CN114867726B - Kras g12c突变体的小分子抑制剂 - Google Patents

Kras g12c突变体的小分子抑制剂 Download PDF

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Abstract

本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中W1、W2、Y、Z、M、L、Cy、Cz、R1、R2、R3、R4、R2a、Ry、Rz及下标m、n、q及r是如本文中所描述。所述化合物或其药学上可接受的盐可抑制柯尔斯滕大鼠肉瘤(KRAS)蛋白的G12C突变体且预期适用于例如用于治疗癌症的治疗剂。本公开还提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本公开还涉及使用所述化合物或其药学上可接受的盐在癌症的治疗及预防中的方法及制备用于此目的的药物的方法。

Description

KRAS G12C突变体的小分子抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求保护2019年10月28日提出的美国临时申请第62/926,879号和2020年5月26日提出的美国临时申请第63/030,014号的权利，其各自以引用的方式整体并入本文中。
技术领域
本公开涉及某些杂芳基化合物及其药学上可接受的盐，其抑制柯尔斯滕大鼠肉瘤(KRAS)蛋白的G12C突变体且预期可用作治疗剂，例如用于治疗癌症。。本申请还涉及含有此类化合物的药物化合物以及使用所述化合物治疗癌症的方法。
背景技术
RAS蛋白为膜相关鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，其充当分子开关。RAS蛋白作为信号通路的组成部分而发挥作用，其从细胞表面受体传输信号来调节细胞的增殖、存活及分化。RAS蛋白在非活性GDP-结合状态与活性GTP-结合状态之间循环。
RAS亚家族中最值得注意的成员为HRAS、KRAS及NRAS，其主要牵涉许多癌症类型。然而，存在许多其他成员，包括DIRAS1；DIRAS2；DIRAS3；ERAS；GEM；MRAS；KIRAS1；KIRAS2；NRAS；RALA；RALB；RAPIA；RAPIB；RAP2A；RAP2B；RAP2C；RASD1；RASD2；RASL10A；RASL10B；RASL11A；RASL11B；RASL12；REM1；REM2；RERG；RERGL；RRAD；RRAS及RRAS2。
RAS(HRAS、NRAS或KRAS)基因的三种主要亚型中的任一种的突变为人类肿瘤形成中最常见的事件之一。在25-30％肿瘤中检测到KRAS突变。相比之下，NRAS及HRAS家族成员中致癌突变的出现率低得多(分别为8％及3％)。
在RAS(G12C突变)的残基12处甘氨酸交换为半胱氨酸是由RAS基因中常见的突变引起的。大规模癌症测序研究表明，G12C突变最常见地出现于肺癌、结肠直肠癌及胰腺癌中。七种癌症类型的组织学分析表明，非小细胞肺癌在具有KRAS G12C突变的癌症病例中占大部分(70-75％)。参见Lindsay,C.R.,et al.,Br J Cancer 121,197–198(2019)。
因此，尽管已在本领域中取得进展，但本领域中仍需要例如通过抑制突变KRAS、HRAS或NRAS蛋白(例如KRAS G12C)来治疗癌症的经改进的化合物及方法。本公开的实施方案满足此需要且提供进一步的相关优势。
发明概述
本公开提供调节突变KRAS、HRAS及/或NRAS蛋白且可以是用于治疗癌症的有价值的药学活性的化合物。在一些实施方案中，所公开的化合物选择性抑制KRAS(G12C)蛋白。式(I)化合物
及其药学上可接受的盐，可以调节KRAS、HRAS的活性及/或NRAS活性且从而影响调节与致癌病症相关的细胞生长、分化及增殖的信号传导路径。在某些实施方案中，式(I)化合物可抑制KRAS(G12C)蛋白。本公开进一步提供制备式(I)化合物的方法、使用此类化合物治疗致癌病症的方法及包含式(I)化合物的药物组合物。
发明详述
本公开化合物
在第1号实施例中，本公开提供一种化合物，其具有如上文所示的结构式(I)，其中：
Y为N或C(H)；
Z为N或C(R5)；
M为C或N；
所示含有M的环中的虚线表示任选地双键；
L为C1-C7亚烷基或C1-C7杂亚烷基，
其中所述亚烷基或杂亚烷基未经取代或经1至5个独立地选自氧代、氟、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、氨基和羟基的取代基取代；
或替代地，所述亚烷基或杂亚烷基的两个偕位、邻位或间隔位(hominal)取代可与其所连接的碳原子一起形成环CL，其中所述CL为C3-C6环烷基，且其中所述环CL未经取代或经1至3个氟取代；
R1为卤基、H、C1-C4烷基、C1-C4氟烷基、或C1-C4羟烷基；
R2为H、CH3、或卤基；
R3各自独立地为：
(a)C1-C4烷基、C1-C4氰基烷基、C1-C4氟烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷基苯基、氧代或羧基；
(b)或替代地，两个R3取代基与其所连接的碳原子一起可与所示的含有M的环一起形成3元至6元双环或螺环环系；
W1为-C(O)-或-S(O)2-；
W2为下式的基团：
其中
W2a为H、CH3、F、氰基、CH2OH、CH2CH2OH或CH2Br；
W2b为CH3、CH2NH2、CH2N(H)CH3、CH2N(CH3)2、CH2-NH-环丙基、
R4为H、C1-C4烷基或C3-C5环烷基；
R5为H或卤基；
环Cy为：
(a)苯基,
(b)含有一个至三个选自N、O和S的杂原子的5元至6元单环杂芳基；或
(c)含有一至四个选自N、O和S的杂原子的9元至10元双环杂芳基；
Ry各自独立地为卤基、羟基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C1-C3烷氧基、氰基、羟基或C1-C3羟烷基；
环Cz为：
(a)苯基，或
(b)含有一个至三个选自N、O和S的杂原子的5元至6元杂芳基；
Rz各自独立地为卤基、羟基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C1-C3烷氧基、氰基或C1-C3羟烷基；
下标m为0、1、2或3；
下标n为0、1、2、3或4；
下标q为0、1、2、3或4；并且
下标r为0或1；
或其药学上可接受的盐。
在第2号实施方案中，
基团为/>
R3各自独立地为：
(a)C1-C4烷基、C1-C4氰基烷基、C1-C4氟烷基、C1-C4羟烷基、C1-C4烷基苯基、氧代或羧基；
(b)或替代地，两个R3取代基与其所连接的碳原子一起可与所示的含有M的环一起形成3元至6元双环或螺环环系；并且
Ry各自独立地为卤基、羟基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C1-C3烷氧基、氰基、羟基或C1-C3羟烷基。
且其余变量是如第1号实施方案中所述。
在第3号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中L为基团-X1-X2-X5-X4-X3-，其中：
X1和X3独立地为-CH2-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(H)(CH3)-或-N(H)-；
X2为-CH2-、-CF2-、-C(H)(F)-、-C(H)(OH)-、-C(H)(CH3)-、-O-、-S-、-N(H)-或-C(O)-；
X4为不存在、-CF2-、-C(H)(F)-、-C(H)(OH)-、-C(H)(CH3)-、-CH2-、-O-、-S-、-N(H)-或-C(O)-；
X5为不存在、-CH2-、-CF2-、-C(H)(F)-、-O-、-S-、-N(H)-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-O-CH2-、-CH2-O-；
其中：
当X1为-O-、-S-或-N(H)-时，则X2为-CH2-或-C(O)-；
当X2为-O-、-S-或-N(H)-时，则X1为-CH2-或–C(O)-且X5若存在则为-CH2-、-CF2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；
当X3为-O-、-S-或-N(H)-时，则X4为-CH2-或-C(O)-；
当X4为-O-、-S-或-N(H)-时，则X3为-CH2-且X5若存在则为-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；并且
当X5为-O-、-S-或-N(H)-，则X2和X4均为-CH2-；
且其余变量是如第1号或第2号实施方案中所述。在第3号实施方案及所有其他实施方案中，其中L为基团-X1-X2-X5-X4-X3-，X1键结至环Cy且X3键结至环Cz。
在第4号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中L为：
-O-CH2CH2CH2-O-；
-CH2CH2CH2-O-；
-O-CH2CH2CH2-；
-O-C(H)(CH3)CH2CH2-；
-O-CH2CH2CH2CH2-；
-O-CH2CF2CH2CH2-；
-CH2CH2CH2CH2-O-；
-CH2CH2CH2CH2-；
-CH2CH2CH2-；
-CH2CH2C(H)(OH)CH2-；
-CH2C(H)(OH)CH2CH2-；
-O-CH2CH2-；
-CH2CH2-O-；
-O-CH2CH2-O-；
-O-CH2C(H)(CH3)-O-；
-O-C(H)(CH3)CH2-O-；
-O-CH2CF2CH2-O-；
-CH2CH2-O-CH2CH2-；
-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-；
-CH2-O-CH2CH2-；
-CH2CH2-O-CH2-；
-N(H)-CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2-O-CH2-；
-C(O)-N(H)-CH2CH2CH2-；
-CH2CH2CH2-N(H)-C(O)-；
-N(H)-CH2CH2-O-CH2-；
且其余变量是如第1号或第2号实施方案中所述。在这些基团中，最左连接链原子键结至环Cy且最右侧连接链原子键结至环Cz。
在第5号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中L为：
-O-CH2CH2CH2-O-；
-CH2CH2CH2-O-；
-O-CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2CH2CH2-；
-CH2CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2-；
-O-CH2CH2-O-；
-O-CH2CF2CH2-O-；
-CH2CH2-O-CH2CH2-；
-C(O)-N(H)-CH2CH2CH2-；或
-CH2-O-CH2CH2-；
且其余变量是如第1号或第2号实施方案中所述。
在第6号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中基团-X1-X2-X5-X4-X3-为：
-O-CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2-O-；或
-O-CH2CF2CH2CH2-；
且其余变量是如第1号或第2号实施方案中所述。
在第7号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中R1为氟，且其余变量是如第1号至第6号实施方案中任一项所述。
在第8号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中R2为氟或氯，且其余变量是如第1号至第7号实施方案中任一项所述。
在第9号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中R4为H或异丙基，且其余变量是如第1号至第8号实施方案中任一项所述。
在第10号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中下标m为0,1或2，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第11号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中下标m为0或1，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第12号实施方案中，下标m为0，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第13号实施方案中，下标m为1，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第14号实施方案中，下标m为2，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第15号实施方案中，本公开提供如第10号、第11号、第13号或第14号实施方案中所述的式(I)的化合物，其中R3为甲基或-CH2-CN，且其余变量是如第1号至第9号实施方案中任一项所述。
在第16号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中M为N，且其余变量是如第1号至第15号实施方案中任一项所述。
在第17号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物，其中在以下基团中
所述双键为不存在，M为N且其余变量是如第1号至第15号实施方案中任一项所述。
在第18号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物其中所述基团为 且其余变量是如第1号实施方案中所述。
在第19号实施方案中，本公开提供一种式(I)的化合物其中在所述基团中为/>并且所述双键为不存在，M为N且其余变量是如第1号至第15号实施方案中任一项所述。
在第20号实施方案中，本公开提供如第19号实施方案中所述的式(I)化合物，其中所述基团为/> 且其余变量是如第1号至第15号实施方案中任一项所述。
在第21号实施方案中，本公开提供如第19号实施方案中所述的式(I)化合物，其中所述基团为/>且其余变量是如第1号至第15号实施方案中任一项所述。
在第22号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中Cy为苯基或含有一个至三个选自N、O和S的杂原子的5元至6元单环杂芳基；且其余变量是如第1号至第21号实施方案中任一项所述。
在第23号实施方案中，Cy为苯基，且其余变量是如第1号至第22号实施方案中任一项所述。
在第24号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中所述基团为/> 且其余变量是如第1号至第6号及第8号至第21号实施方案中任一项所述。
在第25号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中所述基团为/>且其余变量是如第1号至第6号及第8号至第21号实施方案中任一项所述。
在第26号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中Cz为苯基或含有一个至三个选自N、O和S的杂原子的5元至6元单环杂芳基；且其余变量是如第1号至第25号实施方案中任一项所述。
在第27号实施方案中，Cz为苯基或吡啶，且其余变量是如第1号至第26号实施方案中任一项所述。
在第28号实施方案中，本公开提供式(I)的化合物，其中所述基团为/>且其余变量是如第1号至第25号实施方案中任一项所述。
在第29号实施方案中，所述基团为/>且其余变量是如第1号至第25号实施方案中任一项所述。
