CN110891951A

CN110891951A - 化合物

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Publication number: CN110891951A
Application number: CN201880046704.9A
Authority: CN
Inventors: 加雷斯·理查兹; 蒂莫西·M·斯凯里; 约瑟·P·A·哈丽蒂; 让-奥利维尔·齐里姆瓦巴加博; 马修·J·托泽; 卡尔·理查德·吉普森; 罗德里克·艾伦·波特; 保罗·马修·布兰妮; 保罗·艾伦·格洛索普
Original assignee: University of Sheffield
Current assignee: University of Sheffield
Priority date: 2017-05-17
Filing date: 2018-05-16
Publication date: 2020-03-17
Anticipated expiration: 2038-05-16
Also published as: GB201707938D0; JP7267207B2; US11400081B2; US20210113534A1; CA3063809A1; CN110891951B; WO2018211275A1; EP3628045A1; JP2020520375A; EP3628045B1

Abstract

公开了式(I)化合物及其药学上可接受的盐：其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、X、X₁、X₂、X₃、L¹和n如本文所定义。这些化合物是肾上腺髓质素受体亚型2(AM₂)的抑制剂。还公开了这些化合物用于治疗AM₂调节的疾病，包括增殖性疾病如癌症；包含这些化合物的药物组合物；这些化合物的制备方法；以及用于制备这些化合物的中间体。

Description

化合物

技术领域

本发明涉及作为AM₂受体抑制剂的化合物，并涉及该化合物作为治疗剂在治疗AM₂介导的病况，例如在治疗增殖性疾病(包括癌症如胰腺癌)中的用途。还公开了包含该化合物的药物组合物。

背景技术

肾上腺髓质素(AM)是一种激素，其具有重要的生理功能，包括调节血压。但是，AM在许多疾病中均失调，并与多种癌症(例如胰腺癌)的发生和发展相关(Adrenomedullin isinduced by hypoxia and enhances pancreatic cancer cell invasion.Keleg S,KayedH,Jiang X,Penzel R,Giese T,Büchler MW,Friess H,Kleeff J.Int.J.Cancer.2007Jul1；121(1):21-32；Adrenomedullin and cancer.Zudaire E,Martínez A,CuttittaF.Regulatory Peptides.2003 Apr15；112(1–3):175–183；Adrenomedullin,aMultifunctional Regulatory Peptide.Hinson JP,Kapas S,Smith DM.Endocrinereviews.2000；21(2):138-167)。

肾上腺髓质素有两种细胞表面受体复合物——肾上腺髓质素受体亚型1(AM₁)和肾上腺髓质素受体亚型2(AM₂)。这些受体是异源结构，包含G蛋白偶联受体(GPCR)和称为受体活性修饰蛋白(RAMP)的辅助蛋白。更具体地，AM₁受体形成为降钙素样受体(CLR)和RAMP2的复合物。AM₂受体由CLR和RAMP3形成。相对于降钙素基因相关肽(CGRP)，AM₁受体对AM的选择性高。相反，AM₂受体对AM显示较小的特异性，对βCGRP具有明显的亲和力(Hay等人J.Mol.Neuroscience 2004；22(1-2):105-113)。CLR/RAMP1受体CGRP是降钙素基因相关肽(CGRP)的高亲和力受体，但它也以较低的亲和力与AM结合(Hay等人Pharmacologicaldiscrimination of calcitonin receptor:receptor activity-modifying proteincomplexes.Mol.Pharmacol.2005；67:1655–1665；Poyner等人International Union ofPharmacology.XXXII.The mammalian calcitonin gene-related peptides,adrenomedullin,amylin,and calcitonin receptors.Pharmacol.Rev.2002；54:233–246)。

尽管AM₁和AM₂共享相同的GPCR，CLR，但这两种受体的作用却截然不同。肾上腺髓质素通过AM₁受体介导重要的生理功能，包括调节血压(Biological action ofAdrenomedullin.Horio T&Yoshihara F.In:Nishikimi T.(编辑)；Adrenomedullin inCardiovascular Disease.Springer,2005,ISBN-100-387-25404-8:DOI.org/10.1007/0-387-25405-6_5)。

相反，AM₂受体通过许多不同的机制参与多种促癌作用，包括：刺激癌细胞增殖、防止应激诱导的细胞凋亡、促进血管生成和增加肿瘤侵袭性。

肿瘤分泌的AM导致肿瘤周围的宿主组织中AM₂受体上调。AM₂的宿主组织表达被认为是肿瘤促进血管生成和逃避宿主防御的机制中的重要因素。这已在胰腺肿瘤中得到证实，其中AM₂表达随肿瘤严重程度的升高而增加。研究表明，肿瘤或宿主中AM₂表达的降低，或肽或抗体对受体的拮抗作用会导致体内和体外癌细胞生长的降低(Ishikawa T等人Adrenomedullin antagonist suppresses in-vivo growth of human pancreaticcancer cells in SCID mice by suppressing angiogenesis.Oncogene.2003 Feb 27；22(8):1238-1242；Antolino等人Pancreatic Cancer Can be Detected by Adrenomedullinin New Onset Diabetes Patients (PaCANOD).https://clinicaltrials.gov/ct2/show/ NCT02456051；Antolino等人Adrenomedullin in pancreatic carcinoma:A case-controlstudy of 22 patients.Faculty of Medicine and Psychology,Sapienza Universityof Rome,Rome,Italy:DOI 10.15761/ICST.1000175)。

在动物异种移植实验中已经证明，AM及其受体的靶向是有效的。与对照组相比，直接将AM肽拮抗剂(AM22-52)局部注射到胰腺癌模型的肿瘤中显著减少肿瘤大小(Adrenomedullin antagonist suppresses in-vivo growth of human pancreaticcancer cells in SCID mice by suppressing angiogenesis.Ishikawa T等人Oncogene.2003；22:1238–1242:DOI 10.1038/sj.onc.1206207)。

将过表达AM的胰腺细胞植入小鼠中产生明显更大的肿瘤，而天然AM表达被敲低的细胞则具有较小的肿瘤。此外，在具有AM敲低细胞的动物中几乎不存在转移(Ishikawa T等人，2003)。

在人类癌症中，AM₂受体在肿瘤周围的宿主组织中被上调。WO2008/132453公开了针对hRAMP3的小鼠单克隆抗体在小鼠模型中减少了肿瘤体积，表明干扰了AM在肿瘤中的已知作用机制。

在临床试验中，与对照组相比，在胰腺癌患者中观察到血清AM水平升高，而与肿瘤阶段、分化、可手术性(operability)和糖尿病的存在无关(A Star of ConnectionBetween Pancreatic Cancer and Diabetes:Adrenomedullin.

K等人Journal ofthe Pancreas.2015；16(5):408-412)。因此，高血清AM通常被认为是胰腺癌预后不良的指标。

血清AM水平升高并伴有2型糖尿病的非典型发展也已被证明可预测早期胰腺癌(Kaafarani I等人Targeting adrenomedullin receptors with systemic delivery ofneutralizing antibodies inhibits tumour angiogenesis and suppresses growth ofhuman tumour xenografts in mice.FASEB J.2009 June 22:DOI:10.1096/fj.08-127852)。

因此，抑制AM₂受体是用于治疗增殖性疾病(例如癌症)，例如治疗胰腺癌的有吸引力的靶标。AM₂受体可在调节细胞增殖和/或凋亡中和/或在介导与宿主组织的相互作用(包括细胞迁移和转移)中起作用。

胰腺癌是一种破坏性疾病，它在诊断后6个月内使大多数患者死亡。胰腺癌的一年生存率低于20％，这符合大多数患者在初诊时被诊断为晚期疾病的情况，此时没有有效的延长寿命的疗法。在早期诊断的情况下，手术切除是首选的治疗选择，在肿瘤切除之后通常进行化疗(例如细胞毒性疗法，包括吉西他滨(gemcitabine)或5-氟尿嘧啶和EGF受体酪氨酸激酶抑制剂埃洛替尼(erlotinib))。然而，由于早期诊断的困难，大多数目前的疗法和管理策略都集中在支援性化疗上，对延长寿命的期望非常有限。此外，从免疫学的角度来看，胰腺癌非常罕见，这意味着当前的免疫肿瘤治疗方法(例如PDL-1抑制剂)在治疗胰腺癌方面非常无效(From bench to bedside a comprehensive review of pancreatic cancerimmunotherapy.Kunk PR,Bauer TW,Slingluff CL,Rahma OE.Journal forImmunoTherapy of Cancer.2016；4:14:DOI 10.1186/s40425-016-0119-z；RecentAdvancements in Pancreatic Cancer Immunotherapy.Ma Y等人Cancer ResearchFrontiers.2016 May；2(2):252-276:DOI 10.17980/2016.252)。因此，需要针对胰腺癌的新疗法。

尽管已知了某些肽和抗体AM₂受体抑制剂，例如AM_22-52(Robinson等人J.Pharmacology and Exp.Therapeutics.2009；331(2):513-521)，但是仍然需要作为AM₂受体抑制剂的新治疗剂。适当地，AM₂抑制剂将对AM₂受体具有选择性，特别是对相关的AM₁受体几乎没有影响或没有影响。期望选择性的AM₂受体来提供有益的治疗作用，例如抗癌作用，而对AM₁受体介导的生理作用几乎没有影响或没有影响。

发明内容

根据本发明，提供了式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

X₁是N或CR⁷；

X₂和X₃各自独立地是N或CH，条件是X₁、X₂和X₃中只有一个是N；

L¹是键、-O-或-N(R¹⁰)-；

R¹选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-12环烷基、C_3-12环烷基-C_1-4烷基、C_3-12环烯基、C_3-12环烯基-C_1-4烷基、4至12元杂环基、4至12元杂环基-C_1-4烷基、C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

并且其中R¹任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、-C_1-4烷基-OR^A1、-C_1-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)R^A1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-S(O)₂NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1S(O)₂R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-C_1-4烷基-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-SR^A1、-S(O)R^A1、-S(O)₂R¹⁸、-C(O)R¹⁸、-OC(O)R^A1、-C(O)OR^A1、-NR^A1C(O)R¹⁸、-C(O)NR^A1R¹⁸、-NR^A1SO₂R^B1、-SO₂NR^A1R¹⁸、＝O、-CN和R¹⁷；

R¹⁷独立地选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

R¹⁸独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基，

或者，R¹中的任何NR^A1R¹⁸基团形成4至7元杂环基；

其中R¹⁷和R¹⁸各自独立地任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-S(O)_xR^A6(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A6、-OC(O)R^A6、-C(O)OR^A6、-NR^A6C(O)R^B6、-C(O)NR^A6R^B6、-NR^A6SO₂R^B6、-SO₂NR^A6R^B6、＝O和-CN；

X是-(CR^AR^B)_p-；

R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、-OR^A10、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-6烷基-、C_6-10芳基-C_1-6烷基-、5至10元杂芳基-C_1-6烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被–OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

R^A7和每个R^A9独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和C_3-6环烷基，或者取代基内的任何-N(R^A9)₂可以形成4至6元杂环基；

并且其中R²和R³独立地任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-S(O)_xR^A2(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A2、-OC(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-NR^A2C(O)R^B2、-C(O)NR^A2R^B2、-NR^A2SO₂R^B2、-SO₂NR^A2R^B2、＝O和-CN；

或者

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基或咪唑基，其中由R²和R³形成的所述4至7元杂环基或咪唑基任选地进一步被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3、-S(O)_xR^A3(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A3、-C(O)OR^A3、＝O、-CN、被-NR^A3R^B3取代的C_1-6烷基和被-OR^A3取代的C_1-6烷基；

或者

基团R²N(R³)X-和与X相邻的苯环碳原子一起形成下式的基团：

其中

表示与式(I)中C(R⁵R⁶)基团连接的点；

a是整数0、1或2；

n1是整数0、1、2或3并且，当存在时，R⁴位于苯环上；并且其中环A任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3和＝O；

或者

基团R²N(R³)X-和R⁶与它们所连接的原子一起形成下式的基团：

其中

表示与式(I)中-N(C(O)L¹R¹)-基团连接的点；

a1是整数0、1或2；

当存在时，R⁴位于苯环上；并且其中环B任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4、-NR^A4R^B4、-S(O)_xR^A4(其中x是0、1或2)和-CN；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹独立地选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基，其中所述C_1-6烷基任选地被-OR^A5、-NR^A5R^B5、-S(O)_xR^A5(其中x是0、1或2)取代，或者

R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至7元杂环基，或者

R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至7元杂环基；

R⁷选自：H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基；

R^A和R^B各自独立地选自：H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基，或者

R^A和R^B与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至7元杂环基，或者

X中与同一碳原子连接的R^A和R^B形成＝NR^A8或＝NOR^A8；

R¹⁰选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和-OR^A12；

R^A1、R^B1、R^A2、R^B2、R^A3、R^B3、R^A4、R^B4、R^A5、R^B5、R^A6、R^B6、R^A8、R^A10和R^A12各自独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者其中取代基内的任何-NR^A1R^B1、-NR^A2R^B2或-NR^A3R^B3可以形成4至6元杂环基；

n是选自0、1、2、3或4的整数；并且

p是选自0、1、2或3的整数。

还提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。

还提供了本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，其用作药物。在一些实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2(AM₂)受体介导的疾病或医学病况。

还提供了一种治疗有此需要的受试者中由AM₂介导的疾病或医学病况的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的化合物，或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗增殖性疾病，例如癌症。在某些实施方案中，本发明化合物用于预防或抑制癌症进展，例如通过预防或抑制癌细胞迁移和/或预防或抑制癌症转移。

还提供了本发明的化合物用于治疗其中AM和或AM₂与癌症的发生或发展相关的癌症。例如，在一些实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌和肺癌。在一个特定的实施方案中，本发明的化合物用于治疗胰腺癌。在某些实施方案中，本发明的化合物用于治疗患有癌症例如胰腺癌的患者，其中与对照相比，患者中AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的表达升高。例如，患者可能具有升高的AM、AM₂、CLR和/或RAMP3血清水平。

本发明的化合物可单独使用或与一种或多种本文所述的抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

具体实施方式

定义

除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的下列术语具有以下含义。

术语“治疗”是指说明成功治疗或改善疾病、病理或病况的任何指标，包括任何客观或主观参数，例如消减；缓解；减轻症状或使患者对病理或病况的耐受性更高；减慢退化或衰退的速度；使退化终点的虚弱程度更低；改善患者的身心健康。例如，本文的某些方法通过减少癌症症状来治疗癌症。癌症的症状将是已知的或可以由本领域普通技术人员确定。术语“治疗”及其结合包括预防病理、病况或疾病(例如，预防与AM₂相关的癌症的一种或多种症状的发展)。

在与疾病(例如癌症)相关的物质或物质活性或功能的背景中，术语“相关”或“与...相关”是指疾病(例如癌症)(全部或部分)由该物质或物质活性或功能引起，或疾病症状(全部或部分)由该物质或物质活性或功能引起。例如，与AM₂受体途径活性相关的疾病或病况的症状可以是(全部或部分)由AM₂蛋白途径的活性水平升高引起的症状。如本文所用，被描述为与疾病相关的(如果是病原体)可以是该疾病的治疗靶标。例如，可以用有效降低AM₂活性水平的药剂(例如本文所述的化合物)治疗与AM₂活性水平增加相关的疾病。

如本文所定义，关于蛋白质-抑制剂(例如拮抗剂)相互作用的术语“抑制”等意指相对于在不存在抑制剂的情况下的蛋白质途径的活性或功能水平，对蛋白质(例如AM₂的组分)途径的活性或功能水平产生负面影响(例如降低)。在一些实施方案中，抑制是指与AM₂活性水平升高相关的疾病或疾病症状(例如癌症)的减轻。在一些实施方案中，抑制是指与AM₂相关的信号转导途径(signal transduction pathway)或信号传导途径(signallingpathway)的活性水平降低。因此，抑制可包括至少部分、部分地或全部地阻断蛋白质(例如AM₂受体)的刺激，减少、防止或延迟其激活，或使其失活，使其敏感性降低，或下调其信号转导或酶活性或其量。因此，抑制可包括，相对于非疾病对照，至少部分、部分地或全部地减少可能会调节另一种蛋白质的水平或调节细胞存活、细胞增殖或细胞运动的蛋白质(例如AM₂蛋白途径的组成部分)的刺激，减少其激活，或使其失活，使其敏感性降低，或下调其信号转导或酶活性或其量。

在本说明书的整个说明书和权利要求书中，词语“包含”和“含有”及其变体意指“包括但不限于”，并且它们不旨在(并且不)排除其他部分、添加物、组分、整数或步骤。在本说明书的整个说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则单数形式包含复数形式。特别地，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另有要求，否则说明书应被理解为考虑多个以及单个(singularity)。

术语“卤代”或“卤素”是指元素周期表的第17族卤素中的一种。特别地，该术语是指氟、氯、溴和碘。优选地，该术语是指氟或氯。

术语C_m-n是指具有m至n个碳原子的基团。

术语“C_1-6烷基”是指含有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。“C_1-4烷基”类似地是指包含至多4个碳原子的这种基团。亚烷基基团是二价烷基基团，并且同样可以是直链或支链的，并且与分子的其余部分具有两个连接点。此外，亚烷基基团可以例如对应于本段中列出的那些烷基基团之一。烷基和亚烷基基团可以未被取代或被一个或多个取代基取代。可能的取代基描述如下。烷基基团的取代基可以是卤素(例如氟、氯、溴和碘)、OH、C₁-C₄烷氧基。可替代性地使用烷基基团的其他取代基。

术语“C_1-6卤代烷基”，例如“C_1-4卤代烷基”是指被至少一个卤素原子取代的烃链，所述卤素原子在每次出现时独立选择，例如氟、氯、溴和碘。卤素原子可以存在于烃链上的任何位置。例如，C_1-6卤代烷基可以指氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氯乙基例如1-氯甲基和2-氯乙基、三氯乙基例如1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基、氟乙基例如1-氟甲基和2-氟乙基、三氟乙基例如1,2,2-三氟乙基和2,2,2-三氟乙基、氯丙基、三氯丙基、氟丙基、三氟丙基。卤代烷基基团可以是氟代烷基基团，即被至少一个氟原子取代的烃链。

术语“C_2-6烯基”包括含有至少一个双键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。双键可以以E或Z异构体存在。双键可以在烃链的任何可能的位置。例如，“C_2-6烯基”可以是乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基和己二烯基。

术语“C_2-6炔基”包括含有至少一个三键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。三键可以在烃链的任何可能的位置。例如，“C_2-6炔基”可以是乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。

术语“C_3-12环烷基”包括含有3至12个碳原子的饱和烃环体系。环烷基基团可以是单环的或稠合、桥连或螺环的饱和烃环体系。术语“C_3-6环烷基”包括含有3、4、5或6个碳原子的饱和烃环体系。例如，C₃-C₁₂环烷基可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷(降冰片烷)、双环[2.2.2]辛烷或三环[3.3.1.1]癸烷(金刚烷基)。例如，“C₃-C₆环烷基”可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.1.1]己烷或双环[1.1.1]戊烷。适当地，“C₃-C₆环烷基”可以是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

术语“C_3-12环烯基”包括含有3至12个碳原子和至少一个双键(例如1或2个双键)的烃环体系。环烯基基团可以是单环的或稠合、桥连或螺环的烃环体系。例如，C_3-12环烯基可以是环丁烯基、环戊烯基、环己烯基，

术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”包括非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥连或螺环双环杂环体系。单环杂环可在环中包含约3至12个(适当地3至7个)环原子，具有1至5个(适当地1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子。双环杂环可在环中包含7至12个成员原子。双环杂环可以是稠环、螺环或桥环体系。杂环基基团可以是3至12元，例如3至7元非芳族单环或双环饱和或部分饱和的基团，其在环体系中包含1、2或3个独立地选自O、S和N的杂原子(换言之，形成环体系的原子中的1、2或3个选自O、S和N)。部分饱和是指该环可以包含一个或两个双键。这尤其适用于具有5至7个成员的单环。双键通常在两个碳原子之间，但是可以在碳原子和氮原子之间。双环体系可以是螺稠合的，即其中环通过单个碳原子相互连接；邻位(vicinally)稠合的，即其中环通过两个相邻的碳或氮原子相互连接；或者它们可以共享一个桥头，即环通过两个不相邻的碳或氮原子相互连接(一个桥环体系)。杂环基基团的实例包括环醚例如环氧乙烷基(oxiranyl)、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二噁烷基和取代的环醚。在环位置中包含至少一个氮的杂环包括，例如，氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢三嗪基、四氢吡唑基、四氢吡啶基、高哌啶基、高哌嗪基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚基等等。典型的含硫杂环包括四氢噻吩基、二氢-1,3-二硫醇、四氢-2H-噻喃和六氢噻呯(hexahydrothiepine)。其他杂环包括二氢氧硫杂环戊烯基(dihydro oxathiolyl)、四氢噁唑基、四氢-噁二唑基、四氢二噁唑基、四氢氧杂噻唑基、六氢三嗪基、四氢噁嗪基、四氢嘧啶基、二氢间二氧杂环戊烯基(dioxolinyl)、八氢苯并呋喃基、八氢苯并咪唑基和八氢苯并噻唑基。对于含硫的杂环，还包括含SO或SO₂基团的氧化的硫杂环。实例包括四氢噻吩基和硫代吗啉基的亚砜和砜形式，例如四氢噻吩1,1-二氧化物和硫代吗啉基1,1-二氧化物。用于具有1个或2个氧代(＝O)的杂环基团的合适的值例如2-氧代吡咯烷基、2-氧代咪唑烷基、2-氧代哌啶基、2,5-二氧代吡咯烷基、2,5-二氧代咪唑烷基或2,6-二氧代哌啶基。特定的杂环基基团是含有1、2或3个选自氮、氧或硫的杂原子的饱和单环3至7元杂环基，例如氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、吗啉基、四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、硫代吗啉基、硫代吗啉基1,1-二氧化物、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基或高哌嗪基。如技术人员将理解的，任何杂环可以通过任何合适的原子(例如通过碳或氮原子)与另一个基团连接。例如，术语“哌啶基(piperidino)”和“吗啉基(morpholino)”是指通过环氮连接的哌啶-1-基或吗啉-4-基环。

术语“桥环体系”包括其中两个环共享多于两个原子的环体系，参见例如JerryMarch的Advanced Organic Chemistry，第四版，Wiley Interscience，第131-133页，1992。适当地，在环体系中的两个不相邻的碳或氮原子之间形成桥。连接桥头原子的桥可以是键或包含一个或多个原子。桥接的杂环基环体系的实例包括氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂-双环[2.2.2]辛烷、氮杂-双环[3.2.1]辛烷和奎宁环。

术语“螺双环环体系”包括其中两个环体系共享一个共同的螺碳原子的环体系，即杂环通过单个共同的螺碳原子与另外的碳环或杂环连接。螺环体系的实例包括3,8-二氮-杂双环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷、6-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷、2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷和2-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷。

“杂环基-C_m-n烷基”包括与C_m-n亚烷基基团共价连接的杂环基基团，两者均在本文中定义；并且其中杂环基-C_m-n烷基通过亚烷基基团中的碳原子与分子的其余部分连接。基团“芳基-C_m-n烷基”“杂芳基-C_m-n烷基”的定义方式相同。

“被-NRR取代的-C_m-n烷基”和“被-OR取代的C_m-n烷基”类似地是指与C_m-n亚烷基共价连接的-NRR或-OR基团，其中该基团通过亚烷基基团中的碳原子与分子的其余部分连接。

当作为整体应用于取代基时，术语“芳族”包括在环或环体系内的共轭π体系中具有4n+2个电子的单环或多环体系，其中对共轭π体系有贡献的所有原子都在同一平面上。

术语“芳基”包括芳族烃环体系。该环体系在一个环中的共轭π体系中具有4n+2个电子，其中对共轭π体系有贡献的所有原子都在同一平面上。例如，“芳基”可以是苯基和萘基。芳基体系本身可以被其他基团取代。

术语“杂芳基”包括结合有一个或多个(例如1-4个，特别是1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子的芳族单环或双环。该环或环体系在共轭π体系中具有4n+2个电子，其中对共轭π体系有贡献的所有原子都在同一平面上。

杂芳基基团的实例是伴有五个至十二个环成员，且更通常地含有五个至十个环成员的单环和双环基团。杂芳基基团可以是例如5元或6元单环或9元或10元双环，例如由稠合的五元环和六元环或两个稠合的六元环形成的双环结构。每个环可以含有至多约四个通常选自氮、硫和氧的杂原子。通常，杂芳基环将含有至多3个杂原子，更通常含有至多2个杂原子，例如含有单个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的(如在咪唑或吡啶的情况下)或基本上非碱性的(如在吲哚或吡咯氮的情况下)。通常，存在于杂芳基基团(包含环的任何氨基取代基)中的碱性氮原子的数目将小于五个。

杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、萘啶基、咔唑基、吩嗪基、苯并异喹啉基、吡啶并吡嗪基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、1H-吡唑并[4,3-d]-噁唑基、4H-咪唑并[4,5-d]噻唑基、吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、咪唑并[2,1-b]噻唑基和咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基。在环位置中包含至少一个氮的杂芳基基团的实例包括吡咯基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基和蝶啶基。“杂芳基”还覆盖部分芳族的双环或多环环体系，其中至少一个环是芳族环并且其他环中的一个或多个是非芳族饱和或部分饱和的环，条件是至少一个环含有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子。部分芳族的杂芳基基团的实例包括例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基、2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基(dioxolyl)、2,2-二氧代-1,3-二氢-2-苯并噻吩基、4,5,6,7-四氢苯并呋喃基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基、1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪基和3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪基。

五元杂芳基基团的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基、噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基基团。

六元杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基和三嗪基。

含有与五元环稠合的六元环的双环杂芳基基团的具体实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基(indolizinyl)、吲哚啉基、异吲哚啉基、嘌呤基(例如腺嘌呤基、鸟嘌呤基)、吲唑基、苯并间二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、吡咯并吡啶基和吡唑并吡啶基基团。

含有两个稠合的六元环的双环杂芳基基团的具体实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、色满基(chromanyl)、硫代色满基、色烯基(chromenyl)、异色烯基、色满基、异色满基、苯并二噁烷基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗪基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基和蝶啶基基团。

术语“任选地被取代的”包括被取代的基团、结构或分子和未被取代的基团、结构或分子。

当任选的取代基选自“一个或多个”基团时，应理解该定义包括选自指定基团之一的所有取代基或选自指定基团中的两个或更多个的取代基。

当一个部分被取代时，当化学上合理且与原子价要求一致时，可以在该部分的任何点上取代。该部分可以被一个或多个取代基取代，例如1、2、3或4个取代基；任选地，一个基团上有1或2个取代基。当存在两个或更多个取代基时，这些取代基可以相同或不同。

取代基仅存在于化学上合理的位置，本领域技术人员能够不费力地(实验性地或在理论上)决定哪些取代是化学上合理的，哪些不是。

邻位、间位和对位取代是本领域众所周知的术语。毫无疑问，“邻位”取代是其中相邻的碳原子具有取代基(无论是简单的基团(例如以下示例中的氟基团)，还是分子的其他部分(如以

结尾的键所示))的取代模式。

“间位”取代是一种取代模式，其中两个取代基在彼此距离一个碳的碳上，即，在取代的碳之间具有单个碳原子。换句话说，在远离具有取代基的原子的第二个原子上存在另一个取代基。例如，下面的基团是间位取代的。

“对位”取代是一种取代模式，其中两个取代基在彼此距离两个碳的碳上，即，在取代的碳之间具有两个碳原子。换句话说，在远离具有取代基的原子的第三个原子上存在另一个取代基。例如，下面的基团是间位取代的。

短语“本发明的化合物”是指大体上和具体地在本文公开的那些化合物。因此，本发明的化合物包括式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(VIIIa)、(VIIIb)、(IX)、(IXa)、(IXb)、(X)、(Xa)、(Xb)、(XI)、(XIa)、(XIb)的化合物和实施例中的化合物。

以

结尾的键表示该键与结构中未示出的另一个原子连接。终止于环状结构内部而不终止于环结构的原子的键表示该键可以与环结构中的任何原子连接(在化合价允许的情况下)。

结合本发明的特定方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为适用于本文描述的任意其他方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征，和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤，可以以任意组合进行组合，除了这些特征和/或步骤中的至少一些是相互排斥的组合之外。本发明不限于任何前述实施方案的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的任何一个新颖特征，或特征的任意新颖的组合，或如此公开的任意方法或过程的任意一个新颖步骤，或步骤的任意新颖的组合。

读者的注意力被导向到与本说明书同时提交或在本说明书之前提交的与本申请相关的所有论文和文献，所有这些论文和文献与本说明书一起可公开查阅，并且所有这些论文和文献的内容通过引用并入本文。

通常选择构成本发明化合物的各种官能团和取代基，使得化合物的分子量不超过1000。更通常地，化合物的分子量小于750，例如小于700，或小于650，或小于600，或小于550。更优选地，分子量小于585，例如为575或更小。

本发明的任何化合物的合适或优选的特征也可以是任何其他方面的合适的特征。

本发明涉及本发明化合物的药学上可接受的盐。这些可以包括化合物的酸加成盐和碱盐。这些可以是化合物的酸加成盐和碱盐。

合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、硫酸甲盐、萘酸盐(naphthylate)、1,5-萘二磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素盐(benzathine salt)、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、醇胺盐、钾盐、钠盐、三甲胺盐和锌盐。还可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。关于合适的盐的综述，请参见Stahl和Wermuth的“Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002年)。

本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过例如以下一种或多种方法制备：

(i)通过使本发明的化合物与所需的酸或碱反应；

(ii)通过使用所需的酸或碱，从本发明化合物的合适的前体除去对酸或碱不稳定的保护基团，或使合适的环状前体(例如内酯或内酰胺)开环；或者

(iii)通过与合适的酸或碱反应或借助于合适的离子交换柱将本发明化合物的一种盐转化为另一种盐。

这些方法通常在溶液中进行。所得的盐可能沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。所得盐中的电离程度可以从完全电离到几乎不电离。

具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或其原子在空间中的排列不同的化合物称为“异构体”。其原子在空间中的排列不同的异构体被称为“立体异构体”。彼此不是镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，而彼此是不可重叠的镜像的立体异构体被称为“对映体(enantiomer)”。当化合物具有不对称中心时，例如，它与四个不同的基团键合，可能有一对对映体。对映体的特征在于其不对称中心的绝对构型，并由Cahn和Prelog的R-和S-排序规则描述，或由分子旋转偏振光平面的方式描述，并称为右旋或左旋(即，分别为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以以单独的对映体或以其混合物存在。含有等比例对映体的混合物被称为“外消旋混合物”。当本发明的化合物具有两个或多个立体中心时，可以考虑(R)和(S)立体异构体的任何组合。(R)和(S)立体异构体的组合可产生非对映异构体混合物或单个非对映异构体。本发明的化合物可以作为单一的立体异构体存在或可以是立体异构体的混合物，例如外消旋混合物和其他对映体混合物，以及非对映异构体混合物。当混合物是对映体的混合物时，对映体过量可以是以上公开的任何情况。当化合物是单一立体异构体时，化合物可能仍含有其他非对映异构体或对映体作为杂质。因此，单一立体异构体不一定具有100％的对映体过量(e.e.)或非对映异构体过量(d.e.)，但可能具有约至少85％，例如至少90％、至少95％或至少99％的e.e.或者d.e.。

本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此，这类化合物可以作为单独的(R)-立体异构体或(S)-立体异构体或其混合物生产。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中特定化合物的描述或命名旨在包括单个对映体及其混合物(外消旋或其他形式)。立体化学的测定方法和立体异构体的分离是本领域众所周知的(参见“AdvancedOrganic Chemistry”第4章，第四版，J.March，John Wiley and Sons，New York，2001中的讨论)，例如通过由光学活性起始材料合成或通过消旋形式的解析。本发明的某些化合物可以具有几何异构中心(E异构体和Z异构体)。应当理解，本发明包括具有AM₂抑制活性的所有光学、非对映异构体和几何异构体及其混合物。

Z/E(例如，顺式/反式)异构体可以通过本领域技术人员众所周知的常规技术分离，例如色谱法和分步结晶。

必要时制备/分离单个对映体的常规技术包括使用例如手性高压液相色谱(HPLC)从合适的光学纯前体手性合成或拆分外消旋物(或盐或衍生物的外消旋物)。因此，本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用色谱法(通常为HPLC)在不对称树脂上以对映体富集的形式获得，流动相由烃(通常为庚烷或己烷)组成，含有0至50体积％(通常2％-20％)的异丙醇，和，对于具体实例，0至5体积％的烷基胺(例如0.1％的二乙胺)。浓缩洗脱液得到富集的混合物。

或者，外消旋物(或外消旋前体)可以与合适的光学活性化合物反应，其中光学活性化合物例如是醇，或者在本发明化合物含有酸性或碱性部分的情况下，是碱或酸，例如1-苯基乙胺或酒石酸。可以通过色谱法和/或分步结晶分离所得的非对映异构体混合物，并且可以通过技术人员熟知的方法将非对映异构体中的一种或两种转化为相应的纯对映体。

在任意外消旋体结晶的情况下，两种不同类型的晶体是可能的。第一类是上面提到的外消旋化合物(真正的外消旋物)，其中产生一种均相形式的晶体，其含有等摩尔量的两种对映体。第二种类型是外消旋混合物或聚集体(conglomerate)，其中两种形式的晶体以等摩尔量产生，每种晶体包含单一对映体。

虽然存在于外消旋混合物中的两种晶体形式都具有相同的物理性质，但与真正的外消旋物相比，它们可能具有不同的物理性质。外消旋混合物可通过本领域技术人员已知的常规技术分离—参见例如E.L.Eliel和S.H.Wilen的“Stereochemistry of OrganicCompounds”(Wiley，1994)。

在本说明书中描述的化合物和盐可以被同位素标记(或“放射性标记”)。因此，一个或多个原子被原子质量或质量数与自然界中通常发现的原子质量或质量数不同的原子取代。可掺入的放射性核素的实例包括²H(也写为“D”，氘)、³H(也写为“T”，氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹³N、¹⁵N、¹⁸F、³⁶Cl、¹²³I、²⁵I、³²P、³⁵S等。所使用的放射性核素将取决于该放射性标记的衍生物的具体应用。例如，对于体外竞争试验，³H或¹⁴C通常是有用的。对于放射性成像应用，¹¹C或¹⁸F通常是有用的。在一些实施方案中，放射性核素是³H。在一些实施方案中，放射性核素是¹⁴C。在一些实施方案中，放射性核素是¹¹C。并且在一些实施方案中，放射性核素是¹⁸F。

同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所述方法类似的方法使用合适的同位素标记的试剂代替先前使用的未标记的试剂来制备。

在化合物中用氘选择性替代氢可以调节化合物的代谢、化合物的PK/PD特性和/或化合物的毒性。例如，氘化可以增加化合物的体内半衰期或减少其体内清除率。氘化还可以抑制有毒代谢产物的形成，从而提高安全性和耐受性。应该理解，本发明包括式(I)化合物的氘化衍生物。如本文所用，术语氘化衍生物是指在特定位置上至少一个氢原子被氘取代的本发明的化合物。例如，C_1-4烷基基团中的一个或多个氢原子可以被氘取代以形成氘代的C_1-4烷基基团。例如，R²可以是氘代的C_1-4烷基基团，例如CD₃。在另一个实例中，基团-X-NR²R³是-CHD-NH(CD₃)。

本发明的某些化合物可以以溶剂化物和非溶剂化物形式(例如水合形式)存在。应理解，本发明涵盖具有AM₂抑制活性的所有这些溶剂化形式。

还应理解，本发明的某些化合物可表现出多晶型，并且本发明涵盖具有AM₂抑制活性的所有这些形式。

本发明的化合物可以以多种不同的互变异构形式存在，并且对本发明的化合物的提及包括所有这些形式。为避免疑问，如果化合物可以以几种互变异构形式之一存在，并且只具体描述或示出了一种，则本发明的化合物仍然包含所有其他互变异构形式。互变异构形式的实例包括酮-、烯醇-和烯醇盐形式，例如，以下互变异构对：酮/烯醇(如下所示)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇(enethiol)和硝基/酸式硝基(aci-nitro)。

本发明的化合物的体内作用可部分地由施用本发明的化合物后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物发挥。

还应理解，式(I)化合物的合适的药学上可接受的前药也构成本发明的一个方面。因此，本发明的化合物包括化合物的前药形式，并且本发明的化合物可以以前药(即，在人或动物体内分解以释放本发明化合物的化合物)的形式施用。前药可用于改变本发明化合物的物理性质和/或药代动力学性质。当本发明的化合物含有可以连接性质修饰基团的合适的基团或取代基时，可以形成前药。前药的实例包括体内可裂解的酯衍生物，其可以在本发明化合物中的羧基基团或羟基基团上形成，和体内可裂解的酰胺衍生物，其可以在本发明化合物中的羧基基团或氨基基团上形成。

因此，本发明包括可以通过有机合成获得，和可以通过裂解其前药而在人体或动物体内获得的本文定义的本发明化合物。因此，本发明包括通过有机合成方法生产的式(I)化合物，以及通过前体化合物的代谢在人体或动物体内生成的那些化合物，即式(I)化合物可以是合成产生的化合物或代谢产生的化合物。

本发明化合物的合适的药学上可接受的前药是基于合理的医学判断适合于对人体或动物体施用而没有不希望的药理学活性且没有过度毒性的前药。

多种形式的前药已经描述于，例如下列文件中：-

a)Methods in Enzymology,第42卷,第309-396页,K.Widder等人编辑(AcademicPress,1985)；

b)Design of Pro-drugs,H.Bundgaard编辑,(Elsevier,1985)；

c)A Textbook of Drug Design and Development,Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编辑,H.Bundgaard的第5章“Design and Application of Pro-drugs”,第113-191页(1991)；

d)H.Bundgaard,Advanced Drug Delivery Reviews,8,1-38(1992)；

e)H.Bundgaard等人,Journal of Pharmaceutical Sciences,77,285(1988)；

f)N.Kakeya等人,Chem.Pharm.Bull.,32,692(1984)；

g)T.Higuchi和V.Stella,“Pro-Drugs as Novel Delivery Systems”,A.C.S.Symposium Series,第14卷；和

h)E.Roche(编辑),“Bioreversible Carriers in Drug Design”,PergamonPress,1987。

具有羧基基团的式I化合物的合适的药学上可接受的前药是，例如，其在体内可裂解的酯。含有羧基基团的本发明化合物的体内可裂解的酯是，例如，在人体或动物体内裂解以产生母体酸的药学上可接受的酯。用于羧基的合适的药学上可接受的酯包括C_1-6烷基酯如甲基、乙基和叔丁基，C_1-6烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯，C_1-6烷酰氧基甲基酯如新戊酰氧基甲基酯、3-苯酞基酯(3-phthalidyl ester)，C_3-8环烷基羰基氧基-C_1-6烷基酯如环戊基羰基氧基甲基和1-环己基羰基氧基乙基酯、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基甲基酯(2-oxo-1,3-dioxolenylmethyl ester)如5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基甲基酯和C_1-6烷氧基羰基氧基-C_1-6烷基酯如甲氧基羰基氧基甲基和1-甲氧基羰基氧基乙基酯。

具有羟基基团的本发明化合物的合适的药学上可接受的前药是，例如，其在体内可裂解的酯或醚。含有羟基基团的本发明化合物的体内可裂解的酯或醚是，例如，在人体或动物体内裂解以产生母体羟基化合物的药学上可接受的酯或醚。用于羟基基团的合适的药学上可接受的酯形成基团包括无机酯，例如磷酸酯(包括氨基磷酸环酯)。用于羟基基团的其它合适的药学上可接受的酯形成基团包括C_1-10烷酰基基团如乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基和取代的苯甲酰基和苯乙酰基基团、C_1-10烷氧基羰基基团如乙氧基羰基、N,N-(C_1-6 烷基)₂氨基甲酰基、2-二烷基氨基乙酰基和2-羧基乙酰基基团。苯乙酰基和苯甲酰基基团上的环取代基的实例包括氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C_1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。用于羟基基团的合适的药学上可接受的醚形成基团包括α-酰氧基烷基基团，如乙酰氧基甲基和新戊酰氧基甲基。

具有羧基基团的本发明化合物的合适的药学上可接受的前药是，例如，其在体内可裂解的酰胺，例如，用胺如氨、C_1-4烷基胺如甲基胺、(C_1-4烷基)₂胺如二甲基胺、N-乙基-N-甲基胺或二乙基胺、C_1-4烷氧基-C_2-4烷基胺如2-甲氧基乙胺、苯基-C_1-4烷基胺如苄胺和氨基酸如甘氨酸或其酯形成的酰胺。

具有氨基基团的本发明化合物的合适的药学上可接受的前药是，例如，其在体内可裂解的酰胺或氨基甲酸酯衍生物。来自氨基基团的合适的药学上可接受的酰胺包括，例如，与C_1-10烷酰基基团如乙酰基、苯甲酰基、苯乙酰基和取代的苯甲酰基和苯乙酰基基团形成的酰胺。苯乙酰基和苯甲酰基基团上的环取代基的实例包括氨基甲基、N-烷基氨基甲基、N,N-二烷基氨基甲基、吗啉代甲基、哌嗪-1-基甲基和4-(C_1-4烷基)哌嗪-1-基甲基。来自氨基基团的合适的药学上可接受的氨基甲酸酯包括例如酰氧基烷氧基羰基和苄氧基羰基基团。

化合物

以下段落适用于本发明的化合物。

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(II)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(III)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(IV)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(V)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(VI)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中R⁷具有本文定义的任何值，条件是R⁷不是H。例如，R⁷选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，例如R⁷选自：氟、甲基、乙基或CF₃。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹选自键和-O-。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹是-N(R¹⁰)-。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹选自：-NH-、--N(C_1-4烷基)-、-N(OH)-和-N(-OC_1-4烷基)-。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹选自：-NH-和--N(C_1-4烷基)-

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹是-NH-。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹是-O-。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)的化合物中，L¹是键。

在某些实施方案中，式(I)的化合物是根据式(VII)的化合物，或其药学上可接受的盐：

在某些实施方案中，在式(I)或(VII)的化合物中，R⁷选自：H、卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基。在某些实施方案中，R⁷选自卤素、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基。在某些实施方案中，R⁷选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，例如R⁷选自：H、氟、甲基、乙基或CF₃。在某些实施方案中，R⁷是F、甲基、乙基或CF₃。在某些实施方案中，R⁷选自：卤素和C_1-4烷基。在某些实施方案中，R⁷选自：H和C_1-4烷基。在某些实施方案中，R⁷是H。在某些实施方案中，R⁷是C_1-4烷基，例如甲基。在某些实施方案中，R⁷是卤素，例如氟。

本发明的特定化合物包括，例如，式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，除非另有说明，否则R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、X₁、X₂、X₃、L¹和n中的每一个具有上文或下文第(1)至(153)段中任一段中定义的任何含义：-

1.R⁸和R⁹独立地选自H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、-C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-S(O)_xR^A5，其中x是0、1或2并且R^A5和R^B5各自独立地选自H和C_1-4烷基；

或者，R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至6元杂环基，该杂环基含有1或2个选自O、S和N的杂原子。

2.R⁸和R⁹独立地选自H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、-C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-SR^A5，其中R^A5选自H、甲基和乙基；

或者，R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至6元杂环基，该杂环基含有1个选自O、S和N的杂原子。

3.R⁸和R⁹独立地选自H、C_1-4烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-SR^A5，其中R^A5和R^B5各自独立地选自H、甲基和乙基；

或者，R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基(oxetanyl)。

4.R⁸和R⁹独立地选自H和C_1-3烷基，或者

R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基。

5.R⁸是H并且R⁹选自C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、-C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-S(O)_xR^A5，其中x是0、1或2并且R^A5和R^B5各自独立地选自H和C_1-4烷基；

6.R⁸是H并且R⁹选自H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5和-C_1-4烷基-SR^A，其中R^A5选自H、甲基和乙基；

7.R⁸是H并且R⁹选自H和C_1-3烷基；

或者，R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基。

8.R⁸是H并且R⁹是C_1-3烷基，例如甲基。

9.R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基，例如环丙基或环丁基。

10.R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成4或5元杂环基，该杂环基含有1个选自O、S和N的杂原子，例如氧杂环丁烷基。

11.R⁸和R⁹都是C_1-4烷基，例如R⁸和R⁹都是甲基。

12.R⁸和R⁹都是H。

13.R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、-C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-S(O)_xR^A5，其中x是0、1或2并且R^A5和R^B5各自独立地选自H和C_1-4烷基；

或者，R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基或4至6元杂环基，该杂环基含有1或2个选自O、S和N的杂原子。

14.R⁵和R⁶独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

或者，R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基。

15.R⁵和R⁶独立地选自H和C_1-3烷基；

16.R⁵是H并且R⁶选自C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

17.R⁵是H并且R⁶选自H和C_1-3烷基；

或者，R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成C_3-5环烷基或氧杂环丁烷基。

18.R⁵是H并且R⁶选自H和C_1-3烷基，或者

R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成环丙基。

19.R⁵是H并且R⁶是C_1-3烷基，例如R⁵是H并且R⁶是甲基。

20.R⁵和R⁶都是C_1-3烷基，例如R⁵和R⁶都是甲基。

21.R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成C_3-6环烷基，例如环丙基或环丁基。

22.R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成氧杂环丁烷基。

23.R⁵和R⁶都是H。

24.R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4、-NR^A4R^B4、-S(O)_xR^A4(其中x是0、1或2)和-CN。

25.R⁴独立地选自：C_1-4烷基、-OR^A4和-NR^A4R^B4。

26.R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4、-NR^A4R^B4、-S(O)_xR^A4(其中x是0、1或2)和-CN；并且n是1或2。

27.R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4和-NR^A4R^B4；并且n是1或2。

28.R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基和二甲基氨基；并且n是1或2。

29.R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；并且n是1或2。

30.R⁴独立地选自：C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；并且n是1或2。

31.R⁴独立地选自：C_1-4烷基和卤素(例如氟)；并且n是1或2。

32.R⁴独立地选自：C_1-4烷基；并且n是1或2。

33.R⁴独立地是卤素，例如氟；并且n是1或2。

34.R⁴是氟并且n是1。

35.n是0。

36.R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、-OR^A10、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

并且其中每个R^A9独立地是C_1-6烷基；

并且其中R²和R³独立地任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-S(O)_xR^A2(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A2、-OC(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-NR^A2C(O)R^B2、-C(O)NR^A2R^B2、-NR^A2SO₂R^B2、-SO₂NR^A2R^B2、＝O和-CN；或者

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基，其中由R²和R³形成的所述4至7元杂环基任选地进一步被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3、-S(O)_xR^A3(其中x是0、1或2)、＝O、-CN、被-NR^A3R^B3取代的C_2-6烷基和被-OR^A3取代的C_2-6烷基。

37.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

38.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成4至7元饱和杂环基，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的环氮原子，并且其中所述杂环基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3、-S(O)_xR^A3(其中x是0、1或2)、＝O、-CN、被-NR^A3R^B3取代的C_2-6烷基和被-OR^A3取代的C_2-6烷基。

39.R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

并且其中R^A7和每个R^A9独立地是C_1-4烷基；

并且其中R²和R³独立地任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-S(O)_xR^A2(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A2、-OC(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-C(O)NR^A2R^B2、-SO₂NR^A2R^B2、＝O和-CN。

40.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

41.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-,咪唑基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

并且其中R²和R³独立地任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、-CN、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A2和-NR^A2R^B2。

42.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被-OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，其中所述杂环基包含一个环氮并且任选地还包含一个选自O、S和N的另外的环杂原子(例如氮杂环丁烷基(azetidinyl)、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或硫代吗啉基)；

43.R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NH)NH₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基并且R^A7是C_1-4烷基；

或者，R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基和高哌嗪基，其中由R²和R³形成的杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和-NR^A2R^B2。

44.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

45.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H和C_1-4烷基。

46.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_1-4卤代烷基、环丙基、环丁基、环丙基-C_1-2烷基-、环丁基-C_1-2烷基-、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(二甲基氨基)乙基、2-(乙基氨基)乙基、2-(二乙基氨基)乙基、3-羟丙基、3-甲氧基丙基、3-氨基丙基、3-(甲基氨基)丙基、3-(二甲基氨基)丙基、3-(乙基氨基)丙基、3-(二乙基氨基)丙基、咪唑基甲基-、咪唑基乙基-、苄基和2-苯基乙基；

或者，R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中由R²和R³形成的杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：卤素和C_1-4烷基。

47.R²和R³各自独立地选自：H、C_1-3烷基、C_1-3氟烷基、环丙基、环丁基、环丙基-C_1-2烷基-、环丁基-C_1-2烷基-、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(二甲基氨基)乙基、3-氨基丙基、3-(甲基氨基)丙基和3-(二甲基氨基)丙基。

48.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成饱和或部分饱和的4至7元杂环基，其含有一个环氮和任选地一个或两个选自O、S和N的另外的环杂原子，该杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和-NR^A2R^B2。

49.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成饱和或部分饱和的4至7元杂环基，其含有一个或两个环氮原子，该杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、＝O、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和-NR^A2R^B2。

50.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成饱和的4至6元杂环基，其含有一个或两个环氮原子，该杂环基任选地被1或2个独立地选自以下的取代基取代：卤素和C_1-4烷基。

51.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中由R²和R³形成的杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：氟和C_1-4烷基。

52.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基和吡咯烷基，其中由R²和R³形成的所述杂环基任选地被1个选自以下的取代基取代：氟和C_1-3烷基。

53.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成式：

的咪唑基，其中所述咪唑基基团任选地被一个或两个选自以下的基团取代：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基。

54.R²是H或C_1-4烷基并且R³具有第36至47段中列出的任何含义。

55.R²是H。

56.R²和R³都是H。

57.R²是H或C_1-4烷基；并且R³选自：H、-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、-OR^A10、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-4烷基和被-OR¹³取代的C_2-4烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

并且其中每个R^A9和R^A7独立地是C_1-4烷基；

并且其中R³任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-S(O)_xR^A2(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A2、-OC(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-NR^A2C(O)R^B2、-C(O)NR^A2R^B2、-NR^A2SO₂R^B2、-SO₂NR^A2R^B2、＝O和-CN。

58.R²是H并且R³选自：H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-4烷基和被-OR¹³取代的C_2-4烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

59.R²是H并且R³选自：C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-4烷基和被-OR¹³取代的C_2-4烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

60.R²是H或C_1-4烷基并且R³选自-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂；其中R^A7和每个R^A9独立地选自C_1-4烷基。

61.R²是H并且R³选自-C(＝NH)NH₂、-C(＝NH)R^A7和-C(＝NCN)NH₂，其中R^A7是C_1-4烷基。

62.R²是H并且R³选自：C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基。

63.R²是H并且R³选自：C_1-3烷基、C_1-3氟烷基、环丙基、环丁基、环丙基-C_1-2烷基-、环丁基-C_1-2烷基-、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(二甲基氨基)乙基、3-氨基丙基、3-(甲基氨基)丙基和3-(二甲基氨基)丙基。

64.R²是H并且R³选自：H、甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-羟乙基、2-甲氧基乙基和2-氨基乙基。

65.R²是H并且R³选自：H和C_1-3烷基。

66.R²是H并且R³是甲基或乙基。

67.R²是H并且R³是甲基。

68.R²是H并且R³选自：C_3-6环烷基和C_3-6环烷基-C_1-3烷基，例如R³选自：环丙基、环丁基、环丙基甲基和环丁基甲基。

69.R²和R³都是C_1-3烷基，例如R²和R³独立地是甲基或乙基。

70.R²是H并且R³选自：甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-甲氧基乙基、2-羟乙基、环丙基和环丁基，或者

R²和R³都是甲基，或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，该杂环基任选地被一个或两个氟取代基取代，例如，其中所述杂环基任选地被一个氟取代基取代。

71.R²是H或甲基并且R³选自：甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-甲氧基乙基、2-羟乙基、环丙基和-C(＝NH)NH₂；

或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基，该杂环基任选地被一个氟取代基取代。

72.R²是H或甲基并且R³选自：甲基、乙基、异丙基和环丙基；

或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基和吡咯烷基。

73.R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基和氟氮杂环丁烷基(例如R²和R³与它们所连接的氮一起形成氮杂环丁烷基或3-氟氮杂环丁烷基)。

74.-NR²R³选自-NH₂、-NH(Me)、-NH(Et)、--N(Me)₂、-NH(环丙基)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、氮杂环丁烷-1-基和吡咯烷-1-基；例如-NR²R³选自：-NH₂、-NH(Me)-NH(Et)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(环丙基)-NH(环丁基)和氮杂环丁烷-1-基，(例如-NR²R³选自-NH(Me)和氮杂环丁烷-1-基)。

75.-NR²R³是-NH(Me)。

76.n是0并且R²和R³具有第36至75段中列出的任何含义。

77.n是0并且-NR²R³选自–NH₂、-NH(Me)、-NH(Et)、-N(Me)₂、-NH(环丙基)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、氮杂环丁烷-1-基和吡咯烷-1-基。

78.n是0并且-NR²R³是-NH(Me)。

79.p是1或2。

80.p是1。

81.p是0。

82.p是1并且R²和R³具有第36至75段中列出的任何含义。

83.p是1并且-NR²R³选自–NH₂、-NH(Me)、-NH(Et)、--N(Me)₂、-NH(环丙基)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、氮杂环丁烷-1-基和吡咯烷-1-基。

84.p是1并且-NR²R³选自–NH₂、-NH(Me)、-NHC(＝NH)NH₂和-NHC(＝NCN)NH₂。

85.p是1并且-NR²R³是-NH(Me)。

86.p是0并且R²和R³具有第36至75段中列出的任何含义。

87.p是0并且-NR²R³选自-NH₂、-N(Me)H、-NHC(＝NH)NH₂和-NHC(＝NCN)NH₂。

88.X选自：-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CHR^A-、*-CH₂CHR^A-、*-CHR^ACH₂-、-CR^AR^B-、*-CH₂CR^AR^B-、*-CR^AR^BCH₂-、-C(＝NR^A8)-、-C(＝NOR^A8)-、*-C(＝NR^A8)CH₂-、*-C(＝NOR^A8)CH₂-、

其中R^A和

R^B各自独立地是C_1-3烷基；

R^A8是H或C_1-4烷基；并且

*表示与NR²R³连接的点。

89.X选自：-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CHR^A-、*-CH₂CHR^A-、*-CHR^ACH₂-、-CR^AR^B-、*-CH₂CR^AR^B-、*-CR^AR^BCH₂-、

其中R^A和R^B各自独立地是C_1-3烷基；并且

*表示与NR²R³连接的点。

90.X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、-CH₂CH₂-、

91.X选自：-C(＝NR^A8)-和-C(＝NOR^A8)-，其中R^A8是H或C_1-4烷基(例如X是-C(＝NH)-、-C(＝NMe)-或-C(＝NOH)-)。

92.X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-和-CH₂CH₂-。

93.X选自：-CH₂-和-CH(CH₃)-。

94.X是-CH₂CH₂-。

95.X是-CH₂-。

96.X选自：-C(＝NR^A8)-和-C(＝NOR^A8)-，其中R^A8是H或C_1-4烷基；R²是H或C_1-4烷基；并且R³是H、C_1-4烷基、-OH或-OC_1-4烷基，(例如X是–C(＝NH)-或–C(＝NMe)-；R²是H或C_1-4烷基；并且R³是H、C_1-4烷基或-OH)。

97.基团

形成下式的基团：

其中

a是整数0、1或2；

n1是整数0、1、2或3并且，当存在时，R⁴位于苯环上；并且环A任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O；

任选地，R³选自：H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；优选地R³是H或C_1-4烷基，更优选地R³是H；

任选地，n1是1并且R⁴是卤素，例如氟；

任选地，n1是0。

98.基团

形成下式的基团：

其中：

n1是整数0、1或2(例如n₁是0)并且，当存在时，R⁴位于苯环上；并且环A任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O(优选地，环A是未取代的)；

任选地，n1是1并且R⁴是卤素，例如氟；

任选地，n1是0。

99.基团

形成下式的基团：

100.基团

形成下式的基团：

其中

n₂是整数0、1或2(例如n₂是0)并且，当存在时，R⁴位于苯环上；并且

R³⁰选自：H和C_1-4烷基；优选地R³是H或甲基，更优选地R³是H。

101.基团

形成下式的基团：

102.R¹选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

并且其中R¹任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A1、-OC(O)R^A1、-C(O)OR^A1、-NR^A1C(O)R^B1、-C(O)NR^A1R^B1、-NR^A1SO₂R^B1、-SO₂NR^A1R^B1、＝O、-CN和R¹⁷；

R¹⁷独立地选自：C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基，

其中R¹⁷任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-S(O)_xR^A6(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A6、-OC(O)R^A6、-C(O)OR^A6、-NR^A6C(O)R^B6、-C(O)NR^A6R^B6、-NR^A6SO₂R^B6、-SO₂NR^A6R^B6、＝O和-CN。

103.R¹选自：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

R¹⁷独立地选自：C_3-6环烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

104.R¹选自：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至6-元杂芳基和5至6-元杂芳基-C_1-4烷基；

R¹⁷独立地选自：4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-3烷基；并且其中R¹⁷任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6和＝O。

105.R¹选自：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-4烷基；

R¹⁷独立地选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基、吡咯烷基-C_1-3烷基、哌啶基-C_1-3烷基、哌嗪基-C_1-3烷基、吗啉基-C_1-3烷基、

其中每个X₄独立地为CH或N，条件是不超过2个X₄基团为N；并且其中R¹⁷任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O。

106.R¹选自以下(i)、(ii)和(iii)：

(i)C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基、苯基、苯基-C_1-3烷基和5至10元杂芳基，其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和-CN；

(ii)苯基、苯基-C_1-3烷基，其中所述苯基基团被R^17A取代，并且R^17A选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基、吡咯烷基-C_1-3烷基、哌啶基-C_1-3烷基、哌嗪基-C_1-3烷基，并且其中R^17A任选地被1或2个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基和＝O；和

(iii)

其中R^17B选自

其中每个X₄独立地为CH或N，条件是不超过一个X₄基团为N；并且其中R^17B任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O。

107.R¹选自以下(i)、(ii)和(iii)：

(i)C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基、苯基、苯基-C_1-3烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-3烷基；

其中(i)中的4至6元杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡喃基和吗啉基；

其中(i)中的5或6元杂芳基选自：呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基；

并且其中(i)中列出的每个基团任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和-CN；

(iii)

其中R^17B选自

其中每个X₄独立地为CH或N，条件是不超过一个X₄基团为N；并且其中R^17B任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基。

108.R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、4至7元杂环基、苯基和5至10元杂芳基；

并且其中R¹任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和-CN。

109.R¹选自：C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、4至6元杂环基、苯基和5或6元杂芳基；

并且其中R¹任选地被一个或多个选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和-CN。

110.R¹选自：C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，其中R¹任选地被一个或多个选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和-S(O)_xR^A1。

111.R¹是任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代的C_3-6环烷基：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和＝O。

112.R¹是4至7元杂环基，例如饱和的4至7元杂环基，其选自：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌啶基和高哌嗪基，其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和＝O。

113.R¹选自：苯基或5或6-元杂芳基，其含有环氮和任选地1或2个独立地选自O、S和N的杂原子，并且其中R¹任选地被一个或多个选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)和-CN。

114.R¹选自：苯基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基和吲唑基，其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)和-CN。

115.R¹是下式的基团：

其中

R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶各自独立地选自：卤素、-OR^A1、-NR^A1R^B1、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-2烷基、苯基、苯基-C_1-2烷基、5或6元杂芳基和5或6元杂芳基-C_1-2烷基；

或者，R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起形成C_3-6环烷基或4至7元杂环基；

并且其中由R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶中的任一个表示的C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-2烷基、苯基、苯基-C_1-2烷基、5或6元杂芳基或5或6元杂芳基-C_1-2烷基基团，或由R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起形成的C_3-6环烷基或4至7元杂环基各自任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和-CN。

116.R¹是下式的基团：

其中R¹⁶选自卤素、-OR^A1、-NR^A1R^B1、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基和C_1-4卤代烷基；

R¹⁴和R¹⁵各自独立地选自卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

或者，R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起形成C_3-6环烷基或4至6元杂环基，其含有一个或两个选自O、S和N的杂原子，其中所述环烷基或杂环基任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和＝O。

117.R¹是下式的基团：

其中R¹⁶选自卤素、-OR^A1、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R¹⁴和R¹⁵各自独立地选自卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

或者，R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基、环己基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基，其中的每一个任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和＝O。

118.

