操作繁琐。CN102351825中以银杏叶为原料，采用乙醇和乙酸乙酯得到提取液，经石油醚反复重结晶和20 MPa下超临界流体脱溶结晶得到纯度98%的银杏素。其提取工艺中有机溶剂用量多，纯化工艺条件要求高。
发明内容
发明目的：本发明目的在于针对现有技术的不足，具体是：有机溶剂用量多，对环境不友好且银杏素提取液的获得的工艺条件要求高的问题，提供一种提取银杏素的方法。
本发明以银杏叶为原料，在水中提取，有机溶剂用量少，对环境友好，在纤维素酶法提取过程中，加入助溶剂，增加了银杏叶中低极性成分的溶解性，从而提高了银杏素的提取率。
技术方案：本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种银杏素的提取方法，包括以下步骤：
1）银杏素提取液的制备：将干燥银杏叶粉加入到去离子水中并加入纤维素酶和助溶剂，在一定温度条件下进行提取，然后过滤得到滤液，即为银杏素提取液；
2）从步骤1）中获得的银杏素提取液中分离纯化银杏素。
优选的，步骤2）中从银杏素提取液中分离纯化银杏素的具体步骤如下：
S1、将银杏素提取液用二氯甲烷常温下萃取，并将下层溶液减压浓缩获得浓缩物A；
S2、将步骤S1获得的浓缩物A使用金属络合法纯化获得浓缩物B；
S3、将步骤S2获得的浓缩物B加入填有交联环糊精的层析柱中进行柱层析，先用体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II减压浓缩得到浓缩物C，即为银杏提取物；环糊精是由多个D-吡喃葡萄糖单元通过α-1,4-糖苷键连接而成的环状化合物，环糊精分子中含有大量的羟基。其外表面一侧含C6-OH，另一侧含C2-OH和C3-OH。内部含糖苷氧原子和氢原子。因此，环糊精具有“内疏水、外亲水”的结构，能与很多有机分子通过氢键、疏水相互作用等分子间弱相互作用，凭借不同有机分子的尺寸、形状、极性等性质的差异进行识别与之选择性结合，从而实现分离纯化的目的。
S4、重结晶：将步骤S3得到的银杏提取物加入丙酮和活性炭，搅拌并过滤，滤液自然冷却析出，得到纯度更高的银杏提取物；
其中，在步骤S2-S4中，也可以减少其中任意一个步骤（即S2、S4或者S2、S3或者S3、S4顺序组合），当减少其中一个步骤后，直接将减少的该步骤上一个步骤中获得的浓缩物加入到减少的该步骤的下一步骤中。
本纯化工艺流程简单。
优选的，步骤S2中所述的金属络合法如下：
（1）将步骤S1得到的浓缩物A加入甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液；
（2）将步骤（1）获得的滤液加入硫酸锌和碳酸氢钠，常温下反应一段时间，离心得到沉淀物；
（3）将步骤（2）获得的沉淀物加入二氯甲烷溶液和硫化物，常温下搅拌一段时间后分层，下层溶液过滤，滤液减压浓缩得到浓缩物B。
优选的，步骤（1）中使用的甲醇的量为5~20倍银杏叶粉质量；步骤（2）中加入0.05~2倍银杏叶粉质量的硫酸锌和2~5倍质量的10%（W/V）碳酸氢钠到步骤（1）中获得的滤液中，常温下反应1~6 h；步骤（3）中加入5~40倍银杏叶粉质量的40%（V/V）二氯甲烷溶液和0.05~2倍银杏叶粉质量的硫化物到步骤（2）中获得的沉淀物中，常温下搅拌0.5~2 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30~40 ℃下减压浓缩1~3 h得到浓缩物B。工艺条件要求低。
优选的，所述硫化物为硫化钠、硫化钾或硫化铵中的一种。
优选的，步骤S1中，加入4~10倍银杏叶粉质量的二氯甲烷，下层溶液在30~40 ℃下减压浓缩1~3 h得到浓缩物A，步骤S4中，加入0.02~0.2倍银杏叶粉质量的丙酮和0.0001~0.001倍银杏叶粉质量的活性炭，40~60 ℃条件下搅拌0.5~2 h，过滤。工艺条件要求低。
优选的，步骤S3中，使用0.2~1倍银杏叶粉质量的交联环糊精填充层析柱，先用1~4倍柱体积体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用3~10倍柱体积的体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在30~60 ℃条件下减压浓缩1~5 h得到浓缩物C。工艺条件要求低。
优选的，交联环糊精的制备方法为：将β-环糊精溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺中，加入氢化钠，搅拌1 h，过滤，在滤液中加入KH-560，90℃反应10 h。加入100~200目硅胶于90℃继续反应24 h，抽滤，用丙酮洗涤，滤饼80 ℃真空干燥24 h，得到交联β-环糊精。
优选的，步骤1）中助熔剂为表面活性剂和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的混合液，表面活性剂为吐温-20或司盘-80，表面活性剂和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的重量比为1：（0.1~1）。利用表面活性剂与1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐这种离子液体产生协调助溶的作用。
优选的，步骤1）中是将过200目筛的干燥银杏叶粉加入4~10倍银杏叶粉质量的去离子水中，并加入0.001~0.01倍银杏叶粉质量的纤维素酶和0.1~0.5倍银杏叶粉质量的助溶剂，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取0.5~4 h，过滤得到滤液。工艺条件要求低。
有益效果：
1、本发明在水中提取，有机溶剂用量少，在纤维素酶法提取过程中，加入助溶剂，如吐温-20和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的混合液，或者司盘-80和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的混合液，增加了银杏叶中低极性成分的溶解性，从而提高了银杏素的提取率且银杏素提取液的获得的工艺条件要求低。