在第30号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中Y为N，且其余变量是如第1号至第29号实施方案中任一项所述。
在第31号实施方案中，本公开提供式(I)的化合物其中Z为N，且其余变量是如第1号至第30号实施方案中任一项所述。
在第32号实施方案中，本公开提供式(I)化合物其中所述基团为/>且其余变量是如第1号至第29号实施方案中任一项所述。
在第33号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中所述基团为/>且其余变量是如第1号至第29号实施方案中任一项所述。
在第34号实施方案中，本公开提供式(I)化合物，其中下标r为0，且其余变量是如第1号至第27号及第30号至第33号实施方案中任一项所述。
在第35号实施方案中，本公开提供式(I)的化合物，其中下标r为1，且其余变量是如第1号至第27号及第30号至第33号实施方案中任一项所述。
在第36号实施方案中，式(I)化合物具有式(IA)
其中所述基团-X1-X2-X5-X4-X3-是如第3号实施方案中所述；
R3各自和Ry各自是如第2号实施方案中所述；并且
R1、R2、R4、Rz、Y、Z、环Cy、环Cz及下标m、n及q是如第1号实施方案中所述。
在具有式(IA)的化合物的第37号实施方案中，所述基团-X1-X2-X5-X4-X3-是如第5号实施方案中所述。
在第38号实施方案中，本公开提供式(IA)化合物
其中
所述基团
是如第21号实施方案中所述，
所述基团
是如第32号实施方案中所述，
所述基团
是如第28号实施方案中所述，
所述基团
是如第25号实施方案中所述，并且
L是如第5号实施方案中所述。
在第39号实施方案中，本公开提供具有式(IB)的式(I)化合物
其中：
Cy为苯基；
Cz为吡啶基；
X3为-CH2-或-O-；
X5为不存在,-CH2-,-CF2-,或-C(H)(F)-；
R1为氟或氯；
R2为氟或氯；
R4为C1-C4烷基；并且
其余变量是如第1号实施方案中所述。
在第40号实施方案中，所述化合物具有式(IB)且基团
-O-CH2-X5-CH2-X3-为：
-O-CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2CH2CH2-；
-O-CH2CH2-O-；或
-O-CH2CF2CH2CH2-；并且
其余变量是如第39号实施方案中所述。
在第41号实施方案中，化合物具有式(IB)且所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-为-O-CH2CH2CH2-。
在第42号实施方案中，化合物具有式(IB)且所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-为-O-CH2CH2CH2CH2-。
在第43号实施方案中，化合物具有式(IB)且所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-为-O-CH2CH2-O-。
在第44号实施方案中，化合物具有式(IB)且所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-为-O-CH2CF2CH2CH2-。
在第45号实施方案中，化合物具有式(IB)，其中
所述基团为/>
所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-是如第39号至第44号实施方案中任一项所述；并且其余变量是如第39号实施方案中所述。
在第46号实施方案中，化合物具有式(IB)，其中
所述基团为/>
所述基团是如第39号或第45号实施方案中所述；
所述基团-O-CH2-X5-CH2-X3-是如第39号至第44号实施方案中任一项所述；并且其余变量是如第39号实施方案中所述。
在第47号实施方案中，所述化合物具有如第39号或第46号实施方案中所述的式(IB)，其中所述基团为/>
在第48号实施方案中，本公开提供如下文所述的实施例1至20、50至52、54至68、70及73至126中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本公开提供具有低预测口服人类剂量(例如，每日一次经口施用<500mg，优选地<200mg)的化合物，其由高细胞效能(例如，在磷酸-ERK分析中在2h孵育时间IC50<100nM)及优异的临床前药物动力学及稳定性特性(例如，如在大鼠及狗血浆中的化合物浓度及在血浆清除研究中所测量)产生。
本公开包括本文所定义的化合物的药学上可接受的盐，包括本文所定义的所有结构式、实施方案及类别的药学上可接受的盐。引用结构式(I)的化合物包括例如式(IA)及式(IB)的其他通用结构式的化合物及落入式(I)的范围内的实施方案。
定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语具有与本公开所属领域技术人员所理解相同的含义。
如在本公开通篇中所使用，“式(I)化合物”应理解为包括“式(I)化合物或其药学上可接受的盐”。且“式(I)化合物”应理解为包括“式(IA)化合物”及“式(IB)化合物”(及式(IA)及式(IB)化合物的药学上可接受的盐)。
“烷基”以及具有前缀“akl”的其它基团(例如烷氧基及其类似基团)表示可为含有指定数目的碳原子的直链或支链或其组合的碳链。在特定实施方案中，直链烷基具有1至6个碳原子且支链烷基具有3至7个碳原子。烷基的实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基及叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基及其类似基团。
“亚烷基”是指任选地经取代的亚烷基。可给出表示总链长的数值范围。例如，C3-C4亚烷基具有3或4个原子的链长。除非本说明书中另有说明，否则亚烷基可在基团中的碳原子处经一个或多个取代基取代，所述取代基独立地为氧代、氟、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、氨基、羟基，或两个偕位或邻位或间隔位取代可与其经取代的碳原子组合形成C3-C6环烷基。
“烷氧基”及“烷基-O-”可互换使用且是指连接至氧的烷基。
“烷基苯基”是指经苯基取代的C1-C4烷基。苯基可在碳链上的任何位置，例如碳链末端。
“双环环系”是指两个接合环。环可为稠合的，即共用两个相邻原子，或“螺环”，即仅共用单个原子。
“氰基烷基”是指经氰基取代的烷基。
“环烷基”是指饱和环状烃基。在特定实施方案中，环烷基具有3至12个碳原子，形成稠合的1至3个碳环。环烷基的实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基及其类似基团。
“氟烷基”包括经单取代的烷基以及多个经氟取代的烷基，直至经全氟取代的烷基。例如，包括氟甲基、1,1-二氟乙基、三氟甲基或1,1,1,2,2-五氟丁基。
“经偕位取代”是指连接至分子中的同一原子的取代(例如官能团)。例如，1,1-二氯乙烷为经两个氯原子偕位取代的乙烷分子。
术语“杂亚烷基”是指任选地经取代的亚烷基，其具有一个或多个选自除碳以外的原子(例如氧、氮或硫)的骨架链原子。可给出表示总链长的数值范围。例如，C1-C7杂亚烷基具有1至7个原子的链长。例如，—OCH2CH2CH2O-基团被称为“C5杂亚烷基”，其在原子链长度描述中包括两个杂原子。通过亚烷基链中的末端碳、氮、氧或硫原子连接至分子的其余部分(例如连接至Cy及Cz的环原子)。杂亚烷基可经取代。除非本说明书中另有说明，否则杂亚烷基可在基团中的碳原子处经一个或多个取代基取代，此类取代基独立地为氧代、氟、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、氨基、羟基，或两个偕位或邻位或间隔位取代可与其经取代的碳原子组合形成C3-C6环烷基。在一些实施方案中，杂亚烷基在原子链中具有1至2个选自氮及氧原子的杂原子。在一些实施方案中，杂亚烷基在原子链中具有1个选自氮及氧原子的杂原子。
“杂芳基”是指芳族单环及双环环结构，其中环中的一个或多个原子(杂原子)为除碳以外的元素。杂原子通常为O、S或N原子。杂芳族基团的实施例包括吡啶基、嘧啶基、吡咯基、哒嗪基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并噻唑基及咪唑基。
除非另有说明，否则“卤素”或“卤基”包括氟(氟基)、氯(氯基)、溴(溴基)及碘(碘基)。在一个实施方案中，卤基为氟基(-F)或氯基(-Cl)。
“经间隔位取代”(Hominally substituted)是指以1,3-关系连接于分子上的取代基或基团。例如，1,3-二氯丙烷ClCH2CH2CH2Cl为经两个氯原子间隔位取代的丙烷分子。
“羟烷基”包括经单取代的烷基以及多个经羟基取代的烷基。
当任何变量(例如R3、Ry等)在任何组分或式(I)或本文中指其他通用式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义独立于其在其他每次出现时的定义。取代基及/或变量的组合仅在此类组合产生稳定化合物时为允许的。在选择本公开化合物时，本领域普通技术人员将认识到，遵照众所周知的化学结构连接性及稳定性原理可选择多个取代基，即R3、Ry等。除非明确规定为相反的，否则允许在环(例如芳基、杂芳基环或饱和杂环烷基环)中的任何原子上经指定取代基取代，其限制条件为此类环取代为化学上允许的且产生稳定化合物。“稳定”化合物为可制备及分离的化合物且其结构及特性保持或可基本上保持不变持续足以允许将化合物用于本文所描述的目的的时间段(例如向个体治疗或预防性施用)。
应认为术语“经取代”包括所指定取代基的多种取代度。在公开或要求保护多种取代基部分时，经取代的化合物可独立地经一个或多个所公开或所要求保护的取代基部分单取代或多取代。独立取代是指(两个或更多个)取代基可相同或不同。
“经邻位取代”是指连接至分子中的相邻原子的取代基或基团。例如，1,2-二氯乙烷为经两个氯原子邻位取代的乙烷分子。
除非另外明确描绘或描述，否则在变量所连接的环中的任何可用碳原子上允许具有“浮动”键的结构式中所描绘的变量，例如式(I)中的R3或Ry。当式(I)或其任何实施方案中的部分经指定为“任选地经取代”时，表示式(I)或其实施方案涵盖在所述部分上含有指定取代基(多个取代基)的化合物及在所述部分上不含指定取代基(或多个取代基)的化合物。
如本文中所使用的是指与化合物的其余部分的连接点。
式(I)化合物可含有一个或多个不对称中心且可因此以外消旋体及外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构混合物及个别非对映异构体形式存在。式(I)化合物中所存在的不对称性中心可全部彼此独立地具有S构型或R构型。本公开化合物包括所有可能的对映异构体及非对映异构体以及两种或更多种立体异构体的所有比例的混合物，例如对映异构体及/或非对映异构体的混合物。因此，对映异构体为本公开的主题，其呈左旋及右旋对映体的对映异构纯形式、外消旋体形式及两种对映异构体的所有比例的混合物形式。在顺/反异构的情形中，本公开包括顺式及反式两者以及此类形式的所有比例的混合物。本公开旨在涵盖式(I)化合物的所有此类立体异构形式。在结构式或化学名称指定立体中心处的特定构型的情况下，期望由该指定立体中心产生的化合物的对映异构体或立体异构体。在式(I)化合物的结构式是指手性中心处的直线的情况下，所述结构式包括与手性中心相关的S及R立体异构体及其混合物。
式(I)化合物可通过例如自适合的溶剂(例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物)分步结晶或通过手性色谱法使用光学活性固定相分离成其个别非对映异构体。绝对立体化学可通过(若必要)用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生的结晶产物或结晶中间体的X-射线晶体学来测定。还可使用振动圆二色性(VCD)测定绝对立体化学。替代地，式(I)化合物的任何立体异构体或异构体可使用已知绝对构型的光学纯起始物质或试剂，通过立体特异性合成获得。
必要时，可分离化合物的外消旋混合物以便分离个别对映异构体。分离可通过本领域中众所周知的方法进行，例如使化合物的外消旋混合物与对映异构性纯化合物偶合以形成非对映异构混合物，随后通过例如分步结晶或色谱法的标准方法分离个别非对映异构体。偶合反应通常使用对映异构纯的酸或碱形成盐。非对映异构体衍生物然后可通过使所添加的手性残基裂解转化为纯对映异构体。化合物的外消旋混合物还可直接通过色谱法法利用手性固定相分离，所述方法在本领域中已众所周知。
对于含有烯烃双键的本文所描述的式(I)化合物，除非另有说明，否则其旨在包括E及Z几何异构体两者。
本文所描述的化合物中的一些可以互变异构体的形式存在，其具有不同的氢连接点，伴随一个或多个双键位移。例如，酮及其烯醇形式为酮-烯醇互变异构体。本公开的式I化合物涵盖个别互变异构体以及其混合物。
本文中所描述的一些化合物可在围绕单键的旋转能垒足够高以防止在给定温度下自由旋转时以阻转异构体形式存在，因此允许分离具有不同特性的个别构象异构体。稳定阻转异构体的典型实施例由中间体Int-4d-1及Int-4d-2(下文描述)示例，其可通过超临界流体色谱法分离来解析。本公开的式I化合物涵盖个别阻转异构体以及其混合物。当经解析时，个别阻转异构体可通过建立的惯例指定，例如由国际纯应用化学联盟(IUPAC)2013建议指定的那些惯例。
在式(I)化合物中，原子可展示其天然同位素丰度，或可人工富集原子数目相同但原子质量或质量数与自然界中主要发现的原子质量或质量数不同的特定同位素中的一种或多种原子。如本文所描述及所要求保护的本公开旨在包括式(I)化合物及其实施例的所有适合的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)及氘)(2H，在本文中还表示为D)。氕为自然界中发现的主要氢同位素。氘富集可获得某些治疗优势，例如增加活体内半衰期或减少剂量需求，或可提供适用于表征生物样本的标准物的化合物。式(I)的同位素富集化合物可通过本领域技术人员众所周知的常规技术而无需过度实验或通过与本文的方案及实施例中所述类似的工艺，使用适当的同位素富集试剂及/或中间体来制备。
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本公开化合物为酸性时，其相应盐可方便地自药学上可接受的无毒碱制备，所述无毒碱包括无机碱及有机碱。衍生自此类无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐(高价及低价)、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐(高价及低价)、钾盐、钠盐、锌盐及其类似盐。优选地为铵盐、钙盐、镁盐、钾盐及钠盐。自药学上可接受的有机无毒碱制备的盐包括衍生自天然存在及合成来源的伯胺、仲胺及叔胺的盐。可由其形成盐的药学上可接受的有机无毒碱包括例如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、二环己胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多元胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可豆碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺(tromethamine)及其类似碱。
当本公开化合物为碱性时，其对应盐可方便地由药学上可接受的无毒无机及有机酸制备。所述酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、顺丁烯二酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏液酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸及其类似酸。优选地为柠檬酸、氢溴酸、盐酸、顺丁烯二酸、磷酸、硫酸及酒石酸。若式(I)化合物在分子中同时含有酸性及碱性基团，则除所提及的盐形式以外，本公开还包括内盐或甜菜碱(两性离子)。可通过本领域技术人员已知的常规方法，例如通过与有机或无机酸或碱在溶剂或分散剂中组合，或通过与其他盐阴离子交换或阳离子交换，自式(I)化合物获得盐。本公开还包括式(I)化合物的所有盐，所述盐由于较低生理相容性而并不直接适用于药物，但可用作例如中间体以用于化学反应或用于制备药学上可接受的盐。