R¹选自

其中R^17B选自

119.R¹选自4至12(例如4至7)-元饱和或部分饱和的杂环基，其含有1个环氮和任选地1个或2个选自O、S和N的另外的环杂原子，

其中所述杂环基基团在环氮上任选地被选自以下的基团取代：C_1-4烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)R^A1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-S(O)₂NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1S(O)₂R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-C_1-4烷基-S(O)₂R^A1、C_1-4卤代烷基、-S(O)₂R¹⁸、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R¹⁸、-SO₂NR^A1R¹⁸和R¹⁷；

并且其中所述杂环基基团在(多个)环碳原子上任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O。

120.R¹选自4至12(例如4至7)-元饱和或部分饱和的杂环基，其含有1个环氮和任选地1个或2个选自O、S和N的另外的环杂原子和5-10元杂芳基，其含有1个环氮和任选地1个或2个选自O、S和N的另外的环杂原子；其中R¹通过杂环基或杂芳基基团中的氮与基团-L¹-C(O)-键合；

其中所述杂环基任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R^B1、-S(O)₂R^A1和＝O；并且

所述杂芳基任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R^B1和-S(O)₂R^A1。

121.R¹选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基，其中氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或硫代吗啉基中的环氮原子任选地被选自以下的基团取代：

C_1-4烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)R^A1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-S(O)₂NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1S(O)₂R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-C_1-4烷基-S(O)₂R^A1、C_1-4卤代烷基、-S(O)₂R¹⁸、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R¹⁸、-SO₂NR^A1R¹⁸和R¹⁷。

122.R¹选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基通过环碳原子与基团-L¹-C(O)-键合，并且其中氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基中的环氮原子任选地被选自以下的基团取代：

C_1-4烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)R^A1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-S(O)₂NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1S(O)₂R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-C_1-4烷基-S(O)₂R^A1、C_1-4卤代烷基、-S(O)₂R^18A、-C(O)R^18A、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R^18A、-SO₂NR^A1R^18A和R^17E；

R^17E选自C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、吗啉基-C_1-3烷基-、硫代吗啉基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-；

R^18A选自C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、吗啉基-C_1-3烷基-、硫代吗啉基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-；并且

其中R^17E和R^18A各自独立地任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-S(O)_xR^A6(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A6、-OC(O)R^A6、-C(O)OR^A6、-NR^A6C(O)R^B6、-C(O)NR^A6R^B6、-NR^A6SO₂R^B6、-SO₂NR^A6R^B6、＝O和-CN。

123.R¹选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基通过环碳原子与基团-L¹-C(O)-键合，并且其中氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基中的环氮原子任选地被选自以下的基团取代：

C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-S(O)₂R^18B、-C(O)R^18B、-C(O)NR^A1R^18B和R^17F；

R^17F选自C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、吗啉基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-；

R^18B选自C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-；

其中R^17F和R^18B各自独立地任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-C(O)R^A6、-C(O)OR^A6和-C(O)NR^A6R^B6。

124.R¹选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中所述氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基通过环碳原子与基团-L¹-C(O)-键合，并且其中氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基中的环氮原子任选地被选自以下的基团取代：

C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-S(O)₂R^B1、-C(O)R^18B、-C(O)NR^A1R^B1和R^17F；

125.R¹是4至7元饱和杂环基，其含有一个NH环基团，和任选地，1个选自O、S和N的另外的杂原子(例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基)，其中4至7元杂环基中的NH环基团被选自以下的取代基取代：-S(O)₂R^B1、-C(O)R^18B和-C(O)NR^A1R^B1；

其中R^18B任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-C(O)R^A6、-C(O)OR^A6和-C(O)NR^A6R^B6。

126.R¹是4至7元饱和杂环基，其含有一个NH环基团，和任选地，1个选自O、S和N的另外的杂原子(例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基)，其中4至7元杂环基中的NH环基团被选自以下的取代基取代：C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1和R^17G；

R^17G选自C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基-、吡咯烷基-C_1-3烷基-、哌啶基-C_1-3烷基-、哌嗪基-C_1-3烷基-、吗啉基-C_1-3烷基-、苯基、苯基-C_1-3烷基-、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基-C_1-3烷基-、吡啶基-C_1-3烷基-、嘧啶基-C_1-3烷基-、吡嗪基-C_1-3烷基-和哒嗪基-C_1-3烷基-

其中R^17G任选地被一个或多个(例如1或2个)独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-C(O)R^A6、-C(O)OR^A6和-C(O)NR^A6R^B6。

127.R¹选自：苯基和苯基-C_1-3烷基，其中所述苯基基团被氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氮杂环丁烷基-C_1-3烷基、吡咯烷基-C_1-3烷基、哌啶基-C_1-3烷基或哌嗪基-C_1-3烷基取代。

R¹选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基(其中所述环丙基、环丁基、环戊基和环己基独立地任选地被一个或两个R¹⁰²取代)、

其中

R¹⁰¹独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_2-4烷基-OR^A1、-C_2-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-S(O)₂R^18B、-C(O)R^18B、-C(O)NR^A1R^18B和R^17F；

其中R^17F和R^18B各自独立地任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-C(O)R^A6、-C(O)OR^A6和-C(O)NR^A6R^B6

(例如，R¹⁰¹独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-SO₂R^A1、-C(O)R^A1、-C(O)NR^A1R^B1和-SO₂NR^A1R^B1)；

每个R¹⁰²独立地选自卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1和＝O；并且

每个q是整数0、1或2。

128.R¹选自苯基、吡啶基和噻唑基，其中所述苯基、吡啶基和噻唑基任选地被一个或两个选自以下的基团取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1。

129.R¹选自：甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基-甲基-、环丁基-甲基-、环戊基-甲基-、环己基-甲基-

其中

(例如，R¹⁰¹选自：H、C_1-4烷基、-SO₂R^A1、-C(O)R^A1、-C(O)NR^A1R^B1和-SO₂NR^A1R^B1)；并且

R¹⁰²选自H、C_1-3烷基和C_1-3卤代烷基(例如R¹⁰²是H。例如R¹⁰²是C_1-3烷基。例如R¹⁰²是-CF₃)。

130.R¹选自：甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、

；例如，R¹选自环丙基、环丁基、环戊基、

131.R¹选自：甲基、乙基、异丙基、叔丁基、羟甲基、2-羟乙基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、苯基、噻唑基、吡啶基、

132.R¹选自叔丁基、

133.R¹选自：环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、苯基、

134.R¹选自4至7元饱和或部分饱和的杂环基，其含有一个或两个环氧原子，例如氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基或二噁烷基。

135.R¹选自：

136.R¹选自：

137.R¹选自：

138.R¹选自：环丙基、环丁基、环戊基、环丙基-甲基、环丁基-甲基和环戊基-甲基(例如R¹选自：环丙基、环丁基和环戊基)。

139.R¹是叔丁基。

140.基团-L¹-C(O)-与R¹中的碳原子键合。

141.L¹是键并且R¹通过R¹中的碳原子与羰基基团连接。

142.L¹是键并且R¹通过R¹中的氮原子与羰基基团连接。

143.L¹是键并且R¹如以上102至140中的任一项所定义。

144.L¹是键并且R¹是4至12(例如4至7)-元饱和或部分饱和的杂环基，其含有1个环氮和任选地1个或2个选自O、S和N的另外的环杂原子，其中所述杂环基通过杂环基中的环氮原子与羰基基团键合，其中所述杂环基任选地被一个或多个(例如1或2个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-C(O)R¹⁸、-C(O)OR^A1、-C(O)NR^A1R^B1和-S(O)₂R^A1。

145.L¹是键并且R¹选自：

其中R¹⁰¹独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-SO₂R^A1、-C(O)R^A1、-C(O)NR^A1R^B1和-SO₂NR^A1R^B1；

每个q是整数0、1或2

146.L¹是-O-或-N(R¹⁰)-并且L¹与R¹中的碳原子键合。

147.L¹是-O-或-N(R¹⁰)-并且L¹选自：甲基、乙基、丙基、异丙基、

其中

148.式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物中式：

的基团是：

149.式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物中式：

的基团是：

150.式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物中式：

的基团是：

其中R⁷具有本文定义的任何值。例如，R⁷可能是氢、卤素或C_1-3烷基。R⁷可能是氢。R⁷可能是C_1-3烷基，例如甲基。R⁷可能是卤素，例如氟。

151.式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物中式：

的基团是：

在某些实施方案中，在式(I)的化合物中，X₂和X₃是CH并且X₁是CR⁷。

在某些实施方案中，在式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的化合物中：

X选自：–CH₂-、-CH(CH₃)-、–CH₂CH₂-、-C(＝NOH)-、

R²选自：H、甲基和乙基(例如R²是H，或者R²是甲基)；

R³选自：H、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基(例如环丙基或环丁基)、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H和C_1-3烷基；

或者，R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中由R²和R³形成的所述杂环基任选地被氟取代(例如R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成氮杂环丁烷基、3-氟氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基)；

或者，基团

形成下式的基团：

其中

R³⁰选自：H和C_1-4烷基(例如R³⁰是H，或者R³⁰是甲基)；

n1是整数0、1、2或3并且，当存在时，R⁴位于苯环上(例如n是0)；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹各自独立地是H或C_1-3烷基(例如H或甲基，特别是H)。

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、–CH₂CH₂-和-C(＝NOH)-；

基团-NR²R³选自：-NH₂、-NH(Me)-NH(Et)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(环丙基)、-NH(环丁基)、氮杂环丁烷-1-基、3-氟氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1基和哌嗪-1-基(例如-NR²R³选自-NH(Me)和氮杂环丁烷-1-基，优选地-NR²R³是-NH(Me))；

或者，基团

形成下式的基团：

其中

n₁是整数0、1、2或3并且，当存在时，R⁴位于苯环上(例如n₁是0)；

或者，基团

形成下式的基团：

其中

n₂是整数0、1或2(例如n₂是0)并且，当存在时，R⁴位于苯环上；

R³⁰选自：H和C_1-4烷基(例如R³⁰是H，或者R³⁰是甲基)；

R⁵和R⁶是H；

R⁸和R⁹独立地选自：H和甲基(例如R⁸是H并且R⁹是甲基；优选地R⁸和R⁹都是H)；

L¹选自键、-O-和-NH-(优选地L¹是键)；

R⁴选自：C_1-4烷基和卤素(例如氟)；n是0、1或2；并且

R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义。

优选地，在该实施方案中，n是0。

优选地，在该实施方案中，X是-CH₂-；基团-NR²R³是-NH(Me)；L¹是键；并且n是0。

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-和-CH₂CH₂-(优选地X是-CH₂-)；

基团-NR²R³选自：-NH₂、-NH(Me)-NH(Et)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(环丙基)-NH(环丁基)和氮杂环丁烷-1-基，(例如-NR²R³选自-NH(Me)和氮杂环丁烷-1-基，优选地-NR²R³是-NH(Me))；

R⁵和R⁶是H；

L¹是键；

R⁴是卤素(例如氟)；n是0或1(优选地n是0)；

X₂和X₃是CH；

X₁是N或CR⁷(优选地X₁是CH)；

R⁷是H或甲基；

并且

R¹选自环丙基、环丁基、环戊基、

在一个实施方案中，式(I)的化合物是式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R^A是H或C_1-3烷基；

R²是H或C_1-4烷基；并且

R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、L¹和n具有本文定义的任何含义。

优选地，在该实施方案中，该化合物是式(VIIIa)的化合物，或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²是H。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²是C_1-3烷基，例如甲基。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²是C_1-3烷基并且R³是H。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²是甲基并且R³是H。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²是C_1-3烷基(例如R²是甲基)并且R³不是H。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R²和R³独立地是C_1-3烷基(例如R²和R³都是甲基)。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：基团-NR²R³是氮杂环丁烷-1-基或吡咯烷-1-基。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R^A是C_1-3烷基(例如R^A是甲基)。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R^A是氢。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R⁷是C_1-3烷基(例如R⁷是甲基)。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R⁷是卤素，例如氟或氯，特别是氟。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：R⁷是氢。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：

R^A是H或甲基(例如R^A是甲基)；

R²是H或C_1-3烷基；

n是0、1或2并且R⁴选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

L¹是键或-O-；

R¹具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)所定义。例如如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义)；

R⁵和R⁶各自独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

或者，R⁵和R⁶与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基；

R⁸和R⁹各自独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-C_1-4烷基-OR^A5、-C_1-4烷基-NR^A5R^B5和-C_1-4烷基-SR^A5，其中R^A5和R^B5各自独立地选自：H、甲基和乙基；

或者，R⁸和R⁹与它们所连接的碳一起形成环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基；

R⁷选自：H、卤素和C_1-4烷基(例如R⁷是卤素或C_1-4烷基)；并且

R³如关于式(I)所定义。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：

R^A是H或甲基(例如R^A是甲基)；

R²是H或甲基；

n是0；

L¹是键；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹是H；

R⁷是H、氟或甲基(例如R⁷是氟或甲基)；并且

R³如关于式(I)所定义。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：

R^A是H或甲基(例如R^A是甲基)；

n是0；

L¹是键；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹是H；

R⁷是H、氟或甲基(例如R⁷是氟或甲基)；并且

基团-NR²R³选自：-NH₂、-NH(Me)-NH(Et)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、-NH(CH₂CH₂F)-NH(环丙基)-NH(环丁基)、氮杂环丁烷-1-基、3-氟氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1基和哌嗪-1-基(例如-NR²R³选自-NH(Me)和氮杂环丁烷-1-基，优选地-NR²R³是-NH(Me))。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：

R^A是H或甲基(例如R^A是甲基)；

R²是H或甲基；

n是0；

L¹是-O-；

R⁷选自：H、氟和甲基(例如R⁷是氟或甲基)；并且

R³如关于式(I)所定义(例如R³是甲基)。

在某些实施方案中，在式(VIII)、(VIIIa)或(VIIIb)的化合物中：

R^A是H或甲基(例如R^A是甲基)；

n是0；

L¹是键或-O-(优选地L¹是键)；

R¹是叔丁基；

R²是H或C_1-3烷基；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹是H；

R⁷选自：H、氟和甲基(例如R⁷是氟或甲基)；并且

R³具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)所定义；例如R³是C_1-3烷基)。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、X、L¹和n具有本文定义的任何含义。

优选地，在该实施方案中，该化合物是式(IXa)的化合物，或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：L¹是键。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：L¹是-O-。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：L¹是-N(R¹⁰)-，其中R¹⁰是H或C_1-4烷基(例如L¹是-NH-)。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：R⁷是C_1-3烷基(例如R⁷是甲基)。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：R⁷是卤素(例如R⁷是氟)。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：R⁷是氢。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：

n是0、1或2并且R⁴选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

L¹是键或-O-；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、–CH₂CH₂-、

R⁵和R⁶各自独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

R⁷选自：H、卤素和C_1-4烷基；并且

R²和R³具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)所定义)。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：

n是0；

L¹是键或–O-；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、–CH₂CH₂-；

R⁵、R⁶、R⁸和R⁹是H；

R⁷是H或甲基；

R²是H或C_1-3烷基；并且

R³具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)所定义)。

在某些实施方案中，在式(IX)、(IXa)或(IXb)的化合物中：

n是0；

L¹是键；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、-CH₂CH₂-；

R⁵和R⁶是H；

R⁸和R⁹是H或甲基(例如R⁸和R⁹都是H；例如R⁸是H并且R⁹是甲基)；

R⁷是H、F或甲基；并且

基团-NR²R³选自-NH₂、-NH(Me)-NH(Et)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、-NH(CH₂CH₂F)-NH(环丙基)-NH(环丁基)、氮杂环丁烷-1-基、3-氟氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1基和哌嗪-1-基(例如-NR²R³选自-NH(Me)和氮杂环丁烷-1-基，优选地-NR²R³是-NH(Me))。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

R²、R³、R⁴、R⁷、X、L¹和n具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)的化合物所定义)；并且

R⁷是卤素或C_1-4烷基(例如甲基)。

优选地，在该实施方案中，该化合物是式(Xa)的化合物，或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，R⁷是卤素，例如氟。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，R⁷是C_1-4烷基(例如甲基)。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，L¹是键。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，L¹是-O-。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，L¹是-NH-

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中，R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中：

R⁷是C_1-4烷基(例如甲基)；

n是0、1或2和R⁴选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-、–CH₂CH₂-、

L¹是键或O；

R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义；并且

R²和R³如关于式(I)所定义。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中：

R⁷是C_1-4烷基(例如甲基)或卤素(例如氟)；

n是0或1并且R⁴选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-和-CH₂CH₂-；

L¹是键或-O-；

R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义；

R²是H或C_1-3烷基；并且

R³具有本文定义的任何含义(例如如关于式(I)所定义)。

在某些实施方案中，在式(X)、(Xa)或(Xb)的化合物中：

R⁷是C_1-4烷基(例如甲基)或卤素(例如氟)；

n是0；

X选自：-CH₂-、-CH(CH₃)-和–CH₂CH₂-；

L¹是键；

R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义；并且

在某些实施方案中，提供了上述式(VIII)、(VIIIa)、(VIIIb)、(IX)、(IXa)、(IXb)、(X)、(Xa)和(Xb)的任何实施方案，其中R³可能具有本文定义的任何值，例如R³如第(36)至(73)段中的任一段所定义。

在某些实施方案中，提供了上述式(VIII)、(VIIIa)、(VIIIb)、(IX)、(IXa)、(IXb)、(X)、(Xa)和(Xb)的任何实施方案，其中R³可能具有本文定义的任何值，例如：

A.R³选自：H、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-4烷基和被-OR¹³取代的C_2-4烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

并且其中R³任选地进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基(例如1、2或3个)取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A2、-NR^A2R^B2、-S(O)_xR^A2(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A2、-OC(O)R^A2、-C(O)OR^A2、-NR^A2C(O)R^B2、-C(O)NR^A2R^B2、-NR^A2SO₂R^B2、-SO₂NR^A2R^B2、＝O、-CN和-NO₂；或者

B.R³选自：C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；或者

C.R³选自：H、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基(例如环丙基或环丁基)、被-NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被-OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H和C_1-3烷基；或者

D.R³选自：C_1-3烷基、C_1-3氟烷基、环丙基、环丁基、环丙基-C_1-2烷基-、环丁基-C_1-2烷基-、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(二甲基氨基)乙基、3-氨基丙基、3-(甲基氨基)丙基和3-(二甲基氨基)丙基；或者

E.R³选自：甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-甲氧基乙基、2-羟乙基、环丙基、环丁基；或者

F.R³是H；或者

G.R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中由R²和R³形成的所述杂环基任选地被氟取代(例如R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成氮杂环丁烷基、3-氟氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基)；

H.基团

形成下式的基团：

其中

R³⁰选自：H和C_1-4烷基(例如R³⁰是H，或者R³⁰是甲基)；

I.R³选自-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂；其中R^A7和每个R^A9独立地选自C_1-4烷基。

在其他实施方案中，在上述实施方案A至I中，R²可能选自：H和C_1-4烷基。例如，R²可能是H。例如，R²可能是C_1-4烷基。例如R²是甲基或乙基。例如R²是H或甲基。

在某些实施方案中，提供了上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(VIIIa)、(VIIIb)、(IX)、(IXa)、(IXb)、(X)、(Xa)和(Xb)的任何实施方案，基团

形成下式的基团：

在某些实施方案中，提供了上述式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(VIIIa)、(VIIIb)、(X)、(Xa)和(Xb)的任何实施方案，其中：

L¹是键；

R¹选自C_1-4烷基、-C_1-4烷基-OR^A1，其中R^A1是H或C_1-3烷基、C_1-4氟烷基、C_3-5环烷基、氧杂环丁烷基、噻唑基，其中所述C_3-5环烷基、氧杂环丁烷基、噻唑基各自独立地被C_1-3烷基(例如甲基)取代；

X是-CH₂-或-CH(CH₃)-；

R²是H或甲基；

R³选自：H、C_1-3烷基、氟乙基或环丙基(例如H或C_1-3烷基)；或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成氮杂环丁烷基；

R⁴是氟并且n是0或1；

R⁵和R⁸是H；

R⁶和R⁹独立地选自H和甲基；并且

R⁷是H或甲基。

在另一个实施方案中，式(I)的化合物是式(XI)、(XIa)或(XIb)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中：

X₁、X₂、X₃、R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、L¹和n具有本文定义的任何含义。

可能的是，在式(XI)、(XIa)或(XIb)的化合物中，R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义。

可能的是，在式(XI)、(XIa)或(XIb)的化合物中，

X₁是N或CR⁷；

R⁷选自H、卤素和C_1-3烷基(例如R⁷是H、F或甲基)；

R⁵和R⁶是H；

L¹选自键、-O-和-NH-(优选地L¹是键)；

R⁴选自：C_1-4烷基和卤素(例如氟)；n是0、1或2；并且

R¹如以上第(102)至(140)段中的任一段所定义。

优选地，在这些实施方案中，该化合物是式(XIa)的化合物，或其药学上可接受的盐。

优选地，在这些实施方案中，n是0。

优选地，在这些实施方案中，X₂和X₃是CH并且X₁是CR⁷。

优选地，在这些实施方案中，X₂和X₃是CH，X₁是CR⁷并且是0。

在另一个实施方案中，提供了选自表1或表2的化合物或其药学上可接受的盐或前药：

表1

表2

在一个实施方案中，本发明的化合物不是

或其药学上可接受的盐。

药物组合物

根据另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。

选择和制备合适的药物组合物的常规方法描述于，例如，Pharmaceuticals-TheScience of Dosage Form Designs",M.E.Aulton,Churchill Livingstone,1988。

本发明的组合物可以是适于口服使用的形式(例如片剂、锭剂、硬或软胶囊、水性或油性悬浮液、乳液、可分散的粉末或颗粒、糖浆或酏剂)、适用于外部使用的形式(例如乳膏、软膏、凝胶或水性或油性溶液或悬浮液)、适用于通过吸入施用的形式(例如细碎粉末或液体气溶胶)、适用于通过吹入施用的形式(例如细碎粉末)或适用于肠胃外施用的形式(例如用于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内给药的无菌水溶液或油溶液或用于直肠给药的栓剂)。

本发明的组合物可通过常规方法使用本领域熟知的常规药物赋形剂获得。因此，用于口服使用的组合物可含有例如一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。

用于治疗病况的本发明化合物的有效量是足以在症状上缓解温血动物，特别是人的病况症状或减缓病况进展的量。

与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量必然会根据所治疗的宿主和特定施用途径而变化。例如，用于口服施用于人的制剂通常含有例如0.1mg至0.5g与适当且方便量的赋形剂复合的活性剂(更适当地0.5至100mg，例如1至30mg)，所述赋形剂可以为总组合物重量的约5％至约98％。

用于本发明化合物的治疗或预防目的的剂量大小将理所当然地根据病况的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径，根据众所周知的医学原则而变化。

在将本发明化合物用于治疗或预防目的时，通常将其施用使得每日剂量在例如选自0.1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至75mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至20mg/kg或5mg/kg至10mg/kg体重的每日剂量的范围内，如果需要，以分剂量给予。通常，当采用肠胃外途径时，将施用较低剂量。因此，例如，对于静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内施用，通常使用的剂量范围为例如0.1mg/kg至30mg/kg体重。类似地，对于吸入施用，将使用例如0.05mg/kg至25mg/kg体重的剂量。合适地，口服施用本发明的化合物，例如以片剂或胶囊剂型的形式施用。口服施用的日剂量可以是例如选自1mg至1000mg、5mg至1000mg、10mg至750mg或25mg至500mg的总日剂量。通常，单位剂型含有约0.5mg至0.5g的本发明化合物。在一个特定的实施方案中，肠胃外施用本发明的化合物，例如通过静脉内施用。在另一个特定的实施方案中，口服施用本发明的化合物。

治疗用途和应用

根据另一方面，本发明提供了本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，其用作药物。

本发明的另一方面提供了本发明的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM₂)介导的疾病或医学病况。

还提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由AM₂介导的疾病或医学病况的药物中的用途。

在本申请的以下各节中引用了用于治疗某些疾病或病况的本发明化合物，或其药学上可接受的盐。应当理解，本文中对用于特定用途的化合物的任何引用还旨在引用(i)本发明的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗该疾病或病况中的用途；(ii)治疗受试者的疾病或病况的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

由AM₂介导的医学病况疾病可以是本申请中列出的任何疾病或医学病况，例如增殖性疾病，特别是癌症。

向其施用本发明化合物的受试者可以是温血哺乳动物，例如人或动物。在特定的实施方案中，受试者或患者是人。在其他实施方案中，受试者是动物，例如大鼠、小鼠、狗、猫、灵长类动物或马。

在本发明的背景技术中阐明了AM和AM₂受体与人和动物疾病的关联。本公开和相关参考文献为本发明化合物的治疗用途提供了进一步的支持。因此，连接AM、AM₂受体及其抑制作用的支持性参考文献也构成本发明化合物在治疗和预防本文所述医学病况中的用途的公开内容的一部分。

AM₂的作用在疾病(例如癌症)中具有独特的作用。因此，抑制AM₂可能是有利的。AM₂受体是由GPCR、降钙素样受体(CLR)和RAMP3形成的复合物。相关的AM₁受体由CLR和RAMP2形成，并介导许多重要的生理功能，包括血压。因此，优选本发明的化合物选择性地抑制AM₂并且对AM₁的功能几乎没有影响或没有影响。

RAMP1和RAMP3还与降钙素受体(CTR)相互作用形成两个功能性胰岛淀粉样多肽(amylin)受体(AMY受体)。CTR和RAMP1形成AMY₁受体，而CTR和RAMP3形成AMY₃受体。胰岛淀粉样多肽在血糖控制中具有重要作用，这是因为它可以响应血糖变化而与胰岛素共分泌，并且其具有通过减缓胃排空、减缓消化酶和胆汁的释放并增加饱腹感以减少或抑制进一步进食而减缓血糖升高的特异性功能。它还减少了胰高血糖素的分泌，从而减少了新葡萄糖的产生及其向血液中的释放。还已知胰岛淀粉样多肽通过对成骨细胞的直接合成代谢作用来刺激骨形成。这些功能是通过胰岛淀粉样多肽对胰岛淀粉样多肽受体的作用来实现的。其中，认为AMY₁R和AMY₃R负责这些稳态功能。尚不知道AMY₂受体(由CTR和RAMP2形成)是否具有重要的生理功能。阻断血糖控制不是理想的功能，在癌症患者中，食欲下降和无法维持正常血糖水平将被视为药物的不良作用。因此，本发明的优选化合物相对于AMY₁和/或AMY₃选择性地抑制AM₂。由于其在血压调节中的重要作用，预期本发明的特定化合物将提供适用于治疗用途的有效AM₂拮抗剂，而对AM₁受体几乎没有或没有拮抗作用。适当地，本发明的化合物对参与能量代谢的生理调节的CTR/RAMP3AMY₃受体几乎没有影响或没有影响。

在实施方案中，与AM₁、AMY₁和/或AMY₃中的一种或多种相比，本发明的化合物对AM₂的活性高10倍、50倍或100倍。在某些实施方案中，与AM₁和/或AMY₃相比，本发明的化合物选择性地抑制AM₂。例如，在实施例中描述的基于AM₂细胞的试验中，本发明化合物的IC₅₀比在使用表达AM₁、AMY₁或AMY₃受体的细胞系的一个或多个相应试验中的IC₅₀低10倍、50倍或100倍。。

适当地，相对于AM结合的其他受体，本发明的化合物选择性地抑制AM₂受体，例如，相对于AM结合的其他受体，对AM₂受体的选择性高5倍、10倍、50倍或100倍。

增殖性疾病

本发明的另一方面提供了用于治疗增殖性疾病的本发明化合物或其药学上可接受的盐。增殖性疾病可能是恶性的或非恶性的。

AM₂在原发癌和转移瘤中被上调并且起关键作用。因此，在一个实施方案中，提供了用于治疗癌症的本发明化合物，该癌症可以是非转移性的或转移性的。该癌症适当地是实体瘤，但是，本发明的化合物也可以用于治疗血液(“液体”)癌症和与此类癌症相关的作用。有证据表明，血液癌症表达AM，并且其在刺激血管生成中的作用在疾病进展中很重要(Kocemba K等人The hypoxia target adrenomedullin is aberrantly expressed inmultiple myeloma and promotes angiogenesis,Leukemia.2013；27:1729–1737:DOI10.1038/leu.2013.76)。在肿瘤微环境中抑制AM₂可能有益于预防或抑制与癌症(如多发性骨髓瘤)相关的血管生成和疾病进展。

本发明的化合物可用于治疗和/或预防例如：

癌，包括例如源自复层鳞状上皮细胞的肿瘤(鳞状细胞癌)和在器官或腺体内产生的肿瘤(腺癌)。实例包括乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、食道癌(包括但不限于食道腺癌和鳞状细胞癌)、基底样乳腺癌、基底细胞癌(皮肤癌的一种形式)、鳞状细胞癌(各种组织)、头颈癌(包括但不限于鳞状细胞癌)、胃癌(包括但不限于胃腺癌、胃肠道间质肿瘤)、印戒细胞癌、膀胱癌(包括过渡性细胞癌(一种膀胱恶性赘生物)、支气管癌、结直肠癌(包括但不限于结肠癌和直肠癌)、肛门癌、胃癌、肺癌(包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、细支气管肺泡癌和间皮瘤)、神经内分泌肿瘤(包括但不限于胃肠道、乳腺和其他器官的类癌)、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、胰腺癌、乳腺癌(包括但不限于导管癌、小叶癌、炎性乳腺癌、透明细胞癌、粘液性癌)、卵巢癌(包括但不限于卵巢上皮癌或表面上皮间质肿瘤包括浆液性肿瘤、子宫内膜样肿瘤和粘液性囊腺癌、性索间质肿瘤)、肝和胆管癌(包括但不限于肝细胞癌、胆管癌(cholangiocarcinoma)和血管瘤)、前列腺癌、腺癌、脑肿瘤(包括但不限于神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和髓母细胞瘤)、生殖细胞肿瘤、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状瘤腺癌、囊腺癌、肾癌(包括但不限于肾细胞癌、透明细胞癌和威尔姆氏(Wilm‘s)肿瘤)、髓样癌、原位导管癌或胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、宫颈癌、子宫癌(包括但不限于子宫内膜腺癌、子宫乳头状浆液性癌、子宫透明细胞癌、子宫肉瘤和平滑肌肉瘤、混合性苗勒氏(mullerian)肿瘤)、睾丸癌、成骨癌、上皮癌、肉瘤样癌、鼻咽癌、喉癌；口腔和口咽鳞癌；

肉瘤，包括：骨肉瘤和成骨肉瘤(骨)；软骨肉瘤(软骨)；平滑肌肉瘤(平滑肌)；横纹肌肉瘤(骨骼肌)；间皮肉瘤和间皮瘤(体腔的膜状内膜)；纤维肉瘤(纤维组织)；血管肉瘤和血管内皮瘤(血管)；脂肪肉瘤(脂肪组织)；神经胶质瘤和星形细胞瘤(大脑中发现的神经源性结缔组织)；粘液肉瘤(myxosarcoma)(原始胚胎结缔组织)；脊索瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、尤因氏(Ewing‘s)肉瘤、间质性(mesenchymous)和混合性中胚层肿瘤(混合性结缔组织类型)和其他软组织肉瘤；

神经系统的实体瘤，包括髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤和神经鞘瘤；

黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤和视网膜母细胞瘤；

骨髓瘤和多发性骨髓瘤；

造血肿瘤，包括：骨髓性和粒细胞性白血病(髓样和粒细胞性白细胞系列的恶性肿瘤)；淋巴性、淋巴细胞性和淋巴母细胞性白血病(淋巴样和淋巴细胞样血细胞系列的恶性肿瘤)；真性红细胞增多症和红血球(各种血细胞产物的恶性肿瘤，但以红细胞为主)；骨髓纤维化；和

淋巴瘤，包括：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

在一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗实体瘤，例如以上所列的任何实体瘤。在一个特定的实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌。

在另一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗激素依赖性前列腺癌。

在另一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的乳腺癌：Luminal A乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕激素受体)阳性)、HER2阴性且蛋白Ki-67水平低)；Luminal B乳腺癌(激素受体阳性(雌激素受体和/或孕激素受体阳性)、HER2阳性或HER2阴性且Ki-67水平高)；三阴性乳腺癌(即肿瘤是雌激素受体阴性、孕激素受体阴性且HER2阴性的)；HER2阳性乳腺癌或正常类乳腺癌(如Dai等人Am.J.CancerResearch.2015；5(10):2929–2943的表1中定义的分类)。

在一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗选自以下的癌症：胰腺癌、三阴性乳腺癌(即肿瘤是雌激素受体阴性、孕激素受体阴性且HER2阴性的)、激素难治性前列腺癌和非小细胞肺癌。

在实施方案中，本发明的化合物对癌症(例如本文公开的任何癌症)提供了抗癌作用，其选自以下中的一种或多种：抗增殖作用、促凋亡作用、抗有丝分裂作用、抗血管生成作用、抑制细胞迁移、抑制或预防肿瘤侵袭和/或预防或抑制转移。

本发明的化合物可以用于预防或抑制癌症的进展。本发明的化合物可用于减缓、延迟或使癌症进展停止。癌症的进展通常通过指定癌症的时期来确定。分期通常通过为癌症指定一个从I到IV的数字来进行，I是孤立的癌症，IV是疾病的晚期，其中癌症已经扩散到其他器官。分期通常考虑肿瘤的大小、是否侵袭了邻近器官、已扩散到的淋巴结的数量以及癌症是否已经转移。对于预防癌症的扩散而言，预防或抑制癌症的进展，例如，从I期进展到II期(其中癌症在局部扩散)，或从III期进展到IV期(其中癌症转移到其他器官)特别重要。

本发明的化合物可用于治疗癌症，其中该癌症是原发癌，其可以是第二原发癌。

本发明的化合物可用于预防或抑制第二原发癌的发生。

本发明的化合物可用于治疗癌症，其中该癌症对化学疗法和/或放射疗法是难治的(耐药性)。该癌症可能在治疗开始时产生耐药性，或者在治疗期间变得耐药。

本发明的化合物可用于治疗癌症，其中该癌症是复发性癌症，其可以是局部的、区域的或远端的。复发性癌症是在初始治疗后且在一段时间内无法检测到该癌症后复发的癌症。相同的癌症可能在相同的组织或身体的不同部位复发。

本发明的化合物可用于预防或抑制癌症的复发。

本发明的化合物可用于治疗癌症，其中该癌症是转移性或继发性癌症。

本发明的化合物可用于预防或抑制癌症转移。转移性癌症的治疗可能与先前用于治疗原发性肿瘤的治疗相同或不同。例如，在某些实施方案中，可以通过外科手术切除原发性肿瘤，并将本发明的化合物用于预防可能在外科手术后残留的或已经逸出原发性肿瘤的癌细胞的扩散。在其他实施方案中，可以使用放射疗法治疗原发性肿瘤。在其他实施方案中，可以通过化学疗法治疗原发性肿瘤。通常使用联合疗法治疗癌症以改善治疗效果，并且通常使缓解的时长和深度最大化。本文公开的任何组合疗法均可与本发明的化合物一起使用。

当原发性肿瘤已经转移并且继发性肿瘤已经确定时，可以使用本发明的化合物来治疗继发性肿瘤。这可能涉及对继发性肿瘤的治疗和对继发性肿瘤转移的预防。本文对转移的提及旨在涵盖本文所公开的任何肿瘤的转移。通常，继发性肿瘤将与原发性肿瘤位于不同的组织中。例如，继发性肿瘤可以是骨中的继发性肿瘤。在一个特定的实施方案中，本发明的化合物用于治疗骨中的继发性肿瘤，例如用于治疗继发性骨肿瘤，其中原发性肿瘤是乳腺或前列腺肿瘤。

胰腺肿瘤

在一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗胰腺肿瘤，特别是恶性胰腺肿瘤。术语“胰腺肿瘤”涵盖外分泌肿瘤和内分泌肿瘤，其可能是良性或恶性的。外分泌肿瘤是胰腺癌的最普遍形式，约占病例的95％。外分泌癌包括例如导管腺癌(PDAC)、腺泡细胞癌、乳头状肿瘤(例如导管内乳头状粘液性肿瘤(IPMN))、粘液性肿瘤(例如粘液性囊腺癌)、实体瘤和浆液性肿瘤。胰腺内分泌肿瘤很少见，是胰腺内胰岛细胞异常的结果。胰腺内分泌肿瘤的实例包括胃泌素瘤(Zollinger-Ellison综合征)、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、生长抑素瘤、VIPoma(Verner-Morrison综合征)、无功能胰岛细胞肿瘤和多发性内分泌肿瘤1型(MEN1，也称为Wermer综合征)。在一个特定的实施方案中，该化合物用于治疗胰腺癌，特别是选自以下的胰腺癌：胰腺导管腺癌、胰腺腺癌、腺泡细胞癌、具有浸润性癌的导管内乳头状粘液性肿瘤、具有浸润性癌的粘液性囊性肿瘤、胰岛细胞癌和神经内分泌肿瘤。在另一个特定的实施方案中，胰腺癌是胰腺癌。

本发明的化合物可用于治疗患者的胰腺癌，其中肿瘤是可切除的。在该实施方案中，在手术切除肿瘤之后，将本发明的化合物作为辅助疗法施用于患者。

在一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗早期胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是晚期(late stage)胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是晚期(advanced)胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是局部晚期胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是复发性胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是非转移性胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是转移性胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是原发性胰腺癌。在一些实施方案中，原发性胰腺肿瘤已经转移。在一些实施方案中，胰腺癌在缓解后已经复发。在一些实施方案中，胰腺癌是进展性胰腺癌。在一些实施方案中，胰腺癌是缓解期的胰腺癌。

在一些实施方案中，胰腺癌的治疗是辅助治疗。辅助治疗可以是如下治疗，其中：患者有胰腺癌病史，并且通常(但不一定)对治疗(包括但不限于手术切除、放疗和/或化疗)有反应；然而，由于他们的癌症病史，该患者被认为有患该病的风险。在辅助背景中的治疗或施用是指随后的治疗方式。

在一些实施方案中，胰腺癌的治疗可以是新辅助(neoadjuvant)治疗。“新辅助”是指在对胰腺癌进行基本/权威治疗之前，使用本发明的化合物治疗患者。在一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中该患者先前未接受过胰腺癌的治疗。

在一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中该患者在先前已经或正在同时治疗该胰腺癌。先前或同时的治疗可以包括化学治疗剂，例如选自以下的治疗：吉西他滨(gemcitabine)、吉西他滨与Nab-紫杉醇(Abraxane^TM)；5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(capecitabine)、组合治疗FOLFIRINOX(甲酰四氢叶酸(leucovorin)、5-FU、伊立替康(irinotecan)和奥沙利铂(oxaliplatin))、奥沙利铂和5-FU的组合(也称为FOLFOX)以及吉西他滨和卡培他滨的组合。在一些实施方案中，先前的治疗包括吉西他滨和/或埃洛替尼。在一些实施方案中，先前的治疗包括5-FU。

在一些实施方案中，本发明的化合物用于胰腺癌患者的二线或三线治疗。例如，其中患者先前已经被第一和/或第二疗法治疗，该第一和/或第二疗法治疗已经失败或基本上失败了。

本发明的化合物可用于治疗对常规化学疗法难治的胰腺癌，例如治疗对吉西他滨和/或5FU难治的胰腺癌。

在一些实施方案中，本发明的化合物与另一种抗癌剂组合用于治疗胰腺癌。可以使用本文公开的任何组合治疗。

在实施方案中，本发明的化合物用于治疗患者的胰腺癌，其中该患者已患有非典型2型糖尿病。

良性增殖性疾病

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗良性增殖性疾病。良性疾病可以是良性肿瘤例如血管瘤、肝细胞腺瘤、海绵状血管瘤、局灶性结节性增生、听神经瘤、神经纤维瘤、胆管腺瘤、胆管囊肿、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、间皮瘤、畸胎瘤、粘液瘤、结节性再生性增生、沙眼(trachomas)、化脓性肉芽肿、痣、子宫肌瘤、甲状腺腺瘤、肾上腺皮质腺瘤或垂体腺瘤。

患者选择和生物标志物

血清AM在许多癌症，例如人胰腺癌中有所上调。与正常组织和胰腺炎相比，胰腺癌患者的组织切片中AM也有所上调。另外，AM₂受体或其组分(即CLR和/或RAMP3)在大多数胰腺肿瘤中表达(Keleg等人，2007)。胰腺癌患者分泌的含AM的外泌体数量增加。有证据表明，这些含AM的外泌体会导致副肿瘤性(paraneoplastic)β细胞功能异常，这通常与胰腺癌的发展相关(Javeed等人2015)。因此，预期本发明的化合物在癌症(例如胰腺癌)的治疗中是有益的，在该癌症(例如胰腺癌)中，与参考样品相比，生物样品中的AM有所上调。生物学样品可以是例如血清样品或组织样品，例如肿瘤活检。

预期本发明的化合物在癌症(例如胰腺癌)的治疗中是有益的，在该癌症(例如胰腺癌)中，与参考样品相比，生物样品中的AM₂有所上调。预期本发明的化合物在癌症(例如胰腺癌)的治疗中是有益的，在该癌症(例如胰腺癌)中，与参考样品相比，生物样品中的AM₂的组分(即，CLR和/或RAMP3)有所上调，无论是独立地还是共同地。生物样品可以是例如血清样品或组织样品，例如肿瘤活检。另外，在RAMP3(其表达在肿瘤周围的健康组织中升高(Brekhman,V等人,The FASEB Journal.2011；25(1):55-65))的情况下，组织样品可能来自紧邻肿瘤组织的健康组织。除了相对于参考样品而言RAMP3表达升高以外，该组织可能没有显示其他癌症病况或癌前病况的迹象。

由于与对照相比，AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的表达升高可能指示癌症，特别是早期胰腺癌，因此可以根据其基因表达特征将患者分为不同的临床上有用的组。特别地，这些生物标志物中的一种或多种的表达升高预示了对本发明化合物的治疗反应性。确定将对用本发明化合物进行的治疗反应良好的患者的能力使得能够以有效的方式对每位患者进行适当的治疗，而无需冗长的试验和错误以及不必要的、不适当的或不及时的治疗的相关副作用。

因此，本发明提供了一种预测或确定对用本发明化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，包括以下步骤：

(a)分析从受试者获得的生物样品，以确定一种或多种生物标志物的表达水平，其中所述生物标志物选自AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3；和

(b)将在(a)中确定的生物标志物的表达水平与一个或多个参考值进行比较，其中与一个或多个参考值相比，来自受试者的(多个)样品中的一种或多种生物标志物的表达水平的增加指示对用本发明化合物进行的治疗的治疗反应性和/或指示存在癌症，例如早期胰腺癌。

应当理解，可以独立地或以组合地方式选择指示癌症(例如早期胰腺癌)的任何生物标志物(即AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3)进行分析，以确定对本发明化合物的治疗反应性。

通常，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM的表达水平，并将其与一个或多个参考值进行比较。优选地，将分析样品(例如血清样品或肿瘤样品)中AM和/或AM₂的表达水平，并将其与一个或多个参考值进行比较。优选地，将分析血清样品中AM的表达水平，并将其与一个或多个参考值进行比较。

同样，将分析样品(例如肿瘤样品或循环肿瘤细胞)中AM₂受体组分CLR或RAMP3的表达水平，并将其与一个或多个参考值进行比较。另外，可以分析无循环肿瘤细胞的肿瘤DNA，以确定编码AM、AM₂、CLR或RAMP3的无循环肿瘤细胞的肿瘤DNA的存在，这可以揭示或提供一种或多种生物标志物的潜在表达的提前指示。

与一个或多个参考值相比，来自受试者的(多个)样品中的一种或多种生物标志物的表达水平的增加预示了对本发明化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，与一个或多个参考值相比，来自受试者的血清样品中AM的表达水平的增加预示了对本发明化合物的敏感性和/或治疗反应性。优选地，与一个或多个参考值相比，来自受试者的血清样品中AM₂的表达水平的增加预示了对本发明化合物的敏感性和/或治疗反应性。更优选地，与一个或多个参考值相比，来自受试者的血清样品或肿瘤样品中的AM和AM₂的表达水平的增加预示了对本发明化合物的敏感性和/或治疗反应性。

生物标志物

贯穿全文，来自受试者的(多个)生物样品中的生物标志物被认为是差异表达的，并且指示例如早期胰腺癌，其中与一个或多个参考值相比，它们的表达水平显著上调。取决于各个生物标志物，可以通过相对于一种或多种对照样品或一个或多个参考值的表达水平的升高(相对于样品均值和样品方差定标(scale))来在生物样品中诊断早期胰腺癌。显然，各个生物标志物的敏感性、受试者和样品中的差异意味着每种生物标志物具有不同的置信度。当在将生物标志物表达水平相对于样品均值和样品方差定标之后，与一种或多种对照样品或一个或多个参考值相比，它们表现出2倍的变化时，可以说本发明的生物标志物显著上调(或升高)。优选地，与一个或多个对照样品或一个或多个参考值相比，所述生物标志物将表现出3倍或更多的变化。更优选地，与一种或多种对照样品或一个或多个参考值相比，本发明的生物标志物将表现出4倍或更多的变化。也就是说，在表达水平增加(相对于参考值上调)的情况下，生物标志物水平将比参考值的水平或在一种或多种对照样品中观察到的水平高多于两倍。优选地，生物标志物水平将比一个或多个参考值的水平或一种或多种对照样品中的水平高多于3倍。更优选地，生物标志物水平将比一个或多个参考值的水平或一种或多种对照样品中的水平高多于4倍。

生物标志物参考序列

AM

如本文所用，“AM”表示“肾上腺髓质素”。全长人AM mRNA转录本的参考序列可从GenBank数据库获得，登录号为NM_001124，版本为NM_001124.2。

AM₂

如本文所用，“AM₂”表示“肾上腺髓质素受体亚型2”。全长人AM₂ mRNA转录本的参考序列可从GenBank数据库获得，登录号为NM_001253845，版本为NM_001253845.1。

CLR

如本文所用，“CLR”表示“降钙素样受体”。全长人CLR mRNA转录本变体1的参考序列可从NCBI-GenBank数据库获得，登录号为NM_005795，版本为NM_005795.5。全长人CLRmRNA转录本变体2的参考序列可从GenBank数据库获得，登录号为NM_214095，版本为NM_214095.1。

RAMP3

如本文所用，“RAMP3”表示“受体活性修饰蛋白3”。全长人RAMP3 mRNA转录本的参考序列可从NCBI-GenBank数据库获得，登录号为NM_005856，版本为NM_005856.2。

本文公开的生物标志物的参考序列的所有登录号和版本号均从可从NCBI-GenBank数据库(Flat File Release 218.0)获得，在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ genbank/获得。

参考值

贯穿全文，术语“参考值”可以指预定的参考值，例如，为诊断或预测受试者对早期胰腺癌的易感性指定置信区间或阈值。优选地，“参考值”可以指预定的参考值，为预测对本发明化合物的敏感性和/或治疗反应性指定置信区间或阈值。或者，参考值可以从“对照”生物样品(例如阳性(例如患有癌症或已知处于癌前期)或阴性(例如健康的)对照)中一种或多种相应生物标志物的表达水平得出。此外，参考值可以是“内部”标准或内部标准范围，例如蛋白质、转录本、标记或化合物的已知浓度。或者，参考值可以是用于表达值的校准或验证样品或测量技术的质量的内部技术对照。这可能涉及样品中已知组成性表达或以已知水平表达的一个或多个转录本的测量。因此，对于技术人员来说，以下操作是常规的：单独或组合使用这些已知技术，以便相对于标准品或其他转录本或蛋白质来定量样品中生物标志物的水平，或以便验证生物样品的质量、分析(assay)或统计分析(statisticalanalysis)。

生物样品

通常，本发明的生物样品将选自血清样品、组织样品或肿瘤组织样品。通常，本发明的生物样品将是血清样品。在患有早期胰腺癌的受试者的血清中可以检测到AM和/或AM₂表达的水平升高。在患有癌症例如早期胰腺癌的受试者的肿瘤样品的细胞中可以检测到AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达的表达水平升高。这些细胞可以例如来自肿瘤的活检或可以是循环肿瘤细胞。类似地，可以有用地分析无循环肿瘤细胞的肿瘤DNA是否存在编码任何一种或多种生物标志物的DNA(特别是AM₂受体组分CLR和/或RAMP3的DNA)，其可以指示或预示该一种或多种生物标志物的潜在表达。在RAMP3表达的情况下，可以在取自患有早期胰腺癌的受试者的肿瘤组织周围区域的组织样品中检测到RAMP3水平升高，其指示癌症，例如早期胰腺癌。否则，这种组织可能是无症状的。

适当地，本发明的方法可以利用取自受试者的一系列生物样品来确定选自AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3的生物标志物的表达水平。

当与一个或多个参考值或参考血清和/或组织和/或肿瘤组织样品相比时，血清和/或组织和/或肿瘤组织样品中AM和/或AM₂表达水平升高指示早期胰腺癌。当与一个或多个参考值或参考肿瘤组织样品相比时，肿瘤组织样品中CLR和/或RAMP3表达水平升高指示早期胰腺癌。当与一个或多个参考值或参考生物样品相比时，生物样品中AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达水平升高可以适当地在转录本(mRNA)和/或蛋白质水平上辨别。最方便地，当与一个或多个参考值或对照生物样品相比时，生物样品中AM和/或AM₂和/或CLR和/或RAMP3表达的水平升高在转录本(mRNA)水平上可检测到。

适当地，生物标志物选自由以下组成的组：生物标志物蛋白；和编码生物标志物蛋白的核酸分子。优选地，生物标志物是核酸分子，并且特别优选地，其是mRNA分子。

优选地，使用特异性结合配偶体研究生物样品中生物标志物的水平。适当地，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。对于任何给定的生物标志物，结合配偶体(partners)的合适类别对于本领域技术人员将是显而易见的。

适当地，可以通过直接评估靶分子和结合配偶体之间的结合来检测生物样品中生物标志物的水平。

方便地，使用与结合配偶体连接的报告子部分(reporter moiety)检测生物样品中生物标志物的水平。优选地，报告子部分选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。