2、运用交联环糊精对银杏素进行吸附分离，纯化效果显著。
3、整套工艺流程简单，设备条件要求低，适合规模化操作。
具体实施方式
实施例中使用的试剂和干燥银杏叶粉均为市售。
本发明的实施例中交联环糊精的制备方法为：将200 g β-环糊精溶于3 L干燥的N,N-二甲基甲酰胺中，加入6 g氢化钠，搅拌1 h，过滤，在滤液中加入100 mL的KH-560（γ―(2,3-环氧丙氧) 丙基三甲氧基硅烷），90℃反应10 h。加入300 g100~200目硅胶于90 ℃继续反应24 h，抽滤，用1 L丙酮洗涤，滤饼80 ℃真空干燥24 h，得到435 g交联β-环糊精。
本发明的实施例中检测银杏素的测定方法为高效液相色谱法：将5 mg样品溶液定容至50 mL甲醇配制成样品溶液。按照如下色谱条件：Kromasil C18色谱柱（150×4.6mm，5μm）；流动相是甲醇-水-乙酸（85:15:0.8）；流速1.0 mL/h；检测波长330 nm，柱温30 ℃；进样量为10μL。根据标准品曲线方程：y=6E+08x+3E+06得出样品浓度（式中样品浓度为x，峰面积为y），从而计算银杏素纯度。根据公式提取量（mg/g）=银杏素纯度（%）×银杏素重量（mg）/银杏叶重量（g），计算每克银杏银杏素提取量。
实施例1
一种银杏素的提取方法，包括以下步骤：
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，10 g吐温-20，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.064 g银杏素。
实施例2
一种银杏素的提取方法，包括以下步骤：
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入1000 g去离子水，1 g纤维素酶，20 g吐温-20，15 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取2 h，过滤得到滤液。滤液中加入600 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩2 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入600 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入15g硫酸锌和400 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应3 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入2000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和15 g硫化钾，常温下搅拌2 h后分层，下层溶液过滤，滤液在40 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有50 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用300 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用800 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入10 g丙酮和0.02 g活性炭，60 ℃条件下搅拌2 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.071 g银杏素。
实施例3
一种银杏素的提取方法，包括以下步骤：
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入400 g去离子水，0.2 g纤维素酶，10 g司盘-80，2 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1h，过滤得到滤液。滤液中加入500 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在35 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入800 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入5 g硫酸锌和200 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入500 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和5 g硫化铵，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在35 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有30 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用400 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用600 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入4 g丙酮和0.01 g活性炭，40 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.055 g银杏素。
实施例4
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，10 g吐温-20，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃的条件下，提取1 h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.035 g银杏素。