此外，本公开化合物可以非晶形式及/或一种或多种结晶形式存在，且因此式(I)化合物的所有非晶及结晶形式及其混合物(包括实施例)旨在包括在本公开的范围内。另外，本公开的一些化合物可与水(即水合物)或常见有机溶剂(例如(但不限于)乙酸乙酯)形成溶剂合物。本公开化合物的此类溶剂合物及水合物，尤其药学上可接受的溶剂合物及水合物以及非溶剂化及无水形式同样涵盖在本公开的范围内。
本公开化合物的引起活体内转化成在本公开范围内的化合物的任何药学上可接受的前药修饰也在本公开范围内。
本公开还涉及用于制备式(I)化合物的工艺，其描述于下文中且通过其可获得本公开化合物。
术语“治疗上有效(effective)(或有效(efficacious))量”及类似描述(例如“对治疗有效的量”)旨在表示将引起研究人员、兽医、医生或其他临床医生正寻求的组织、是统、动物或人类的生物学或医学反应的式(I)化合物的量。在优选地实施例中，术语“治疗有效量”是指缓解人类患者的至少一种临床症状的式(I)化合物的量。术语“预防上有效(或有效)量”及类似描述(例如“对预防有效的量”)旨在表示将预防或降低研究人员、兽医、医生或其他临床医生在组织、是统、动物或人类中预防的生物学或医学事件的出现风险的式(I)化合物的量。
式(I)化合物的剂量
利用本公开化合物的施用方案是根据多种因素而选择，包括患者的类型、人种、年龄、体重、性别及医学病状；待治疗的病状的严重程度；选择施用的化合物的效能；施用途径；及患者的肾及肝功能。出于确定预防、对抗或阻止病状进展所需的治疗有效或预防有效剂量的目的，这些因素的考虑完全在一般熟练临床医生的权限内。应理解，特定日剂量可同时为例如用于治疗致癌病状的治疗有效量及例如用于预防致癌病状的预防有效量。
尽管个体需要不同，但本公开化合物的有效量的最优选地范围的确定在本领域的技术范围内。为了在对本文所鉴别的病状及病症进行治愈性及预防性治疗中施用给人类，本公开化合物的典型剂量可为约0.05mg/kg/天至约50mg/kg/天、例如至少0.05mg/kg、至少0.08mg/kg、至少0.1mg/kg、至少0.2mg/kg、至少0.3mg/kg、至少0.4mg/kg、或至少0.5mg/kg且优选地50mg/kg或更少、40mg/kg或更少、30mg/kg或更少、20mg/kg或更少、或10mg/kg或更少，其可例如为约2.5mg/天(0.5mg/kg×5kg)至约5000mg/天(50mg/kg×100kg)。例如，化合物的剂量可为约0.1mg/kg/天至约50mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约10mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约5mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约3mg/kg/天、约0.07mg/kg/天至约3mg/kg/天、约0.09mg/kg/天至约3mg/kg/天、约0.05mg/kg/天至约0.1mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约1mg/kg/天、约1mg/kg/天至约10mg/kg/天、约1mg/kg/天至约5mg/kg/天、约1mg/kg/天至约3mg/kg/天、约3mg/天至约500mg/天、约5mg/天至约250mg/天、约10mg/天至约100mg/天、约3mg/天至约10mg/天或约100mg/天至约250mg/天。此类剂量可以单次剂量施用或可分为多次剂量。
药物组合物
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以本身作为药物与彼此混合或呈药物组合物形式向动物、优选地向哺乳动物，且尤其为向人类施用。术语“个体”或“患者”包括动物，优选地地为哺乳动物，且尤其为人类，其使用本公开的活性剂来预防或治疗医学病状。向个体施用药物包括自我施用及通过另一个人向患者施用。个体可能需要或期望治疗现有疾病或医学病状，或可能需要或期望预防性治疗以预防或降低所述疾病或医学病状出现的风险。如本文中所使用，个体“需要”现有病状的治疗或预防性治疗涵盖需要通过医疗专业人士进行叛定以及患者期望进行此类治疗。
因此，本公开还提供适用于药物的式(I)化合物及其药学上可接受的盐；其用于调节突变KRAS、HRAS及/或NRAS蛋白质的活性的用途，且尤其是其用于治疗及预防下文所提及的疾病或病症的用途；以及其用于制备用于这些目的的剂的用途。在某些实施方案中，式(I)化合物及其药学上可接受的盐抑制KRAS G12C蛋白质。
此外，本公开提供药物组合物，包含有效剂量的至少一种式(I)化合物及/或其药学上可接受的盐及常规药学上可接受的载体，即一种或多种药学上可接受的载体物质及/或添加剂作为活性组分。
因此，本公开提供例如适用于药物组合物的所述化合物及其药学上可接受的盐，所述药物组合物包含有效剂量的式(I)化合物及/或其药学上可接受的盐及常规药学上可接受的载体作为活性组分；及所述化合物及/或其药学上可接受的盐在治疗或预防下文所提及的疾病或病症(例如癌症)中的用途；以及其用于制备用于这些目的的剂的用途。
根据本公开的药物组合物可例如按以下形式经口施用：丸剂、片剂、漆包片剂(lacquered tablets)、糖衣片剂、颗粒剂、硬明胶胶囊及软明胶胶囊、水性、酒精性或油性溶液、糖浆、乳液或悬浮液，或例如以栓剂形式经直肠施用。施用还可以注射或输注用溶液形式非经肠(例如经皮下、经肌内或经静脉内)进行。
其他适合的施用形式为例如经皮或局部施用(例如呈软膏、酊剂、喷雾剂或经皮治疗是统形式)，或例如微胶囊、植入物或棒。优选地施用形式视例如待治疗的疾病及其严重程度而定。
药物组合物中的式(I)的活性化合物及/或其药学上可接受的盐的量通常为每剂量0.01至200mg，例如0.1至200mg，优选地1至200mg，但视药物组合物的类型而定，其还可更高。在一些实施方案中，药物组合物中的式(I)的活性化合物及/或其药学上可接受的盐的量为每剂量0.01至10mg。药物组合物通常包含0.5至90重量％的式(I)化合物及/或其药学上可接受的盐。药物组合物的制备可以本身已知的方式进行。为此目的，将一种或多种式(I)化合物及/或其药学上可接受的盐以及一种或多种固体或液体药物载体物质及/或添加剂(或辅助物质)及(必要时)与具有治疗或预防作用的其他药学上活性化合物组合视为适合的施用形式或剂型，其可随后在人类或兽药中用作药物。
为了生产丸剂、片剂、糖衣片剂及硬明胶胶囊，有可能使用例如乳糖、淀粉(例如玉米淀粉或淀粉衍生物)、滑石、硬脂酸或其盐等。用于软明胶胶囊及栓剂的载体为例如脂肪、蜡、半固体及液体多元醇、天然或硬化油等。用于制备溶液(例如注射用溶液或乳液或糖浆)的适合的载体为例如水、生理学上可接受的氯化钠溶液、醇(例如乙醇、丙三醇、多元醇)、蔗糖、转化糖、葡萄糖、甘露醇、植物油等。还有可能冻干式(I)化合物及其药学上可接受的盐且使用所得冻干物，例如用于制备注射或输注用制剂。用于微胶囊、植入物或棒的适合的载体为例如乙醇酸与乳酸的共聚物。
除活性化合物及载体以外，药物组合物还可含有常规添加剂，例如填充剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、润湿剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调味剂、芳香剂、增稠剂、稀释剂、缓冲物质、溶剂、增溶剂、用于实现储存效应的试剂、用于改变渗透压的盐、包衣剂或抗氧化剂。
使用式(I)的化合物的方法
本申请提供一种抑制RAS介导的细胞信号传导的方法，其包含使细胞与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。RAS介导的信号转导的抑制可通过本领域中已知的广泛多种方式来评定及证实。非限制性实施例包括(a)RAS的GTP酶活性降低；(b)GTP结合亲和力降低或GDP结合亲和力增加；(c)GTP的Koff增加或GDP的Koff降低；(d)RAS路径下游的信号转导分子的含量降低，例如pMEK、pERK或pAKT含量降低；及/或(e)RAS复合物与包括但不限于Raf的下游信号传导分子的结合降低。试剂盒及市售分析可用于测定上述的一种或多种。
本申请还提供使用式(I)化合物(或其药学上可接受的盐)或含有此类化合物的药物组合物治疗疾病病状的方法，所述疾病病状包括但不限于由突变KRAS、HRAS及/或NRAS蛋白(例如癌症)及在一些实施方案中KRAS G12C突变体所涉及的病状。
在一些实施方案中，提供一种用于治疗癌症的方法，所述方法包含向需要此类治疗的个体施用治疗有效量的式(I)化合物(或其药学上可接受的盐)或任何包含此类化合物的前述药物组合物。在一些实施方案中，癌症是由KRAS、HRAS或NRAS突变，例如KRAS G12C突变介导。在各种实施方案中，癌症为胰腺癌、结肠直肠癌或肺癌。在一些实施方案中，癌症为胆囊癌、甲状腺癌或胆管癌。
在一些实施方案中，本公开提供一种治疗有需要个体的病症的方法，其中所述方法包含测定个体是否具有KRAS、HRAS或NRAS突变(例如KRAS G12C突变)，且如果个体经测定具有KRAS、HRAS或NRAS突变，则向所述个体施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
公开的化合物抑制锚定非依赖性细胞生长且因此具有抑制肿瘤癌转移的潜能。因此，本公开的另一实施方案提供一种用于抑制肿瘤癌转移的方法，所述方法包含施用有效量的本文所公开的化合物。
还已鉴别出血液学恶性病(例如影响血液、骨髓及/或淋巴结的癌症)中的KRAS、HRAS或NRAS突变。因此，某些实施方案是关于向需要治疗血液恶性病的个体施用式(I)化合物(例如呈药物组合物形式)。此类恶性病包括但不限于白血病及淋巴瘤。例如，本公开的化合物可用于治疗例如以下的疾病：急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性单核细胞性白血病(AMoL)及/或其他白血病。在其他实施方案中，所述化合物适用于治疗淋巴瘤，例如霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)或非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma)。在各种实施方案中，所述化合物适用于治疗浆细胞恶性病，例如多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglubunemia)。
测定肿瘤或癌症是否包含KRAS、HRAS或NRAS突变(例如KRAS G12C突变)可通过评定编码KRAS、HRAS或NRAS蛋白的核苷酸序列，通过评定KRAS、HRAS或NRAS蛋白的氨基酸序列或通过评定推定KRAS、HRAS或NRAS突变蛋白的特征来进行。野生型人类KRAS、HRAS或NRAS的序列为本领域中已知的。
检测KRAS、HRAS或NRAS核苷酸序列的突变的方法也为本领域技术人员已知。此类方法包括但不限于聚合酶链反应-限制性片段长度多形性(PCR-RFLP)分析、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析、实时PCR分析、PCR测序、突变等位基因特异性PCR扩增(MASA)分析、直接测序、引子延伸反应、电泳、寡核苷酸接合分析、杂交分析、塔克曼分析(TaqMan assay)、SNP基因分型分析、高解析度溶解分析及微阵列分析。在一些实施方案中，通过实时PCR评价样本中的KRAS、HRAS或NRAS突变(例如KRAS G12C突变)。在实时PCR中，使用对KRAS、HRAS或NRAS G12C突变具有特异性的荧光探针。存在突变时，探针结合且检测到荧光。在一些实施方案中，使用直接测序方法鉴别KRAS、HRAS或NRAS基因的特定区(例如外显子2及/或外显子3)中的KRAS、HRAS或NRAS突变。
检测KRAS、HRAS或NRAS蛋白(例如KRAS G12C突变)的方法也为本领域技术人员已知。此类方法包括但不限于使用对突变蛋白具有特异性的接合剂(例如抗体)检测KRAS、HRAS或NRAS突变体、蛋白电泳及西方墨点法及直接肽测序。
可评估多种组织样本以测定肿瘤或癌症是否包含KRAS、HRAS或NRAS突变(例如KRAS G12C突变)。在一些实施方案中，样本获自患有肿瘤或癌症的个体。在一些实施方案中，样本为新鲜的肿瘤/癌症样本。在一些实施方案中，样本为冷冻的肿瘤/癌症样本。在一些实施方案中，样本为经福尔马林(formalin)固定、经石蜡包埋的样本。在一些实施方案中，样本为循环肿瘤细胞(CTC)样本。在一些实施方案中，将样本处理成细胞溶解物。在一些实施方案中，将样本处理成DNA或RNA。
本申请还提供一种治疗过度增生性病症的方法，其包含向有需要的个体施用治疗有效量的本公开化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有例如以下的癌症的个体：急性骨髓性白血病、青少年癌症、儿童肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症(例如淋巴瘤及卡堡氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma))、肛门癌、阑尾癌、星型细胞瘤、非典型畸胎瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶瘤、脑瘤、乳癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、类癌、非典型畸胎瘤、胚胎肿瘤、生殖细胞肿瘤、原发性淋巴瘤、子宫颈癌、儿童癌症、脊索瘤、心脏肿瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓增生性病症、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、肝外乳腺管原位癌(DCIS)、胚胎肿瘤、中枢神经是统(CNS)癌症、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、敏感性神经胚细胞瘤、尤文氏肉瘤(ewing sarcoma)、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、眼癌、骨纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道基质肿瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、妊娠期滋养细胞肿瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心腺癌、肝癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌症、眼内黑色素瘤、胰岛细胞瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、肾癌、喉癌、唇及口腔癌症、肝癌、小叶原位癌(LCIS)、肺癌、淋巴瘤、原发性隐匿的转移性鳞状颈癌、中线道癌、口腔癌、多发性内分泌瘤症候群、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样霉菌病、骨髓发育不良症候群、脊髓发育不良/骨髓增生赘瘤、多发性骨髓瘤、梅克尔细胞癌、恶性间皮瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤及骨肉瘤、鼻腔及鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、口腔癌、唇及口腔癌、口咽癌、卵巢癌、胰腺癌、乳头状瘤症、副神经节瘤、副鼻窦及鼻腔癌症、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经是统(CNS)淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌、胃(stomach/gastric)癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤及胸腺癌、甲状腺癌、肾盂及输尿管的移行细胞癌症、滋养细胞肿瘤、儿童罕见癌症、尿道癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌或病毒诱发的癌症。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗非癌性过度增生性病症，例如皮肤(例如牛皮癣)、再狭窄或前列腺(例如良性前列腺肥大(BPH))的良性增生。
