CN105924481B - 一种红景天苷的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红景天苷的提取方法，采用生物酶结合连续逆流提取法提取红景天苷，同时采用大孔吸附树脂与高速逆流色谱联用，分离纯化红景天苷，是一种提取效率高、分离纯化效果明显、提取产物纯度高（99%以上）、收率高的红景天苷提取方法，具有良好的应用前景。

Description

一种红景天苷的提取方法
技术领域
本发明属于天然产物提取领域，涉及一种红景天苷的提取方法，特别是涉及一种大孔吸附树脂联用高速逆流色谱分离纯化红景天苷的生产方法。
背景技术
红景天是景天科多年生草木或灌木植物，主要含苯丙酯类和类黄酮类化学成分。其中红景天苷是红景天中的主要有效成分，也是评价红景天及其提取物的最重要指标。现代药理学研究表明，红景天苷具有消除疲劳、抗缺氧、抗肿瘤、抗衰老、抗微波辐射等作用。
目前，国内外学者对红景天的化学成分、药理作用、主要有效成分的结构鉴定有较为深入的研究，但对其提取纯化工艺的研究还处于初始阶段。常用的提取方法主要有浸泡或热回流法等。
专利CN021004897公开了一种经过两次高速逆流色谱提取红景天苷的方法，提取产物的纯度较高，但是收率较低。
专利CN201310463903.9公开了一种从红景天中提取红景天苷的方法，采用大孔树脂纯化与模拟移动床纯化联用的方式进行分离纯化，虽然提取产物的纯度较高，但操作过程较复杂，收率也较低。
为了克服现有方法的缺陷，本申请采用大孔吸附树脂与高速逆流色谱联用，出乎意料的既保证了产物的纯度，同时也提高了收率。
发明内容
本发明目的在于提供一种从红景天中分离纯化红景天苷的方法，本方法是一种提取效率高、分离纯化效果明显、提取产物纯度高、收率高。
本发明目的是通过如下技术方案实现的, 本发明所述的红景天苷纯品是指HPLC纯度在99%以上的红景天苷。
一种红景天苷的提取方法，包括如下步骤：
（1）将红景天干燥粉碎后，加入PH=3.8-4.5柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液，然后加入生物酶进行酶解，得酶解液；其中缓冲溶液用量为原料红景天重量的5-10倍；
（2）将步骤（1）的酶解液转移至连续逆流提取罐中，并加入重量为红景天原料2-5倍的水，回流提取，过滤，浓缩，得到红景天苷粗提物；
(3)将步骤（2）所得红景天苷粗提物加水溶解，用大孔吸附树脂吸附纯化，用35-45%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到红景天苷粗品；
(4)将步骤（3）所得的红景天苷粗品，用高速逆流色谱法进行分离，收集含有红景天苷的组分，减压蒸干，得到红景天苷纯品；
作为优选的方案：所述步骤（1）的生物酶选自纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶中两种或三种；用量为原料的0.1-1.5%，优选0.5-1.2%。
进一步优选，所述的柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液的PH为4.0
进一步优选，所述大孔吸附树脂型号为AB-8、HPD100、D-101。
进一步地，所述的高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备：将环己烷、正丁醇、甲醇和水混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相。
在优选的实施例中，上述环己烷、正丁醇、甲醇、水的体积比为1.5-3.5：2.0-3.5：1.0-2.5：3.0-6.0，更优选为3.0-3.5：2.5-3.0：1.0-2.0：3.0-4.5，最优选3：2.5：1.5：3.5。
本发明与现有技术相比，有益效果在于：
1）采用高速逆流色谱法与大孔吸附树脂相结合的方法，并采用特定的混合溶剂体系环己烷-正丁醇-甲醇-水进行分离，既保证了提取产品的高纯度（99%以上），也大大提高了提取率。
2）本发明将生物酶结合连续逆流提取法提取红景天苷，有助于提高提取率。
下面将结合具体的实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
将干燥的红景天1kg粉碎后，加入8倍重量的PH=3.8柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液，然后加入0.5%的纤维素酶和果胶酶（1:1），在45℃下，酶解2h后，转移至连续逆流提取罐中，并加入4kg水，回流提取，过滤，浓缩，得到红景天苷粗提物；加水溶解，用大孔吸附树脂AB-8吸附，用40%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到红景天苷粗品；用高速逆流色谱法进行纯化，收集含有红景天苷的组分，减压蒸干，得到红景天苷纯品13.2g，HPLC:99.15%；其中高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备：按环己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例将环己烷、正丁醇、甲醇和水混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相。
实施例2
将干燥的红景天1kg粉碎后，加入5倍重量的PH=4.0柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液，然后加入0.8%的纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶（1:1:1），在50℃下，酶解2h后，转移至连续逆流提取罐中，并加入5kg水，回流提取，过滤，浓缩，得到红景天苷粗提物；加水溶解，用大孔吸附树脂HPD100吸附，用35%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到红景天苷粗品；用高速逆流色谱法进行纯化，收集含有红景天苷的组分，减压蒸干，得到红景天苷纯品13.5g，HPLC:99.53%；其中高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备：按环己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例将环己烷、正丁醇、甲醇和水混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相。
实施例3
将干燥的红景天1kg粉碎后，加入10倍重量的PH=4.5柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液，然后加入1%的半纤维素酶和果胶酶（1:1），在55℃下，酶解1.5h后，转移至连续逆流提取罐中，并加入2kg水，回流提取，过滤，浓缩，得到红景天苷粗提物；加水溶解，用大孔吸附树脂D-101吸附，用45%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到红景天苷粗品；用高速逆流色谱法进行分离，收集含有红景天苷的组分，减压蒸干，得到红景天苷纯品12.9g，HPLC:99.37%；其中高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备：按环己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5的比例将环己烷、正丁醇、甲醇和水混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相。
对比例1：参照实施例1的方法进行，将环己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5用乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水为高速逆流色谱的溶剂体系，得到红景天苷9.3g，HPLC:97.31%；
对比例2：参照实施例2的方法进行，将环己烷：正丁醇：甲醇：水=3：2.5：1.5：3.5用氯仿-正丁醇-甲醇-水为高速逆流色谱的溶剂体系，得到红景天苷10.2g，HPLC:96.56%；
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (4)