实施例5
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1 h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.052 g银杏素。
实施例6
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1 h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.041 g银杏素。
实施例7
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，10 g吐温-20，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到浓缩物C。浓缩物C中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.102 g银杏素。
实施例8
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，10 g吐温-20，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B中加入5 g丙酮和0.02 g活性炭，50 ℃条件下搅拌1 h，过滤，滤液自然冷却析出，得到0.093 g银杏素。
实施例9
将过200目筛的100 g干燥银杏叶粉加入600 g去离子水，0.5 g纤维素酶，10 g吐温-20，5 g 1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取1h，过滤得到滤液。滤液中加入400 g二氯甲烷，常温下萃取分层，下层溶液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物A。浓缩物A中加入1000 g甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液。滤液中加入10 g硫酸锌和300 g的10%（W/V）碳酸氢钠，常温下反应2 h，离心得到沉淀物。沉淀物中加入1000 g 40%（V/V）二氯甲烷溶液和10 g硫化钠，常温下搅拌1 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30 ℃下减压浓缩1 h得到浓缩物B。浓缩物B加入填有40 g 交联环糊精的层析柱中，这里的柱体积为100ml，先用200 mL体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用500 mL体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在50 ℃条件下减压浓缩2 h得到0.081 g银杏素也就是浓缩物C。
将本发明实施例1-9进行对比，见表1：
表1 银杏素提取工艺比较
| 实施例 | 银杏素纯度（%） | 银杏素提取量（mg/g） |
| 实施例1 | 99.5 | 0.64 |
| 实施例2 | 98.5 | 0.70 |
| 实施例3 | 99.1 | 0.55 |
| 实施例4 | 99.4 | 0.35 |
| 实施例5 | 99.2 | 0.52 |
| 实施例6 | 98.8 | 0.41 |
| 实施例7 | 82.3 | 0.84 |
| 实施例8 | 74.5 | 0.69 |
| 实施例9 | 95.3 | 0.77 |
由实施例1，实施例2和实施例3可知，本发明的工艺中将所有的工艺步骤都使用（即以银杏叶为原料，采用超声辅助酶法得到银杏提取物，经络合分离，柱层析和重结晶纯化得到银杏素）的情况下均能得到纯度98%以上的银杏素。通过实施例4，实施例5和实施例6与实施例1的比较，说明在超声和助溶剂的加入下银杏素的提取率得到显著提高。通过实施例7，实施例8和实施例9与实施例1可知，通过硫酸锌富集，交联环糊精吸附和丙酮重结晶能够提高银杏素的纯度。
值得注意的是，实施例1-实施例9提供的工艺均可以使得有机溶剂用量减少，实施例4-9是进一步做单一变量实验，以验证该变量对整个银杏素的提取的影响。
将实施例1中银杏素进行核磁碳谱和核磁氢谱分析，数据如下：1H-NMR(DMSO-d6）：δ6.77（3-H）, 6.32（6-H），6.76（8-H）,8.04（2’-H），7.32（5’-H），8.17（6’-H），6.96（3’’-H），6.36（6’’-H），7.44（2’’’,6’’’-H），6.67（3’’’,5’’’-H），3.81（7-OCH3），3.77（4’-OCH3），12.81（5-0H），12.99（5’’-OH），10.20（4’’’-OH），10.74（7’’-OH）。13C-NMR(DMSO-d6）：δ163.6（2-C），103.5（3-C），182.0（4-C），161.1（5-C），98.5（6-C），165.2（7-C），92.7（8-C），157.3（9-C），104.7（10-C），121.2（1’-C），128.3（2’-C），121.6（3’-C），161.0（4’-C），111.7（5’-C），130.9（6’-C），163.5（2’’-C），102.5（3’’-C），181.9（4’’-C），160.6（5’’-C），98.1（6’’-C），161.7（7’’-C），103.6（8’’-C），154.3（9’’-C），103.8（10’’-C），122.3（1’’’-C），128.0（2’’’,6’’’-C），115.8（3’’’,5’’’-C），160.6（4’’’-C），56.0（7-OCH3），55.9（4’-OCH3）。谱图数据与3’,8’’-双芹菜素型双黄酮（Conformational analysis of c3’-c8connected biflavones）基本一致。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种银杏素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）银杏素提取液的制备：将干燥银杏叶粉加入到去离子水中并加入纤维素酶和助溶剂，在一定温度条件下进行提取，然后过滤得到滤液，即为银杏素提取液；