在一些实施方案中，治疗方法为针对治疗肺癌，且所述方法包含向有需要的个体施用治疗有效量的本公开化合物(或包含此类化合物的药物组合物)。在某些实施方案中，肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC)，例如腺癌、鳞状细胞肺癌或大细胞肺癌。在一些实施方案中，肺癌为小细胞肺癌。式(I)化合物可提供治疗益处的其他肺癌包括但不限于腺肿瘤、类癌及未分化癌瘤。
本公开还提供通过使蛋白质与有效量的式(I)化合物接触来调节突变KRAS、HRAS或NRAS蛋白活性(例如，由KRAS G12C突变产生的活性)的方法。调节可为抑制或活化蛋白质活性。在一些实施方案中，本公开提供通过使突变KRAS、HRAS或NRAS蛋白(例如，由KRASG12C突变产生的活性)与有效量的式(I)化合物在溶液中接触来抑制蛋白质活性的方法。在一些实施方案中，本公开提供通过接触表现所关注蛋白质的细胞、组织或器官来抑制突变KRAS、HRAS或NRAS蛋白活性的方法。在一些实施方案中，本公开提供通过向个体施用有效量的式(I)化合物来抑制包括但不限于啮齿动物及哺乳动物(例如人类)的个体中的蛋白质活性的方法。
组合疗法
一种或多种额外药理学活性剂可与式(I)化合物(或其药学上可接受的盐)组合施用。额外活性剂(一种或多种活性剂)旨在表示在体内具有活性的药物活性剂(一种或多种活性剂)，包括在施用后转化为药学上活性形式的前药，其不同于式(I)化合物。额外活性剂还包括所述额外活性剂的游离酸、游离碱及药学上可接受的盐。通常，任何一种或多种适合的额外活性剂，包括化学治疗剂或治疗抗体，可与式(I)化合物以单一剂量制剂(例如固定剂量药物组合)，或以一种或多种单独的剂量制剂以任何组合形式使用，所述一种或多种单独的剂量制剂允许同时或依序向个体施用活性剂(联施用单独活性剂)。另外，式(I)化合物(或其药学上可接受的盐)可与放射疗法、激素疗法、手术或免疫疗法组合施用。
本申请还提供用于组合疗法的方法，其中已知额外活性剂调节其他路径、或相同路径的其他组分、或甚至重叠目标酶组，其与式(I)化合物或其药学上可接受的盐组合使用。在一个实施方案中，此类疗法包括但不限于一种或多种式(I)化合物与化学治疗剂、免疫治疗剂、激素及抗激素剂、靶向治疗剂及抗血管生成剂的组合以提供协同或累加治疗效果。在另一个实施方案中，此类疗法包括放射治疗以提供协同或累加治疗效果。
额外活性剂(即额外抗癌剂)的实施例包括化学治疗剂(例如细胞毒性剂)、免疫治疗剂、激素及抗激素剂、靶向治疗剂及抗血管生成剂。许多抗癌剂可归类为此类群组中的一种或多种。尽管本文中已将某些抗癌剂分类于特定群组或子组内，但许多此类剂还可列于一个或多个其他群组或子组内，如目前在本领域中将理解。应理解，特定剂在本文中分类成特定群组并不旨在为限制性的。许多抗癌剂目前在本领域中是已知的且可与本公开化合物组合使用。
此外，剂可为激动剂、拮抗剂、立体异位调节剂、毒素，或更一般地，可用来抑制或刺激其标靶(例如受体或酶活化或抑制)。例如，适合使用的为一种或多种特异性结合且抑制生长因子活性的剂(例如抗体、抗原结合区或可溶性受体)，例如肝细胞生长因子(HGF，也称为散射因子)的拮抗剂，及特异性结合其受体“c-met”的抗体或抗原结合区。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为化学治疗剂、免疫治疗剂、激素剂、抗激素剂、靶向治疗剂或抗血管生成剂(或血管生成抑制剂)。在一个实施方案中，额外抗癌剂选自由以下组成的组：化学治疗剂、有丝分裂抑制剂、植物生物碱、烷基化剂、抗代谢物、铂类似物、酶、拓扑异构酶抑制剂、类视黄素、氮丙啶、抗生素、激素剂、抗激素剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、抗肾上腺剂、雄激素剂、靶向治疗剂、免疫治疗剂、生物反应调节剂、细胞介素抑制剂、肿瘤疫苗、单克隆抗体、免疫检查点抑制剂、抗PD-1剂、抗PD-L1剂、群落刺激因子、免疫调节剂、免疫调节酰亚胺(IMiD)、抗CTLA4剂、抗LAGl剂、抗OX40剂、GITR激动剂、CAR-T细胞、BiTE、信号转导抑制剂、生长因子抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、EGFR抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、蛋白酶体抑制剂、细胞周期抑制剂、抗血管生成剂、基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂、肝细胞生长因子抑制剂、TOR抑制剂、KDR抑制剂、VEGF抑制剂、HIF-1α抑制剂、HIF-2α抑制剂、纤维母细胞生长因子(FGF)抑制剂、RAF抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、MCL-1抑制剂、BCL-2抑制剂、SHP2抑制剂、HER-2抑制剂、BRAF抑制剂、基因表达调节剂、自噬抑制剂、细胞凋亡诱导剂、抗增生剂及糖酵解抑制剂。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为化学治疗剂。化学治疗剂的非限制性实施例包括有丝分裂抑制剂及植物生物碱、烷基化剂、抗代谢物、铂类似物、酶、拓扑异构酶抑制剂、类视黄素、氮丙啶及抗生素。
有丝分裂抑制剂及植物生物碱的非限制性实施例包括紫杉烷，例如卡巴他赛(cabazitaxel)、多西他赛(docetaxel)、拉洛他赛(larotaxel)、奥他赛(ortataxel)、太平样紫杉醇(paclitaxel)及替司他赛(tesetaxel)；地美可辛(demecolcine)；埃坡霉素(epothilone)；艾瑞布林(eribulin)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)；纳维瑞滨(navelbine)；诺斯卡品(noscapine)；替尼泊苷(teniposide)；噻立拉斯汀(thaliblastine)；长春碱(vinblastine)；长春新碱(vincristine)；长春地辛(vindesine)；长春氟宁(vinflunine)；及长春瑞滨(vinorelbine)。
烷基化剂的非限制性实施例包括氮芥，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺、胞磷烷(cytophosphane)、雌氮芥(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甘露醇氮芥(mannomustine)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、三(2-氯乙基)胺、曲磷胺(trofosfamide)及尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；亚硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)、链佐霉素(streptozotocin)及TA-07、乙烯亚胺及甲基三聚氰胺，例如六甲蜜胺(altretamine)、噻替派(thiotepa)、曲他胺(triethylenemelamine)、三乙烯基硫代磷酰胺、三乙烯基磷酰胺及三甲基三聚氰胺；胺莫司汀(ambamustine)；苯达莫司汀(bendamustine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；依托格鲁(etoglucid)；伊洛福芬(irofulven)；马磷酰胺(mafosfamide)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；丙卡巴肼(procarbazine)；替莫唑胺(temozolomide)；曲奥舒凡(treosulfan)；及三亚胺醌(triaziquone)。
抗代谢物的非限制性实施例包括叶酸类似物，例如氨基喋呤(aminopterin)、迪诺特宁(denopterin)、依达曲沙(edatrexate)、甲氨喋呤(methotrexate)、蝶罗呤(pteropterin)、雷替曲塞(raltitrexed)及曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、氟达拉宾(fludarabine)、佛罗得辛(forodesine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)及硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-氮尿苷、安西他滨(ancitabine)、氮胞苷(azacytidine)、卡培他滨(capecitabine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、地西他滨(decitabine)、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifiuridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、加洛他滨(galocitabine)、吉西他滨(gemcitabine)及沙帕他滨(sapacitabine)、3-氨基吡啶-2-甲醛硫半卡巴肼；溴尿苷(broxuridine)；克拉屈滨(cladribine)；环磷酰胺；阿糖胞苷(cytarabine)；乙嘧替氟(emitefur)；羟基尿素；巯基嘌呤；奈拉滨(nelarabine)；培美曲塞(pemetrexed)；喷司他丁(pentostatin)；喃氟啶(tegafur)；及曲沙他滨(troxacitabine)。
铂类似物的非限制性实施例包括卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、二环铂(dicycloplatin)、庚铂(heptaplatin)、洛铂(lobaplatin)、奈达铂(nedaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、赛特铂(satraplatin)及四硝酸三铂(triplatin tetranitrate)。
酶的非限制性实施例包括天冬酰胺酶(asparaginase)及培门冬酶(pegaspargase)。
拓扑异构酶抑制剂的非限制性实施例包括吖啶甲酰胺、胺萘非特(amonafide)、安吖啶(amsacrine)、贝洛替康(belotecan)、依利醋铵(elliptinium acetate)、依昔替康(exatecan)、吲哚并咔唑(indolocarbazole)、伊立替康(irinotecan)、勒托替康(lurtotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone)、雷佐生(razoxane)、卢比替康(rubitecan)、SN-38、索布佐生(sobuzoxane)及拓朴替康(topotecan)。
类视黄素的非限制性实施例包括阿维利甲酸(alitretinoin)、贝瑟罗汀(bexarotene)、非瑞替尼(fenretinide)、异维甲酸(isotretinoin)、利阿唑(liarozole)、RII瑞汀酰胺(retinamide)及维甲酸。
氮丙啶的非限制性实施例包括苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)。
抗生素的的非限制性实施例包括插层抗生素；蒽二酮；蒽环霉素抗生素，例如阿克拉霉素(aclarubicin)、胺柔比星(amrubicin)、柔红霉素(daunomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、小红莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、艾达霉素(idarubicin)、美诺立尔(menogaril)、诺加霉素(nogalamycin)、吡柔比星(pirarubicin)及伐柔比星(valrubicin)；6-重氮-5-氧代苯-L-正白氨酸；阿克拉霉素(aclacinomysin)；放射菌素(actinomycin)；安曲霉素(authramycin)；偶氮丝氨酸(azaserine)；博来霉素(bleomycin)；放线菌素C(cactinomycin)；卡奇霉素(calicheamicin)；卡拉比辛(carabicin)；洋红霉素(carminomycin)；嗜癌菌素(carzinophilin)；色霉素(chromomycin)；放线菌素D(dactinomycin)；地托比星(detorubicin)；依索比星(esorubicin)；埃斯波霉素(esperamicin)；格尔德霉素(geldanamycin)；麻西罗霉素(marcellomycin)；丝裂霉素(mitomycin)；丝裂霉素C；霉酚酸；橄榄霉素(olivomycin)；诺凡特龙(novantrone)；培洛霉素(peplomycin)；泊非罗霉素(porfiromycin)；泼非霉素(potfiromycin)；嘌呤霉素(puromycin)；奎那霉素(quelamycin)；蝴蝶霉素(rebeccamycin)；罗多比星(rodorubicin)；链黑菌素(streptonigrin)；链脲菌素(streptozocin)；坦螺旋霉素(tanespimycin)；杀结核菌素(tubercidin)；乌苯美司(ubenimex)；净司他丁(zinostatin)；净司他丁司他美(zinostatin stimalamer)；及左柔比星(zorubicin)。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为激素及/或抗激素剂(即激素疗法)。激素及抗激素剂的非限制性实施例包括抗雄激素剂，例如阿比特龙(abiraterone)、阿帕鲁胺(apalutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、达洛鲁胺(darolutamide)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、氟他胺(flutamide)、戈舍瑞林(goserelin)、亮丙立德(leuprolide)及尼鲁胺(nilutamide)；抗雌激素剂，例如4-羟基他莫昔芬(tamoxifen)、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、EM-800、磷雌酚(fosfestrol)、氟维司群(fulvestrant)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)、雷诺昔酚(raloxifene)、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)及曲沃昔芬(trioxifene)；抗肾上腺剂，例如胺鲁米特(aminoglutethimide)、右旋胺鲁米特(dexaminoglutethimide)、米托坦(mitotane)及曲洛司坦(trilostane)；雄激素，例如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)及睾内酯(testolactone)；阿巴瑞克(abarelix)；阿那曲唑(anastrozole)；西曲瑞克(cetrorelix)；德舍瑞林(deslorelin)；依西美坦(exemestane)；法屈唑(fadrozole)；非那雄安(finasteride)；福美司坦(formestane)；组氨瑞林(histrelin)(RL 0903)；人类绒毛膜激性腺素；兰瑞肽(lanreotide)；LDI 200(Milkhaus)；来曲唑(letrozole)；亮丙瑞林(leuprorelin)；米非司酮(mifepristone)；那法瑞林(nafarelin)；萘氧啶(nafoxidine)；奥沙特隆(osaterone)；泼尼松(prednisone)；促甲状腺激素α及曲普瑞林(triptorelin)。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为免疫治疗剂(即，免疫疗法)。免疫治疗剂的非限制性实施例包括生物反应调节剂、细胞介素抑制剂、肿瘤疫苗、单克隆抗体、免疫检查点抑制剂、群落刺激因子及免疫调节剂。