结合配偶体

可以使用与生物标志物或其片段特异性结合或杂交的结合配偶体来研究生物样品中生物标志物的表达水平。关于本发明，术语“结合配偶体”可以包括能够以高亲和力与相关生物标志物和/或其核苷酸或肽变体特异性结合的任何配体。所述配体包括但不限于核酸(DNA或RNA)、蛋白质、肽、抗体、抗体-缀合物、合成的亲和探针、碳水化合物、脂质、人造分子或有机小分子如药物。在某些实施方案中，结合配偶体可以选自由以下组成的组：互补核酸；适体；抗体或抗体片段。在检测mRNA的情况下，核酸代表高度合适的结合配偶体。

在本发明的上下文中，特异性结合生物标志物的结合配偶体应被视为要求该结合配偶体应能够与至少一种这种生物标志物结合，结合方式区分于与非生物标志物的非特异性结合。适当的区分例如可以基于这种结合的幅度的可区分的差异。

在本发明方法的优选实施方案中，生物标志物是核酸，优选mRNA分子，并且结合配偶体选自包括互补核酸或适体的组。

合适地，结合配偶体可以是核酸分子(通常是DNA，但是可以是RNA)，其具有与其靶向的相关mRNA或cDNA的序列互补的序列。这种核酸通常被称为“探针”(或报告子或寡核苷酸)，与之结合的互补序列通常被称为“靶标”。通常通过检测荧光团、银或化学发光标记的靶标来检测和定量探针-靶标杂交，以确定靶标中核酸序列的相对丰度。

探针的长度可以是25至1000个核苷酸。然而，优选长度为30至100个核苷酸，并且通常使用长度大约为50个核苷酸的探针成功进行完整转录组分析。

虽然确定合适的探针可能是困难的，例如，在非常复杂的阵列中，但是有许多完整转录组阵列的商业来源，并且使用公开序列信息开发定制阵列以检测任何给定的一组特定mRNA是常规的。用于转录组分析的微阵列的商业来源包括Illumina和Affymetrix。

应当理解，可以常规地将有效的核苷酸探针序列设计为AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)的生物标志物转录本或其变体的任何序列区域，以便特异性地检测和测量其表达。本领域技术人员将理解，所选择的特定探针的效力将根据用于测量转录本丰度的平台、探针结合的序列区域以及所使用的杂交条件等而变化。

或者，生物标志物可以是蛋白质，并且结合配偶体可以适当地选自由以下组成的组：抗体、抗体-缀合物、抗体片段或适体。这种结合配偶体将能够与AM、AM₂、CLR或RAMP3蛋白特异性结合，以便检测和测量其表达。

编码上述本发明生物标志物的任何特定结合配偶体的多核苷酸可以是分离的和/或纯化的核酸分子，并且可以是RNA或DNA分子。

贯穿全文，本文所用的术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并且涵盖以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交的天然存在的核苷酸的类似物。这种多核苷酸可以源自智人(Homo sapiens)，或者可以是合成的，或者可以源自任何其他生物。

通常，在本发明中用作结合配偶体的多肽序列和多核苷酸可以是分离的或纯化的。“纯化的”是指它们基本上不含其他细胞组分或材料或培养基。“分离的”是指它们可能也不含有侧接天然序列的天然存在的序列，例如，在核酸分子的情况下，分离的可能是指它不含有5'调控序列和3'调控序列。

在本发明方法的优选实施方案中，核酸是mRNA。对于定量测量给定生物样品中mRNA转录本水平而言，本领域已知许多合适的技术。这些技术包括但不限于；“Northern”RNA印迹、实时聚合酶链反应(RTPCR)、定量聚合酶链反应(qPCR)、数字PCR(dPCR)、多重PCR、逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)或通过高通量分析如杂交微阵列、二代测序(NGS)或通过直接mRNA定量例如通过“Nanopore”测序。或者，可以使用“基于标签”的技术，其包括但不限于基因表达系列分析(SAGE)。通常，可以通过在杂交微阵列或“芯片”上与特定互补核苷酸探针杂交、通过珠阵列微阵列技术或通过RNA-Seq(其中序列数据与参考基因组或参考序列相匹配)来确定给定生物样品中生物标志物mRNA转录本的水平。

在优选的实施方案中，其中核酸是mRNA，本发明提供了一种预测或确定对用本发明化合物进行的治疗的治疗反应性的方法，其中通过PCR确定(多个)生物标志物转录本的水平。多种合适的基于PCR扩增的技术是本领域众所周知的。PCR应用是本领域常规的，技术人员将能够选择合适的聚合酶、缓冲液、报告子部分和反应条件。优选地，mRNA转录本丰度将通过qPCR、dPCR或多重PCR确定。可以通过本领域众所周知的方法，常规地将核苷酸引物序列设计为AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)的生物标志物转录本或其变体的任何序列区域。因此，本领域技术人员将理解，可以针对选自AM、AM₂、CLR或RAMP3的生物标志物的转录本或cDNA的不同区域设计有效的引物，并且所选择的特定引物的效力将根据所选择的区域、用于测量转录本丰度的平台、生物样品和所使用的杂交条件等而变化。因此，应当理解，只要它们允许相关cDNA的特异性扩增，原则上可以根据本发明使用靶向转录本的任何区域的引物。然而，本领域技术人员将认识到，在设计合适的引物序列以检测生物标志物表达时，要求引物序列能够选择性地且特异性地结合对应于AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)的生物标志物或其片段或变体的cDNA序列。如上所述，合适的结合配偶体优选是适于特异性结合生物标志物的cDNA转录本的核酸引物。根据所涉及的样品，优选地，将提供特异性靶向AM、AM₂、CLR或RAMP3的引物。

本领域已知的许多不同技术都适用于检测靶序列的结合以及适用于高通量筛选和分析蛋白质相互作用。根据本发明，合适的技术包括(独立地或以组合的方式)但不限于此：免疫共沉淀、双分子荧光互补(BiFC)、基于双表达重组酶(DERB)的单载体系统、亲和电泳、下拉式沉淀分析(pull-down assay)、标记转移、酵母双杂交筛选、噬菌体展示、体内交联、串联亲和纯化(TAP)、ChIP分析、化学交联然后进行高质量MALDI质谱分析、链球蛋白相互作用实验(SPINE)、定量免疫沉淀联合敲低(quantitative immunoprecipitationcombined with knock-down，QUICK)、邻近连接分析(proximity ligation assay，PLA)、生物层干涉法、双偏振干涉法(DPI)、静态光散射(SLS)、动态光散射(DLS)、表面等离子体共振(SPR)、荧光关联光谱、荧光共振能量转移(FRET)、等温滴定量热(ITC)、微型热泳(MST)、染色质免疫沉淀分析、电泳迁移率改变分析、下拉式沉淀分析、微孔板捕获和检测分析、报告子分析、RNase保护分析、FISH/ISH共定位、微阵列、微球阵列或基于硅纳米线(SiNW)的检测。在要定量生物标志物蛋白质水平的情况下，优选地，将使用附着有荧光报告子的抗体来分析结合配偶体与生物标志物蛋白质之间的相互作用。

在本发明的某些实施方案中，可以通过直接评估生物标志物与其结合配偶体的结合来检测特定生物标志物的表达水平。根据本发明的该实施方案的这种方法的合适实例可利用诸如电阻抗谱(EIS)之类的技术来直接评估结合配偶体(例如抗体)与靶生物标志物(例如生物标志物蛋白质)的结合。

在本发明的某些实施方案中，结合配偶体可以是抗体、抗体-缀合物或抗体片段，并且靶分子的检测利用免疫学方法。在方法或装置的某些实施方案中，免疫学方法可以是酶联免疫吸附测定(ELISA)或利用侧向流动装置。

本发明的方法还可以包括对指示受试者生物样品中存在的生物标志物表达的靶分子的量进行定量。本发明的合适的方法(其中已经定量了存在的靶分子的量，并且已知了患者样品的体积)还可以包括确定患者样品中存在的靶分子的浓度，该浓度可以用作定性评估受试者病况的基础，继而可以用来为受试者推荐适当的治疗过程，例如，用一种或多种本发明化合物进行治疗。

报告子部分

在本发明的某些实施方案中，可以确定生物样品中蛋白质的表达水平。在某些情况下，可以直接确定表达，例如用GFP或通过目标蛋白质(POI)的酶促作用来产生可检测的光信号。然而，在某些情况下，可以选择确定物理表达(physical expression)，例如通过抗体探测，并依赖单独的测试来验证物理表达是否伴随所需的功能。

在本发明的某些实施方案中，通过高通量筛选方法，例如依赖光信号的检测，例如使用报告子部分，将可以在生物样品中检测特定生物标志物的表达水平。为此目的，可能需要特异性的结合配偶体掺入标签或用可去除的标签标记，其中该标签允许检测表达。这种标签可以是例如荧光报告分子。这种标签可以为生物标志物表达的可视化提供合适的标志物，因为可以通过在体外或在阵列上进行荧光测量来简单直接地测定其表达。或者，它可以是可用于产生光信号的酶。用于检测表达的标签也可以是抗原肽标签。类似地，报告子部分可以选自由以下组成的组：荧光团；生色底物；和生色酶。其他种类的标记物可用于标记核酸结合配偶体，包括有机染料分子、放射性标记物和自旋标记物(其可能是小分子)。

方便地，可以通过测量互补核苷酸探针与目标生物标志物在高严格条件或非常严格条件下的特异性杂交来量化一种生物标志物或几种生物标志物的水平。

方便地，可以通过检测荧光团、银或化学发光标记的探针来检测和定量探针-生物标志物杂交，以确定样品中生物标志物核酸序列的相对丰度。或者，可以通过RNA测序或纳米孔测序技术直接确定生物标志物mRNA转录本丰度的水平。

本发明的方法可以利用选自由以下组成的组的分子：生物标志物蛋白；和编码生物标志物蛋白的核酸。

核苷酸和杂交条件

贯穿全文，本文所用的术语“多核苷酸”是指单链或双链形式或正义或反义的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，并且涵盖以类似于天然存在的核苷酸的方式与核酸杂交的天然存在的核苷酸的类似物。

本领域技术人员将以下视为常规：针对对应于AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)的生物标志物转录本或cDNA序列或其片段或变体的任何序列区域设计核苷酸探针序列。使用核苷酸引物的情况也是如此，其中通过基于PCR的技术确定表达水平的检测。

当然，本领域技术人员会认识到，在设计合适的探针序列以检测生物标志物表达时，要求探针序列能够选择性地且特异性地结合对应于AM(NM_001124.2)、AM₂(NM_001253845.1)、CLR(CLR变体1：NM_005795.5，CLR变体2：NM_214095.1)或RAMP3(NM_005856.2)的生物标志物或其片段或变体的转录本或cDNA序列。因此，探针序列将可以与该核苷酸序列杂交，优选在严格条件下，更优选在非常严格的条件下。术语“严格条件”可以理解为描述用于杂交和洗涤的一组条件，并且各种严格杂交条件对于本领域技术人员来说是熟悉的。当两个互补核酸分子经历一定量的彼此氢键结合(称为Watson-Crick碱基配对)时，就会发生核酸分子杂交。杂交的严格性可根据核酸周围的环境(即化学/物理/生物学)条件、温度、杂交方法的性质以及所用核酸分子的组成和长度而变化。Sambrook等人(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY)；和Tijssen(1993,Laboratory Techniques in Biochemistryand Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Acid Probes，第I部分，第2章，Elsevier,NY)等人讨论了关于达到特定严格度所需的杂交条件的计算。Tm是给定的核酸分子链的50％与其互补链杂交的温度。

在本文对杂交条件的任何提及中，以下是示例性的而非限制性的：

非常高的严格性(允许具有至少90％同一性的序列杂交)

杂交：5x SSC，在65℃下，16小时

洗涤两次：2x SSC，在室温(RT)下，15分钟，每次

洗涤两次：0.5x SSC，在65℃下，20分钟，每次

高严格性(允许具有至少80％同一性的序列杂交)

杂交：5x-6x SSC，在65℃-70℃下，16-20小时

洗涤两次：2x SSC，在RT下，5-20分钟，每次

洗涤两次：1x SSC，在55℃-70℃下，30分钟，每次

低严格性(允许具有至少50％同一性的序列杂交)

杂交：6x SSC，RT至55℃，16-20小时

洗涤至少两次：2x-3x SSC，RT至55℃，20-30分钟，每次

在另一方面，本发明涉及一种治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的AM₂抑制剂，例如本发明的化合物，其中所述受试者具有与AM和/或CLR和/或RAMP3的表达相关的癌症。不希望受到理论的束缚，有可能肿瘤的AM表达可能与健康组织中的AM₂受体相互作用，导致例如癌症的转移和/或血管生成和进展。因此，AM和/或CLR和/或RAMP3的表达可以在肿瘤中或在健康组织中，例如在肿瘤周围的健康组织中。

任选地，该方法可以包括确定所述受试者的生物样品中AM和/或CLR和/或RAMP3的水平，并且当确定AM和/或CLR和/或RAMP3的水平在该生物样品中表达，或相对于一个或多个参考值表达水平升高时，向所述受试者施用本发明的化合物。

在另一方面，本发明涉及一种鉴定患者对AM₂抑制剂(例如本发明的化合物)具有反应性或敏感性的可能性增加的方法，包括确定受试者的生物样品中AM、CLR和RAMP3中的一种或多种的水平；

其中与一个或多个参考值相比AM、CLR和/或RAMP3的水平增加表明受试者对AM₂抑制剂的反应性或敏感性的可能性增加。

组合疗法

本发明的化合物可以单独使用以提供治疗效果。本发明的化合物还可以与一种或多种另外的抗癌剂和/或放射疗法组合使用。

这种化学疗法可包括以下类型的抗癌剂中的一种或多种：

(i)抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，例如烷化剂(例如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥(nitrogen mustard)、尿嘧啶氮芥、苯达莫司汀(bendamustin)、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(melphalan)、氮芥(chlormethine)、白消安(busulphan)、替莫唑胺(temozolamide)、亚硝基脲、异环磷酰胺(ifosamide)、美法仑、哌泊溴烷(pipobroman)、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基硫代磷胺、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、链脲佐菌素(stroptozocin)和达卡巴嗪(dacarbazine))；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸剂如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟(tegafur)、雷替曲塞(raltitrexed)、甲氨蝶呤(methotrexate)、培美曲塞(pemetrexed)、阿糖胞苷、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、氟达拉滨磷酸盐、喷司他汀(pentostatine)和吉西他滨和羟基脲)；抗生素(例如蒽环类抗生素如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素(daunomycin)、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨和紫杉烷类如紫杉醇(taxol)、泰索帝和Polo激酶抑制剂)；蛋白酶体抑制剂，例如卡非佐米(carfilzomib)和硼替佐米(bortezomib)；干扰素治疗；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康、米托蒽醌(mitoxantrone)和喜树碱)；博来霉素(bleomcin)、放线菌素D、道诺霉素(daunorubicin)、多柔比星、表柔比星、伊达比星、阿糖胞苷、紫杉醇(paclitaxel)(Taxol^TM)、nab紫杉醇(nab paclitaxel)(白蛋白结合型紫杉醇)、多西他赛、光辉霉素、脱氧柯福霉素(deoxyco-formycin)、丝裂霉素-C、L-门冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-α)、依托泊苷、替尼泊苷、DNA去甲基化剂(例如阿扎胞苷或地西他滨)；和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂(例如伏立诺他(vorinostat)、MS-275、帕诺比司他(panobinostat)、罗米地辛(romidepsin)、丙戊酸、mocetinostat(MGCD0103)和pracinostat SB939)；

(ii)细胞抑制剂如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和碘氧基芬)、抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂如非那雄胺；和navelbene、CPT-11、阿那曲唑(anastrazole)、letrazole、卡培他滨、reloxafme、环磷酰胺、异环磷酰胺和屈洛昔芬(droloxafine)；

(iii)抗侵袭剂，例如达沙替尼和伯舒替尼(SKI-606)，和金属蛋白酶抑制剂、尿激酶纤溶酶原激活物受体功能抑制剂或肝素酶抗体；

(iv)生长因子功能抑制剂：例如此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体，例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[Herceptin^TM]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗、酪氨酸激酶抑制剂例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼、埃洛替尼、6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)、阿法替尼、凡德他尼(vandetanib)、奥西替尼(osimertinib)和罗昔替尼(rociletinib))erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼)和共刺激分子(如CTLA-4、4-1BB和PD-1)的抗体或细胞因子(IL-10、TGF-β)的抗体；肝细胞生长因子家族的抑制剂；胰岛素生长因子家族的抑制剂；细胞凋亡蛋白调节剂的调节剂(例如Bcl-2抑制剂)；血小板衍生生长因子家族的抑制剂，如伊马替尼和/或尼罗替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂如法尼基转移酶抑制剂、索拉非尼、替比法尼和洛那法尼)、通过MEK和/或AKT激酶细胞信号传导的抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、Plt3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体、激酶抑制剂例如达洛妥珠单抗(dalotuzumab)；极光激酶抑制剂和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂如CDK2和/或CDK4抑制剂；CCR2、CCR4或CCR6拮抗剂；RAF激酶抑制剂如WO2006043090、WO2009077766、WO2011092469或WO2015075483中公开的那些；和Hedgehog抑制剂例如维莫德吉(vismodegib)。

(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子作用的那些，[例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(Avastin^TM)]；沙利度胺(thalidomide)；来那度胺；和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如凡德他尼、瓦他拉尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼和卡博替尼(cabozantinib)；

(vi)基因治疗方法，包括例如替代异常基因的方法，例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2

(vii)免疫治疗方法，包括例如抗体治疗，例如阿仑单抗、利妥昔单抗、替伊莫单抗

和奥法木单抗；干扰素，例如α干扰素；白介素，例如IL-2(醛清蛋白)；白介素抑制剂，例如IRAK4抑制剂；癌症疫苗，包括预防和治疗疫苗，例如HPV疫苗，例如Gardasil、Cervarix、Oncophage和Sipuleucel-T(Provenge)；gp100；基于树突细胞的疫苗(例如Ad.p53 DC)；toll样受体调节剂，例如TLR-7或TLR-9激动剂；PD-1、PD-L1、PD-L2和CTL4-A调节剂(例如纳武单抗(Nivolumab))、抗体和疫苗；其他IDO抑制剂(例如吲哚莫德)；抗PD-1单克隆抗体(例如MK-3475和纳武单抗)；抗PDL1单克隆抗体(例如MEDI-4736和RG-7446)；抗PDL2单克隆抗体；和抗CTLA-4抗体(例如伊匹单抗(ipilumumab))、CAR-T细胞疗法；和

(viii)细胞毒剂，例如氟达雷滨(fludara)、克拉屈滨、喷司他汀(Nipent^TM)；

(ix)靶向疗法，例如PI3K抑制剂，例如艾代拉里斯(idelalisib)和哌立福辛(perifosine)；SMAC(半胱天冬酶的第二个线粒体衍生激活剂)模拟物，也称为凋亡蛋白抑制剂(IAP)拮抗剂(IAP拮抗剂)。这些药剂起抑制IAP例如XIAP、cIAP1和cIAP2的作用，从而重新建立细胞凋亡途径。特定SMAC模拟物包括Birinapant(TL32711，TetraLogicPharmaceuticals)、LCL161(Novartis)、AEG40730(Aegera Therapeutics)、SM-164(密歇根大学)、LBW242(Novartis)、ML101(Sanford-Burnham Medical Research Institute)、AT-406(Ascenta Therapeutics/密歇根大学)、GDC-0917(Genentech)、AEG35156(AegeraTherapeutic)和HGS1029(人类基因组科学)；和靶向泛素蛋白酶体系统(UPS)的药剂，例如硼替佐米、卡非佐米、马利佐米(marizomib)(NPI-0052)和MLN9708；CXCR4拮抗剂，例如普乐沙福(plerixafor)或BL-8040；

(x)PARP抑制剂，例如尼拉帕利(niraparib)(MK-4827)、他唑帕尼(talazoparib)(BMN-673)、维利帕利(veliparib)(ABT-888)；奥拉帕尼(olaparib)、CEP 9722和BGB-290

(xi)嵌合抗原受体、抗癌疫苗和精氨酸酶抑制剂；

(xii)降解透明质酸的药剂，例如透明质酸酶PEGPH20

另外的抗癌剂可以是单一药剂或本文列出的另外药剂中的一种或多种。

可以与本发明的化合物一起使用的特定抗癌剂包括例如埃洛替尼、卡博替尼、贝伐单抗、达洛妥珠单抗、奥拉帕尼、PEGPH20、维莫德吉、紫杉醇(包括nab紫杉醇)、吉西他滨、奥沙利铂、伊立替康、甲酰四氢叶酸和5-氟尿嘧啶。在一些实施方案中，另外的抗癌剂选自卡培他滨、吉西他滨和5-氟尿嘧啶(5FU)。

这种联合治疗可以通过同时、依次或分开施用治疗物的各个组分来实现。这种组合产品使用上文所述治疗有效量的剂量范围内的本发明化合物和其批准剂量范围内的其它药物活性剂。

本文中，在使用术语“组合”时，应理解这是指同时、分开或依次施用。在本发明的一个方面，“组合”是指同时施用。在本发明的另一个方面，“组合”是指分开施用。在本发明的另一方面，“组合”是指依次施用。当施用是依次或分开时，施用第二组分的延迟不应该失去该组合物的有益效果。

在使用组合治疗的一些实施方案中，当组合时，本发明化合物的量和其他(多种)药物活性剂的量在治疗上有效治疗患者的靶标病症。在这种情况下，如果组合量(当组合时)足以减轻或完全缓解病症的症状或其他不利影响；治愈病症；逆转、完全停止或减缓病症的进展；或降低病症恶化的风险，则其为“治疗有效量”。通常，这种量可以由本领域技术人员确定，通过例如从本说明书中描述的本发明化合物的剂量范围和其他(多种)药物活性化合物的批准或以其他方式公开的(多个)剂量范围开始。

根据本发明的另一方面，提供了如上定义的本发明化合物和如上定义的另外的抗癌剂，用于联合治疗癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物产品，其包含如上文定义的本发明化合物和如上文所定义的另外的抗癌剂，用于联合治疗癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，同时、依次或分别施用上文定义的另外的抗癌剂。

根据本发明的另一方面，提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其与上文定义的另外的抗癌剂同时、依次或分别使用，用于治疗癌症。

本发明的化合物也可以与放射疗法组合使用。合适的放射疗法包括例如X射线疗法、质子束疗法或电子束疗法。放射疗法也可以包括使用放射性核素剂，例如¹³¹I、³²P、⁹⁰Y、⁸⁹Sr、¹⁵³Sm或²²³Ra。这种放射性核素疗法是众所周知的并且可商购。

根据本发明的另一方面，提供了如上定义的本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于与放射疗法联合治疗癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，同时、依次或分别施用放射疗法。

生物测定

可以使用实施例中本文所述的一种或多种测定法评估化合物的生物学作用。

合成

在以下描述的合成方法的描述中以及在用于制备起始材料的参考合成方法中，应理解，所有提出的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和后处理程序，可以由本领域技术人员选择。

有机合成领域的技术人员应理解，分子的各个部分上存在的官能度必须与所使用的试剂和反应条件相容。

必要的起始原料可以通过有机化学的标准方法获得。结合以下代表性的方法变体并在所附的实施例中描述了这些原料的制备。或者，必要的起始原料可以通过与所示的那些方法类似的方法获得，这在普通有机化学技术人员的范围内。

应当理解，在以下定义的方法中合成本发明化合物的过程中，或在某些起始原料的合成过程中，可能希望保护某些取代基团以防止其不希望的反应。熟练的化学家将理解何时需要这种保护，以及如何将这种保护基团放置到位，然后再除去。

关于保护基团的实例，参见关于该主题的许多一般教科书之一，例如，TheodoraGreen的‘Protective Groups in Organic Synthesis‘(出版商：John Wiley&Sons)。可以通过文献中描述的或熟练的化学家已知的适合于除去所讨论的保护基团的任何方便的方法除去保护基团，选择这样的方法以实现保护基团的去除，而最低程度地影响分子中其他地方的基团。

因此，如果反应物包括例如氨基、羧基或羟基之类的基团，可能需要在本文提及的某些反应中保护该基团。

举例来说，用于氨基或烷基氨基基团的合适的保护基团是，例如，酰基基团，例如烷酰基基团，例如乙酰基或三氟乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基基团，例如苄氧基羰基，或芳酰基基团，例如苯甲酰基。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以通过例如用合适的碱，例如碱金属氢氧化物，例如锂或氢氧化钠进行水解来除去酰基基团例如烷酰基或烷氧基羰基基团或芳酰基基团。或者，可以例如通过用合适的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来除去酰基基团如叔丁氧基羰基基团，并且可以例如通过经催化剂例如钯碳进行氢化，或通过用路易斯酸例如BF₃.OEt₂处理来除去芳基甲氧基羰基基团例如苄氧基羰基基团。伯氨基基团的合适的替代性保护基团是例如邻苯二甲酰基基团，其可以通过用烷基胺例如二甲基氨基丙胺或用肼处理来除去。

用于羟基基团的合适的保护基团是，例如，酰基基团，例如烷酰基基团，例如乙酰基，芳酰基基团，例如苯甲酰基，或芳基甲基基团，例如苄基。上述保护基团的脱保护条件将必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用合适的碱例如碱金属氢氧化物，例如锂或氢氧化钠，或氨进行水解，来除去酰基基团，例如烷酰基或芳酰基基团。或者，可以例如通过经催化剂如钯碳进行氢化来除去芳基甲基基团如苄基基团。

羧基基团的合适的保护基团是，例如，酯化基团，例如甲基或乙基基团，其可以例如通过用碱例如氢氧化钠进行水解来除去，或者例如是叔丁基基团，其可以例如通过用酸例如有机酸如三氟乙酸处理来除去，或者例如是苄基基团，其可以例如通过经催化剂如钯碳进行氢化来除去。

树脂也可以用作保护基团。

通用合成路线

本发明还提供了制备如上定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括使式(XII)化合物或其盐与式NHR²R³化合物或其盐反应：

其中R¹、R^A、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、L¹、X₁、X₂、X₃和n具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团；其中R²和R³具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团；

然后任选地进行以下一个或多个步骤：

·将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物

·去除任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，在式(XII)化合物中，X₂和X₃是CH；并且X₁是CR^7，其中R⁷具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团。

该反应适合作为式(XII)的醛或酮的还原胺化进行。合适地，该反应在合适的还原剂，例如三乙酰氧基硼氢化钠或硼氢化钠的存在下进行。该反应在合适的溶剂，例如二氯甲烷或甲醇的存在下进行。当以盐例如盐酸盐的形式使用式NHR²R³的化合物时，该反应适当地在碱例如叔有机胺例如二异丙基乙胺的存在下进行。任选地，该反应在合适的脱水剂，例如硫酸钠或硫酸镁的存在下进行。

式(XII)化合物可以如实施例中所述制备。该式的化合物可商购获得或可以使用众所周知的方法制备。

式(I)化合物(其中X是CH₂并且R²是H)也可以通过还原式(XIII)的亚胺或其盐来制备：

其中R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、X₁、X₂、X₃、L¹和n具有本文所定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团；

然后任选地进行以下一个或多个步骤：

·将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物

·去除任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，在式(XIII)化合物中，X₂和X₃是CH；并且X₁是CR⁷，其中R⁷具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团。

在合适的还原剂，例如硼氢化钠的存在下进行还原。该反应适当地在溶剂例如甲醇的存在下进行。

式(XIII)化合物可以使用类似于实施例中所述的方法制备。例如，通过使式(XIII)的醛与式NR³H₂的伯胺反应。

式(I)化合物也可以通过将式(XIV)化合物或其盐与式(XV)化合物或其盐偶联来制备：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、L¹、X和n具有本文所定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团(例如R²和/或R³可以是氨基保护基团)，

其中X₁、X₂和X₃具有本文所定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团；然后任选地进行以下一个或多个步骤：

·将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物

·去除任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，在式(XV)化合物中，X₂和X₃是CH；并且X₁是CR⁷，其中R⁷具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团。

使用众所周知的用于使酸与胺偶联形成酰胺的方法进行该反应。代表性方法在本文的实施例部分列出。式(XIV)和(XV)化合物可以如实施例中所述制备。

可以改变以上反应以得到中间体，随后将其转化为式(I)化合物。例如，可以进行将式(XIVa)中间体或其盐与式(XV)化合物偶联的反应：

其中R‘是卤素，例如溴。然后可通过例如将卤素转化为氰基基团，然后将氰基基团还原为胺，从而将所得的中间体转化为式(I)化合物。

式(I)化合物还可以通过使式(XVI)化合物或其盐与式：R¹L¹C(O)R“化合物反应来制备：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、X、X₁、X₂、X₃和n具有本文所定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团(例如R²和/或R³可以是氨基保护基团)；其中R¹和L¹具有本文所定义的任何含义，并且R“是OH或卤素(例如氯)，除了必要时保护任何官能团。

然后任选地进行以下一个或多个步骤：

·将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物

·去除任何保护基团

·形成药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，在式(XVI))化合物中，X₂和X₃是CH；并且X₁是CR⁷，其中R⁷具有本文定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团。

该反应适当地在溶剂，例如极性质子溶剂如N,N-二甲基甲酰胺的存在下进行。该反应适当地在碱，例如有机胺碱如N,N-二异丙基乙胺的存在下进行。式(XI)化合物可使用与实施例中描述的条件类似的条件制备。式R¹L¹C(O)R“的化合物可商购获得或可以使用众所周知的方法制备。

可以通过将式(XVII)的化合物或其盐脱保护来制备式(I)的化合物(其中R²为H)：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、X、X₁、X₂、X₃、L¹和n具有本文所定义的任何含义，除了必要时保护任何官能团，并且Pg是氨基保护基团。

合适的氨基保护基是众所周知的，包括例如本文公开的那些，例如叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，优选BOC。氨基保护基团可以通过常规方法除去，例如用合适的酸或碱处理。

本文所述的某些中间体是新颖的，并且构成本发明的另一方面。因此，还提供了式(XII)、(XIII)、(XIV)、(XIVa)(XV)、(XVI)或(XVII)的化合物或其盐。

在一个实施方案中，提供了式(XIV)的化合物或其盐，其中X是-(CR^AR^B)_p1-，其中p1为整数1、2或3，优选是1。适当地，在该实施方案中，X是-CH₂-。适当地，在该实施方案中，L¹是键。

适当地，式(XII)、(XIII)、(XIV)、(XIVa)、(XV)(XVI)或(XVII)的化合物的盐是其药学上可接受的盐，但是，应当理解，不是药学上可接受的盐的其他盐也可以用于制造本发明的化合物。

应当理解，本发明化合物中的各种环取代基中的某些可以在上述方法之前或紧跟上述方法之后通过标准的芳族取代反应引入或通过常规的官能团修饰产生，因此包括在本发明的方法方面中。这种反应和修饰包括，例如，通过芳族取代反应引入取代基、取代基的还原、取代基的烷基化和取代基的氧化。用于这种步骤的试剂和反应条件是化学领域众所周知的。芳族取代反应的具体实例包括使用浓硝酸引入硝基基团，在Friedel-Crafts条件下，使用例如酰基卤和路易斯酸(例如三氯化铝)引入酰基基团，在Friedel-Crafts条件下，使用卤代烷和路易斯酸(例如三氯化铝)引入烷基基团；以及引入卤代基团。修饰的具体实例包括通过例如用镍催化剂进行催化氢化或在盐酸的存在下在加热下用铁处理从而将硝基基团还原成氨基基团；将烷硫基氧化为烷基亚磺酰基或烷基磺酰基。

当需要式(I)的化合物的药学上可接受的盐，例如酸或碱加成盐时，它可以通过例如使用上述常规方法使式(I)的化合物与合适的酸或碱反应来获得。

为了在制备过程中促进式(I)化合物的分离，该化合物可以以盐的形式制备，该盐不是药学上可接受的盐。然后可以通过常规技术将所得盐进行修饰以得到化合物的药学上可接受的盐。这样的盐修饰技术是众所周知的，并且包括例如离子交换技术或在如上所述的药学上可接受的抗衡离子存在下从溶液中再沉淀化合物，例如通过在合适的药学上可接受的酸的存在下再沉淀，得到所需的式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐。

实施例

缩略语：

BINAP——2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘基

Bn——苄基

Boc——叔丁氧羰基

CPME——环戊基甲基醚

CSH——带电表面杂化(charged surface hybrid)

DCM——二氯甲烷

DIPA——二异丙胺

DIPEA——N,N-二异丙基乙胺

DMAc——二甲基乙酰胺

DMF——N,N-二甲基甲酰胺

DMP——Dess-Martin高碘烷(1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并噁唑-3-(1H)-酮)

DSC——差示扫描量热法

EDCI.HCl——1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

HATU——1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

HOAT——1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HPLC——高效液相色谱

IPA——异丙醇

LCMS——液相色谱-质谱

LDA——二异丙基氨基锂

MDAP——质量导向的自动纯化

MS——质谱

NBS——N-溴代琥珀酰亚胺

NMM——N-甲基吗啉

NMR——核磁共振

PDA——光电二极管阵列

pTSA——对甲苯磺酸

QDA——Quadrupole Dalton

RT——室温

rt——保留时间

SCX2——强阳离子交换2(Biotage的SPE)

SEM——三甲基甲硅烷基乙氧基甲基

SPE——固相萃取

STMAd——琥珀酸乙基硫化硅(Phosphonics的SPE)

TBAB——四丁基溴化铵

TEA——三乙胺

TFA——三氟乙酸

TFAA——三氟乙酸酐

THF——四氢呋喃

UPLC——超高效液相色谱

分析方法

以下方法适用于实施例1–66、70–74、79–91、103和104。

所有UPLC-MS分析均使用Waters Acquity UPLC-MS(四级泵流量0.8ml/min，Acquity自动进样器，PDA和QDA)进行。

方法：

所有碱性方法都使用XBridge C18柱：XB C18 2.5μm 2.1 x 50mm运行

短时间碱性方法：运行时间：1.40min；溶剂B)乙腈C)10mM NH₄HCO₃，pH 10

梯度：在1.2min内2-98％B与C，保持在98％B 2％C至1.40min，0.8ml/min，40℃；

长时间碱性方法：运行时间：4.60min；溶剂B)乙腈C)10mM NH₄HCO₃，pH10

梯度：在4.0min内2-98％B与C，保持在98％B 2％C至4.60min，0.8ml/min，40℃

所有CSH方法都是使用CSH C18柱：CSH C18 1.7μm 2.1 x 50mm进行的酸性方法。

短时间CSH：运行时间：1.40min；溶剂A)水B)乙腈D)2％甲酸：梯度以5％D运行。梯度：在1.2min内2-95％B与A和5％D，保持在95％B 5％D至1.40min，0.8ml/min，40℃。

短时间CSH 2-50％：运行时间：2.0min；溶剂A)水B)乙腈D)2％甲酸：梯度以5％D运行。梯度：在1.0min内2-50％B与A和5％D，至在1.8min 95％B与5％D，保持在95％B 5％D至2.0min，0.8ml/min，40℃。

短时间CSH 0-50％：运行时间：1.40min；溶剂：A)0.1％甲酸，B)乙腈；梯度：在0.80min内0-50％B，50-95％B至1.20min，保持在95％B至1.40min。

长时间CSH：运行时间：4.60mins；溶剂A)水B)乙腈D)2％甲酸：梯度以5％D运行。梯度：2-95％B与A和5％D 4.0min，保持在95％B 5％D至4.60min，0.8ml/min，40℃。

使用Waters Alliance 2695，流速1ml/min，(PDA，ZQ微质量)进行HPLC-MS分析。

方法：

长时间碱性方法：运行时间：3.1min溶剂：A)水10mM碳酸氢铵pH 10，B)MeCN；梯度：0-95％B与A至2.0min，保持在95％B，5％A至3.10min XBridge IS C18 2.5μm 2.1 x2.0mm。

长时间碱性方法，11min，40％：运行时间：11min；溶剂：60％水pH 10缓冲液10mMNH₄HCO₃，40％乙腈，Isocratic，XBridge C18 Column：XB C18 5μm 3 x 150mm。

所有NMR光谱均使用运行Delta软件的Jeol EXC300 MHz或EXC400 MHz NMR光谱仪获得。

以上情况的例外——使用以下方法分析实施例38(23L)、41(23O)、42(23P)、43(23Q)：

HPLC：Waters Alliance 2690，流速1ml/min，(Water 2487，UV可见探测器)；柱：Thermo HyPurity C8，250 x 4.6mm，梯度–5至95％乙腈/水0.1％TFA，历时20min，保持在95％，25min运行，RT。

MS：Agilent 6530Q-ToF。

NMR：Bruker Advance III HD，在400MHz下预运行，或Bruker Advance dpx，在400MHz下运行，运行Topspin软件。

以下方法适用于实施例67-69、75-78和92-101。

使用SHIMADZU LCMS-2020；HPLC-MS(LC-20AB流速0.8ml/min，自动进样器，PDA)进行HPLC-MS分析。

所有酸性方法均使用Kinetex@5um EVO C18 30*2.1mm和Chromolith@Flash RP-18E 25-2MM运行。

短时间酸性方法：运行时间：1.50min；溶剂A)0.0375％TFA的水溶液(v/v)B)0.01875％TFA的乙腈溶液(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5-95％B与A 0.8min，保持在95％B至1.20min；在1.21min 5％B并保持在5％B至1.5min，1.5ml/min，50℃。

长时间酸性方法：运行时间：4.00min；溶剂A)0.0375％TFA的水溶液(v/v)B)0.01875％TFA的乙腈溶液(v/v)。梯度以5％B运行。梯度：5-95％B与A 3.00min，保持在95％B至3.50min；在3.51min 5％B并保持在5％B至4.00min，0.8ml/min，50℃。

所有NMR光谱均使用运行ACD/Spectrus Processor的Bruker Avance 400MHZ光谱仪获得。

中间体A、B和C的合成

方案1

1-溴-2-(二甲氧基甲基)苯1.2

将2-溴苯甲醛1.1(3.15g，17.0mmol)溶解于甲醇(20ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(310mg，1.7mmol)。将该溶液温热至50℃，然后在冷凝器中缓慢加入原甲酸三甲酯(10ml)。然后将反应加热至回流4小时。将混合物在冰水上冷却，然后加入三乙胺(3ml)。除去挥发物，然后将混合物用乙醚和水稀释。将水层用乙醚萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(250ml二氧化硅，10-15％乙醚的己烷溶液)，得到化合物1.2(3.45g，88％)，为无色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.39(s,6H),5.56(s,1H),7.20(t,1H),7.33(t,1H),7.57(m,2H)。

2-(二甲氧基甲基)苯甲醛中间体A

在氩气气氛下将化合物1.2(3.60g，15.58mmol)溶解于无水四氢呋喃(35ml)中，然后在干冰/丙酮上冷却。向其中滴加正丁基锂的溶液(2.5M的己烷溶液，9.35ml，23.37mmol)，使内部温度保持在-60℃以下(添加10分钟)。将反应在干冰/丙酮上搅拌70分钟。向其中一次性加入N,N-二甲基甲酰胺(2.43ml，31.16mmol)。将混合物在干冰/丙酮上搅拌60分钟，然后在1.5小时内温热至室温。加入水，然后将混合物用二乙醚萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物中间体A(2.92g，定量)，为稻草色油状物；¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.39(s,6H),5.87(s,1H),7.49(t,1H),7.59(t,1H),7.66(d,1H),7.91(d,1H),10.43(s,1H)–含有痕量THF和少量杂质。直接使用。

2-((2-(二甲氧基甲基)亚苄基)氨基)乙酸甲酯1.3

在氩气气氛下，将化合物中间体A(3.60g，～15.58mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(6.1ml，35mmol)，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(3.92g，31.2mmol)和硫酸镁(过量)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物过滤，然后将滤液用饱和碳酸氢钠洗涤。将水层用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。得到化合物1.3(4.78g，定量)，为淡黄色胶状物。直接使用。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.70(220[M-OMe+H]⁺)。

2-((2-(二甲氧基甲基)苄基)氨基)乙酸甲酯中间体B

在氩气气氛下将化合物1.3(4.78g，～15.58mmol)溶解于甲醇(30ml)中，然后在冰/水上冷却。分批加入硼氢化钠(297mg，7.8mmol)(注意剧烈放出气体)。将混合物在冰/水上搅拌10分钟，然后温热至室温，并通过UPLC-MS监测反应。18小时后，加入额外的硼氢化钠(150mg，3.94mmol)，并在室温下再静置20分钟后反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物中间体B(4.04g，定量)，为淡稻草色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.34(s,6H),3.44(s,2H),3.73(s,3H),3.89(s,2H),5.62(s,1H),7.33(m,3H),7.57(dd,1H).–含有痕量烷基杂质。UPLC-MS(短时间碱性方法):rt 0.68(222[M-OMe+H]⁺)。直接使用。

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯(Methyl2-(N-(2-(dimethoxymethyl)benzyl)pivalamido)acetate)中间体C

在氩气气氛下，将化合物中间体B(4.04g，～15.58mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(5.45ml，31.2mmol)。逐滴加入三甲基乙酰氯(1.91ml，15.6mmol)—注意在加入0.4ml后，反应升温—因此将烧瓶在冰/水上冷却，并继续添加。将混合物在室温下搅拌4小时。此后通过UPLC-MS确定反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过柱色谱纯化(300ml二氧化硅，二氯甲烷–具有乙酸乙酯梯度0％–20％)，得到化合物中间体C(4.32g，82％)，为无色胶状物，其静置时会结晶。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.29(s,9H),3.32(s,6H),3.72(s,3H),3.93(br s,2H),4.97(br s,2H),5.33(s,1H),7.21(m,1H),7.31(m,2H),7.52(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法):rt 0.84(190片段)。

中间体D和E的合成

方案2

1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶2.2

将7-氮杂吲哚2.1(95g，804.2mmol)的二甲基甲酰胺(500ml)溶液冷却至0℃，然后分几批添加氢化钠(38.6g，964.9mmol)，保持内部温度低于10℃。将悬浮液在0-5℃下搅拌1小时。然后在5-10℃下逐滴加入2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基氯(171ml，964.9ml)。加完后，将黄色悬浮液在室温下搅拌18小时。通过缓慢加入水将混合物淬灭直至泡腾停止，然后用另外的水稀释至总计1.5L。该混合物用乙酸乙酯(2×1.5L)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x1 L)和盐水(2x1 L)洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发，得到化合物2.2，为琥珀色油状物(199g，99％收率)。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.08(s,1H),0.89(m,2H),3.52(m,2H),5.68(s,2H),6.50(dd,1H),7.08(dd,1H),7.34(d,1H),7.90(dd,1H),8.33(dd,1H)。UPLC(短时间碱性方法,1.30min):rt 0.96min,[M+H]⁺249,纯度96％。

3,3-二溴-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮2.3

使用冰/水浴将机械搅拌的三溴化吡啶鎓(646g，2.02mol)的1,4二噁烷(900ml)悬浮液冷却至10-15℃，并逐滴加入2.2(100g，403.2mmol)的1,4-二噁烷(500ml)溶液(注意：未观察到明显的放热现象，但将反应保持冷却以最小化聚合物副产物的形成)。在10-15℃下搅拌2小时后，将混合物在水(1.5L)和乙酸乙酯(1.5L)之间分配。收集乙酸乙酯层，并用水(2×1L)、饱和碳酸氢钠水溶液(1L)、硫代硫酸钠溶液(1M溶液，1L)和盐水(2×1L)洗涤。将乙酸乙酯层用硫酸镁干燥并蒸发，得到化合物2.3(144g，85％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.03(s,9H),0.97(dd,2H),3.70(dd,2H),5.32(s,2H),7.15(dd,1H),7.87(dd,1H),8.30(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt1.00(421,423,425[M+H]⁺),89％纯。

1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮中间体D

向机械搅拌的2.3(144g，341mmol)的四氢呋喃(2L)溶液中加入饱和氯化铵水溶液(0.5L)。将悬浮液在冰/盐/水浴中冷却至5-10℃，然后分批加入锌粉(223g，3.41mol)。加入一半的锌后，内部温度达到峰值24℃，加入剩余的锌后没有发现进一步明显的放热现象。在室温下搅拌2小时后，将混合物通过硅藻土垫过滤，以除去过量的Zn粉，用乙酸乙酯(1L)洗涤。将滤液用水(1.2L)稀释，使溴化锌盐沉淀。将该悬浮液通过另一硅藻土垫过滤。从滤液中分离出有机层，并用水(0.8L)和盐水(2×0.8L)洗涤，用硫酸镁干燥，并蒸发，得到深红色油状物。

将该物质与第二批物质(151g的2.3的)合并，并将合并的粗物质(201g)通过干闪色谱法纯化(0-30％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到化合物中间体D(110g，55％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.03(s,9H),0.98(dd,2H),3.59(s,2H),3.69(dd,2H),5.25(s,2H),6.97(dd,1H),7.50(dd,1H),8.22(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.85(265[M+H]⁺),88％纯。

(4-硝基-1,2-亚苯基)二甲醇2.7

将机械搅拌的硼烷-四氢呋喃配合物溶液(1M的THF溶液，1.23L，1.23mol)冷却至0℃。在约45分钟的时间内滴加4-硝基邻苯二甲酸(100g，472mmol)的四氢呋喃(1L)溶液，保持内部温度低于10℃。然后除去冷却浴，并将混合物在室温搅拌过夜。然后将搅拌的混合物再次冷却至0℃，并缓慢加入甲醇以破坏过量的硼烷(直到不再观察到冒泡)。将混合物浓缩至25-30％体积，然后通过添加水稀释至1L。通过添加2M氢氧化钠水溶液将混合物的pH调节至10，然后用乙酸乙酯(5×1L)萃取。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并蒸发，得到化合物2.7(85.5g，98％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ4.60(m,4H),5.44(q,2H),7.67(d,1H),8.09(dd,1H),8.23(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.51(182[M-H]^-),98％纯。

1,2-双(溴甲基)-4-硝基苯2.8

将二醇2.7(95.5g，521.6mmol)的二噁烷(2L)悬浮液冷却至0℃，并滴加三溴化磷(54ml，573.7mmol)。然后除去冷却，并使混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物小心地倒入搅拌的1.5L饱和碳酸氢钠溶液中，并用乙酸乙酯(3×1L)萃取。将有机萃取物用硫酸镁干燥并蒸发，得到化合物2.8(153.9g，96％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ4.66(s,2H),4.67(s,2H),7.56(d,1H),8.16(dd,1H),8.25(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.86(无m/z),98％纯。

5-硝基-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮2.4

向机械搅拌的中间体D(55g，208.3mmol)的二甲基甲酰胺(1.65L)溶液中加入2.8(70.8g，229.1mmol)。然后一次性加入碳酸铯(238g，729.1mmol)。将该悬浮液在室温下搅拌16小时(或直到反应完全)，然后通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(2L)洗涤滤饼。滤液用水(3×1L)和盐水(1L)洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发，得到深红色油状物(96g)。将其通过干闪色谱法纯化(用9：1庚烷/乙酸乙酯，然后用17：3庚烷/乙酸乙酯，8：2庚烷/乙酸乙酯，3：1庚烷/乙酸乙酯，7：3庚烷/乙酸乙酯，和13：7庚烷/乙酸乙酯洗脱)，得到黄色/橙色粉末(60.1g)，将其与二乙醚研磨，得到化合物2.4(45g，53％收率)。从剩余的55g中间体D中又获得了另外的54.5g的2.4，得到总计99.5g的2.4(58％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.01(s,9H),0.99(dd,2H),3.18(dd,2H),3.71(m,4H),5.30(s,2H),6.88(dd,2H),7.08(dd,1H),7.43(d,1H),8.09(m,2H),8.23(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.99(411[M+H]⁺),97％纯。

5-氨基-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮2.5

向机械搅拌的2.4(70g，170.3mmol)的四氢呋喃(1.1L)溶液中加入饱和氯化铵溶液(300ml)，然后加入锌粉(111g，1.70mol)，分三次加入。内部温度最初从22℃上升到33℃，然后在1小时内缓慢冷却回到环境温度。2.5小时后的LCMS分析表明产物和羟胺/亚硝基中间体的混合物。加入另外的35g锌粉(3eq)和100ml饱和氯化铵溶液。再过3.5小时后，完成还原。通过硅藻土垫过滤混合物，用乙酸乙酯(1L)洗涤滤饼。将滤液用水(3×1L)洗涤，经硫酸镁干燥，并蒸发，得到橙色固体，将其与二乙醚一起研磨，得到化合物2.5，为淡黄色粉末(48.8g)。通过快速色谱法将研磨液再纯化(1：1庚烷/乙酸乙酯洗脱)，并用二乙醚再次研磨，得到另外的3g的2.5，总共有51.9g的2.5(80％收率)。在处理完所有99.5g的2.4之后，总共制备了70.7g的2.5(77％收率)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz):δ-0.02(s,9H),0.98(m,2H),2.91(d,2H),3.56(dd,2H),3.69(m,2H),5.29(s,2H),6.59(m,2H),6.82(dd,1H),7.02(d,1H),7.09(dd,1H),8.18(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.92(382[M+H]⁺),95％纯。

5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

中间体E

将2.5(51.8g，135.9mmol)在新鲜制备的氯化氢的甲醇溶液[制备至约15％浓度(w/v)]中的溶液加热至回流6小时。一旦反应完成后，则停止加热，并将溶液冷却至室温过夜。将混合物真空浓缩成稠的橙色液体，然后用300ml水稀释，并用饱和碳酸钠溶液将pH调节至9。将含水混合物用二氯甲烷(3×500ml)和9∶1的二氯甲烷/甲醇(3×500ml)萃取。将合并的有机物用硫酸镁干燥并蒸发，得到橙色固体，将其与2：1的二氯甲烷/乙酸乙酯(约60ml)一起研磨，得到中间体E，为淡橙色粉末(21.5g，63％收率)。1H NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ2.84(dd,2H),3.18(dd,2H),4.94(s,NH₂),6.41(m,2H),6.81(dd,1H),6.86(d,1H),7.08(dd,1H),8.01(dd,1H),11.03(s,NH)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.56(252[M+H]⁺),97％纯。

中间体F的合成

方案3

4-甲基-5-硝基邻苯二甲酸3.2

将4-甲基邻苯二甲酸酐(5.05g，31.1mmol)悬浮在浓硫酸(98％，10.0ml)中，然后在80℃加热。将加热除去，然后在10分钟内向其中滴加发烟硝酸(90％，2.0ml)和浓硫酸(1.5ml)的预混合混合物，使温度不超过80℃。一旦添加完成，则将加热再次引入至80℃，并一次性加入浓硝酸(68％，8.2ml)，然后将混合物在100℃下搅拌2小时，然后冷却至室温。加入水，然后将固体过滤，并用水洗涤。将过滤的固体干燥，得到产物3.2和位置异构体(regioisomer)3.3的1：1混合物(5.46g，78％)，为白色粉末。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ2.34(s,3H),2.54(s,3H),7.62(d,1H 3.3),7.73(s,1H 3.2),7.91(d,1H 3.3),8.25(s,1H,3.2)～1:1比例。UPLC-MS(短时间酸性方法0-50％)rt 0.72(180[M-CO₂H]^-),rt 0.82(224,[M-H]^-)。

DSC分析—在220℃时放热，因此保持在120℃以下

4-甲基-5-硝基邻苯二甲酸二甲酯3.4

将化合物3.2和3.3的混合物(～1：1 6.23g，27.7mmol)溶解于甲醇(117ml)中，然后加入浓硫酸(98％，3.3ml)，并将混合物加热至回流8小时，然后冷却至室温8小时。反应不完全，因此在回流下再加热24小时。将混合物浓缩以除去甲醇，然后在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠之间分配。将水层用二氯甲烷萃取两次。将有机萃取物用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，将残余物从热甲醇中结晶，将晶体过滤并用少量甲醇洗涤，并干燥固体。通过从热甲醇中重结晶，从过滤液中回收第二批晶体，将两批晶体合并并干燥，得到纯产物3.4(1.98g，28％)，为无色结晶固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.66(s,3H),3.93(s,6H),7.61(s,1H),8.41(s,1H)。HPLC-MS(长时间碱性方法11min,40％)rt 4.00(254,[M+H]⁺),99％纯。

(4-甲基-5-硝基-1,2-亚苯基)二甲醇3.6

将化合物3.4(1.76mg，6.95mmol)溶解于无水四氢呋喃(41ml)中，并加入甲醇(0.56ml)，然后冷却至0℃(冰/水)。分批加入硼氢化锂(0.38g，17.4mmol)。混合物变成紫色，然后随着时间变成黄色。将混合物在室温下搅拌20小时。将混合物倒入20％柠檬酸水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到产物3.6(1.50g，定量)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.56(s,3H),4.68(d,4H),7.49(s,1H),8.03(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.55(196,[M-H]^-),99％纯。

1,2-双(溴甲基)-4-甲基-5-硝基苯3.7

将化合物3.6(1.66g，8.41mmol)悬浮在二噁烷(35ml)中，然后滴加三溴化磷(0.87ml，9.3mmol)，并将混合物在室温下搅拌3天。然后将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物3.7(2.69g，99％)，为黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.60(s,3H),4.61(d,4H),7.35(s,1H),8.01(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.90(无m/z),96％纯。

5-甲基-6-硝基-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮3.8

将化合物3.7(2.69g，8.33mmol)和中间体D(1.98g，7.49mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(53ml)中。加入碳酸铯(8.94g，27.4mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(1-17％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物3.8(2.51g，79％)，为橙色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ-0.01(s,9H),1.00(m,2H),2.62(s,3H),3.10(dd,2H),3.69(m,4H),5.30(s,2H),6.88(dd,1H),7.10(dd,1H),7.24(s,1H),7.90(s,1H),8.23(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 1.02(426[M+H]⁺),95％纯

5-氨基-6-甲基-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮3.9

将化合物3.8(2.51g，5.91mmol)悬浮在四氢呋喃(40ml)和饱和氯化铵(10ml)中，然后加入锌粉(3.9g，59.1mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。滤液用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物3.9(1.14g，49％)，为黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ-0.02(s,9H),0.97(m,2H),2.17(s,3H),2.90(d,2H),3.55(dd,2H),3.69(dd,2H),5.29(s,2H),6.60(s,1H),6.81(dd,1H),6.94(s,1H),7.10(dd,1H),8.18(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.95(396[M+H]⁺),86％纯。

5-氨基-6-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮中间体F

将化合物3.9(1.14g，2.88mmol)溶解于新鲜制备的HCl的甲醇溶液中[制备至约15％浓度(w/v)，100ml]，并在室温下搅拌18小时。UPLC-MS表明反应不完全，因此加入额外的HCl的甲醇溶液(50ml)，在室温下搅拌1.5小时，然后回流4小时，然后在室温下搅拌18小时。将混合物浓缩，用水稀释，并用固体氢氧化钠将pH调节至8。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法(EtOAc)纯化，得到中间体F(0.32g，28％)，为黄色固体。

¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ2.01(s,3H),2.83(dd,2H),3.17(m,2H),4.68(s,2H),6.49(s,1H),6.80(m,2H),7.05(dd,1H),8.00(dd,1H),11.0(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.95(396[M+H]⁺),86％纯。