2）从步骤1）中获得的银杏素提取液中分离纯化银杏素。
2.根据权利要求1所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤2）中从银杏素提取液中分离纯化银杏素的具体步骤如下：
S1、将银杏素提取液用二氯甲烷常温下萃取，并将下层溶液减压浓缩获得浓缩物A；
S2、将步骤S1获得的浓缩物A使用金属络合法纯化获得浓缩物B；
S3、将步骤S2获得的浓缩物B加入填有交联环糊精的层析柱中进行柱层析，先用体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II减压浓缩得到浓缩物C，即为银杏提取物；
S4、重结晶：将步骤S3得到的银杏提取物加入丙酮和活性炭，搅拌并过滤，滤液自然冷却析出，得到纯度更高的银杏提取物；
其中，在步骤S2-S4中，也可以减少其中任意一个步骤，当减少其中一个步骤后，直接将减少的该步骤上一个步骤中获得的浓缩物加入到减少的该步骤的下一步骤中。
3.根据权利要求2所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤S2中所述的金属络合法如下：
（1）将步骤S1得到的浓缩物A加入甲醇常温下搅拌溶解，过滤得到滤液；
（2）将步骤（1）获得的滤液加入硫酸锌和碳酸氢钠，常温下反应一段时间，离心得到沉淀物；
（3）将步骤（2）获得的沉淀物加入二氯甲烷溶液和硫化物，常温下搅拌一段时间后分层，下层溶液过滤，滤液减压浓缩得到浓缩物B。
4.根据权利要求3所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤（1）中使用的甲醇的量为5~20倍银杏叶粉质量；步骤（2）中加入0.05~2倍银杏叶粉质量的硫酸锌和2~5倍质量的10%（W/V）碳酸氢钠到步骤（1）中获得的滤液中，常温下反应1~6 h；步骤（3）中加入5~40倍银杏叶粉质量的40%（V/V）二氯甲烷溶液和0.05~2倍银杏叶粉质量的硫化物到步骤（2）中获得的沉淀物中，常温下搅拌0.5~2 h后分层，下层溶液过滤，滤液在30~40 ℃下减压浓缩1~3 h得到浓缩物B。
5.根据权利要求3或4所述的一种银杏素的提取方法，其特征在于，所述硫化物为硫化钠、硫化钾或硫化铵中的一种。
6.根据权利要求2所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤S1中，加入4~10倍银杏叶粉质量的二氯甲烷，下层溶液在30~40 ℃下减压浓缩1~3 h得到浓缩物A，步骤S4中，加入0.02~0.2倍银杏叶粉质量的丙酮和0.0001~0.001倍银杏叶粉质量的活性炭，40~60 ℃条件下搅拌0.5~2 h，过滤。
7.根据权利要求2所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤S3中，使用0.2~1倍银杏叶粉质量的交联环糊精填充层析柱，先用1~4倍柱体积体积比为20：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液I，再用3~10倍柱体积的体积比为8：1的石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱得到洗脱液II，洗脱液II在30~60 ℃条件下减压浓缩1~5 h得到浓缩物C。
8.根据权利要求2或7所述的银杏素的提取方法，其特征在于，交联环糊精的制备方法为：将β-环糊精溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺中，加入氢化钠，搅拌1 h，过滤，在滤液中加入KH-560，90℃反应10 h；加入100~200目硅胶于90 ℃继续反应24 h，抽滤，用丙酮洗涤，滤饼80 ℃真空干燥24 h，得到交联β-环糊精。
9.根据权利要求1所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤1）中助熔剂为表面活性剂和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的混合液，表面活性剂为吐温-20或司盘-80，表面活性剂和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的重量比为1：（0.1~1）。
10.根据权利要求1所述的银杏素的提取方法，其特征在于，步骤1）中是将过200目筛的干燥银杏叶粉加入4~10倍银杏叶粉质量的去离子水中，并加入0.001~0.01倍银杏叶粉质量的纤维素酶和0.1~0.5倍银杏叶粉质量的助溶剂，在温度50 ℃和超声功率500 w的条件下，提取0.5~4 h，过滤得到滤液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911335815.4A CN110938053B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种银杏素的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911335815.4A CN110938053B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种银杏素的提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110938053A true CN110938053A (zh) | 2020-03-31 |
| CN110938053B CN110938053B (zh) | 2022-08-05 |
Family