包括例如干扰素及白介素的细胞介素抑制剂(细胞介素)的生物反应调节剂的非限制性实施例包括干扰素α/干扰素α，例如干扰素α-2、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-nl、干扰素α-n3、干扰素α-1、聚乙二醇干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b及白细胞α干扰素；干扰素β，例如干扰素β-1a及干扰素β-1b；干扰素γ，例如天然干扰素γ-1a及干扰素γ-1b；阿地白介素(aldesleukin)；白介素-1β；白介素-2；奥普瑞白介素(oprelvekin)；索纳明(sonermin)；他索那明(tasonermin)；及维力金(virulizin)。
肿瘤疫苗的非限制性实施例包括APC 8015、AVICINE、膀胱癌疫苗、癌症疫苗(Biomira)、胃泌素17免疫原、丸山疫苗、黑色素瘤溶解物疫苗、黑色素瘤肿瘤溶解剂疫苗(New York Medical College)、黑色素瘤疫苗(New York University)、黑色素瘤疫苗(Sloan Kettering Institute)、BCG(Bacillus Calmette-Guerin)及病毒黑色素瘤细胞溶解物疫苗(Royal Newcastle Hospital)。
单克隆抗体的非限制性实施例包括阿巴伏单抗(abagovomab)、阿达木单抗(adecatumumab)、阿柏西普(aflibercept)、阿仑单抗(alemtuzumab)、博纳吐单抗(blinatumomab)、贝伦妥单抗维多汀(brentuximab vedotin)、CA 125MAb(Biomira)、癌症MAb(Japan Pharmaceutical Development)、达利珠单抗(daclizumab)、达雷木单抗(daratumumab)、德诺单抗(denosumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、吉妥单抗奥唑米星(gemtuzumab zogamicin)、HER-2及Fc MAb(Medarex)、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、个体基因型105AD7 MAb(CRC Technology)、个体基因型CEA MAb(Trilex)、伊派利单抗(ipilimumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、LYM-1-碘131MAb(Techni clone)、米妥莫单抗(mitumomab)、莫昔土莫单抗(moxetumomab)、奥伐木单抗(ofatumumab)、多晶型上皮黏蛋白-钇90MAb(Antisoma)、兰比珠单抗(ranibizumab)、利妥昔单抗(rituximab)及曲妥珠单抗(trastuzumab)。
免疫检查点抑制剂的非限制性实施例包括抗PD-1剂或抗体，例如测米匹单抗(cemiplimab)、纳武单抗(nivolumab)及派立珠单抗(pembrolizumab)；抗PD-L1剂或抗体，例如阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)及德瓦鲁单抗(durvalumab)；抗CTLA-4剂或抗体，例如易普单抗(ipilumumab)；抗LAG1剂；及抗OX40剂。
群落刺激因子的非限制性实施例包括阿法达贝泊汀(darbepoetin alfa)、阿法依泊汀(epoetin alfa)、倍他依泊汀(epoetin beta)、非格司亭(filgrastim)、颗粒球巨噬细胞群落刺激因子、来格司亭(lenograstim)、来立司亭(leridistim)、米立司亭(mirimostim)、莫拉司亭(molgramostim)、那托司亭(nartograstim)、派非格司亭(pegfilgrastim)及沙格司亭(sargramostim)。
额外免疫治疗剂的非限制性实施例包括BiTE、CAR-T细胞、GITR激动剂、咪喹莫特(imiquimod)、免疫调节酰亚胺(IMiD)、失配双股RNA(Ampligen)、雷西莫特(resiquimod)、SRL 172及胸腺法新(thymalfasin)。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为靶向治疗剂(即，靶向疗法)。靶向治疗剂包括例如单克隆抗体及小分子药物。靶向治疗剂的非限制性实施例包括信号转导抑制剂、生长因子抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、EGFR抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、蛋白酶体抑制剂、细胞周期抑制剂、血管生成抑制剂、基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂、肝细胞生长因子抑制剂、TOR抑制剂、KDR抑制剂、VEGF抑制剂、纤维母细胞生长因子(FGF)抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、MCL-1抑制剂、BCL-2抑制剂、SHP2抑制剂、HER-2抑制剂、BRAF抑制剂、基因表达调节剂、自噬抑制剂、细胞凋亡诱导剂、抗增生剂及糖酵解抑制剂。
信号转导抑制剂的非限制性实施例包括酪氨酸激酶抑制剂、多重激酶抑制剂、安罗替尼(anlotinib)、阿瓦替尼(avapritinib)、阿西替尼(axitinib)、达沙替尼(dasatinib)、多韦替尼(dovitinib)、伊马替尼(imatinib)、乐伐替尼(lenvatinib)、氯尼达明(lonidamine)、尼罗替尼(nilotinib)、尼达尼布(nintedanib)、帕唑尼布(pazopanib)、派格索曼(pegvisomant)、普纳替尼(ponatinib)、凡德他尼(vandetanib)及EGFR抑制剂。
EGFR抑制剂的非限制性实施例包括EGFR的小分子拮抗剂，例如阿法替尼(afatinib)、布加替尼(brigatinib)、埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)及奥希替尼(osimertinib)；及基于抗体的EGFR抑制剂，包括可通过其天然配位体部分或完全阻断EGFR活化的任何抗EGFR抗体或抗体片段。基于抗体的EGFR抑制剂可包括例如描述于Modjtahedi,H.,等人，1993，Br.J.Cancer 67:247-253；Teramoto,T.,等人，1996，Cancer 77:639-645；Goldstein等人，1995，Clin.Cancer Res.1:1311-1318；Huang,S.M.,等人，1999，Cancer Res.15:59(8):1935-40；及Yang,X.,等人，1999，CancerRes.59:1236-1243中的抑制剂；单克隆抗体Mab E7.6.3(Yang，1999，见上文)；Mab C225(ATCC寄存编号HB-8508)，或具有其结合特异性的抗体或抗体片段；特异性反义核苷酸或siRNA；阿法替尼(afatinib)、西妥昔单抗(cetuximab)；马妥珠单抗(matuzumab)；莱西单抗(necitumumab)；尼妥珠单抗(nimotuzumab)；帕尼单抗(panitumumab)；及扎鲁姆单抗(zalutumumab)。
组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂的非限制性实施例包括贝林诺他(belinostat)、帕比诺他(panobinostat)、罗米地辛(romidepsin)及伏立诺他(vorinostat)。
蛋白酶体抑制剂的非限制性实施例包括硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib)、依萨佐米(ixazomib)、马瑞佐米(marizomib)(盐孢菌素(salinosporamide)a)及奥普洛佐米(oprozomib)。
包括CDK抑制剂的细胞周期抑制剂的非限制性实施例包括阿贝力布(abemaciclib)、阿昔迪布(alvocidib)、帕柏西利(palbociclib)及利波西利(ribociclib)。
在一个实施方案中，额外抗癌剂为抗血管生成剂(或血管生成抑制剂)，包括但不限于基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂；VEGF抑制剂；EGFR抑制剂；TOR抑制剂，例如依维莫司(everolimus)及坦罗莫司(temsirolimus)；PDGFR激酶抑制剂，例如克诺拉尼(crenolanib)；HIF-lα抑制剂，例如PX 478；HIF-2α抑制剂，例如贝聚替凡(belzutifan)及描述于WO 2015/035223中的HIF-2α抑制剂；纤维母细胞生长因子(FGF)或FGFR抑制剂，例如B-FGF及RG 13577；肝细胞生长因子抑制剂；KDR抑制剂；抗Ang1剂及抗Ang2剂；抗Tie2激酶抑制剂；Tek拮抗剂(US 2003/0162712；US 6,413,932)；抗TWEAK剂(US 6,727,225)；用以拮抗整合素与其配位体的结合的ADAM解联整合素域(US 2002/0042368)；抗eph受体及/或抗肝配蛋白抗体或抗原结合区(US 5,981,245；5,728,813；5,969,110；6,596,852；6,232,447；及6,057,124)；及抗PDGF-BB拮抗剂以及特异性结合于PDGF-BB配位体的抗体或抗原结合区。
基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂的非限制性实施例包括MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂、MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂、普啉司他(prinomastat)、RO 32-3555及RS 13-0830。可用基质金属蛋白酶抑制剂的实施例描述于例如WO 96/33172、WO 96/27583、EP1004578、WO 98/07697、WO 98/03516、WO 98/34918、WO 98/34915、WO 98/33768、WO 98/30566、EP 0606046、EP 0931788、WO 90/05719、WO 99/52910、WO 99/52889、WO 99/29667、WO 1999/007675、EP 1786785、EP 1181017、US 2009/0012085、US 5,863,949、US 5,861,510及EP 0780386中。优选地的MMP-2及MMP-9抑制剂为具有极小或无抑制MMP-1的活性的那些。更优选地为相对于其他基质金属蛋白酶(即，MAP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-ll、MMP-12及MMP-13)抑制MMP-2及/或MMP-9的抑制剂。
VEGF及VEGFR抑制剂的非限制性实施例包括贝伐单抗(bevacizumab)、西地尼布(cediranib)、CEP 7055、CP 547632、KRN 633、奥兰替尼(orantinib)、帕佐泮尼(pazopanib)、派加替尼(pegaptanib)、派加替尼八钠、司马沙尼(semaxanib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、VEGF拮抗剂(Borean,Denmark)及VEGF-TRAPTM。
额外抗癌剂还可为另一抗血管生成剂，包括但不限于2-甲氧雌二醇、AE 941、阿仑单抗(alemtuzumab)、α-D148 Mab(Amgen,US)、艾普士他汀(alphastatin)、醋酸阿奈可他(anecortave acetate)、血管生成素(angiocidin)、血管生成抑制剂(SUGEN,US)、血管生长抑素、抗Vn Mab(Crucell,Netherlands)、阿替莫德(atiprimod)、阿西替尼(axitinib)、AZD9935、BAY RES 2690(Bayer,Germany)、BC 1(Genoa Institute of Cancer Research,Italy)、贝洛尼布(beloranib)、氟草胺(benefin)(Lane Labs,US)、卡博替尼(cabozantinib)、CDP 791(Celltech Group,UK)、软骨素酶(chondroitinase)AC、西仑吉肽(cilengitide)、康柏斯达汀(combretastatin)A4前药、CP 564959(OSI,US)、CV247、CYC381(Harvard University,US)、E 7820、EHT 0101、内皮生长抑素(endostatin)、恩扎妥林盐酸盐(enzastaurin hydrochloride)、ER-68203-00(IVAX,US)、血纤维蛋白原-E(fibrinogen-E)片段、Flk-1(ImClone Systems,US)、FLT 1的形式(VEGFR 1)、FR-111142、GCS-100、GW 2286(GlaxoSmithKline,UK)、IL-8、伊洛马司他(ilomastat)、IM-862、伊索拉定(irsogladine)、KM-2550(Kyowa Hakko,Japan)、来那度胺(lenalidomide)、乐伐替尼(lenvatinib)、第二代MAbα5β3整合素(Applied Molecular Evolution,USA及Medlmmune,US)、MAb VEGF(Xenova,UK)、马立马司他(marimastat)、马斯平(maspin)(Sosei,Japan)、美他汀(metastatin)、莫托帕明(motuporamine)C、M-PGA、奥瑞布林(ombrabulin)、OXI4503、PI 88、血小板因子4、PPI 2458、雷莫芦单抗(ramucirumab)、rBPI 21及BPI衍生的抗血管生成剂(XOMA,US)、瑞戈非尼(regorafenib)、SC-236、SD-7784(Pfizer,US)、SDX 103(University of California，San Diego,US)、SG 292(Telios,US)、SU-0879(Pfizer,US)、TAN-1120、TBC-1635、特伐替尼(tesevatinib)、四硫钼酸盐、沙利度胺(thalidomide)、凝血栓蛋白1抑制剂、Tie-2配体(Regeneron,US)、组织因子路径抑制剂(EntreMed,US)、肿瘤坏死因子-α抑制剂、肿瘤抑素(tumstatin)、TZ 93、尿激酶纤维蛋白溶酶原活化物抑制剂、瓦迪美占(vadimezan)、凡德他尼(vandetanib)、血管新生抑制素(vasostatin)、凡塔蓝尼(vatalanib)、VE-钙黏素-2拮抗剂、束骨姜黄醇(xanthorrhizol)、XL 784(Exelixis,US)、塞维-阿柏西普(ziv-aflibercept)及ZD 6126。