1.一种红景天苷的提取方法，包括如下步骤：
（1）将红景天干燥粉碎后，加入pH=3.8-4.5柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液，然后加入生物酶进行酶解，得酶解液；其中缓冲溶液用量为原料红景天重量的5-10倍；
（2）将步骤（1）的酶解液转移至连续逆流提取罐中，并加入重量为红景天原料2-5倍的水，回流提取，过滤，浓缩，得到红景天苷粗提物；
（3）将步骤（2）所得红景天苷粗提物加水溶解，用大孔吸附树脂吸附纯化，用35-45%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到红景天苷粗品，所述大孔吸附树脂型号选自AB-8、HPD100、D-101；
（4）将步骤（3）所得的红景天苷粗品，用高速逆流色谱法进行分离，收集含有红景天苷的组分，减压蒸干，得到红景天苷纯品；所述的高速逆流色谱法的固定相和流动相按照如下方法制备：按体积比环己烷:正丁醇:甲醇:水=3：2.5：1.5：3.5混匀后静置分层，分别收集上层溶剂和下层溶剂，分别超声，以上层溶剂为固定相，下层溶剂为流动相。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于步骤（1）所述的生物酶选自纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶中两种或三种；用量为原料的0.1-1.5%。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于所述的生物酶用量为原料的0.5-1.2%。
4.根据权利要求1-3任一项所述的提取方法，其特征在于所述的柠檬酸钠/柠檬酸缓冲溶液的pH为4.0。
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