中间体G和H的制备：

方案4

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸中间体G

将中间体C(2.0g，5.93mmol)溶解于甲醇(25ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(4.8ml，12mmol)。将混合物在55℃搅拌1.5小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物冷却至室温，除去大部分挥发物，然后倒入水中。用2M盐酸非常小心地将pH调节至pH 4。一旦pH为4，用乙酸乙酯萃取水层。每次萃取后将水层重新调节至pH 4(共萃取4次，加入6ml 2M盐酸)。[注意：如果水溶液变成深蓝色/紫色—立即用2.5M NaOH碱化，然后重新开始调节pH]。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并小心蒸发(30℃水浴，不蒸发至干燥)(注意：可用于下一步骤，因为可在蒸发前加入乙酸乙酯溶液或DIPEA)。由于该化合物不稳定，将中间体G直接用于下一步；UPLC-MS rt 0.51(322[M-H]^-)

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺(pivalamide)4.1

在氩气气氛下将中间体G(～5.93mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(30ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(2.9ml，16.3mmol)。加入EDCI.HCl(1.24g，6.5mmol)和HOAt(0.89g，6.5mmol)，然后加入中间体E(1.4g，5.6mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过柱色谱法纯化(300ml二氧化硅，4∶1乙酸乙酯/庚烷-乙酸乙酯)，得到化合物4.1(2.48g，80％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ1.31(s,9H),3.01(dd,2H),3.32(s,6H),3.60(dd,2H),4.10(br s,2H),5.06(br s,2H),5.37(s,1H),6.81(dd,1H),7.08(dd,1H),7.18(d,2H),7.22(m,1H),7.32(m,2H),7.54(m,2H),8.12(d,1H),8.62(br s,1H),9.35(br s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.80(555[M-H]^-),98％纯。N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺中间体H

将化合物4.1(2.48g，4.46mmol)溶解于丙酮(100ml)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(860mg，4.9mmol)。将混合物在室温下搅拌。20分钟后，颜色变为绿色，UPLC-MS指示反应完全。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到中间体H(2.16g，95％)，为黄色固体。¹HNMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),3.05(dd,2H),3.60(dd,2H),4.09(br s,2H),5.36(s,2H),6.82(dd,1H),7.07(dd,1H),7.20(d,1H),7.30(m,1H),7.34(m,1H),7.55(m,2H),7.63(m,1H),8.12(d,1H),8.63(br s,1H),8.90(br s,1H),10.11(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.74(509[M-H]^-),96％纯。

通用路线A

方案5

将中间体H(30–40mg，0.059–0.078mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中并加入胺/胺盐酸盐(0.12–0.18mmol)。如果使用胺盐酸盐，则加入N,N-二异丙基乙胺(0.028–0.067ml，0.15–0.36mmol)。加入硫酸钠或硫酸镁，并将混合物在室温搅拌，并通过UPLC-MS监测进程。0.25-20小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(20–29mg，0.094–0.136mmol)，并在室温下搅拌反应，通过UPLC-MS进行监测。根据需要加入额外的三乙酰氧基硼氢化钠(0.094mmol)。完成后，将反应倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物干燥(硫酸钠)、过滤并蒸发。

实施例1：N-(2-((环丙基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5A

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合6小时的环丙胺(8.3μl，0.12mmol)合成标题化合物，然后在48小时后进行后处理(work up)，并通过SPE纯化(2gSiO₂ 0-12％MeOH的EtOAc溶液)并在二乙醚中研磨，得到5A(9mg，28％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ0.31(m,2H),0.44(m,2H),1.30(s,9H),2.20(m,1H),3.05(dd,2H),3.61(dd,2H),3.85(s,2H),4.08(br s,2H),5.05(br s,2H),6.82(dd,1H),7.10(m,2H),7.31(m,5H),7.55(s,1H),8.11(d,1H),8.20(br s,1H),8.58(br s,1H)。UPLC-MS rt 0.78(552[M+H]⁺),95％纯。

实施例2：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5B

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合6小时的盐酸氮杂环丁烷(11mg，0.12mmol)合成，然后在30小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10％MeOH的DCM溶液)，得到5B(21mg，65％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CDCl₃,300MHz)δ1.33(s,9H),2.02(m,2H),3.05(dd,2H),3.14(br m,4H),3.60(m,4H),4.12(br s,2H),5.11(br s,2H),6.81(dd,1H),7.10(m,2H),7.20(m,5H),7.53(br s,1H),8.11(d,1H),8.68(br d,2H)。UPLC-MS rt 0.78(552[M+H]⁺),95％纯。

实施例3：N-(2-(((2,2-二氟乙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5C

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合22小时的2,2-二氟乙胺(10mg，0.12mmol)合成，然后在30小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ EtOAc)，得到5C(24mg，71％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30,1.32(2s,9H),3.02(m,4H),3.60(dd,2H),3.87(s,2H),4.08(br s,2H),5.11(br s,2H),5.80(tt,1H),6.82(dd,1H),7.08(d,1H),7.26(m,6H),7.54(m,1H),8.12(d,1H),8.60(br s,2H)。UPLC-MS rt 0.78(576[M+H]⁺),98％纯。

实施例4：N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-(2-(吡咯烷-1-基甲基)苄基)新戊酰胺5D

根据通用路线A，由中间体H(40mg，0.078mmol)使用预混合15分钟的吡咯烷(15μl，0.18mmol)合成，然后在18小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10％MeOH的DCM溶液)，得到5D(26mg，59％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.29(s,9H),1.69(m,4H),2.46(m,4H),3.04(dd,2H),3.50(dd,2H),3.61(s,2H),4.07(br s,2H),5.18(br s,2H),6.86(dd,1H),7.10(dd,1H),7.23(m,6H),7.55(s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS rt 0.89(566[M+H]⁺),99％纯。

实施例5：N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-(2-(哌嗪-1-基甲基)苄基)新戊酰胺5E

根据通用路线A，使用预混合3小时的中间体H(30mg，0.059mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10mg，0.12mmol)合成，然后在21小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-5％MeOH的EtOAc溶液)。通过溶解于二氯甲烷(3ml)中并添加三氟乙酸(0.2ml)，使Boc保护的中间体(24mg，0.035mmol)去保护。在室温搅拌4小时后，将反应倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂，0-10％MeOH的DCM溶液)，得到5E(12mg，35％2步)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),2.44(br s,4H),2.82(br s,4H),3.06(dd,2H),3.49(m,4H),3.64(m,1H),4.07(br s,2H),5.19(br s,1H),6.86(dd,1H),7.13(d,1H),7.20(m,4H),7.33(m,2H),7.55(s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS rt 0.68(581[M+H]⁺),96％纯。

实施例6：N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-(2-(((2,2,2-三氟乙基)氨基)甲基)苄基)新戊酰胺5F

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合3小时的2,2,2-三氟乙胺(9.5μl，0.12mmol)合成，然后在21小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-5％MeOH的EtOAc溶液)，得到5F(9mg，26％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.29(s,9H),3.04(dd,2H),3.18(q,1H),3.50(dd,2H),3.86(s,1H),4.13(m,3H),5.20(br s,3H),6.86(dd,1H),7.10(dd,1H),7.30(m,6H),7.77和8.66(2s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS rt 0.81(594[M+H]⁺),93％纯。

实施例7：N-(2-(((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5G

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合20小时的N,N-二甲基乙二胺(13μl，0.12mmol)合成，然后在26小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-20％MeOH的DCM溶液)，然后在二乙醚中研磨，得到5G(18mg，53％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(s,9H),2.21(s,6H),2.48(t,2H),2.74(t,2H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.78(s,2H),4.03(br s,2H),5.02(br s,2H),6.88(dd,1H),7.12(d,1H),7.28(m,6H),7.54(s,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS rt 0.69(583[M+H]⁺),100％纯。

实施例8：N-(2-(((环丙基甲基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5H

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合20小时的(环丙基甲基)胺(10μl，0.12mmol)合成，然后在26小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-20％MeOH的DCM溶液)，然后在二乙醚中研磨，得到5H(21mg，63％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ0.21(br s,2H),0.52(br d,2H),1.00(m,1H),1.30(s,9H),2.63(br m,2H),3.06(dd,2H),3.50(dd,2H),3.92(br m,2H),4.22(br s,2H),4.82(m,2H),6.88(dd,1H),7.12(d,1H),7.30(m,6H),7.52(s,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS rt0.77(566[M+H]⁺),100％纯。

实施例9：N-(2-((((1H-咪唑-2-基)甲基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2’-氧代-1,1’,2’,3-四氢螺[茚-2,3’-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺5I

根据通用路线A，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合3.5小时的2-甲基氨基咪唑二盐酸盐(12mg，0.076mmol)合成，然后在21小时后进行后处理，并通过SPE纯化(2gSTMAd MeOH，然后是NH₃的MeOH溶液，然后是2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10％MeOH的DCM溶液)，得到5I(13mg，37％)，为淡黄色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.29(s,9H),3.04(dd,2H),3.48(dd,2H),3.63(br d,1H),3.70(br d,1H),3.78(s,2H),3.90(s,2H),4.97(br s,2H),6.84(dd,1H),6.98(s,2H),7.09(d,1H),7.20(d,1H),7.26(m,5H),7.52(s,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS rt 0.64(592[M+H]⁺),92％纯。

通用路线B

方案6

将中间体H(30–40mg，0.059–0.078mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中并加入胺/胺盐酸盐(0.12–0.18mmol)。如果使用胺盐酸盐，则加入N,N-二异丙基乙胺(0.028–0.067ml，0.15–0.36mmol)。加入硫酸钠或硫酸镁，并将混合物在室温搅拌，并通过UPLC-MS监测进程。0.25-1.5小时后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(20–29mg，0.094–0.136mmol)，并在室温下搅拌反应，通过UPLC-MS进行监测。根据需要加入额外的三乙酰氧基硼氢化钠(0.094mmol)。通过UPLC-MS检测反应具有亚胺和胺的混合物。将反应倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物干燥(硫酸钠)、过滤并蒸发。然后将粗残余物溶解于甲醇中，并分批加入硼氢化钠(4mg，0.106mmol)，有气体放出。将反应在室温下搅拌2-6小时。完成后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。

实施例10：N-(2-((3-氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺6A

根据通用路线B，由中间体H(40mg，0.078mmol)使用预混合15分钟的3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(20mg，0.18mmol)合成，然后在18小时后进行后处理。UPLC-MS显示76％的胺和14％的亚胺。在6小时内用硼氢化钠进一步还原粗产物，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 50-100％EtOAc的DCM溶液)，得到6A(11mg，25％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),3.03(dd,2H),3.19(m,2H),3.50(m,4H),3.65(m,2H),4.10(br s,2H),4.99(br s,1H),5.10(br s,2H),6.58(dd,1H),7.10(dd,1H),7.25(m,6H),7.55(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MSrt 0.79(570[M+H]⁺),94％纯。

实施例11：N-(2-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺6B

根据通用路线B，由中间体H(40mg，0.078mmol)使用预混合15分钟的3,3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(23mg，0.18mmol)合成，然后在18小时后进行后处理。UPLC-MS显示33％的胺和37％的亚胺。在6小时内用硼氢化钠进一步还原粗产物，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 25-75％EtOAc的DCM溶液)，得到6B(9mg，20％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),3.04(dd,2H),3.50(m,6H),3.74(s,2H),4.09(br s,2H),5.12(br s,2H),6.86(dd,1H),7.10(d,1H),7.25(m,6H),7.53(s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS rt 0.83(587[M+H]⁺),83％纯。

实施例12：N-(2-(((3-(二甲基氨基)丙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺6C

根据通用路线B，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合1.5小时的3,3-二甲基氨基丙胺(15μl，0.12mmol)合成，然后在22小时后进行后处理。UPLC-MS显示24％的胺和70％的亚胺。在2小时内用硼氢化钠进一步还原粗产物，并通过SPE纯化(2g STMAd，MeOH然后是NH₃的MeOH溶液)，得到6C(16mg，46％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),1.71(m,2H),2.17(s,6H),2.37(t,2H),2.62(t,2H),3.05(dd,2H),3.48(dd,2H),3.76(s,2H),4.10(br s,2H),5.00(br s,2H),6.86(dd,1H),7.25(m,7H),7.54(s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS rt 0.69(597[M+H]⁺),76％纯。

实施例13：N-(2-(((2-羟乙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺6D

根据通用路线B，由中间体H(30mg，0.059mmol)使用预混合15分钟的2-乙醇胺(36μl，0.59mmol)合成，然后在18小时后进行后处理。UPLC-MS显示76％的亚胺。进行了另外的步骤，其中尝试在室温下使用氰基硼氢化钠(3.2mg 0.049mmol)的甲醇(2ml)溶液还原18小时，但这仍然得到亚胺和亚胺的腈加合物。在1.5小时内用硼氢化钠进一步还原粗产物，并通过SPE纯化(2g SiO₂0-25％MeOH的EtOAc溶液)，得到6D(10mg，30％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.34(s,9H),2.85(m,2H),3.05(dd,2H),3.60(dd,2H),3.68(m,2H),3.87(s,2H),4.10(m,2H),5.10(s,2H),6.81(dd,1H),7.08(dd,1H),7.21(m,3H),7.30(m,3H),7.50(s,1H),8.10(d,1H),8.74(s,1H)。UPLC-MS rt 0.65(556[M+H]⁺),96％纯。

通用路线C

方案7

步骤1:

将中间体H(40-280mg，0.078–0.549mmol)悬浮在二氯甲烷(2-10ml)中并加入胺/胺盐酸盐(0.33–1.65mmol)。如果使用胺盐酸盐，则加入N,N-二异丙基乙胺(88-410μl，0.47–2.2mmol)。加入硫酸钠，并将反应在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物7.1，为黄色玻璃状物。

步骤2:

将化合物7.1(～0.078–0.549mmol)溶解于甲醇(2-10ml)中，然后分批加入硼氢化钠(4–31mg，0.108–0.823mmol)(放出气体)。将混合物在室温下搅拌40–180min。UPLC-MS表明反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。

N-(2-((甲基亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1a

按照通用路线C步骤1，从中间体H(280mg，0.549mmol)和甲胺盐酸盐(112mg，1.65mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(0.41ml，2.2mmol)合成，得到化合物7.1a，为黄色玻璃状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.33(s,9H),3.05(dd,2H),3.51(d,3H),3.61(dd,2H),4.09(br s,2H),5.26(s,2H),6.82(dd,1H),7.09(d,1H),7.21(m,2H),7.40(m,2H),7.58(s,1H),7.63(d,1H),8.24(br s,1H),8.45(s,1H),8.60(br s,1H)。UPLC-MS rt 0.75(524[M+H]⁺),92％纯。

实施例14：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7A

根据通用路线C步骤2，由7.1a(～0.549mmol)和硼氢化钠(31mg，0.823mmol)的甲醇(10ml)溶液合成180分钟，然后通过快速硅胶色谱纯化(10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-20％MeOH的DCM溶液，然后是20％MeOH与NH3的DCM溶液)，得到化合物7A(147mg，51％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(s,9H),2.48(s,3H),3.02(d,2H),3.58(d,2H),3.84(br s,2H),4.18(br s,2H),5.02(br s,2H),6.80(dd,1H),7.07(dd,1H),7.22(d,4H),7.31(m,3H),7.50(s,1H),8.11(d,1H),8.95(br s,1H)。UPLC-MS rt 0.70(526[M+H]⁺),99％纯。

如以下实施例15和16所述，通过手性半制备型HPLC(手性IA，ID 20，250mm，85％乙腈15％甲醇与0.1％二乙胺，18ml/min)纯化化合物7A(49mg，0.093mmol)的样品，得到7A_S(16mg，33％)和7A_R(13mg，26％)。

实施例15：(S)-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7A_S

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.41(s,3H),3.04(dd,2H),3.50(dd,2H),3.72(s,2H),4.11(br s,2H),4.96(br s,2H),6.86(dd,1H),7.11(m,1H),7.20(m,2H),7.30(m,4H),7.52(s,1H),8.03(d,1H)。手性HPLC(IA，90％乙腈，10％甲醇0.1％二乙胺，1ml/min)，99.4％ee。

实施例16：(R)-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7A_R

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.41(s,3H),3.04(dd,2H),3.50(dd,2H),3.72(s,2H),4.11(br s,2H),4.96(br s,2H),6.86(dd,1H),7.11(m,1H),7.20(m,2H),7.30(m,4H),7.52(s,1H),8.03(d,1H)。手性HPLC(IA，90％乙腈，10％甲醇0.1％二乙胺，1ml/min)，98.1％ee。

N-(2-(((2-氟乙基)亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1b

按照通用路线C步骤1，从中间体H(40mg，0.078mmol)和2-氟乙胺盐酸盐(23.5mg，0.235mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(88μl，0.47mmol)合成，得到化合物7.1b，为黄色玻璃状物。UPLC-MS rt 0.75(556[M+H]⁺),75％纯。

实施例17：N-(2-(((2-氟乙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7B

根据通用路线C步骤2，由7.1b(～0.549mmol)和硼氢化钠(4mg，0.106mmol)的甲醇(2ml)溶液合成40分钟，并通过SPE纯化(2g SiO₂，0–10％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物7B(14mg，32％)，为无色固体。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),2.83(t,1H),2.92(t,1H),3.03(dd,2H),3.49(dd,2H),3.81(d,2H),4.07(br s,2H),4.39(t,1H),4.56(t,1H),5.07(br s,2H),6.86(dd,1H),7.11(dd,2H),7.23(m,4H),7.53(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS rt 0.74(558[M+H]⁺),93％纯。

N-(2-(((2-甲氧基乙基)亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1c

根据通用路线C步骤1，由中间体H(40mg，0.078mmol)和2-甲氧基乙胺(34μl，0.235mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液合成，得到化合物7.1c，为黄色玻璃状物。UPLC-MS rt0.74(568[M+H]⁺),90％纯。

实施例18：N-(2-(((2-甲氧基乙基)氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7C

根据通用路线C步骤2，由7.1c(～0.549mmol)和硼氢化钠(4mg，0.106mmol)的甲醇(2ml)溶液合成90分钟，并通过SPE纯化(2g SiO₂，0–10％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物7C(24mg，54％)，为无色固体。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.77(t,2H),3.04(dd,2H),3.30(s,3H),3.49(m,4H),3.79(s,2H),4.10(br s,2H),5.05(br s,2H),6.87(dd,1H),7.11(d,1H),7.26(m,6H),7.54(s,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS rt 0.74(570[M+H]⁺),99％纯。

N-(2-(((异丙基)亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1d

根据通用路线C步骤1，由中间体H(50mg，0.098mmol)和异丙胺(42μl，0.49mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液合成，得到化合物7.1d，为黄色玻璃状物。UPLC-MS rt 0.83(552[M+H]⁺),76％纯。

实施例19：N-(2-((异丙基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7D

根据通用路线C步骤2，由7.1d(～0.549mmol)和硼氢化钠(4mg，0.106mmol)的甲醇(2ml)溶液合成60分钟，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-20％MeOH的DCM溶液)，得到化合物7D(33mg，54％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.09(d,6H),1.32(s,9H),2.86(m,1H),3.03(dd,2H),3.61(dd,2H),3.79(s,2H),4.12(br s,2H),5.12(br s,2H),6.81(dd,1H),7.05(dd,1H),7.19(m,4H),7.30(m,2H),7.54(s,1H),8.11(dd,1H)8.64(s,1H)。UPLC-MS rt 0.79(554[M+H]⁺),97％纯。

N-(2-(((环丁基)亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1e

根据通用路线C步骤1，由中间体H(50mg，0.098mmol)和环丁胺(42μl，0.49mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液合成，得到化合物7.1e，为黄色玻璃状物。UPLC-MS rt 0.85(564[M+H]⁺),87％纯。

实施例20：N-(2-((环丁基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7E

根据通用路线C步骤2，由7.1e(～0.549mmol)和硼氢化钠(4mg，0.106mmol)的甲醇(2ml)溶液合成60分钟，并通过SPE纯化(2g SiO₂ 10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-20％MeOH的DCM溶液)，得到化合物7E(41mg，74％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(s,9H),1.70(m,4H),2.19(m,2H),3.03(dd,2H),3.26(m,1H),3.62(dd,2H),3.72(s,2H),4.12(br s,2H),5.09(br s,2H),6.82(dd,1H),7.01(dd,1H),7.20(m,4H),7.30(m,2H),7.51(brs,1H),8.11(dd,1H)8.68(br s,1H)。UPLC-MS rt 0.81(566[M+H]⁺),96％纯。

N-(2-((d₃-甲基亚氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7.1f

根据通用路线C步骤1，由中间体H(51mg，0.095mmol)、d3-甲胺盐酸盐(20mg，0.285mmol)和N,N-二异丙基乙胺(88μl，0.47mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到化合物7.1f，为黄色玻璃状物。

UPLC-MS rt 0.78(527[M+H]⁺),86％纯。

实施例21：N-(2-((d₃-甲基氨基)-d₁-甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺7F

根据通用路线C步骤2，从7.1f(～0.095mmol)合成60分钟(除了使用硼氘化钠(6.2mg，0.147mmol)的d₄-甲醇(2ml)溶液)，并通过SPE纯化(2g STMAd，MeOH然后是NH₃的MeOH溶液)，得到化合物7F(30mg，60％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),3.05(d,2H),3.50(d,2H),3.70(s,1H),4.11(br s,2H),4.97(br s,2H),6.86(dd,1H),7.10(dd,1H),7.20(m,2H),7.28(m,2H),7.33(m,2H),7.52(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(CSH2-50％)rt 0.59(530[M+H]⁺),98％纯。

中间体I的合成

方案8

1-溴-2-(1,1-二甲氧基乙基)苯8.2

将2-溴苯乙酮8.1(876mg，4.4mmol)溶解于甲醇(6ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(84mg，0.44mmol)和原甲酸三甲酯(10ml)。将该溶液温热至60℃保持3小时。将混合物在冰水上冷却，然后加入三乙胺(1ml)。除去挥发物，然后将混合物用乙酸乙酯和水稀释。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。得到化合物8.2(1.03g，96％)，为无色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.68(s,3H),3.20(s,6H),7.12(td,1H),7.30(td,1H),7.60(dd,1H),7.79(dd,1H)。

2-(1,1-二甲氧基乙基)苯甲醛8.3

在氩气气氛下将化合物8.2(830mg，3.39mmol)溶解于无水四氢呋喃(10ml)中，然后在干冰/丙酮上冷却。向其中滴加正丁基锂的溶液(2.04ml，5.09mmol，2.5M的己烷溶液)，使内部温度保持在-60℃以下(添加10分钟)。将反应在干冰/丙酮上搅拌60分钟。向其中一次性加入N,N-二甲基甲酰胺(0.525ml，6.78mmol)。将混合物在干冰/丙酮上搅拌60分钟，然后在18小时内温热至室温。加入水，然后将混合物用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物8.3(634mg，96％)，为稻草色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.70(s,3H),3.23(s,6H),7.40(t,1H),7.54(dt,1H),7.64(dd,1H),7.86(dd,1H),10.64(s,1H)。

2-((2-(1,1-二甲氧基乙基)苄基)氨基)乙酸甲酯8.4

在氩气气氛下，将化合物8.3(634mg，3.26mmol)溶解于二氯甲烷(25ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(1.14ml，6.52mmol)，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(777mg，6.19mmol)和硫酸镁(过量)。将混合物在室温下搅拌1小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.1g，5.2mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物倒入水中，水层用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物8.4(717g，82％)，为淡稻草色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.88(s,3H),3.23(s,6H),3.50(s,2H),3.72(s,3H),3.98(s,2H),7.27(m,2H),7.39(m,1H),7.54(m,1H)。

2-(N-(2-(1,1-二甲氧基乙基)苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯8.5

在氩气气氛下将化合物8.4(685mg，2.56mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(1.34ml，7.68mmol)。滴加三甲基乙酰氯(0.38ml，3.07mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，此后TLC检测完成。将混合物倒入水中，水层用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物8.5(1.012g，定量)，为黄色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(s,9H),1.52(s,3H),3.20(s,6H),3.72(s,3H),5.02(br s,2H),7.27(m,3H),7.60(dd,1H)–一个信号丧失，不可见。

2-(N-(2-(1,1-二甲氧基乙基)苄基)新戊酰胺基)乙酸8.6

将化合物8.5(500mg，1.40mmol)溶解于甲醇(5ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(0.84ml，2.1mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，此后TLC检测完成。将混合物用水稀释，并用10％硫酸氢钾非常小心地将pH调节至pH 4。一旦pH为4，用乙酸乙酯萃取水层两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并小心地蒸发(30℃水浴，不至干燥)。由于化合物8.6不稳定，因此直接用于下一步。

N-(2-(1,1-二甲氧基乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺8.7

在氩气气氛下将化合物8.6(～1.40mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(15ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.73ml，4.2mmol)。加入EDCI.HCl(322mg，1.68mmol)和HOAt(229mg，1.68mmol)，然后加入中间体E(387mg，1.54mmol)。将混合物在室温下搅拌3天。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过柱色谱法纯化(300ml二氧化硅，2：1庚烷/丙酮)，得到化合物8.7(247mg，31％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.34(s,9H),1.59(s,3H),3.03(m,2H),3.22(s,6H),3.60(m,4H),5.10(br s,2H),6.61(m,1H),6.68(m,1H),7.05(m,2H),7.18(m,1H),7.28(m,1H),7.32(m,2H),8.05(br s,1H),8.12(m,1H),8.62(br s,1H)。

N-(2-乙酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺中间体I

将化合物8.7(247mg，0.43mmol)溶解于丙酮(15ml)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(89mg，0.47mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时。加入额外的对甲苯磺酸一水合物(33mg，0.17mmol)。1小时后无变化。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物中间体I(89mg，39％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.31(s,9H),2.64(s,3H),3.04(dd,2H),3.63(dd,2H),4.05(s,2H),5.23(s,2H),6.82(dd,1H),7.07(dd,1H),7.25(m,3H),7.42(t,1H),7.54(m,2H),7.89(d,1H),8.11(dd,1H),8.63(br s,1H)。UPLC-MS rt0.75(524[M+H]⁺),90％纯。

方案9

实施例22：N-(2-(1-氨基乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺9A

将中间体I(83mg，0.17mmol)溶解于甲醇(3.5ml)中，然后加入乙酸铵(131mg，1.7mmol)和氰基硼氢化钠(21mg，0.34mmol)。将混合物在回流下搅拌18小时。加入额外的乙酸铵(131mg，1.7mmol)和氰基硼氢化钠(21mg，0.34mmol)，并将混合物在50℃下搅拌72小时。将混合物倒入水中，水层用二氯甲烷萃取。将有机萃取物蒸发，残余物通过制备型HPLC纯化(XBridge C18，ID 19mm，长度150mm，流速20ml/min：40-60％MeCN的pH 10[NH₄HCO₃与NH₄OH]溶液，历时8分钟)，得到化合物9B(15mg，17％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.34(m,12H),3.05(dd,2H),3.49(dd,2H),4.09(br s,2H),4.29(q,1H),4.96(m,2H),6.86(dt,1H),7.12(m,2H),7.23(m,2H),7.32(t,2H),7.53(m,2H),8.03(d,1H)。UPLC-MS(长时间)rt 1.86(526[M+H]⁺),99％纯。

实施例23：N-(2-(1-(甲基氨基)乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺9B

将中间体I(42mg，0.08mmol)溶解于甲胺的乙醇溶液(2ml，33％溶液，过量)中，然后加入4A分子筛。将混合物在室温下搅拌22小时。UPLC-MS表明转化率为20％，因此加入了更多的甲胺的乙醇溶液(0.5ml，33％溶液)，并在室温搅拌24小时。UPLC-MS表明转化率为50％，因此将反应倾析到饱和碳酸氢钠中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。UPLC-MS(CSH)rt 0.46(538[M+H]⁺)。

将粗残余物溶解于甲醇(2ml)中，并在氩气下加入硼氢化钠(5mg，0.132mmol)。在室温搅拌1.5小时后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后10％MeOH的DCM溶液，然后是500mg SCX-2MeOH至氨的MeOH溶液)，得到化合物9A(6mg，14％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.30(m,12H),2.20(s,3H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.92(q,1H),4.10(br s,2H),4.98(br d,2H),6.88(dd,1H),7.20(m,6H),7.50(m,2H),8.03(d,1H)。UPLC-MS(CSH)rt 0.47(540[M+H]⁺),96％纯。

实施例24：N-(2-(1-(二甲基氨基)乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺9C

将中间体I(43mg，0.082mmol)与二甲胺盐酸盐(20mg，0.246mmol)和异丙醇钛(39ml，0.131mmol)混合。初始混合不好，因此添加了少量二氯甲烷(0.5ml)。将混合物在室温下搅拌18小时。除去挥发物，在氩气下加入甲醇(0.75ml)，然后加入硼氢化钠(4mg，0.108mmol)。在室温搅拌21小时后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后10％MeOH的DCM溶液，然后是500mg SCX-2MeOH至氨的MeOH溶液)，得到化合物9C(4mg，9％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.28(s,9H),1.32(s,3H),2.17(s,6H),3.03(dd,2H),3.60(m,3H),3.81(br s,1H),4.36(br s,1H),4.84(br d,1H),5.46(br s,1H),6.80(dd,1H),7.07(m,2H),7.19(m,2H),7.27(m,1H),7.40(m,1H),7.56(d,1H),8.11(d,1H),8.69(br s,1H),8.83(br s,1H)。UPLC-MS(CSH)rt 0.81(554[M+H]⁺),100％纯。

实施例25：N-(2-(1-(氮杂环丁烷-1-基)乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺9D

将中间体I(43mg，0.082mmol)溶解于二氯甲烷(1.5ml)中，然后加入盐酸氮杂环丁烷(23mg，0.246mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(28mg，0.131mmol)和硫酸钠。将混合物在室温下搅拌3天。加入2滴乙酸，然后在室温搅拌24小时。加入额外的三乙酰氧基硼氢化钠(28mg，0.131mmol)，并在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。将残余物纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10-15％MeOH的DCM溶液，然后是15％氨和MeOH的DCM溶液，然后是500mg SCX-2MeOH至氨的MeOH溶液)，得到化合物9D(15mg，32％)，为无色固体。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.17(d,3H),1.34(s,9H),2.02(m,2H),3.04(dd,2H),3.11(m,4H),3.47(m,1H),3.61(m,2H),4.05(br m,2H),5.08(s,2H),6.81(dd,1H),7.09(t,2H),7.24(m,4H),7.54(m,2H),8.13(d,1H),8.62(br s,1H),9.56(br s,1H)。UPLC-MS rt 0.77(566[M+H]⁺),98％纯。

中间体酸A至M的合成

酸A

方案10

2-(氨基甲基)苄基氨基甲酸苄酯10.2

将邻苯二甲胺(o-xylylenediamine)10.1(1.04g，7.64mmol)溶解于无水二氯甲烷(50ml)中，并加入三乙胺(1.0ml，7.2mmol)。将该溶液在5℃(冰/水)下搅拌，然后在15分钟内滴加氯甲酸苄酯(1.0ml，7.0mmol)(在无水DCM(25ml)中的溶液)。将混合物在室温下搅拌2天。除去挥发物，并将残余物在乙酸乙酯和2M氢氧化钠之间分配。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-10％MeOH的DCM溶液，然后10％MeOH与氨的DCM溶液)，得到化合物10.2(0.706g，37％)，为橙色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.75(br s,2H),3.93(s,2H),4.42(d,2H),5.09(s,2H),6.88(br s,1H),7.33(m,9H)。

2-((2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)苄基)氨基)乙酸乙酯10.3

将化合物10.2(353mg，1.31mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中，并加入三乙胺(0.36ml，2.6mmol)。滴加溴乙酸乙酯(0.14ml，1.3mmol)。将混合物在室温下搅拌3天。将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-10％MeOH的DCM溶液，然后10％MeOH与氨的DCM溶液)，得到化合物10.3(436mg，94％)，为橙色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.23(t,3H),3.40(s,2H),3.81(s,2H),4.16(q,2H),4.43(d,2H),5.09(s,2H),6.81(m,1H),7.33(m,9H)。

2-(N-(2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸乙酯10.4

在氩气气氛下将化合物10.3(436mg，1.22mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.64ml，3.7mmol)。滴加三甲基乙酰氯(0.18ml，1.46mmol)，然后将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入水中，水层用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用20％柠檬酸水溶液、水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物10.4(588mg，定量)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.22(t,3H),1.26(s,9H),3.95(brs,2H),4.16(q,2H),4.35(br d,2H),4.84(br s,2H),5.12(s,2H),7.12(m,1H),7.28(m,9H)。

2-(N-(2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸A

将化合物10.4(285mg，0.65mmol)溶解于1∶1的甲醇/四氢呋喃(2ml)中，然后加入氢氧化锂一水合物(95mg，2.30mmol)。将混合物在室温下搅拌18小时。除去挥发物，然后将残余物溶解于水中，并用乙酸乙酯洗涤两次。用2M HCl将水层酸化至pH 2，然后用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发滤液，然后与甲苯共沸两次，得到化合物酸A(199mg，75％)，为灰白色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.25(br s,9H),3.88(br s,2H),4.28(br s,2H),4.89(br s,2H),5.08(s,2H),7.12(m,1H),7.28(m,9H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.56(413[M+H]⁺),94％纯。

酸B和中间体J

方案11

2-((2-溴苄基)氨基)乙酸甲酯11.2

将2-溴苯甲醛11.1(16.8g，90.8mmol)溶解于甲醇(260ml)中，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(34g，272.4mmol)和氰基硼氢化钠(8.6g，136.2mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物倒入碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取两次。将有机萃取物用2MHCl萃取三次。将水相用碳酸钠碱化，然后用二氯甲烷萃取三次。将该有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物11.2(9.5g，41％)，为橙色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.44(s,2H),3.71(s,3H),3.89(s,2H),7.12(td,1H),7.28(td,1H),7.38(dd,1H),7.53(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.73(258,260[M+H]⁺),97％纯。

2-(N-(2-溴苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯中间体J

在氩气气氛下将化合物11.2(9.5g，36.8mmol)溶解于二氯甲烷(200ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(22.5ml，128.8mmol)，并将混合物在5℃(冰/水)下搅拌。滴加三甲基乙酰氯(4.6ml，36.8mmol)，然后将混合物在室温搅拌18小时。将混合物用20％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(9：1至1：1庚烷/EtOAc)，得到化合物中间体J(11.8g，94％)，为黄色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.28(s,9H),3.73(s,3H),3.95(br s,2H),4.82(s,2H),7.16(m,2H),7.32(t,1H),7.56(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.87(342,344[M+H]⁺),99％纯。

2-(N-(2-溴苄基)新戊酰胺基)乙酸酸B

将中间体J(8.0g，23.38mmol)溶解于甲醇(60ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(12ml，30.0mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物用水和二氯甲烷稀释。将水层用二氯甲烷洗涤，然后用20％柠檬酸水溶液酸化至pH 4。将水层用二氯甲烷萃取三次。将该有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物酸B(6.8g，89％)，为灰白色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.29(s,9H),3.98(br s,2H),4.83(s,2H),7.16(m,2H),7.33(t,1H),7.57(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.51(328,330[M+H]⁺),99％纯。

酸C

方案12

N-烯丙基-N-(2-溴苯乙基)丙-2-烯-1-胺12.2

将2-溴苯乙胺12.1(2.63g，13.1mmol)溶解于无水甲苯(50ml)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(5.4ml，31.0mmol)。逐滴加入烯丙基溴(10.8ml，125.0mmol)，然后将混合物在回流下搅拌4小时，然后冷却至室温18小时。将反应混合物过滤，用甲苯洗涤。将残余物在二氯甲烷和水之间分配，然后将水相用二氯甲烷萃取两次。将有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(9:1至7:3庚烷/EtOAc)，得到化合物12.2(0.466g，13％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ2.67(m,2H),2.93(m,2H),3.20(m,4H),5.19(m,4H),5.90(m,2H),7.05(m,1H),7.21(m,2H),7.50(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt1.05(280,282[M+H]⁺),98％纯。

2-(2-(二烯丙基氨基)乙基)苯甲醛12.3

将化合物12.2(157mg，0.56mmol)溶解于无水四氢呋喃(2ml)中，并冷却至-78℃(干冰，丙酮)。滴加正丁基锂(2.5M的己烷溶液，0.34ml，0.85mmol)，然后将混合物在-78℃搅拌1小时。加入无水N,N-二甲基甲酰胺(0.1ml，1.29mmol)，然后在-78℃下继续搅拌1小时，然后在室温搅拌1小时。将反应混合物用水淬灭，然后在室温搅拌18小时。将混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物12.3(116mg，90％)，为橙色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.00(br m,8H),5.19(m,4H),5.88(m,2H),7.17(t,1H),7.36(t,1H),7.50(dt,1H),7.82(dd,1H),10.22(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.88(230[M+H]⁺),82％纯。

2-((2-(2-(二烯丙基氨基)乙基)苄基)氨基)乙酸甲酯12.4

将化合物12.3(116mg，0.516mmol)溶解于甲醇(2ml)中，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(191mg，1.52mmol)和氰基硼氢化钠(55mg，0.88mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物倒入水中，并用2M HCl将pH调节至4，然后用二氯甲烷洗涤两次。将水相用碳酸钠碱化，然后用二氯甲烷萃取两次。将该有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物12.4(53mg，35％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ2.73(m,4H),3.18(d,4H),3.44(s,2H),3.74(s,3H),3.79(s,2H),5.18(m,4H),5.88(m,2H),7.21(m,4H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.84(303[M+H]⁺),80％纯。

2-(N-(2-(2-(二烯丙基氨基)乙基)苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯12.5

在氩气气氛下将化合物12.4(54mg，0.18mmol)溶解于二氯甲烷(1ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(93μl，0.53mmol)。滴加三甲基乙酰氯(26μl，0.21mmol)，然后将混合物在室温搅拌4天。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物蒸发，得到化合物12.5(68mg，99％)，为无色油状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.96(387[M+H]⁺),89％纯。

2-(N-(2-(2-(二烯丙基氨基)乙基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸C

将化合物12.5(68mg，0.176mmol)溶解于甲醇(1ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(0.22ml，0.55mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。除去挥发物，将材料用水稀释，并用2MHCl将pH调节至5。然后将其浓缩至干，得到化合物酸C(假定为0.176mmol)，为玻璃状物。直接使用。

酸D

方案13

2-((2-((二甲基氨基)甲基)苄基)氨基)乙酸乙酯13.2

将1-(2-氨基甲基)苯基-N,N-二甲基甲胺二盐酸盐13.1(250mg，1.52mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(1.18g，9.13mmol)。滴加溴乙酸乙酯(288mg，1.37mmol)。将混合物在室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用氯化铵洗涤两次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。得到化合物13.2(110mg，29％)，为橙色油状物。HPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.66(251[M+H]⁺)。直接使用。

2-(N-(2-((二甲基氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸乙酯13.3

在氩气气氛下将化合物13.2(110mg，0.439mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(113mg，0.87mmol)。滴加三甲基乙酰氯(79.5mg，0.669mmol)，然后将混合物在室温搅拌3天。将混合物倒入饱和氯化铵中，然后用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过反相色谱纯化(30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物13.3(50mg，34％)，为无色油状物。

UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.93(335[M+H]⁺)。

2-(N-(2-((二甲基氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸D

将化合物13.3(50mg，0.149mmol)溶解于甲醇(4ml)中，然后加入2M氢氧化钠(0.22ml，0.45mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。用2M HCl将反应淬灭至pH 5，然后浓缩至干。将其通过反相色谱纯化(30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物酸D(40mg，88％)，为玻璃状物。

UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.49(307[M+H]⁺),94％纯。

酸E

方案14

8-溴-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯14.2

将8-溴-1,2,3,4-四氢异喹啉14.1(200mg，0.804mmol)悬浮在四氢呋喃(4ml)和饱和碳酸氢钠(2ml)中，然后将二碳酸二叔丁酯(263mg，1.21mmol)以在THF(2ml)中的溶液加入，并将混合物在室温搅拌42小时。将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(庚烷/DCM 0-80％)，得到化合物14.2(200mg，80％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.30(s,9H),2.82(m,2H),3.63(m,2H),4.60(m,2H),7.05(m,2H),7.39(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt1.01(255,257[M-tBu+H]⁺),96％纯。

8-甲酰基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯14.3

将化合物14.2(200mg，0.64mmol)溶解于无水四氢呋喃(10ml)中，并冷却至-78℃(干冰，丙酮)。滴加正丁基锂(2.4M的己烷溶液，0.40ml，0.96mmol)，然后将混合物在-78℃搅拌1小时。加入无水N,N-二甲基甲酰胺(0.1ml，1.29mmol)，然后在-78℃下继续搅拌30分钟，然后在室温搅拌1小时。将反应混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(DCM/EtOAc 5％)，得到化合物14.3(80mg，45％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.35(s,9H),2.90(m,2H),3.65(m,2H),5.02(s,2H),7.36(m,2H),7.67(t,1H),10.13(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.85(262[M+H]⁺),95％纯。

8-(((2-甲氧基-2-氧乙基)氨基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯14.4

将化合物14.3(80mg，0.306mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.20ml，1.22mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(115mg，0.918mmol)，然后加入硫酸镁。将混合物在室温下搅拌4小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(97mg，0.46mmol)，并在室温继续搅拌72小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用二氯甲烷萃取。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发。UPLC-MS表明为亚胺和胺的1：1混合物。用三乙酰氧基硼氢化钠的二氯甲烷溶液进行重复条件不能提高该比例。将残余物溶解于在冰/水上冷却的甲醇(10ml)中，然后加入硼氢化钠(7mg，0.18mmol)，并将混合物在室温搅拌1.5小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取，然后将有机萃取物用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到化合物14.4(150mg，定量)，为黄色油状物。直接使用。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.83(335[M+H]⁺)。

8-((N-(2-甲氧基-2-氧乙基)新戊酰胺基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯14.5

在氩气气氛下将化合物14.4(148mg，～0.407mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(140μl，0.80mmol)。滴加三甲基乙酰氯(50μl，0.40mmol)，然后将混合物在室温搅拌3小时。UPLC-MS表明胺已耗尽。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶SPE纯化(5g SiO₂ SPE，15％EtOAc的DCM溶液)，得到化合物14.5(35mg，20％)，为无色胶状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.93(419[M+H]⁺),80％纯。

2-(N-((2-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基)甲基)新戊酰胺基)-乙酸酸E

将化合物14.5(35mg，0.084mmol)溶解于甲醇(3ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(50μl，0.125mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。UPLC-MS表明水解不完全，因此添加了额外的2.5M氢氧化钠(50μl，0.125mmol)，并将混合物在室温下搅拌72小时。将反应用乙酸乙酯稀释并用饱和氯化铵洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物酸E(～0.084mmol)，为玻璃状物，将其直接使用。

UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.59(405[M+H]⁺)。

酸F

方案15

2-((2-溴-3-氟苄基)氨基)乙酸甲酯15.2

将2-溴-3-氟苯甲醛15.1(1.05g，5.07mmol)溶解于甲醇(14ml)中，然后加入甘氨酸甲酯盐酸盐(1.88g，15.0mmol)和氰基硼氢化钠(0.50g，7.96mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物倒入水中，然后用2M HCl将pH调节至4。将其用二氯甲烷洗涤。用碳酸钠将水相调节至pH 8，然后用二氯甲烷萃取三次。将该有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物15.2(330mg，23％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.45(s,2H),3.73(s,3H),3.93(s,2H),7.17(m,3H)。 UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.74(276,278[M+H]⁺),95％纯。

2-(N-(2-溴-3-氟苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯15.3

在氩气气氛下将化合物15.2(330mg，1.20mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.62ml，3.5mmol)。滴加三甲基乙酰氯(0.18ml，1.5mmol)，然后将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用水、20％柠檬酸水溶液、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(1：1EtOAc/庚烷)，得到化合物15.3(310mg，72％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.25(s,9H),3.72(s,3H),3.93(br s,2H),4.80(br s,2H),7.06(m,1H),7.14(t,1H),7.39(m,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.88(360,362[M+H]⁺),90％纯。

2-(N-(2-溴-3-氟苄基)新戊酰胺基)乙酸酸F

将化合物15.3(310mg，0.86mmol)溶解于THF(2ml)、甲醇(2ml)和水(2ml)中，然后添加氢氧化锂一水合物(109mg，2.59mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。除去挥发物，残余物通过快速硅胶色谱纯化(10-20％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到粗产物酸F(238mg，80％)，将其直接使用。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.52(344[M-H]^-),90％纯。

酸G

方案16

2-((2-((1H-咪唑-1-基)甲基)苄基)氨基)乙酸叔丁酯16.2

将(2-((1H-咪唑-1-基)甲基)苯基)甲胺二盐酸盐16.1(200mg，0.76mmol)和N,N-二异丙基乙胺(596mg，4.61mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中。缓慢加入溴乙酸叔丁酯(135mg，0.69mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液。将混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物与另一批材料(0.192mmol)合并，用饱和氯化铵水溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发，得到化合物16.2(100mg，22％)，为淡黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.58(302[M+H]⁺)。直接使用。

2-(N-(2-((1H-咪唑-1-基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸叔丁酯16.3

在氩气气氛下将化合物16.2(50mg，0.166mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(43mg，0.332mmol)。加入三甲基乙酰氯(30mg，0.249mmol)，然后将混合物在室温搅拌过夜。加入另外的三甲基乙酰氯(20mg，0.166mmol)。UPLC表明反应不完全。将混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭，并用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。将残余物溶解于吡啶(1ml)中，并加入三甲基乙酰氯(96mg，0.797mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后蒸发。将残余物溶解于水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。粗残余物通过反相色谱法纯化(30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物16.3(80mg，83％)，为白色固体。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.02(386[M+H]⁺)。直接使用。

2-(N-(2-((1H-咪唑-1-基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸G

将化合物16.3(80mg，0.207mmol)溶解于甲醇(3ml)中，然后加入2M氢氧化钠(0.311ml，0.622mmol)，并将混合物在室温搅拌2天。用2M HCl水溶液将混合物酸化至pH 5，然后用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物酸G(40mg，59％)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.29(s,9H),3.98(s,2H),4.72(s,2H),5.25(s,2H),6.95(m,2H),7.25(m,2H),7.35(m,4H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.46(330[M+H]⁺),100％纯。

酸H

方案17

(S,E/Z)-甲基2-((2-(二甲氧基甲基)亚苄基)氨基)丙酸酯17.1

将L-丙氨酸甲酯盐酸盐(250mg，1.79mmol)悬浮在二氯甲烷(8ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(1.25ml，7.16mmol)。加入中间体A(0.5g，1.79mmol)，然后加入硫酸镁(过量)。将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物过滤，然后将滤液用水洗涤两次。将水层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物17.1(假定1.79mmol)，为淡黄色胶状物。直接使用。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.53(d,3H),3.31(s,3H),3.33(s,3H),3.75(s,3H),4.18(q,1H),5.66(s,1H),7.39(m,2H),7.55(d,1H),8.01(d,1H),8.77(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.81(234[M-OMe+H]⁺)。

(S)-甲基2-((2-(二甲氧基甲基)苄基)氨基)丙酸酯17.2

在氩气气氛下将化合物17.1(～1.79mmol)溶解于甲醇(10ml)中，然后在冰/水上冷却。分批加入硼氢化钠(102mg，2.69mmol)(注意：剧烈地气体放出)，并将混合物在室温搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过正相色谱法纯化(30g SiO₂，Isolera，5-20％IPA的庚烷溶液)，得到化合物17.2(311mg，65％)，为淡稻草色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(d,3H),3.33(s,3H),3.34(s,3H),3.36(s,1H),3.73(s,3H),3.81(dd,2H),5.63(s,1H),7.28(m,2H),7.34(m,1H),7.57(m,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.79(204[M-2OMe+H]⁺)。

(S)-甲基2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)丙酸酯17.3

在氩气气氛下将化合物17.2(311mg，1.16mmol)溶解于二氯甲烷(8ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.61ml，3.49mmol)。加入三甲基乙酰氯(0.14ml，1.16mmol)，然后将反应混合物在室温搅拌18小时。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过正相色谱法纯化(30g Isolera，5-30％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物17.3(148mg，37％)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.26(s,9H),1.41(d,3H),3.31(s,3H),3.33(s,3H),3.65(m,1H),3.71(s,3H),4.79(m,1H),5.06(d,1H),5.36(s,1H),7.50(m,4H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.98(204片段),90％纯。

(S)-2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)丙酸酸H

将化合物17.3(148mg，0.422mmol)溶解于甲醇(4ml)中，然后加入1M氢氧化钠(0.85ml，0.85mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌2小时。将混合物浓缩至0.5体积，然后用水稀释，并通过小心地加入2M HCl将pH调节至4。将其用乙酸乙酯萃取。用2M HCl将水相重新调节至pH 4，并再次用乙酸乙酯萃取，再重复该pH调节一次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。向滤液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.2ml)和N,N-二甲基甲酰胺(2ml)，并将滤液浓缩—但不蒸发至干燥，以避免化合物分解—得到酸H，可直接使用(假定0.422mmol)。

酸I

方案18

(R,E/Z)-甲基2-((2-(二甲氧基甲基)亚苄基)氨基)丙酸酯18.1

将D-丙氨酸甲酯盐酸盐(250mg，1.79mmol)悬浮在二氯甲烷(8ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(1.25ml，7.16mmol)。加入中间体A(0.5g，1.79mmol)，然后加入硫酸镁(过量)。将混合物在室温下搅拌72小时。将混合物过滤，然后将滤液用水洗涤两次。将水层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物18.1(假定1.79mmol)，为淡黄色胶状物。直接使用。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.52(d,3H),3.30(s,3H),3.34(s,3H),3.75(s,3H),4.18(q,1H),5.65(s,1H),7.39(m,2H),7.55(dd,1H),8.00(dd,1H),8.76(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.79(234[M-OMe+H]⁺)。

(R)-甲基2-((2-(二甲氧基甲基)苄基)氨基)丙酸酯18.2

在氩气气氛下将化合物18.1(～1.79mmol)溶解于甲醇(10ml)中，然后在冰/水上冷却。分批加入硼氢化钠(102mg，2.69mmol)(注：剧烈放出气体)。将混合物在冰/水上搅拌10分钟，然后在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物18.2(480mg，定量)，为淡稻草色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(d,3H),3.33(s,3H),3.34(s,3H),3.36(s,2H),3.73(m,4H),5.63(s,1H),7.40(m,4H)。UPLC-MS (短时间碱性方法)rt 0.76(267[M+H]⁺)。

(R)-甲基2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)丙酸酯18.3

在氩气气氛下将化合物18.2(478mg，1.79mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.93ml，5.37mmol)。加入三甲基乙酰氯(0.22ml，1.79mmol)，然后将反应混合物在室温搅拌18小时。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(9:1至8:2庚烷/EtOAc)，得到化合物18.3(189mg，30％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29(s,9H),1.40(d,3H),3.31(s,3H),3.33(s,3H),3.65(m,1H),3.71(s,3H),4.79(m,1H),5.06(d,1H),5.36(s,1H),7.50(m,4H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.95(320[M-OMe+H]⁺),83％纯。

(R)-2-(N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)新戊酰胺基)丙酸酸I

将化合物18.3(189mg，0.54mmol)溶解于甲醇(5ml)中，然后加入1M氢氧化钠(1.08ml，1.08mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌2小时。将混合物浓缩至0.5体积，然后用水稀释，并通过小心地加入2M HCl将pH调节至4。将其用乙酸乙酯萃取。用2M HCl将水相重新调节至pH 4，并再次用乙酸乙酯萃取，再重复该pH调节一次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。向滤液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.2ml)和N,N-二甲基甲酰胺(2ml)，然后蒸发滤液，但不至干燥以避免化合物分解，得到酸I—直接使用(假定0.54mmol)。

酸J

方案19

1-溴-2-(二甲氧基甲基)-3-氟苯19.2

将2-溴-6-氟苯甲醛19.1(3g，14.8mmol)溶解于甲醇(20ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(270mg，1.48mmol)和原甲酸三甲酯(10ml)。然后将反应加热至回流3小时。将混合物在冰/水上冷却，然后加入三乙胺(3ml)。除去挥发物，然后将混合物用乙醚和水稀释。将水层用乙醚萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(150ml二氧化硅，10％乙醚的己烷溶液)，得到化合物19.2(3.23g，88％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.48(s,6H),5.70(s,1H),7.07(dt,1H),7.15(m,1H),7.35(dd,1H)。

2-(二甲氧基甲基)-3-氟苯甲醛19.3

在氩气气氛下将化合物19.2(3.23g，13.02mmol)溶解于无水四氢呋喃(30ml)中，然后在干冰/丙酮上冷却。向其中滴加正丁基锂的溶液(2.5M的己烷溶液，5.73ml，14.33mmol)，使内部温度保持在-60℃以下(添加10分钟)。将反应在干冰/丙酮上搅拌70分钟。向其中一次性加入N,N-二甲基甲酰胺(2.05ml，26.0mmol)。将混合物在干冰/丙酮上搅拌60分钟，然后在1.5小时内温热至室温。加入水，然后将混合物用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(150ml二氧化硅，10％二乙醚的己烷溶液)，得到化合物19.3(1.72g，67％)，为稻草色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.48(s,6H),5.70(s,1H),7.26(dt,1H),7.41(m,1H),7.78(d,1H),7.91(d,1H),10.68(s,1H)直接使用。

2-((2-(二甲氧基甲基)-3-氟苄基)氨基)乙酸甲酯19.4

将化合物19.3(1.0g，5.05mmol)溶解于二氯甲烷(30ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(2.5ml，13.8mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(577mg，4.6mmol)，然后加入硫酸镁。将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物过滤并蒸发滤液。将残余物溶解于甲醇(10ml)中，然后分批加入硼氢化钠(105mg，2.77mmol)，并在室温搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取两次，然后将有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到化合物19.4(1.26g，93％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ2.46(br s,1H),3.40(s,2H),3.46(s,6H),3.67(s,3H),4.01(s,2H),5.61(s,1H),6.97(t,1H),7.23(m,2H)。

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)-3-氟苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯19.5

在氩气气氛下将化合物19.4(1.26g，4.69mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(2.5ml，14.1mmol)。加入三甲基乙酰氯(0.58ml，4.69mmol)，然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(7:3庚烷/EtOAc)，得到化合物19.5(1.27mg，76％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.34(s,9H),3.41(s,6H),3.71(s,3H),3.89(s,2H),5.12(s,2H),5.59(s,1H),6.95(t,1H),7.08(d,1H),7.26(m,1H)。

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)-3-氟苄基)新戊酰胺基)乙酸酸J

将化合物19.5(1.27g，3.57mmol)溶解于甲醇(60ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(3.6ml，8.9mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌1小时。将混合物浓缩至0.5体积，然后用水稀释，并通过小心地加入2M HCl将pH调节至4。将其用乙酸乙酯萃取。用2M HCl将水相重新调节至pH 4，并再次用乙酸乙酯萃取，再重复该pH调节一次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。向滤液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.2ml)和N,N-二甲基甲酰胺(2ml)，然后蒸发滤液，但不至干燥以避免化合物分解，得到酸J—直接使用(假定3.57mmol)。

酸K

方案20

1-溴-2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苯20.2

将2-溴-4,5-二氟苯甲醛20.1(1g，4.52mmol)溶解于甲醇(5ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(9mg，0.226mmol)和原甲酸三甲酯(2ml)。然后将反应加热至回流3小时。将混合物在冰水上冷却，然后除去挥发物。将混合物用乙醚和水稀释。将水层用乙醚萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(150ml二氧化硅，5-20％乙醚的己烷溶液)，得到化合物20.2(1.1g，91％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.38(s,6H),5.46(s,1H),7.39(dd,1H),7.46(dd,1H)。

2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苯甲醛20.3

在氩气气氛下将化合物20.2(0.55g，2.06mmol)溶解于无水四氢呋喃(6ml)中，然后在干冰/丙酮上冷却。向其中滴加正丁基锂的溶液(2.5M的己烷溶液，1.24ml，3.09mmol)，使内部温度保持在-60℃以下(添加10分钟)。将反应在干冰/丙酮上搅拌70分钟。向其中一次性加入N,N-二甲基甲酰胺(0.34ml，4.12mmol)。将混合物在干冰/丙酮上搅拌60分钟，然后在1.5小时内温热至室温。加入水，然后将混合物用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(10-15％乙醚的己烷溶液)，得到化合物20.3(216mg，48％)，为稻草色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.40(s,6H),5.88(s,1H),7.37(dd,1H),7.50(ddd,1H),10.48(s,1H)直接使用。

2-((2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苄基)氨基)乙酸甲酯20.4

将化合物20.3(216mg，1.00mmol)溶解于二氯甲烷(6ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.7ml，4.0mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(138mg，1.1mmol)，然后加入硫酸镁。将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物过滤，滤液用水洗涤，经硫酸镁干燥并蒸发。将残余物溶解于甲醇(7ml)中，然后分批加入硼氢化钠(30mg，1.02mmol)，并在室温搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水相用乙酸乙酯萃取两次，然后将有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到化合物20.4(145mg，59％)，为黄色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.34(s,6H),3.44(s,2H),3.73(s,3H),3.89(m,2H),5.57(s,1H),7.08(dd,1H),7.29(m,1H)。

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯20.5

在氩气气氛下将化合物20.4(145mg，0.50mmol)溶解于二氯甲烷(4ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.27ml，1.51mmol)。加入三甲基乙酰氯(62μl，0.50mmol)，然后将反应混合物在室温搅拌18小时。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(19:1庚烷/IPA)，得到化合物20.5(101mg，54％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),3.31(s,6H),3.71(s,3H),4.02(br s,2H),4.90(m,2H),5.44(s,1H),7.10(m,1H),7.34(m,1H)。

2-(N-(2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苄基)新戊酰胺基)乙酸酸K

将化合物20.5(101mg，0.27mmol)溶解于甲醇(3ml)中，然后加入1M氢氧化钠(0.33ml，0.33mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌4小时，然后在室温搅拌18小时。将混合物浓缩至0.5体积，然后用水稀释，并通过小心地加入2M HCl将pH调节至4。将其用乙酸乙酯萃取。用2M HCl将水相重新调节至pH 4，并再次用乙酸乙酯萃取，再重复该pH调节一次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并过滤。向滤液中加入N,N-二甲基甲酰胺(2ml)，然后蒸发滤液，但不至干燥以避免化合物分解，得到酸K—直接使用(假定0.27mmol)。

酸L

方案21

2-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)苄基)氨基)乙酸乙酯21.2

将叔丁基-2-氨基甲基苯基氨基甲酸酯21.1(100mg，0.45mmol)、溴乙酸乙酯(38μl，0.34mmol)和N,N-二异丙基乙胺(157μl，0.90mmol)混合在N,N-二甲基甲酰胺(1ml)中并在室温搅拌2小时，此后通过UPLC-MS确定反应完成。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物21.2(119mg，86％)，为黄色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.28(t,3H),1.52(s,9H),3.36(s,2H),3.84(s,2H),4.21(q,2H),6.93(dt,1H),7.06(dd,1H),7.26(m,1H),7.98(brd,1H),9.14(br s,1H)。

2-(N-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)苄基)新戊酰胺基)乙酸乙酯21.3

将化合物21.2(119mg，0.39mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(204μl，1.17mmol)和三甲基乙酰氯(58μl，0.47mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。UPLC-MS显示几乎没有反应，因此进一步添加了N,N-二异丙基乙胺(204μl，1.17mmol)和三甲基乙酰氯(58μl，0.47mmol)。再过2小时后，UPLC-MS显示反应完全。将混合物倒入水中，水相用二氯甲烷萃取。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速色谱法纯化(4:1庚烷/乙酸乙酯)，得到化合物21.3(99mg，65％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.28(t,3H),1.30(s,9H),1.51(s,9H),4.00(s,2H),4.18(q,2H),4.72(s,2H),7.04(m,2H),7.27(m,1H),7.99(br s,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.50(415[M+Na]⁺),95％纯。

2-(N-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸L

将化合物21.3(99mg，0.25mmol)溶解于甲醇(1.5ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.25ml，0.625mmol)，并将混合物加热回流2小时。将混合物倒入水中，并通过添加2M HCl将pH小心地调节至4，并用乙酸乙酯萃取。再次将水相pH调节至4，并用乙酸乙酯萃取。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到酸L(80mg，88％)，为无色固体。¹HNMR(CDCl₃,300MHz)δ1.31(s,9H),1.50(s,9H),4.03(s,2H),4.75(s,2H),7.05(m,2H),7.29(m,2H),7.82(br s,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.28(363[M+Na]⁺),95％纯。

酸M

方案22

2-(N-(2-氰基苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯22.1

将中间体J(500mg，1.46mmol)、氰化锌(II)(305mg，2.6mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(335mg，0.29mmol)加入到脱气的无水N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中，然后在微波辐射下于130℃加热1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(0-20％丙酮的庚烷溶液)，得到化合物22.1(320mg，76％)，为黄色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),3.74(s,3H),4.00(br s,2H),4.96(br s,2H),7.40(m,2H),7.60(t,1H),7.67(d,1H)。

2-(N-(2-(氨基甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯22.2

将化合物22.1(320mg，1.1mmol)溶解于甲醇(14ml)和三氟乙酸(0.75ml)中。加入碳载钯(10％湿，32mg)，将容器密封，并在大气压下引入氢气气氛。将混合物在室温下搅拌18小时。将反应通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤，并蒸发滤液。将残余物溶解于乙酸乙酯中，并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物22.2(132mg，41％)，为黄色胶状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 0.45(293[M+H]⁺)。

2-(N-(2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸甲酯22.3

将化合物22.2(341mg，1.2mmol)溶解于1,4-二噁烷(10ml)，并加入饱和碳酸氢钠(10ml)中，然后加入二碳酸二叔丁酯(393mg，1.8mmol)。将混合物在室温快速搅拌5小时。将混合物倒入乙酸乙酯和水中，水层用乙酸乙酯萃取。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速色谱法纯化(2:1庚烷/EtOAc)，得到化合物22.3(300mg，64％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.25(s,9H),1.44(s,9H),3.71(s,3H),3.96(br s,2H),4.29(s,2H),4.86(s,2H),7.26(m,4H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.21(293[M-Boc+H]⁺)。

2-(N-(2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄基)新戊酰胺基)乙酸酸M

将化合物22.3(300mg，0.76mmol)溶解于甲醇(10ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.7ml，1.75mmol)，并将混合物在回流下加热2小时，然后在室温加热18小时。除去挥发物，然后将残余物溶解于水中。通过添加2M HCl将pH小心地调节至4，并用乙酸乙酯萃取。再次将水相pH调节至4，并用乙酸乙酯萃取(重复4次)。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，加入2ml的DMF，得到酸M，为黄色油状物。直接使用。

通用路线D

方案23

2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)苄基氨基甲酸苄酯23.1a

将酸A(93mg，0.225mmol)、EDCI.HCl(52mg，0.271mmol)和HOAt(45mg，0.330mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.10ml，0.60mmol)和中间体E(50.5mg，0.20mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用水、20％柠檬酸水溶液、水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(7:3庚烷/EtOAc至EtOAc)，得到化合物23.1a(69mg，53％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.29(s,9H),2.81(dd,2H),3.01(dd,2H),3.45(m,2H),4.06(br s,2H),4.29(m,2H),5.03(s,2H),6.83(dd,1H),7.08(dd,1H),7.30(m,12H),8.01(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.40(646[M+H]⁺),97％纯。

实施例26：N-(2-(氨基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23A

和

实施例27：N-(2-((乙基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23B

在氩气气氛下，将化合物23.1a(46.5mg，0.072mmol)溶解于无水乙醇(2ml)中。加入钯碳(5％，13mg)，并在气球压力下引入氢。在室温下搅拌2小时后，UPLC-MS显示无进展，因此添加了额外的钯碳(5％，12mg)，并通过气球重新引入氢气。将反应在室温下搅拌42小时。UPLC-MS分析显示23.1a几乎完全消耗，形成了两种产物。将混合物通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤，并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(0.5–7％氨和MeOH的EtOAc溶液)，得到两种化合物：(较高运行点)化合物23B(9.3mg，24％)；和不纯的(较低运行点)化合物23A。

将不纯的23A纯化(2g STMAd SPE，MeOH，然后是氨的MeOH溶液)，随后在乙醚中研磨，然后进一步纯化(500mg SiO₂ 5％氨和甲醇的EtOAc溶液)，得到化合物23A(2.0mg，5％)

23A的数据

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.83(s,2H),4.13(br s,2H),4.94(br s,2H),6.87(dd,1H),7.27(m,8H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.77(512[M+H]⁺),95％纯。

23B的数据

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.11(t,3H),1.32(s,9H),2.66(q,2H),3.04(dd,2H),3.49(dd,2H),3.75(s,2H),4.13(br s,2H),4.94(br s,2H),6.86(dd,1H),7.27(m,8H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.07(540[M+H]⁺),90％纯。

23A的替代合成

N-(2-溴苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.2a

将酸B(3.11g，9.48mmol)、EDCI.HCl(2.5g，13.27mmol)和HOAt(1.8g，13.27mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(60ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(5.0ml，28.44mmol)和中间体E(2.38g，9.48mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物用乙酸乙酯(250ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，并用盐水洗涤三次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(0-100％EtOAc的DCM溶液)，得到化合物23.2a(4.38g，83％)，为淡黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.31(s,9H),3.02(dd,2H),3.61(dd,2H),4.08(s,2H),4.92(s,2H),6.81(dd,1H),7.06(dd,1H),7.17(m,3H),7.34(t,1H),7.57(m,2H),8.13(dd,1H),8.49(s,1H),9.29(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.84(561,563[M+H]⁺)。

N-(2-氰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺中间体K

将化合物23.2a(4.40g，7.84mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(88ml)中，并通过将氩气鼓泡通过溶液而脱气。加入氰化锌(II)(1.66g，14.12mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(1.8g，1.57mmol)，并将混合物在130℃下搅拌2小时。UPLC-MS指示转化完成。除去加热，并在室温搅拌18小时。将混合物用乙酸乙酯(400ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤两次，并用盐水洗涤三次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。将残余物用乙醚研磨，得到中间体K(3.85g，96％)，为灰白色固体。¹H NMR(DMSO-d₆,300MHz)δ1.20(s,9H),3.04(dd,2H),3.31(dd,2H),4.22(br s,2H),4.85(br s,2H),6.83(dd,1H),7.16(t,1H),7.31(d,1H),7.37(m,1H),7.44(t,2H),7.68(t,1H),7.81(d,1H),8.03(dd,1H),9.98(s,1H),11.06(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.72(508[M+H]⁺)。

在高压釜中，在氩气气氛下，将中间体K(2.3g，4.53mmol)溶解于15％氨的甲醇溶液(180ml)中。加入Raney镍(250mg，0.45mmol)，并引入氢气至500psi。将容器在60℃下搅拌6小时，然后室温搅拌18小时。UPLC-MS显示转化率为20％，因此添加了额外的Raney镍(400mg，0.72mmol)，并重新引入氢气至500psi。将容器在60℃下搅拌6.5小时。UPLC-MS分析显示转化率为58％。将混合物(从镍固体中)倒出，然后通过硅藻土过滤，用15％氨的甲醇溶液洗涤，蒸发滤液。在高压釜中，在氩气气氛下，将残余物溶解于15％氨的甲醇溶液(180ml)中。加入Raney镍(400mg，0.72mmol)，并重新引入氢气至500psi。将容器在50℃下搅拌6小时，然后在室温下搅拌18小时，然后在55℃下搅拌6小时，然后在室温下搅拌42小时，然后在55℃下搅拌8小时。将混合物(从镍固体中)倒出，然后通过硅藻土过滤，用15％氨的甲醇溶液洗涤，蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(EtOAc，然后是5％MeOH的DCM溶液，然后是10-15％MeOH与氨的DCM溶液)，得到化合物23A(240mg，10％)，为白色粉末(从水溶液中冷冻干燥后)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.83(s,2H),4.13(br s,2H),4.94(br s,2H),6.87(dd,1H),7.27(m,8H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.79(512[M+H]⁺),84％纯–含有6％的单N-甲基和3％的二-N-甲基副产物。

2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)苄基氨基甲酸叔丁酯23.4a

将酸M(～290mg，～0.765mmol)、EDCI.HCl(176mg，0.92mmol)和HOAt(124mg，0.92mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.68ml，3.83mmol)和中间体E(211mg，0.84mmol)，并将混合物在室温搅拌20小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机物用水洗涤三次，然后用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物23.4a(228mg，48％)，为淡黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.91(612[M+H]⁺),90％纯。

将化合物23.4a(228mg，0.37mmol)溶解于二氯甲烷(6ml)中，并在冰/水上冷却。滴加三氟乙酸(0.3ml)，在冰/水上搅拌15分钟，然后在室温搅拌45分钟。UPLC-MS指示转换缓慢。加入额外的三氟乙酸(0.15ml)，并将反应搅拌55分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到160mg的物质，该物质为23.4a和23A的2：1混合物。将水相用10％甲醇/乙酸乙酯萃取两次，将有机相用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将160mg混合的物质重新溶解于二氯甲烷(6ml)中，并加入三氟乙酸(0.45ml)，并将混合物在室温搅拌1小时。如上所述对反应进行后处理，将二氯甲烷萃取物与10％甲醇/乙酸乙酯萃取物分开。粗残余物由SPE纯化(5g SiO₂ 10-15％MeOH的DCM溶液，然后是15％MeOH和氨的DCM溶液)，得到化合物23A(96mg，51％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),4.13(br s,2H),4.35(br s,2H),4.94(br s,2H),6.87(dd,1H),7.11(d,1H),7.22(d,1H),7.37(m,5H),7.59(s,1H),8.04(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 0.65(510[M+H]⁺),99％纯。

实施例28：N-(2-(2-(二烯丙基氨基)乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.1c

将酸C(～0.176mmol)、EDCI.HCl(53mg，0.28mmol)和HOAt(38mg，0.28mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(1ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.11ml，0.64mmol)和中间体E(44.5mg，0.177mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物23.1c(77mg，72％)，为淡黄色玻璃状物。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ1.32(s,9H),2.69(m,4H),3.05(dd,2H),3.16(d,4H),3.61(dd,2H),4.02(br s,2H),4.90(s,2H),5.14(m,4H),5.83(m,2H),6.80(dd,1H),7.15(m,7H),7.56(s,1H),8.15(br s,1H),8.45(s,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.65(606[M+H]⁺),98％纯。

实施例29：N-(2-(2-氨基乙基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23C

将化合物23.1c(77mg，0.127mmol)和N,N‘-二甲基巴比妥酸(125mg，0.801mmol)溶解于无水脱气的二氯甲烷(2ml)中，然后再次脱气。加入四(三苯基膦)钯(0)(11.4mg，0.010mmol)，并将混合物在35℃下搅拌2小时，并在室温下搅拌18小时。UPLC-MS分析显示反应不完全。加入四(三苯基膦)钯(0)(13mg，0.011mmol)，并将混合物在35℃下搅拌3.5小时。UPLC-MS仍显示转化不完全。将混合物用二氯甲烷和饱和碳酸氢钠稀释，并分离各层。将水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将水相用乙酸乙酯反萃取两次，将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。将提取的残余物合并，并显示其含有单烯丙基副产物。产物仍在水层中。将水层蒸发并使用Biotage Isolera纯化(18g，C18Ultra柱，60-80％乙腈/水，含pH10缓冲液)，得到粗化合物。将其通过MDAP进一步纯化(XBridge C18 19x 150，35-50％乙腈水，含0.1％氢氧化铵)，得到化合物23C(19.4mg，29％)，为淡黄色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.34(s,9H),2.78(dd,2H),3.00(m,4H),3.60(d,2H),4.05(br s,2H),4.97(br s,2H),6.80(dd,1H),7.17(m,8H),7.53(s,1H),8.11(dd,1H),8.62(s,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.79(526[M+H]⁺),94％纯。

实施例30：N-(2-((二甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23D

将酸D(40mg，0.13mmol)、EDCI.HCl(38mg，0.19mmol)和HOAt(27mg，0.19mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(101mg，0.78mmol)和中间体E(40mg，0.16mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和氯化铵中，水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过反相色谱法纯化(SP4 30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物23D(12mg，17％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.26(s,9H),2.18(s,6H),3.10(m,2H),3.55(m,4H),4.05(br s,2H),5.10(br s,2H),6.88(d,1H),7.27(m,7H),7.54(s,1H),8.02(d,1H)。HPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.35(540[M+H]⁺),99％纯。

8-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯23.1e

将酸E(35mg，0.084mmol)、EDCI.HCl(19mg，0.101mmol)和HOAt(14mg，0.101mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(35μl，0.20mmol)和中间体E(21mg，0.084mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂ EtOAc)，得到化合物23.1e(30mg，56％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.86(638[M+H]⁺)。

实施例31：N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-N-((1,2,3,4-四氢异喹啉-8-基)甲基)新戊酰胺23E

将化合物23.1e(30mg，0.047mmol)溶解于二氯甲烷(3ml)中。加入三氟乙酸(0.3ml)，并将溶液在室温搅拌45分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂ 10％MeOH的EtOAc溶液，然后10-20％MeOH的DCM溶液)，得到化合物23E(12mg，48％)，为无色玻璃状物。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),2.89(m,2H),3.06(m,4H),3.50(dd,2H),3.94(s,2H),4.10(br s,2H),4.74(br s,2H),6.87(d,1H),7.00(d,1H),7.12(m,4H),7.33(d,1H),7.52(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.66(538[M+H]⁺),99％纯。

N-(2-溴-3-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.1f

将酸F(45mg，0.13mmol)、中间体E(27mg，0.11mmol)和HATU(54mg，0.14mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(1.5ml)中。加入N-甲基吗啉(0.1ml，9.3mmol)，并将混合物在室温搅拌30分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释，然后用盐水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过反相色谱法纯化(30g C18柱，乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物23.1f(60mg，80％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.30(s,9H),2.97(d,2H),3.55(d,2H),4.08(br s,2H),4.94(br s,2H),6.80(m,1H),6.96(d,1H),7.10(m,3H),7.30(m,2H),7.54(d,1H),8.65(br s,1H),10.27(br s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.84(580,582[M+H]⁺),97％纯。

N-(2-氰基-3-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.2f

将化合物23.1f(50mg，0.08mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2.5ml)中，并通过将氩气鼓泡通过溶液而脱气。加入氰化锌(II)(13mg，0.11mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(4.3mg，0.005mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(5.3mg，0.01mmol)，并将混合物在150℃下搅拌18小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，然后将滤液用盐水洗涤三次。将有机层蒸发，并通过反相色谱法纯化(30g C18柱，乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物23.2f(40mg，90％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.76(526[M+H]⁺)。

实施例32：N-(2-(氨基甲基)-3-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23F

将化合物23.2f(10.4mg，0.02mmol)溶解于甲醇(1ml)中，然后加入氯化钴(II)(0.05mg，0.0005mmol)，并将混合物在室温搅拌10分钟。在室温下在10分钟内分批加入硼氢化钠(1.5mg，0.04mmol)，然后将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，并蒸发滤液。残余物通过反相色谱法纯化(30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，然后通过SPE纯化(SCX-2，500mg，MeOH然后是氨的MeOH溶液)，得到化合物23F(6.7mg，64％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.30(s,9H),3.07(d,2H),3.48(dd,2H),4.23(s,2H),4.40(br s,2H),4.85(br s,2H),6.87(m,1H),7.13(m,1H),7.21(m,4H),7.33(m,1H),7.44(m,1H),7.50(m,1H),8.04(m,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.68(530[M+H]⁺),97％纯。

实施例33：N-(2-((1H-咪唑-1-基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23G

将酸G(40mg，0.121mmol)、EDCI.HCl(25mg，0.182mmol)和HOAt(35mg，0.182mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(83mg，0.73mmol)和中间体E(37mg，0.147mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入饱和氯化铵中，水层用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用碳酸氢钠洗涤三次，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过反相色谱法纯化(SP4 30g C18柱乙腈/pH10缓冲液，含碳酸氢铵)，得到化合物23G(16mg，24％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.20(m,9H),3.00(m,2H),4.00(m,4H),4.80(br s,2H),5.29(s,2H),6.70-7.70(m,12H),8.02(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.87(563[M+H]⁺),100％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-((2S)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23.1h

将酸H(～142mg，假定0.422mmol)和中间体E(106mg，0.422mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(4ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.22ml，1.27mmol)和HATU(192mg，0.506mmol)，并将混合物在50℃下搅拌6小时，然后在室温下搅拌12小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物先后用水和盐水洗涤3次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物用快速硅胶色谱纯化(10-30％IPA的庚烷溶液)，然后再通过正相纯化(5g SiO₂，Biotage Isolera，50-80％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物23.1h(52mg，22％)为黄色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(m,12H),3.05(dd,2H),3.31(s,3H),3.34(s,3H),3.62(dd,2H),4.74(m,2H),4.97(m,1H),5.38(s,1H),6.80(m,1H),7.06(m,1H),7.18(s,1H),7.29(m,4H),7.52(m,1H),7.85(s,1H),8.10(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.93(569[M-H]^-)。

N-(2-甲酰基苄基)-N-((2S)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23.2h

将化合物23.1h(53mg，0.093mmol)溶解于丙酮(2ml)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(19mg，0.102mmol)。将混合物在室温下搅拌。35分钟后，UPLC-MS表明反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物23.2h(35mg，72％)，为黄色固体。直接使用。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.32(m,12H),3.05(dd,2H),3.63(dd,2H),4.74(m,2H),5.15(m,1H),6.82(dd,1H),7.08(m,1H),7.23(m,2H),7.56(m,3H),7.84(d,1H),7.94(s,1H),8.11(dd,1H),10.11(s,1H)。UPLC-MS rt 0.79(525[M+H]⁺),74％纯。

实施例34：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-((2S)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23H

将化合物23.2H(35mg，0.067mmol)悬浮在二氯甲烷(3ml)中，并加入甲胺盐酸盐(11mg，0.167mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(100μl，0.334mmol)和硫酸镁，并将反应在室温搅拌18小时。将混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。UPLC-MS rt 0.83(538[M+H]⁺)。直接使用。将残余物溶解于甲醇(3ml)中，然后加入硼氢化钠(4mg，0.080mmol)(放出气体)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速SPE纯化(2g SiO₂ EtOAc，然后是5-10％MeOH的DCM溶液至10％氨和MeOH的DCM溶液)，得到化合物23H(8.4mg，23％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CD₃OD,400MHz)δ1.30(s,9H),1.47(m,3H),2.47(s,3H),3.05(m,2H),3.50(dd,2H),3.84(d,2H),4.70(br s,2H),5.04(m,1H),6.87(ddd,1H),7.12(d,1H),7.27(m,6H),7.45(d,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.17(540[M+H]⁺),95％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-((2R)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23.1i

将酸I(～180mg，假定0.538mmol)、EDCI.HCl(124mg，0.646mmol)和HOAt(88mg，0.646mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(4ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(280μl，1.61mmol)和中间体E(135mg，0.538mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。反应不完全，因此添加了额外的EDCI.HCl(124mg，0.646mmol)、HOAt(88mg，0.646mmol)和N,N-二异丙基乙胺(280μl，1.61mmol)，并将反应在55℃搅拌4小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤，先后用水和盐水洗涤3次。将有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。使用正相色谱法纯化残余物(Biotage Isolera 10g SiO₂柱80-100％EtOAc的庚烷溶液，然后是5gSiO₂柱10-30％IPA的庚烷溶液)。该物质仍然含有少量杂质，因此通过快速硅胶色谱法纯化(80-100％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物23.1i(19mg，6％)，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),1.44和1.60(m,旋转异构体,3H),3.02(dd,2H),3.31(s,3H),3.34(s,3H),3.62(dd,2H),4.74(m,1H),4.97(q,2H),5.38(s,1H),6.80(m,1H),7.06(m,1H),7.18(s,2H),7.29(m,2H),7.49(m,2H),8.13(dd,1H),8.91(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.90(571[M+H]⁺),89％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-((2R)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23.2i

将化合物23.1i(19mg，0.033mmol)溶解于丙酮(1ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(7mg，0.036mmol)。将混合物在室温下搅拌。20分钟后，UPLC-MS表明反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物23.2i(10mg，95％)，为黄色固体。直接使用。UPLC-MS rt 0.80(525[M+H]⁺),80％纯。

实施例35：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-((2R)-1-氧代-1-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)丙烷-2-基)新戊酰胺23I

将化合物23.2i(10mg，0.019mmol)悬浮在二氯甲烷(1ml)中，并加入甲胺盐酸盐(3mg，0.048mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(17μl，0.095mmol)和硫酸镁，并将反应在室温搅拌18小时。将混合物倒入水中，并用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。UPLC-MS rt 0.83(538[M+H]⁺)。直接使用。将残余物溶解于甲醇(1ml)中，并加入硼氢化钠(1mg，0.023mmol)(放出气体)。将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂ EtOAc，然后是5-10％MeOH的DCM溶液至10％氨和MeOH的DCM溶液)，得到化合物23I(3mg，30％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.37(m,12H),2.47(s,3H),3.05(m,2H),3.49(m,3H),3.82(d,2H),4.85(m,1H),5.13(d,1H),6.87(ddd,1H),7.12(dd,1H),7.27(m,6H),7.44(d,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.25(540[M+H]⁺),96％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)-3-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.1j

将酸J(～100mg，假定0.27mmol)、EDCI.HCl(63mg，0.33mmol)和HOAt(45mg，0.33mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(106mg，0.80mmol)和中间体E(76mg，0.30mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤，先后用水和盐水洗涤3次。将有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速色谱法纯化(10g SiO₂，10-30％IPA的庚烷溶液)，得到化合物23.1j(145mg，93％)，为白色固体。UPLC-MS(CSH 2-50％)rt 1.30(573[M+H]⁺),90％纯。

N-(3-氟-2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.2j

将化合物23.1j(145mg，0.25mmol)溶解于丙酮(5ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(53mg，0.275mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入1ml水。再过5分钟后，UPLC-MS表明反应完全。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物23.2j(75mg，57％)，为黄色固体。直接使用。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.24(s,9H),3.06(dd,2H),3.49(dd,2H),4.12(br s,2H),5.28(br s,2H),6.86(t,1H),7.22(m,6H),7.53(s,1H),7.71(m,1H),8.02(d,1H),10.48(s,1H)。UPLC-MS(CSH 2-95％)rt 0.87(527[M-H]^-),80％纯。

实施例36：N-(3-氟-2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23J

将化合物23.2j(75mg，0.142mmol)悬浮在二氯甲烷(10ml)中，并加入甲胺盐酸盐(23mg，0.341mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(126μl，0.712mmol)和硫酸镁，并将反应在室温搅拌18小时。将混合物过滤并蒸发滤液。UPLC-MS(短时间碱性)rt 0.86(542[M+H]⁺)。直接使用。将残余物溶解于甲醇(5ml)中，并加入硼氢化钠(15mg，0.526mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速色谱法纯化(16g SiO₂0-10％MeOH的EtOAc溶液)，然后得到化合物23J(54mg，68％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(s,9H),2.40(s,3H),3.04(dd,2H),3.49(dd,3H),3.80(d,2H),4.15(br s,2H),5.00(br s,2H),6.88(dd,1H),7.04(m,2H),7.10(d,1H),7.21(d,1H),7.33(m,2H),7.53(s,1H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.87(544[M+H]⁺),97％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)-4,5-二氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.1k

将酸K(～98mg，假定0.27mmol)、EDCI.HCl(68mg，0.35mmol)和HOAt(48mg，0.35mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2.5ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.19ml，1.08mmol)和中间体E(68mg，0.27mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物温热至50℃保持3小时，然后用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤，先后用水和盐水洗涤3次。将有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速色谱法纯化(SiO₂，7:3–8:2EtOAc/庚烷)，得到化合物23.1k(40mg，25％)，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.39(s,9H),3.00(m,2H),3.37(s,6H),3.57(m,2H),4.10(m,2H),5.06(s,2H),5.43(s,1H),6.80(dd,1H),7.04(m,2H),7.20(m,2H),7.42(s,1H),8.13(dd,1H),8.32(s,1H),9.39(s,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 2.13(593[M+H]⁺),72％纯。

N-(4,5-二氟-2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23.2k

将化合物23.1k(40mg，0.068mmol)溶解于丙酮(1.5ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(14mg，0.074mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。UPLC-MS表明反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物23.2k(34mg，92％)，为黄色固体。直接使用。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.39(s,9H),3.02(dd,2H),3.61(dd,2H),4.10(br s,2H),5.31(s,2H),6.81(dd,1H),7.37(m,5H),8.13(dd,1H),8.31,8.80(2s,1H),9.16(s,1H),10.10(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.81(547[M+H]⁺)。

实施例37：N-(4,5-二氟-2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23K

将化合物23.2k(34mg，0.062mmol)悬浮在二氯甲烷(2ml)中，并加入甲胺盐酸盐(8.5mg，0.125mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(50μl，0.249mmol)和硫酸镁，并将反应在室温搅拌72小时。将混合物过滤并蒸发滤液。将残余物溶解于甲醇(2ml)中，并加入硼氢化钠(4mg，0.093mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过制备型HPLC纯化(XBridge C18，ID 19mm，长度150mm，流速20ml/min：40-45％MeCN的pH 10[NH₄HCO₃与NH₄OH]溶液，历时8分钟)，得到化合物23K(3.8mg，11％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.31(s,9H),2.36(s,3H),3.06(dd,2H),3.50(dd,2H),3.71(s,2H),4.25(m,2H),4.89(br s,2H),6.87(dd,1H),7.16(m,4H),7.32(d,1H),7.50(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法2-50％)rt 2.54(562[M+H]⁺),98％纯。

(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯23.1l

将酸L(80mg，0.22mmol)、EDCI.HCl(50mg，0.26mmol)和HOAt(35mg，0.26mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(4ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(115μl，0.66mmol)和中间体E(55mg，0.22mmol)，并将混合物在室温搅拌4小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(1：1庚烷/丙酮)，得到化合物23.1l(110mg，84％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.36(s,9H),1.51(s,9H),3.04(dd,2H),3.61(dd,2H),4.06(br s,2H),4.83(s,2H),6.81(dd,1H),7.06(m,2H),7.17(m,3H),7.30(dt,1H),7.51(s,1H),7.75(br,s,1H),8.10(m,2H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.31(498[M-Boc+H]⁺),88％纯。

实施例38：N-(2-氨基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23L

将化合物23.1l(20mg，0.033mmol)溶解于二氯甲烷(1ml)中。加入三氟乙酸(0.05ml)，并将溶液在室温搅拌7小时。将混合物倒入水中，水层用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-50％MeCN/水/0.1％TFA，历时20分钟)，得到化合物23L(10.3mg，48％)，为无色玻璃状物(TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),3.09(dd,2H),3.53(dd,2H),4.17(br s,2H),4.61(br s,1H),4.75(br s,2H),6.72(m,1H),6.77(m,1H),6.91(m,1H),7.00(m,1H),7.09(m,1H),7.16(m,1H),7.25(m,1H),7.39(m,1H),7.57(brs,1H),8.07(m,1H)。HPLC(25min酸性)rt 12.28,99％纯。MS 498[M+H]⁺

N-(2-溴苄基)-N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)新戊酰胺23.1m

将酸B(131mg，0.40mmol)、EDCI.HCl(96mg，0.50mmol)和HOAt(74mg，0.54mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2.3ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(0.19ml，1.09mmol)和中间体F(99mg，0.37mmol)，并将混合物在室温搅拌90小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用水、20％柠檬酸水溶液、水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(5g SiO₂，EtOAc)，得到化合物23.1m(121mg，56％)，为淡黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.81(575[M+H]⁺),82％。

N-(2-氰基苄基)-N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)新戊酰胺23.2m

将化合物23.1m(100mg，0.17mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中，并通过将氩气鼓泡通过溶液而脱气。加入氰化锌(II)(36mg，0.31mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(30mg，0.026mmol)，并将混合物在微波辐射下于120℃搅拌1小时。UPLC-MS指示转化不完全。加入额外的四(三苯基膦)钯(0)(70mg，0.061mmol)，并将混合物在微波辐射下于120℃搅拌1小时。UPLC-MS指示转化完全。使反应在室温下静置3天。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取。将有机萃取物用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(5g SiO₂ 0-50％EtOAc的DCM溶液)，得到化合物23.2m(40mg，44％)，为淡黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.35(s,9H),2.27(s,3H),3.01(t,2H),3.58(dd,2H),4.14(s,2H),5.09(br s,2H),6.80(dd,1H),7.10(m,1H),7.36(d,1H),7.42(t,1H),7.61(t,1H),7.70(d,1H),7.79(s,1H),8.12(d,1H),8.30(br s,1H),9.39(br s,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法20-70％)rt 1.87(522[M+H]⁺),94％纯。

实施例39：N-(2-(氨基甲基)苄基)-N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)新戊酰胺23M

在氩气气氛下将化合物23.2m(40mg，0.078mmol)悬浮于甲醇(2ml)和三氟乙酸(0.2ml)中。加入钯碳(10％，15mg)，并在气球压力下引入氢。在室温下搅拌6小时后，UPLC-MS显示进展缓慢，因此添加了额外的钯碳(10％，15mg)，并在200psi下重新引入氢气，并在室温下搅拌18小时。UPLC-MS分析显示转化不完全，因此在800psi下重新引入氢气，并将混合物在室温下搅拌24小时。将混合物通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤，并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂,0-10％MeOH的EtOAc溶液，然后10％MeOH的DCM溶液)，得到化合物23M(16mg，39％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.20(s,3H),3.01(m,2H),3.47(d,2H),4.22(s,2H),4.47(br s,2H),4.82(br s,2H),6.86(dd,1H),7.14(m,3H),7.41(m,4H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.67(526[M+H]⁺),98％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)新戊酰胺23.1n

将中间体G(78mg，0.23mmol)、EDCI.HCl(47mg，0.245mmol)和HOAt(33mg，0.245mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(3ml)中。加入N,N-二异丙基乙胺(134μl，0.754mmol)和中间体F(50mg，0.19mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。UPLC-MS表明转化不完全，因此添加了额外的EDCI.HCl(47mg，0.245mmol)、HOAt(33mg，0.245mmol)和N,N-二异丙基乙胺(67μl，0.38mmol)，并在室温下继续搅拌24小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取。将有机萃取物用水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(80％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物23.1n(68mg，63％)，为淡黄色固体。

UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.85(569[M-H]^-),78％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)新戊酰胺23.2n

将化合物23.1n(68mg，0.12mmol)溶解于丙酮(2ml)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(25mg，0.13mmol)，并将混合物在室温搅拌30分钟。显现出蓝色。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取两次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到化合物23.2n(56mg，89％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.75(523[M-H]^-),70％纯。

N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)-N-(2-((甲基亚氨基)甲基)苄基)新戊酰胺23.3n

将化合物23.2n(56mg，0.107mmol)悬浮在二氯甲烷(2ml)中，并加入甲胺盐酸盐(14.5mg，0.214mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(76μl，0.43mmol)和硫酸镁，并将混合物在室温搅拌76小时。将混合物过滤并蒸发滤液。将残余物溶解于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠、水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液，得到化合物23.3n(55mg，96％)，为黄色玻璃状物。直接使用。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.75(538[M+H]⁺)。

实施例40：N-(2-((5-甲基-2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-6-基)氨基)-2-氧乙基)-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)新戊酰胺23N

将化合物23.3n(55mg，0.102mmol)溶解于甲醇(2ml)中，在0℃(冰/水)冷却，然后分批加入硼氢化钠(7.8mg，0.204mmol)(放出气体)。将混合物在室温下搅拌2小时。UPLC-MS表明反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取。将有机萃取物用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-10％MeOH的DCM溶液)，然后将物质在5％甲醇的二乙醚溶液中研磨，得到产物23N(9.5mg，17％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.19(s,3H),2.70(s,3H),3.05(d,2H),3.45(d,2H),4.20(s,2H),4.47(br s,2H),4.80(s,2H),6.85(dd,1H),7.14(m,3H),7.41(m,4H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.91(540[M+H]⁺),96％纯。

实施例41：N-(2-(N-羟基甲脒基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺(N-(2-(N-Hydroxycarbamimidoyl)benzyl)-N-(2-oxo-2-((2'-oxo-1,1',2',3-tetrahy drospiro[indene-2,3'-pyrrolo[2,3-b]pyridin]-5-yl)amino)ethyl)pivalamide)23O

将中间体K(11mg，0.022mmol)、羟胺(50％的水溶液，73mg，2.2mmol)和三乙胺(331mg，3.3mmol)的乙醇(1.2ml)溶液在微波辐射下于70℃加热3小时。加入甲醇，并将混合物直接通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-50％MeCN水/乙腈，历时20分钟)，得到所需化合物23O(10mg，85％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.36(s,9H),3.09(dd,2H),3.53(dd,2H),4.14(br s,2H),4.64(br s,1H),5.01(br s,2H),6.90(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(m,1H),7.41(m,3H),7.49(m,1H),7.55(m,2H),8.08(dd,1H)。HPLC:99％纯。MS:541[M+H]⁺。

实施例42：N-(2-(乙酰胺酰胺甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺(N-(2-(Acetimidamidomethyl)benzyl)-N-(2-oxo-2-((2'-oxo-1,1',2',3-tetrahydros piro[indene-2,3'-pyrrolo[2,3-b]pyridin]-5-yl)amino)ethyl)pivalamide)23P

将化合物23A(5mg，0.01mmol)和乙腈(8.2mg，0.2mmol)溶解于甲苯(0.7ml)中，然后添加二甲基氯化铝(0.01ml，0.08mmol)，并将混合物在微波辐射下于140℃加热1小时。通过添加三滴水将混合物淬灭，用乙酸乙酯稀释，并通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。蒸发滤液，然后直接通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％MeCN水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，得到所需化合物23P(1.9mg，35％)，为无色玻璃状物(TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.36(s,9H),2.28(s,3H),3.10(dd,2H),3.51(dd,2H),4.31(br s,2H),4.53(br s,2H),4.85(br s,2H),6.92(dd,1H),7.17(dd,1H),7.25(d,1H),7.38(m,5H),7.53(br s,1H),8.08(d,1H)。HPLC:97％纯。MS:553[M+H]⁺。

实施例43：N-(2-(胍基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺23Q

将化合物23A(15mg，0.03mmol)和4-苄基-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-甲酰亚胺(carboximidamide)盐酸盐(根据Tetrahedron Letts，2002，第1401页制备；30mg，0.117mmol)和三乙胺(15mg，0.15mmol)加入到四氢呋喃(0.3ml)和乙腈(0.3ml)中，并将混合物在微波辐射下于90℃加热1小时。将混合物用甲醇稀释，然后直接通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-45％MeCN水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，得到所需化合物23Q(8.9mg，55％)，为无色玻璃状物(TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.36(s,9H),3.10(dd,2H),3.52(dd,2H),4.29(br s,2H),4.48(m,2H),4.85(br s,2H),6.93(dd,1H),7.19(dd,1H),7.24(d,1H),7.36(m,5H),7.52(br s,1H),7.87(m,1H),8.07(dd,1H)。HPLC:98％纯。MS:554[M+H]⁺。

通用路线E

中间体L的合成

方案24

2-((叔丁氧基羰基)(2-(二甲氧基甲基)苄基)氨基)乙酸甲酯24.1

将中间体B(3.19g，12.6mmol)溶解于四氢呋喃(20ml)中，并加入饱和碳酸氢钠溶液(10ml)。向其中加入二碳酸二叔丁酯(3.03g，13.9mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物倒入乙酸乙酯中，水层用乙酸乙酯萃取两次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(10％EtOAc的庚烷溶液，含1％Et₃N)，得到化合物24.1(2.48g，56％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.45(s,9H),3.29(d,6H),3.69(s,3H),3.76(s,1H),3.90(s,1H),4.66(d,2H),5.40(s,1H),7.27(m,3H),7.51(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.89(190[M-2OMe-Boc+H]⁺),90％纯。

2-((叔丁氧基羰基)(2-甲酰基苄基)氨基)乙酸甲酯24.2

将化合物24.1(2.48g，7.0mmol)溶解于丙酮(30ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(1.46g，7.7mmol)。将混合物在室温搅拌1.5小时，然后倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取五次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物24.2(2.14g，99％)，为红色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.40(s,9H),3.70(s,3H),3.84(s,1H),3.97(s,1H),4.97(d,2H),7.47(m,2H),7.55(m,1H),7.84(d,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.82(190片段)。

2-((2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)(叔丁氧基羰基)氨基)乙酸甲酯24.3

将化合物24.2(762mg，2.48mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)中，并加入氮杂环丁烷盐酸盐(696mg，7.44mmol)，随后加入N,N-二异丙基乙胺(1.6g，12.4mmol)、硫酸钠(1.05g)和三乙酰氧基硼氢化钠(789mg，3.72mmol)。将反应在室温下搅拌3小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将有机萃取物用硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(20％EtOAc的庚烷溶液，含1％Et₃N)，得到化合物24.3(597mg，69％)，为无色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.47(s,9H),2.03(quin,2H),3.14(t,4H),3.52(d,2H),3.71(s,3H),3.81(s,1H),3.92(s,1H),4.64(d,2H),7.21(m,4H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.89(349[M+H]⁺),94％纯。

2-((2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)(叔丁氧基羰基)氨基)乙酸24.4

将化合物24.3(567mg，1.63mmol)溶解于甲醇中，然后加入2.5M氢氧化钠(5.2ml，13.03mmol)，并将反应混合物在室温搅拌18小时。除去挥发物，并加入1M HCl(13ml)以中和混合物。除去挥发物，并与甲苯共沸两次，得到化合物24.4(假定1.63mmol)，为无色固体。直接使用。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.51(333[M-H]^-),97％纯。

实施例44：2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯24A

在氩气气氛下将化合物24.4(～1.63mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(1.7ml，9.78mmol)。加入EDCI.HCl(376mg，1.95mmol)和HOAt(267mg，1.95mmol)，然后加入中间体E(409mg，1.63mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过柱色谱法纯化(300ml二氧化硅，9：1EtOAc/MeOH至9：1DCM/MeOH，然后是9：1DCM/MeOH与氨)，得到化合物24A(631mg，68％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.47(s,9H),2.09(m,2H),3.06(dd,2H),3.32(m,4H),3.50(dd,2H),3.71(m,2H),3.92(br s,2H),4.68(s,2H),6.86(dd,1H),7.13(dd,1H),7.27(m,6H),7.80(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt1.26(568[M+H]⁺),95％纯。

2-((2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)氨基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺二盐酸盐中间体L

将化合物24A(199mg，0.35mmol)溶解于1,4-二噁烷(5ml)中，然后加入4M HCl的二噁烷(4ml，16mmol)溶液，并将混合物在室温搅拌1小时，此后通过UPLC-MS确定反应完成。将混合物用二乙醚稀释，然后通过倾析出液体将固体分离。将该固体用二乙醚洗涤三次，干燥，得到化合物中间体K(192mg，定量)，为无色固体。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.47(m,1H),2.59(m,1H),3.06(dd,2H),3.32(m,2H),3.57(dd,2H),4.21(m,2H),4.32(m,2H),4.53(s,2H),4.70(s,2H),7.27(m,2H),7.49(d,1H),7.62(m,6H),8.12(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 0.68(468[M+H]⁺),95％纯。

化合物25A-I的合成

方案25

实施例45：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-3,3,3-三氟-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺25A

在氩气气氛下，将中间体L(25mg，0.046mmol)加入到3,3,3-三氟丙酸(6.5mg，0.051mmol)、EDCI.HCl(11.4mg，0.06mmol)和HOAt(8.2mg，0.06mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(30mg，0.231mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤两次，然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(10-15％MeOH的EtOAc溶液)，然后从1∶20的甲醇/乙醚中结晶，得到化合物25A(6.1mg，23％)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.08(m,2H),3.05(dd,2H),3.24(m,2H),3.33(m,1H),3.54(m,5H),4.17(s,2H),4.77(br d,2H),4.82(m,2H),6.85(dd,1H),7.11(m,1H),7.26(m,6H),7.45(br d,1H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.03(578[M+H]⁺),98％纯。

实施例46：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环戊烷甲酰胺25B

在氩气气氛下，将中间体L(27mg，0.05mmol)加入到环戊烷羧酸(6.3mg，0.055mmol)、EDCI.HCl(13.3mg，0.07mmol)和HOAt(9.6mg，0.07mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(33mg，0.25mmol)。将混合物在室温搅拌3天，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤，然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-5％MeOH的EtOAc溶液，然后是5％MeOH的DCM溶液，然后是5％MeOH与氨的DCM溶液)，得到含有一些烷基杂质的粗化合物。通过溶解于乙腈中并用庚烷洗涤将其纯化。将乙腈层蒸发。将其通过SPE进一步纯化(STMAd2g MeOH，然后是氨的MeOH溶液，然后是SCX-22g MeOH，然后是氨的MeOH溶液)，得到化合物25B(2.0mg，7％)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.60(m,2H),1.80(m,8H),2.10(m,1H),2.26(m,1H),3.05(m,2H),3.30(m,2H),3.50(m,2H),3.68(m,2H),4.12(s,1H),4.30(s,1H),4.80(m,1H),4.95(m,2H),6.85(dd,1H),7.12(dd,1H),7.30(m,6H),7.49(m,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.18(564[M+H]⁺),94％纯。

实施例47：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-1-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-环丙烷甲酰胺25C

在氩气气氛下，将中间体L(35mg，0.065mmol)加入到1-甲基环丙烷羧酸(7mg，0.072mmol)、EDCI.HCl(16mg，0.085mmol)和HOAt(12mg，0.085mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(57μl，0.33mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(20％MeOH的EtOAc溶液)，并通过快速硅胶色谱法再次纯化(10％氨和MeOH的DCM溶液)，得到化合物25C(1mg，3％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ0.65(m,2H),0.98(m,1H),1.02(m,2H),1.35(s,3H),2.03(m,2H),3.05(m,2H),3.50(m,4H),3.70(brs,2H),4.00(br s,1H),4.40(br s,2H),5.02(br s,2H),6.85(dd,1H),7.11(m,1H),7.26(m,6H),7.45(br d,1H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.01(550[M+H]⁺),96％纯。

实施例48：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-2-氟-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺25D

在氩气气氛下，将中间体L(35mg，0.065mmol)加入到2-氟异丁酸(7.6mg，0.072mmol)、EDCI.HCl(16mg，0.085mmol)和HOAt(12mg，0.085mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(57μl，0.33mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(20％MeOH的EtOAc溶液)，并通过快速硅胶色谱法再次纯化(10％氨和MeOH的DCM溶液)，得到化合物25D(3.9mg，11％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.28(s,2H),1.64(s,3H),1.72(s,3H),2.05(br s,2H),3.06(dd,2H),3.50(dd,2H),3.65(s,3H),4.03(br s,1H),4.36(br s,1H),5.07(br s,1H),6.85(dd,1H),7.11(m,1H),7.26(m,6H),7.45(br d,1H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.06(556[M+H]⁺),92％纯。

实施例49：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环丙烷甲酰胺25E

在氩气气氛下，将中间体L(45mg，0.083mmol)加入到环丙烷羧酸(7.7mg，0.09mmol)、EDCI.HCl(20.6mg，0.11mmol)和HOAt(15mg，0.11mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(73μl，0.41mmol)。将混合物在室温搅拌72小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(5-10％MeOH的EtOAc溶液，然后是10％MeOH/NH₄OH的EtOAc溶液)，然后在二乙醚中研磨，得到化合物25E(26mg，58％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ0.85(m,2H),0.99(m,2H),1.72(s,3H),2.05(br s,2H),3.06(dd,2H),3.50(dd,2H),3.65(s,3H),4.03(br s,1H),4.36(br s,1H),5.07(br s,1H),6.85(dd,1H),7.11(m,1H),7.26(m,6H),7.45(br d,1H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 0.96(536[M+H]⁺),94％纯。

实施例50：2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸甲酯25F

将中间体L(34mg，0.059mmol)在二氯甲烷(2ml)和饱和碳酸氢钠(1ml)中剧烈搅拌，然后滴加氯甲酸甲酯(5.5ml，0.07mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将水相用二氯甲烷萃取两次。将有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂ 0-10％MeOH的EtOAc溶液至10％MeOH与氨的EtOAc溶液)，得到化合物25F(2mg，6％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.23(m,2H),3.05(m,2H),3.49(dd,2H),3.60(m,4H),3.78(s,3H),4.00(m,4H),4.72(s,2H),6.87(dd,1H),7.12(m,1H),7.20(m,1H),7.30(m,5H),7.43(s,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS(CSH 2-50％)rt 0.55(526[M+H]⁺),100％纯。

实施例51：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)苯甲酰胺25G

在氩气气氛下，将中间体L(35mg，0.065mmol)加入到苯甲酸(8.1mg，0.068mmol)、EDCI.HCl(15mg，0.078mmol)和HOAt(11mg，0.078mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(68μl，0.39mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-6％MeOH与氨的EtOAc溶液)，然后在二乙醚中与5％甲醇一起研磨，得到化合物25G(3mg，9％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.92(m,1H),2.07(m,1H),3.07(m,4H),3.37(m,2H),3.58(m,3H),3.78(s,1H),3.99(s,1H),4.24(s,1H),4.80(s,1H),4.99(s,1H),6.88(dd,1H),7.11(m,1H),7.39(m,12H),8.02(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.46(572[M+H]⁺),90％纯。

实施例52：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡啶甲酰胺25H

在氩气气氛下，将中间体L(35mg，0.065mmol)加入到2-吡啶甲酸(8.0mg，0.068mmol)、EDCI.HCl(15mg，0.078mmol)和HOAt(11mg，0.078mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(68μl，0.39mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化(0-6％MeOH与氨的EtOAc溶液)，然后与甲苯共沸3次，得到化合物25H(4.1mg，12％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.00(m,2H),3.07(m,3H),3.27(s,1H),3.50(m,3H),3.72(s,1H),4.23(s,2H),4.89(s,2H),5.00(s,2H),6.88(dd,1H),7.10(m,1H),7.39(m,8H),7.78(m,1H),7.93(dt,1H),8.04(dd,1H),8.57(m,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.76(573[M+H]⁺),93％纯。

实施例53：N-(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺25I

在氩气气氛下，将中间体L(35mg，0.065mmol)加入到噻唑-4-羧酸(8.0mg，0.061mmol)、EDCI.HCl(15mg，0.078mmol)和HOAt(11mg，0.078mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(70μl，0.39mmol)。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取物用水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过SPE纯化(2g SiO₂5％MeOH的EtOAc溶液，然后是5％MeOH与氨的EtOAc溶液)，然后在二乙醚中研磨，得到化合物25I(3.1mg，8％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.00(m,2H),3.03(d,2H),3.22(m,4H),3.51(m,4H),4.21(s,1H),4.51(s,1H),4.99(s,1H),5.20(s,1H),6.86(dd,1H),7.10(d,1H),7.41(m,7H),8.03(dd,1H),8.23(m,1H),9.00(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.74(579[M+H]⁺),92％纯。

中间体M的合成

方案26

(2-氧代-2-((2‘-氧代-1,1‘,2‘,3-四氢螺[茚-2,3‘-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯26.1

在氩气气氛下，将N,N-二异丙基乙胺(6.24ml，35.8mmol)加入到Boc-甘氨酸-OH(2.4g，13.7mmol)、EDCI.HCl(2.52g，13.2mmol)和HOAt(1.8g，13.2)的N,N-二甲基甲酰胺(25ml)溶液中。加入中间体E(3.0g，11.9mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(10ml)洗涤。将混合物在室温搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用水、20％柠檬酸水溶液洗涤3次，用水洗涤3次，用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液，得到化合物26.1(4.84mg，99％)，为淡黄色玻璃状物。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.45(s,9H),3.06(dd,2H),3.50(dd,2H),3.84(br s,2H),6.87(dd,1H),7.12(d,1H),7.22(d,1H),7.38(d,1H),7.55(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(CSH 2-50％)rt 0.93(409[M+H]⁺)。

2-氨基-N-(2‘-氧代-1,1‘,2‘,3-四氢螺[茚-2,3‘-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺二盐酸盐中间体M

将化合物26.1(4.84ml，11.9mmol)在3M HCl的环戊基甲基醚(20ml，60mmol)溶液中研磨，直至获得流动的悬浮液。将混合物在室温搅拌3小时，此后UPLC-MS检测反应完成。通过倾析溶剂将固体分离，然后用二乙醚洗涤并倾析三次。将固体干燥，得到中间体M(4.62mg，定量)，为米色粉末。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.43(309[M+H]⁺),93％纯。

醛中间体N-P的合成

方案27

醛中间体N-P的合成

将溴苯甲醛27.1(3.0g，14.78mmol)溶解于甲醇(20ml)中，然后加入原甲酸三甲酯(10ml)和对甲苯磺酸一水合物(270mg，1.48mmol)。将该溶液温热至50℃保持3.5小时。将混合物在冰水上冷却，然后加入三乙胺(3ml)。除去挥发物，并将混合物用乙醚和水稀释。将水层用乙醚萃取两次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。将残余物通过柱色谱法纯化(250ml二氧化硅，10-15％乙醚的己烷溶液)，得到化合物27.2，为无色油状物。

将27.2(1g，4.02mmol)溶解于四氢呋喃(15ml)中，并在氩气下在干冰/丙酮中冷却。逐滴加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，2.4ml，6.02mmol)，然后在干冰/丙酮上搅拌1小时。一次性加入N,N-二甲基甲酰胺(0.63mmol)，继续搅拌1小时，然后使其到室温1.5小时。将反应倒入水中，并用乙醚萃取三次。将有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。如果需要，将获得的油状物通过快速硅胶色谱法纯化(二乙醚的己烷溶液)，得到中间体N-P。

2-(二甲氧基甲基)-5-氟苯甲醛中间体N

由2-溴-4-氟苯甲醛制得27.2n(3.7g，定量)的通用方法

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.37(s,6H),5.51(s,1H),7.03(dt,1H),7.30(dd,1H),7.57(dd,1H)。

纯化(10-15％己烷的乙醚溶液)后，将27.1n转化为中间体N(0.45g，57％)。H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.38(s,6H),5.78(s,1H),7.26(dt,1H),7.63(m,2H),10.43(s,1H)。UPLC(短时间碱性方法):rt 0.78(167[M+H]+)94％纯。

2-(二甲氧基甲基)-4-氟苯甲醛中间体O

由2-溴-5-氟苯甲醛制得27.2o(4.8g，定量)的通用方法¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.38(s,6H),5.50(s,1H),6.93(dt,1H),7.35(dd,1H),7.50(dd,1H)。

纯化(20％己烷的乙醚溶液)后，将27.2o转化为中间体O(0.55g，69％)。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.39(s,6H),5.92(s,1H),7.16(dt,1H),7.41(dd,1H),7.95(dd,1H),10.33(s,1H)。

2-(二甲氧基甲基)-6-氟苯甲醛中间体P

由2-溴-3-氟苯甲醛制得27.2p(3.54g，96％)的通用方法

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.39(s,6H),5.56(s,1H),7.11(dt,1H),7.31(m,1H),7.39(d,1H)。

将27.2p转化为中间体P(0.79g，99％)，无需纯化。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.42(s,6H),5.99(s,1H),7.16(m,1H),7.56(m,2H),10.51(s,1H)。

中间体Q–T的通用合成

方案28

将中间体M(385-480mg，1.01-1.27mmol)悬浮在二氯甲烷(10-14ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.8-0.98ml，4.54-5.8mmol)，得到溶液。5分钟后，加入中间体A、N、O或P，然后加入硫酸镁(过量)。将混合物在室温搅拌1至5天，如果反应不完全，则加热至50℃。将混合物过滤并用二氯甲烷洗涤，并将滤液蒸发。将粗混合物溶解于甲醇(8-10ml)中，并在5分钟内分批加入硼氢化钠(46-77mg，1.21-2.03mmol)，然后在室温下搅拌1小时。如果需要，加入额外的硼氢化钠(50mg，0.66-1.32mmol)，并在室温搅拌1-3小时。将混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物中间体Q-T。直接使用。

2-((2-(二甲氧基甲基)-5-氟苄基)氨基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺中间体Q

如方案28中所述，使用中间体N(0.2g，1.01mmol)、中间体M(385mg，1.01mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.8ml，4.5mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液在室温下合成3天。使用硼氢化钠(46mg，1.21mmol)的甲醇(10ml)溶液将亚胺还原2.5小时。通过快速硅胶色谱法纯化(Isolera，SiO₂ 10-30％IPA的庚烷溶液)，得到中间体Q(120mg，24％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CD₃OD,300MHz)δ3.05(dd,2H),3.33(s,6H),3.44(s,2H),3.61(dd,2H),3.91(s,2H),5.52(s,1H),6.80(dd,1H),7.00(td,1H),7.09(m,2H),7.21(d,1H),7.39(d,1H),7.56(dd,1H),7.69(s,1H),8.13(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.78(489[M-H]^-),88％纯。

2-((2-(二甲氧基甲基)-4-氟苄基)氨基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺中间体R

如方案28中所述，使用醛中间体O(277mg，1.4mmol)、中间体M(0.48g，1.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.98ml，5.8mmol)的二氯甲烷(14ml)溶液在室温下合成2天，然后在50℃下合成6小时。使用硼氢化钠(77mg，2.03mmol)的甲醇(8ml)溶液将亚胺还原40分钟，添加额外的硼氢化钠(50mg，1.32mmol)还原1小时。通过快速硅胶色谱法纯化(5-10％MeOH的EtOAc溶液)，得到中间体R(125mg，20％)，为无色玻璃状物。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.02(dd,2H),3.34(s,6H),3.42(s,2H),3.64(dd,2H),3.87(s,2H),5.59(s,1H),6.80(dd,1H),7.06(m,1H),7.30(m,4H),7.71(s,1H),7.84(br s,1H),8.11(dd,1H),9.43(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.78(489[M-H]^-),89％纯。

2-((2-(二甲氧基甲基)-6-氟苄基)氨基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺中间体S

如方案28中所述，使用乙醛中间体P(277mg，1.4mmol)、中间体M(0.48g，1.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.98ml，5.8mmol)的二氯甲烷(14ml)溶液在室温下合成2天。使用硼氢化钠(77mg，2.03mmol)的甲醇(8ml)溶液将亚胺还原1.5小时。通过快速硅胶色谱法纯化(1.5-10％MeOH的EtOAc溶液)，得到中间体S(210mg，34％)，为无色玻璃状物。¹HNMR(CD₃OD,300MHz)δ3.04(dd,2H),3.34(s,6H),3.40(s,2H),3.49(dd,2H),3.96(s,2H),5.59(s,1H),6.85(dd,1H),7.12(m,2H),7.21(d,1H),7.33(m,3H),7.57(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(CSH 2-95％)rt 0.40(427[M-2OMe+H]⁺),90％纯。

2-((2-(二甲氧基甲基)苄基)氨基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺中间体T

如方案28中所述，使用中间体A(方案1，252mg，1.4mmol)、中间体M(484mg，1.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.88ml，5.08mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液在室温下合成2天，然后在回流下合成3天。使用硼氢化钠(48mg，1.27mmol)的甲醇(10ml)溶液将亚胺还原，在1h(25mg)和2h(30mg)时添加额外的硼氢化钠，总共反应5小时。通过快速硅胶色谱法纯化(0-12.5％MeOH的EtOAc溶液)，得到中间体T(275mg，46％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ3.05(dd,2H),3.34(s,6H),3.51(dd,2H),3.92(s,2H),4.91(s,2H),5.62(s,1H),6.86(dd,1H),7.14(d,1H),7.30(d,5H),7.55(s,2H),8.04(d,1H)。UPLC-MS(CSH 2-50％)rt0.57(409[M-2MeO+H]⁺),87％纯。

替代–甲磺酸酯路线至中间T

方案29

(2-(二甲氧基甲基)苯基)甲醇29.1

在氩气下将中间体A(1g，5.55mmol)溶解于甲醇(30ml)中，并在冰/水上冷却。在15分钟内分批加入氢硼化钠(231mg，6.10mmol)，然后在冰/水上继续搅拌10分钟，然后使其至室温1小时。加入乙酸(1ml)，然后将反应倒入饱和碳酸氢钠中，并用二乙醚萃取两次。将有机层用饱和碳酸氢钠、水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液，残余物通过快速硅胶色谱纯化(50-100％DCM的己烷溶液)，得到化合物29.1(480mg，48％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.06(t,1H),3.37(s,6H),4.71(d,2H),5.51(s,1H),7.35(m,3H),7.52(dd,1H)。

2-(二甲氧基甲基)苄基甲磺酸酯29.2

在氩气下将化合物29.1(240mg，1.45mmol)溶解于乙酸乙酯(5ml)中，加入三乙胺(0.37ml，2.64mmol)，并在冰/水上冷却。滴加甲磺酰氯(112μl，1.45mmol)，然后在冰/水上继续搅拌2小时。将反应通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(50-100％DCM的己烷溶液)，得到化合物29.2(340mg，99％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.96(s,3H),3.34(s,6H),5.43(s,2H),5.48(s,1H),7.39(m,2H),7.48(m,1H),7.58(m,1H)。

将中间体M(570mg，1.50mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)和三乙胺(0.84ml)中，然后加入29.2(390mg，1.50mmol)。将混合物在室温搅拌24小时，然后在60℃加热16小时，然后静置2天。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并将形成的固体过滤并用水洗涤并干燥，得到粗产物。将滤液用乙酸乙酯萃取三次，然后将有机相用盐水洗涤三次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物中间体T(90mg)。将粗固体进一步通过快速硅胶色谱纯化(0-4％MeOH的DCM溶液)，得到化合物中间体T(100mg)—合并收率27％。UPLC-MS(短时间碱性方法)0.75(471,[M-H]^-),85％纯。

通用路线F

方案30

步骤1

A：酰氯

在氩气气氛下将中间体Q、R、S或T(0.16-0.25mmol)溶解于二氯甲烷(3-10ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.06-0.13ml，0.35-0.74mmol)。加入酰氯R¹C(O)Cl(0.13-0.24mmol)，并将混合物在室温下搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物30.1。

B：羧酸

将中间体Q、R、S或T(0.106-0.116mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3-4ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(56-61μl，0.32-0.35mmol)、羧酸X'COOH(0.116-0.128mmol)、EDCI.HCl(26-30mg，0.137-0.151mmol)和HOAt(19-20.5mg，0.137-0.151mmol)。将反应在室温或80℃下搅拌18h，取决于酸。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，用水洗涤三次，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物30.1。

步骤2

将化合物30.1(0.04-0.125mmol)溶解于丙酮(1.5-3ml)中，然后加入对甲苯磺酸一水合物(8-26mg，0.04-0.14mmol)。将混合物在室温搅拌30-60min，然后倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到化合物30.2。

步骤3

将化合物30.2(0.04–0.104mmol)溶解于二氯甲烷(3-5ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(46–100μl，0.26–0.52mmol)、甲胺盐酸盐(10–18mg，0.15–0.26mmol)和硫酸镁，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物过滤，用DCM洗涤。将滤液用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将残余物溶解于甲醇中，然后加入硼氢化钠(2.7–5mg，0.073–0.125mmol)(在0℃或室温下)，并将反应在室温下搅拌1-3小时，通过UPLC-MS监测。完成后，将反应倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物干燥(硫酸钠)、过滤并蒸发。相关纯化方法，请参见具体实施例。

N-(2-(二甲氧基甲基)-5-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.1a

根据通用路线F(步骤1A)，由中间体Q(125mg，0.25mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(0.13ml，0.74mmol)、新戊酰氯(30μl，0.24mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(5g SiO₂ SPE，10–30％IPA的庚烷溶液)，得到化合物30.1a(72mg，52％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.31(s,9H),3.03(dd,2H),3.32(s,6H),3.61(dd,2H),4.05(s,2H),4.70(s,2H),5.34(s,1H),6.81(dd,1H),6.89(dd,1H),6.98(td,1H),7.06(dd,1H),7.19(t,1H),7.36(t,1H),7.54(m,2H),8.12(dd,1H),8.56(br s,1H),9.13(br s,1H)。UPLC-MS(CSH)rt 0.85(575[M+H]⁺),87％纯。

N-(5-氟-2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.2a

根据通用路线F(步骤2)由30.1a(72mg，0.125mmol)、对甲苯磺酸一水合物(26mg，0.14mmol)的丙酮(3ml)溶液合成得到化合物30.2a(55mg，83％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),3.02(dd,2H),3.61(dd,2H),4.08(m,2H),5.36(s,2H),6.81(dd,1H),7.07(dd,2H),7.22(m,2H),7.36(d,1H),7.54(s,1H),7.90(dd,1H),8.13(dd,1H),8.57(s,1H),9.27(s,1H),10.06(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.76(529[M+H]⁺),78％纯。

实施例54：N-(5-氟-2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30A

根据通用路线F(步骤3)，从30.2a(55mg，0.104mmol)、甲胺盐酸盐(18mg，0.26mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.1ml，0.52mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.84(542[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(5mg，0.125mmol)的甲醇(2ml)溶液还原2小时。通过制备型HPLC纯化(XBridge C18，ID 19mm，长度150mm，流速20ml/min：40-45％MeCN的pH 10[NH₄HCO₃与NH₄OH]溶液，历时8分钟)，然后通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc至10％MeOH的DCM溶液至10％MeOH与氨的DCM溶液)，得到化合物30A(8.5mg，15％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.41(s,3H),3.05(dd,2H),3.49(dd,2H),3.71(s,2H),4.13(br s,2H),4.96(br s,2H),6.86(dd,1H),6.98(m,2H),7.11(dd,1H),7.21(d,1H),7.34(m,2H),7.53(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.12(544[M+H]⁺),99％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)-4-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.1b

根据通用路线F(步骤1A)，由中间体R(62.5mg，0.13mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(0.13ml，0.38mmol)、新戊酰氯(47μl，0.13mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(5g SiO₂ SPE，0–30％IPA的庚烷溶液)，得到化合物30.1b(49mg，67％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.31(s,9H),3.04(dd,2H),3.33(s,6H),3.62(dd,2H),4.05(s,2H),4.98(s,2H),5.39(s,1H),6.82(dd,1H),7.10(m,4H),7.32(dd,1H),7.54(s,1H),7.88(s,1H),8.11(dd,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.89(573[M-H]^-),94％纯。

N-(4-氟-2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.2b

根据通用路线F(步骤2)由30.1b(49mg，0.085mmol)、对甲苯磺酸一水合物(17mg，0.094mmol)的丙酮(2ml)溶液合成得到化合物30.2b(43mg，95％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.30(s,9H),3.03(dd,2H),3.32(s,2H),3.62(dd,2H),4.06(m,2H),6.81(dd,1H),7.07(dd,1H),7.18(m,2H),7.32(m,2H),7.53(s,1H),7.58(dd,1H),8.13(dd,1H),8.56(s,1H),9.25(s,1H),10.08(s,1H)。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.80(529[M+H]⁺),78％纯。

实施例55：N-(4-氟-2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30B

根据通用路线F(步骤3)，从30.2b(43mg，0.081mmol)、甲胺盐酸盐(14mg，0.203mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.07ml，0.41mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.82(542[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(4mg，0.102mmol)的甲醇(2ml)溶液还原1小时。通过制备型HPLC纯化(XBridge C18，ID 19mm，长度150mm，流速20ml/min：30-70％MeCN的pH 10[NH₄HCO₃与NH₄OH]溶液，历时8分钟)，得到化合物30B(13mg，28％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.32(s,9H),2.41(s,3H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.71(s,2H),4.13(br s,2H),4.90(br s,2H),6.86(dd,1H),7.02(td,1H),7.12(m,2H),7.21(m,1H),7.34(m,2H),7.53(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.10(544[M+H]⁺),96％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)-6-氟苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.1c

根据通用路线F(步骤1A)，由中间体S(50mg，0.10mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(54μl，0.30mmol)、新戊酰氯(14μl，0.11mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(5g SiO₂ SPE，20–100％EtOAc的庚烷溶液至10％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物30.1c(53mg，92％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.77(573[M-H]^-)。

N-(2-氟-6-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30.2c

根据通用路线F(步骤2)由30.1c(53mg，0.092mmol)、对甲苯磺酸一水合物(18mg，0.094mmol)的丙酮(3ml)溶液合成得到化合物30.2c(35mg，95％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.27(s,9H),3.08(dd,2H),3.30(dd,2H),4.30(m,2H),5.14(m,2H),6.88(m,1H),7.29(m,6H),7.73(d,1H),8.04(d,1H),10.28(s,1H)。UPLC-MS(CSH 2-50％)rt1.08(529[M+H]⁺),92％纯。

实施例56：N-(2-氟-6-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺30C

根据通用路线F(步骤3)，从30.2c(35mg，0.066mmol)、甲胺盐酸盐(11mg，0.165mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.06ml，0.33mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.77(542[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(4mg，0.102mmol)的甲醇(10ml)溶液还原1小时。通过快速色谱纯化(5-10％MeOH的EtOAc溶液至10％MeOH与氨的EtOAc溶液)，得到化合物30C(10mg，28％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.28(s,9H),2.58(s,3H),3.09(dd,2H),3.49(dd,2H),4.05(s,2H),4.41(br s,2H),4.81(br s,2H),6.85(dd,1H),7.12(m,2H),7.23(m,2H),7.33(m,2H),7.49(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH)rt 1.16(544[M+H]⁺),95％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-2-甲氧基-N-(2-氧代-2-((2‘-氧代-1,1‘,2‘,3-四氢螺[茚-2,3‘-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰胺30.1d

根据通用路线F(步骤1A)，由中间体T(55mg，0.116mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(61μl，0.349mmol)、甲氧基乙酰氯(13.8mg，0.123mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(20％庚烷的80％EtOAc溶液，然后是0-2％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物30.1d(50mg，87％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.68(543[M-H]^-),81％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-2-甲氧基-N-(2-氧代-2-((2‘-氧代-1,1‘,2‘,3-四氢螺[茚-2,3‘-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰胺30.2d

根据通用路线F(步骤2)由30.1d(50mg，0.092mmol)、对甲苯磺酸一水合物(19.2mg，0.01mmol)的丙酮(2ml)溶液合成得到化合物30.2d(50mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.60(499[M+H]⁺)。

实施例57：2-甲氧基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰胺30D

根据通用路线F(步骤3)，从30.2d(50mg，0.092mmol)、甲胺盐酸盐(13.5mg，0.20mmol)、N,N-二异丙基乙胺(51mg，0.40mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.62(512[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(7.4mg，0.195mmol)的甲醇(4ml)溶液还原2小时。通过SPE纯化(2g STMAd，MeOH，然后是氨的MeOH溶液)，得到化合物30D(4.2mg，9％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.80(s,2H),3.04(d,2H),3.43(s,3H),3.46(d,2H),4.23(s,1H),4.30(s,4H),4.82(s,2H),6.87(dd,1H),7.10(d,1H),7.15(s,2H),7.42(m,5H),8.05(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.35(514[M+H]⁺),99％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-3-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺30.1e

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(55mg，0.116mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(61μl，0.349mmol)、3-甲基-氧杂环丁烷-3-羧酸(15mg，0.128mmol)、EDCI.HCl(29mg，0.151mmol)、HOAt(20.5mg，0.151mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(50-100％EtOAc)，得到化合物30.1e(21mg，31％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.71(570[M-H]^-),80％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-3-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺30.2e

根据通用路线F(步骤2)由30.1e(21mg，0.037mmol)、对甲苯磺酸一水合物(7.7mg，0.040mmol)的丙酮(1.5ml)溶液合成得到化合物30.2e(19mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.62(525[M+H]⁺)。

实施例58：3-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺30E

根据通用路线F(步骤3)，从30.2e(19mg，0.037mmol)、甲胺盐酸盐(10mg，0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(46μl，0.26mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.64(538[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(2.7mg，0.073mmol)的甲醇(2ml)溶液还原3小时。通过快速硅胶色谱纯化(0-4％MeOH与氨的DCM溶液)，得到化合物30E(3.7mg，18％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.75(s,1H),1.76(s,1H),2.38(s,3H),3.06(m,2H),3.50(m,2H),3.70(m,3H),4.04(s,1H),4.35(d,2H),4.50(s,1H),4.81(d,2H),5.04(t,2H),6.87(m,1H),7.25(m,7H),7.52(d,1H),8.05(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.45(540[M+H]⁺),96％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-2-甲氧基-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺30.1f

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(55mg，0.116mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(61μl，0.349mmol)、2-甲氧基-2-甲基丙酸(15mg，0.128mmol)、EDCI.HCl(29mg，0.151mmol)、HOAt(20.5mg，0.151mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(50-100％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物30.1f(25mg，37％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.81(571[M-H]^-),70％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-2-甲氧基-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺30.2f

根据通用路线F(步骤2)由30.1f(25mg，0.044mmol)、对甲苯磺酸一水合物(9mg，0.048mmol)的丙酮(1.5ml)溶液合成得到化合物30.2f(23mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.73(527[M+H]⁺)。

实施例59：2-甲氧基-2-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺30F

根据通用路线F(步骤3)，从30.2f(23mg，0.044mmol)、甲胺盐酸盐(12mg，0.17mmol)、N,N-二异丙基乙胺(54μl，0.30mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.74(540[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(3.3mg，0.087mmol)的甲醇(2ml)溶液还原3小时。通过快速二氧化硅色谱法纯化(0-4％MeOH与氨的DCM溶液)，然后在乙醚中研磨，得到化合物30F(5.3mg，22％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.47(d,6H),2.40(d,3H),3.06(m,2H),3.28(d,3H),3.49(dd,2H),3.71(s,2H),4.05(s,1H),4.62(s,1H),4.82(s,1H),5.34(s,1H),6.87(t,1H),7.10(t,1H),7.27(m,6H),7.36(d,2H),7.52(s,1H),8.05(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.66(542[M+H]⁺),91％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.1g

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(55mg，0.116mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(61μl，0.349mmol)、1,3-噻唑-4-羧酸(16.5mg，0.128mmol)、EDCI.HCl(29mg，0.151mmol)、HOAt(20.5mg，0.151mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(50-100％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物30.1g(50mg，82％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.73(582[M-H]^-),67％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.2g

根据通用路线F(步骤2)由30.1g(50mg，0.086mmol)、对甲苯磺酸一水合物(18mg，0.094mmol)的丙酮(2ml)溶液合成得到化合物30.2g(50mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.65(538[M+H]⁺)。

实施例60：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30G

根据通用路线F(步骤3)，从30.2g(50mg，0.086mmol)、甲胺盐酸盐(12.5mg，0.18mmol)、N,N-二异丙基乙胺(48mg，0.37mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.66(551[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(7mg，0.18mmol)的甲醇(3ml)溶液还原2小时。通过SPE纯化(STMAd 2g，MeOH然后是MeOH与氨)，得到化合物30G(5.3mg，22％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.40(m,3H),2.95(s,1H),3.08(m,1H),3.52(d,2H),3.78(m,2H),4.20+4.58(2s,2H旋转异构体),5.00+5.22(2s,2H旋转异构体),6.87(t,1H),7.12(d,1H),7.23(d,2H),7.30(m,3H),7.40(m,2H),8.05(d,1H),8.25(s,1H),8.98(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.49(553[M+H]⁺)。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.1h

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(50mg，0.106mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(56μl，0.32mmol)、2-甲基-1,3-噻唑-4-羧酸(16.5mg，0.116mmol)、EDCI.HCl(26mg，0.137mmol)、HOAt(19mg，0.137mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(50-100％EtOAc的庚烷溶液，然后是2％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物30.1h(55mg，87％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.78(596[M-H]^-),94％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.2h

根据通用路线F(步骤2)由30.1h(55mg，0.092mmol)、对甲苯磺酸一水合物(19mg，0.101mmol)的丙酮(0.5ml)溶液合成，30分钟后加入水(0.5ml)，在1小时完成，得到化合物30.2h(51mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(CSH2-50％)rt 0.97(552[M+H]⁺),89％纯。

实施例61：2-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30H

根据通用路线F(步骤3)，从30.2h(51mg，0.092mmol)、甲胺盐酸盐(12.5mg，0.18mmol)、N,N-二异丙基乙胺(65μl，0.37mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.73(565[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(7mg，0.18mmol)的甲醇(3ml)溶液还原3小时。通过快速硅胶色谱法纯化(0-8％MeOH与氨的DCM溶液)，然后在含2％甲醇的1∶1乙醚/庚烷中研磨，得到化合物30H(3.7mg，7％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.52(s,3H),2.70(s,3H),3.02(s,1H),3.07(s,1H),3.50(dd,2H),4.07(m,2H),4.40(m,2H),5.07(m,2H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.23(m,2H),7.37(m,3H),7.44(m,2H),8.05(m,2H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.32(567[M+H]⁺),92％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-5-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.1i

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(50mg，0.106mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(56μl，0.32mmol)、5-甲基-1,3-噻唑-4-羧酸(16.5mg，0.116mmol)、EDCI.HCl(26mg，0.137mmol)、HOAt(19mg，0.137mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(50-100％EtOAc的庚烷溶液，然后是2％MeOH的EtOAc溶液)，得到化合物30.1i(50mg，63％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.77(596[M-H]^-),91％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-5-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30.2i

根据通用路线F(步骤2)由30.1i(50mg，0.084mmol)、对甲苯磺酸一水合物(17.5mg，0.092mmol)的丙酮(3ml)溶液合成，30分钟后加入水(0.5ml)，在1小时完成，得到化合物30.2i(46mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(CSH2-50％)rt 0.96(552[M+H]⁺),91％纯。

实施例62：5-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)噻唑-4-甲酰胺30I

根据通用路线F(步骤3)，从30.2i(46mg，0.084mmol)、甲胺盐酸盐(11mg，0.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(59μl，0.34mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.72(565[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(6.3mg，0.165mmol)的甲醇(3ml)溶液还原3小时。通过快速硅胶色谱法纯化(0-6％MeOH与氨的DCM溶液)，然后在含2％甲醇的1∶1乙醚/庚烷中研磨，得到化合物30I(5.9mg，12％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.45(m,3H),2.62(s,3H),3.02(s,1H),3.07(s,1H),3.50(dd,2H),3.80(m,2H),4.20(s,2H),4.92(m,2H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.19(s,2H),7.30(m,3H),7.40(s,2H),8.03(d,1H),8.76(s,1H)。 UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.28(567[M+H]⁺),92％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢呋喃-2-甲酰胺30.1j

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(45mg，0.095mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(68μl，0.381mmol)、2-四氢糠酸(13.2mg，0.114mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.123mmol)、HOAt(17mg，0.123mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物30.1j(30mg，55％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.74(569[M-H]^-),88％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢呋喃-2-甲酰胺30.2j

根据通用路线F(步骤2)由30.1j(30mg，0.052mmol)、对甲苯磺酸一水合物(10mg，0.052mmol)的丙酮(2ml)溶液合成得到化合物30.2j(27mg，99％)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.65(525[M+H]⁺)。

实施例63：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢呋喃-2-甲酰胺30J

根据通用路线F(步骤3)，从30.2j(27mg，0.051mmol)、甲胺盐酸盐(7mg，0.10mmol)、N,N-二异丙基乙胺(37μl，0.205mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.74(538[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(3.8mg，0.102mmol)的甲醇(4ml)溶液还原3小时。经由快速二氧化硅色谱法(0-5％MeOH与氨的DCM溶液)和SPE(STMAd，2g，MeOH，然后是氨的MeOH溶液)纯化，得到化合物30J(1.5mg，5％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.96(m,2H),2.20(m,2H),2.55(2s,3H,旋转异构体),3.05(d,2H),3.49(m,2H),3.86(m,2H),3.99(m,1H),4.25(d,2H),4.60(m,2H),5.00(m,1H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.20(s,1H),7.31(m,5H),7.65(d,1H),8.02(d,1H)。UPLC-MS(长时间酸性方法CSH)rt 0.89(540[M+H]⁺),86％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺30.1k

根据通用路线F(步骤1B)，由中间体T(45mg，0.095mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(68μl，0.381mmol)、四氢-2H-吡喃-2-羧酸(14.8mg，0.114mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.123mmol)、HOAt(17mg，0.123mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(4:1EtOAc/庚烷至100％EtOAc)，得到化合物30.1k(30mg，55％)，为无色玻璃状物。

UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.80(583[M-H]^-),88％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺30.2k

根据通用路线F(步骤2)由30.1k(30mg，0.051mmol)、对甲苯磺酸一水合物(10mg，0.052mmol)的丙酮(2ml)溶液合成得到化合物30.2k(30mg，定量)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.71(539[M+H]⁺)。

实施例64：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢-2H-吡喃-2-甲酰胺30K

根据通用路线F(步骤3)，从30.1k(30mg，0.051mmol)、甲胺盐酸盐(7.5mg，0.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.22mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.73(552[M+H]+)，将其在室温下用硼氢化钠(4.2mg，0.111mmol)的甲醇(4ml)溶液还原3小时。经由快速二氧化硅色谱法(0-5％MeOH与氨的DCM溶液)和SPE(STMAd，2g，MeOH，然后是氨的MeOH溶液)纯化，得到化合物30K(5.4mg，17％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.56(m,3H),1.80(br m,2H),1.92(br m,1H),2.54(2s,3H,旋转异构体),3.02(d,2H),3.49(m,3H),3.65(m,1H),3.94(m,3H),4.35(m,3H),4.99(m,1H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.20(d,1H),7.33(m,6H),8.05(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.62(554[M+H]⁺),95％纯。

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环戊烷甲酰胺30.1l

根据通用路线F(步骤1A)，由中间体T(30mg，0.06mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(34μl，0.19mmol)、环戊烷羰基氯(9.2mg，0.069mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(4:1EtOAc/庚烷至100％EtOAc)，得到化合物30.1l(30mg，88％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt0.87(567[M-H]^-),72％纯。

N-(2-甲酰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环戊烷甲酰胺30.2l

根据通用路线F(步骤2)由30.1l(30mg，0.052mmol)、对甲苯磺酸一水合物(10mg，0.052mmol)的丙酮(3ml)溶液合成得到化合物30.2l(27mg，99％)，为黄色固体。UPLC-MS(短时间碱性方法)rt 0.78(521[M-H]^-)。

实施例65：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环戊烷甲酰胺30L

根据通用路线F(步骤3)，从30.2l(27mg，0.052mmol)、甲胺盐酸盐(7.5mg，0.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(46μl，0.26mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液合成，得到中间体亚胺UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.91(536[M+H]⁺)，将其在室温下用硼氢化钠(3.5mg，0.093mmol)的甲醇(3ml)溶液还原2小时。经由快速二氧化硅色谱法(0-4％MeOH与氨的DCM溶液)和SPE(STMAd，2g，MeOH，然后是氨的MeOH溶液，然后是PE-AX，2g，MeOH)纯化，得到化合物30L(2.8mg，11％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.63(br m,2H),1.82(br m,4H),1.95(br m,2H),2.68(2s,3H,旋转异构体),2.94(M,1H),3.05(m,2H),3.50(d,2H),4.00(brm,4H),4.88(m,2H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.25(m,2H),7.40(m,5H),8.05(d,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.18(538[M+H]⁺),93％纯。

胺中间体U和V的合成

方案31

1-(2-(二甲氧基甲基)苯基)-N-甲基甲胺31.1

将中间体A(8.0g，44.4mmol)溶解于二氯甲烷(110ml)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(40ml，222mmol)，然后加入甲胺盐酸盐(9.04g，133.2mmol)，并在室温搅拌5分钟。加入硫酸镁，并将混合物在室温搅拌18小时。将混合物过滤并用二氯甲烷洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠洗涤两次，然后将水层用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到无色油状物。将其在氩气下溶解于甲醇(100ml)中，然后在含有少量冰的水上冷却。在20分钟内分几批加入硼氢化钠(2.01g，53.3mmol)，然后将反应在室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩至约1/4体积，然后倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物31.1(8.14g，～70％，含有乙酸乙酯)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.45(s,3H),3.33(s,6H),3.80(s,2H),5.58(s,1H),7.31(m,3H),7.53(dd,1H)–含有～30％乙酸乙酯。

2-(二甲氧基甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯31.2

将化合物31.1(8.14g，～30.0mmol)溶解于1,4-二噁烷(100ml)，然后加入饱和碳酸氢钠(70ml)中，然后加入二碳酸二叔丁酯(7.85g，36.0mmol)，并将混合物在室温下快速搅拌72小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将粗品通过快速色谱法纯化(250ml二氧化硅，2:1至1:2庚烷/乙酸乙酯)，得到化合物31.2(7.20g，81％)，为无色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.45(s,9H),2.85(m,3H),3.31(s,6H),4.58(s,2H),5.42(s,1H),7.19(dd,1H),7.29(m,2H),7.54(dd,1H)-旋转异构体。

2-甲酰基苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯31.3

将化合物31.2(0.43g，1.46mmol)溶解于丙酮(35ml)中，然后在冰/水上冷却。加入对甲苯磺酸一水合物(267mg，1.53mmol)，将反应搅拌5分钟，然后温热至室温保持15分钟。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物31.3(0.35g，97％)，为无色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.41(m,9H),2.90(br s,3H),4.90(s,2H),7.32(d,1H),7.47(t,1H),7.58(t,1H),7.84(d,1H),10.20(s,1H)-旋转异构体。

2-((2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)氨基)乙酸甲酯中间体U

将化合物31.3(0.35g，1.42mmol)溶解于二氯甲烷(12ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.76ml，4.38mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(365mg，2.9mmol)，然后加入硫酸镁。将混合物在室温下搅拌18小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后将水相用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。在氩气下将残余物溶解于甲醇(8ml)中，然后在2分钟内分批加入硼氢化钠(71mg，1.9mmol)，然后将反应在室温搅拌1小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到中间体U(0.44g，94％)，为无色胶状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.46(m,9H),2.82(br s,3H),3.71(s,3H),4.58(s,2H),7.18(m,2H),7.30(m,2H)-旋转异构体。

UPLC-MS(短时间碱性)0.89(323[M+H]⁺),

2-(N-(2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)-2,2,2-三氟乙酰氨基)乙酸甲酯31.4

将中间体U(0.44g，1.37mmol)溶解于二氯甲烷(12ml)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(0.6ml，3.42mmol)，并将混合物在冰/水上冷却。滴加三氟乙酸酐(211ml，1.51mmol)，然后将混合物在冰/水上搅拌1.5小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物31.4(595mg，定量)，为无色胶状物。UPLC-MS(短时间CSH,2-50％)1.46(319[M-Boc+H]⁺)。

2-(N-(2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)-2,2,2-三氟乙酰氨基)乙酸31.5

将化合物31.4(595mg，1.37mmol)溶解于甲醇(10ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.55ml，1.37mmol)，并将反应在室温搅拌22小时。将混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取三次。有机物用盐水洗涤。将水相用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物31.5(433mg，78％)，为无色玻璃状物。直接使用。

UPLC-MS(短时间CSH,2-50％)1.31(305[M-Boc+H]⁺)。

甲基(2-((2,2,2-三氟-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)乙酰氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯31.6

将化合物31.5(45mg，0.11mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中，并加入N,N-二异丙基乙胺(48μl，0.27mmol)，然后加入EDCI(28mg，0.13mmol)和HOAt(18mg，0.13mmol)。加入中间体E(33mg，0.13mmol)，并将混合物在室温搅拌76小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用水洗涤三次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速色谱法纯化(5g SiO₂，2:1至1：1庚烷/乙酸乙酯)，得到化合物31.6(42mg，59％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH,2-50％)1.32(538[M-Boc+H]⁺)。

甲基(2-(((2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯中间体V

将化合物31.6(42mg，0.064mmol)溶解于甲醇(1ml)中，然后将碳酸钾(11.4mg，0.075mmol)加入水(0.15ml)中。将混合物在室温搅拌4小时，在1小时时加入另外2滴水。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物中间体V(40mg，定量)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH,2-50％)0.75(542[M+H]⁺)。

通用路线G

方案32

步骤1

A：酰氯

在氩气气氛下将中间体V溶解于二氯甲烷中，然后加入N,N-二异丙基乙胺。加入酰氯R¹C(O)Cl，并将混合物在室温下搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物32.1。

B:羧酸

将中间体V溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入N,N-二异丙基乙胺、羧酸R¹COOH、EDCI.HCl和HOAt。将反应在室温或80℃下搅拌2-18小时，取决于酸。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用饱和碳酸氢钠洗涤，用水洗涤三次，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物32.1。

C：异氰酸酯

在氩气气氛下将中间体V溶解于二氯甲烷或1,2-二氯乙烷中。加入异氰酸酯R¹C(O)，并将混合物在室温下搅拌18小时，此后UPLC-MS检测反应完成。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱法纯化，得到化合物32.1。

步骤2

A:三氟乙酸将化合物32.1溶解于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，并将混合物在室温下搅拌0.5–3小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用二氯甲烷萃取两次，然后用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。粗残余物通过快速硅胶色谱、SPE或制备型HPLC纯化。

B：盐酸

将化合物32.1溶解于甲醇/乙酸乙酯中，然后加入盐酸，并将混合物在室温搅拌过夜。真空除去挥发物，并将粗物质直接通过HPLC纯化。

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1a

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(40mg，0.064mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(30μl，0.17mmol)、氧杂环丁烷-3-羧酸(8mg，0.077mmol)、EDCI.HCl(18mg，0.084mmol)、HOAt(12mg，0.084mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(3:2庚烷/IPA)，得到化合物32.1a(12mg，30％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.12(526[M-Boc+H]⁺)。

实施例66：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氧杂环丁烷-3-甲酰胺32A

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1a(12mg，0.019mmol)、三氟乙酸(0.16ml)和二氯甲烷(2ml)合成。通过SPE纯化(2g STMAd，甲醇，然后是氨的甲醇溶液)，得到化合物32A(3.2mg，32％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.45(m,3H),2.62(s,3H),3.02(s,1H),3.07(s,1H),3.50(dd,2H),3.80(m,2H),4.20(s,2H),4.92(m,2H),6.85(t,1H),7.10(d,1H),7.19(s,2H),7.30(m,3H),7.40(s,2H),8.03(d,1H),8.76(s,1H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 1.28(567[M+H]⁺),92％纯。

N-[[2-[[(3-甲氧基吡咯烷-1-羰基)-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯32.1b

在0℃下，向中间体V(80mg，0.15mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入三乙胺(44mg，0.44mmol)和三光气(43mg，0.14mmol)。将反应混合物在26℃下搅拌1小时。将3-甲氧基吡咯烷(22mg，0.16mmol，HCl盐)加入到混合物中，并将反应混合物在26℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(3×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：42％-72％，11min)。冻干后，得到32.1b(35mg，0.052mmol，35％收率)，为无色油状物。LC-MS:rt 0.810min,(669[M+H]⁺)。

实施例67：3-甲氧基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]吡咯烷-1-甲酰胺32B

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1b(35mg，0.052mmol)和三氟乙酸(0.2ml)的二氯甲烷(1ml)溶液在0℃下合成，然后在20℃下合成0.5小时。混合物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150x25 mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：20％-47％，9min)。冻干后，得到化合物32B，为黄色固体(3mg，7％收率，99.7％纯度，TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.88–1.92(m,1H),2.00–2.03(m,1H),2.80(s,3H),3.06(d,2H),3.30–3.57(m,6H),3.96(s,1H),4.15(d,1H),4.21–4.25(m,2H),4.36–4.44(m,2H),4.74–4.80(m,2H),6.89(dd,1H),7.14(dd,1H),7.23(d,1H),7.27–7.30(m,1H),7.35–7.46(m,4H),7.66(d,1H),8.05(dd,1H)。LC-MS:rt 2.551min,(569[M+H]⁺),纯度99.7％。

实施例68：1-(乙酰基)-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]氮杂环丁烷-3-甲酰胺32C

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(60mg)和1-乙酰基-氮杂环丁烷-3-羧酸合成。通过用正己烷研磨进行步骤2A的纯化，得到化合物32C，为黄色固体(20mg，95％纯度)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz,T＝80℃)δ1.75(s,3H),2.51–2.52(d,3H),3.10–3.13(m,2H),3.37(dd,2H),3.71–3.82(m,1H),3.90–4.05(m,4H),4.09(s,2H),4.12–4.32(m,3H),4.73(s,2H),6.86(dd,1H),7.15(dd,1H),7.20(d,1H),7.27–7.39(m,4H),7.45(dd,1H),7.48–7.56(m,1H),8.06(dd,1H),9.72–9.89(m,1H),10.79(br.s,1H)。LCMS:rt＝2.005min,(567[M+H]⁺),95％纯度。

实施例69：1-乙酰基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺32D

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(60mg)和1-乙酰基-吡咯烷-2-羧酸合成化合物32D。将步骤1B的粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：35％-55％，11min)。通过用正己烷研磨，纯化步骤2A，得到化合物32D，为黄色固体(21mg，98.2％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ.1.29(d,4H),2.69(s,3H),2.99(d,2H),3.41(dd,2H),4.19(s,2H),4.71(m,4H),6.80(dd,1H),7.06(dd,1H),7.14(d,1H),7.22(d,1H),7.31–7.38(m,5H),7.96(dd,1H)。LC-MS:rt 1.492min,(578[M+H]⁺),纯度100.0％。

1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰基)哌啶-4-羧酸甲酯

向哌啶-4-羧酸甲酯(200mg，1.40mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液中加入Boc-Gly-OH(245mg，1.40mmol)、EDCI.HCl(349mg，1.82mmol)、HOAt(248mg，1.82mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.73ml，4.19mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释，然后用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，蒸发，并通过SPE纯化(5g SiO₂50％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到所需产物(99mg，24％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.45(s,9H),1.62-1.73(m,2H),1.89-2.00(m,2H),2.50-2.62(m,1H),2.90(t,1H),3.09(t,1H),3.69(d,1H),3.70(s,3H),3.95(d,2H),4.35(d,1H),5.51(s,NH)；UPLC-MS0.64(201[MH-Boc]⁺)。

1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰基)哌啶-4-羧酸

将1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(99mg，0.33mmol)溶解于甲醇(2ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.2ml，0.49mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用2M HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到所需产物，为无色玻璃状物(46mg，49％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.45(s,9H),1.62-1.78(m,2H),1.93-2.05(m,2H),2.55-2.67(m,1H),2.94(td,1H),3.12(td,1H),3.63-3.75(m,1H),3.96(d,2H),4.35(dt,2H),5.55(s,NH)。UPLC-MS(短时间酸性)0.51(187[M-Boc+H]⁺)。

2-((1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1e

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(52mg，0.096mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)、1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰基)哌啶-4-羧酸(28mg，0.096mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.126mmol)、HOAt(17mg，0.126mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(5g SiO₂，乙酸乙酯)，得到化合物32.1e(42mg，74％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.08(581[M-Boc+H]⁺)。

实施例70：1-(2-氨基乙酰基)-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸酯)32E

根据通用路线G(步骤2B)，由32.1e(40mg，0.049mmol)的在甲醇(0.6ml)和乙酸乙酯(0.6ml)中的溶液与35％的盐酸(110μl)合成。通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-60％乙腈-水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，然后冻干，得到化合物32E，为白色固体(17mg，42％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.75(m,2H),1.92(m,2H),2.82(s,3H),3.12(m,3H),2.98(m,1H),3.01(dd,2H),3.19(m,1H),3.50(dd,2H),3.80(m,1H),3.96(m,2H),4.32(s,br,2H),4.48(s,br,2H),4.56(m,1H),4.84(s,br,2H),6.91(dd,1H),7.14(m,1H),7.22(s,br,2H),7.45(m,5H),8.09(dd,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.2.MS(567[M+H]⁺),85％纯。

1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯

向哌啶-4-羧酸甲酯(200mg，1.40mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.73ml，4.19mmol)，然后加入二甲基羰基氯(0.13ml，1.40mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和碳酸氢钠淬灭，并用二氯甲烷萃取两次。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，蒸发，并通过SPE纯化(5g SiO₂ 50％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(50mg，17％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.62-1.77(m,2H),1.86-1.96(m,2H),2.40-2.52(m,1H),2.75-2.86(m,2H),2.82(m,6H),3.62(dt,2H),3.69(s,3H)；UPLC-MS(弱UV)。

1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸

将1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(50mg，0.23mmol)溶解于甲醇(2ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.14ml，0.35mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用2MHCl酸化，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸，为无色玻璃状物(26mg，56％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.63(qd,2H),1.84-1.94(m,2H),2.41-2.53(m,1H),2.81(s,6H),2.85(td,2H),3.60(dt,2H)；UPLC-MS(短时间酸性)0.38(201[MH]⁺)。

2-((1-(二甲基氨基甲酰基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1f

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(52mg，0.096mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)、1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸(19mg，0.096mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.126mmol)、HOAt(17mg，0.126mmol)合成，并通过Biotage Isolera纯化(5g SiO₂，0至5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到化合物32.1f(35mg，49％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间酸性)rt 0.80(724[MH]⁺)。

实施例71：N1,N1-二甲基-N4-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N4-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-1,4-二甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32F

根据通用路线G(步骤2B)，由化合物32.1f(16mg，0.026mmol)在甲醇(0.4ml)和乙酸乙酯(0.4ml)中的溶液与35％的盐酸(0.2ml)合成。通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％乙腈-水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，然后冻干，得到化合物32F，为白色固体(12mg，62％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.81(m,4H),2.84(m,12H),3.09(m,2H),3.51(m,2H),3.72(m,2H),4.33(s,br,2H),4.47(s,br,2H),4.84(m,2H),6.92(dd,1H),7.16(d,2H),7.22(m,2H),7.45(m,5H),8.08(dd,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.3；MS(624[M+H]⁺),98％纯。

1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸甲酯

向哌啶-4-羧酸甲酯(200mg，1.40mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.73ml，4.193mmol)，然后加入甲磺酰氯(0.11ml，1.40mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和碳酸氢钠淬灭，并用二氯甲烷萃取两次。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，蒸发，并通过SPE纯化(5g SiO₂50％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(67mg，22％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.77-1.93(m,2H),1.97-2.08(m,2H),2.41-2.51(m,1H),2.28(s,3H),2.81-2.92(m,2H),3.61-3.71(m,2H),3.71(s,3H)；UPLC-MS(弱UV)。

1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸

将1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(67mg，0.30mmol)溶解于甲醇(2ml)中，并加入2.5M氢氧化钠(0.18ml，0.45mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用2M HCl酸化，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸，为无色玻璃状物(41mg，66％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.72(dq,2H),1.96-2.06(m,2H),2.38-2.50(m,1H),2.80(s,3H),2.84(td,2H),3.58-3.67(m,2H)；UPLC-MS(短时间酸性)(206[M-H]⁺)。

甲基(2-((1-(甲基磺酰基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1g

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(52mg，0.096mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)、1-(甲基磺酰基)哌啶-4-羧酸(20mg，0.096mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.13mmol)、HOAt(17mg，0.13mmol)合成，并通过BiotageIsolera纯化(5g SiO₂，0至5％甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到3：2的化合物32.1g和原料化合物的混合物。混合物不经进一步纯化用于下一步。

实施例72：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-1-(甲基磺酰基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32G

根据通用路线G(步骤2B)，由化合物32.1g(16mg，0.022mmol)在甲醇(0.4ml)和乙酸乙酯(0.4ml)中的溶液与35％的盐酸(0.2ml)合成。通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％乙腈-水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，然后冻干，得到化合物32G，为白色固体(8mg，51％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.90(m,4H),2.80(m,9H),3.09(m,2H),3.50(m,2H),3.77(m,2H),4.33(s,br,2H),4.46(s,br,2H),4.84(m,2H),6.92(dd,1H),7.15(d,1H),7.22(m,2H),7.45(m,5H),8.08(dd,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.3；MS(631[M+H]⁺),97％纯。

1-(异丙基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯

向哌啶-4-羧酸甲酯(250mg，1.75mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中加入异氰酸异丙酯(0.17ml，1.75mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用饱和碳酸氢钠淬灭，并用二氯甲烷萃取两次。将有机物经硫酸镁干燥，过滤，蒸发，并通过SPE纯化(5g SiO₂50％乙酸乙酯的庚烷溶液)，得到1-(异丙基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(81mg，21％)。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.14(d,6H),1.67(td,2H),1.86-1.96(m,2H),2.41-2.53(m,1H),2.86(ddd,2H),3.96(s,3H),3.84(dt,2H),3.96(六重峰,1H),4.14-4.26(m,NH)；UPLC-MS(短时间碱性方法)0.53(229[M-H]^-)。

1-(异丙基氨基甲酰基)-4-甲基哌啶-4-羧酸

将1-(异丙基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸甲酯(82mg，0.36mmol)溶解于甲醇(2ml)中，加入2.5M氢氧化钠(0.22ml，0.54mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。将混合物用2MHCl酸化，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到所需产物，为无色玻璃状物(25mg，33％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.11(d,6H),1.55(dq,2H),1.81-1.92(m,2H),2.42-2.54(m,1H),2.86(ddd,3H),3.80-3.96(m,3H)；UPLC-MS(短时间酸性)0.39(213[M-H]^-)。

2-((1-(异丙基氨基甲酰基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1h

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(52mg，0.096mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)、1-(二甲基氨基甲酰基)哌啶-4-羧酸(21mg，0.096mmol)、EDCI.HCl(24mg，0.126mmol)、HOAt(17mg，0.126mmol)合成，并通过biotage isolera纯化(5g SiO₂，0-10％的甲醇的乙酸乙酯溶液)，得到化合物32.1h(47mg，66％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间酸性)rt 0.81(738[MH]⁺)。

实施例73：N1-异丙基-N4-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N4-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-1,4-二甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32H

根据通用路线G(步骤2B)，由化合物32.1h(16mg，0.021mmol)在甲醇(0.4ml)和乙酸乙酯(0.4ml)中的溶液与35％的盐酸(0.2ml)合成。通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％乙腈-水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，然后冻干，得到化合物32H，为白色固体(9.1mg，58％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.15(d,6H),1.75(m,4H),2.82(m,5H),3.09(m,2H),3.50(m,2H),3.77(m,2H),3.90(hept,1H),4.09(m,2H),4.33(s,br,2H),4.47(s,br,2H),4.83(m,2H),6.92(dd,1H),7.15(d,1H),7.22(m,2H),7.45(m,5H),8.08(dd,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.3；MS(638[M+H]⁺),99％纯。

1-乙酰基吡咯烷-3-羧酸甲酯

将1-乙酰基吡咯烷-3-羧酸盐酸盐(200mg，1.21mmol)溶解于吡啶(2ml)中，并在氩气下加入乙酸酐(0.14ml，2.32mol)，并将混合物在室温下搅拌5小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠中。水层用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到所需化合物，为无色油状物(190mg，92％)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.04,2.05(2s,3H),2.20(m,2H),3.11(m,1H),3.46(m,1H),3.60(m,3H),3.72(s,3H)。UPLC-MS(长时间碱性方法)rt 0.66(172[M-H]^-)。

1-乙酰基吡咯烷-3-羧酸

将1-乙酰基吡咯烷-3-羧酸甲酯(190mg，1.11mmol)溶解于甲醇(10ml)中，加入2.5M氢氧化钠(0.68ml，1.2mmol)，并将反应在室温下搅拌过夜。将混合物倒入氯化铵水溶液中，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到所需产物，为无色玻璃状物(20mg，12％)。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.07,2.08(2s,3H),2.22(m,2H),3.11-3.20(m,1H),3.51(m,1H),3.70(m,3H)。UPLC-MS(短时间CSH,2-20％)0.47(158[MH]⁺)。

2-((1-乙酰基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-3-甲酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1i

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(44μl，0.28mmol)、1-乙酰基吡咯烷-3-羧酸(20mg，0.127mmol)、EDCI.HCl(27mg，0.140mmol)、HOAt(19mg，0.140mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(5g SiO₂，乙酸乙酯)，得到化合物32.1i(42mg，74％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.08(581[M-Boc+H]⁺)。

实施例74：1-乙酰基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32I

根据通用路线G(步骤2B)，由化合物32.1i(16mg，0.023mmol)在甲醇(0.4ml)和乙酸乙酯(0.4ml)中的溶液与35％的盐酸(0.2ml)合成。通过制备型HPLC纯化(HP C18，ID22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％乙腈-水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)并冻干，得到化合物32I(10mg，65％)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.07,2.08(2s,3H),2.27(m,2H),2.82(s,3H),3.08(m,2H),3.52(m,5H),3.75(m,2H),4.52(m,5H),4.85(m,1H),5.03(m,1H),6.92(dd,1H),7.15(d,2H),7.22(m,2H),7.42(m,5H),8.08(dd,1H).¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.2.MS(581[M+H]⁺),99％纯。

实施例75：N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32J

根据通用路线G由中间体V(70mg)合成化合物32J。对于步骤1B，在80℃下，用HOAt、EDCI和DIPEA进行与1-(三氟甲基)环丙烷-1-羧酸的缩合。粗产物通过制备型TLC纯化(EA)。对于步骤2A，用TFA进行脱保护。通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：21％-51％，10min)并冻干，得到化合物32J(16mg，51％收率)，为黄色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ.1.29(d,4H),2.69(s,3H),2.99(d,2H),3.41(dd,2H),4.19(s,2H),4.71(m,4H),6.80(dd,1H),7.06(dd,1H),7.14(d,1H),7.22(d,1H),7.31–7.38(m,5H),7.96(dd,1H)。LC-MS:rt 1.492min,(578[M+H]⁺),纯度100.0％

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-[1-(三氟甲基)环丁烷羰基]氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯32.1k

通过类似于通用路线G步骤1A的路线制备化合物32.1k：在0℃下，向化合物1-(三氟甲基)环丁烷羧酸(28mg，0.16mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入草酰氯(15mg，0.12mmol)和二甲基甲酰胺(6mg，0.82mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，并在0℃下真空浓缩。将残余物重新溶解于二氯甲烷(2ml)中，并在0℃下加入到中间体V(50mg，0.82mmol)和DIPEA(25mg，0.19mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中。将所得混合物在20℃下再搅拌3小时。将混合物用水(10mL)淬灭，并用二氯甲烷(3×10mL)萃取。将有机相用盐水(10ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，将残余物通过制备型TLC纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0∶1)，得到化合物32.1k，为黄色固体(40mg，55％收率)。

LC-MS:rt 0.882min,(692[M+H]⁺),纯度78％。

实施例76：N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-1-(三氟甲基)环丁烷甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32K

向化合物32.1k(40mg，0.45mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在20℃下搅拌1小时。LCMS表明检测到所需的MS。将混合物浓缩，得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston pH-lex 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：20％-50％，10min)。冻干后，得到化合物32K，为黄色固体(11mg，33％收率，纯度95.7％)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ.1.81–1.86(m,1H),1.99–2.04(m,1H),2.52(m,2H),2.65(s,3H),2.74–2.79(m,2H),3.09(dd,2H),3.35–3.40(m,2H),4.04(s,2H),4.18(s,2H),4.74(s,2H),6.86(dd,1H),7.15–7.25(m,3H),7.32(dd,1H),7.37–7.54(m,4H),8.06(dd,1H),8.68(br.s,2H),9.87(br.s,1H),10.81(s,1H)。LC-MS:rt 2.63min,(592[M+H]⁺),纯度95.7％。

实施例77：3-氨基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸酯)32L

根据通用路线G(步骤1B和步骤2A)由中间体V(40mg)和3-氨基-双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸合成化合物32L。对于步骤1B，直接使用粗产物。通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：5％-35％，9min)进行步骤2A的纯化并冻干，得到化合物32L，为白色固体(40mg，70％收率)。

实施例78：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯32M

根据通用路线G(步骤1B和步骤2A)由中间体V(40mg)和双环[1.1.1]戊烷羧酸合成化合物32M。对于步骤1B，直接使用粗产物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：15％-45％，9min)进行步骤2A的纯化，得到化合物32M，为白色固体(19mg，43％收率)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ.2.20(s,6H),2.45(s,1H),2.70(s,2H),2.81(s,3H),3.07(dd,2H),3.46-3.51(m,2H),4.33(s,2H),4.47(s,2H),4.79(m,2H),6.89(dd,1H),7.13–7.22(m,3H),7.32(s,1H),7.40–7.46(m,4H),8.06(dd,1H)。LC-MS:rt 1.432min,(536[M+H]⁺),纯度98.6％。

(2-((1-乙酰基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1n

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(40mg，0.074mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1ml)和二氯甲烷(1ml)中的溶液与N,N-二异丙基乙胺(31μl，0.19mmol)、氧杂环丁烷-3-羧酸(15mg，0.089mmol)、EDCI.HCl(18mg，0.098mmol)、HOAt(12mg，0.098mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc 0–6％MeOH，然后是二氯甲烷6–10％MeOH)，得到化合物32.1b(30mg，30％)，为无色玻璃状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.56(s,9H),1.80(m,2H),2.05(2s,3H),2.82(s,3H),3.05(m,4H),3.60(m,3H),4.10(m,2H),4.46(br s,2H),4.72(m,2H),6.81(dd,1H),7.04(m,2H),7.15(s,3H),7.30(m,2H),7.50(s,1H),7.92(s,1H),8.10(dd,1H),8.52(m,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.12(695[M+H]⁺)。

实施例79：1-乙酰基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺32N

根据通用路线G(步骤2AA)，由32.1b(30mg，0.043mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成2.5小时，并通过研磨纯化(MeOH/二乙醚)，然后与甲醇和甲苯共沸，得到化合物32N(11mg，43％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.31(m,3H),1.75(m,5H),2.08,2.09(2s,3H),2.46,2.53(2s,3H),2.64(m,1H),3.04(m,4H),3.49(m,2H),3.94(m,2H),4.11(m,1H),4.32(m,1H),4.50(m,1H),4.78(m,1H),4.92(s,1H),6.87(dd,1H),7.12(m,3H),7.32(m,4H),7.52(m,1H),8.03(d,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.28(595[M+H]⁺),94％纯。

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢呋喃-3-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1o

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(33mg，0.061mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液与N,N-二异丙基乙胺(24μl，0.15mmol)、3-四氢呋喃羧酸(8.5mg，0.073mmol)、EDCI.HCl(16mg，0.073mmol)、HOAt(12mg，0.073mmol)合成，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物32.1o(21mg，54％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.14(540[M-Boc+H]⁺)。

实施例80：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)四氢呋喃-3-甲酰胺32O

根据通用路线G(步骤2AA)，由32.1o(21mg，0.033mmol)、三氟乙酸(0.20ml)和二氯甲烷(2ml)合成1小时，并通过快速色谱纯化(二氧化硅，EtOAc0–10％MeOH，然后是二氯甲烷10–15％MeOH，然后是二氯甲烷15–20％MeOH与氨)，得到化合物32O(5mg，28％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.17(m,2H),2.58(s,3H),3.05(d,2H),3.50(m,2H),3.81(m,2H),3.90(m,3H),4.00(m,2H),4.13(s,1H),4.42(dd,1H),4.90(m,2H),6.88(dd,1H),7.10(d,1H),7.21(m,3H),7.33(m,5H),8.03(d,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 0.58(540[M+H]⁺)。

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1p

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(33mg，0.061mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(24μl，0.15mmol)、吡咯烷1-羰基氯(10.5mg，0.079mmol)在室温下合成18小时，在50℃下加热5小时，然后在室温下加热12天，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc 0–6％MeOH)，得到化合物32.1p(21mg，54％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.26(639[M+H]⁺)。

实施例81：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酰胺32P

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1p(21mg，0.033mmol)、三氟乙酸(0.20ml)和二氯甲烷(2ml)合成1小时，并通过快速色谱纯化(二氧化硅，EtOAc 0–10％MeOH，然后是rir 10–15％MeOH，然后是二氯甲烷15–20％MeOH与氨)，得到化合物32P(9mg，28％)，为无色固体。¹HNMR(CD₃OD,300MHz)δ1.84(m,4H),2.57(s,3H),3.04(d,2H),3.42(m,4H),3.50(dd,2H),3.99(s,2H),4.04(s,2H),4.63(s,2H),6.88(dd,1H),7.11(dd,1H),7.21(d,1H),7.32(m,4H),7.51(m,2H),8.04(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 0.67(539[M+H]⁺),98％纯度。

(2-((3-甲氧基-3-甲基-1-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)脲基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1q

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和N-甲氧基-N-甲基-1-氨基甲酰氯(14μl，0.11mmol)在室温下合成18小时，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物32.1q(40mg，78％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.26(627[M-H]^-),95％纯。

实施例82：2-(3-甲氧基-3-甲基-1-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)脲基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺32Q

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1q(40mg，0.064mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成2.5小时，并通过SPE纯化(STMAd，2g，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32Q(20mg，59％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.42,2.44(2s,3H),3.05(m,5H),3.48(m,2H),3.55(s,3H),3.76(s,2H),4.02(s,2H),4.77(s,2H),6.87(dd,1H),7.12(dd,1H),7.20(d,1H),7.32(m,5H),7.50(s,1H),8.04(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt0.50(529[M+H]⁺),93％纯度。

(2-((3-环戊基-1-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)脲基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1r

根据通用路线G(步骤1C)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液与环戊基异氰酸酯(12μl，0.108mmol)在室温下合成18小时，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc)，得到化合物32.1r(34mg，63％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt1.33(553[M-Boc+H]⁺),99％纯。

实施例83：2-(3-环戊基-1-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)脲基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺32R

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1r(34mg，0.052mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成5小时，并通过SPE纯化(STMAd，2g，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32R(20mg，59％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.52(m,6H),1.89(m,2H),2.44(s,3H),3.04(dd,2H),3.50(dd,2H),3.74(s,2H),4.04(m,1H),4.08(s,2H),4.69(s,2H),6.87(dd,1H),7.11(dd,1H),7.28(m,6H),7.47(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt0.72(553[M+H]⁺),94％纯度。

(2-((3-异丙基-1-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)脲基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1s

根据通用路线G(步骤1C)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的1,2-二氯乙烷(1ml)溶液与异氰酸异丙酯(11μl，0.108mmol)在室温下合成18小时，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc 0–5％MeOH)，得到化合物32.1s(39mg，75％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH2-50％)rt 1.21(625[M-H]^-),98％纯。

实施例84：2-(3-异丙基-1-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)脲基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺32S

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1s(39mg，0.062mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成6小时，并通过SPE纯化(STMAd，2g，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32S(11mg，34％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.11(d,6H),2.44(s,3H),3.04(dd,2H),3.50(dd,2H),3.73(s,2H),3.92(m,1H),4.08(s,2H),4.69(s,2H),6.88(dd,1H),7.11(dd,1H),7.25(m,6H),7.48(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 0.64(527[M+H]⁺),94％纯度。

(2-((3,3-二甲基-1-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)脲基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯32.1t

根据通用路线G(步骤1C)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的1,2-二氯乙烷(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和二甲基氨基甲酰氯(10μl，0.108mmol)在室温下合成18小时，然后在55℃下合成6.5小时，然后在室温下合成3天，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc 0–5％MeOH)，得到化合物32.1t(38mg，75％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH2-50％)rt 1.17(611[M-H]^-),98％纯。

实施例85：2-(3,3-二甲基-1-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)脲基)-N-(2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)乙酰胺32T

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1t(39mg，0.062mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成6小时，并通过SPE纯化(STMAd，2g，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32T(18mg，57％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.41(s,3H),2.91(s,6H),3.05(dd,2H),3.50(dd,2H),3.72(s,2H),3.89(s,2H),4.62(s,2H),6.87(dd,1H),7.12(dd,1H),7.20(d,1H),7.26(m,4H),7.41(m,1H),7.49(s,1H),8.02(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt0.63(513[M+H]⁺),95％纯度。

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吗啉-4-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1u

根据通用路线G(步骤1C)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的1,2-二氯乙烷(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和吗啉-4-氨基甲酰氯(13μl，0.108mmol)在室温下合成18小时，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc0–6％MeOH)，得到化合物32.1u(40mg，74％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.19(653[M-H]^-),98％纯。

实施例86：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)吗啉-4-甲酰胺32U

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1u(40mg，0.061mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成6小时，并通过SPE纯化(STMAd，2g，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32U(12mg，36％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ2.43(s,3H),3.04(dd,2H),3.35(m,4H),3.50(dd,2H),3.69(m,4H),3.75(s,2H),3.91(s,2H),4.64(s,2H),6.87(dd,1H),7.11(dd,1H),7.20(d,1H),7.31(m,5H),7.60(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt0.60(555[M+H]⁺),98％纯度。

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-1-甲酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯32.1v

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和哌啶-1-氨基甲酰氯(12mg，0.083mmol)在室温下合成4天，并通过正相色谱法纯化(Zip球形二氧化硅5g，50–90％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物32.1v(32mg，59％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-95％)rt 0.96(653[M+H]⁺),98％纯。

实施例87：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-1-甲酰胺32V

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1v(32mg，0.049mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成3小时，并通过快速硅胶色谱(EtOAc，然后是二氯甲烷5％MeOH，然后是二氯甲烷5％MeOH与氨)和SPE(SCX2 1g，MeOH然后是氨的MeOH溶液)纯化，得到化合物32V(9mg，36％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.60(m,6H),2.42(s,3H),3.04(dd,2H),3.30(m,4H),3.50(dd,2H),3.72(s,2H),3.87(s,2H),4.61(s,2H),6.86(dd,1H),7.11(dd,1H),7.19(d,1H),7.28(m,3H),7.36(m,2H),7.49(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH 2-95％)rt 1.16(553[M+H]⁺),99％纯度。

4-((2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯32.1w

根据通用路线G(步骤1B)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)、N-Boc-异癸酸(19mg，0.083mmol)、EDCI.HCl(21mg，0.108mmol)、HOAt(15mg，0.108mmol)在室温下合成4天，并通过正相色谱法纯化(Zip球形二氧化硅5g，50–90％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物32.1w(37mg，59％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-95％)rt 0.98(653[M-2Boc+H]⁺),93％纯。

实施例88：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)哌啶-4-甲酰胺32W

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1w(37mg，0.049mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成3小时，并通过快速硅胶色谱纯化(EtOAc，然后二氯甲烷5-10％MeOH，然后是二氯甲烷30％MeOH与氨)，得到化合物32W(6.4mg，24％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.35(m,4H),1.91(m,4H),2.46,2.54(2s,3H),2.87(t,1H),3.05(d,2H),3.47(dd,2H),3.78,3.93(2s,2H),4.12,4.20,4.32(3m,2H),4.77,4.95(2s,2H),6.86(dd,1H),7.10(d,1H),7.29(m,6H),7.53,7.61,7.70(3m,1H),8.04(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH 2-20％)rt 1.17(553[M+H]⁺),100％纯度。

9-(氯羰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯

在氩气气氛下将3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(80mg，0.32mmol)溶解于四氢呋喃(6ml)中，然后加入三乙胺(69μl，0.49mmol)并在冰/水上冷却。加入光气(36.5mg，0.13mmol)，并将混合物在冰/水上搅拌10分钟，然后在室温搅拌21小时。加入额外的光气(15mg，0.05mmol)，并在室温搅拌3小时。将混合物倒入冰/水中，然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到9-(氯羰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(96mg，定量)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.43(s,9H),1.53(m,8H),3.39(m,4H),3.60(m,2H),3.68(m,2H)。

9-((2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯32.1x

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和9-(氯羰基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(31.5mg，0.10mmol)在室温下合成18小时。加入另一份酰氯(64mg，0.20mmol)并搅拌6小时，并通过快速色谱法纯化(二氧化硅5g，EtOAc)，得到化合物32.1x(32mg，47％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.52(822[M+H]⁺),87％纯。

实施例89：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酰胺32X

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1x(32mg，0.039mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成4小时。无水后处理，除去挥发物，与甲苯共蒸发，并通过SPE纯化(SCX2500mg，MeOH，然后是MeOH与氨)，得到化合物32X(12mg，49％)，为无色固体。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.53(m,8H),2.39(s,3H),2.79(m,4H),3.04(dd,2H),3.33(m,4H),3.50(dd,2H),3.68(s,2H),3.86(s,2H),4.62(s,2H),6.87(dd,1H),7.11(dd,1H),7.22(d,1H),7.30(m,5H),7.49(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH 2-95％)rt 0.46(622[M+H]⁺),95％纯度。

2-(氯羰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯

在氩气气氛下，将2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(80mg，0.33mmol)溶解于四氢呋喃(6ml)中，然后加入三乙胺(68μl，0.49mmol)并在冰/水上冷却。加入光气(38.5mg，0.13mmol)，并将混合物在冰/水上搅拌10分钟，然后在室温搅拌3小时。将混合物倒入冰/水中，然后用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发滤液，得到2-(氯羰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(31mg，31％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.45(s,9H),1.53(m,4H),1.83(m,2H),3.28(m,2H),3.37(m,2H),3.44(m,2H),3.49(m,2H),3.59(t,1H),3.68(t,1H)。

2-((2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基甲酰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯32.1y

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(40μl，0.25mmol)和2-(氯羰基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-羧酸叔丁酯(30mg，0.10mmol)在室温下合成3天，并通过快速色谱纯化(二氧化硅5g，EtOAc 0–5％MeOH)，得到化合物32.1y(39mg，58％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt1.42(808[M+H]⁺)。

实施例90：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-2-甲酰胺32Y

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1y(39mg，0.048mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成6小时。无水后处理，除去挥发物，与甲苯共蒸发，并通过SPE(SCX2 500mg，MeOH，然后是MeOH与氨)和快速硅胶色谱法(二氯甲烷10–15％MeOH，然后是二氯甲烷15–30％MeOH与氨)纯化，得到化合物32Y(9mg，31％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.51(m,4H),1.73(m,2H),2.40(s,3H),2.79(m,4H),3.05(dd,2H),3.35(s,2H),3.50(m,4H),3.72(s,2H),3.94(s,2H),4.68(s,2H),6.88(dd,1H),7.11(dd,1H),7.21(d,1H),7.31(m,5H),7.50(s,1H),8.03(dd,1H)。UPLC-MS(长时间CSH 2-95％)rt 0.46(608[M+H]⁺),94％纯度。

方案33

2-甲基-2-(对甲苯基)丙酸甲酯33.2

在氩气下，将4-甲基苯基乙酸甲酯33.1(5g，30.4mmol)溶解于无水四氢呋喃(150ml)中。向其中加入18-冠-6醚(2g，7.61mmol)、碘甲烷(5.68ml，91.3mmol)，然后分批加入叔丁醇钾(10.25g，91.3mmol)[注意—冒泡]，并将混合物在室温搅拌18小时。向该混合物中分批加入氢化钠(60％的矿物油溶液，3.65g，91.3mmol)，并将混合物在室温搅拌22小时。在快速搅拌下将反应倒入冰/水中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物33.1(4.02g，68％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.55(s,6H),2.32(s,3H),3.60(s,3H),7.10(d,2H),7.22(m,2H)。

2-(4-(溴甲基)苯基)-2-甲基丙酸甲酯33.3

在氩气下，将化合物33.2(3.6g，18.7mmol)溶解于无水二氯甲烷(40ml)中。向其中加入N-溴琥珀酰亚胺(3.99g，22.5mmol)和过氧化苯甲酰(75％的水溶液，266mg，0.82mmol)，然后将混合物在回流下搅拌12小时。将混合物通过二氧化硅塞过滤并蒸发，得到化合物33.3(4.35g，86％)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.60(s,6H),3.65(s,3H),4.47(s,2H),7.32(m,4H)。

4-(4-(1-甲氧基-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯33.4

将1-Boc-哌嗪(1.03g，5.53mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(25ml)中，然后加入碳酸钾和化合物33.3(1.5g，5.53mmol)。将混合物在回流下搅拌16小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(20–50％EtOAc的庚烷溶液)，然后再次纯化(120倍二氧化硅，3：1EtOAc/庚烷，含2％MeOH；rf0.6)，得到化合物33.4(425mg，18％)为无色蜡状固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.47(s,9H),1.57(s,6H),2.37(m,4H),3.42(m,4H),3.48(s,2H),3.65(s,3H),7.28(m,4H)。UPLC(CSH 2-50％)0.65(321[M-Boc+H]⁺)。

2-(4-((4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-2-甲基丙酸33.5

将化合物33.5(100mg，0.238mmol)溶解于无水甲醇(3ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(0.14ml，0.36mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。加入额外的2.5M氢氧化钠(0.14ml，0.36mmol)，并将混合物在55℃加热3天。将混合物用水稀释，使用2M HCl将pH调节至4，然后用二氯甲烷萃取两次。将水层用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯萃取三次；将这些有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物33.5(100mg，定量)，为无色固体。

UPLC(CSH 2-50％)0.58(307[M-Boc+H]⁺)。

4-(4-(1-氯-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯33.6

将化合物33.5(100mg，0.238mmol)溶解于无水二氯甲烷(3ml)中，在氩气下在冰/水上冷却。加入草酰氯(30μl，0.36mmol)，然后加入1滴N,N-二甲基甲酰胺。将混合物在冰/水上搅拌3小时。将反应混合物蒸发，得到化合物33.6(110mg，定量)，为无色胶状物。UPLC在甲醇中(CSH 2-50％)0.69(321[甲基酯M-Boc+H]⁺)。

4-(4-(1-((2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯32.1z

根据通用路线G(步骤1A)，由中间体V(45mg，0.083mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液与N,N-二异丙基乙胺(45μl，0.29mmol)和化合物33.6(50mg，0.13mmol)在室温下合成18小时。加入额外的33.6(15mg)，在室温下搅拌5小时，并通过快速色谱(硅胶5g，EtOAc 0–10％MeOH)然后通过SPE(STMAd 2g，MeOH，然后是2–5％N-甲基吗啉的MeOH溶液)纯化，得到化合物32.1z(12mg，16％)，为无色玻璃状物。UPLC-MS(短时间CSH 2-50％)rt 1.00(886[M+H]⁺)。

实施例91：2-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)-2-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯基)丙酰胺32Z

根据通用路线G(步骤2A)，由32.1z(12mg，0.013mmol)、三氟乙酸(0.10ml)和二氯甲烷(2ml)合成4小时。无水后处理，除去挥发物，与甲苯共蒸发，得到化合物32Z(5mg，42％)，为无色固体(TFA盐)。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.50,1.51(2s,6H),2.30(s,5H),2.73(m,3H),2.83(m,2H),3.12(m,3H),3.20(s,1H),3.40(m,2H),3.48(s,2H),4.12(s,1H),4.35(s,1H),4.75(m,1H),4.90(m,2H),6.92(m,1H),7.13(m,6H),7.31(m,6H),8.06(m,1H)。UPLC-MS(CSH 2-20％)rt 0.75(686[M+H]⁺),98％纯度。

中间体W的合成

方案34

(1S,2S,4S,5R)-1-(3,5-双(三氟甲基)苄基)-2-((R)-羟基(喹啉-4-基)甲基)-5-乙烯基奎宁环-1-鎓溴化物(“PTC*”)

将3,5-双(三氟甲基)苄基溴化物(5.00g，17.0mmol)和辛可尼定(cinchonidine)(5.50g，17.8mmol)的异丙醇(IPA)溶液在回流下加热3.5小时。冷却至室温后，在搅拌下将反应混合物缓慢倒入二乙醚(250mL)中。将沉淀的固体过滤，并用二乙醚(150ml)和戊烷(100ml)洗涤，得到8.60g(84％)产物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.48(m,1H),1.91(m,1H),2.12(m,1H),2.31(m,2H),2.76(s,br,1H),3.41(t,1H),3.50(dd,1H),3.71(m,1H),4.02(t,1H),4.58(m,1H),5.03(d,1H),5.19(m,2H),5.37(d,1H),5.71(ddd,1H),6.67(s,1H),7.98(dddd,2H),8.15(dd,1H),8.27(s,1H),8.34(d,1H),8.98(d,1H)；[α]_D ²³＝-139.5°(c8.9,MeOH)。

4-氨基邻苯二甲酸二甲酯

向4-硝基邻苯二甲酸(10.6g，50.2mmol)的甲醇(50ml)溶液中加入甲磺酸(7.2g，75.3mmol)。将反应混合物加热回流过夜。冷却至室温后，加入Pd/C(1g，在5ml水中)，并将反应混合物在37℃下搅拌9小时。然后加入乙酸乙酯(50ml)，并通过过滤除去Pd/C。真空除去挥发物至干，并将粗产物溶解于乙酸乙酯(～100ml)中，有机相用水洗涤，用硫酸镁干燥并过滤。真空除去挥发物，得到10.5g(100％)所需产物。该产物不经进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.85(s,3H),3.92(s,3H),6.69(d,1H),6.75(s,1H),7.74(d,1H).

4-(二苄基氨基)邻苯二甲酸二甲酯

向4-氨基苯-1,2-二羧酸二甲酯(10.5g，50.2mmol)、碳酸钾(22g，160.6mmol)和无水碘化钾(1.70g，10.0mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(100)溶液中缓慢加入苄基氯(15.9g，125.5mmol)。将反应混合物在90℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯(～500ml)稀释。将有机层用盐水和H₂O洗涤。有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤，并在真空下除去挥发物，得到18.6g(96％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.76(m,1H),7.36(m,7H),7.21(m,3H),6.83(d,1H),6.74(dd,1H),4.72(s,4H),3.88(s,3H),3.84(s,3H)。LCMS(390.17[M+H]⁺)。

(4-(二苄基氨基)-1,2-亚苯基)二甲醇

在0℃下，将4-(二苄基氨基)苯-1,2-二羧酸二甲酯(16.00g，40.8mmol)的四氢呋喃(200ml)溶液缓慢加入到氢化铝锂(3.1g，81.6mmol)的四氢呋喃(300ml)溶液中。将反应混合物在0℃下搅拌20分钟，然后将其在室温下搅拌3小时。然后在0℃下缓慢加入四氢呋喃的水溶液(用50ml四氢呋喃稀释的50ml水)。接下来，加入100ml的15％氢氧化钠溶液。使反应混合物升温至室温，然后通过硅藻土过滤。将混合物浓缩，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，然后用氯化铵水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到11.00g(81％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ4.54(s,2H),4.61(s,2H),4.67(s,br,4H),6.61(m,1H),6.90(m,1H),7.12(m,1H),7.26(m,10H)。

(2-(氯甲基)-4-(二苄基氨基)苯基)甲醇盐酸盐

在0℃下，向亚硫酰氯(7.1ml，96.3mmol)的乙腈(20ml)溶液中缓慢(在10分钟内)加入4-(二苄基氨基)苯-1,2-二基]二甲醇(10.7g，32.1mmol)的乙腈(20ml)溶液。将反应混合物在室温搅拌1.5小时[注意：明显地放出HCl/SO2气体]。将二乙醚(140ml)加入到反应混合物中，10分钟后形成晶体。加入另外的二乙醚(50ml)，并通过过滤收集晶体，转移到圆底烧瓶中，并在二乙醚(80ml)中搅拌20分钟。然后通过过滤收集晶体。该操作重复3次，然后将晶体真空干燥，得到9.7g(78％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ4.48(s,2H),4.60(s,2H),4.71(s,br,4H),7.30(m,8H),7.38(s,1H),7.46(m,4H)。LCMS(352.1[M+H]⁺)

N-(叔丁基)-3-甲基吡啶-2-胺

在85℃下，将2-溴-3-甲基吡啶(25.0g，145mmol)、NaO^tBu(28.0g，291mmol)、Pd₂(dba)₃(0.30g，0.33mmol)、BINAP(0.41g，0.66mL)和^tBuNH₂(31ml，290.66mmol)在甲苯(380ml)中的混合物搅拌过夜。加入水(～200ml)以淬灭反应，并通过添加3M HCl将pH调节至pH～4。加入二乙醚(～300ml)，分离两层。水层用二乙醚萃取，将合并的有机物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到21.9g(92％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.02(d,1H),7.19(d,1H),6.48(dd,1H),4.01(s,br,1H),2.05(s,3H),1.52(s,9H)。LCMS(165.14[M+H]⁺)。

1-(叔丁基)-2-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯

在-30℃下，向N-叔丁基-3-甲基吡啶-2-胺(12.0g，73.1mmol)的四氢呋喃(210ml)溶液中缓慢加入正丁基锂(35ml，80.4mmol)。15分钟后，滴加氯甲酸甲酯(5.9ml，76.8mmol)。5分钟后，将反应混合物温热至室温并搅拌1小时。将反应混合物冷却至-30℃，并缓慢加入正丁基锂(35ml，80.4mmol)。在-30℃下20分钟后，加入二异丙胺(14.0ml，102.3mmol)，然后直接加入正丁基锂(35ml，80.4mmol)。将反应混合物在-30℃下搅拌～15分钟，然后温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物冷却至-10℃，并逐滴加入氯甲酸甲酯(5.9mL，76.8mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1小时。然后缓慢加入6M HCl(35ml)以淬灭反应混合物。蒸发四氢呋喃至最小量，加水(～200ml)，产物用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到15.8g(87％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.80(s,2.7H),1.93(s,6.3H),3.82(s,0.9H),3.98(s,2.1H),6.95(m,0.3H),7.09(m,0.7H),7.53(m,0.3H),7.91(m,0.7H),8.16(m,0.7H),8.24(m,0.3H)(化合物混合物的光谱)。LCMS(249.12[M+H]⁺)。

(R)-1'-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮

在室温下，向氢氧化钠(72g)的水(60ml)溶液中加入甲苯(130ml)和[2-(氯甲基)-4-(二苄基氨基)苯基]甲醇盐酸盐(4.7g，12.1mmol)。在用氩气鼓泡的同时，将反应混合物在室温下搅拌5分钟。在10分钟内分3份加入1-叔丁基-2-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羧酸甲酯(3.0g，12.1mmol)。继续将氩气鼓泡通入搅拌的溶液15分钟，然后在室温下一次性加入(9R)-1-[3,5-双(三氟甲基)苄基]辛可宁-1-鎓-9-醇溴化物((9R)-1-[3,5-bis(trifluoromethyl)benzyl]cinchonan-1-ium-9-ol bromide)(0.7g，1.2mmol)。将该混合物在氩气鼓泡下于室温搅拌3小时。加入水(～300ml)[注意：放热反应]，并将混合物搅拌～15分钟，同时温热至室温。分离两层，水层用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到纯度为～90％，ee为83％的粗产物。将该产物在60℃下溶解于甲苯(60ml)中。一旦完全溶解，则将混合物温热至室温，并加入甲醇(180ml)。将混合物在室温搅拌16小时，并通过过滤收集所得晶体，并用甲醇洗涤，得到产物(61％，96％ee)。使用甲苯(50ml)和甲醇(120ml)使产物重结晶，得到3.1g(52％，＞99％ee)的产物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ8.14(m,1H),7.30(m,10H),7.05(m,2H),6.78(m,1H),6.67(s,br,2H),4.67(s,br,4H),3.48(d,2H),2.87(dd,2H),1.82(s,9H)。LCMS(488.27[M+H]⁺)。手性HPLC:

Lux 3μCellulose-1柱；正己烷：异丙醇，95：5；流速＝1.0ml/min；在254nm检测。

(R)-5-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮中间体W

在室温下，向(R)-1'-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮(3.1g，6.36mmol)的甲醇(120ml)溶液中加入甲磺酸(11ml)。将混合物在回流下搅拌4小时。在真空下除去甲醇，并将水(～100ml)加入到混合物中，并通过加入氢氧化钠的50％水溶液将pH调节至pH～10。水层用乙酸乙酯萃取，将合并的萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物溶解于甲醇(～80ml)中，并向该溶液中加入Pd/C(0.1g)，然后加入浓HCl(7ml)。将混合物在H₂气球下于室温搅拌过夜。除去挥发物至干燥，然后将粗物质溶解于二氯甲烷中。加入水，然后加入饱和碳酸钾水溶液至pH～10。将混合物用二氯甲烷萃取，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到1.2g(77％)所需产物。该化合物不经进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ8.05(dd,1H),7.14(dd,1H),7.04(d,1H),6.89(dd,1H),6.71(s,br,1H),6.67(dd,1H),3.46(dd,2H),2.96(dd,2H)；LCMS(252.11[M+H]⁺)；手性HPLC:

Lux 3μCellulose-1柱；正己烷：异丙醇，40：60；流速＝0.5mL/min；在220nm检测。

中间体X的合成

方案35

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-(2,2,2-三氟乙酰基)氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯35.1

向化合物31.5(4.50g，11.1mmol)和中间体W(2.80g，11.1mmol)的二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入EDCI(2.56g，13.3mmol)、DIPEA(3.60g，27.8mmol)和HOAt(1.82g，13.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。通过加入水(100mL)淬灭混合物，并用乙酸乙酯(3 x 100ml)萃取。将合并的有机相先后用0.5mol/L的盐酸水溶液(2×100ml)和碳酸氢钠的饱和水溶液(100ml)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物35.1，为黄色固体(6.1g，9.18mmol，83％收率，96％纯度)。1H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.44–1.47(m,9H),2.82–2.91(m,3H),3.04(d,2H),3.57–3.63(m,2H),4.02–4.12(m,2H),4.44–4.49(m,2H),4.85–4.88(m,2H),6.83(t,1H),7.07(dd,1H),7.17–7.23(m,4H),7.30–7.37(m,2H),7.44–7.52(m,1H),8.00(br.s,1H),8.13(d,1H)。

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯中间体X

向化合物35.1(6.10g，9.57mmol)在甲醇(60mL)和水(15mL)中的溶液中加入碳酸钾(2.64g，19.13mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。真空除去混合物的甲醇。将残余物溶解于乙酸乙酯(200ml)中，并用0.5mol/L盐酸的水溶液(2×100ml)洗涤。弃去有机相。用碳酸氢钠的饱和水溶液将水相调节至pH＝9，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到中间体X(4.50g，86％收率)，为黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.48(s,9H),2.84(s,3H),3.05(dd,2H),3.47(s,2H),3.64(dd,2H),3.89(s,2H),4.64(s,2H),6.81(dd,1H),7.07(dd,1H),7.19–7.24(m,2H),7.30–7.34(m,4H),7.66(s,1H),8.13(dd,1H),8.49(br.s,1H),9.26(br.s,1H)。

通用路线H

方案36

N-[[2-[[金刚烷-1-羰基-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯36.1a

向金刚烷-1-羧酸(40mg，0.22mmol)的亚硫酰氯(5mL)溶液中加入二甲基甲酰胺(1.62mg，0.22)。将混合物在80℃下搅拌3h。将混合物在真空下浓缩，并将残余物溶解于二氯甲烷(1mL)中。在氮气保护下在0℃下将该溶液缓慢加入到中间体X(50mg，0.92)和三乙胺(50mg，0.49mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物倒入水(20mL)中，然后用二氯甲烷(3×20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(50ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物36.1a(60mg，0.85mmol，粗品)，为黄色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.36(s,9H),1.87(s,6H),1.94(s,9H),2.70(s,3H),2.94–3.00(m,2H),3.54–3.60(m,2H),3.98–4.06(m,2H),4.41(s,2H),4.88(s,2H),6.81–6.84(m,1H),7.05–7.16(m,5H),7.22–7.24(m,2H),7.51(s,1H),8.02(d,1H),8.56(br.s,1H)。

实施例92：N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]金刚烷-1-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36A

向化合物36.1a(60mg，0.85mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。LC-MS显示原料已完全消耗，并且检测到所需的MS。将混合物真空浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：22％-52％，9min)。冻干后，得到化合物36A，为白色固体(15mg，0.24mmol，29％收率，99％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.77(s,6H),2.03(s,9H),2.81(s,3H),3.10–3.30(m,2H),3.48–3.54(m,2H),4.32(s,2H),4.69–4.74(m,4H),6.89(dd,1H),7.13(dd,1H),7.24(d,1H),7.40(d,1H),7.42–7.48(m,5H),8.05(dd,1H)。

4,4-二氟-1-甲基环己烷羧酸乙酯

在氮气下，在-78℃下，向二异丙胺(354mg，3.51mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中滴加n-BuLi(2.5M，1.40mL)。将混合物在-78℃下搅拌1小时，并加入4,4-二氟环己烷羧酸乙酯(500mg，2.60mmol)。将混合物温热至0℃并搅拌30分钟，此时其被重新冷却至-78℃。加入甲基碘(7.70mL，124mmol)。将混合物温热至15℃并在15℃下搅拌12小时。将反应混合物通过饱和氯化铵水溶液(50ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝100∶1至80∶1稀释，得到产物(400mg，75％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.22(s,3H),1.27(t,3H),1.53–1.56(m,2H),1.74–1.91(m,2H),1.93–2.03(m,2H),2.16–2.21(m,2H),4.18(q,2H)。

4,4-二氟-1-甲基环己烷羧酸

向4,4-二氟-1-甲基环己烷羧酸乙酯(100mg，0.48mmol)在四氢呋喃(2mL)、甲醇(0.2mL)和水(0.2mL)中的溶液中加入氢氧化钠(39mg，0.97mmol)。将混合物在70℃下搅拌0.5小时。通过添加20ml水将反应混合物淬灭，然后添加1mol/L盐酸水溶液直至pH＝4，并用乙酸乙酯(2×30ml)萃取。将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到产物(67mg，77％收率)，为黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.30(s,3H),1.53–1.61(m,2H),1.82–2.04(m,4H),2.18–2.22(m,2H)。

(R)-叔丁基2-((4,4-二氟-1-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环己烷甲酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸酯36.1b

向化合物3(66mg，0.37mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入亚硫酰氯(200μL2.76mmol)和二甲基甲酰胺(2.85μL，0.037mmol)。将混合物在25℃搅拌2小时，并减压浓缩，得到72mg的4,4-二氟-1-甲基-环己烷羰基氯，为黄色油状物。

向中间体X(50mg，0.92mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三乙胺(111mg，1.10mmol)和4,4-二氟-1-甲基-环己烷羰基氯(72mg，0.37mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。通过加入20mL水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物36.1b，为黄色固体(64mg，99％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.32(s,3H),1.45(s,9H),1.66–1.68(m,2H),2.00–2.25(m,4H),2.15–2.18(m,2H),2.82(s,3H),3.02–3.08(dd,2H),3.62(dd,2H),4.10–4.16(m,2H),4.47(s,2H),4.92(br.s,2H),8.83(dd,1H),7.08(dd,1H),7.15–7.24(m,4H),7.29–7.34(m,2H),7.56(s,1H),8.12–8.13(m,1H),8.34(br.s,1H),8.65(br.s,1H)。

实施例93：(R)-4,4-二氟-1-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)环己烷甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36B

向化合物36.1b(64mg，0.91mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.5mL，6.75mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。减压浓缩混合物，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：20％-50％，9min)。冻干后，得到化合物36B，为白色固体(30mg，46％收率，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.36(s,3H),1.55–1.65(m,2H),1.86–2.00(m,4H),2.23(d,2H),2.81(s,3H),3.10(dd,2H),3.51(dd,2H),4.33(s,2H),4.51–4.80(m,4H),6.90(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(d,1H),7.35–7.46(m,5H),7.53(s,1H),8.06(dd,1H)。

LC-MS:RT 0.905min,(602[M+H]⁺),纯度100％。

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-[1-(三氟甲基)环戊烷羰基]氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯36.1c

向1-(三氟甲基)环戊烷-1-羧酸(50mg，0.27mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入Ghosez试剂(1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺)(44mg，0.33mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物加入到中间体X(50mg，0.92mmol)和三乙胺(28mg，0.28mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌1小时。通过加入水(20mL)淬灭混合物，并用二氯甲烷(25mL)萃取。将有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物36.1c，为白色固体(60mg，87％收率，95％纯度)，无需进一步纯化即可使用。LC-MS:RT 0.917min,(728[M+Na]⁺),纯度95.3％。

实施例94：N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-1-(三氟甲基)环戊烷甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36C

向化合物36.1c(60mg，0.85mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。浓缩混合物，残余物通过制备型HPLC纯化(柱：BostonPrime C18 150 x 30mm 5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：31％-51％，8min)。冻干后，得到化合物36C，为白色固体(34mg，56％收率，100％纯度)。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.70–1.72(m,4H),2.20–2.24(m,2H),2.50–2.54(m,2H),2.80(s,3H),3.08(dd,2H),3.51(dd,2H),4.29(s,2H),4.53(br.s,1H),4.81(m,3H),6.89–6.92(m,1H),7.16–7.25(m,2H),7.34–7.53(m,5H),8.06(dd,1H)。

LC-MS:RT 0.797min,(606[M+H]⁺),纯度100％。

(R)-叔丁基2-((2-氟-2-甲基-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺基)甲基)苄基(甲基)氨基甲酸酯36.1d

向2-氟-2-甲基-丙酸(40mg，0.38mmol)的二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入DIEA(100mg，0.77mmol)、EDCI(85mg，0.44mmol)和HOAt(60mg，0.44mmol)。加入中间体X(100mg，0.18mmol)，并将得到的混合物在40℃下搅拌16小时。将反应混合物倒入水(20ml)中，然后用乙酸乙酯(2×40mL)萃取。将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Luna C18 150x25，5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：50％-70％，8min)，得到化合物36.1d，为白色固体(50mg，43％收率)。¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ1.37(s,9H),1.62(s,3H),1.67(s,3H),2.72–2.74(m,3H),2.97(dd,2H),3.60–3.61(m,2H),3.96–4.20(m,2H),4.41(s,2H),4.73–4.88(m,2H),6.93(dd,1H),7.12–7.13(m,4H),7.23–7.27(m,3H),7.53(br.s,1H),7.91(d,1H),8.32(br.s,1H),11.39(br.s,1H)。

实施例95：(R)-2-氟-2-甲基-N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)丙酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36D

向化合物36.1d(40mg，0.63mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入TFA(0.5mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物减压浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：10％-40％，10min)。冻干后，得到化合物36D，为白色固体(34mg，83％收率，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.67(s,3H),1.72(s,3H),2.83(s,3H),3.08(d,2H),3.52(dd,2H),4.36(s,2H),4.60-4.80(m,4H),6.90–6.93(m,1H),7.16–7.28(m,3H),7.46–7.49(m,5H),8.07(d,1H)。LC-MS:RT＝2.021min,[M+H]⁺530,100％纯度。

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-(3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙酰基)氨基]甲基]苯基]甲基]碳酸叔丁酯36.1e

在20℃下，向3,3,3-三氟-2,2-二甲基-丙酸(70mg，0.45mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中加入Ghosez试剂(90mg，0.67mmol)。将所得混合物在20℃下搅拌2.5小时。在0℃下，将混合物加入到中间体X(40mg，0.74mmol)和三乙胺(60mg，0.59mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中。将混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(2×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝5∶1至1∶1洗脱，得到化合物36.1e，为灰白色固体(70mg，91％收率，98％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.42–1.49(m,9H),1.54(s,6H),2.83(s,3H),3.05(dd,2H),3.63(dd,2H),4.12–4.16(m,2H),4.46(s,2H),4.93(s,2H),6.83(dd,1H),7.08(dd,1H),7.13–7.25(m,4H),7.30–7.37(m,2H),7.55(s,1H),8.11(dd,1H),8.17(br.s,1H),8.40(br.s,1H)。LC-MS:RT＝0.886min,[M+Na]⁺702,98.16％纯度。

实施例96：3,3,3-三氟-2,2-二甲基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]丙酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36E

在20℃下，向化合物36.1e(65mg，0.96mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(0.4mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：15％-45％，9min)。冻干后，得到化合物36E，为白色固体(36mg，54％收率，100％纯度)。¹HNMR(CD₃OD,400MHz)δ1.58(s,6H),2.81(s,3H),3.08(d,2H),3.51(dd,2H),4.31(s,2H),4.42–4.60(m,2H),4.90-5.03(m,2H),6.90(dd,1H),7.15(dd,1H),7.24(d,1H),7.33(d,1H),7.39-7.53(m,5H),8.06(d,1H)。LC-MS rt＝1.756min,[M+H]⁺580,98.6％纯度。

4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸苄酯

在氮气下，在-78℃下，向二异丙胺(624mg，6.17mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中滴加n-BuLi(2.5M，2.5mL)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。加入异丁酸苄酯(1.00g，5.61mmol)，并在0℃下继续搅拌30分钟，然后将其重新冷却至-78℃。加入2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(1.43g，6.17mmol)。将所得混合物温热至15℃并搅拌12小时。通过添加氯化铵水溶液(50ml)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。将合并的有机相用盐水(20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：58％-88％，9min)，得到4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸苄酯(160mg，11％收率)，为无色油状物。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.33(d,6H),2.50(q,2H),5.14(s,2H),7.33–7.38(m,5H)。

4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸

向4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸苄酯(80mg，0.31mmol)的甲醇(4mL)溶液中加入10％Pd/C(10mg)。将混合物在真空下脱气并用氢气吹扫3次。将所得的悬浮液在氢气气球下于25℃搅拌1小时。将混合物过滤并将滤液在真空下浓缩，得到化合物4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸(38mg，72.66％收率)，无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.36(s,6H),2.50(q,2H)。

N-甲基-N-[[2-[[[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]-(4,4,4-三氟-2,2-二甲基-丁酰基)氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯36.1f

在20℃下，向化合物4,4,4-三氟-2,2-二甲基丁酸(30mg，0.18mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入Ghosez试剂(35mg，0.26mmol)。将混合物在20℃下搅拌2.5小时，并在0℃下加入到中间体X(35mg，0.65mmol)和三乙胺(52mg，0.52mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌1小时，倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。将合并的有机相用0.1M盐酸水溶液(20ml)和碳酸氢钠饱和水溶液(30ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物36.1f，为黄色固体(40mg，粗品)。LCMS RT＝0.979min,[M+Na]⁺＝716

实施例97：4,4,4-三氟-2,2-二甲基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]丁酰胺2,2,2-三氟乙酸酯36F

在20℃下，向化合物36.1f(40mg，0.58mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.2mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时，并真空浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18 250x50mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：23％-43％，8min)，得到化合物36F，为白色固体(27.42mg，66.82％收率，99.43％纯度)。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.44(s,6H),2.69(q,2H),2.81(s,3H),3.09(d,2H),3.51(dd,2H),4.32(s,2H),4.38–4.56(m,1.5H),4.77–4.83(m,2.5H),6.87–6.94(m,1H),7.13–7.21(m,1H),7.24(d,1H),7.32(d,1H),7.37–7.52(m,5H),8.06(d,1H)。LC-MS RT＝1.836min,[M+H]⁺594,99.43％纯度。

方案37

4-乙基四氢吡喃-4-羧酸乙酯37.2

在氮气气氛下，在-70℃下，向二异丙胺(380mg，3.76mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液中滴加2.5M正丁基锂(1.5mL)。将混合物在-70℃下搅拌1小时。然后在-70℃下将化合物37.1(500mg，3.16mmol)的四氢呋喃(2ml)溶液滴加到该混合物中，温热至0℃并搅拌0.5小时。将混合物冷却至-70℃，并缓慢加入碘乙烷(740mg，4.74mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液。将所得混合物在氮气气氛下于-70℃再搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机相用盐水(2×30ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物用硅胶柱纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝1∶0至50∶1洗脱，得到化合物37.2(530mg，2.85mmol，90.03％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.83(t,3H),1.28(t,3H),1.44–1.54(m,2H),1.58(q,2H),2.05–2.12(m,2H),344(td,2H),3.81–3.85(m,2H),4.20(q,2H)。

4-乙基四氢吡喃-4-羧酸37.3

在20℃下，向化合物37.2(250mg，1.34mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入氢氧化钠(322mg，8.05mmol)的水(1mL)溶液。将混合物加热至70℃并搅拌12小时，倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(20ml)萃取。保留水相，并弃去有机相。向水相中加入1M盐酸，直到pH＝4。所得混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(2×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物37.3(150mg，71％收率)，为黄色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ0.90(t,3H),1.47–1.57(m,2H),1.64(q,2H),2.07(d,2H),352(td,2H),3.87(dt,2H)。

N-[[2-[[(4-乙基四氢吡喃-4-羰基)-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯37.4

在20℃下，向化合物37.3(50mg，0.32mmol)和二甲基甲酰胺(2.31mg，0.032mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入亚硫酰氯(376mg，3.20mmol)。将混合物在20℃下搅拌1.5小时，并真空浓缩，得到残余物。将残余物溶解于二氯甲烷(1.5ml)中，并在0℃下加入到中间体X(65mg)和三乙胺(97mg，0.96mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中。将混合物在20℃下搅拌2小时，倒入水(10ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。将合并的有机相用0.1M盐酸(20ml)、饱和碳酸氢钠(30ml)和盐水(2×30ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝5∶1至1∶3洗脱，得到化合物37.4(40mg，56.20μmol，47％收率，95.8％纯度)，为白色固体。LCMS:RT＝0.860min,[M+H]⁺＝682,95.795％纯度。

实施例98：4-乙基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]四氢吡喃-4-甲酰胺2,2,2三氟乙酸酯37.5

在20℃下，向化合物4(40mg，58.67μmol，1eq)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入三氟乙酸(0.2mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时。LCMS显示原料已消耗并且检测到所需质量。将所得混合物真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex luna C18250x50mm，10μm；流动相：[水(0.1％三氟乙酸)-乙腈]；B％：24％-41％，7min)，得到化合物37.5(23.68mg，57％收率，98.8％纯度)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ0.85(s,3H),1.48–1.60(m,2H),1.73–1.86(m,2H),2.19(d,2H),2.82(s,3H),3.09(dd,2H),3.44-3.61(m,4H),3.65–3.77(m,2H),4.35(s,2H),4.47–4.71(m,4H),6.87-6.94(m,1H),7.14–7.20(m,1H),7.24(d,1H),7.32–7.50(m,5H),7.54(s,1H),8.06(dd,1H)。LC-MS:RT＝1.650min,[M+H]⁺582。

方案38

2-(叠氮基甲基)苄腈38.2

向2-(溴甲基)苄腈38.1(14.0g，71.4mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中的混合物中加入叠氮化钠(7.90g，121mmol)。将混合物在60℃下搅拌12小时，用水(150ml)淬灭，并用乙酸乙酯(3×20 0ml)萃取。合并的有机相用盐水(3×200ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，将溶剂在真空下浓缩至约20ml，并将混合物用异丙醇(100ml)稀释。重复该过程3次。然后将所得的100ml异丙醇中的混合物直接用于下一步。LCMS:RT＝0.716min,(159[M+H]⁺),98.753％纯度。

N-[(2-氰基苯基)甲基]氨基甲酸叔丁酯38.3

向化合物38.2(11.2g，70.8mmol)的异丙醇(100ml)溶液(参见上文)中加入三乙胺(21.5g，212mmol)、二碳酸二叔丁酯(23.2g，106mmol)和10％钯/碳(1.0g)。将混合物在真空下脱气，用氢气吹扫三次，并在氢气气球下于20℃搅拌16小时。将反应混合物过滤，将滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝25∶1至15∶1洗脱，得到化合物38.3(4g，24.32％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.45(s,9H),4.50(d,2H),5.16(br.s,1H),7.38(td,1H),7.51–7.59(m,2H),7.63(d,1H)。

N-[[2-(氨基甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯38.4

向化合物38.3(4.00g，17.2mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液中加入氯化钴(4.10g，17.2mmol)的水(20mL)溶液。然后加入硼氢化钠(1.30g，34.4mmol)，将混合物在35℃搅拌12小时，用水(20ml)稀释，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并的有机相用盐水(3×50ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过反相快速色谱法纯化(氢氧化铵条件)，得到化合物38.4(1.70g，43％收率)，为黄色油状物。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.45(s,9H),3.94(s,2H),4.37(d,2H),6.00(br.s,1H),7.24–7.26(m,1H),7.28–7.32(m,2H),7.34–7.36(m,1H)。

2-[[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]苯基]甲基氨基]乙酸乙酯38.5

向化合物38.4(500mg，2.12mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入三乙胺(642mg，6.35mmol)和2-溴乙酸乙酯(354mg，2.12mmol)。将混合物在20℃下搅拌12小时，用水(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。合并的有机层用盐水(3×30ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝30∶1至10∶1洗脱，得到化合物38.5(550mg，81％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.31(t,3H),1.45(s,9H),3.48(s,2H),3.83(s,2H),4.20(q,2H),4.39(d,2H),6.18(br.s,1H),7.24–7.26(m,1H),7.28–7.34(m,2H),7.38–7.40(m,1H)。

2-[[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]苯基]甲基-[1-(三氟甲基)环丙烷羰基]氨基]乙酸乙酯38.6

在20℃下，向1-(三氟甲基)环丙烷羧酸(251mg，1.63mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入Ghosez试剂(280mg，2.09mmol，4.5eq)。将混合物在20℃下搅拌2.5小时。在0℃下，将混合物加入到化合物38.5(150mg，0.46mmol)和三乙胺(376mg，3.72mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中。将所得混合物在20℃下搅拌0.5小时，倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。将合并的有机相用0.1M盐酸(20ml)、碳酸氢钠饱和水溶液(30ml)和盐水(2×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物38.6(160mg，60％收率，80％纯度)，为黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.25–1.33(m,7H),1.45(s,9H),3.90–4.05(m,1H),4.15–4.37(m,5H),4.70–4.88(m,1H),4.89–5.09(m,1H),7.04–7.16(m,1H),7.28–7.38(m,3H)。

2-[[2-[(叔丁氧基羰基氨基)甲基]苯基]甲基-[1-(三氟甲基)环丙烷羰基]氨基]乙酸38.7

在20℃下，向化合物38.6(160mg，0.28mmol)在四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中的溶液中加入氢氧化钠(56mg，1.40mmol)。将混合物在20℃搅拌2小时，倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(20mL)萃取，将水相分离并保存。通过添加1M盐酸将水相调节至pH4。所得混合物用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(2×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物38.7，为黄色胶状物(110mg，0.24mmol，86％收率，94％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.29–1.35(m,4H),1.46(s,9H),3.96–4.05(m,1H),4.20–4.36(m,3H),4.75–4.85(m,1H),4.93–5.02(m,1H),7.07–7.14(m,1H),7.28–7.36(m,3H)。LCMS:RT＝0.883min,[M+Na]⁺＝453,93.75％纯度。

N-[[2-[[[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-[1-(三氟甲基)环丙烷羰基]氨基]甲基]苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯38.8

在20℃下，向化合物38.7(50mg，0.12mmol)、EDCI(34mg，0.17mmol)和HOAt(21mg，0.151mmol)的二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中加入二异丙基乙胺(60mg，0.46mmol)，然后加入中间体W(29mg，0.12mmol)。将混合物在20℃下搅拌3小时，倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。将合并的有机相用盐水(2×20ml)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物38.8，为黄色固体(70mg，0.92mmol，79％收率，87.4％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.28–1.39(m,4H),1.44(s,9H),3.05(dd,2H),3.62(dd,2H),4.00–4.12(m,1H),4.20–4.21(m,2.5H),4.65–5.30(m,2.5H),6.85(dd,1H),7.10(d,1H),7.16–7.25(m,3H),7.28–7.37(m,3H),7.44–7.55(m,1H),8.13(d,1H),8.18(br s,1H),8.51(br.s,1H)。LCMSRT＝0.927min,[M+Na]⁺＝686。

实施例99：N-[[2-(氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-1-(三氟甲基)环丙基甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯38.9

在20℃下，向化合物38.8(70mg，0.92mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(0.4mL，5.40mmol)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时，并真空浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：29％-46％，7min)，得到38.9，为白色固体(37mg，59％收率，100％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.39(s,4H),3.09(d,2H),3.51(dd,2H),4.22(s,2H),4.50–4.64(br.s,2H),4.80–4.83(m,2H),6.87-6.94(m,1H),7.16(d,1H),7.22(d,1H),7.31(d,1H),7.36–7.50(m,5H),8.06(dd,1H)。LC-MS RT＝1.700min,[M+H]⁺564。

方案39

3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸39.2

将化合物39.1(150mg，0.66mmol)在4M盐酸/二噁烷(5ML)中的溶液在20℃搅拌1小时。将混合物浓缩，得到化合物39.2(107mg，0.65mmol，99％收率，HCl盐)，为白色固体。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.34(d,6H)。

3-(苄氧基羰基氨基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸39.3

向化合物39.2(67mg，0.41mmol，HCl盐)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入三乙胺(207mg，2.05mmol)和N-(苄氧基羰氧基)琥珀酰亚胺(122mg，0.49mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时，通过加入水(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯(2 x 25mL)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚/乙酸乙酯＝5∶1～1∶1洗脱，得到化合物39.3，为白色固体(100mg，0.38mmol，93％收率)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ2.24(s,6H),5.05(s,2H),7.25–7.40(m,5H)。

N-[[2-[[[3-(苄氧基羰基氨基)双环[1.1.1]戊烷-1-羰基]-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯39.4

向中间体X(80mg，0.15mmol)和化合物39.3(46mg，0.18mmol)的二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入EDCI(57mg，0.29mmol)、HOAt(40mg，0.29mmol)和DIEA(38mg，0.29mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时，通过加入水(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯(3 x 20mL)萃取。将合并的有机相用0.5M盐酸(2 x 20mL)、碳酸氢钠饱和水溶液(20ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物39.4，为白色固体(80mg，59％收率，86％纯度)。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.45(s,9H),2.33(s,6H),2.82(s,3H),3.04(dd,2H),3.62(dd,2H),4.06(s,2H),4.45(s,2H),4.81(s,2H),5.04(s,2H),6.80–6.83(m,1H),7.06–7.08(m,2H),7.18–7.23(m,3H),7.30–7.33(m,6H),7.54(s,1H),8.13(d,1H),8.69(s,1H),8.92(br.s,1H)。LCMS rt 0.970(785[M+H]⁺)。

N-[[2-[[(3-氨基双环[1.1.1]戊烷-1-羰基)-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯39.5

在氮气气氛下，向化合物39.4(80mg，0.10mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入10％Pd/C(30mg)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫3次。将所得混合物在氢气气球下于20℃搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，并将过滤液体浓缩，得到化合物39.5，为白色固体(66mg，79％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.45(s,9H),2.12–2.28(m,6H),2.82(s,3H),3.08(q,2H),3.52(q,2H),4.17(m,2H),4.46(m,2H),4.71(s,2H),6.87–6.91(m,1H),7.20–7.37(m,7H),7.54(d,1H),8.05(s,1H)。LCMS rt 0.708(651[M+H]⁺)。

N-[[2-[[(3-乙酰氨基双环[1.1.1]戊烷-1-羰基)-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯39.6

向化合物39.5(66mg，0.10mmol)的二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入醋酸(12mg，0.20mmol)、EDCI(39mg，0.20mmol)、HOAt(28mg，0.20mmol)和DIEA(26mg，0.20mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时，通过加入水(20ml)淬灭，并用乙酸乙酯(3 x 20mL)萃取。将合并的有机相用0.5M盐酸(2×20ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物39.6，为黄色油状物，直接使用(70mg，71％纯度)。

LCMS rt 0.875(693[M+H]⁺)。

实施例100：3-乙酰氨基-N-[[2-(甲基氨基甲基)苯基]甲基]-N-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯39.7

向化合物39.6(70mg，0.10mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在20℃下搅拌0.5小时，在真空下浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Phenomenex Synergi C18 150x25mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：10％-40％，9min)。冻干后，得到化合物39.7，为白色固体(11mg，16％收率，99.1％纯度)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.86(s,3H),2.40(s,6H),2.81(s,3H),3.08(d,2H),3.48(dd,2H),4.34(s,2H),4.44(s,2H),4.90(s,2H),6.91–6.93(m,1H),7.16–7.21(m,3H),7.34(s,1H),7.40–7.46(m,4H),8.06(d,1H)。LCMS rt 0.719(593[M+H]⁺)。

方案40

2-[苄基-(2-硝基苯基)磺酰基-氨基]乙酸乙酯40.2

向化合物40.1(10.00g，51.7mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入三乙胺(10.47g，103.5mmol)和2-硝基苯磺酰氯(12.62g，56.9mmol)。将混合物在20℃搅拌2小时，倒入1M盐酸(50ml)中，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝10∶1～5∶1洗脱，得到化合物40.2，为黄色固体(12.00g，31.7mmol，61％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.17(t,3H),4.03(s,2H),4.08(q,2H),4.67(s,2H),7.27–7.33(m,2H),7.30–7.38(m,3H),7.66–7.71(m,3H),8.09–8.11(m,1H)。

2-[苄基-(2-硝基苯基)磺酰基-氨基]乙酸40.3

向化合物40.2(11.00g，29.1mmol)在四氢呋喃(100mL)和水(15mL)中的溶液中加入氢氧化锂(6.10g，145mmol)。将混合物在20℃搅拌2小时，倒入1M盐酸(100ml)中，并用乙酸乙酯(3×80ml)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物40.3，为黄色油状物(10.00g，28.5mmol，98％收率)。

¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ4.08(s,2H),4.65(s,2H),7.23–7.25(m,2H),7.31–7.33(m,3H),7.68–7.72(m,3H),8.06–8.08(m,2H)。

2-[苄基-(2-硝基苯基)磺酰基-氨基]乙酰氯40.4

向化合物40.3(10.0g，28.5mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入亚硫酰氯(30mL)。将混合物在80℃下搅拌1小时，并真空浓缩，得到化合物40.4，为黄色油状物。

2-(2-硝基苯基)磺酰基-1,3-二氢异喹啉-4-酮40.5

在-40℃下，向化合物40.4(10.00g，27.1mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中加入氯化铝(18.08g，135mmol)。将混合物在-20℃搅拌1小时，倒入1N盐酸(100ml)中，并用乙酸乙酯(80mL*3)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，将粗产物与甲醇(20ml)一起研磨，得到化合物40.5，为黄色固体(8.00g，24.1mmol，89％收率)。¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ4.33(s,2H),4.83(s,2H),7.41(t,1H),7.50(d,1H),7.63(t,1H),7.84–7.76(m,3H),7.91(dd,1H).8.06(dd,1H)。

2-(2-硝基苯基)磺酰基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-醇40.6

向化合物40.5(7.00g，21.1mmol)的乙醇(100mL)溶液中加入硼氢化钠(1.59g，42.1mmol)。将混合物在25℃搅拌3小时，在真空下浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(100ml)溶解并倒入水(50ml)中。收集有机相，并将水相用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。合并有机相，并用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物用硅胶柱纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝10∶1～3∶1洗脱，得到化合物40.6，为黄色固体(6.00g，17.9mmol，85％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.30(d,1H),3.53(dd,1H),3.86(dd,1H),4.41(d,1H),4.80–4.77(m,2H),7.15(t,1H),7.27–7.32(m,2H),7.49(t,1H),7.67(m,1H),7.74–7.72(m,2H),8.15–8.13(m,1H)。

4-羟基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.8

在20℃下，向化合物40.6(4.00g，12.0mmol)的二甲基甲酰胺(40mL)溶液中加入碳酸钾(2.48g，18.0mmol)，然后加入苯硫醇(1.98g，18.0mmol)。将混合物在20℃下搅拌4小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1∶1)显示原料已完全消耗，得到化合物40.7。反应混合物无需进一步后处理即可直接用于下一步。向反应混合物中加入另外的碳酸钾(1.11g，8.04mmol)和二碳酸二叔丁酯(5.27g，24.1mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)检测到了新的斑点，LCMS显示起始材料被完全消耗。将混合物倒入水(20ml)中，并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物用硅胶柱纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝10∶1～5∶1稀释，得到化合物40.8，为无色油状物(1.20g，4.81mmol，60％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.51(s,9H),3.60(dd,1H),3.93(dd,1H),4.43(d,1H),4.80–4.76(m,2H),7.40–7.16(m,1H),7.30–7.28(m,2H),7.48–7.46(m,1H.)