在实施方案中，额外抗癌剂为干扰或抑制RAS-RAF-ERK或PI3K-AKT-TOR信号传导路径的额外活性剂或为PD-1及/或PD-L1拮抗剂。在实施方案中，额外抗癌剂为RAF抑制剂、EGFR抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂、PI3K抑制剂、AKT抑制剂、TOR抑制剂、MCL-1抑制剂、BCL-2抑制剂、SHP2抑制剂、蛋白酶体抑制剂或免疫疗法，包括单克隆抗体、免疫调节酰亚胺(IMiD)、抗PD-1剂、抗PDL-1剂、抗CTLA4剂、抗LAGl剂及抗OX40剂、GITR激动剂、CAR-T细胞及BiTE。
RAF抑制剂的非限制性实施例包括达拉非尼(dabrafenib)、恩拉非尼(encorafenib)、瑞戈非尼(regorafenib)、索拉非尼(sorafenib)及维罗非尼(vemurafenib)。
MEK抑制剂的非限制性实施例包括毕尼替尼(binimetinib)、CI-1040、考比替尼(cobimetinib)、PD318088、PD325901、PD334581、PD98059、瑞法美替尼(refametinib)、司美替尼(selumetinib)及曲美替尼(trametinib)。
ERK抑制剂的非限制性实施例包括如WO 2017/068412中所描述的LY3214996、LTT462、MK-8353、SCH772984、来福替尼(ravoxertinib)、优立替尼(ulixertinib)及ERKi。
PI3K抑制剂的非限制性实施例包括17-羟基渥曼青霉素类似物(例如WO 06/044453)；AEZS-136；阿培利司(alpelisib)；AS-252424；布帕昔布(buparlisib)；CAL263；考班昔布(copanlisib)；CUDC-907；达妥昔布(dactolisib)(WO 06/122806)；去甲氧基绿胶霉素(demethoxyviridin)；杜韦力西布(duvelisib)；GNE-477；GSK1059615；IC87114；艾德昔布(idelalisib)；INK1117；LY294002；Palomid 529；帕夏昔布(paxalisib)；哌立福新(perifosine)；PI-103；PI-103盐酸盐；皮克立西(pictilisib)(例如WO 09/036,082；WO09/055,730)；PIK 90；PWT33597；SF1126；索诺昔布(sonolisib)；TGI 00-115；TGX-221；XL147；XL-765；渥曼青霉素；及ZSTK474。
AKT抑制剂的非限制性实施例包括Akt-1-1(抑制Aktl)(Barnett等人(2005)Biochem.J.,385(Pt.2),399-408)；Akt-1-1,2(Barnett等人(2005)Biochem.J.385(Pt.2),399-408)；API-59CJ-Ome(例如Jin等人(2004)Br.J.Cancer 91,1808-12)；l-H-咪唑并[4,5-c]吡啶基化合物(例如WO05011700)；吲哚-3-甲醇及其衍生物(例如美国专利第6,656,963号；Sarkar及Li(2004)J Nutr.134(12增刊),3493S-3498S)；哌立福新(perifosine)，Dasmahapatra等人(2004)Clin.Cancer Res.10(15),5242-52,2004)；磷脂酰环己六醇醚脂质类似物(例如Gills及Dennis(2004)Expert.Opin.Investig.Drugs13,787-97)；曲西立滨(triciribine)(Yang等人(2004)Cancer Res.64,4394-9)；咪唑并噁草酮，包括反-3-氨基-1-甲基-3-[4-(3-苯基-5H-咪唑并[1,2-c]吡啶并[3,4-e][1,3]噁嗪-2-基)苯基]-环丁醇盐酸盐(WO 2012/137870)；阿弗替布(afuresertib)；卡瓦替布(capivasertib)；MK2206；及帕塞替布(patasertib)。
TOR抑制剂的非限制性实施例包括德佛利姆(deforolimus)；ATP-竞争性TORC1/TORC2抑制剂，包括PI-103、PP242、PP30及托林(Torin)1；FKBP12增强剂中的TOR抑制剂、雷帕霉素(rapamycin)及其衍生物，包括坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、WO 9409010；雷帕霉素类似物(rapalog)，例如，如WO98/02441及WO 01/14387中所公开，例如AP23573、AP23464或AP23841；40-(2-羟基乙基)雷帕霉素、40-[3-羟基(羟基甲基)甲基丙酸酯]-雷帕霉素；40-表-(四唑基)-雷帕霉素(也被称作ABT578)；32-去氧雷帕霉素；16-戊炔基氧基-32(S)-二氢雷帕霉素，及WO 05/005434中所公开的其他衍生物；US 5,258,389、WO 94/090101、WO 92/05179、US 5,118,677、US 5,118,678、US 5,100,883、US 5,151,413、US 5,120,842、WO 93/111130、WO 94/02136、WO 94/02485、WO 95/14023、WO 94/02136、WO95/16691、WO 96/41807、WO 96/41807及US 5,256,790中所公开的衍生物；及含磷雷帕霉素衍生物(例如WO 05/016252)。
MCL-1抑制剂的非限制性实施例包括AMG-176、MIK665及S63845。
SHP2抑制剂的非限制性实施例包括WO 2019/167000及WO 2020/022323中所描述的SHP2抑制剂。
适合使用的抗癌剂的额外非限制性实施例包括2-乙基酰肼、2,2’,2"-三氯三乙胺、ABVD、醋葡醛内酯(aceglatone)、醋孟南(acemannan)、醛磷酰胺醣苷、艾法雷啶(alpharadin)、阿米福汀(amifostine)、氨基乙酰丙酸、阿那格雷(anagrelide)、ANCER、安西司亭(ancestim)、抗CD22免疫毒素、抗癌变草药、阿帕兹醌(apaziquone)、阿格拉宾(arglabin)、三氧化二砷、硫唑嘌呤(azathioprine)、BAM 002(Novelos)、bcl-2(Genta)、贝斯布西(bestrabucil)、比立考达(biricodar)、比山群(bisantrene)、溴麦角环肽(bromocriptine)、布洛利辛(brostallicin)、苔藓虫素(bryostatin)、丁硫氨酸磺基肟(buthionine sulfoximine)、花萼海绵诱癌素(calyculin)、细胞周期非特异性抗肿瘤剂、西莫白介素(celmoleukin)、氯屈膦酸盐(clodronate)、克氯霉唑(clotrimazole)、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabine ocfosfate)、DA 3030(Dong-A)、得弗伐胺(defofamine)、地尼白介素(denileukin diftitox)、右雷佐生(dexrazoxane)、地吖醌(diaziquone)、二氯乙酸、地拉齐普(dilazep)、迪斯德莫来(discodermolide)、多可沙诺(docosanol)、度骨化醇(doxercalciferol)、依地福新(edelfosine)、依洛尼塞(eflornithine)、EL532(Elan)、依氟鸟氨酸(elfomithine)、依沙芦星(elsamitrucin)、恩尿嘧啶(eniluracil)、依他哒唑(etanidazole)、依昔舒林(exisulind)、氟鲁吉喏(ferruginol)、叶酸补充剂(例如亚叶酸)、加西托星(gacytosine)、硝酸镓、吉美拉西(gimeracil)/奥特拉西(oteracil)/喃氟啶(tegafur)组合(S-1)、吉可平(glycopine)、组胺二盐酸盐、HIT双氯芬酸、HLA-B7基因疗法(Vical)、人胚胎α胎蛋白、伊班膦酸盐(ibandronate)、伊班膦酸(ibandronic acid)、ICE化疗方案、伊美克(imexon)、碘苄胍(iobenguane)、IT-101(CRLX101)、拉尼喹达(laniquidar)、LC 9018(Yakult)、来氟米特(leflunomide)、磨菇多糖(lentinan)、左旋咪唑(levamisole)+氟尿嘧啶(fluorouracil)、洛伐他汀(lovastatin)、甲硫蒽酮(lucanthone)、马索罗酚(masoprocol)、美拉胂醇(melarsoprol)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、米替福新(miltefosine)、米泼昔芬(miproxifene)、米托胍腙(mitoguazone)、米托唑胺(mitozolomide)、莫哌达醇(mopidamol)、莫特沙芬钆(motexafingadolinium)、MX6(Galderma)、纳洛酮(naloxone)+戊唑星(pentazocine)、硝基可润(nitracrine)、诺拉曲特(nolatrexed)、NSC 631570奥曲肽(octreotide)(Ukrain)、奥拉帕尼(olaparib)、P-30蛋白、PAC-1、帕利夫明(palifermin)、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕米膦酸(pamidronic acid)、戊聚糖聚硫酸钠、苯来美特(phenamet)、毕西巴尼(picibanil)、匹蒽醌(pixantrone)、铂、鬼臼酸(podophyllinic acid)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、PSK(多醣-K)、兔抗胸腺细胞多株抗体、拉布立实施方案(rasburiembodiment)、视黄酸、铼Re 186依替膦酸盐(etidronate)、罗莫肽(romurtide)、钐(153Sm)来昔决南衫(lexidronam)、西索菲兰(sizofiran)、苯基乙酸钠、膦门冬酸(sparfosic acid)、螺旋锗、氯化锶-89、苏拉明(suramin)、苦马豆素(swainsonine)、他拉泊芬(talaporfin)、塔利奎达(tariquidar)、他扎罗汀(tazarotene)、喃氟啶-尿嘧啶(tegafur-uracil)、替莫泊芬(temoporfin)、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)、四氯十氧化物、血小板生成素、乙基艾迪普林锡(tin ethyl etiopurpurin)、替拉扎明(tirapazamine)、TLC ELL-12、托西莫单抗(tositumomab)-碘131、曲氟尿苷(trifluridine)及替吡嘧啶(tipiracil)组合、肌钙蛋白(troponin)I(Harvard University,US)、尿烷、伐司扑达(valspodar)、维替泊芬(verteporfin)、唑来膦酸(zoledronic acid)及唑苏达(zosuquidar)。
本公开进一步提供一种使用本文所提供的式(I)化合物或药物组合物与放射疗法的组合来治疗癌症的方法。本领域中已知施用放射疗法的技术，且这些技术可用于本文所描述的组合疗法。式(I)化合物在此组合疗法中的施用可如本文中所描述来确定。
放射疗法可通过多种方法中的一种或方法组合来施用，包括但不限于外射束疗法、内放射疗法、植入物放射、立体定向放射外科手术、全身放射疗法、放射疗法及持久性或暂时性间质性近接疗法。如本文所使用，术语“近接疗法”是指通过在肿瘤或其他增生性组织疾病部位处或附近插入体内的空间围束放射性物质所递送的放射疗法。所述术语旨在包括但不限于暴露于放射性同位素(例如At-211、I-131、I-125、Y-90、Re-186、Re-188、Sm-153、Bi-212、P-32及Lu的放射性同位素)。适用于本公开的细胞调节剂的适合的放射源包括固体及液体二者。作为非限制性实施例，放射源可为放射性核素，例如作为固体源的I-125、I-131、Yb-169、Ir-192、作为固体源的I-125，或发射光子、β粒子、γ放射线或其他治疗射线的其他放射性核素。放射性物质还可为由放射性核素的任何溶液(例如I-125或I-131的溶液)制备的流体，或放射性流体可使用含有较小固体放射性核素(例如Au-198、Y-90)粒子的适合的流体的浆液制备。此外，放射性核素可包含于凝胶或放射性微球体中。
本公开还提供用于组合疗法的方法，其中已知额外活性剂调节其他路径、或相同路径的其他组分、或甚至重叠目标酶组，其与式(I)化合物或其药学上可接受的盐组合使用。在一个实施方案中，此类疗法包括但不限于一种或多种式(I)化合物与化学治疗剂、免疫治疗剂、激素治疗剂、治疗性抗体、靶向治疗剂及放射治疗的组合以提供协同或累加治疗效果。
根据所治疗的病状，本公开化合物可与本文所公开的剂或其他适合的剂组合使用。因此，在一些实施方案中，一种或多种本公开化合物将与如上文所描述的其他剂共同施用。当用于组合疗法中时，本文所描述的化合物与第二剂同时或分开施用。所述组合施用可包括两种剂以同一剂型同时施用、以单独剂型同时施用，及分开施用。即，式(I)化合物及上文所描述的任何剂可一起调配于同一剂型中且同时施用。替代地，式(I)化合物及上文所描述的任何剂可同时施用，其中两种剂存在于单独剂型中。在另一个替代方案中，式(I)化合物可仅在上文所描述的任何剂之后施用，或反之亦然。在单独施用方案的一些实施方案中，式(I)化合物及上文所描述的任何剂相隔几分钟、或相隔几小时、或相隔几天施用。
由于本公开的一个方面使用可分开施用的药学上活性化合物的组合治疗疾病/病状，本公开进一步涉及以试剂盒形式组合单独的药物组合物。试剂盒包含两种单独的药物组合物：式(I)化合物及第二药物化合物。所述试剂盒包含用于容纳单独组合物的容器，例如分开的瓶或分开的箔片包装。容器的额外实施例包括注射器、盒子及袋子。在一些实施方案中，试剂盒包含单独组分的使用说明。当单独组分优选地以不同剂型(例如，经口及非经肠)施用时，以不同施用时间间隔施用时或当处方健康护理专业人员需要滴定组合的个别组分时，所述试剂盒形式尤其有利。
本公开还提供用于疗法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或式(I)化合物或其药学上可接受的盐在疗法中的用途。本公开还提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗癌症的用途。本公开还提供用于制备供治疗癌症用的剂的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，或式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制备供治疗癌症用的剂的用途。本公开还提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂，或式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂用于治疗癌症的用途。本公开还提供用于制备供治疗癌症用的剂的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂，或式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂用于制备供治疗癌症用的剂的用途。本公开还提供一种用于治疗癌症的包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂的药物组合物，或包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂的药物组合物用于治疗癌症的用途。本公开还提供一种用于治疗癌症的包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂的药物组合物，或包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂的药物组合物用于治疗癌症的用途。
制备本公开化合物的方法
除用于制备本公开的化合物的若干方法描述于以下实施例中。起始物质及中间体为购买的、由已知程序制成，或如以其他方式说明。
在整个合成方案及实施例中，除非另有说明，否则缩写及首字母缩写词可与以下定义一起使用：
anhydr.＝无水；aq.＝水溶液；atm＝气氛；Bodipy-GDP＝((2R,3S,4R,5R)-5-(2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-3-(((2-(3-(5,5-二氟-7,9-二甲基-5H-4l4,5l4-二吡咯并[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]二氮杂硼杂环己烯-3-基)丙酰胺基)乙基)氨甲酰基)氧基)-4-羟基四氢呋喃2-基)甲基二磷酸氢酯与((2R,3R,4R,5R)-5-(2-氨基-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)-4-(((2-(3-(5,5-二氟-7,9-二甲基-5H-4l4,5l4-二吡咯并[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]二氮杂硼杂环己烯-3-基)丙酰胺基)乙基)氨甲酰基)氧基)-3-羟基四氢呋喃2-基)甲基二磷酸氢酯的混合物(InvitrogenTM，目录号G22360)；br s＝宽单峰；Bu＝丁基；t-Bu＝叔丁基；C＝反-二(μ-乙酸根)双[邻(二-邻甲苯基膦基)苯甲基]二钯(II)，C＝CDCl3＝氘化氯仿；CDI＝1,1'-羰基二咪唑，CELITE＝硅藻土；CF3＝三氟甲基；cGMP＝环单磷酸鸟苷；CH3NO2＝硝基甲烷；DCM＝二氯甲烷；DETA-NO＝二乙烯基三胺/氧化氮加合物；DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯；DIEA/DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；DME＝二甲氧基乙烷,DMEA＝N,N-二甲基乙胺，DMF＝N,N-二甲基甲酰胺；DMP＝戴斯-马丁高碘烷；DMS＝甲硫醚；DMSO＝二甲亚砜；DPPF或dppf＝1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁；DTT＝二硫苏糖醇；EDTA＝乙二胺四乙酸；equiv,eq.＝当量；Et＝乙基；Et3N＝三乙胺；EtOAc＝乙酸乙酯；EtOH＝乙醇；格拉布氏催化剂＝(1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑啶亚基)二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦)钌；GTP＝鸟苷三磷酸盐；h＝小时；HEPES＝4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸；HMDS＝六甲基二硅氮烷；HPLC＝高压液相色谱法；Int.＝中间体；iPr＝异丙基；IP＝反曲点；i-PrOH＝异丙醇；KHMDS＝双(三甲基硅烷基)氨基钾；LCMS,LC/MS＝液相色谱法-质谱法；min,min.＝分钟；LDA＝二异丙氨基锂；M＝摩尔；Me＝甲基；MeCN,ACN＝乙腈；MeOH＝甲醇；mp,m.p.＝熔点；mpk＝毫克/千克；MsCl＝甲磺酰氯；MPLC＝中压液相色谱法；N＝正常；NaOMe＝甲醇钠；NMR＝核磁共振；N.D.＝未确定；PDA＝光电二极体阵列；Pet.醚＝石油醚；Pd-C＝钯/碳；Pd2(dba)3＝三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)；Ph＝苯基；Pr＝丙基；psi＝磅/平方寸量规；POCl3＝氧氯化磷；PTLC,制备型TLC＝制备型薄层色谱法；rac＝外消旋；RT＝保留时间；RP-HPLC＝反向HPLC；rt＝室温；sat.＝饱和；SFC＝超临界流体色谱法；SOS＝非七激酶子(Son of Sevenless)；Sphos Pd G3＝甲磺酸(2-二环己基膦基-2′,6′-二甲氧基联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)；TBAF＝氟化四正丁基铵；TBSCl＝叔丁基二甲基氯硅烷；TFA＝三氟乙酸；TLC＝薄层色谱法；THF＝四氢呋喃；TMS＝三甲基硅烷基；TWEEN＝聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯；VCD＝振动圆二色性；v,v/v＝体积、体积比体积；w,w/w＝重量、重量比重量，XPhos-Pd-G3＝(2-二环己基膦基o-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)；μm＝微米。
实施例
可根据以下方案及实施例的程序，使用适当的的物质制备本文所描述的化合物，且通过以下特定实施例进一步示例。然而，实施例中所说明的化合物不应解释为形成视为本公开的唯一种类。实施例进一步说明制备本公开的化合物的细节。本领域技术人员将容易地理解，以下制备程序的条件及工艺的已知变化可用于制备这些化合物。提供这些实施例的目的仅为了进一步说明且并不旨在限制本公开。下文所描述的任何中间体在本文中是通过编号的前有“Int-”而提及。
除非另有说明，否则浓度是指在减压下(例如通过旋转蒸发)移除挥发性组分。除非另有说明，否则所有温度以摄氏度为单位。除非另有说明，否则通过阳离子检测模式下电喷雾离子质谱分析(ESI)测量的质谱(MS)，且m/z是指[M+H]+离子。除非另有说明，否则在环境温度下，在400-500MHz下记录1H NMR光谱。报告为0.5H的质子是归因于旋转异构信号。RP-HPLC是指在C18-官能化的制备型或半制备型柱上使用乙腈及水(用三氟乙酸或氢氧化铵作为溶剂修饰)作为洗脱液进行梯度洗脱的反向HPLC，且除非另有说明，否则馏分经冻干或通过旋转蒸发浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化是使用快速色谱法是统(例如或)和使用所述溶剂是统洗脱的市售预装填硅胶柱实现。除非在实验程序及化合物表中另有说明，否则以外消旋体形式合成本文所描述的化合物。实施例中的某些产物/中间体包括“峰1”及/或“峰2”的指示，其是指在指定条件下用于以分离化合物的色谱柱(例如SFC柱)洗脱指定产物/中间体的顺序。因此，例如，峰1是指在指定条件下的第一洗脱化合物，例如第一洗脱立体异构体(例如第一洗脱阻转异构体)。起始物质2,5-二氯-3-硝基吡啶及(E)-叔丁基二甲基((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷购自Sigma Aldrich。
立体异构体的手性拆分中所用的SFC柱概述于下表中：
实施例1a：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-12,13-二氢-4H,11H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,5,8,10]苯并二氧 杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-1a)
将3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-醇(7.60g，39.9mmol)溶解于四氢呋喃(121mL)中，冷却至0℃，且添加氢化钠(1.60g，39.9mmol)并使其在该温度下搅拌30分钟。向反应物中分批添加2,4-二氯-3-硝基吡啶(7.00g，36.3mmol)且使其经2h缓慢升温至rt。将反应物用氯化铵饱和水溶液淬灭，用EtOAc稀释，分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩且经硅胶0-25％EtOAc/己烷纯化，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-1a)。MS(ESI)[M+H]+m/z 347。
步骤B：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基) 吡啶(Int-1b)
将4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(5.00g，14.4mmol)及碳酸铯(14.1g，43.2mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的200mL圆底烧瓶中，在氮气下抽空，且添加DME(38.4mL)/水(9.6mL)及异丙烯基二羟硼酸频哪醇酯(3.25mL，17.3mmol)，在氮气下脱气三次并添加双(三苯基膦)二氯化钯(II)(1.01g，1.44mmol)。将反应物在氮气下脱气，与回流冷凝器连接且加热至100℃过夜。将反应物冷却至室温，用50mL氯化铵饱和水溶液淬灭，用2×100mL EtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩且经硅胶10-50％EtOAc/己烷纯化，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-1b)。MS(ESI)m/z 353。
步骤C：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int- 1c)
将4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(4.20g，11.9mmol)溶解于乙醇(100mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(10％w/w，润湿)(840mg)，在氮气下脱气，在氢气球下抽空且使其在氢气气氛下于室温搅拌24h。反应物经硅藻土过滤且真空浓缩，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-1c)，其未经进一步纯化即使用。MS(ESI)[M+H]+：m/z 325。
步骤D：N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨 甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-1d)
向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(1.15g，5.48mmol)于THF(25mL)中的经搅拌溶液中添加2M乙二酰氯于DCM(2.60mL，5.20mmol)中的溶液，且利用所附的回流冷凝器将反应物加热至75℃，持续1h。将反应物冷却至0℃且逐滴添加4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(1.87g，5.75mmol)于THF(5mL)中的溶液。使反应物搅拌1h。将反应物用10mL饱和氯化铵淬灭，用2×50mL EtOAc稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩且经硅胶0-100％己烷/3:1EtOAc/EtOH纯化，得到N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-1d)。MS(ESI)[M+H]+：m/z 559/561。
步骤E：1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-1e)
将N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(1.72g，3.07mmol)溶解于THF(20mL)中，冷却至0℃，添加1MKHMDS于THF(6.46mL，6.46mmol)中的溶液且使其经1h升温至rt。将反应物用10mL饱和氯化铵淬灭，用2×50mL EtOAc稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩，得到1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-1e)，其未经进一步纯化即使用。MS(ESI)[M+H]+：m/z 523。
步骤F：1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4, 7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-1f)
将1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.57g，3.00mmol)溶解于CH3CN(20mL)中，添加DIEA(1.05mL，6.00mmol)及POCl3(0.336mL，3.60mmol)，且加热至80℃，持续1h。将反应物在旋转蒸发器蒸发且在高真空下干燥10分钟，得到1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-1f)且未经进一步纯化即使用MS(ESI)[M+H]+：m/z 540.8/542.9。
步骤G：(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶- 3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-1g)
将1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.63g，3.00mmol)溶解于乙腈(20mL)中，冷却至0℃，添加DIEA(2.01mL，12.0mmol)，然后添加(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.721g，3.60mmol)且使其搅拌30分钟。将反应物用1:1饱和碳酸氢钠/水淬灭，使其搅拌5分钟，并分离有机物。将水层用2×25mL EtOAc萃取，合并，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩且经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-1g)MS(ESI)[M+H]+m/z：705。
步骤H：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 1h)
将(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.500g，0.709mmol)、3-氟-2-(三氟-λ4-硼烷基)苯酚钾(0.200g，0.922mmol)、乙酸钾(0.278g，2.84mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(3.0mL)/水(0.50mL)，在氮气下脱气3次且加热至90℃，持续1h。将反应物冷却至室温，用10mL 1:1水/饱和碳酸氢钠淬灭，用2×25mLEtOAc萃取，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于10mL THF中，添加1M TBAF于THF(1.77mL，1.77mmol)中的溶液，且使其在室温下搅拌1.5h。将反应物用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取一次，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩且经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-1h)。MS(ESI)[M+H]+m/z：667。