ID=69911972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911335815.4A Active CN110938053B (zh) | 2019-12-23 | 2019-12-23 | 一种银杏素的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110938053B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105175465A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-12-23 | 河北工业大学 | 一种提取银杏叶黄酮的方法 |
| CN105413666A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-03-23 | 徐州医学院 | 一种固相萃取填料、固相萃取小柱及其制备方法和应用 |
| CN107684568A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-13 | 临沂金卓生物科技有限公司 | 一种从银杏叶中提取精制高纯度银杏黄酮的方法 |
| CN108815210A (zh) * | 2018-07-18 | 2018-11-16 | 南京中医药大学翰林学院 | 一种高效提取银杏黄酮的方法 |
| CN109776473A (zh) * | 2017-11-12 | 2019-05-21 | 陕西修风生物科技有限公司 | 银杏叶下脚料制备异银杏双黄酮的工艺 |
-
2019
- 2019-12-23 CN CN201911335815.4A patent/CN110938053B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105175465A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-12-23 | 河北工业大学 | 一种提取银杏叶黄酮的方法 |
| CN105413666A (zh) * | 2015-11-24 | 2016-03-23 | 徐州医学院 | 一种固相萃取填料、固相萃取小柱及其制备方法和应用 |
| CN107684568A (zh) * | 2017-09-18 | 2018-02-13 | 临沂金卓生物科技有限公司 | 一种从银杏叶中提取精制高纯度银杏黄酮的方法 |
| CN109776473A (zh) * | 2017-11-12 | 2019-05-21 | 陕西修风生物科技有限公司 | 银杏叶下脚料制备异银杏双黄酮的工艺 |
| CN108815210A (zh) * | 2018-07-18 | 2018-11-16 | 南京中医药大学翰林学院 | 一种高效提取银杏黄酮的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110938053B (zh) | 2022-08-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103304613B (zh) | 一种从瓜蒌皮中分离纯化4种核苷类化学成分的方法 | |
| CN106008253B (zh) | 一种从米糠中提取高纯度神经酰胺的方法 | |
| CN108558817B (zh) | 一种异香豆素类衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN105732250B (zh) | 一种高纯度灰树花多酚组分的制备方法 | |
| CN107759648B (zh) | 一种从金花葵中分离纯化金丝桃苷和异槲皮苷的方法 | |
| CN104372045A (zh) | 一种高纯度萝卜硫素的制备方法 | |
| CN102304554A (zh) | 一种高色价栀子红色素的生产方法 | |
| Zhang et al. | Separation and purification of flavonoid from ginkgo extract by polyamide resin | |
| JP6473803B2 (ja) | 杜仲葉からクロロゲン酸を抽出する方法 | |
| CN106349324A (zh) | 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法 | |
| CN107805270A (zh) | 一种人参皂苷Rh2的提取方法 | |
| CN108218948A (zh) | 一种七叶皂苷钠的制备方法 | |
| CN110938053B (zh) | 一种银杏素的提取方法 | |
| CN101823964A (zh) | 鸡树条荚蒾叶中绿原酸的制备工艺 | |
| CN110646524A (zh) | 一种黄曲霉毒素m族专用净化柱及应用 | |
| CN110898091A (zh) | 一种人参提取物及其制备方法 | |
| CN113616564B (zh) | 一种从莲花中提取水溶性黄酮的方法 | |
| CN102229631A (zh) | 一种从葡萄皮红中分离纯化锦葵花素葡萄糖苷的方法 | |
| CN115403589A (zh) | 一种高三尖杉酯碱的分离纯化方法 | |
| CN104483431B (zh) | 从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法 | |
| CN106336440A (zh) | 从油橄榄叶中提取分离齐墩果酸的方法 | |
| CN108816194B (zh) | 利用金属有机骨架@介孔硅复合材料-基质固相分散技术分离富集槲皮素的方法 | |
| CN105924481B (zh) | 一种红景天苷的提取方法 | |
| CN112010911A (zh) | 一种人参总皂苷的纯化方法 | |
| CN114426478B (zh) | 一种高含量没食子酸及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |