CN111747953B - Erbb受体抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了抑制ErbB(例如HER2)的化合物，其药学上可接受的盐，以及包含所述化合物的药物组合物。所述化合物和所述药物组合物可以有效地治疗ErbB(特别是HER2)相关疾病，包括癌症。

Description

ERBB受体抑制剂
本申请是申请号为201980006431.X、申请日为2019年5月8日、发明名称为“ERBB受体抑制剂”的中国发明专利申请的分案申请。原申请为国际申请号为PCT/CN2019/085949的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2018年5月8日、申请号为PCT/CN2018/085998的PCT专利申请的优先权。上述所有申请均通过引用并入本申请。
发明领域
本申请涉及抑制ErbB(例如HER2)的化合物。本申请还涉及包含一种或多种所述化合物作为活性成分的药物组合物，以及所述化合物在制造用于治疗与ErbB(例如HER2)有关的疾病的药物中的用途。
背景
ErbB受体酪氨酸激酶家族由四种密切相关的受体组成：EGFR(ErbB1或HER1)、ErbB2(HER2)、ErbB3(HER3)和ErbB4(HER4)(综述于Riese和Stern,《生物学论文集》(Bioessays)(1998)20:41-48；Olayioye等人,《欧洲分子生物学学会杂志》(EMBO Journal)(2000)19:3159-3167；和Schlessinger,《细胞》(Cell)(2002)110:669-672)。这些受体通过在酪氨酸磷酸化残基处发生的磷酸化事件激活次级信息传递效应子，将信号从细胞外部传输至内部。这些信号调节多个细胞过程，包括增殖、碳水化合物利用、蛋白质合成、血管生成、细胞生长以及细胞存活。ErbB家族信号传导失调将调节增殖、侵袭、转移、血管生成以及肿瘤细胞存活并且可能与许多人类癌症，包括肺癌、头颈癌和乳腺癌相关联。有关ErbB受体信号传导及其在肿瘤形成中之参与情况的详细评述提供于《新英格兰医学杂志》(NewEngland Journal of Medicine),2008,第358卷:1160-74以及《生物化学与生物物理学研究通讯》(Biochemical and Biophysical Research Communications),2004,第319卷:1-11中。
一些研究者已经证明了EGFR和ErbB2在癌症发展中的作用(综述于Salomon等人,《肿瘤学与血液学评论》(Crit.Rev.Oncol.Hematol.)(1995)19:183-232；Klapper等人,《癌症研究进展》(Adv.Cancer Res.)(2000)77:25-79；以及Hynes和Stern,《生物化学与生物物理学报》(Biochim.Biophys.Acta)(1994)1198:165-184)。头部、颈部和肺部的鳞状细胞癌表达高水平的EGFR。此外，已在胶质瘤、乳腺癌和肺癌中发现组成型活性EGFR。ErbB2过表达发生在所有乳腺癌中的约30％中，并且在各种其它癌症类型，如卵巢癌、结肠癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肺癌、子宫癌和前列腺癌中也涉及。ErbB2过表达也与人类癌症的不良预后相关，包括转移和早期复发。
几种EGFR和ErbB2信号传导途径的抑制剂已被证明在癌症治疗中具有临床功效。吉非替尼(Gefitinib)(IRESSA)、埃罗替尼(erlotinib)(TARCEVA)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB、TYVERB)、帕尼单抗(panitumumab)(VECTIBIX)、西妥昔单抗(cetuximab)(ERBITUX)、奥希替尼(osimertinib)(TAGRISSO、AZD9291)和阿法替尼(afatinib)(GIOTRIF)是临床上可获得的EGFR抑制剂。临床上可获得的靶向HER2的抗癌药物包括曲妥珠单抗(Trastuzumab)(也称为赫赛汀(Herceptin))、曲妥珠单抗-美坦新(Trastuzumabemantasine)(T-DM1)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)(Perjeta)、拉帕替尼(Lapatinib)(Tyverb)和奈拉替尼(Neratinib)(Nerlynx)。尽管有三分之二的乳腺癌患者对赫赛汀曲妥珠单抗反应良好，但一些HER2阳性乳腺癌患者对该药物无反应。
因此，仍然需要开发新的ErbB(特别是HER2)抑制剂。
发明内容
在一个方面，本申请提供一种由式(I)表示的化合物：
Figure BDA0002577094420000021
或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含一种或多种式(I)化合物、其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载剂。
在又另一方面，本申请提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或具有前述一种或多种的药物组合物，其用作抑制ErbB(例如HER2)的药物。
在另一方面，本申请提供了通过使用一种或多种式(I)化合物、其药学上可接受的盐，或具有前述一种或多种的药物组合物来抑制ErbB(例如HER2)的方法。
在另一方面，本申请提供在受试者中治疗与HER2相关的疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的一种或多种式(I)化合物、药学上可接受的盐，或具有前述一种或多种的药物组合物。
在另一方面，本申请提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其与第二治疗剂，优选抗肿瘤剂，如化学治疗剂(卡培他滨(capecitabine)、多西紫杉醇(docetaxel)、长春瑞滨(vinorelbine))或HER2靶向抗体(曲妥珠单抗(赫赛汀)、曲妥珠单抗-美坦新(T-DM1)、帕妥珠单抗(Perjeta))组合。
在另一方面，本申请提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在受试者中治疗与ErbB(例如HER2)相关的疾病的药物中的用途。
发明详述
化合物
在一个方面，本申请提供式(I)化合物：
Figure BDA0002577094420000031
或其药学上可接受的盐，
其中，
R1是氢；
R2是氢、卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
G是N或C-CN；
W是O、C(＝O)、S、SO或SO2；
Y是键或C1-12亚烷基，
R3是3-10元饱和或不饱和碳环基，或3-10元饱和或不饱和杂环基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基、被取代的C1-12烷基；
i是0、1、2或3，以及
各R4独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
j是0、1、2或3，以及
各R5独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或OR6，其中R6是3-10元饱和或不饱和碳环基，或3-10元饱和或不饱和杂环基，任选地被以下基团单取代或独立地多取代：羟基、卤素、氰基、C1-12烷基或C1-12卤代烷基；
A是O、C(＝O)、S、SO或SO2；
E是
Figure BDA0002577094420000041
X1、X2、X3和X4各自独立地是N或CR8；
X5和X6各自独立地是N或CR8，并且X7是O、S、NR9或CR10R11，其中X5和X6中的至少一个是N；R8、R9、R10和R11各自独立地是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
p是0、1、2或3，以及
各R7独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的R2是卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，i＝0。在一些实施方式中，i＝1，并且式(I)中的R4是卤素。
在一些实施方式中，j＝1或2，各R5独立地是氨基、C1-12烷氧基或OR6；其中R6是3-10元饱和或不饱和碳环基，或3-10元饱和或不饱和杂环基，任选地被以下基团单取代或独立地多取代：羟基、卤素、氰基、C1-12烷基或C1-12卤代烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的R5独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或OR6，其被氘单取代或多取代。
在一些实施方式中，式(I)中的W是O。
在一些实施方式中，式(I)中的A是O。在一些实施方式中，式(I)中的R3是3-10元饱和或不饱和杂环基，其被氘单取代或多取代。
在一些实施方式中，式(I)中的R3是3-10元饱和杂环基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基、C1-12烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的R3是3-10元饱和杂环基，其被氘取代的C1-12烷基单取代或独立地多取代。
在一些实施方式中，式(I)中的R3是含有一个或两个N原子的5-10元饱和杂环基，其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、氘、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或氘取代的C1-12烷基。在某些实施方式中，式(I)中的R3含有至少一个卤素取代基，优选卤素是F。在某些实施方式中，式(I)中的R3含有两个、三个或更多个卤素取代基，优选卤素是F。
在一些实施方式中，式(I)中的R3是
Figure BDA0002577094420000051
其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、氘、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或氘取代的C1-12烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的R3是
Figure BDA0002577094420000052
其可任选地被以下基团单取代或独立地多取代：卤素、氘、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或氘取代的C1-12烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的Y是键或C1-3亚烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的E是
Figure BDA0002577094420000061
其中，
X2和X3各自独立地是N或CR8；
X6是N或CR8，并且X7是O、S、NR9或CR10R11；
p是0、1、2或3，以及
各R7独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
R8、R9、R10和R11各自独立地是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基。
在一些实施方式中，式(I)中的E是
Figure BDA0002577094420000062
其中X2是N或CR8。
在一些实施方式中，本申请的化合物由式(Ia)表示：
Figure BDA0002577094420000063
或其药学上可接受的盐，
其中，
R2是氢、卤素、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
R12、R13、R14和R15各自独立地是氢、卤素、氘、羟基、氨基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基、氘取代的C1-12烷基；
R16和R17各自独立地是氢、卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH、C1-12卤代烷基或OR6；其中R6是3-10元饱和或不饱和碳环基，或3-10元饱和或不饱和杂环基，任选地被以下基团单取代或独立地多取代：羟基、卤素、氰基、C1-12烷基或C1-12卤代烷基；
其中E是
Figure BDA0002577094420000071
其中
X2和X3各自独立地是N或CR8；
X6各自独立地是N或CR8，并且X7是O、S、NR9或CR10R11；
p是0、1、2或3，以及
各R7独立地是卤素、氨基、羟基、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基；
R8、R9、R10和R11各自独立地是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基、C1-12烷氧基、C1-12烷基-OH或C1-12卤代烷基。
在一些实施方式中，式(Ia)中的R2是卤素、羟基、C1-12烷基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，式(Ia)中的R12、R13、R14和R15各自独立地是氢、卤素、氘、羟基、氨基、C1-12烷基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，式(Ia)中的R13和R14中的至少一个是卤素。在一些实施方式中，式(Ia)中的R13和R14都是卤素。在一些实施方式中，式(Ia)中的R13和R14中的至少一个是F。在一些实施方式中，式(Ia)中的R13和R14都是F。在一些实施方式中，式(Ia)中的R15是氢。在一些实施方式中，式(Ia)中的R15是卤素。
在一些实施方式中，式(Ia)中的R16和R17各自独立地是氢、卤素、氨基、C1-12烷氧基或OR6，其可任选地被氘单取代或独立地多取代；其中R6是3-10元饱和或不饱和碳环基，或3-10元饱和或不饱和杂环基，任选地被以下基团单取代或独立地多取代：羟基、卤素、氰基、C1-12烷基或C1-12卤代烷基。在一些实施方式中，式(Ia)中的R16和R17各自独立地是氢、氨基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，式(Ia)中的E含有至少两个或三个N原子。
在一些实施方式中，式(Ia)中的E是
Figure BDA0002577094420000081
其中X2是CR8并且R8是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基或C1-12烷氧基。
在一些实施方式中，式(Ia)中的E是
Figure BDA0002577094420000082
其中X2是CR8并且R8是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基或C1-12烷氧基。在一些实施方式中，式(Ia)中的E是
Figure BDA0002577094420000083
其中X2和X3各自独立地是CR8并且R8是氢、卤素、C1-12烷基、氰基、氨基、羟基或C1-12烷氧基。
示例性的式(I)化合物1-46列于下表1中。
表1.示例性化合物1-56
Figure BDA0002577094420000084
Figure BDA0002577094420000091
Figure BDA0002577094420000101
Figure BDA0002577094420000111
Figure BDA0002577094420000121
Figure BDA0002577094420000131
Figure BDA0002577094420000141
Figure BDA0002577094420000151
Figure BDA0002577094420000161
Figure BDA0002577094420000171
Figure BDA0002577094420000181
应了解，为清楚起见而在单独实施例的上下文中描述的本申请的某些特征也可在单一实施方式中组合。相反，为简洁起见而在单个实施例的上下文中描述的本申请的各种特征也可分开地或以任何适合子组合形式提供。
在本申请多处，描述了连接取代基。在结构明确需要连接基团的情况下，关于该基团所列的马库什变量(markush variable)应理解为连接基团。例如，如果结构中需要连接基团，且该变量的马库什组定义列举了“烷基”，则应理解，则应当理解所述“烷基”表示连接性亚烷基。
如本文所使用，当提到化学基团时，术语“被取代”意思指所述化学基团有一个或多个氢原子被移除且被取代基置换。如本文所使用，术语“取代基”具有本领域中已知的普通含义并且指共价连接至，或适当时，稠合至母基团的化学部分。如本文所使用，术语“任选被取代”或“任选被……取代”意思指化学基团可以不具有取代基(即，未被取代)或可以具有一个或多个取代基(即，被取代)。应理解，在给定原子处的取代受价态限制。
如本文所使用，术语“Ci-j”指示碳原子数量的范围，其中i和j是整数并且碳原子数量的范围包括端点(即，i和j)以及端点之间的每个整数点在内，且其中i∈{1、2、3、4、5、6、7、8、9或10}，j大于i，j∈{2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40}。例如，C1-6指示一至六个碳原子的范围，包括一个碳原子、二个碳原子、三个碳原子、四个碳原子、五个碳原子及六个碳原子。
如本文所使用，术语“烷基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指饱和或不饱和烃链，而不饱和烃链可以进一步细分成具有至少一个双键或三键的烃链(烯基或炔基)。以上提到的烃链可以是直链的或支链的。术语“Ci-j烷基”是指具有i至j个碳原子的烷基。在一些实施方式中，烷基含有1至12个、1至8个、1至6个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。饱和烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基；高级同系物，例如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丁基等。不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基、乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。
如本文所使用，术语“卤代”和“卤素”是指选自氟、氯、溴和碘的原子。
如本文所使用，术语“氰基”是指式-CN的基团。
如本文所使用，术语“羟基”是指式-OH的基团。
如本文所使用，术语“烷氧基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指式-O-烷基的基团。术语“Ci-j烷氧基”意思指烷氧基的烷基部分具有i至j个碳原子。在一些实施方式中，烷基部分具有1至12个、1至10个、1至8个、1至6个、1至5个、1至4个、1至3个或1至2个碳原子。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。
如本文所使用，术语“Ci-j烷基-OH”是指式“-C1-12烷基-OH”的基团，其中所述基团的烷基部分具有i至j个碳原子，并且羟基可以连接烷基部分中的任何碳原子。在一些实施方式中，烷基部分具有1至12、1至10、1至8、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2个碳原子。
如本文所使用，术语“Ci-j卤代烷基”是指卤素取代的(单取代或多取代的)Ci-j烷基。
如本文所使用，术语“碳环基”无论是作为另一个术语的一部分还是独立地使用，都是指所有环原子都是碳且含有至少三个成环碳原子的任何环。在一些实施方式中，碳环基可以含有3至12个成环碳原子、3至10个成环碳原子、3至9个成环碳原子或4至8个成环碳原子。碳环基可以是饱和或部分不饱和的。在一些实施方式中，碳环基可以是饱和环烷基。在一些实施方式中，碳环基可以是在环系统中含有至少一个双键的不饱和环烷基。在一些实施方式中，不饱和碳环基可以含有一个或多个芳香环。
碳环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠环、桥连环或螺环)。单环碳环基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基等。如本文所使用，术语“螺环”是指二个环通过单一共用原子连接的环系统；术语“稠合环”是指二个环共用二个相邻原子的环系统；并且术语“桥连环”是指二个环共用三个或三个以上原子的环系统。螺碳环基的实例包括但不限于螺[5.5]十一烷、螺戊二烯、螺[3.6]癸烷等。稠合碳环基的实例包括但不限于萘、苯并芘、蒽、二氢苊、芴、苊烯等。桥连碳环基的实例包括但不限于双环[1,1,1]戊烯基、双环[2,2,1]庚烯基、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.3.1]壬烷、双环[3.3.3]十一烷等。
如本文所使用，术语“杂环基”是指一个或多个(例如1、2或3个)环原子被杂原子置换的碳环基，所述杂原子包括但不限于氧、硫、氮、磷等。在一些实施方式中，杂环基是饱和杂环基。在一些实施方式中，杂环基是在环系统中具有一个或多个双键的不饱和杂环基。在一些实施方式中，不饱和杂环基可以含有一个或多个芳香环。
杂环基可以包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环、桥连环或螺环)。示例性单环杂环基包括但不限于哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、吗啉基等。螺杂环基的实例包括但不限于螺吡喃、螺噁嗪等。稠合杂环基的实例包括但不限于喹啉、异喹啉、喹嗪、喹唑啉、蝶啶、色烯、异色烯、吲哚、异吲哚、吲哚嗪、吲唑、嘌呤、苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噻吩、咔唑、吩嗪、吩噻嗪、菲啶等基团。桥连杂环基的实例包括但不限于吗啡烷、六亚甲基四胺、8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷、1-氮杂-双环[2.2.2]辛烷、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)等。
如本文所使用，术语“i-j元”是指具有i至j个成环原子的碳环基或杂环基。例如，“3-8元碳环基”是指具有3至10个(例如3、4、5、6、7、8、9或10个)成环成员的碳环基；“3-10元杂环基”是指具有3至10个(例如3、4、5、6、7、8、9或10个)成环成员的杂环基。在一些实施方式中，碳环基或杂环基是3-10元、3-8元、3-6元或4-6元的。例如，哌啶基是6元杂环基的实例，吡唑基是5元杂环基的实例，吡啶基是6元杂环基的实例，且1,2,3,4-四氢萘是10元碳环基的实例。
如本文所使用，术语“芳香族基团”或“芳香环”是指在至少一个环中的成环原子之间具有交替的双键和单键的单环或多环碳环基或杂环基部分。在一些实施方式中，芳香环具有5至12个、5至10个、5至8个、6至12个、6至10个或6至8个成环原子(即，5-12元、5-10元、5-8元、6-12元、6-10元或6-8元的)。碳环芳香族基团的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。在一些实施方式中，杂环芳香族基团是5元或6元的。示例性5元杂环芳香族基团是噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,3,4-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基等。示例性6元杂环芳香族基团是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基及哒嗪基。
除非另外说明，否则本申请的“化合物”意图涵盖所描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体和互变异构体。
术语“立体异构体”是指不对称化合物(例如具有一个或多个不对称取代的碳原子，即“不对称中心”)的多种立体异构构型(例如对映异构体、非对映异构体和外消旋体)。含有不对称中心的本申请化合物可以分离成有光学活性(对映异构体或非对映异构体)或无光学活性(外消旋)形式。术语“对映异构体”包括不可重叠的互为镜像的立体异构体对。一对对映异构体的1:1混合物是一种“外消旋混合物”。术语“非对映异构体(diastereomer/diastereoisomer)”包括具有至少二个不对称原子但不互为镜像的立体异构体。含有一个或多个不对称中心的某些化合物可以产生对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式，这些异构体可根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统在各不对称中心处依据绝对构型将其定义为(R)-或(S)-。拆分的化合物，其绝对构型未知的，可以在不对称中心处使用术语“或”标示。有关如何自外消旋混合物制备光学活性形式的方法是本领域中已知的，如通过HPLC拆分或立体选择性合成。
“几何异构体”或“顺式和反式异构体”是指具有相同结构式但官能团在三维空间中旋转成不同取向的化合物。术语“互变异构体”包括质子转移互变异构体，它是具有相同结构式和总电荷的化合物的异构质子化状态。质子转移互变异构体的实例包括但不限于酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对，以及环状形式，在环状形式中，质子可以占用杂环系统的两个或更多个位置，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚，以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构体可以处于平衡状态或通过适当取代而空间锁定成一种形式。除非另外说明，否则本申请中通过名称或结构标识为一种特定互变异构形式的本申请化合物意图包括其它互变异构形式。
本申请的“化合物”还意图涵盖化合物中原子的所有同位素。原子的同位素包括具有相同原子序数但原子量不同的原子。例如，除非另外规定，否则本申请的“化合物”中的氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴或碘意图还包括其同位素，如但不限于：1H、2H、3H、11C、12C、13C、14C、14N、15N、16O、17O、18O、31P、32P、32S、33S、34S、36S、17F、19F、35Cl、37Cl、79Br、81Br、127I及131I。在一些实施方式中，氢包括氕、氘和氚。在一些实施方式中，术语“被氘取代”或“氘取代的”是指用氘取代化学基团中的氢的另一种同种型(例如氕)。在一些实施方式中，碳包括12C和13C。
还应理解，本申请的“化合物”可以呈溶剂化形式以及非溶剂化形式，例如水合形式、固体形式存在，并且本申请意图涵盖所有这些溶剂化形式和非溶剂化形式。
还应理解，本申请的“化合物”可以呈药学上可接受的盐或酯形式存在。
如本文所使用，术语“药学上可接受”是指在合理医学判断的范围内，适合与人类和动物的组织接触使用，而无过高毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，并与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。在一些实施方式中，药学上可接受的化合物、材料、组合物和/或剂型是指被监管机构(如美国食品药品监督管理局(U.S.Foodand Drug Administration)、中国国家食品药品监督管理总局(China Food and DrugAdministration)或欧洲药品管理局(European Medicines Agency))批准，或公认药典(如美国药典(U.S.Pharmacopeia)、中国药典(China Pharmacopeia)或欧洲药典(EuropeanPharmacopeia))中所列的可用于动物特别是人类的那些。
如本文所使用，“药学上可接受的盐”是指本申请化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸性部分(例如羧基等)或碱性部分(例如胺、碱等)转化成其盐形式进行修饰。在许多情况下，本申请化合物能够因氨基和/或羧基或其类似基团的存在而形成酸和/或碱盐。并且药学上可接受的盐是保持母体化合物的生物有效性和特性且通常在生物学上或其它方面无不利影响的酸盐和/或碱盐。适合的本申请化合物的药学上可接受的盐包括例如酸加成盐，这种盐可以衍生自例如无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)或有机酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、顺丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、苯均三酸、柠檬酸、乳酸、苯乙酸、苯甲酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘二磺酸、乙烷磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、水杨酸、磺基水杨酸等)。在一些实施方式中，本申请化合物的药学上可接受的盐是甲酸盐。在一些实施方式中，本申请化合物的药学上可接受的盐是TFA盐。
适合的本申请化合物的药学上可接受的盐还包括例如碱加成盐，这种盐可以衍生自例如无机碱(例如钠、钾、铵盐以及周期表第I至XII栏中金属如钙、镁、铁、银、锌、铜等的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐)或有机碱(例如伯胺、仲胺和叔胺、被取代的胺(包括天然存在的被取代的胺)、环胺、碱性离子交换树脂等)。某些有机胺包括但不限于异丙胺、苯乍生(benzathine)、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪以及缓血酸胺。本领域技术人员应理解，也能够加入除实例中所显示的酸或碱外其它酸或碱以用于形成酸/碱加成盐。其它适合的盐的清单可以见于例如《雷明登氏药学全书(Remington's PharmaceuticalSciences)》,第20版,Mack Publishing Company,宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa.),(1985)；以及Stahl和Wermuth的《药用盐手册：特性、选择和应用(Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use)》(Wiley-VCH,德国魏因海姆(Weinheim,Germany),2002)。
如本文所使用，“药学上可接受的酯”是指在体内水解的酯，并且包括易于在人体内分解而留下母体化合物或其盐的那些酯。此类酯可以用作如本文所定义的前药。酯可以与本文所描述的化合物上的胺、羟基或羧基侧链形成。例如，如果所公开的化合物含有醇官能团，则可以通过用酸性基团，如包括但不限于羧酸、磷酸、次膦酸、亚磺酸、磺酸以及硼酸基团置换醇基的氢原子来形成酯。制备此类酯的程序和具体基团是本领域技术人员已知的并且可以容易地在如以全文引用的方式并入本文中的Greene和Wuts,《有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis)》,第3版,John Wiley&Sons,纽约州纽约(New York,NY),1999等参考来源中找到。
本申请还包括本申请化合物的活性中间物、活性代谢物和前药。如本文所使用，“活性中间物”是指合成工艺过程中的中间化合物，其展现与最终合成的化合物相同或基本上相同的生物活性。
如本文所使用，“活性代谢物”是指通过在动物或人体内代谢或生物转化产生的本申请化合物或其盐或前药的分解或最终产物，其展现与指定化合物相同或基本上相同的生物活性。此类代谢物可以由例如施用的化合物或盐或前药的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、去酯化、酶裂解等得到。
如本文所使用，“前药”是指当施用给动物或人类受试者时，释放活性母体药物的任何化合物或偶联物。前药可以通过修饰化合物中存在的官能团来制备，其方式使得该修饰在常规操作中或在体内被剪切而释放母体化合物。前药包括这样的化合物，其中羟基、氨基、硫氢基或羧基键结至任何基团，使得当将其施用给哺乳动物受试者时分别剪切形成游离的羟基、氨基、硫氢基或羧基。前药的实例包括但不限于本申请化合物中醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。前药的制备和使用论述于T.Higuchi和V.Stella,“作为新型递送系统的前药(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)”,《美国化学会会议论文集(A.C.S.Symposium Series)》第14卷，以及《药物设计中的生物可逆载剂(BioreversibleCarriers in Drug Design)》,Edward B.Roche编,American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press,1987，二者在此以全文引用的方式并入。
除非另有说明，否则“野生型ErbB”是指存在于自然环境中的执行ErbB正常功能的正常ErbB家族成员。在一方面，本申请提供ErbB家族激酶(例如EGFR、Her2、Her3和/或Her4)的抑制性化合物。在一些实施方式中，本申请的化合物可以抑制一种以上的ErbB家族激酶。在一些其它实施方式中，本申请的化合物选择性地抑制ErbB2(即HER2)，而不抑制其它ErbB家族激酶(例如EGFR)。
在一些实施方式中，本申请的化合物可以抑制ErbB家族激酶的野生型(WT)和突变形式。如本文所使用，术语“突变”是指ErbB蛋白质的任何突变；“突变体”或“突变形式”是指含有所述突变的蛋白质。ErbB的示例性突变包括但不限于EGFR中的L858R、T790M、G719S、G719X、delE746-A750、A763_Y764insFQEA、V769_D770insASV、H773_V774insNPH等，以及Her2中的外显子20insYVMA。在一些实施方式中，本申请的化合物可以抑制野生型(WT)HER2和HER2的突变形式(例如，外显子20insYVMA)。
在一些实施方式中，本申请的化合物抑制WT HER2的磷酸化，其IC50值是0.1-200nM，优选地是0.1-150nM、0.1-130nM、0.1-120nM、0.1-100nM、0.1-50nM、0.1-40nM、0.1-30nM、0.1-25nM、0.1-20nM、0.1-10nM、0.5-200nM、0.5-150nM、0.5-130nM、0.5-120nM、0.5-100nM、0.5-50nM、0.5-40nM、0.5-30nM、0.5-25nM、0.5-20nM、0.5-10nM、1-200nM、1-150nM、1-130nM、1-120nM、1-100nM、1-50nM、1-40nM、1-30nM、1-25nM、1-20nM、1-10nM、2-200nM、2-150nM、2-130nM、2-120nM、2-100nM、2-50nM、2-40nM、2-30nM、2-25nM、2-20nM或2-10nM，更优选地是0.1-150nM、0.1-130nM、1-150nM、1-130nM、2-130nM或2-150nM。
增殖抑制作用可以用“50％生长抑制浓度”(GI50)值表示，其是指当观察到50％的最大增殖抑制作用时的化合物的浓度。GI50值可通过本领域已知的方法测量，例如MTS、酪蛋白和任何其它方法。在一些实施方式中，本申请的化合物抑制带有WT HER2和/或突变HER2的细胞增殖，如通过MTS所测量，其GI50值是0.1-200nM，优选地是0.1-150nM、0.1-130nM、0.1-120nM、0.1-100nM、0.1-50nM、0.1-40nM、0.1-30nM、0.1-20nM、0.1-10nM、1-200nM、1-150nM、1-130nM、1-120nM、1-100nM、1-50nM、1-40nM、1-30nM、1-20nM、1-10nM、2-200nM、2-150nM、2-130nM、2-120nM、2-100nM、2-50nM、2-40nM、2-30nM、2-25nM、2-20nM或2-10nM、4-200nM、4-150nM、4-130nM、4-120nM、4-50nM、4-40nM、4-30nM、4-20nM、4-10nM，更优选地是0.1-150nM、0.1-130nM、1-150nM、1-130nM、2-150nM、2-130nM、4-150nM或4-130nM。
如本文所使用，“选择性抑制”HER2意指所提供的化合物作为WT(和/或突变型)HER2的抑制剂的效力是其抑制其它类型的ErbB激酶(例如EGFR)的至少1000倍、至少500倍、至少200倍、至少100倍、至少50倍、至少45倍、至少40倍、至少35倍、至少30倍、至少25倍、至少20倍、至少15倍或至少10倍。在一些实施方式中，“选择性抑制”HER2意指所提供的化合物作为HER2(WT和/或突变型)抑制剂的效力是其抑制其它类型的ErbB激酶(例如EGFR)的高达1500倍、高达1200倍、高达1000倍、高达800倍、高达600倍、高达400倍、高达200倍、高达100倍、高达50倍。
在一些实施方式中，术语“不抑制”其它类型的ErbB激酶(例如EGFR)意指所提供的化合物抑制其它类型的ErbB激酶(例如WT EGFR)的IC50是至少500nΜ。在一些实施方式中，此类化合物抑制其它类型的ErbB激酶的IC50是至少10μΜ、至少9μΜ、至少8μΜ、至少7μΜ、至少6μΜ、至少5μΜ、至少3μΜ、至少2μΜ或至少1μΜ。
在一些实施方式中，化合物对WT-EGFR的IC50和/或GI50比化合物对WT HER2的IC50和/或GI50高至少5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1000倍，优选50倍、100倍、200倍、500倍或1000倍。
所述化合物或其药学上可接受的盐与其它临床上可获得的ErbB抑制剂相比时，表现出某些改善的特性，例如更高的血脑屏障BBB渗透(从而使它们可用于治疗转移至中枢神经系统(CNS)的癌症，特别是脑转移和柔脑膜转移)；与用于某些类型的ErbB的现有药物相比，对所述某些类型的ErbB(例如HER2)显示出更好的选择性，同时保持相当或改善的抑制活性。因此，这些化合物或其药学上可接受的盐可特别用于治疗涉及这些HER2的疾病状态，例如用于治疗癌症，尤其是具有CNS(特别是脑和柔脑膜)转移的癌症。
合成方法
本文提供的化合物，包括其盐、酯、水合物或溶剂化物或立体异构体的合成在实施例中的合成方案中说明。本文提供的化合物可以使用任何已知的有机合成技术制备并且可以根据多种可能的合成途径中的任一种合成，并因此，这些方案只是例示性的且无意限制可以用于制备本文提供的化合物的其它可能的方法。此外，方案中的步骤是为了更好地说明且在适当时可以改变。出于研究和可能提交给管理机构的目的，合成实施例中化合物的实例。
用于制备本申请化合物的反应可以在适合溶剂中进行，这些溶剂可以由有机合成领域的技术人员容易地选择。适合溶剂可以在反应进行的温度下(例如在从溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度范围内的温度)基本上不与起始物质(反应物)、中间物或产物反应。指定反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于特定反应步骤，用于特定反应步骤的适合溶剂可以由本领域技术人员选择。
本申请化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。对于保护和脱保护的需求，以及适当保护基的选择可以由本领域技术人员容易地确定。保护基的化学性质可以见于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,《有机合成中的保护基》,第3版,Wiley&Sons,Inc.,纽约(1999)，其以全文引用的方式并入本文中。
反应可以根据本领域中已知的任何适合方法监测。例如，可以通过频谱手段，如核磁共振波谱(NMR，例如1H或13C)、红外光谱(IR)、分光光度法(例如紫外-可见光)、质谱(MS)，或通过色谱法，如高压液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱(TLC)来监测产物形成。本领域的技术人员可以利用多种方法，包括高效液相色谱法(HPLC)(“制备型LC-MS纯化：改善的化合物特异性方法优化(Preparative LC-MS Purification：ImprovedCompound Specific Method Optimization)”,Karl F.Blom,Brian Glass,RichardSparks,Andrew P.Combs,《组合化学杂志(J.Combi.Chem.)》,2004,6(6),874-883，以全文引用的方式并入本文中)和正相二氧化硅色谱法纯化化合物。
本文所使用的缩写定义如下：“1×”或“×1”表示一次，“2×”或“×2”表示两次，“3×”或“×3”表示三次，“4×”或“×4”表示四次，“5×”或“×5”表示五次，“℃”表示摄氏度，“eq”或“eq.”表示当量，“g”表示克，“mg”表示毫克，“L”表示升，“mL”或“ml”表示毫升，“μL”表示微升，“Nor”表示当量浓度，“M”表示摩尔浓度，“mmol”表示毫摩尔，“min”表示分钟，“h”或“hr”表示小时，“r.t.”或“rt”表示室温，“atm”表示大气压，“psi”表示磅/平方英寸，“conc.”表示浓缩，“sat”或“sat'd”表示饱和，“MS”或“Mass Spec”表示质谱，“ESI”表示电喷雾电离质谱，“LCMS”表示液相色谱质谱法，“HPLC”表示高压液相色谱，“RP”表示逆相，“TLC”或“tlc”表示薄层色谱法，“SM”表示起始物质，“NMR”表示核磁共振波谱，“1H”表示质子，“δ”表示德耳塔(delta)，“s”表示单峰，“d”表示二重峰，“t”表示三重峰，“q”表示四重峰，“m”表示多重峰，“br”表示宽峰，并且“Hz”表示赫兹。“α”、“β”、“R”、“S”、“E”以及“Z”是本领域技术人员熟悉的立体化学名称。
在本文提供的化合物的合成中使用的化学试剂的缩写列于下：
Figure BDA0002577094420000271
Figure BDA0002577094420000281
药物组合物
本申请提供了包含至少一种本申请的化合物的药物组合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含多于一种本申请的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种本申请的化合物和药学上可接受的载剂。
药学上可接受的载剂是本领域中的常规药物载剂，其可以按药学领域中众所周知的方式制备。在一些实施方式中，本申请的化合物可以与药学上可接受的载剂混合以制备药物组合物。
如本文所使用，术语“药学上可接受的载剂”是指将本文提供的化合物从一个位置、体液、组织、器官(内部或外部)或身体的一部分载运或运输至另一位置、体液、组织、器官或身体的一部分所涉及的药学上可接受的材料、组合物或媒剂，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。药学上可接受的载剂可以是能够用于接触动物组织，而无过高毒性或不良作用的媒剂、稀释剂、赋形剂或其它材料。示例性药学上可接受的载剂包括糖、淀粉、纤维素、麦芽、黄芪胶、明胶、林格氏溶液(Ringer's solution)、海藻酸、等渗生理盐水、缓冲剂等。可以用于本申请中的药学上可接受的载剂包括本领域中普遍知道的那些，如以引用的方式并入本文中的《雷明登氏药学全书》,Mack Pub.Co.,新泽西州(NewJersey)(1991)中公开的那些。
可以充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂、如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗生理盐水；(18)林格氏溶液；(19)醇，如乙醇和丙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物配制物中采用的其它无毒可相容物质，如丙酮。
药物组合物可视需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。
药物组合物的形式取决于多种标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或欲施用的剂量。
所述药物组合物可以被配制成经口、鼻、直肠、经皮、静脉内或肌肉内施用。根据希望的施用途径，所述药物组合物可以被配制成片剂、胶囊、丸剂、糖衣药丸、散剂、颗粒剂、药囊、扁囊剂、口含锭、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或在液体介质中)、喷雾剂、油膏、糊浆、乳膏、洗剂、凝胶剂、贴片、吸入剂或栓剂形式。
药物组合物可以被配制用于在通过采用本领域中已知的程序施用给患者之后，提供活性成分的快速、持续或延迟释放。在一些实施方式中，药物组合物被配制成持续释放形式。如本文所使用，术语“持续释放形式”是指活性剂自药物组合物释放以使其变得在较长时间段(延长释放)内或在某一位置(控制释放)可供受试者，主要是受试者的胃肠道生物吸收。在一些实施方式中，所述较长时间段可以是约1小时至24小时、2小时至12小时、3小时至8小时、4小时至6小时、1至2天或更长时间。在某些实施方式中，所述较长时间段是至少约4小时、至少约8小时、至少约12小时或至少约24小时。所述药物组合物可以被配制成片剂形式。例如，活性剂的释放速率不仅可以通过活性剂溶解于胃肠液中且随后独立于pH而自片剂或丸剂扩散进行控制，而且还受片剂崩解和溶蚀的物理过程影响。在一些实施方式中，“控制释放的医学应用(Medical Applications of Controlled Release)”,Langer和Wise(编),CRC Pres.,佛罗里达州波卡拉顿(Boca Raton,Florida)(1974)；“控制性药物生物利用率(Controlled Drug Bioavailability)”,《药品设计和性能(Drug Product Designand Performance)》,Smolen和Ball(编),Wiley,纽约(1984)；Ranger和Peppas,1983,《高分子科学—高分子化学评述(J Macromol.Sci.Rev.Macromol Chem.)》23:61中所公开的聚合材料可以用于持续释放；还参见Levy等人,1985,《科学(Science)》228:190；During等人,1989,《神经学年评(Ann.Neurol.)》25:351；Howard等人,1989,《神经外科杂志(J.Neurosurg.)》71:105。以上参考文献都以全文引用的方式并入本文中。
在某些实施方式中，药物组合物包含约0.0001mg至约5000mg本申请的化合物(例如约0.0001mg至约10mg、约0.001mg至约10mg、约0.01mg至约10mg、约0.1mg至约10mg、约1mg至约10mg、约5mg至约10mg、约5mg至约20mg、约5mg至约30mg、约5mg至约40mg、约5mg至约50mg、约10mg至约100mg、约20mg至约100mg、约30mg至约100mg、约40mg至约100mg、约50mg至约100mg、约50mg至约200mg、约50mg至约300mg、约50mg至约400mg、约50mg至约500mg、约100mg至约200mg、约100mg至约300mg、约100mg至约400mg、约100mg至约500mg、约200mg至约500mg、约300mg至约500mg、约400mg至约500mg、约500mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约1000mg至约2000mg、约2000mg至约3000mg、约3000mg至约4000mg或约4000mg至约5000mg)。每天每位受试者的适合剂量可以是约5mg至约500mg，优选地是约5mg至约50mg、约50mg至约100mg或约50mg至约500mg。
在某些实施方式中，所述药物组合物可以被配制成单位剂型，每次剂量含有约0.0001mg至约10mg、约0.001mg至约10mg、约0.01mg至约10mg、约0.1mg至约10mg、约1mg至约10mg、约5mg至约10mg、约5mg至约20mg、约5mg至约30mg、约5mg至约40mg、约5mg至约50mg、约10mg至约100mg、约20mg至约100mg、约30mg至约100mg、约40mg至约100mg、约50mg至约100mg、约50mg至约200mg、约50mg至约300mg、约50mg至约400mg、约50mg至约500mg、约100mg至约200mg、约100mg至约300mg、约100mg至约400mg、约100mg至约500mg、约200mg至约500mg、约300mg至约500mg、约400mg至约500mg、约500mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约1000mg至约2000mg、约2000mg至约3000mg、约3000mg至约4000mg或约4000mg至约5000mg本申请的化合物。
术语“单位剂型”是指适合以单一剂量用于人类受试者和其它哺乳动物的物理离散单位，每个单位含有经计算以产生所希望的治疗作用的预定量的活性材料与适合药物载剂的组合。在一些实施方式中，药物组合物包含一种或多种本申请的化合物作为第一活性成分，并且还包含第二活性成分。第二活性成分可以是本领域中已知的任何抗癌剂，例如化学治疗剂、细胞信号转导抑制剂、细胞信号转导抑制剂、烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、免疫治疗剂、有丝分裂抑制剂、抗激素剂、化学治疗药物、EGFR抑制剂、CTLA-4抑制剂、MEK抑制剂、PD-L1抑制剂、OX40激动剂等。用于治疗癌症或肿瘤的抗癌剂的代表性实例可包括但不限于曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-美坦新、帕妥珠单抗、ONT380、奈拉替尼、拉帕替尼、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、伏立诺他(vorinostat)、坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、帕唑帕尼(pazopanib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、阿多-曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、兰比珠单抗(ranibizumab)、哌加他尼(pegaptanib)、帕尼单抗(panitumumab)、曲美单抗(tremelimumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、伊派利单抗(ipilimumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、度伐单抗(durvalumab)、克卓替尼(crizotinib)、卢佐替尼(ruxolitinib)、卡培他滨、多西紫杉醇、长春瑞滨、紫杉醇(paclitaxel)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、吉西他滨(gemcitabine)、他莫昔芬(tamoxifen)、雷诺昔芬(raloxifene)、环磷酰胺、苯丁酸氮芥(chromabucil)、卡莫司汀(carmustine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、放线菌素(actinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、蒽环霉素(anthracycline)、博莱霉素(bleomycin)、丝裂霉素C、(mitomycin-C)、伊立替康(irinotecan)、拓朴替康(topotecan)、替尼泊苷白细胞介素(teniposide interleukin)、干扰素等。在一些实施方式中，第二活性剂是以下一种或多种：化学治疗剂(卡培他滨、多西紫杉醇、长春瑞滨)或HER2靶向抗体(曲妥珠单抗、曲妥珠单抗美坦新、帕妥珠单抗)。
治疗方法
本申请提供一种治疗与ErbB(包括例如HER2)有关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种本申请的化合物、其药学上可接受的盐或药物组合物。
如本文所使用，术语“与ErbB有关的疾病”是指发作或发展或二者都与ErbB的基因组变化、表达、过表达或活性有关的疾病。实例包括但不限于免疫相关疾病、增生性病症、癌症和其它疾病。
如本文所使用，术语“与HER2有关的疾病”是指视具体情况，发作或发展或二者都与HER2的基因组变化、表达、过表达或活性有关的疾病或病症。实例包括但不限于免疫相关疾病、增生性病症、癌症和其它疾病。
在一些实施方式中，与ErbB有关的疾病是癌症，优选表达ErbB的癌症或过表达ErbB的癌症。“表达ErbB的癌症”是涉及具有在其细胞表面存在的ErbB蛋白(例如HER2)的癌细胞或肿瘤细胞的癌症。“过表达ErbB的癌症”是与相同组织类型的非癌细胞相比，在癌症或肿瘤细胞的细胞表面具有显著更高水平的ErbB蛋白(例如HER2)的癌症。这种过表达可能是由基因扩增或增加的转录或翻译引起的。通过评估细胞表面上存在的ErbB蛋白水平的增加(例如通过免疫组织化学分析；IHC)，可以在诊断或预后分析中测定ErbB受体表达或过表达。替代地或另外，可以测量细胞中编码ErbB的核酸的水平，例如通过荧光原位杂交(FISH；参见1998年10月公开的WO98/45479)、DNA印迹或聚合酶链反应(PCR)技术，如实时定量PCR(RT-PCR)《方法(Methods)》132:73-80(1990))。除了上述分析之外，本领域技术人员可以使用各种体内分析。例如，可以将患者体内的细胞暴露于抗体，所述抗体任选地用可检测标记物(例如放射性同位素)标记，并且可以评估抗体与患者细胞的结合，例如，通过外部扫描放射性或通过分析从先前暴露于抗体的患者取得的活组织检查。
确切地说，所述癌症包括但不限于白血病、神经胶母细胞瘤、黑素瘤、软骨肉瘤、胆管癌、骨肉瘤、淋巴瘤、肺癌、腺瘤、骨髓瘤、肝细胞癌、肾上腺皮质癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫颈癌、脑癌、食道癌、骨癌、睾丸癌、皮肤癌、肾癌、间皮瘤、神经母细胞瘤、甲状腺癌、头颈癌、食道癌、眼癌、前列腺癌、鼻咽癌或口腔癌。在一些实施方式中，所述癌症是肺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌或神经胶母细胞瘤。在一些实施方式中，所述癌症是乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌或肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌、鳞状细胞肺癌和大细胞肺癌)。在一些实施方式中，与ErbB(例如HER2)有关的疾病是已经转移至中枢神经系统(CNS)的癌症，特别是具有脑和柔脑膜转移的癌症。
如本文所使用，术语“治疗(treatment/treat)”是指逆转、缓解如本文所描述的疾病或病症或其一种或多种症状，延迟其发作或抑制其进展。在一些实施方式中，治疗可以在出现了一种或多种症状后进行。在其它实施方式中，治疗可以在无症状存在下进行。例如，可以在症状发作之前对易感个体(例如根据症状史和/或根据遗传学或其它易感因素)进行治疗。也可以在症状消退之后继续治疗，例如以预防或延迟其复发。
本文提供的治疗有效量的化合物将取决于本领域已知的各种因素，例如受试者的体重、年龄、既往病史、目前的药物治疗、健康状况和交叉反应的可能性、过敏、敏感性和不良副作用，以及施用途径和疾病发展的程度。如这些和其它情况或要求所示，本领域普通技术人员(例如医生或兽医)可以按比例减少或增加剂量。
如本文所使用，术语“受试者”和“个体”可互换使用并且指温血动物，包括人或任何非人动物(例如小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、绵羊、马或灵长类动物)。人类包括产前和产后形式。在一些实施方式中，受试者是人。受试者可以是疑似患有与ErbB(优选HER2)有关的疾病的受试者，但可能显示或可能不显示所述疾病的症状。
在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐或药物组合物是通过肠胃外途径或非肠胃外途径施用。在一些实施方式中，所述一种或多种化合物、其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或立体异构体或药物组合物是经口、经肠、经颊、经鼻、鼻内、经粘膜、经表皮、透皮、经皮、经眼、肺、舌下、经直肠、经阴道、经表面、皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内或胸骨内施用。
本文提供的化合物可以呈纯的形式、与其它活性成分组合或呈本申请的药物组合物形式施用。在一些实施方式中，本文提供的化合物可以与本领域中已知的一种或多种抗癌剂组合同时或依序施用给有需要的受试者。在一些实施方式中，施用是一天一次、一天两次、一天三次或每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、一周一次进行。
在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐或药物组合物是经口施用的。对于经口施用，实现所希望的目标的任何剂量都是适当的。在一些实施方式中，适合日剂量是在约0.001-5000mg之间，优选地在0.1mg与5g之间，更优选地在5mg与1g之间，更优选地在10mg与500mg之间，并且施用是一天一次、一天两次、一天三次、每天或一周3-5天进行。在一些实施方式中，本文提供的一种或多种化合物、其药学上可接受的盐或药物组合物的剂量在每天约0.0001mg、优选地0.001mg、0.01mg、0.1mg、1mg、10mg、50mg、100mg、200mg、250mg、500mg、750mg、1000mg、2000mg、3000mg、4000mg或到约5000mg之间的范围内。
在一些实施方式中，一种或多种化合物、其药学上可接受的盐或本文提供的药物组合物在施用于受试者后可以穿过受试者的血脑屏障(BBB)。
化合物的用途
在某些实施方式中，本申请提供了本申请的化合物、其药学上可接受的盐或药物组合物在制造用于治疗与ErbB(例如HER2)有关的疾病的药物中的用途。
本申请中的化合物和其药物组合物可用于在体内和体外抑制ErbB(表达或活性)，尤其是抑制HER2(表达或活性)。在一些实施方式中，本申请中的化合物和其药物组合物可用于在非诊断性非治疗方法(例如，用于研究目的)中抑制ErbB(表达或活性)，尤其是抑制HER2(表达或活性)。
本申请中的化合物和其药物组合物可用于预防或治疗温血动物，尤其是人的与ErbB(例如HER2)有关的任何疾病的发作或发展。
在此类情形中，本申请还提供一种筛选患者的方法，所筛选的患者适于用单独本申请的化合物或药物组合物或其与其它成分(例如第二活性成分，例如抗癌剂)的组合治疗。所述方法包括对来自患者的肿瘤样品进行测序并检测所述患者体内ErbB(例如HER2)的积累。
实施例
以下进一步阐明本申请的通用方法。本申请的化合物可以通过本领域中已知的方法制备。以下说明本申请的优选化合物的具体制备方法。不过，这些具体的制备方法决不限定本申请化合物的制备方法。
合成实施例
以下实施例中化合物的结构通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)表征。NMR位移(δ)是以10-6(ppm)为单位给出。1H-NMR谱图是在Bruker AVANCE NMR(400MHz)谱仪上使用ICON-NMR(在TopSpin程序控制下)，或在Varian 400MR NMR或Varian VNMR400 NMR(400MHz)谱仪上(在VnmrJ程序控制下)录得，以二甲亚砜-d6(DMSO-d6)或CDCl3或CD3OD或D2O(来自Aldrich或Cambridge Isotope Lab.,Inc.)为溶剂，以四甲基硅烷为内标。
MS测量是使用Shimadzu 2010质谱仪或Agilent 6110A MSD或1969ATOF质谱仪，使用电喷雾、化学和电子碰撞电离方法，由一系列仪器进行。
高效液相色谱(HPLC)测量是在Shimadzu LC-20A系统或Shimadzu LC-2010HT系列，或Agilent 1200LC或Agilent 1100系列上，使用Ultimate XB-C18色谱柱(3.0*50mm，3μm或3.0*150mm，3μm)，或Xbridge shieldRP18色谱柱(5μm，50mm*2.1mm)或Xtimate C18色谱柱(3μm，2.1*30mm)，或MERCK RP18 2.5-2mm，或Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm*150mm，5μm)等进行。
使用Yantai Huanghai HSGF254硅胶或Anhui Liang Chen Gui Yuan板进行薄层色谱法。用于薄层色谱法(TLC)的硅胶板是0.15mm-0.2mm。通过TLC分离和纯化产物所使用的硅胶板是0.4mm-0.5mm。
纯化色谱柱使用硅胶作为载体(100-200、200-300或300-400目，由YantaiHuanghai co.或Anhui Liang Chen Gui Yuan co.等制造)，或在Teledyne ISCO combi-flash或Biotage快速色谱系统中的快速柱(二氧化硅-CS快速柱，40-60μm，或逆相C18色谱柱20-35μm，由Agela Technologies等制造)或由Agela Technologies制造的快速柱二氧化硅-CS(40-60μm)或C18色谱柱(20-40μm)中进行纯化色谱法。根据化合物的量调整色谱柱的大小。
本申请的已知起始物质可以通过使用或根据本领域中已知的方法合成，或可以购自Alfa Aesar、Langcaster、TCI、Aldrich、Bepharm和Scochem(或PharmaBlock、Bide、Amatek、Stru Chem、Firster Pharmaceutical、Titan(Adamas)等)。
除非另外说明，否则实施例中的反应都是在氩气或氮气气氛下进行。氩气或氮气气氛是指，反应烧瓶被连接至体积约1L的氩气或氮气球。氢化通常是在压力下进行。除非另外说明，否则实施例中的反应温度是环境温度，即20℃-30℃。
实施例中的反应进程通过TLC监测。用于反应的洗脱剂系统包括二氯甲烷-甲醇系统和石油醚-乙酸乙酯系统。溶剂的体积比是根据化合物的不同极性进行调整。
用于化合物纯化的柱色谱法的洗脱系统以及TLC的洗脱剂系统包括二氯甲烷-甲醇系统和石油醚-乙酸乙酯系统。溶剂的体积比根据化合物的不同极性进行调整。可以添加少量碱性或酸性试剂(0.1％-1％)，如甲酸、或乙酸、或TFA、或氨水进行调整。
实施例1
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000361
用于制备化合物1b的程序：
向4-甲氧基-吡啶-2-基胺(5.0g，40.3mmol)的乙醇(150mL)溶液中加入二甲氧基甲基-二甲基-胺(4.8g，40.3mmol)。然后将混合物在回流下搅拌10小时。浓缩混合物，得到粗产物(7.8g)，其未经纯化并直接用于下一步骤。LCMS：在0-60AB_220&254lcm色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.898min，MS(ESI)m/z＝179.9[M+H+]。
用于制备化合物1c的程序：
向1b(7.8g粗品)的甲醇溶液中加入羟胺-o-磺酸(5.42g，47.9mmol)、吡啶(7g，88.5mmol)，将新得到的溶液在回流下搅拌10小时。浓缩溶液，并通过硅胶(CH2Cl2:MeOH，100:1至50:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的产物1c(4.0g，61.5％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝7.6Hz,1H),8.32(s,1H),7.22(d,J＝2.4Hz,1H),6.84(dd,J＝7.6Hz,1H),3.89(s,3H)。
用于制备化合物1d的程序：
将化合物1c(900mg，6.03mmol)和吡啶-盐酸盐(6g，51.9mmol)在烧瓶中的混合物在160℃下搅拌4小时。将混合物冷却至25℃并用氢氧化钠溶液(1M)中和溶液以将pH调节至5-7。过滤所得混合物，得到呈白色固体状的产物。将滤液用EtOAc(200mL×5)萃取，合并有机相，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈白色固体状的产物(700mg，85.9％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.70(dd,J＝7.4Hz,1H),8.24(s,1H),6.89(dd,J＝2.8Hz,1H),6.75-72(m,1H)。
用于制备化合物1e的程序：
向搅拌的1d(1.0g，7.4mmol)和1-氟-2-甲基-4-硝基苯(1.4g，8.9mmol)的DMF(10mL)溶液中加入Cs2CO3(4.8g，14.8mmol)，将混合物加热至100℃保持2小时。减压浓缩反应混合物，将残余物溶于EtOAc(50mL)中。将溶液用水和盐水洗涤。浓缩有机层，并通过硅胶柱色谱(用5％至20％乙酸乙酯/石油醚洗脱)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物1e(1.5g，75.0％产率)。
用于制备化合物1f的程序：
将1e(1.5g，5.6mmol)和10％Pd/C(150mg)的甲醇(15mL)溶液在氢气氛(40psi)下在45℃加热3小时。将热溶液通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，得到呈浅灰色固体状的化合物1f(1.2g，粗品)，将其直接用于下一步骤。
用于制备化合物1g的程序：
Figure BDA0002577094420000371
将化合物1g1(100g，734.5mmol)在浓H2SO4(700mL)中的搅拌溶液在65℃下搅拌3小时。然后将混合物倒入冰中，用20％NaOH水溶液调节pH＝9。将混合物用EtOAc(1000mL×3)萃取，合并有机层并用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，然后真空浓缩，得到呈黄色固体状的化合物1g2(100g，88％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.52(d,J＝12.4Hz,2H),7.10-7.04(m,1H),6.50(d,J＝8.0Hz,2H),6.33-6.28(m,1H),6.16(s,2H)。将化合物1g2(30g，19.5mmol)的CH(OEt)3(300mL)溶液在140℃下搅拌72小时。然后浓缩所得混合物，得到粗残余物，将其从乙酸乙酯/PE＝1:2(v/v)中重结晶，得到呈白色固体状的化合物1g3(28g，产率：87.8％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(s,1H),8.08(s,1H),7.81-7.75(m,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.29-7.24(m,1H)。将化合物1g3(20g，12.2mmol)在SOCl2(400mL)和无水DMF(5mL)中的溶液在回流下搅拌24小时。然后，浓缩混合物，得到呈黄色固体状的化合物1g(24g，产率：99％)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.23(s,1H),8.49(d,J＝8.4,1H),8.15-8.21(m,1H),7.62-7.66(m,1H)。
用于制备化合物1h的程序：
将化合物1g(3g，6.48mmol)和化合物1f(3.95g，16.48mmol)在无水CH3CN(30mL)中的混合物在回流下搅拌2小时。从混合物中沉淀出固体。将混合物冷却至室温(25-30℃)，过滤混合物，得到呈黄色固体状的所需化合物1h(5g，78.1％产率)。LCMS：在0-60AB_4min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝2.144min，MS(ESI)m/z＝387.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.13-9.10(m,2H),8.84(s,1H),8.20-8.15(m,1H),7.78-7.77(m,2H),7.73-7.68(m,2H),7.50(dd,J1＝2.4Hz,J2＝7.6Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),2.32(s,3H)。
用于制备化合物1i的程序：
Figure BDA0002577094420000381
向化合物1i1(130g，0.948mol)在冰盐冷浴中的溶液中加入98％HCOOH(200mL，4.47mol)。将所得混合物温热至25℃并加入40％HCHO(137mL，1.896mol)。在加热到40℃时释放出大量气体。完成后，通过加入浓NaOH将溶液调节至pH＝9～10并用EtOAc(1.5L×3)萃取，用水和盐水(1.6L)洗涤。将有机层用NaSO4干燥并浓缩，得到呈白色固体状的化合物1i(116.8g，粗品)
用于制备化合物1和化合物1'的化合物的程序：
将化合物1h(100mg，0.259mmol)、化合物1i(118mg，0.778mmol)、t-BuOK(146mg，1.3mmol)的DMF(2mL)溶液在100℃下搅拌16小时。通过反相制备型HPLC(柱：Sunfire C830*100mm*5um，梯度：0-20％B(A＝水/0.05％HCl，B＝乙腈)，流速：30mL/min)纯化混合物得到1j，将其通过SFC分离而分离得到对映异构体化合物1'(28.6mg)和化合物1(26.0mg)。
化合物1：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.931min,MS(ESI)m/z＝518.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.74(d,J＝7.6Hz,1H),8.53(s,1H),8.28(s,1H),7.85(m,2H),7.78(t,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),7.18(d,J＝8.8Hz,1H),7.07(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),5.17-5.08(m,1H),3.27(m,1H),2.98-2.95(m,1H),2.68-2.58(m,1H),2.48-2.41(m,2H),2.41(s,3H),2.12(s,3H),2.10-2.03(m,1H)。
实施例2
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((1R,3r,5S)-8-(2,2-二氟乙基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000391
用于制备化合物2的程序：
向化合物1h(100mg，0.26mmol)的THF(3mL)和DMF(3mL)溶液中加入化合物2a(99mg，0.52mmol)、t-BuOK(88mg，0.78mmol)。加完后，将混合物在90℃下搅拌5天。将混合物过滤，浓缩，通过HPLC纯化(柱：ASB 150*25mm*5um，梯度：5-30％B(HCl，B＝乙腈)，流速：30mL/min)，得到化合物2(10mg，6.9％)。
化合物2：LCMS：在10-80AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.865min,MS(ESI)m/z＝558.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.07(d,J＝7.6Hz,1H),9.01(d,J＝6.4Hz,1H),8.79(s,1H),8.09(t,J＝8.4Hz,1H),7.87(s,1H),7.76-7.69(m,1H),7.51-7.40(m,3H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.19(s,1H),6.55(tt,J1＝53.6Hz,J2＝3.2Hz,1H),5.29(s,1H),4.25(s,2H),3.73-3.60(m,2H),2.90-2.86(m,2H),2.70-2.67(m,2H),2.41(s,2H),2.32-2.28(m,5H)。
实施例3
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((3R,4S)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000401
用于制备化合物3b的程序：
向化合物3a(5.0g，26.44mmol)的DMF(50mL)溶液中加入NaCN(1.43g，29.08mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。浓缩混合物，得到残余物。将残余物溶于EtOAc(80mL)中并用水(20mL×2)和饱和盐水(20mL×2)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱(PE/EtOAc＝20:1至5:1(v/v))纯化并浓缩，得到呈黄色固体状的化合物3b(2.5g，产率48.1％)。LCMS：在10-80AB_2.0min_E色谱(Merck RP-18e 25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝0.845min,MS(ESI)m/z＝197.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(br d,J＝8.80Hz,1H),7.24-7.33(m,1H),4.09(s,3H)。
用于制备化合物3c的程序：
在0℃，向化合物3b(2.3g，11.73mmol)的AcOH(25mL)和水(0.3mL)溶液中加入Fe(3.27g，58.63mmol)。将所得混合物在20℃下搅拌16小时。过滤混合物，减压浓缩滤液，得到残余物。将残余物溶于乙酸乙酯(50mL)中并用饱和NaHCO3调节至pH＝8-9。将有机相用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色固体状的化合物3c(2g，粗品)。LCMS：在10-80AB_2min_E色谱(Merck RP-18e25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝0.689min,MS(ESI)m/z＝167.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.06(t,J＝9.00Hz,1H),6.46(dd,J＝9.00,1.76Hz,1H),4.21(br s,2H),3.71-3.91(m,3H)。
用于制备化合物3d的程序：
将化合物3c(1g，6.02mmol)在DMF-DMA(15mL)中的混合物在100℃下搅拌12小时。浓缩混合物，得到呈黄色固体状的粗化合物3d(1.5g，粗品)。LCMS：在0-60AB_2min_E色谱(Merck RP-18e 25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝0.577min,MS(ESI)m/z＝222.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.73(s,1H),7.27(t,J＝9.26Hz,1H),6.82(dd,J＝9.04,1.76Hz,1H),3.72-3.98(m,3H),3.01-3.14(m,6H)。
用于制备化合物3e的程序：
将化合物3d(1.5g，6.78mmol)和化合物1f(2.44g，10.17mmol)在AcOH(20mL)中的混合物在50℃下搅拌12小时。将混合物真空浓缩。将残余物悬浮在EtOAc(15mL)中并用饱和K2CO3(水溶液)将pH调节至8～9，过滤并将滤饼用乙酸乙酯(5mL)洗涤，得到呈棕色固体状的N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-氟-6-甲氧基喹唑啉-4-胺(Y02，2g，4.81mmol，90.0质量％，70.9％产率)。LCMS：在0-60AB_2min_E色谱(Merck RP-18e25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝1.022min,MS(ESI)m/z＝417.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.71-8.77(m,1H),8.44(s,1H),8.27-8.31(m,1H),7.79-7.88(m,1H),7.70-7.77(m,2H),7.66(dd,J＝9.26,1.76Hz,1H),7.19(d,J＝8.60Hz,1H),7.05-7.11(m,1H),6.85(d,J＝2.43Hz,1H),4.05(s,3H),2.25(s,3H)。
用于制备化合物3的程序：
将化合物3e(400mg，537.9μmol，56％纯度)和化合物3f(214.9mg，1.61mmol，3.0当量)和t-BuOK(211.3mg，1.88mmol，3.5当量)在DMF(5mL)中的混合物在130℃下搅拌16小时。将混合物调节至pH＝7-8，过滤，通过中性制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 200*25mm*10um，梯度：28-58％B(A：H2O，B：CH3CN)流速：25mL/min)纯化滤液，然后进行SFC分离，得到呈白色固体状的化合物3的顺式异构体(40mg，14％产率)。
化合物3：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.906min,MS(ESI)m/z＝530.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.74(d,J＝7.2Hz,1H),8.40(s,1H),8.28(s,1H),7.84(s,1H),7.84-7.81(m,1H),7.76(d,J＝9.2Hz,1H),7.61(d,J＝9.2Hz,1H),7.15(d,J＝8.8Hz,1H),7.06(dd,J＝2.4Hz and 7.6Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),5.20-5.07(m,1H),4.98-4.89(m,1H),4.04(s,3H),3.25-3.23(m,1H),2.91(d,J＝8.0Hz,1H),2.28(s,3H),2.24(s,3H),2.49-2.15(m,3H)。
实施例4
(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((4,4-二氟-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000421
向化合物3e(100mg，0.24mmol)的THF(6mL)和DMF(4mL)溶液中加入化合物4a(119mg，0.72mmol)、t-BuOK(94mg，0.84mmol)。加完后，将混合物在80℃下搅拌24小时。将其过滤，浓缩，通过HPLC(柱：Agella Venusil ASB C18 150*21.2mm*5um，梯度：10-40％B(HCl，B＝乙腈)，流速：25mL/min)纯化，得到化合物4(80mg，59.3％产率)。
化合物4：LCMS：在10-80AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝2.079min,MS(ESI)m/z＝562.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.08(d,J＝7.6Hz,1H),9.04(s,1H),8.71(s,1H),8.07(d,J＝9.2Hz,1H),7.91-7.88(m,2H),7.76(d,J＝9.2Hz,1H),7.45(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.8Hz,1H),7.21(d,J＝2.4Hz,1H),4.87(m,1H),4.58-4.55(m,1H),4.17(s,3H),4.09-4.05(m,1H),3.77(m,1H),3.51-3.48(m,1H),3.26(s,3H),2.86-2.69(m,3H),2.47-2.44(m,1H),2.30(s,3H)。
实施例5
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((4,4-二氟-1-甲基哌啶-3-基)氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000431
合成遵循与化合物3类似的实验程序，在SFC分离后得到呈固体状的对映异构体化合物5。
化合物5：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝2.065min,MS(ESI)m/z＝548.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69-12.04(m,1H),10.86-10.49(m,1H),8.98(d,J＝7.2Hz,1H),8.81(s,1H),8.42(s,1H),8.06(d,J＝9.6Hz,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.80(s,1H),7.68(s,1H),7.31(d,J＝6.0Hz,1H),7.06(dd,J1＝2.8Hz,J2＝7.6Hz,1H),6.83(s,1H),5.56-4.88(m,1H),4.27-4.23(m,6H),4.12(brs,1H),3.31(brs,3H),2.91(s,3H),2.58(brs,1H),2.23(s,3H)
实施例6
对映异构体-1：(S)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
和
对映异构体-2：(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000441
用于制备化合物6b的程序：
将化合物6a(2.5g，11.2mmol)和CuCN(2.9g，22.4mmol)在NMP(25mL)中的混合物在160℃下搅拌5小时。冷却至室温后，过滤并浓缩，粗产物6b不经进一步纯化即直接用于下一步骤。
用于制备化合物6c的程序：
在0℃下将NH3气体泵入100mL EtOH中15分钟，并将化合物6b(3g粗品)溶于30mLMeOH中，将混合物在120℃下在密封管中搅拌过夜。浓缩溶液，残余物通过硅胶柱色谱(PE/EtOAc＝1/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物6c(450mg，两步产率24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.38(s,2H),6.17(d,J＝2Hz,1H),6.13(dd,J1＝2.0Hz,J2＝9.2Hz,1H),3.73(s,3H)。
用于制备化合物6d的程序：
将化合物6c(2g粗品)在DMF-DMA(8mL)中的混合物在100℃下搅拌2小时，冷却至室温后，过滤混合物，用乙酸乙酯洗涤沉淀物，得到呈黄色固体状的化合物6d(800mg，粗品)，其直接用于下一步骤。
用于制备化合物6e的程序：
将化合物6d(800mg，3.62mmol)和化合物1f(1.303g，5.43mmol)在AcOH(15mL)中的混合物在40-60℃下搅拌过夜。浓缩并用K2CO3(水溶液)调节pH至8～9，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，得到呈棕色固体状的化合物6e(1.6g，粗品)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(XtimateC18 2.1*30mm)中，Rt＝0.702min,MS(ESI)m/z 417.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.74(d,J＝7.2Hz,1H),8.46(s,1H),8.29(s,1H),7.71(s,1H),7.67(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.09-7.00(m,3H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),3.98(s,3H),2.25(s,3H)。
用于制备化合物6的程序：
在N2保护下，将化合物6e(1.1g，2.64mmol)、化合物1i(991mg，5.28mmol)和t-BuOK(889mg，7.92mmol)在THF/DMF(15/6mL)中的混合物在80～100℃下搅拌过夜。浓缩混合物，残余物通过反相制备型HPLC(柱：SYNERGI 250*50 10um，梯度：40-70％B(A＝水/0.05％NH4HCO3，B＝乙腈)，流速：80mL/min)纯化，得到化合物6f，然后通过SFC分离化合物，得到170mg化合物6和170mg化合物6'。
化合物6(对映异构体-1)：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝2.001min,MS(ESI)m/z＝548.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.89(d,J＝7.6Hz,1H),8.77(s,1H),8.58(s,1H),7.82(d,J＝2.4Hz,1H),7.77(dd,J1＝9.2Hz,J2＝2.8Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(dd,J1＝13.6Hz,J2＝2.0Hz,2H),6.95(d,J＝2.0Hz,1H),6.92(s,1H),5.67-5.59(m,1H),4.28(brs,1H),4.08(s,3H),3.91-3.76(m,2H),3.53-3.47(m,1H),3.07(s,3H),2.88(d,J＝13.2Hz,1H),2.43-2.40(m,1H),2.29(s,3H)。
化合物6'(对映异构体-2)：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)，中Rt＝2.009min,MS(ESI)m/z＝548.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.89(d,J＝7.2Hz,1H),8.76(s,1H),8.57(s,1H),7.82(d,J＝2.4Hz,1H),7.77(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,1H),7.22(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.4Hz,2H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),6.91(d,J＝2.4Hz,1H),5.72-5.63(m,1H),4.26-4.24(m,1H),4.08(s,3H),3.94-3.76(m,2H),3.57-3.51(m,1H),3.07(s,3H),2.87(d,J＝14.4Hz,1H),2.48-2.42(m,1H),2.29(s,3H)。
实施例7
5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(3-甲基-4-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氧基)苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000461
用于制备化合物7b的程序：
在0℃下，向化合物7a(5.0g，29.76mmol)的DMF(50mL)溶液中加入NaH(1.3g，32.74mmol)并搅拌10分钟。加入MeI(6.34g，44.64mmol)并在35℃下搅拌1.5小时。TLC显示化合物1被完全消耗。向溶液中加入水(50mL)并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈红色固体状的化合物7b(6.2g，100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(d,J＝2.8Hz,1H),7.18(dd,J＝9.6Hz,3.2Hz,1H),6.82(d,J＝9.6Hz,1H),3.80(s,3H),3.02(d,J＝5.2Hz,3H)。
用于制备化合物7c的程序：
向化合物7b(6.2g，34.06mmol)在EtOH(147mL)和THF(27mL)中的溶液中加入Pd/C(1.0g)，并将所述溶液在H2气球下在室温下搅拌4小时。完成后，将溶液过滤，浓缩并通过柱色谱(PE:EtOAc＝3:1(v/v))纯化，得到呈固体状的化合物7c(3.5g，69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.60(d,J＝8.4Hz,1H),6.39-6.35(m,2H),3.74(s,3H),2.82(s,3H)。
用于制备化合物7d的程序：
将化合物7c(3.5g，23.03mmol)和乙酸甲脒(4.8g，46.06mmol)的2-甲氧基-乙醇(60mL)溶液在120℃下搅拌20小时。然后浓缩混合物并加入H2O(60mL)，用CH2Cl2(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到呈固体状的化合物7d(3.6g，97％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(s,1H),7.29-7.26(m,2H),6.97(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),3.87(s,3H),3.82(s,3H)。
用于制备化合物7e的程序：
将化合物7d(1.0g，6.17mmol)在38％HBr(30mL)和AcOH(30mL)中的溶液在110℃下搅拌48小时。完成后，浓缩混合物并用Na2CO3中和至pH＝7。用EtOAc(100mL×3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到呈固体状的化合物7e(0.2g，22％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.97(s,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,1H),7.03(d,J＝2.4Hz,1H),6.87(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),3.84(s,3H)。
用于制备化合物7g的程序：
向化合物7e(209.0mg，1.35mmol)和化合物7f(200.0mg，1.35mmol)的DMF(5mL)溶液中加入K2CO3(209.0mg，1.35mmol)并在80℃下搅拌20小时。完成后，将混合物用水(10mL)加入，用EtOAc(50mL×3)萃取，并将合并的有机层用盐水(50mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到呈黄色固体状的化合物7g(0.4g，粗品)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.95(d,J＝2.8Hz,1H),7.93(d,J＝2.8Hz,1H),7.48(d,J＝2.0Hz,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(s,1H),7.07(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.67(d,J＝9.2Hz,1H),3.89(s,2H),2.46(s,3H)。
用于制备化合物7h的程序：
向化合物7g(400.0mg，1.41mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(0.5g)并在H2气球下在室温下搅拌2小时。完成后，将混合物过滤并浓缩，得到呈红色固体状的化合物7h(340mg，69％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),6.89-6.85(m,2H),6.65(d,J＝8.4Hz,1H),6.49(d,J＝2.4Hz,1H),6.42(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),4.88(s,2H),3.79(s,3H),1.99(s,3H)。
用于制备化合物7i的程序：
将化合物7h(340.0mg，1.344mmol)和化合物1g(244.0mg，1.344mmol)的CH3CN(40mL)溶液在80℃下搅拌20小时。完成后，浓缩混合物，得到呈黄色固体状的化合物7i(530.0mg，98.0％产率)。LCMS：在10-80AB_4min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.351min,MS(ESI)m/z＝400.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.49(s,1H),8.10(s,1H),7.85-7.79(m,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.55-7.48(m,2H),7.35(dd,J1＝8.0Hz,J2＝12.8Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.08(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,1H),3.90(s,3H),2.30(s,3H)。
用于制备化合物7的程序：
将化合物7i(430.0mg，1.08mmol)、化合物1i(325.0mg，2.16mmol)和t-BuOK(362.0mg，3.24mmol)在DMF(5mL)和THF(5mL)中的溶液在100℃下搅拌20小时。将混合物过滤并浓缩，通过HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 200*25mm*10um，梯度：10-20％B(A＝水/0.05％TFA，B＝乙腈)纯化粗产物，然后进行SFC分离，得到呈白色固体状的对映异构体化合物7(140mg，产率24％)。
化合物7：LCMS：在10-80AB_4min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.166min,MS(ESI)m/z＝531.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.37(s,1H),8.83(s,1H),8.10(t,J＝8.4Hz,1H),7.95(d,J＝9.2Hz,1H),7.77-7.73(m,2H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(dd,J1＝2.0Hz,J2＝8.8Hz,1H),7.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,1H),5.81-5.73(m,1H),4.32-4.27(m,1H),4.17(s,3H),4.06-3.95(m,1H),3.81(d,J＝12.8Hz,1H),3.69-3.62(m,1H),3.10(s,3H),2.92-2.88(m,1H),2.51-2.47(m,1H),2.32(s,3H)。
实施例8
5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000481
用于制备化合物8c的程序：
将化合物8a(12.68g，1.0当量)、化合物8b(9.0g，1.0当量)和Cs2CO3(53.26g，2.0当量)在DMF(135mL)中的溶液在80℃下搅拌16小时。完成后，将混合物倒入水中，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，用盐水(150mL×3)洗涤，然后经Na2SO4干燥并过滤，浓缩，在硅胶上通过柱色谱(PE:EA＝1:1(v/v))纯化粗产物，得到呈黄色固体状的化合物8c(10g，49％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(d,J＝2.4Hz,1H),8.13(dd,J1＝8.8Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.87(d,J＝6.0Hz,1H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),6.19(dd,J1＝6.0Hz,J2＝2.0Hz,1H),6.04(s,2H),5.89(d,J＝2.4Hz,1H),2.27(s,3H)。
用于制备化合物8d的程序：
将化合物8c(10.0g，1.0当量)在2-氯乙醛(137.9g，43.1当量)中的溶液在80℃下搅拌16小时。将混合物用饱和NaOH水溶液(50mL)淬灭，浓缩并通过二氧化硅柱色谱法(CH2Cl2/CH3OH＝10:1(v/v))纯化，得到呈棕色固体状的化合物8d(9.0g，91.9％产率)。LCMS：在5-95AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.640min,MS(ESI)m/z＝269.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(d,J＝7.6Hz,1H),8.09(dd,J1＝8.4Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.62(s,1H),7.57(s,1H),7.10(s,1H),7.04(d,J＝8.8Hz,1H),6.75(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.4Hz,1H),2.37(s,3H)。
用于制备化合物8e的程序：
向化合物8d(9.0g，1.0当量)和NH4Cl(17.88g，10.0当量)在MeOH/H2O＝3:1(v/v)(100mL)中的溶液中加入Fe(9.33g，5.0当量)，将混合物在60℃下搅拌6小时。将悬浮液通过硅藻土垫过滤，将滤液减压浓缩，得到粗产物8e，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。
用于制备化合物8f的程序：
将化合物6d(203.4mg，0.919mmol)和化合物8e(200mg，0.836mmol)在AcOH(5mL)中的混合物在40-60℃下搅拌3天。真空去除AcOH，用Na2CO3水溶液将残余物碱化至pH 8-9并过滤。将滤液干燥，得到呈红色油状的化合物8f(250mg，粗品)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,)中，Rt＝1.901min,MS(ESI)m/z＝416.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.77(d,J＝7.6Hz,1H),8.68(s,1H),8.09(s,1H),7.88(d,J＝2.0Hz,1H),7.69(s,1H),7.63(d,J＝2.4Hz,1H),7.36-7.28(m,3H),7.08(s,1H),7.04(s,1H),4.06(s,3H),2.29(s,3H)。
用于制备化合物8的程序：
将化合物8f(250mg，0.6mmol)、化合物1i(136.4mg，0.9mmol)和t-BuOK(134.4mg，1.2mmol)在THF(5mL)和DMF(2mL)中的混合物在80-100℃下搅拌过夜。浓缩混合物，通过反相制备型HPLC(柱：Sunfire C8 30*100mm*5um，梯度：0-20％B(A＝水/0.05％HCl，B＝乙腈)，流速：30mL/min)纯化粗产物，然后进行SFC分离，得到呈黄色固体状的对映异构体化合物8(18.2mg，两步产率5.6％)。
化合物8：LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.81min,MS(ESI)m/z＝547.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.79(d,J＝7.2Hz,1H),8.77(s,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.89-7.79(m,3H),7.35-7.31(m,3H),7.02(d,J＝2.4Hz,1H),6.98(s,1H),5.73(brs,1H),4.29-4.26(m,1H),4.08(s,3H),4.01-3.89(m,1H),3.79(d,J＝12.8Hz,1H),3.63-3.57(m,1H),3.09(s,3H),2.87(s,1H),2.49-2.46(m,1H),2.29(s,3H)。
实施例9
5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(3-甲基-4-(吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基氧基)苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000501
用于制备化合物9b的程序：
将2-氟-1-甲基-5-硝基苯(0.301g，1.0当量)、Cs2CO3(1.26g，2.0当量)和化合物9a(0.26g，1.0当量)在DMF(10mL)中的混合物在80℃下搅拌2小时。完成后，将水(50mL)加入混合物中，用EtOAc(50mL×3)萃取混合物。合并有机相，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗化合物9b，将其通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到黄色固体。(0.45g，产率：86％)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(XMK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.866min,MS(ESI)m/z＝269.9[M+H]+。1H NMR:(400MHz,CDCl3)δ8.37(dd,J1＝1.2Hz,J2＝2.4Hz,1H),8.17(dd,J1＝0.8Hz,J2＝2.8Hz,1H),8.02-7.99(m,1H),7.98(d,J＝2.4Hz,1H),7.61(dd,J1＝4.8Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.96(dd,J1＝2.0Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.82(d,J＝9.2Hz,1H),6.61(dd,J1＝0.8Hz,J2＝2.4Hz,1H),2.46(s,3H)。
用于制备化合物9c的程序：
在5分钟内，向化合物9b(0.45g，1.0当量)和Zn粉末(0.874g，8.0当量)的MeOH(20mL)溶液中逐份加入NH4Cl(0.715g，8.0当量)。将混合物在30℃下搅拌5小时。完成后，过滤混合物，浓缩滤液，得到粗产物，将其通过快速色谱纯化，得到泡沫固体(0.36g，90％产率)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(MK RP-18e 25-2mm)中，Rt＝0.656min,MS(ESI)m/z239.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(t,J＝1.2Hz,1H),7.84(d,J＝2.4Hz,1H),7.46(d,J＝9.6Hz,1H),7.02(dd,J1＝2.4Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.80(d,J＝8.8Hz,1H),6.59(d,J＝2.4Hz,1H),6.52(dd,J1＝2.8Hz,J2＝8.8Hz,1H),6.47(d,J＝2.0Hz,1H)。
用于制备化合物9d的程序：
将化合物9c(0.2g，1.0当量)和化合物1g(0.4152g，1.0当量)在MeCN(10mL)中的混合物回流搅拌2小时。完成后，浓缩混合物，得到呈黄色固体状的化合物9d(0.32g，99％产率)。LCMS：在10-80AB_4min色谱(Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝1.874min,MS(ESI)m/z＝385.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),8.44(d,J＝19.6Hz,1H),8.14(t,J＝1.2Hz,1H),7.90(d,J＝2.4Hz,1H),7.79-7.71(m,2H),7.63(d,J＝2.4Hz,1H),7.56-7.51(m,1H),7.27-7.22(m,1H),7.04(dd,J1＝9.6Hz,J2＝2.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.8Hz,2H),6.53(d,J＝1.6Hz,1H),2.36(s,3H)。
用于制备化合物9e的程序：
向化合物9d(270mg，1.0当量)和B(116mg，1.10当量)在THF/DMF(20mL，v/v＝1:1)中的溶液中加入t-BuOK(326mg，4.1当量)。将混合物在100℃下搅拌12小时。完成后，将混合物浓缩，得到粗产物，并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:MeOH＝20:1)进行预纯化，然后通过反相制备型HPLC纯化粗产物，得到70mg呈苍白色固体状的化合物9e(100mg，27.6％产率)。LCMS：在10-80AB_4min色谱(Xtimate C18 2.1*30mm SN:3U411201583)中，Rt＝1.614min,MS(ESI)m/z＝517.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.01(s,1H),8.65(s,1H),8.07(s,1H),8.13(t,J＝1.2Hz,1H),7.89(d,J＝2.4Hz,1H),7.71(d,J＝2.4Hz,1H),7.69-7.60(m,3H),7.51(d,J＝9.2Hz,1H),7.04(dd,J1＝2.4Hz,J2＝9.6Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),6.52(d,J＝2.0Hz,1H),4.74-4.645(m,1H),3.27-3.20(m,1H),2.60-2.50(m,1H),2.43(s,3H),2.40-2.33(m,2H),2.29(s,3H),2.21-2.13(m,1H)。
用于制备化合物9的程序：
通过SFC分离化合物9e(85mg)，得到化合物9(39mg)和化合物9'(41mg)。
化合物9(对映异构体-1)：LCMS：在10-80AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3um SN:3U411201579)中，Rt＝1.583min,MS(ESI)m/z＝517.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.49(s,1H),8.12(t,J＝1.2Hz,1H),7.88(d,J＝2.4Hz,1H),7.78-7.67(m,4H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.14(dd,J1＝2.0Hz,J2＝9.6Hz,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝2.0Hz,1H),5.15-5.05(m,1H),3.29-3.23(m,1H),2.95(d,J＝12.0Hz,1H),2.68-2.58(m,1H),2.49-2.40(m,2H),2.40(s,3H),2.33(s,3H),2.10-2.02(m,1H)。
实施例10
N4-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4,7-二胺
Figure BDA0002577094420000521
用于制备化合物10b的程序：
向化合物10a(20g)在高压釜中的混合物中加入NH3/EtOH(200mL)。将混合物在100℃下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯(200mL)中，并用水(100mL)洗涤。浓缩有机层，得到灰色固体，将其用石油醚(3×100mL)洗涤并干燥，得到化合物10b(19.5g，98％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.72(t,J＝1.2Hz,1H),6.67(dd,J1＝8.8Hz,J2＝1.2Hz.1H),4.63(s,2H)。
用于制备化合物10c的程序：
将化合物10b(10.0g)和DMF-DMA(11.0g，2.0当量)在甲苯中的溶液在120℃下搅拌2小时。将混合物真空浓缩，得到呈灰色固体状的化合物10c(15.2g，粗品)，将其直接用于下一步骤。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.718min,MS(ESI)m/z＝271.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(s,1H),6.93-6.91(m,2H),3.11(d,J＝2.0Hz,6H)。
用于制备化合物10d的程序：
将化合物10c(15.2g)和化合物1f(11.1g，1.0当量)在乙酸(150mL)中的混合物在120℃下搅拌2小时。LCMS检测到强烈的期望Ms峰值(466.9)。冷却混合物，然后倒入水(100mL)中。将混合物过滤，浓缩并通过色谱法(DCM:MeOH＝20:1(v/v))纯化，得到呈棕色固体状的化合物10d(8.0g，38％)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.787min,MS(ESI)m/z＝466.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(d,J＝11.6Hz,1H),8.93(d,J＝7.6Hz,1H),8.59(s,1H),8.38(s,1H),7.85-7.67(m,4H),7.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.8Hz,1H),6.78(d,J＝2.8Hz,1H),2.18(s,3H)。
用于制备化合物10e的程序：
将化合物10d(4.6g)、化合物1i(1.5g，1.0当量)和t-BuOK(2.2g，2.0当量)在THF(50mL)和DMF(20mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。将混合物倒入水(50mL)中，然后过滤。干燥固体，得到呈灰色固体状的化合物10e(4.74g，80％产率)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.737min,MS(ESI)m/z＝597.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),8.92(d,J＝7.6Hz,1H),8.59(s,1H),8.37(s,1H),7.83(d,J＝2.4Hz,1H),7.73(dd,J1＝8.8Hz,J2＝2.4Hz,1H),7.64(s,2H),7.25(d,J＝8.8Hz,1H),7.02(dd,J1＝7.6Hz,J2＝2.4Hz,1H),6.82(d,J＝2.4Hz,1H),5.43-5.35(m,1H),3.27-3.23(m,2H),2.86-2.82(m,1H),2.38-2.32(m,2H),2.29(s,3H),2.19(s,3H),1.97-1.89(m,1H)。
用于制备化合物10f的程序：
将化合物10e(200mg)、Pd(OAc)2(8mg，0.1当量)、dppf(18mg，0.1当量)和Et3N(67mg，2.0当量)在甲醇(10mL)中的混合物在70℃下在一氧化碳气氛(45Psi)下搅拌过夜。然后过滤混合物，浓缩滤液，得到呈棕色油状的化合物10f(223mg，粗品)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.730min,MS(ESI)m/z＝576.1[M+H]+。
用于制备化合物10g的程序：
将化合物10f(223mg)和LiOH-H2O(70mg，5.0当量)在THF/H2O(5mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。浓缩混合物，残余物用1N HCl溶液酸化。收集沉淀物并干燥，得到呈灰色固体状的化合物10g(140mg，粗品)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.643min,MS(ESI)m/z＝562.1[M+H]+。
用于制备化合物10的程序：
将化合物10g(70mg)、DPPA(42mg，1.2当量)和Et3N(25mg，2.0当量)在t-BuOH(3mL)中的溶液在80℃下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，残余物用HCl/二噁烷(4M，1mL)处理。将反应物在室温下搅拌10分钟。浓缩混合物且通过制备型HPLC(柱：Sunfire C8 30*100mm*5um，梯度：15-25％B(A＝水/0.05％HCl，B＝乙腈)，流速：30mL/min)纯化残余物，然后进行SFC分离，得到对映异构体化合物10(7.9mg，10％产率)。LCMS：在10-80AB_4min色谱(WelchXtimate C18,2.1*30mm,3um)中，Rt＝1.427min,MS(ESI)m/z＝533.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.06(d,J＝7.6Hz,1H),9.00(s,1H),8.51(s,1H),7.79-7.74(m,2H),7.42(d,J＝6.8Hz,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,1H),6.97(s,1H),6.49(d,J＝1.2Hz,1H),5.65-5.58(m,1H),4.27(m,2H),4.06-3.94(m,1H),3.80-3.65(m,2H),3.09(s,3H),2.88-2.86(m,2H),2.44-2.41(m,2H),2.27(s,3H)。
实施例11
5-(((3S,4R)-3-氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000541
用于制备化合物11b的程序：
将DMF-DMA(3.93mL，29.38mmol，2.0当量)加入到化合物11a(2g，14.69mmol)的甲苯(20mL)溶液中。将所得悬浮液在120℃下搅拌1.5小时。LCMS分析显示反应完成。浓缩溶液，得到呈黄色固体状的化合物11b(3.0g，粗品，93％纯度)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱中，Rt＝0.135min,MS(ESI)m/z＝191.9[M+H]+。
用于制备化合物11c的程序：
向化合物11b(1.5g，93％纯度，7.30mmol，1.0当量)的乙酸(30mL)溶液中加入化合物8e(2.62g，10.94mmol，1.5当量)，将反应混合物加热至120℃持续2小时。LCMS显示反应完成。真空去除乙酸，将粗产物溶于乙腈(20mL)中并用水(50mL)稀释。将溶液用碳酸钠溶液碱化至pH＝8。过滤沉淀物，滤饼用乙酸乙酯洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到化合物11c(1.5g，粗品)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱中，Rt＝0.609min,MS(ESI)m/z＝386.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.20(3H,s),6.55(1H,d,J＝2.4Hz),6.82(1H,dd,J1＝7.2Hz,J2＝2.4Hz),7.15(1H,d,J＝8.4Hz),7.40-7.48(2H,m),7.61-7.74(3H,m),7.81-7.89(2H,m),8.56(1H,d,J＝7.6Hz),8.58(1H,s),9.20(1H,br.s)
用于制备化合物11顺式异构体的程序：
向化合物11c(300mg，1.0当量)和化合物顺式-11d(207mg，2.0当量)在THF/DMF(20mL，v/v 1:1)中的溶液中加入t-BuOK(306mg，3.5当量)。将混合物在100℃下搅拌72小时。完成后，浓缩反应物并通过硅胶柱色谱用DCM/MeOH(10:1)纯化残余物，得到粗产物，将其通过制备型HPLC进一步纯化，然后进行SFC分离，得到呈白色固体状的对映异构纯的顺式异构体化合物11(35mg，9％产率)。LCMS：在0-60AB_4min色谱(Xtimate C18,2.1*30mm,3umSN:3U411201579)中，Rt＝1.560min,MS(ESI)m/z＝499.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,D2O)δ8.65(s,1H),8.63(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(t,J＝8.4Hz,1H),7.93(d,J＝2.0Hz,1H),7.73(d,J＝2.4Hz,1H),7.70(d,J＝2.4Hz,1H),7.63-7.59(m,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(dd,J＝7.6Hz,2.4Hz,1H),7.05(d,J＝2.8Hz,1H),5.65-5.53(m,1H),5.44-5.30(m,1H),4.11-4.04(m,1H),3.78-3.74(m,1H),3.71-7.57(m,1H),3.45-3.38(m,1H),3.01(s,3H),2.67-2.64(m,1H),2.49-2.37(m,1H),2.24(s,3H)。
实施例12
(S)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
和
(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000561
用于制备化合物12a的程序：
向化合物1i1(0.2g，1.46mmol)的MeOH(8mL)溶液中加入氰基硼氢化钠(0.092g，1.46mmol)和乙醛(0.099mL，1.75mmol)。将所得混合物在12-23℃下搅拌16小时。然后将反应物倒入水(15mL)中，用氯仿/异丙醇(v/v＝3/1，10mL×3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状的粗化合物12a(0.22g)。产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.09(3H,t,J＝7.2Hz),1.75-2.04(4H,m),2.75-2.85(1H,m),2.45-2.05(2H,m),2.53-2.67(2.5H,m),2.75-2.92(2H,m),3.69-3.85(2H,m),4.02-4.05(1H,m)。
用于制备化合物12b的程序：
向化合物1h(300mg，0.776mmol)在DMF(10mL)和THF(4mL)中的溶液中加入叔丁醇钾(305mg，2.72mmol)和化合物12a(154mg，0.931mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。然后将反应物倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到残余物，将其通过制备型HPLC(柱：YMC-ActusTriart C18 150*30 5u，梯度：5-35％B(A＝水/0.05％HCl，B＝乙腈)，流速：25mL/min)纯化并冻干，得到呈黄色固体状的化合物12b(110mg，粗品)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.972min,MS(ESI)m/z＝532.3[M+H]+。
用于制备化合物12/12'：对映异构体-1/-2的程序
在AD(250mm*30mm,5um)柱上通过制备型手性-HPLC分离化合物12b(110mg)，流动相：A：CO2，B：乙醇(0.05％DEA)，条件：碱-ETOH，开始B 40％和结束B 40％，流速(mL/min)＝50。将含有所需化合物的级分蒸发至干，得到对映异构体1和对映异构体2，然后通过制备型HPLC(DuraShell 150*25mm*5um，35％-65％B(A＝水/10mM NH4Ac，B＝MeCN)再次纯化。减压去除大部分MeCN，通过冷冻干燥去除剩余溶剂，得到呈白色固体状的化合物12'(24.6mg，产率：5.96％)，和呈白色固体状的化合物12(27.6mg，产率：6.69％)。
化合物12'(对映异构体-2)：LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.903min,MS(ESI)m/z532.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.14(3H,t,J＝7.2Hz),2.07-2.09(1H,m),2.25(3H,s),2.44-2.65(5H,m),3.04(1H,d,J＝12.4Hz),3.34-3.39(1H,m),5.07-5.16(1H,m),6.81(1H,d,J＝2.4Hz),7.06(1H,dd,J＝7.6,2.4Hz),7.18(1H,d,J＝8.8Hz),7.31(1H,d,J＝8.0Hz),7.45(1H,d,J＝8.0Hz),7.76-7.88(3H,m),8.28(1H,s),8.54(1H,s),8.73(1H,d,J＝8.0Hz)。
化合物12(对映异构体-1)：LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.905min,MS(ESI)m/z532.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.14(3H,t,J＝7.2Hz),2.04-2.07(1H,m),2.25(3H,s),2.40-2.65(5H,m),3.04(1H,d,J＝12.4Hz),3.34-3.39(1H,m),5.07-5.16(1H,m),6.81(1H,d,J＝2.4Hz),7.06(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),7.18(1H,d,J＝8.8Hz),7.31(1H,d,J＝8.0Hz),7.45(1H,d,J＝7.6Hz),7.76-7.88(3H,m),8.28(1H,s),8.54(1H,s),8.73(1H,d,J＝7.6Hz)。
实施例13
N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(奎宁环-4-基氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000581
用于制备化合物13c的程序：
在0℃下在氮气下，在5分钟内将NaH(87mg，60％Wt，2.17mmol)逐份加入到化合物13b(230mg，1.81mmol)和化合物13a(300mg，1.81mmol)的THF(5mL)溶液中。将所得混合物在17-27℃下搅拌3小时。然后将反应混合物倒入饱和NH4Cl(75mL)中，用EtOAc(50mL×2)萃取，将有机层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(PE:EA＝3:1至100％甲醇)纯化。将纯级分蒸发至干，得到呈黄色固体状的化合物13b(320mg，粗品)。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.579min,MS(ESI)m/z＝274.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.95-2.01(6H,m),3.08-3.12(6H,m),7.49(1H,d,J＝8.4Hz),7.67(1H,t,J＝8.4Hz),7.99(1H,d,J＝8.4Hz)。
用于制备化合物13d的程序：
将化合物13c(320mg，1.17mmol)和Pd-C(120mg，10％Wt，0.11mmol)的甲醇(30mL)溶液在氢气球气氛下在17-24℃下搅拌1小时。然后滤出反应混合物，将滤液蒸发至干，得到呈浅黄色油状的化合物13d(280mg，98％产率)，将其静置后固化。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.279min,MS(ESI)m/z＝244.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.90-1.94(6H,m),3.02-3.06(6H,m),4.42(2H,br.s.),6.39(1H,d,J＝8.0Hz),6.43(1H,d,J＝8.4Hz),7.18(1H,t,J＝8.0Hz)。
用于制备化合物13e的程序：
在20℃下，将1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(0.339mL，2.53mmol)加入到化合物13d(280mg，1.15mmol)的甲苯(10mL)溶液中。将所得混合物在110℃下搅拌90分钟。浓缩反应混合物，得到粗产物，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.128min,MS(ESI)m/z＝299.1[M+H]+。
用于制备化合物13的程序：
在20℃下，将化合物8e(164mg，0.68mmol)加入到化合物13e(170mg，0.57mmol)的AcOH(5mL)溶液中。将所得混合物在120℃下搅拌90分钟。然后将反应混合物浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，25-55％B(A＝水/0.05％氨，B＝乙腈)，流速：25mL/min)纯化。通过冷冻干燥将含有所需化合物的级分干燥，得到呈白色固体状的化合物13(95.3mg，33.9％产率)。LCMS：在1.5min色谱中，tR＝0.578min,MS(ESI)m/z＝493.2[M+H]+。LCMS：在4.0min色谱中，tR＝2.740min,MS(ESI)m/z＝493.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.01-2.05(6H,m),2.26(3H,s),3.07-3.11(6H,m),6.72-6.76(2H,m),7.08(1H,d,J＝8.4Hz),7.16(1H,d,J＝7.2Hz),7.49(1H,d,J＝10.4Hz),7.58-7.65(3H,m),7.80(1H,d,J＝2.0Hz),8.05(1H,d,J＝7.2Hz),8.66(1H,s),10.22(1H,s)。
实施例14
(S)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-2-氟-5-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
和
(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-2-氟-5-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000601
用于制备化合物14b的程序：
向苄醇(10g，76mmol)的二噁烷(150mL)溶液中加入NaH(3.3g，1.1当量)，并将溶液在60℃下搅拌2.0小时。然后将化合物14a(8.2g，76mmol)加入到反应混合物中并在回流下搅拌3.0小时。完成后，然后将反应溶液用NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取。浓缩合并的有机层，残余物用PE/EtOAc＝10/1(20ml)重结晶，得到呈白色固体状的产物(14g，产率84.1％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝6.0Hz,1H),7.44-7.37(m,5H),6.92(d,J＝2.0Hz,1H),6.82(dd,J＝5.6Hz,2.4Hz,1H),5.11(s,2H)。
用于制备化合物14c的程序：
向化合物14b(12g，5.01mmol)、Pd2(dba)3(550mg，0.5mmol)和Xphos(525mg，1.1mmol)在THF(120mL)中的混合物中加入LiHMDS(66.0mL，66mmol)。加热至65℃保持60分钟后，将混合物冷却至室温。完成后，用HCl水溶液(2.0mL，1.0mol/L)淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。通过NaHCO3水溶液将液体溶液调节至pH>8，用EtOAc(200mL×2)萃取。浓缩合并的有机层，得到呈白色固体状的化合物14c(10.5g，产率88％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.41-7.33(m,5H),6.34(dd,J＝6.0Hz,2.0Hz,1H),6.05(d,J＝2.4Hz,1H),5.05(s,2H),4.38(s,2H)。
用于制备化合物14d的程序：
向化合物14c(10.5g，52.5mmol)在t-BuOH(50mL)中的混合物中加入Boc2O(12.6g，1.1当量)，然后将溶液在50℃下搅拌2.0小时。完成后，将EtOH(300mL)加入到反应溶液中。将混合物冷却至室温，过滤并浓缩，得到产物(16g，95.2％产率)。LCMS在10-80AB_2.0min色谱(Welch Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝0.946min,MS(ESI)m/z＝300.9[M+H]+。
用于制备化合物14e的程序：
向化合物14d(15g，50mmol)的MeOH(300mL)溶液中加入Pd/C(3.0g)。将溶液在室温下搅拌3.0小时。然后过滤反应溶液，浓缩滤液，得到呈白色固体状的化合物14e(8.5g，80.9％产率)，无需进一步纯化。
用于制备化合物14f的程序：
向化合物14e(5.0g，28.9mmol)和1,5-二氟-2-甲基-4-硝基苯(6.06g，28.9mmol)的DMF(100mL)溶液中加入K2CO3(5.9g，43.4mmol)，将溶液在室温下搅拌过夜。浓缩混合物，并通过硅胶柱(PE/EtOAc＝1/2)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物14f(6.5g，产率61.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝5.6Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),8.00(s,1H),7.86(s,1H),6.79-6.82(d,J＝11.6Hz,1H),6.57(m,1H),2.30(s,3H),1.50(s,9H)。
用于制备化合物14g的程序：
向化合物14f(6.5g，17.9mmol)的DCM(40mL)溶液中加入TFA(15mL)，并将溶液在回流下搅拌3.0小时。TLC显示起始物质被消耗。LCMS显示产物被发现。浓缩混合物，残余物用NaHCO3水溶液洗涤，用DCM萃取。浓缩合并的有机层，得到呈黄色油状的化合物14g(4.5g，95％)，将其直接用于下一步骤。
用于制备化合物14h的程序：
将化合物14g(4.5g，13.8mmol)的DMF-DMA(20.0mL)溶液在回流下搅拌3.0小时。浓缩混合物，得到呈黄色油状的化合物14h(6.2g，粗品)，将其直接用于下一步骤。LCMS：在0-60AB_4min色谱(Welch Xtimate C18 2.1*30mm)中，Rt＝2.579min,MS(ESI)m/z＝319.0[M+H]+。
用于制备化合物14i的程序：
化合物14h(6.3g，13.8mmol)在i-PrOH(50.0mL)中的溶液中加入NH2OH.HCl(1.3g，13.8mmol)，并将溶液在室温下搅拌4.0小时。过滤混合物，得到呈黄色固体状的化合物14i(5.5g，粗品)，将其直接用于下一步骤。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch Xtimate C182.1*30mm)中，Rt＝0.767min,MS(ESI)m/z＝307.0[M+H]+。
用于制备化合物14j的程序：
向化合物14i(5.0g，13.0mmol)的THF(50.0mL)溶液中加入TFAA(4.5g，16.9mmol)，并将溶液在50℃搅拌过夜。将混合物用NaHCO3调节至pH>8，用乙酸乙酯萃取。浓缩合并的有机层，并通过硅胶柱纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物14j(2.1g，粗品)。
用于制备化合物14k的程序：
向化合物14j(3.0g，10.4mmol)在EtOH(100mL)和H2O(50mL)中的溶液中加入Fe(2.9g，52mmol)和NH4Cl(3.2g，63mmol)，并将溶液在回流下搅拌3.0小时。过滤反应溶液，浓缩滤液，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(柱：AD(250X 30mm,5um)：5-25％B(A＝45％MeOHNH3H2O水，B＝乙腈)，流速：50mL/min，UV检测器220nm)纯化，得到呈白色固体状的化合物14k(700mg，产率19.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝7.6Hz,1H),8.21(s,1H),6.85-6.83(m,1H),6.79-6.71(m,3H),3.71(s,2H),2.06(s,3H)。
用于制备化合物14l的程序：
向化合物14k(400mg，1.55mmol)的i-PrOH(5.0mL)溶液中加入三乙氧基甲烷(690mg，4.65mmol)。将溶液在100℃下搅拌1.0小时，然后将2-氨基-6-氟-4-甲氧基苄腈(260mg，1.55mmol)和TFA(0.2mL)加入到反应溶液中，并将溶液在回流下搅拌2.0小时。浓缩反应溶液，并通过PE/EtOAc(v/v＝10/1，3.0mL)洗涤残余物，得到呈黄色固体状的化合物14l(400mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch XtimateC18 2.1*30mm)中，Rt＝0.753min,MS(ESI)m/z＝434.9[M+H]+。
用于制备化合物14m的程序：
向化合物14l(400mg，0.92mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入t-BuONa(260mg，2.76mmol)和化合物1i(280mg，1.84mmol)，并将溶液在120℃下搅拌2.0小时。过滤反应溶液并浓缩滤液。通过制备型HPLC(柱：YMC-Triat，10-30％B(A＝TFA水，B＝乙腈)，流速：30mL/min，UV检测器220nm)纯化残余物，得到呈白色固体状的14m(202mg，产率38.7％)。LCMS：在0-60AB_2.0min色谱(Welch MK RP-18e,25-2mm SN:UM8505/155)中，Rt＝1.004min,MS(ESI)m/z＝566.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ9.15(d,J＝10.0Hz,1H),9.13(s,1H),8.83(s,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.51(dd,J＝7.6Hz,2.8Hz,1H),7.40-7.33(m,3H),7.03(s,1H),5.78(m,1H),4.27(m,1H),4.11(s,3H),4.02-3.91(m,1H),3.83-3.80(m,1H),3.63-3.57(m,1H),3.11(s,3H),2.83(m,1H),2.52(m,1H),2.30(s,3H)。
用于制备化合物14的程序：
通过SFC分离化合物14m(150mg，0.265mmol)，得到产物呈白色固体状的化合物14'(55mg，产率36.7％)，和呈白色固体状的化合物14(54mg，产率36％)。
化合物14'(对映异构体-2)：
LCMS在5-95AB_1.5min色谱(Welch MK RP-18e,25-2mm SN:UM8505/155)中，Rt＝0.672min,MS(ESI)m/z＝566.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.78(d,J＝7.2Hz,1H),8.48(s,1H),8.33(s,1H),8.27(d,J＝8.8Hz,1H),7.15(d,J＝11.2Hz,1H),7.10(dd,J＝7.6Hz,2.0Hz,1H),6.99(s,1H),6.94(s,1H),6.90(s,1H),5.21-5.13(m,1H),3.99(s,3H),3.22-3.17(m,1H),2.96-2.93(m,1H),2.72-2.62(m,1H),2.52-2.46(m,2H),2.41(s,3H),2.24(s,3H),2.17-2.13(m,1H)。
化合物14(对映异构体-1)：
LCMS：在5-95AB_1.5min色谱(Welch MK RP-18e,25-2mm SN:UM8505/155)中，Rt＝0.675min,MS(ESI)m/z＝566.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ8.78(d,J＝7.2Hz,1H),8.47(s,1H),8.33(s,1H),8.27(d,J＝8.8Hz,1H),7.15(d,J＝10.4Hz,1H),7.10(dd,J＝7.6Hz,2.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.94(d,J＝2.8Hz,1H),6.90(d,J＝2.0Hz,1H),5.17-5.09(m,1H),3.99(s,3H),3.20-3.15(m,1H),2.94-2.91(m,1H),2.69-2.59(m,1H),2.49-2.43(m,2H),2.40(s,3H),2.25(s,3H),2.17-2.13(m,1H)。
实施例15
(±)-(5-(((2S,4S)-2-(二氟甲基)哌啶-4-基)氧基)-N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)喹唑啉-4-胺
和
(±)-(5-(((2R,4S)-2-(二氟甲基)哌啶-4-基)氧基)-N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000641
用于制备化合物15b的程序：
向化合物15a(0.271g，1.44mmol)的THF(10mL)溶液中加入NaH(0.241g，6.02mmol，60％在矿物油中)。将所得混合物在20-27℃下搅拌0.5小时。然后将2-氟-6-硝基苄腈(0.2g，1.20mmol)加入上述混合物中。将所得混合物在20～27℃下搅拌20小时。然后将反应混合物倒入水(40ml)中，用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过快速色谱法纯化残余物，得到呈黄色油状的产物15b(0.28g，78.2％产率)。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.389min,MS(ESI)m/z＝298.0[M+H]+。产物是顺式和反式异构体的混合物。
用于制备化合物15c的程序：
向化合物15b(0.28g，0.94mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入Pd-C(0.1g，50％H2O和10％Pd)。将所得混合物在H2气球下在20-25℃下搅拌1小时。完成后，将反应混合物过滤，用MeOH(10mL×3)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈无色油状的粗产物15c(0.2g)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.97-2.13(0.3H,m),2.13-2.24(1H,m),2.25-2.28(1H,m),2.97-2.98(1H,m),3.24-3.30(1H,m),4.34-4.48(2H,m),5.70(td,J1＝56.4Hz,J2＝4.8Hz),6.24(0.6H,t,J＝8.0Hz),6.32(1H,d,J＝8.0Hz),6.79(0.7H,t,J＝8.8Hz),7.18-7.23(0.6H,m),7.47-7.51(0.3H,m)。
用于制备化合物15d的程序：
向化合物15c(0.05g，0.19mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入DMF-DMA(0.075mL，0.56mmol)。将所得混合物在110℃下搅拌2小时。在减压下浓缩反应物，得到呈黄色油状的粗化合物15d(0.06g)，将其不经进一步纯化即直接用于下一步骤。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.123min,MS(ESI)m/z＝323.1[M+H]+。
用于制备化合物15的程序：
向化合物15d(0.054g，0.17mmol)的AcOH(5mL)溶液中加入化合物8e(0.04g，0.17mmol)。将所得混合物在110℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。减压浓缩反应物，得到残余物。通过制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，33％-63％B，A＝水/0.05％氢氧化铵，B＝MeCN)纯化残余物。在减压下去除大部分MeCN，通过冷冻干燥去除剩余溶剂，得到呈白色固体状的异构体-1化合物15(2.5mg，产率：2.9％)，和呈黄色固体状的异构体-2化合物15'(1.4mg，产率：1.6％)。
化合物15(±)异构体-1：LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.654min,MS(ESI)m/z＝517.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.91-1.99(2H,m),2.22-2.25(4H,m),2.35(1H,d,J＝12.4Hz),3.01-3.05(2H,m),3.35(1H,m),5.28(1H,s),5.78(1H,t,d,J＝56.0,4.4Hz),6.62(1H,d,J＝2.4Hz),6.82(1H,d,J＝7.6Hz),7.14(1H,d,J＝8.4Hz),7.20(1H,d,J＝8.0Hz),7.39(1H,d,J＝8.0Hz),7.43(1H,s),7.70-7.79(4H,m),8.41(1H,d,J＝7.6Hz),8.48(1H,s)。
化合物15'：(±)异构体-2LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.691min,MS(ESI)m/z＝517.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ2.19-2.39(5H,m),2.72(1H,d,J＝12.4Hz),2.37(1H,t,d,J＝14.4Hz),3.48(1H,t,J＝13.2Hz),3.74(1H,d,J＝12.0Hz),4.09-4.14(1H,m),5.36(1H,s),6.33(1H,t,J＝53.6Hz),7.04(1H,d,J＝1.6Hz),7.35(2H,d,J＝8.4Hz),7.50(1H,d,J＝8.0Hz),7.71(1H,d,J＝8.4Hz),7.83-7.91(3H,m),8.09-8.12(2H,m),8.80-8.82(2H,m)。
实施例16
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟哌啶-4-基)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000661
用于制备化合物16b的程序：
向化合物16a(10g，72.92mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入Boc2O(15.92g，72.92mmol)，将反应混合物在10℃下搅拌12小时。将混合物真空浓缩，将残余物在乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)之间分配。用EtOAc(50mL×3)萃取水层。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过二氧化硅柱色谱法(20％EtOAc:80％石油醚，120g二氧化硅柱)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物16b(13g，75.1％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.03-3.90(m,1H),3.84-3.62(m,2H),3.61-3.40(m,2H),2.13(br.s.,1H),1.95(br.s.,1H),1.86-1.74(m,1H),1.46(s,9H)。
用于制备化合物16c的程序：
向化合物16b(569.74mg，0.24mmol)的THF/DMF(20mL/8mL)溶液中加入t-BuOK(404.21mg，0.36mmol)。将混合物在20℃下搅拌20分钟。然后加入化合物6e(500mg，0.12mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌5小时，然后真空浓缩。完成后，将残余物在乙酸乙酯(100mL)和水(500mL)之间分配。用EtOAc(50mL×3)萃取水层。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过二氧化硅柱色谱(10％MeOH:90％DCM，40g二氧化硅柱)纯化残余物，得到粗产物，将其通过SFC分离，得到对映异构体-1化合物16c(300mg，16.43％产率)。LCMS：在10-80AB_2.0min A,Xtimate,2.1*30mm,3um3U411201577B:XBrige Shield 2.1*50mm,SN:01193135614705中，Rt＝1.028min,MS(ESI)m/z＝634.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.62(s,1H),8.61(s,1H),8.53-8.46(m,1H),8.22(s,1H),7.79(d,J＝1.8Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.07(d,J＝8.8Hz,1H),6.97-6.84(m,3H),6.51(s,1H),4.74(dt,J＝5.3,10.6Hz,1H),4.21(br.s.,1H),4.00-3.91(m,3H),3.72(q,J＝7.1Hz,1H),3.34(br.s.,1H),3.12(br.s.,1H),2.41(d,J＝12.8Hz,1H),2.27-2.20(m,3H),2.09(d,J＝5.3Hz,1H),1.57-1.32(m,9H)。
用于制备化合物16的程序：
向化合物16c(300mg，0.47mmol)的EtOAc(10mL)溶液中加入HCl/EtOAc(3mL)。将混合物在10℃下搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物，得到呈白色固体状的HCl盐形式的化合物16(217.0mg，85.9％产率)。LCMS：在10-80AB_2.0min_220&254色谱(Xtimate ODS 2.1*30mm,3um)中，Rt＝0.746min,MS(ESI)m/z＝534.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.06(d,J＝7.5Hz,1H),8.99(s,1H),8.77(s,1H),7.89-7.76(m,2H),7.42(dd,J＝2.4,7.7Hz,1H),7.34(d,J＝8.8Hz,1H),7.29(d,J＝1.3Hz,1H),7.16(d,J＝2.6Hz,1H),6.97(d,J＝1.8Hz,1H),5.78-5.63(m,1H),4.16-4.03(m,4H),3.90-3.75(m,1H),3.66(d,J＝12.8Hz,1H),3.56-3.44(m,1H),2.85(d,J＝14.1Hz,1H),2.47-2.32(m,1H),2.29(s,3H)。
实施例17
(S)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-氟喹唑啉-4-胺
和
(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-氟喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000671
用于制备化合物17b的程序：
通过TLC监测(Rf＝0.7，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，将化合物17a(5g，31.8mmol)在乙腈(128mL)和氨水(64mL)中的溶液在室温下搅拌3天。将混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤。将有机层干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶色谱法纯化，用石油醚:乙酸乙酯＝10:1至2:1(v/v)洗脱，得到化合物17b(1.5g，产率：30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.28-6.23(m,2H),4.70(br,2H)。
用于制备化合物17c的程序：
通过TLC(Rf＝0.5，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)监测，将化合物17b(500mg，3.24mmol)和DMF-DMA(580mg，4.86mmol)的甲苯(20mL)溶液在120℃搅拌2小时。真空去除溶剂，得到化合物17c(690mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。
用于制备化合物17d的程序：
将化合物17c(690mg，3.24mmol)和化合物1f(780mg，3.24mmol)的乙酸(15mL)溶液在120℃下搅拌2小时。真空去除溶剂，残余物用NaHCO3溶液稀释，调节pH至7-8。然后过滤混合物，将滤饼真空干燥，得到化合物17d(720mg，55％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(br,1H),8.93(d,J＝7.6Hz,1H),8.56(s,1H),8.37(s,1H),7.70-7.65(m,3H),7.57(d,J＝9.6Hz,1H),7.20(d,J＝9.2Hz,1H),7.02(dd,J1＝2.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),6.78(d,J＝2.8Hz,1H),2.18(s,3H)。
用于制备化合物17的程序：
通过LCMS监测，将化合物17d(720mg，1.78mmol)、化合物1i(335mg，1.78mmol)和叔丁醇钾(700mg，6.23mmol)的DMF-THF(40mL，2:5)溶液在100℃下搅拌过夜。过滤溶液，将滤液干燥并浓缩，得到粗产物17e(900mg)。通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*20mm*5um，梯度：34-54％B(A＝水/0.05％氨，B＝乙腈)，流速：25mL/min)和SFC(柱：OD(250mm*50mm,5um)，条件：在NH3·H2O中的40％EtOH 50mL/min)纯化300mg粗产物，得到化合物17(64.9mg)和化合物17'(12.2mg)。
化合物17(对映异构体-1)：LCMS：在4min色谱中，Rt＝1.487min,MS(ESI)m/z＝536.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.78-8.73(m,2H),8.31(s,1H),7.82-7.77(m,2H),7.52(dd,J1＝2.4Hz,J2＝10.8Hz,1H),7.23-7.10(m,3H),6.80(d,J＝2.4Hz,1H),5.45(br,1H),3.81(br,1H),3.39-3.31(m,2H),3.04-3.01(m,1H),2.77-2.69(m,4H),2.32-2.21(m,4H)。
化合物17'(对映异构体-2)：LCMS在4min色谱中，Rt＝1.421min,MS(ESI)m/z536.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.79-8.76(m,2H),8.33(s,1H),7.82-7.56(m,3H),7.27-7.22(m,2H),7.10(dd,J1＝2.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),75.56-5.49(m,1H),3.94(br,1H),3.54-3.43(m,2H),3.22-3.15(m,1H),2.86-2.74(m,4H),2.34-2.28(m,4H)。
实施例18
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000691
用于制备化合物18的程序：
通过LCMS监测，将化合物17e(70mg，0.2mmol)、四氢呋喃-3-醇(35mg，0.4mmol)和叔丁醇钾(68mg，0.6mmol)在DMF-THF(5mL，2:5)中的溶液在100℃搅拌过夜。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 200*25mm*10um，梯度：37-67％B(A＝水，B＝乙腈)，流速：25mL/min)纯化溶液，然后进行SFC分离，得到化合物18(7.2mg，9.1％产率)。
LCMS：在4min色谱中，Rt＝1.540min,MS(ESI)m/z＝604.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.72(d,J＝7.6Hz,1H),8.44(s,1H),8.27(s,1H),7.79-7.77(m,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),7.04(d,J＝9.6Hz,1H),6.88(d,J＝2.0Hz,1H),6.79(dd,J1＝2.4Hz,J2＝7.2Hz,1H),5.15-5.05(m,2H),4.06-3.90(m,4H),3.27(brs,1H),2.95-2.92(m,1H),2.47-2.35(m,7H),2.22-2.18(m,4H),2.06-2.06(m,1H)。
实施例19
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((2S,4S)-5,5-二氟-1,2-二甲基哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
和
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((2R,4R)-5,5-二氟-1,2-二甲基哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000701
用于制备化合物19b的程序：
向化合物19a(30g)的MeOH(400mL)溶液中加入(E)-丁-2-烯酸乙酯(31.96g，0.28mol)。将所得混合物在75℃下搅拌48小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到呈黄色油状的粗化合物19b(62g，粗品)。粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤。
用于制备化合物19d的程序：
向化合物19b(30g，0.136mol)的MeOH(300mL)溶液中加入化合物19c(16.2g，0.136mol)和(CH2O)n(4.9g，0.163mol)。在N2保护下，将混合物在15-20℃下搅拌18小时。过滤反应混合物并真空浓缩，得到残余物。通过快速硅胶色谱法纯化残余物，PE/EA＝1/0至9/1至4/1。将纯级分蒸发至干，得到呈黄色油状的化合物19d(25.6g，55.7％产率)。
用于制备化合物19f的程序：
在N2下，在12-20℃下，向锌粉(9.89g，151.3mmol)在无水THF(200mL)中的悬浮液中加入TMSCl(16.44g，151.3mmol)。10分钟后，滴加化合物19e(16.89g，83.22mmol)并保持温度在12-20℃。将混合物再搅拌10分钟。然后将化合物19d(25.6g，75.65mmol)的THF(100mL)溶液加入上述混合物中，并在12-20℃下搅拌18小时。完成后，加入5％NaHCO3水溶液(500mL)以淬灭反应。然后过滤混合物，滤液用EtOAc(200mL×2)萃取。将合并的层用盐水(600mL)洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩，得到残余物。残余物通过快速色谱法，用石油醚:乙酸乙酯(0/1～97:3～95:5)纯化，得到呈无色油状的化合物19f(11.0g，42.3％产率)。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.905min,MS(ESI)m/z＝344.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.04(3H,d,J＝6.8Hz),1.30(3H,t,J＝6.8Hz),2.04-2.24(1H,m),2.48-2.54(1H,m),3.11(2H,t,J＝13.2Hz),3.28-3.30(1H,m),3.61(3H,s),3.70(2H,dd,J＝14.0,34.4Hz),4.22-4.27(2H,m),7.24-7.29(5H,m)。
用于制备化合物19g的程序：
在-65℃下，在N2下，向LDA(70.5mL，2M在正庚烷和THF中)的THF(100mL)溶液中加入化合物19f(32.4g，4.08mmol)的THF(100mL)溶液。移去冷却浴，将反应混合物缓慢升温至15-23℃并再搅拌20小时。将反应混合物倒入NH4Cl(500mL)中并用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(600mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的化合物19g(31.0g，粗品)。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.866min,MS(ESI)m/z＝298.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.21-1.28(3H,m),3.06-3.10(1H,m),3.21-3.33(2H,m),3.69-3.84(6H,m),7.28-7.36(5H,m)。
用于制备化合物19h的程序：
将化合物19g(30.0g，100.9mmol)的3M HCl(400mL)溶液加热至回流并搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，然后用固体NaHCO3将pH调节至7-8。用EtOAc(200mL×3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(700mL)洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到化合物19h(17.6g，粗品)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。
用于制备化合物19i的程序：
在0℃下，向化合物19h(17.6g，0.068mol)的EtOH(200mL)溶液中加入NaBH4(3.86g，0.102mol)。将所得混合物在16-25℃下搅拌20小时。完成后，加入HCl溶液(3M，10mL)以淬灭反应。将反应混合物用H2O(200mL)稀释，用EtOAc(200mL×3)萃取。将合并的有机层真空浓缩，得到化合物19i(16.8g，粗品)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.173min,MS(ESI)m/z＝242.0[M+H]+。
用于制备化合物19j的程序：
向化合物19i(2.0g，8.29mmol)和Pd/C(250mg，50％H2O和10％Pd)的MeOH(50mL)溶液中加入(CH2O)n(1.24g，41.45mmol)。将所得混合物在氢气氛下在50psi和50℃下搅拌18小时。过滤反应混合物，用MeOH(20mL×3)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈黄色油状的化合物19j(1.3g，粗品)，将其不经进一步纯化即用于下一步骤。
用于制备化合物19k的程序：
向化合物1h(1.0g，2.59mmol)的DMF(20mL)/THF(8mL)溶液中加入化合物19j(1.28g，7.77mmol)和叔丁醇钾(1.02g，9.07mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex GeminiC18 250*50mm*10um，30-60％B(A＝水/0.05％氢氧化铵，B＝乙腈)，流速：90mL/min)纯化残余物，得到呈浅红色固体状的反式和顺式混合物19k(0.7g，粗品)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.960min,MS(ESI)m/z＝532.3[M+H]+。
用于制备化合物19的程序：
在AD(250mm*30mm,5um)柱上，通过制备型手性HPLC分离化合物19k(0.7g，粗品)，流动相：A：CO2，B：乙醇(0.05％DEA)；条件：碱-EtOH，开始B 40％和结束B40％，流速(ml/min)＝50。将含有所需化合物的级分蒸发至干，得到四种异构体，然后通过制备型HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，35％-65％B(A＝水/0.05％氢氧化铵，B＝MeCN)再次纯化，得到呈白色固体状的反式对映异构体-1化合物19'(16.3mg，2.3％产率)，和呈白色固体状的反式对映异构体-2化合物19(10.7mg，产率：1.5％，反式，峰2)。化合物19'(反式对映异构体-1)：LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.946min,MS(ESI)m/z 532.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.19(3H,d,J＝6.8Hz),2.11-2.16(1H,m),2.26(3H,s),2.31-2.38(4H,m),2.82(1H,s),2.91-2.97(1H,m),3.20-3.22(1H,m),5.22-5.24(1H,m),6.81(1H,d,J＝2.4Hz),7.06(1H,dd,J＝4.8,7.2Hz),7.20(1H,d,J＝8.4Hz),7.29(1H,d,J＝8.0Hz),7.45(1H,d,J＝7.6Hz),7.77-7.82(3H,m),8.29(1H,s),8.52(1H,s),8.74(1H,d,J＝7.6Hz)。化合物19(反式对映异构体-2)：LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.902min,MS(ESI)m/z 532.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.18(3H,d,J＝6.4Hz),2.08-2.13(1H,m),2.23(3H,s),2.29-2.37(4H,m),2.80(1H,s),2.89-2.92(1H,m),3.18-3.20(1H,m),5.17-5.24(1H,m),6.80(1H,d,J＝2.4Hz),7.03(1H,d,J＝7.6Hz),7.16(1H,d,J＝8.8Hz),7.27(1H,d,J＝8.4Hz),7.42(1H,d,J＝8.4Hz),7.74-7.79(3H,m),8.27(1H,s),8.49(1H,s),8.71(1H,d,J＝7.2Hz)。
实施例20
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((1R,3s,5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000731
用于制备化合物20的程序：
在25℃下，向化合物1h(100mg，0.26mmol)的DMF(5mL)溶液中加入叔丁醇钾(58mg，0.52mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌5天。将反应混合物冷却至25℃并过滤。滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 250*21.2mm*5um，65-95％B(A＝水/0.05％氨，B＝甲醇)，流速：25mL/min)纯化，得到呈白色固体状的化合物20(9.1mg，产率：6.93％)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝2.842min,MS(ESI)m/z＝508.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.74(2H,d,J＝7.6Hz),2.03-2.08(2H,m),2.18-2.33(7H,m),2.39(3H,s),3.33-3.43(2H,m),4.80-4.89(1H,m),6.88-6.95(3H,m),7.09(1H,d,J＝8.4Hz),7.46(1H,d,J＝8.0Hz),7.61-7.65(2H,m),7.77(1H,s),8.23(1H,s),8.49(1H,d,J＝7.6Hz),8.65(1H,s),10.13(1H,br.s.)
实施例21
5-((5,5-二氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基)氧基)-N-(4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000732
用于制备化合物21的程序：
合成遵循与化合物11类似的实验程序，在SFC分离后得到呈固体状的化合物21。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.459min。MS(ESI)m/z＝531.3[M+H]+。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.64(d,J＝7.6Hz,1H),8.53(s,1H),7.95(s,1H),7.86-7.85(m,2H),7.83(t,J＝8.4Hz,1H),7.78-7.75(m,1H),7.71-7.69(m,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.25-7.19(m,2H),7.17-7.15(m,1H),6.83(s,1H),5.37-5.27(m,1H),3.36-3.31(m,2H),3.23-3.20(m,2H),2.75(s,3H),2.72-2.59(m,2H),2.49-2.40(m,2H),2.26(s,3H)。
实施例22
5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(4-((6-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基)氧基)-3-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000741
合成遵循与化合物6类似的实验程序，得到呈固体状的化合物22。通过制备型SFC在CHIRALPAK AD-H SFC5*25cm,5um Chiral-P(AD-H)006S90ADHSCY-QH001柱上，用50％CO2/IPA作为洗脱液等度洗脱纯化粗产物22a。将含有所需化合物的级分蒸发至干，得到呈灰白色固体状的化合物22(对映异构体-1)：(350mg，33.3％产率)。LCMS:MS(ESI)m/z＝566.2[M+H]+；HPLC Rt＝1.911min。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.22(d,1H),2.27(s,5H),2.32-2.65(m,6H),2.97(d,1H),3.18-3.34(m,1H),3.95(s,3H),4.63(td,1H),6.52(d,1H),6.86(d,1H),6.94(d,1H),7.10(d,1H),7.78(dd,1H),7.85(d,1H),8.23(s,1H),8.55-8.67(m,2H),9.80(s,1H)。19F NMR(282MHz,CDCl3)δ-154.2,-116.6,-109.7。
实施例23
5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基)氧基)-N-(4-((6-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基)氧基)-3-甲基苯基)-6-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000742
合成遵循与化合物3类似的实验程序，得到呈固体状的化合物23a。通过制备型SFC在CHIRALPAK IF2*25cm,5um86445S90IF0SCJ-RA002柱上，用50％CO2/EtOH(用NH32mM改性)作为洗脱液等度洗脱纯化粗产物23a。将含有所需化合物的级分蒸发至干，得到呈灰白色固体状的化合物23(对映异构体-1)：(25.00mg，25.0％产率)。化合物23(对映异构体-1)：LCMS：MS(ESI)m/z＝566.2[M+H]+；HPLC:Rt＝1.193min。1H NMR(CRO-HER2_P-1-202-011-01,300MHz,甲醇-d4)δ2.04-2.16(m,1H),2.32(d,8H),2.48(dd,1H),2.94(d,1H),3.19(s,1H),4.07(s,3H),4.89-5.06(m,1H),6.86(d,1H),7.23(d,1H),7.63(d,1H),7.79(d,1H),7.85(d,2H),8.30(s,1H),8.44(s,1H),9.07(d,1H)。19F NMR(282MHz,甲醇-d4)δ-156.2,-118.2,-111.7。
实施例24
N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-(甲基-d3)哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000751
用于制备化合物24a的程序：
向化合物1h(0.5g，1.29mmol)在DMF(20mL)和THF(8mL)的溶液中加入化合物27a(0.307g，1.29mmol)和t-BuOK(0.508g，4.53mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。加入水(20mL)并用EtOAc(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱法纯化，EtOAc/MeOH＝1/0至9/1。将纯级分蒸发至干，得到呈黄色油状的化合物24a(760mg，92.2％产率)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝2.794min,MS(ESI)m/z604.1[M+H]+。SFC分析方法：柱：Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D.,3um；流动相：A：CO2B：乙醇(0.05％DEA)；梯度：在4.5分钟内从5％到40％B，在2.5分钟内保持40％，然后在5％B保持1分钟；流速：2.8mL/min，柱温：40℃
用于制备化合物24b的程序：
在OD(250mm*30mm,5um)柱上通过制备型手性HPLC分离化合物24a，流动相：A＝CO2，B＝乙醇(0.05％DEA)；条件：碱-乙醇，流速：50ml/min。将含有所需化合物的级分蒸发至干，得到化合物24b'(0.340g，44.7％产率)(异构体-1)和化合物24b(0.310g，40.8％产率)(异构体-2)，两者都呈浅黄色固体状。化合物24b'：对映异构体-1LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.760min,MS(ESI)m/z 626.1[M+Na]+。化合物24b：对映异构体-2LCMS：在1.5min色谱中，Rt＝0.762min,MS(ESI)m/z 626.1[M+Na]+。
用于制备化合物24c的程序：
向化合物24b(0.15g，0.25mmol，对映异构体-2)的DCM(4mL)中的溶液中加入TFA(1mL，12.98mmol)。将所得混合物在16-18℃下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，得到残余物。将残余物用MeOH(3mL)稀释，用氨水调节pH至8-9，然后通过制备型HPLC[WatersXbridge Prep OBD C18 150*30 5u，30％-60％B(A＝水/0.05％氢氧化铵，B＝MeCN)]纯化，得到呈白色固体状的化合物24c(0.069g，55.1％产率)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝1.946min,MS(ESI)m/z＝504.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.77-1.81(1H,m),2.20(3H,s),2.36(1H,d,J＝10.8Hz),2.65(1H,s),2.74(1H,t,J＝12.4Hz),2.88-2.99(2H,m),3.29-3.32(1H,m),5.30-5.39(1H,m),6.81(1H,d,J＝7.6Hz),7.02(1H,d,J＝7.6Hz),7.24(1H,d,J＝8.8Hz),7.40(2H,dd,J＝8.0,17.6Hz),7.76-7.78(2H,m),7.87(1H,s),8.38(1H,s),8.59(1H,s),8.92(1H,d,J＝7.6Hz),10.15(1H,s)。
用于制备化合物24的程序：
向化合物24c(300mg，0.596mmol)的DMF(5mL)溶液中加入CDI3(69mg，0.894mmol)和K2CO3(124mg，0.894mmol)。将所得混合物在27-31℃下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物倒入水(20mL)中，用EA(20mL×3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过HPLC(Waters Xbridge Prep OBD C18 150*30 5u，42-42％B，A＝水(0.05％氢氧化铵)，B＝MeCN，流速(ml/min)＝25mL/min)纯化残余物。减压去除大部分MeCN；通过冷冻干燥去除剩余的溶剂，得到呈白色固体状的化合物24(25.1mg，8.1％产率)。LCMS：在4.0min色谱中，Rt＝2.026min,MS(ESI)m/z＝521.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ2.06-2.10(1H,m),2.25(3H,s),2.42-2.48(2H,m),2.64(1H,dd,J＝11.6,28.8Hz),2.96(1H,d,J＝12.0Hz),3.24-3.27(1H,m),5.08-5.16(1H,m),6.81(1H,d,J＝2.8Hz),7.06(1H,dd,J＝2.4,7.6Hz),7.18(1H,d,J＝8.4Hz),7.31(1H,d,J＝8.4Hz),7.45(1H,d,J＝8.4Hz),7.76-7.86(3H,m),8.28(1H,s),8.53(1H,d,J＝7.6Hz),8.73(1H,d,J＝7.6Hz)。
实施例25
(±)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-(((2R,4S)-1-(甲基-d3)-2-(三氟甲基)哌啶-4-基)氧基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000771
用于制备化合物25b的程序：
向化合物25a(15.0g，1.0当量)的甲醇(200mL)溶液中加入盐酸(12M，3mL)和PtO2(1.2g)。将混合物在50℃和氢气氛(50psi)下搅拌3天。将固体用甲醇(200mL)溶解，并将盐酸(12M，3mL)和PtO2(1.2g)加入到混合物中，在50℃氢气氛(50psi)下搅拌20小时。将混合物过滤并浓缩，得到呈无色固体状的化合物25b的盐酸盐(18.2g，96％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ1.60-1.86(2H,m),1.91-2.07(1H,m),2.17-2.27(1H,m),2.32-2.45(0.5H,m),3.10-3.30(1H,m),3.46-3.64(1H,m),3.90-4.00(0.5H,m),4.15-4.40(1H,m)。
用于制备化合物25c的程序：
将化合物25b HCl盐溶于甲醇中，用氨水碱化并浓缩，将残余物用二氯甲烷稀释，过滤并浓缩滤液，得到化合物25b(3.8g，游离碱)，将其用于下一步骤。在搅拌下，向化合物25b(300mg，1.2当量)的THF(10mL)溶液中加入NaH(180mg，3.0当量，60％)。0.5小时后，将2-氟-6-硝基苄腈(250mg，1.0当量)加入到反应混合物中并在21-29℃下搅拌2天。LCMS分析显示反应接近完成。将混合物倒入饱和NH4Cl溶液(50mL)中并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至50％EA/PE)纯化残余物，得到化合物25c(230mg，48％产率)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱中，Rt＝0.641min,MS(ESI)m/z＝315.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.79-1.86(2H,m),2.18-2.29(1H,m),2.35-2.44(1H,m),2.78-2.83(1H,m),3.25-3.37(1H,m),3.38-3.45(1H,m),4.48-4.57(1H,m),7.37(1H,d,J＝8.0Hz),7.73(1H,t,J＝8.4Hz),7.90(1H,d,J＝8.4Hz)。
用于制备化合物25d的程序：
向化合物25c(180mg，1.0当量)和碳酸钾(118mg，1.5当量)在DMF(10mL)中的混合物中加入CD3I(66mg，0.8当量)。将混合物在23-26℃下搅拌6小时。将反应物倒入盐水(50mL)中并用EA(20mL×3)萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至30％EA/PE)纯化残余物，得到呈棕色油状的化合物25d(140mg，粗品)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱中，Rt＝0.684min,MS(ESI)m/z＝333.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.94-2.05(2H,m),2.10-2.18(1H,m),2.35-2.51(2H,m),2.74-2.85(1H,m),3.05-3.15(1H,m),4.40-4.53(1H,m),7.35(1H,d,J＝8.4Hz),7.72(1H,t,J＝8.4Hz),7.89(1H,d,J＝8.4Hz)。
用于制备化合物25e的程序：
在氩气下，向化合物25d(140mg，1.0当量)的甲醇(10mL)溶液中加入Pd/C(50mg，10％)。将悬浮液在氢气(气球)下在24-30℃下搅拌17小时。LCMS分析显示反应完成。将混合物过滤并浓缩，得到呈黄色油状的化合物25e(60mg，68％产率)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱中，Rt＝0.620min,MS(ESI)m/z＝303.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.83-1.93(2H,m),2.08-2.14(1H,m),2.31-2.49(2H,m),2.71-2.79(1H,m),3.03-3.09(1H,m),4.25-4.35(1H,m),4.44(2H,br.s),6.25(1H,d,J＝8.4Hz),6.34(1H,d,J＝7.6Hz),7.22(1H,t,J＝8.4Hz)。
用于制备化合物25f的程序：
向化合物25e(60mg，1.0当量)在无水甲苯(10mL)中的混合物中加入DMF-DMA(54μL，2.0当量)。将混合物在120℃下搅拌1小时。LCMS分析显示反应完成。浓缩溶液，得到化合物25f(0.2mmol，粗品)。LCMS：在5-95AB_220&254色谱中，Rt＝0.222min,MS(ESI)m/z＝358.1[M+H]+。
用于制备化合物25的程序：
向化合物25f(0.20mmol，1.0当量)在AcOH(10mL)中的混合物中加入化合物1f(57mg，1.2当量)。将混合物在120℃下搅拌1.5小时。LCMS分析显示反应完成。浓缩溶液。通过制备型HPLC(柱：DuraShell 150*25mm*5um，梯度：50％-80％B(A＝水/0.05％氢氧化铵，B＝乙腈)，流速：25mL/min)纯化残余物，得到呈白色固体状的化合物25(13.1mg，12％产率)。LCMS：在0-60AB_4min_220&254色谱中，Rt＝2.307min,MS(ESI)m/z＝553.3[M+H]+。HPLC：在0-60_AB_1.2ml中，Rt＝4.31min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.90-1.96(1H,m),2.01-2.08(1H,m),2.25(3H,s),2.35-2.43(1H,m),2.49-2.55(1H,m),2.62-2.69(1H,m),2.79-2.89(1H,m),3.12-3.19(1H,m),4.59-4.69(1H,m),6.87-6.91(2H,m),6.95(1H,d,J＝8.0Hz),7.11(1H,d,J＝8.4Hz),7.51(1H,d,J＝7.6Hz),7.62-7.74(3H,m),8.23(1H,s),8.50(1H,dd,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz),8.68(1H,s),10.03(1H,s)。
实施例26
(±)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-(甲基-d3)哌啶-4-基)氧基)-6-(甲氧基-d3)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000791
用于制备化合物26a的程序：
将化合物3e(200mg，0.48mmol)和吡啶盐酸盐(277.52mg，2.40mmol)的混合物在170℃下搅拌2小时。将混合物冷却至室温。用饱和NaHCO3将pH调节至8-9。强烈搅拌混合物，过滤，用乙酸乙酯(5mL)洗涤沉淀物，得到呈棕色固体状的化合物26a(120mg，62.1％产率)。LCMS：在0-60AB_2min_E色谱(Merck RP-18e 25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝0.956min,MS(ESI)m/z＝403.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.73(br d,J＝7.50Hz,1H),8.09-8.39(m,2H),7.69-7.87(m,2H),7.30-7.49(m,2H),7.03-7.25(m,2H),6.87(s,1H),2.24(s,3H)。
用于制备化合物26b的程序：
向化合物26a(120mg，0.30mmol)和K2CO3(49.46mg，0.36mmol)的DMF(8mL)溶液中加入CD3I(51.88mg，0.36mmol)。将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物过滤并浓缩，得到产物，将其通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1，Rf＝0.6)纯化，得到呈黄色固体状的化合物26b(60mg，48％产率)。LCMS：在0-60AB_2min_E色谱(Merck RP-18e 25-2mm,SN:UM9504/198)中，Rt＝1.016min,MS(ESI)m/z＝420.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.73(dd,J＝7.50,0.66Hz,1H),8.44(s,1H),8.28(s,1H),7.78-7.87(m,1H),7.70-7.76(m,2H),7.66(dd,J＝9.15,1.87Hz,1H),7.19(d,J＝8.38Hz,1H),7.07(dd,J＝7.50,2.43Hz,1H),6.84(d,J＝2.20Hz,1H),2.25(s,3H)。
用于制备化合物26的程序：
向化合物26c(60.6mg，0.39mmol)的THF(5mL)和DMF(2mL)溶液中加入tBuOK(44.1mg，0.39mmol)。将混合物在20℃下搅拌30分钟，然后加入化合物26b(60mg，0.13mmol)。将混合物在90℃下搅拌12小时。将反应混合物过滤并真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1，Rf＝0.5)纯化，得到呈黄色固体状的化合物26(16.37mg，22.57％产率)。LCMS：在0-60AB_2.0min色谱(Welch Xtimate C182.1*30mm 3um)中，Rt＝1.034min,MS(ESI)m/z＝554.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.73(d,J＝7.72Hz,1H),8.41(s,1H),8.28(s,1H),7.73-7.84(m,3H),7.62(d,J＝9.26Hz,1H),7.17(d,J＝8.38Hz,1H),7.06(dd,J＝7.50,2.65Hz,1H),6.83(d,J＝2.65Hz,1H),4.90-5.01(m,1H),3.12-3.23(m,1H),2.86-2.97(m,1H),2.38-2.53(m,1H),2.23-2.28(m,5H),2.03-2.14(m,1H)。
实施例27
(±)N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-甲基哌啶-4-基-4-d)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000811
用于制备化合物27b的程序：
向化合物27a(1.0g，4.22mmol)的无水CH2Cl2(50mL)溶液中缓慢加入Dess-Martin试剂(3.58g，8.44mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时，然后通过饱和Na2SO3/NaHCO3(v/v＝3/1，100mL)淬灭，用CH2Cl2(50mL×2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到呈白色固体状的化合物27b(700mg，65.5％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.94(br t,J＝12.0Hz,1H),3.79(br t,J＝6.1Hz,2H),3.61-3.52(m,1H),3.11(br s,1H),2.76(br t,J＝6.0Hz,1H),1.93(br s,1H),1.49(d,J＝14.5Hz,9H)。
用于制备化合物27c的程序：
在0℃，在N2下，向化合物27b(700mg，2.76mmol)的无水CD3OD(5mL)溶液中缓慢加入NaBD4(231.07mg，5.52mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时，然后用D2O(10mL)淬灭，用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到呈白色固体状的化合物27c(500mg，76.1％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.88-3.62(m,2H),3.60-3.40(m,2H),2.24(br s,1H),2.00-1.88(m,1H),1.86-1.73(m,1H),1.53-1.44(m,9H)。
用于制备化合物27d的程序：
在N2下，在20℃下，向化合物27c(300mg，1.26mmol)的无水THF/DMF(10mL/4mL)溶液中加入t-BuOK(212.06mg，1.89mmol)，并在此温度下搅拌30分钟。加入化合物6e(262.55mg，0.63mmol)，然后在90℃下加热12小时。将反应混合物用30mL水稀释，用EtOAc(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝100/1至20/1，Rf＝0.4)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物27d(320mg，80％产率)。LCMS：在0-60AB_2.0min_220&254色谱(Xtimate 3um,C18,2.1*30mm S/N3U)中，Rt＝1.254min,MS(ESI)m/z634.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.63(s,1H),8.62(s,1H),8.49(d,J＝8.4Hz,1H),8.23(s,1H),7.80(s,1H),7.68(br d,J＝8.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.6Hz,1H),6.93(d,J＝1.4Hz,1H),6.91-6.83(m,2H),6.52(d,J＝1.8Hz,1H),4.45(br s,1H),4.25-4.10(m,1H),3.95(s,3H),3.35(br s,1H),3.13(br s,1H),2.41(br d,J＝10.2Hz,1H),2.25(s,3H),2.14-2.00(m,1H),1.50(s,9H)。
用于制备化合物27e的程序：
将化合物27d(320mg，0.5mmol)溶于TFA的CH2Cl2溶液(20％，10mL)中，并在20℃下搅拌3小时。用NaHCO3(饱和)将反应混合物的pH调节至7-8，用CH2Cl2(30mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩，得到呈黄色固体状的化合物27e(280mg，粗品)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.75(s,1H),8.51(s,1H),8.43(d,J＝7.4Hz,1H),8.13(s,1H),7.74(s,1H),7.66(br d,J＝8.6Hz,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,1H),6.88-6.76(m,3H),6.52(d,J＝2.2Hz,1H),6.55-6.50(m,1H),3.86(s,3H),3.42-3.31(m,1H),3.13(br d,J＝13.5Hz,1H),3.02-2.88(m,1H),2.77(br t,J＝12.8Hz,1H),2.43-2.35(m,1H),2.17(s,3H),1.93-1.90(m,2H)。
用于制备化合物27的程序：
向化合物27e(140mg，0.26mmol)的无水CH2Cl2/MeOH(4mL/4mL)溶液中加入(HCHO)n(23.4mg，0.26mmol)，然后加入5滴HCOOH(1滴纯HCOOH用1mL CH2Cl2稀释)。将混合物在20℃下搅拌12小时，然后加入NaCNBH3(163.4mg，2.6mmol)。将所得混合物在20℃下搅拌30分钟并用10mL饱和的NH4Cl淬灭，用CH2Cl2(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶柱色谱法(CH2Cl2/MeOH＝100/1至15/1，Rf＝0.3)纯化残余物，得到呈黄色固体状的化合物27(40.32mg，28.3％产率)。LCMS：在5-95AB_1.5min_220&254色谱(Merck RP-18e 25-2mm,SN:UM9504)中，Rt＝0.690min,MS(ESI)m/z549.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.72(d,J＝7.5Hz,1H),8.44(s,1H),8.27(s,1H),7.87-7.70(m,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),7.08-6.97(m,1H),6.92-6.76(m,3H),3.95(s,3H),3.31(br s,2H),3.29-3.19(m,1H),2.94(br d,J＝11.9Hz,1H),2.70-2.54(m,1H),2.52-2.35(m,5H),2.22(s,3H),2.12-1.97(m,1H)。
实施例28
(S)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-(甲基-d3)哌啶-4-基-4-d)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
和
(R)-N-(4-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-7-基氧基)-3-甲基苯基)-5-((3,3-二氟-1-(甲基-d3)哌啶-4-基-4-d)氧基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺
Figure BDA0002577094420000831
用于制备化合物28a的程序：
在N2下，在20℃下向化合物27e(140mg，0.262mmol)和K2CO3(145mg，0.275mmol)的无水DMF(5mL)溶液中逐滴加入CD3I(37.97mg，0.262mmol)并在此温度下搅拌2小时。将反应混合物用20mL水稀释，用EtOAc(30mL×3)萃取，用盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩，并通过制备型HPLC(仪器：AA/Boston Green ODS 150*30 5u，条件水(0.05％HCl)-ACN开始B 5结束B 30，梯度时间(分钟)12，100％B保持时间(分钟)2.2，流速(ml/min)25))纯化残余物，得到呈黄色固体状的HCl盐形式的化合物28a(48.3mg，27.9％产率)。LCMS：在0-60AB_2.0min_220&254色谱(Xtimate 3um,C18,2.1*30mm S/N3U411201576)中，Rt＝1.204min,MS(ESI)m/z552.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.96(br d,J＝7.1Hz,1H),8.81-8.59(m,2H),7.98-.71(m,2H),7.45-7.24(m,3H),6.99(br d,J＝17.4Hz,2H),4.28(br s,1H),4.08(s,3H),4.01-3.85(m,1H),3.79(br d,J＝11.9Hz,1H),3.66-3.52(m,1H),2.87(br d,J＝14.8Hz,1H),2.46(br t,J＝12.3Hz,1H),2.29(s,3H)。
用于制备化合物28的程序：
通过手性SFC(SFC方法：仪器：SFC-MS方法：柱：Chiralcel AD(250mm*30mm,10um)条件：0.1％NH3H2O IPA开始B：45％，结束B：45％，流速：80mL/min)纯化化合物28a(45mg，0.068mmol)并冻干，得到呈黄色固体状的化合物28(18.9mg，50.4％产率)和化合物28'(18.1mg，48.3％产率)。
化合物28(对映异构体-1)：SFC:Rt＝5.868min(220nm)OD-H_EtOH(DEA)_5_40_2.5M(柱：柱：ChiralCel OD-H 150×4.6mm I.D.,5um流动相：A：CO2 B：乙醇(0.05％DEA)梯度：在5.5分钟内从5％到40％B，并保持40％3分钟，然后5％B持续1.5分钟流速：2.5mL/min柱温：40℃)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.87(s,1H),8.92(d,J＝7.7Hz,1H),8.51(s,1H),8.37(s,1H),7.82(s,1H),7.73(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,1H),7.04-6.99(m,2H),6.88(d,J＝2.0Hz,1H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),3.92(s,3H),3.26-3.16(m,1H),2.82(br d,J＝11.5Hz,1H),2.56(br s,1H),2.40-2.29(m,2H),2.18(s,3H),1.96-1.85(m,1H)。
化合物28'(对映异构体-2)：SFC:Rt＝6.789min(220nm)OD H_EtOH(DEA)_5_40_2.5M(柱：ChiralCel OD-H 150×4.6mm I.D.,5um移动相：A：CO2 B：乙醇(0.05％DEA)梯度：在5.5分钟内从5％到40％B，保持40％3分钟，然后5％B持续1.5分钟流速：2.5mL/min柱温：40℃)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.87(s,1H),8.92(d,J＝7.5Hz,1H),8.51(s,1H),8.37(s,1H),7.82(br s,1H),7.74(br d,J＝8.8Hz,1H),7.23(br d,J＝8.8Hz,1H),7.02(br s,2H),6.89(s,1H),6.81(d,J＝2.0Hz,1H),3.92(s,3H),3.24(br d,J＝10.8Hz,1H),2.82(brd,J＝11.0Hz,1H),2.56(br s,1H),2.41-2.29(m,2H),2.18(s,3H),1.96-1.79(m,1H)。
生物学实施例：
实施例29：针对WT EGFR的效力评估
化合物对EGFR WT的抑制活性可以用NCI-H838(
Figure BDA0002577094420000841
CRL-5844TM)评估，其表达野生型EGFR蛋白作为计数筛选以确定化合物的选择性。
如下测定化合物对靶调节的抑制：将NCI-H838细胞在含有1％FBS的DMEM培养基中在96孔板(20000个细胞/孔)中分选过夜，然后用一系列浓度的测试化合物处理(3μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.003μM、0.001μM、0.0001μM)。将平板在37℃，5％CO2下培育4小时，然后刺激重组hEGF(100ng/ml，10min，RD，目录号236-EG)，然后用MSD试剂盒(
Figure BDA0002577094420000842
96 4-Spot HB Prototype EGFR Triplex ANALYTES：pEGFR(Tyr1068)，pEGFR(Tyr1173)，总EGFR(目录号N45ZB-1))测量每个孔中细胞的EGFR(Y1068)磷酸化水平。所述分析是用MSD
Figure BDA0002577094420000851
成像仪测定细胞的磷酸化EGFR和总EGFR的电化学发光法(MESO SCALE DISCOVERY)，然后可以用机器产生p-EGFR/总EGFR的比率。抑制百分比使用以下公式：％抑制＝100×[1-(样品孔的比率-最小对照孔的比率)/(最大对照孔的比率-最小对照孔的比率)]。IC50值是使用Prism GraphPad 7.0或Microsoft Xlfit软件，以最佳拟合曲线中50％抑制所需的化合物浓度来进一步计算。
实施例30：针对WT HER2的效力评估
可以用BT474细胞系(
Figure BDA0002577094420000852
HTB-20TM)评估化合物对HER2野生型扩增的选择性抑制活性。所述细胞系表达磷酸化的HER2蛋白，其增殖依赖于扩增的基因，可用于体外PD和抗增殖分析。
如下测定化合物对靶调节的抑制：将BT474细胞在含有10％FBS的DMEM培养基中在96孔板(20000个细胞/孔)中分选过夜，然后用一系列浓度的测试化合物处理(3μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.003μM、0.001μM、0.0001μM)。将平板在37℃，5％CO2下培育4小时，然后用MSD试剂盒(Phospho-ErbB2(Tyr1248)Assay Whole Cell Lysate Kit：目录号K151CLD-3)测量每个孔中细胞的HER2(Y1248)磷酸化水平。所述分析是用MSD
Figure BDA0002577094420000853
成像仪测定细胞的磷酸化HER2和总HER2的电化学发光法(MESO SCALE DISCOVERY)，然后可以用机器产生p-HER2/总HER2的比率。抑制百分比由以下公式得出：％抑制＝100×[1-(样品孔的比率-最小对照孔的比率)/(最大对照孔的比率-最小对照孔的比率)]。IC50值是使用Prism GraphPad 7.0或Microsoft Xlfit软件，以最佳拟合曲线中50％抑制所需的化合物浓度来进一步计算。
化合物的抗增殖活性按以下程序测定：将BT474细胞在含有10％FBS和1M OAA的DMEM培养基中在384孔板中分选过夜，然后在第二天给予一系列浓度(30μM、10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.001μM)的测试化合物。同时，制备另一个细胞板用于在第二天测量G0值。将给药的平板在37℃，5％CO2下培育72小时，通过MTS(CellTiter
Figure BDA0002577094420000854
AQueous One Solution Cell Proliferation Assay,Promega)终点测量G0或给药平板的每个孔中的活细胞数。这一分析是用于测定增殖分析中活细胞数的比色法。将检测试剂(5μl)分配到每孔中，并将板在室温下培育2小时。然后，使用safile II(Tecan)测量每个孔中490nm和650nm(参考波长)的吸光度。增殖百分比由以下公式得出：％增殖＝100×(样品孔的G3值-G0值)/(DMSO对照的G3值-G0值)。GI50值是使用Genedata
Figure BDA0002577094420000855
软件，以最佳拟合曲线中50％增殖所需的化合物浓度进一步计算。
表2.示例性化合物的效力评估结果。
Figure BDA0002577094420000861
实施例31：大鼠中的血脑屏障穿透分析
用平衡透析装置进行体外血液、血浆和脑结合分析。稀释的血液(1:1，DPBSpH7.4)、EDTA抗凝血浆和脑匀浆(1:3，DPBS pH7.4)加入5μM测试化合物(一式三份)，在37℃下在缓慢旋转的板中相对于等体积150μL 100mM PBS缓冲液(pH7.4)透析适当的平衡时间。在培育结束时，取出来自接收器侧的50μL等分试样和来自供体室的5μL等分试样。用45μL空白血液、血浆或脑匀浆进一步稀释5μL样品。将配对样品与缓冲液或空白基质进行基质匹配，混合2分钟，然后用150μL冷乙腈和100ng/mL甲苯磺丁脲作为内标沉淀。在以4000rpm离心20分钟后，将上清液用0.1％甲酸水溶液稀释并分析LC/MS/MS(API 4000,AppliedBiosystems,Foster City)。通过缓冲液侧响应与脑匀浆/血浆/血液侧响应的比率计算测试化合物的未结合分数(fu)，并且通过以下等式从匀浆和稀释血液中测量的fu计算未稀释的血液和组织中测试化合物的未结合分数(fu血液、fu血浆和fu脑)：fu血液(fu脑)＝(1/D)/[(1/fu-1)+1/D)]。D是稀释系数。(D等于1(血浆)，2(血液)和4(脑))
短口服吸收(SOA)模型是用于鉴定化合物的脑渗透的体内筛选模型。从BeijingVital River购买的6只雄性Han Wistar大鼠口服给予所述化合物。在给药后的预定时间点，从小脑延髓池收集脑脊髓液(CSF)，并通过心脏穿刺收集血液样品(>60μL/时间点/每个部位)，进入单独的EDTA抗凝管，然后血液样品立即用3倍体积的水稀释，或者以4000g离心10分钟以获得血浆。收获脑组织并在3×体积的100mM磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)中均质化。在LC/MS/MS分析之前，将所有样品储存在～-70℃。
通过掺入空白血浆、血液、脑匀浆和人工CSF制备标准品。通过添加3倍体积的含有冷乙腈的内标沉淀均质化的脑组织以及血液/血浆样品，并且用100μL含有冷乙腈的内标沉淀10μL CSF样品。涡旋2分钟并以14,000rpm离心5分钟后，通过LC/MS/MS(API4000,AppliedBiosystems,Foster City)分析上清液。血液样品分析中，在每批次的开始和结束时运行两组标准曲线。对于脑和CSF样品，使用一条标准曲线伴随测试样品进行分析。
口服给药后啮齿动物中的总脑水平通过AUC(脑)/AUC(血液或血浆)测量，并表示为脑/血液比率(Kp,脑)。类似地，由CSF/血液暴露的比率(Kp,CSF)表示的CSF水平通过AUC(CSF)/AUC(血液或血浆)确定。通过体外血液和脑结合分析测定生物基质中测试化合物的游离部分。
Kp,uu脑和Kp,uu CSF通过以下等式计算：
Kp,uu脑＝AUC(脑)/AUC(血液或血浆)×(fu脑/fu血液/血浆)和
Kp,uu CSF＝AUC(CSF)/AUC(血液或血浆)×(1/fu血液/血浆)。
表3.示例性化合物的Kp,uu脑和Kp,uu CSF的数据
化合物 K<sub>p,uu脑</sub> K<sub>p,uu CSF</sub>
化合物1 0.23 1.44
化合物6 0.18 0.56
化合物14 0.04 0.24
化合物16 0.03 0.11
化合物17 0.07 1.02
化合物19 0.10 0.40
化合物20 0.08 0.07
化合物24 0.23 1.44
化合物25 0.11 1.92
化合物27 0.10 0.52
化合物28 0.11 0.52
奈拉替尼 AUC(脑)低于检测极限 AUC(CSF)低于检测极限
Kp,uu脑和Kp,uu CSF都应该是在CNS药物研发中测量和优化的主要参数(Di L等人,《药物化学杂志(Journal of Medicinal Chemistry)》[2013],56:2-12)。Kp,uu脑，即脑和血液中未结合药物浓度之间的关系，预测药物对大脑转移性肿瘤的作用。柔脑膜转移(LM)由癌症转移扩散到柔脑膜引起，导致中枢神经系统功能障碍。Kp,uu CSF代表与血液中的药物分布相比CSF中药物的分布，其在柔脑膜转移治疗期间驱动药物反应。表3中关于本申请化合物的分析数据以及获得的关于奈拉替尼的数据证明，当与奈拉替尼相比时，本发明化合物具有优异的脑屏障和CSF屏障穿透特性。
尽管已经参照具体实施方式(其中一部分是优选实施方式)具体地显示和描述本申请，但本领域的技术人员应理解，在不脱离本申请的精神和范围的情况下，可以对其中的形式和细节作出各种变化。

Claims (18)

1.一种式(Ia)的结构：
Figure FDA0003001347040000011
或其药学上可接受的盐，
其中，
R2是C1-12烷基；
R12是氢、C1-12烷基或氘取代的C1-12烷基；
R13和R14各自独立地是卤素；
R15是氢；
R16和R17各自独立地是氢或C1-12烷氧基；
其中E是
Figure FDA0003001347040000012
其中
X2是CR8，R8是氢，
p是0。
2.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自下组：
Figure FDA0003001347040000013
Figure FDA0003001347040000021
3.根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其呈结晶形式。
4.一种药物组合物，包含一种或多种根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载剂。
5.一种根据权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在受试者中治疗与HER2相关的疾病的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述与HER2相关的疾病是癌症。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、肺癌。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
9.根据权利要求5所述的用途，其中所述与HER2相关的疾病是具有脑和柔脑膜转移的癌症。
10.根据权利要求5所述的用途，其中所述受试者是温血动物。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述温血动物是人。
12.根据权利要求5所述的用途，其中所述HER2是突变型HER2。
13.根据权利要求5所述的用途，其中所述一种或多种化合物、其药学上可接受的盐穿过所述受试者的血脑屏障。
14.根据权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐与抗肿瘤剂的组合。
15.根据权利要求14所述的化合物或其药学上可接受的盐与抗肿瘤剂的组合，其中所述抗肿瘤剂是化学治疗剂。
16.根据权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐与抗肿瘤剂的组合，其中所述化学治疗剂是卡培他滨、多西紫杉醇或长春瑞滨。
17.根据权利要求14所述的化合物或其药学上可接受的盐与抗肿瘤剂的组合，其中所述抗肿瘤剂是HER2靶向抗体。
18.根据权利要求17所述的化合物或其药学上可接受的盐与抗肿瘤剂的组合，其中所述HER2靶向抗体是曲妥珠单抗、曲妥珠单抗美坦新或帕妥珠单抗。
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