4-氧代-1,3-二氢异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.9

向化合物40.8(1.20g，4.81mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入Dess-Martin高碘烷(DMP)(3.06g，7.22mmol)和碳酸氢钠(1.21g，14.4mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物倒入饱和亚硫酸钠水溶液(10ml)中，并用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物用硅胶柱纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝20∶1～5∶1洗脱，得到化合物40.9，为无色油状物(800mg，2.62mmol，54％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.46(s,9H),4.34(s,2H),4.78(s,2H),7.31(d,1H),7.41(t,1H),7.58(td,1H),8.07(d,1H)。

(4E)-4-羟基亚氨基-1,3-二氢异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.10

向化合物40.9(800mg，3.24mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入盐酸羟胺(450mg，6.47mmol)和吡啶(1.28g，16.2mmol)。将混合物在70℃下搅拌2小时，过滤并将滤液在真空下浓缩。残余物用硅胶柱纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝20∶1洗脱，得到化合物40.10，为白色固体(750mg，2.86mmol，88％收率)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.49(s,9H),4.58(s,2H),4.69(s,2H),7.21(d,1H),7.28(t,1H),7.34(td,1H),7.90(d,1H),8.21(br.s,1H)。

4-氨基-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.11

向化合物40.10(200mg，0.76mmol)的异丙醇(1mL)溶液中加入10％Pd/C(100mg)。将混合物在真空下脱气，用氢气吹扫三次，并在氢气气球下于25℃搅拌16小时。将混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩，得到化合物40.11(140mg，粗品)，为无色油状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.49(s,9H),3.63(d,2H),3.96–3.97(m,1H),4.49(d,1H),4.71(d,1H),7.15–7.34(m,1H),7.22–7.41(m,2H),7.42–7.44(m,1H)。

4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.12

向化合物40.11(25mg，10 1mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入三乙胺(20mg，0.20mmol)和2-溴乙酸乙酯(18.mg，0.11mmol)。将混合物在40℃下搅拌48小时，真空浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝20∶1洗脱，得到化合物40.12，为无色油状物(35mg，粗品)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.27(t,3H),1.51(s,9H),3.25(d,1H),3.45–3.56(m,2H),3.71–3.85(m,1H),4.09–4.20(m,3H),4.31–4.43(m,1H),4.76–4.96(m,1H),7.14(d,1H),7.21–7.27(m,2H),7.33–7.40(m,1H)。

4-[2,2-二甲基丙酰基-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氨基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.13

向化合物40.12(35mg，0.10mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入三乙胺(26mg，0.26mmol)和2,2-二甲基丙酰氯(19mg，0.16mmol)。将混合物在15℃下搅拌16小时，然后在40℃下再搅拌3小时。将混合物真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯＝10∶1洗脱，得到化合物40.13，为黄色油状物(35mg，88.4％纯度)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.25(t,3H),1.43(s,9H),1.49(s,9H),3.03(t,1H),3.19(d,1H),4.00(d,1H),4.14(q,2H),4.20–4.30(m,1H),4.55–4.58(m,1H),4.92–5.10(m,1H),5.47–5.50(m,1H),7.17(d,1H),7.25–7.30(m,3H)。

2-[(2-叔丁氧基羰基-3,4-二氢-1H-异喹啉-4-基)-(2,2-二甲基丙酰基)氨基]乙酸40.14

向化合物40.13(35mg，0.084mmol)在甲醇(1mL)和水(0.5mL)中的溶液中加入氢氧化钠(10mg，0.25mmol)。将混合物在40℃下搅拌1小时，倒入水(10ml)中，并用乙酸乙酯(10ml)萃取。弃去有机相。用1M盐酸将水相酸化至pH＝5～6，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到化合物40.14(30mg，83％收率，90.9％纯度)，为无色油状物。LC-MS:rt 0.912(MS＝413[M+Na]⁺)。

4-[2,2-二甲基丙酰基-[2-氧代-2-[[(3R)-2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基]氨基]乙基]氨基]-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-羧酸叔丁酯40.15

向化合物40.14(20mg，0.051mmol)的二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入DIEA(20mg，0.15mmol)、EDCI(20mg，0.10mmol)和HOAt(14mg，0.10mmol)。加入中间体W(19mg，0.077mmol)，并将得到的混合物在20℃下搅拌16小时。将混合物倒入0.5M盐酸(10ml)中，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，得到粗化合物40.15，为黄色油状物(40mg，80％收率，63.8％纯度)。LC-MS:rt 0.967(MS＝624.4[M+H]⁺)。

实施例101：2,2-二甲基-N-[2-氧代-2-[(2-氧代螺[1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3,2'-茚满]-5'-基)氨基]乙基]-N-(1,2,3,4-四氢异喹啉-4-基)丙酰胺2,2,2-三氟乙酸酯40.16

向化合物40.15(40mg，0.064mmol)在二氯甲烷(1mL)和甲醇(0.1mL)中的溶液中加入溴化锌(217mg，0.96mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时，倒入5M氢氧化钠水溶液(10ml)中，并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥。过滤并浓缩后，粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Prime C18 150x30mm，5μm；流动相：[水(0.1％TFA)-乙腈]；B％：27％-44％，7min)，得到化合物40.16，为白色固体(4mg，99.1％纯度)；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.37(br.s,9H),3.11(d,2H),3.49–3.56(m,2H),3.65–3.94(m,2H),4.83–3.94(m,2H),4.80(m,3H),6.87–6.90(m,1H),7.14(d,1H),7.24(d,1H),7.31–7.60(m,6H),8.06(d,1H)。

方案41

2-(N-(2-氰基苄基)新戊酰胺基)乙酸锂41.1

将化合物22.1(91mg，0.31mmol)溶解于甲醇(2ml)、四氢呋喃(2ml)和水(1ml)的混合物中，并加入氢氧化锂一水合物(40mg，0.91mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后除去挥发物，并将粗产物通过快速硅胶色谱法直接纯化(100ml SiO₂，5-25％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物41.1，为无色固体(73mg，84％)。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.32(s,9H),4.23(br,2H), 4.84(br,2H),7.73(m,br,2H),7.67(m,br,1H),7.74(m,br,1H)。 LCMS(275[M-Li+2H]⁺)。

(R)-N-(2-氰基苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺41.2

将化合物41.1(59mg，0.21mmol)、中间体W(50mg，0.20mmol)和HATU(83mg，0.22mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中。加入N-甲基吗啉(0.1ml，9.3mmol)，并将混合物在室温搅拌15分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(5-25％二氯甲烷/甲醇)，得到化合物41.2(82mg，84％)，为无色玻璃状物。LCMS(508[M+H]⁺)。

实施例102：(R)-N-(2-(氨基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1,1',2',3-四氢螺[茚-2,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-5-基)氨基)乙基)新戊酰胺2,2,2-三氟乙酸酯41.3

将化合物41.2(16mg，0.03mmol)溶解于三氟乙酸(0.5ml)和甲醇(2ml)中，并添加钯碳(8mg)。将氢气气球装到反应烧瓶中，并将反应混合物在氢气气氛下于55℃搅拌2天。将乙酸乙酯(～5ml)加入到混合物中，并将得到的悬浮液过滤。除去挥发物，并将粗物质通过HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-50％乙腈/水0.1％TFA，历时20分钟)，然后冻干，得到化合物41.3，为白色固体(8.2mg，51％)。

¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),3.10(d,2H),3.53(m,2H),4.26(s,2H),4.44(s,br,2H),4.85(s,br,2H),6.92(dd,1H),7.18(dd,1H),7.25(d,1H),7.36(m,1H),7.45(m,4H),7.52(br,1H),8.08(dd,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-77.3；LCMS(512[M+H]⁺),98％纯。

中间体Y的合成

方案42

吡啶-3,4-二羧酸二甲酯42.2

将吡啶3,4-二羧酸42.1(20g，121mmol)溶解于甲醇(400ml)中，然后加入浓硫酸(12.9ml，242mmol)，并将混合物在回流下搅拌3天。除去挥发物并将液体小心倒入饱和碳酸钠中。用碳酸钠将pH调节至7，然后用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物42.2(15.3g，65％)，为油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.95(s,6H),7.50(d,1H),8.83(d,1H),9.06(s,1H)。UPLC(CSH 2-50％)0.60(196[M+H]⁺)。

3,4-双(甲氧基羰基)吡啶1-氧化物42.3

将化合物42.2(15.3g，78.5mmol)溶解于乙腈(300ml)中，在冰/水上冷却，然后加入过氧化氢脲(14.8g，157mmol)。向悬浮液中逐滴添加三氟乙酸酐(22.1ml，157mmol)，以使内部温度＜10℃。将混合物在室温下搅拌3小时。通过加入焦亚硫酸钠将反应淬灭，然后用水(800ml)稀释。用二氯甲烷萃取六次。将有机层用水洗涤两次然后用盐水洗涤，并用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物42.3(15.2g，98％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.92(s,3H),3.95(s,3H),7.69(d,1H),8.24(dd,1H),8.33(d,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.37(212[M+H]⁺)。

6-氯吡啶-3,4-二羧酸二甲酯42.4

将化合物42.3(15.2g，72.0mmol)悬浮在三氯氧化磷(72ml)中，然后将混合物在回流(105℃)下搅拌6小时，并在室温下放置18小时。除去挥发物，残余物用饱和碳酸钠稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(15-20％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物42.4(4.56g，28％)，为棕色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ3.93(s,3H),3.94(s,3H),7.50(s,1H),8.85(s,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.72(无m/z),92％。

(6-氯吡啶-3,4-二基)二甲醇42.5

将化合物42.4(4.56g，19.9mmol)溶解于四氢呋喃(85ml)和甲醇(1.7ml)中，并在冰/水上冷却。加入硼氢化锂(1.08g，49.6mmol)，然后将混合物在室温搅拌3小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取四次。将有机层用硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(15-20％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物42.5(3.1g，90％)，为黄色油状物。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ4.61(s,2H),4.74(s,2H),7.56(s,1H),8.26(s,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.34(174,176[M+H]⁺),91％。

2-氯-4,5-双(氯甲基)吡啶42.6

将化合物42.5(3.1g，17.9mmol)悬浮在亚硫酰氯(16ml)中，然后将混合物在室温搅拌3小时。将混合物小心地倒入冰/水中，然后用饱和碳酸钠中和。将其用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用硫酸钠干燥、过滤并蒸发，得到化合物42.6(2.53g，67％)，为黄色油状物。¹HNMR(CDCl₃,300MHz)δ4.68(s,4H),7.45(s,1H),8.37(s,1H)。

3-氯-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-5,7-二氢螺[环戊[c]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮中间体Y

将化合物42.6(2.53g，12.0mmol)和中间体D(3.17g，12.0mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(94ml)中，加入碳酸铯(13.7g，42.1mmol)，然后将混合物在室温搅拌18小时。将混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。将滤液用水洗涤3次，用盐水洗涤2次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(8：2–7：3庚烷/EtOAc)，再次纯化(1：1庚烷/MTBE)，得到中间体Y(1.82g，38％)，为淡黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ-0.01(s,9H),0.99(m,2H),3.10(dd,2H),3.62(dd,2H),3.70(m,2H),5.29(s,2H),6.90(dd,1H),7.10(d,1H),7.29(s,1H),8.24(d,1H),8.31(s,1H)。UPLC(短时间碱性方法)1.07(402[M+H]⁺),87％。

中间体Z的合成

方案43

吡啶-2,3-二羧酸二甲酯43.2

将吡啶-2,3-二羧酸43.1(20g，121mmol)溶解于甲醇(400ml)中，然后加入浓硫酸(12.9ml，242mmol)，并将混合物在回流下搅拌18小时。除去挥发物，并将液体小心倒入饱和碳酸钠中。用碳酸钠将pH调节至7，然后用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物43.2(19.5g，83％)，为油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.96(s,3H),4.04(s,3H),7.50(dd,1H),8.17(d,1H),8.76(d,1H)。UPLC(CSH 2-50％)0.57(196[M+H]⁺)99％。

2,3-双(甲氧基羰基)吡啶1-氧化物43.3

将化合物43.2(19.5g，100mmol)溶解于乙腈(385ml)中，在冰/水上冷却，然后加入过氧化氢脲(18.8g，200mmol)。向悬浮液中逐滴添加三氟乙酸酐(28.2ml，200mmol)，以使内部温度＜10℃。将混合物在室温下搅拌3小时。通过加入焦亚硫酸钠将反应淬灭，并用水(800ml)稀释。用二氯甲烷萃取六次。将有机层用水洗涤两次然后用盐水洗涤，并用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将残余物溶解于二氯甲烷中，并先后用水和盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物43.3(11.6g，55％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.94(s,3H),4.06(s,3H),7.39(dd,1H),7.86(dd,1H),8.34(d,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.36(212[M+H]⁺)99％。

6-氯吡啶-2,3-二羧酸二甲酯43.4

将化合物43.3(11.6g，54.9mmol)悬浮在三氯氧化磷(55ml)中，然后将混合物在回流(105℃)下搅拌3小时。除去挥发物，残余物用饱和碳酸钠稀释，并用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(二氯甲烷)，得到化合物43.4(7.72g，62％)，为棕色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ3.93(s,3H),3.99(s,3H),7.51(d,1H),8.16(d,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.68(无m/z),99％。

(6-氯吡啶-2,3-二基)二甲醇43.5

将化合物43.4(7.72g，33.8mmol)溶解于四氢呋喃(144ml)和甲醇(2.8ml)中，并在冰/水上冷却。加入硼氢化锂(1.84g，84.6mmol)，然后将混合物在室温搅拌2.5小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，并用乙酸乙酯萃取六次。将有机层用硫酸钠干燥、过滤并蒸发，得到化合物43.5(5.54g，94％)，为黄色油状物。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ4.68(s,2H),4.71(s,2H),7.35(d,1H),7.85(d,1H)。UPLC(短时间碱性方法)0.36(174,176[M+H]⁺),93％。

6-氯-2,3-双(氯甲基)吡啶43.6

将化合物43.5(5.54g，31.9mmol)悬浮在亚硫酰氯(78ml)中，然后将混合物在室温搅拌3小时。将混合物小心地倒入冰/水中，然后用饱和碳酸钠中和。将其用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用硫酸钠干燥、过滤并蒸发，得到化合物43.6(4.87g，73％)，为黄色油状物。¹HNMR(CDCl₃,300MHz)δ4.72(s,2H),4.75(s,2H),7.33(d,1H),7.72(d,1H)。

2-氯-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮中间体Z

将化合物43.6(4.87g，23.4mmol)和中间体D(6.11g，23.1mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(180ml)中，加入碳酸铯(26.4g，81.0mmol)，然后将混合物在室温搅拌2天。将混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。将滤液用水洗涤3次，用盐水洗涤2次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(8：2–7：3庚烷/EtOAc)，再次纯化(1：1庚烷/MTBE)，得到中间体Z(2.35g，26％)，为淡黄色油状物。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ-0.03(s,9H),0.99(m,2H),3.14(dd,2H),3.61(m,2H),3.71(m,2H),5.29(s,2H),6.91(dd,1H),7.17(dd,1H),7.22(d,1H),7.54(d,1H),8.24(dd,1H)。UPLC(短时间碱性方法)1.09(402[M+H]⁺),82％。

方案44

N-(2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)-N-新戊酰甘氨酸甲酯44.1

将中间体U(670mg，2.08mmol)溶解于二氯甲烷(14ml)中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.1ml，6.24mmol)，然后加入新戊酰氯(0.28ml，2.29mmol)，并将混合物在室温下搅拌温度18小时。将混合物用碳酸氢钠洗涤两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过正相色谱法纯化(80g ZIP二氧化硅，庚烷1：0-8：2乙酸乙酯)，得到化合物44.1(405mg，48％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,300MHz)δ1.28(s,9H),1.47(s,9H),2.77(s,3H),3.72(s,3H),3.94(br s,2H),4.43(s,2H),4.80(s,2H),7.19(m,2H),7.26(m,2H)。UPLC(短时间碱性方法)1.03(307[M-Boc+H]⁺)96％。

N-(2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苄基)-N-新戊酰甘氨酸44.2

将化合物44.1(405mg，0.998mmol)溶解于甲醇(14ml)中，然后加入2.5M氢氧化钠(0.6ml，1.50mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。除去挥发物，然后用水稀释并用二氯甲烷洗涤。用2M HCl将水相的pH调至4，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到化合物44.2(303mg，77％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.26(s,9H),1.46(s,9H),2.76(s,3H),3.95(m,2H),4.47(s,2H),4.82(m,2H),7.17(m,2H),7.31(m,2H)。UPLC(短时间碱性方法)0.58(391[M-H]^-)99％。

(2-((N-(2-氨基-2-氧乙基)新戊酰胺基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯44.3

将化合物44.2(364mg，0.929mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(12ml)中，然后加入EDCI.HCl(232mg，1.21mmol)、HOAt(165mg，1.21mmol)、氯化铵(497mg，9.29mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.1ml，12.1mmol)，并将混合物在室温搅拌18小时。再加入EDCI.HCl(232mg，1.21mmol)、HOAt(165mg，1.21mmol)、氯化铵(497mg，9.29mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.1ml，12.1mmol)，并将混合物在室温搅拌24小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用乙酸乙酯萃取两次。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到化合物44.3(248mg，68％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ1.28(s,9H),1.46(s,9H),2.78(s,3H),3.92(s,2H),4.44(s,2H),4.83(s,2H),5.36(br s,1H),6.17(br s 1H),7.11(m,1H),7.17(m,1H),7.28(m,2H)。UPLC(短时间碱性方法)0.83(390[M-H]^-)93％。

方案45

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1',2',5,7-四氢螺[环戊[c]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-3-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯45.1

将化合物44.3(127mg，0.317mmol)和中间体Y(124mg，0.317mmol)溶解于无水脱气的1,4-二噁烷(5.5ml)中，然后加入碳酸铯(516mg，1.58mmol)、Xanthphos(7.3mg，0.027mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(6mg，0.006mmol)，并用氩气吹扫混合物1分钟。将反应瓶在微波辐射下于100℃加热90分钟。将混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取两次。将有机层先后用水和盐水洗涤3次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过正相色谱法纯化(10g，ZIP二氧化硅，20–50％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物45.1(103mg，43％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ-0.01(s,9H),0.99(m,2H),1.33(s,9H),1.44(s,9H),2.79(s,3H),3.05(dd,2H),3.61(dd,2H),3.71(m,2H),4.08(br s,2H),4.45(s,2H),4.90(s,2H),5.30(s,2H),6.86(dd,1H),7.07(dd,1H),7.18(m,2H),7.30(m,2H),8.14(s,1H),8.16(s,1H),8.22(dd,1H),8.51(br s,1H)。UPLC(短时间碱性方法)1.24(757[M+H]⁺)95％。

实施例103：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1',2',5,7-四氢螺[环戊[c]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-3-基)氨基)乙基)新戊酰胺45.2

将化合物45.1(34mg，0.045mmol)溶解于二氯甲烷(3.2ml)中，然后加入三氟乙酸(0.35ml)，并将混合物在室温搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸钠中，然后用二氯甲烷萃取两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(2g，EtOAc，然后是5％MeOH的二氯甲烷溶液，然后是10％MeOH与氨的二氯甲烷溶液)，然后在甲醇中研磨，得到化合物45.2(9.6mg，40％)，为无色固体。¹H NMR(DMSO-d₆,300MHz)δ1.15,1.21(2s,9H),2.03,2.17,2.31(3s,3H),3.10(m,2H),3.33(m,2H),3.70(s,2H),4.04(m,2H),4.58(m,1H),4.85(br s,2H),6.85(m,1H),7.25(m,5H),8.00(m,3H),10.25(s,1H),10.90(br s,1H)。UPLC(长时间酸性方法)0.90(527[M+H]⁺)94％。

方案46

甲基(2-((N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1'-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1',2',5,7-四氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2-基)氨基)乙基)新戊酰胺基)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯46.1

将中间体Z(127mg，0.317mmol)和化合物44.3(124mg，0.317mmol)溶解于无水脱气的1,4-二噁烷(5.5ml)中，然后加入碳酸铯(516mg，1.58mmol)、Xanthphos(7.3mg，0.027mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(6mg，0.006mmol)，并用氩气吹扫混合物1分钟。将反应瓶在微波辐射下于100℃加热90分钟。将混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取两次。将有机层先后用水和盐水洗涤3次，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物通过正相色谱法纯化(10g，ZIP二氧化硅，20–40％EtOAc的庚烷溶液)，得到化合物46.1(82mg，43％)，为无色固体。¹H NMR(CD₃OD,300MHz)δ-0.01(s,9H),0.98(m,2H),1.32(s,9H),1.45(s,9H),2.79(s,3H),3.05(d,2H),3.61(t,2H),3.71(m,2H),4.08(m,2H),4.46(s,2H),4.90(s,2H),5.30(s,2H),6.89(dd,1H),7.17(m,3H),7.30(m,2H),7.56(d,1H),8.06(d,1H),8.23(d,1H),8.37(br s,1H)。UPLC(短时间碱性方法)1.25(757[M+H]⁺)95％。

实施例104：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1',2',5,7-四氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2-基)氨基)乙基)新戊酰胺46.2

将化合物46.1(41mg，0.054mmol)溶解于二氯甲烷(3.6ml)中，然后加入三氟乙酸(0.4ml)，并将混合物在室温搅拌2小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中，然后用二氯甲烷萃取两次。将有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。残余物通过快速硅胶色谱纯化(2g，EtOAc，然后是5％MeOH的二氯甲烷溶液，然后是10％MeOH与氨的二氯甲烷溶液)，然后在甲醇中研磨，得到化合物46.2(5mg，18％)，为无色固体。¹H NMR(DMSO-d₆,300MHz)δ1.15,1.21(2s,9H),2.03,2.17,2.32(3s,3H),3.05(m,2H),3.28(dd,2H),3.46,3.71(2s,2H),4.09(m,2H),4.64(s,1H),4.84(m,2H),6.89(m,1H),7.23(m,5H),7.60(m,1H),7.87(m,1H),8.04,8.11(2s,1H),10.27(br s,1H),10.94(br s 1H)。UPLC(长时间酸性方法)1.00(527[M+H]⁺)94％。

中间体AA的合成

方案47

(2-溴-5-氯吡啶-3-基)甲醇47.2

在-40℃下，向化合物47.1(10.0g，37.19mmol)的THF(100ml)溶液中缓慢加入异丙基氯化镁/氯化锂(1.3M的THF溶液，31ml，40.3mmol)。将该溶液在-40℃下搅拌30分钟，并加入DMF(8.5ml，111mmol)。将所得溶液温热至室温，并搅拌30分钟。用1M HCl(70ml)淬灭反应，并加入二乙醚(60ml)。分离有机层，并用5％NaHCO₃水溶液洗涤。真空去除溶剂。将所得固体溶解于甲醇(90ml)中。将溶液冷却至0℃。缓慢加入NaBH₄(3.60g，95.2mmol)。将反应混合物搅拌30分钟，然后用水(30ml)淬灭。将所得混合物在真空下浓缩至约40ml。将所得悬浮液在室温下剧烈搅拌1小时，并通过过滤收集固体，并在真空中干燥，得到化合物47.2(7.20g，88％)，为无色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ2.33(t,1H),4.73(d,2H),7.88(d,1H),8.26(d,1H)。LCMS(221.9[M+H]⁺)。

5-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)吡啶甲醛47.3

在室温下，向化合物47.2(7.30g，33.0mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入3,4-二氢-2H-吡喃(3.30g，39.6mmol)和浓硫酸(185mg)。将溶液混合物搅拌1小时，浓缩并直接通过快速硅胶色谱法纯化(5-10％乙酸乙酯/汽油醚)，得到2-溴-5-氯-3-(四氢吡喃-2-基氧基甲基)吡啶(9.10g，90％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.76(m,6H),3.63(m,1H),3.89(m,1H),4.51(m,1H),4.81(m,2H),7.85(s,1H),8.27(s,1H)。LCMS(305.9[M+H]⁺)。

在0℃下，向2-溴-5-氯-3-(四氢吡喃-2-基氧基甲基)吡啶(8.90g，34.9mmol)的四氢呋喃(80ml)溶液中缓慢加入异丙基氯化镁/氯化锂(1.3M的THF溶液，32.2ml，41.9mmol)。将所得溶液在0℃下搅拌4小时。在0℃下缓慢加入DMF(5ml)。将所得溶液在5℃下再搅拌1小时。通过加入二乙醚、柠檬酸水溶液和水淬灭反应混合物。分离有机层，并用盐水洗涤。将有机层真空浓缩，得到化合物47.3(6.90g，78％)，为无色油状物。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.70(m,6H),3.58(m,1H),3.88(m,1H),4.80(m,1H),5.01(d,1H),5.25(d,1H),8.20(s,1H),8.65(s,1H),10.13(s,1H)。LCMS(256.1[M+H]⁺)。

叔丁基(3-甲基吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯47.5

在0℃下，向化合物47.4(4.30g，26.1mmol)的四氢呋喃(40ml)溶液中缓慢加入正丁基锂(2.2M的THF溶液，13.0ml，28.7mmol)。将反应物在0℃下搅拌1小时。在0℃下缓慢加入氯甲酸甲酯(2.1ml，27.4mmol)。在0℃下10分钟后，将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。通过缓慢加入氯化铵水溶液和水将反应混合物淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用MgSO₄干燥、过滤并蒸发，得到化合物47.5(5.80g，100％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.42(s,9H),2.27(s,3H),3.57(s,3H),7.16(dd,1H),7.57(dd,1H),8.36(dd,1H)。LCMS(223.1[M+H]⁺)。

1-(叔丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮47.6

在-40℃下，向化合物47.5(5.40g，24.3mmol)的四氢呋喃(30ml)溶液中缓慢加入LDA(1.0M，50ml，由正丁基锂和二异丙基胺的THF溶液新鲜制备)。将反应混合物在10℃搅拌4小时，并通过添加2M HCl淬灭。将反应混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(10至30％EtOAc/石油醚)，得到化合物47.6(2.60g，81％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.80(s,9H),3.46(s,2H),6.89(dd,1H),7.41(m,1H),8.17(m,1H)。LCMS(135.1[M+H]⁺)。

(E)-1-(叔丁基)-3-((5-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)亚甲基)吲哚啉-2-酮47.7

在0℃下，向化合物47.3(3.70g，14.5mmol)和化合物47.6(2.10g，15.2mmol)的IPA(30ml)溶液中加入DBU(0.10g，0.7mmol)。在0℃下搅拌2小时后，将反应混合物在10℃下搅拌3小时。从混合物中沉淀出微黄色固体。将悬浮液在室温下搅拌过夜。将所得悬浮液温热至50℃并再搅拌4小时。冷却至室温后，缓慢加入水(35ml)。将悬浮液过滤，并用IPA和水(1∶1)的混合物洗涤，并真空干燥，得到化合物47.7(5.00g，81％收率)，为黄色固体。LCMS(428.1[M+H]⁺)。

1-(叔丁基)-3-((5-氯-3-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-2-酮47.8

向化合物47.7(5.00g，11.7mmol)的乙醇(35mL)溶液中分批加入NaBH₄(0.70g，17.5mmol)。将所得悬浮液在室温下搅拌1小时。通过加入水将反应淬灭，然后缓慢加入6MHCl的IPA(5.0ml，30mmol)溶液。将溶液在40℃下搅拌4小时。将反应混合物与二乙醚和饱和NaCl水溶液混合。分离有机相，并用水洗涤。将该溶液在真空下浓缩并将残余物用己烷研磨。将得到的悬浮液在室温下搅拌20分钟，并通过过滤收集，得到化合物47.8(3.70g，92％收率)。LCMS(346.1[M+H]⁺)。

1-(叔丁基)-3-((5-氯-3-(氯甲基)吡啶-2-基)甲基)吲哚啉-2-酮47.9

在～5℃下，向化合物47.8(3.30g，9.60mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入DMF(5滴)和亚硫酰氯(0.9ml，11.4mmol)。将混合物在～5℃下搅拌45分钟，然后加入NaCl水溶液。分离有机层，并用盐水洗涤。除去溶剂，并将残余物溶解于庚烷中。将溶液搅拌30分钟，并使产物沉淀。将悬浮液冷却至0℃并过滤，得到化合物47.9(2.90g，85％收率)，为灰白色固体。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.75(s,9H),3.32(dd,1H),3.66(dd,1H),4.06(m,1H),4.58(m,2H),6.78(dd,1H),7.19(m,1H),7.65(d,1H),8.13(m,1H),8.36(d,1H)。 LCMS (364.1[M+H]⁺)。

1'-(叔丁基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮47.10

在室温下，向化合物47.9(2.80g，7.70mmol)的甲苯(50ml)溶液中加入溴化四丁铵(0.30g，0.90mmol)，然后加入0.3M NaOH水溶液(10ml)。将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(10至30％EtOAc/石油醚)，得到化合物47.10(2.00g，79％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.83(s,9H),3.09(dd,2H),3.61(dd,2H),6.83(dd,1H),7.10(d,1H),7.56(s,1H),8.19(d,1H),8.42(s,1H)。LCMS(328.1[M+H]⁺)。

3-(苄基氨基)-1'-(叔丁基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮47.11

将化合物47.10(1.50g，4.60mmol)、苄胺(1.2ml，11.1mmol)、乙酸钯(90mg，0.40mmol)、2-二-叔丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(tBuXPhos)(335mg，0.80mmol)和叔丁醇钠(1.10g，11.1mmol)溶解于无水甲苯(12ml)中。将混合物在微波辐射下于150℃搅拌1小时。加入乙酸乙酯和氯化铵水溶液。将有机萃取物用盐水洗涤两次，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发滤液。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(10至30％EtOAc/石油醚)，得到化合物47.11(1.20g，65％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ1.83(s,9H),2.96(dd,2H),3.52(dd,2H),4.12(br,1H),4.36(br,2H),6.81(m,2H),7.09(dd,1H),7.34(m,5H),7.94(d,1H),8.16(dd,1H)。LCMS(399.2[M+H]⁺)。

3-氨基-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-2'(1'H)-酮中间体AA

在室温下，向化合物47.11(1.10g，2.70mmol)的甲醇(30ml)溶液中加入甲磺酸(7ml)。将混合物在回流下搅拌48小时。在真空下除去挥发物，并将水(～100ml)加入到混合物中，并通过加入50％的氢氧化钠水溶液将pH调节至pH～10。水层用乙酸乙酯萃取，将合并的萃取物用硫酸镁干燥、过滤并蒸发，得到粗产物。将粗产物溶解于甲醇(25ml)中，并向该溶液中加入Pd/C(65mg)，然后加入浓盐酸(2ml)。将混合物在H₂气球下于55℃搅拌过夜。除去挥发物，然后将粗物质溶解于二氯甲烷中。加入水和饱和K₂CO₃至pH～10。将混合物用二氯甲烷萃取，用MgSO₄干燥，过滤并蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(5-10％甲醇/二氯甲烷)，得到中间体AA(325mg，47％)，为无色固体。LCMS(253.1[M+H]⁺)。

方案48

N-(2-(二甲氧基甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1',2',5,7-四氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-3-基)氨基)乙基)新戊酰胺48.1

将中间体G(36mg，0.11mmol)、中间体AA(29mg，0.11mmol)和HATU(52mg，0.14mmol)溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺(1ml)中。加入N-甲基吗啉(0.1ml，9.3mmol)，并将混合物在室温搅拌10分钟。将混合物用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液。残余物通过快速硅胶色谱纯化(80％EtOAc/石油醚，然后是5-25％二氯甲烷/甲醇)，得到化合物48.1(54mg，88％)，为无色玻璃状物。LCMS(558.3[M+H]⁺)。

实施例105：N-(2-((甲基氨基)甲基)苄基)-N-(2-氧代-2-((2'-氧代-1',2',5,7-四氢螺[环戊[b]吡啶-6,3'-吡咯并[2,3-b]吡啶]-3-基)氨基)乙基)新戊酰胺2,2,2-三氟乙酸酯48.2

将化合物48.1(54mg，0.097mmol)溶解于丙酮(1.5ml)中，并加入对甲苯磺酸一水合物(23mg，0.14mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物倒入饱和碳酸氢钠中。将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发滤液，得到粗化合物，将其溶解于甲醇(1.2ml)中。加入甲胺(6.4μl，0.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟。在室温下将硼氢化钠(7.5mg，0.2mmol)加入到混合物中，并将反应混合物搅拌45分钟。将混合物过滤并直接通过HPLC纯化(HP C18，ID 22mm，长度150mm，流速16ml/min：5-55％MeCN水/乙腈0.1％TFA，历时20分钟)，然后冷冻干燥，得到化合物48.2(28mg，53％)，为白色固体。¹H NMR(CD₃OD,400MHz)δ1.34(s,9H),2.85(s,3H),3.30(dd,2H),3.54(dd,2H),4.34(br,2H),4.51(br,2H),4.88(br,2H),6.99(dd,1H),7.42(m,5H),8.03(m,1H),8.13(dd 1H),8.60(m,1H)；¹⁹F NMR(CD₃OD,400MHz)δ-76.9；LCMS(527.3[M+H]⁺),100％纯。

生物测定

可以使用以下测定来测量本发明化合物的功效。

细胞系中的cAMP/激动剂-拮抗剂竞争测定

使用Perkin Elmer LANCE cAMP测定法，使用市售的表达目的特异性受体的细胞，使用以下通用方法来评估化合物对配体诱导的cAMP升高的抑制能力：

化合物制备

将化合物制备在二甲基亚砜(DMSO—99.9％纯度)(Sigma Aldrich，货号：D4540)中，添加到粉末状原料中制成20mM溶液(100％DMSO)，然后在37℃下超声处理10分钟以使化合物完全溶解。将20mM的储备液在DMSO中进一步稀释，得到2mM的溶液，将其在37℃下超声处理10分钟。对于所有cAMP测定，将2mM储备液溶解在测定/刺激缓冲液中，得到400μM溶液，将其在37℃下超声处理10分钟。所有储备液均储存在-20℃下。然后进行系列稀释(稀释倍数：10)以达到所需实验浓度。

测定方案

使用

TR-FRET cAMP测定试剂盒(Perkin Elmer，货号：AD0264)，根据制造商的说明书进行竞争测定。将分子的系列稀释液(3μl/孔)一式两份铺在384孔OptiPlate(Perkin Elmer，货号：6007299)中。每个板中包括适当的对照(100％刺激：佛司可林(Forskolin)和0％刺激：溶媒对照)(6μl/孔)以进行数据归一化。加入化合物后，将6μl的G蛋白偶联受体过表达细胞/Alexa Fluor抗体溶液(1：100稀释)以所需密度2500细胞/孔添加到每个孔中。过表达细胞系购自DiscoveRx(Birmingham，UK)。将板以1000rpm旋转1分钟并短暂涡旋后，将细胞与化合物在室温下预孵育30分钟(封盖)。然后向除溶媒和佛司可林对照以外的所有孔中添加3μl的等效肽配体(EC₅₀剂量)。然后将板以1000rpm旋转1分钟，一旦完成，则将它们短暂涡旋并封盖。在配体存在下于室温刺激细胞15分钟。刺激后，向所有孔中添加12μl的检测混合物(Europium-Chelate链霉亲和素/生物素化的cAMP示踪剂溶液)，并在室温下孵育60分钟。然后在Enspire多模式读板仪(Perkin Elmer)上读取板；记录了320/340nm激发和615/665nm发射。

测定/刺激缓冲液(30mL)–pH 7.4

·28mL汉克氏(Hank‘s)平衡盐溶液(+MgCl₂，+CaCl₂)–(Thermo Fisher货号：14170112)

·150μl HEPES(1M)–(Thermo Fisher货号：15630080)

·400μl稳定剂(DTPA)纯化的BSA(7.5％)–(Perkin Elmer，货号：CR84-100)

·60μl IBMX(250mM)–(Sigma Aldrich，货号：I5879)

特异性cAMP/激动剂-拮抗剂竞争测定

使用上述方法进行以下特异性测定。

AM₂受体抑制

使用上述方案评估了化合物在表达AM₂受体的细胞(用CALCRL+RAMP3转染的1321N1细胞，来源于DiscoverX目录号95-0169C6)中抑制AM诱导的cAMP活化的能力。

表5和表6列出了化合物在该测定中的活性。

AM₁受体抑制

使用上述通用方案评估了化合物在表达AM₁受体的细胞(用CALCRL+RAMP2转染的CHO-K1细胞，来源于DiscoverX目录号93-0270C2)中抑制AM诱导的活化的能力。

在该测定中测试的化合物通常表现出5至5.7的pIC₅₀。

AMY₃受体抑制

使用上述通用方案评估了化合物在表达AMY₃R的细胞(用CALCR+RAMP-3转染的1321N1细胞，来源于DiscoverX，目录号95-0166C6)中抑制AMY诱导的活化的能力。

在该测定中测试的化合物通常表现出3.5至6.6的pIC₅₀。

细胞活力测定

使用RealTime-Glo^TM MT细胞活力测定试剂盒(Promega，货号：G9712)，根据制造商的说明进行了细胞活力测定。这些测定证明，测试化合物(3μM)能够将细胞存活和生长抑制40％至70％。

所使用的所有细胞系均购自ATCC(Virginia，USA)(表2)。将细胞以所需密度接种在白色透明底的96孔板(Corning，货号：3610)中的完全生长培养基中。将板在室温下孵育15分钟(以确保细胞均匀沉降)，然后在5％CO₂中于37℃下孵育过夜。第二天，将活力测定试剂盒试剂(酶和底物)在37℃水浴中与次优生长培养基(测定缓冲液)平衡10-15分钟。然后制备试剂溶液，其在每个细胞系的次优生长培养基中含有1：1000的每种试剂(使用前应充分涡旋)。然后从孔中取出完全生长培养基，并用100μl的试剂溶液代替。然后将板在5％CO₂中于37℃下孵育至少1小时，然后读取未处理的基线。每三天更换一次试剂，将孔用PBS洗涤一次，并按上述方法添加新鲜试剂，以进行更长时间的处理。读取基线后，将孔用适当浓度的测试分子处理，将板以110x g离心1分钟，以确保孔具有均匀的化合物分布，然后在5％CO₂中于37℃下孵育。使用Enspire多模式读板仪(Perkin Elmer)进行发光测量后，每天对板进行一次处理(持续9天)。

表2：细胞系和相应的完全生长培养基、次优培养基和接种密度

体内功效

可以使用以下异种移植小鼠模型来评估化合物的体内功效。

肿瘤接种

体内实验中使用的所有细胞系均购自ATCC(Virginia，USA)(表3)。在T500TripleFlasks(Thermo Fisher，货号：132913)中在完全生长培养基中培养细胞。当达到80-90％汇合度时，使用TrypLE Express酶分离缓冲液(Thermo Fisher，货号：12605)将细胞从烧瓶中分离。使用Countess II自动细胞计数器对细胞进行计数，然后以110x g的速度离心5分钟。将沉淀物重新悬浮于适当体积的冰冷的PBS中(取决于细胞数)。为了确保接种肿瘤，使用冷却的移液器吸头将细胞(500μL)与500μL冰冷的基质胶(Corning，货号：354234)混合(缓慢地移液以确保均匀混合并防止在基质胶中形成气泡)。在注射入小鼠之前，将基质胶/细胞悬液和注射器保持在冰上。对于每个实验(10个治疗组和10个溶媒对照组)，将100μL的细胞悬液(50％PBS+50％基质胶中的5x10⁶个细胞)皮下注射到27周龄的雌性Balb/c裸鼠中。

表3：细胞系和相应的完全生长培养基

细胞系	完全生长培养基
		MDA-MB-231	RPMI+10％FBS(Sigma)
Capan-2	McCoy’s+10％FBS(Sigma)
		CFPAC-1	DMEM+10％FBS(Gibco)
HPAF-II	RPMI+10％FBS(Gibco)
		Panc10.05	RPMI+15％FBS(Gibco)

化合物制备

根据以下公式，将粉末状化合物稀释在100％DMSO(Sigma Aldrich，货号：D4540)中：

然后将化合物在37℃下超声处理10分钟。然后根据以下公式添加适当体积的溶剂(表4)，以得到6％DMSO/94％溶剂溶液：

然后将化合物在37℃下超声处理10分钟。

表4：化合物溶剂的配方

用测试化合物进行体内治疗

在治疗之前，将每个化合物小瓶用等份溶剂稀释，得到在3％DMSO中的4mg/mL化合物，然后在37℃下超声处理10分钟。用100μL的治疗剂(20mg/kg)或溶媒对照每日腹膜内治疗小鼠。每周测量一次肿瘤大小和小鼠体重。

与对照相比，在该测定中测试的化合物(每天一次，剂量为20mg/kg i.p)以60-80％的范围抑制肿瘤生长。

生物数据

表5和表6中所示的化合物在上述AM₂ LANCE cAMP测定中显示出以下活性。

表5

表6

其他实施方案

还公开了以下编号的条款：

P1.式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐

其中

L¹是键、-O-或-N(R¹⁰)-；

R¹选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、C_6-10芳基、C_6-10芳基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；

并且其中R¹任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A1、-OC(O)R^A1、-C(O)OR^A1、-NR^A1C(O)R^B1、-C(O)NR^A1R^B1、-NR^A1SO₂R^B1、-SO₂NR^A1R^B1、＝O、–CN和R¹⁷；

其中R¹⁷任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-S(O)_xR^A6(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A6、-OC(O)R^A6、-C(O)OR^A6、-NR^A6C(O)R^B6、-C(O)NR^A6R^B6、-NR^A6SO₂R^B6、-SO₂NR^A6R^B6、＝O和–CN；

X是-(CR^AR^B)_p-；

R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、-OR^A10、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-6烷基-、C_6-10芳基-C_1-6烷基-、5至10元杂芳基-C_1-6烷基-、被–NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被–OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

或者

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成4至7元杂环基或咪唑基，其中由R²和R³形成的所述4至7元杂环基或咪唑基任选地进一步被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3、-S(O)_xR^A3(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A3、-C(O)OR^A3、＝O、-CN、被–NR^A3R^B3取代的C_1-6烷基和被–OR^A3取代的C_1-6烷基；

或者

基团R²N(R³)X-和与X相邻的苯环碳原子一起形成下式的基团：

其中

表示与式(I)中C(R⁵R⁶)基团连接的点；

a是整数0、1或2；

R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4、-NR^A4R^B4、-S(O)_xR^A4(其中x是0、1或2)和–CN；

R⁷选自：H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基；

X中与同一碳原子连接的R^A和R^B形成＝NR^A8或＝NOR^A8；

R¹⁰选自：H、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基；

R^A1、R^B1、R^A2、R^B2、R^A3、R^B3、R^A4、R^B4、R^A5、R^B5、R^A6、R^B6、R^A8和R^A10各自独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者其中取代基内的任何-NR^A1R^B1、-NR^A2R^B2或-NR^A3R^B3可以形成4至6元杂环基；

n是选自0、1、2、3或4的整数；并且

p是选自0、1、2或3的整数。

P2.P1所述的化合物，其中L¹是键或–O-。

P3.P1或P2所述的化合物，其中R⁸和R⁹独立地选自：H和C_1-3烷基。

P4.条款P1至P3中任一项所述的化合物，其中R⁵和R⁶独立地选自：H和C_1-3烷基；

P5.条款P1至P4中任一项所述的化合物，其中R⁴独立地选自：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A4和-NR^A4R^B4；并且n是1或2。

P6.条款P1至P4中任一项所述的化合物，其中R⁴独立地选自卤素(例如氟)；并且n是1或2。

P7.条款P1至P6中任一项所述的化合物，其中R⁷是氢。

P8.条款P1至P6中任一项所述的化合物，其中R⁷选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基(例如R⁷是C_1-4烷基)。

P9.条款P1至P8中任一项所述的化合物，其中p是0。

P10.条款P1至P8中任一项所述的化合物，其中p是1或2(例如p是1)。

P11.条款P1至P8中任一项所述的化合物，其中p是1或2并且X选自：–CH₂-、-CH₂CH₂-、-CHR^A-、*-CH₂CHR^A-、*-CHR^ACH₂-、-CR^AR^B-、*-CH₂CR^AR^B-、*-CR^AR^BCH₂-、-C(＝NR^A8)-、-C(＝NOR^A8)-、*-C(＝NR^A8)CH₂-、*-C(＝NOR^A8)CH₂-

其中R^A和R^B各自独立地是C_1-3烷基；

R^A8是H或C_1-4烷基；并且

*表示与NR²R³连接的点。

P12.条款P1至P8中任一项所述的化合物，其中p是1并且X是–CH₂-或-CH(CH₃)-。

P13.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至6元杂环基、4至6元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被–NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被–OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基；

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成4至7元饱和杂环基，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的环氮原子，并且其中所述杂环基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A3、-NR^A3R^B3、-S(O)_xR^A3(其中x是0、1或2)、＝O、-CN、被–NR^A3R^B3取代的C_2-6烷基和被–OR^A3取代的C_2-6烷基。

P14.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自：H、C_1-4烷基、C_1-4氟烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、被–NR¹¹R¹²取代的C_2-3烷基和被–OR¹³取代的C_2-3烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基；

P15.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自：H、C_1-3烷基、C_1-3氟烷基、环丙基、环丁基、环丙基-C_1-2烷基-、环丁基-C_1-2烷基-、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(二甲基氨基)乙基、3-氨基丙基、3-(甲基氨基)丙基和3-(二甲基氨基)丙基；或者

R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，其中由R²和R³形成的杂环基任选地被一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自以下的取代基取代：氟和C_1-4烷基。

P16.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中R²是H或C_1-4烷基；并且R³选自：H、-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、-OR^A10、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-3烷基-、苯基-C_1-3烷基-、5或6元杂芳基-C_1-3烷基-、被–NR¹¹R¹²取代的C_2-4烷基和被–OR¹³取代的C_2-4烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自：H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

并且其中每个R^A9和R^A7独立地是C_1-4烷基；

P17.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中：

R²是H或C_1-4烷基；并且

R³选自-C(＝NH)NH₂、-C(＝NR^A9)NH₂、-C(＝NH)NHR^A9、-C(＝NH)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)NHR^A9、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NH)R^A7、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)NH₂、-C(＝NCN)NHR^A9、-C(＝NCN)N(R^A9)₂；其中R^A7和每个R^A9独立地选自C_1-4烷基

P18.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中：

R²是H并且R³选自：甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-甲氧基乙基、2-羟乙基、环丙基和环丁基；或者

R²和R³都是甲基；或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，该杂环基任选地被一个或两个氟取代基取代。

P19.条款P1至P12中任一项所述的化合物，其中基团：

形成下式的基团：

其中：

n1是整数0、1或2并且，当存在时，R⁴位于苯环上；并且

环A任选地被一个或多个(例如1、2或3个)选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和＝O。

P20.条款P1至P19中任一项所述的化合物，其中R¹选自：C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、4至7元杂环基、苯基和5至10元杂芳基；

并且其中R¹任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和–CN。

P21.条款P1至P19中任一项所述的化合物，其中R¹是下式的基团：

其中

并且其中由R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶中的任一个表示的C_1-4烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-2烷基、苯基、苯基-C_1-2烷基、5或6元杂芳基或5或6元杂芳基-C_1-2烷基基团，或由R¹⁴和R¹⁵与它们所连接的碳原子一起形成的C_3-6环烷基或4至7元杂环基各自任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、＝O和–CN。

P22.条款P1至P19中任一项所述的化合物，其中R¹选自：甲基、乙基、异丙基、叔丁基、羟甲基、2-羟乙基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙基、环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、苯基、噻唑基、吡啶基、

P23.条款P1至P19中任一项所述的化合物，其中R¹是叔丁基。

P24.条款P1至P23中任一项所述的化合物，其中式(I)的化合物中式：

的基团是式：

的基团。

P25.根据P1的化合物，其选自说明书中的表1，或其药学上可接受的盐。

P26.一种药物组合物，其包含条款P1至P25中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂。

P27.条款P1至P25中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，其用作药物。

P28.条款P1至P25中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗由肾上腺髓质素受体亚型2受体(AM₂)介导的疾病或医学病况。

P29.条款P1至P25中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐，其用于治疗增殖性疾病，特别是癌症。

P30.用于P29所述的用途的化合物，其用于治疗选自胰腺癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌和骨癌的癌症。

P31.用于P29或P30所述的用途的化合物，其中将所述化合物施用于与对照相比AM、AM₂、CLR和/或RAMP3的表达升高的受试者，例如其中所述受试者的血清样品中AM或AM₂的表达水平升高。

P32.一种治疗有此需要的受试者中由AM₂介导的疾病或医学病况的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的条款P1至P25中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐。

P33.用于条款29至31中任一项所述的用途的化合物或P32所述的方法，其中将所述化合物与一种或多种另外的抗癌剂和/或放射疗法组合施用。

P34.式(VII)的化合物，或其盐：

其中R¹、R^A、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、L¹和n如P1中所定义。

P35.式(VIII)的化合物，或其盐：

其中R¹、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、L¹和n如P1中所定义。

P36.式(IX)的化合物，或其盐：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、L¹和n如P1中所定义。

P37.式(XI)的化合物，或其盐：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、X和n如P1中所定义。

Claims

1.式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐：

其中

X₁是N或CR⁷；

L¹是键、-O-或-N(R¹⁰)-；

并且其中R¹任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、-C_1-4烷基-OR^A1、-C_1-4烷基-NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-C(O)R^A1、-C_1-4烷基-C(O)NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1C(O)R^B1、-C_1-4烷基-S(O)₂NR^A1R^B1、-C_1-4烷基-NR^A1S(O)₂R^B1、-C_1-4烷基-C(O)OR^A1、-C_1-4烷基-OC(O)R^A1、-C_1-4烷基-S(O)_xR^A1(其中x是0、1或2)、C_1-4卤代烷基、-OR^A1、-NR^A1R^B1、-SR^A1、-S(O)R^A1、-S(O)₂R¹⁸、-C(O)R¹⁸、-OC(O)R^A1、-C(O)OR^A1、-NR^A1C(O)R¹⁸、-C(O)NR^A1R¹⁸、-NR^A1SO₂R^B1、-SO₂NR^A1R¹⁸、＝O、–CN和R¹⁷；

或者，R¹中的任何NR^A1R¹⁸基团形成4至7元杂环基；

其中R¹⁷和R¹⁸各自独立地任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、-OR^A6、-NR^A6R^B6、-S(O)_xR^A6(其中x是0、1或2)、-C(O)R^A6、-OC(O)R^A6、-C(O)OR^A6、-NR^A6C(O)R^B6、-C(O)NR^A6R^B6、-NR^A6SO₂R^B6、-SO₂NR^A6R^B6、＝O和–CN；

X是-(CR^AR^B)_p-；

R²和R³各自独立地选自：H、-C(＝NR^A9)N(R^A9)₂、-C(＝NR^A9)R^A7、-C(＝NCN)N(R^A9)₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、-OR^A10、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基-、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-6烷基-、C_6-10芳基-C_1-6烷基-、5至10元杂芳基-C_1-6烷基-、被–NR¹¹R¹²取代的C_2-6烷基和被–OR¹³取代的C_2-6烷基，其中R¹¹、R¹²和R¹³独立地选自H、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基，或者R¹¹和R¹²与它们所连接的氮一起形成4至6元杂环基，

或者

基团R²N(R³)X-和与X相邻的苯环碳原子一起形成下式的基团：

其中

表示与式(I)中C(R⁵R⁶)基团连接的点；

a是整数0、1或2；

或者

其中

表示与式(I)中-N(C(O)L¹R¹)-基团连接的点；

a1是整数0、1或2；

R⁷选自：H、卤素、C_1-6烷基和C_1-6卤代烷基；

X中与同一碳原子连接的R^A和R^B形成＝NR^A8或＝NOR^A8；

R¹⁰选自：H、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和-OR^A12；

n是选自0、1、2、3或4的整数；并且

p是选自0、1、2或3的整数。

2.权利要求1所述的化合物，其中L¹选自键、-O-和-NH-。

3.权利要求1所述的化合物，其中L¹是键。

4.权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R⁴独立地选自：C_1-4烷基和卤素(例如氟)；并且n是1或2。

5.权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中n是0。

6.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R⁵和R⁶独立地选自H和C_1-3烷基；任选地，其中R⁵是H并且R⁶选自H和甲基；任选地，其中R⁵和R⁶都是H。

7.权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R⁸和R⁹独立地选自H和C_1-3烷基；任选地，其中R⁸是H并且R⁹选自H和甲基；任选地，其中R⁸和R⁹都是H；任选地，其中R⁸是H并且R⁹是甲基。

8.权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中X₁是CR⁷并且R⁷是H。

9.权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中X₁是CR⁷并且R⁷选自：卤素、C_1-4烷基和C_1-4卤代烷基(例如R⁷是C_1-4烷基，任选地R⁷是甲基)。

10.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R²是H并且R³选自：甲基、乙基、异丙基、2-氟乙基、2-甲氧基乙基、2-羟乙基、环丙基和环丁基，或者

R²和R³都是甲基，或者

R²和R³与它们所连接的氮一起形成杂环基，所述杂环基选自：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基和哌嗪基，该杂环基任选地被一个氟取代基取代。

11.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R²和R³与它们所连接的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基选自氮杂环丁烷基和吡咯烷基，其中由R²和R³形成的所述杂环基任选地被1个选自以下的取代基取代：氟和C_1-3烷基。

12.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中基团-NR²R³选自-NH₂、-NH(Me)、-NH(Et)、-N(Me)₂、-NH(环丙基)、-NH(CH₂CH₂F)、-NH(CH₂CH₂OH)、-NH(CH₂CH₂OMe)、氮杂环丁烷-1-基和吡咯烷-1-基。

13.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中基团-NR²R³是-NH(Me)。

14.权利要求1至13中任一项所述的化合物，其中X选自-CH₂-、-CH(CH₃)-和-CH₂CH₂-。

15.权利要求1至13中任一项所述的化合物，其中X是-CH₂-。

16.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中基团：

形成下式的基团：

17.权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中基团：

形成下式的基团：

18.权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中R¹选自C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、4至7元杂环基、4至7元杂环基-C_1-4烷基、苯基、苯基-C_1-4烷基、5至10元杂芳基和5至10元杂芳基-C_1-4烷基；