步骤I：(Int-1i)
向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(61mg，0.091mmol)及三苯膦(60.0mg，0.229mmol)中添加THF(4.7mL)，在氮气下脱气，添加偶氮二甲酸二异丙酯(36.0μl，0.183mmol)且超声处理10分钟。真空移除溶剂，经硅胶0-100％己烷/3:1EtOAc/EtOH纯化残留物，得到Int-1i。MS(ESI)[M+H]+m/z：647。
步骤J：Int-1j
将Int-1i(137mg，0.211mmol)溶解于DCM(4mL)中，添加TFA(0.814mL，10.6mmol)且使其在rt下搅拌1h。在真空中蒸发反应物，得到粗Int-1j+3TFA且未经进一步纯化即使用。MS(ESI)[M+H]+m/z：549。
步骤K：实施例1a：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6- (丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,5,8,10]苯 并二氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
将Int-1j+3TFA(200mg，0.225mmol)溶解于DCM(2.25mL)中，冷却至0℃，添加DIEA(157μL，0.898mmol)、丙烯酰氯(20μL，0.25mmol)且使其搅拌1h。通过添加2mL饱和碳酸氢钠淬灭反应物，用2×10mL EtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩，经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH纯化。通过SFC柱A，条件：MeOH w/0.1％NH4OH拆分外消旋物质，得到呈单一阻转异构体形式的18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,5,8,10]苯并二氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例1a，峰1)。
MS(ESI)[M+H]+m/z：603 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.38(d,J＝5.7Hz,1H),8.17(m,1H),7.52–7.45(m,1H),7.06(d,J＝5.9Hz,1H),6.98–6.90(m,2H),6.90–6.79(m,1H),6.26–6.16(m,1H),5.77(d,J＝10.4Hz,1H),4.73(m,1H),4.45(m,2H),4.32(m,1H),4.19–4.06(m,2H),3.99(m,2H),3.67–3.47(m,2H),3.19(m,1H),2.87(m,1H),1.96(m,1H),1.90–1.76(m,1H),1.41(m,3H),1.13(d,J＝6.7Hz,3H),0.90(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例2a是如实施例1中所描述，使用具有(2-羟基吡啶-3-基)二羟硼酸)的Int-1g来制备。
实施例3a/3b：22-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-12,13-二氢-4H,11H-1,20-乙烯桥吡啶并[4',3’:2,3]嘧啶并[1',6’:4,5][1,4,6,10] 氧杂三氮杂环十三烯并[8,9,10-hi]吲唑-4-酮
步骤A：(S)-4-(6-氟-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(1H-吲唑- 7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-3a)
将(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-1g)(71.4mg，0.101mmol)、7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(0.037g，0.152mmol)、乙酸钾(0.040g，0.405mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(8.3mg，10.1μmol)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(0.87mL)/水(0.15mL)，在氮气下脱气三次且加热至90℃，持续30min。将反应物冷却至室温，用2mL 1:1水/饱和氯化铵淬灭，用1×25mL EtOAc萃取，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于5mL THF中，添加1M TBAF于THF(0.506mL，0.506mmol)中的溶液，且使其在室温下搅拌1.5h。将反应物用饱和NH4Cl淬灭，用1×15mLEtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩且经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH/DCM纯化，得到(S)-4-(6-氟-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。Int-3a MS(ESI)[M+H]+m/z 673。
步骤B：Int-3b
将(S)-4-(6-氟-1-(4-(3-羟基丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(58mg，0.086mmol)溶解于二噁烷(4.3mL)中，添加氰基亚甲基三丁基膦烷(45.2μl，0.172mmol)，在氮气下脱气且加热至120℃过夜。将反应物真空浓缩，经硅胶，0-100％3:1(EtOAc/EtOH)/DCM纯化，得到具有杂质的Int-3b。将树脂用己烷湿磨，超声处理，过滤，用己烷洗涤1×，得到Int-3b MS(ESI)[M+H]+m/z 655。
步骤C：Int-3c
将Int-3b(68mg，0.104mmol)溶解于DCM(2.0mL)中，添加TFA(800μl，10.4mmol)且使其在rt下搅拌1h。真空浓缩反应物，得到呈粗残留物形式的Int-3c+3TFA，其未经进一步纯化即使用。MS(ESI)[M+H]+m/z 555。
步骤D：实施例3a/3b22-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6- (丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,20-乙烯桥吡啶并[4',3’:2,3]嘧啶并[1',6’:4,5][1, 4,6,10]氧杂三氮杂环十三烯并[8,9,10-hi]吲唑-4-酮
将Int-3c(90mg，0.146mmol溶解于4mL DCM中，添加DIEA(153μl，0.876mmol)，冷却至0℃，添加丙烯酰氯(14.0μl，0.175mmol)且使其在该温度下搅拌1h。将反应物用2mL 1:1饱和碳酸氢钠/水淬灭，通过4mL相分离器过滤，用5mL DCM萃取一次，真空浓缩且经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/DCM纯化，得到外消旋产物。通过SFC色谱法，使用柱T，条件：MeOH w/0.25％DMEA，50％CO2拆分该产物，得到呈单一阻转异构体形式的22-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,20-乙烯桥吡啶并[4',3’:2,3]嘧啶并[1',6’:4,5][1,4,6,10]氧杂三氮杂环十三烯并[8,9,10-hi]吲唑-4-酮(实施例3a，峰1)。
MS(ESI)[M+H]+m/z 609。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝8.4Hz,1H),8.31(d,J＝5.7Hz,1H),8.28(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝6.7Hz,1H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),6.96(d,J＝5.7Hz,1H),6.88(dd,J＝16.9,10.4Hz,1H),6.22(dd,J＝16.8,8.6Hz,1H),5.78(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),5.11(m,1H),4.45(d,J＝13.6Hz,0.5H),4.34(d,J＝13.4Hz,0.5H),4.18(m,2.5H),4.08(d,J＝13.9Hz,0.5.H),4.00–3.77(m,3H),3.72(d,J＝13.5Hz,0.5H),3.53(dt,J＝14.0,7.6Hz,1H),3.37(m,ov.1H)3.00(t,J＝11.8Hz,0.5H),2.91(m,1H),2.41–2.24(m,1H),2.16(s,1H),1.37–1.23(m,3H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例3b，峰2-22-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,20-乙烯桥吡啶并[4',3’:2,3]嘧啶并[1',6’:4,5][1,4,6,10]氧杂三氮杂环十三烯并[8,9,10-hi]吲唑-4-酮(实施例3b)。MS(ESI)[M+H]+m/z 609。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝8.6Hz,1H),8.31(d,J＝5.6Hz,1H),8.29(s,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(d,J＝7.0Hz,1H),7.22(t,J＝7.5Hz,1H),6.95(d,J＝5.7Hz,1H),6.88(td,J＝17.5,11.1Hz,1H),6.22(t,J＝14.1Hz,1H),5.78(d,J＝10.7Hz,1H),4.80(m,0.5H),4.77(m,0.5H),4.48(d,J＝13.7Hz,1H),4.42(d,J＝13.3Hz,0.5H),4.27(d,J＝13.4Hz,0.5H),4.17(m,1.5zH),4.03(d,J＝13.8Hz,0.5H),3.93–3.75(m,2H),3.74–3.54(m,2H),3.50(dt,J＝13.8,7.4Hz,1H),3.29(m,ov.0.5H),3.23(d,J＝13.3Hz,0.5H),2.91(p,J＝6.7Hz,1H),2.36–2.25(m,1H),2.14(m,1H),1.47–1.39(m,3H),1.15(d,J＝6.7Hz,3H),0.89(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例4：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂 二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：(E)-4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙- 1-烯-2-基)吡啶。(Int-4a)
将2,4-二氯-3-硝基吡啶(Int-1a)(10.7g，55.5mmol)、碳酸铯(63.3g，194mmol)、双(亚磷酸三苯酯)二氯化钯(II)(3.90g，5.55mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的250mL圆底烧瓶中，在氮气下脱气，添加DME(90mL)/水(22.5mL)，在氮气下脱气两次，添加异丙烯基二羟硼酸频哪醇酯(11.0mL，58.3mmol)。烧瓶装备有回流冷凝器且使其在85℃下搅拌5h。将反应物在冰浴中冷却至室温且通过氩气漏斗，添加(E)-叔丁基二甲基((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷(22.7mL，63.8mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(4.53g，5.55mmol)。将反应物在氮气下脱气3次且加热以在110℃下回流16h。用300mL EtOAc及200mL饱和氯化铵稀释反应物。通过硅藻土垫过滤水层及有机层，且分离有机层。用250mL EtOAc萃取水层。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。所获得的残留物经硅胶0-40％EtOAc/己烷纯化，随后经减缓梯度0-15％EtOAc/己烷纯化，得到(E)-4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-4a)。MS(ESI)[M+H]+m/z：349。
步骤B：4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-4b)
将4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(1.67g，4.76mmol)溶解于EtOH(24.0mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(0.101g，0.953mmol)，在氮气下脱气，且使其在氢气气氛下搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤反应物且真空浓缩。将残留物溶解于5mL DCM中并通过0.2uM过滤器过滤，以移除微量残余钯/碳，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺。(Int-4b)MS(ESI)[M+H]+m/z：323。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.86(d,J＝4.8Hz,1H),3.70(m,4H),3.07(hept,J＝6.7Hz,1H),2.55–2.50(m,2H),1.73(m,2H),1.68–1.62(m,2H),1.33(m,6H),0.92(s,9H),0.08(s,6H)。
步骤C：N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-4c)
在75℃下向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(4.42g，21.2mmol)于THF(20mL)中的经搅拌溶液中添加2M乙二酰氯于DCM(12.5mL，25.0mmol)中的溶液，且利用所附的回流冷凝器将反应物加热至75℃，持续1h。将反应物在真空中蒸发且在高真空下干燥30分钟。向残留物添加20mL THF，冷却至0℃且逐滴添加4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(6.20g，19.2mmol)于THF(10mL)中的溶液。使反应物在0℃下搅拌1h，然后在0℃下用饱和氯化铵淬灭，且用100mL EtOAc稀释。将反应物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-50％3:1EtOAc-EtOH/DCM纯化，得到N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-4c)。MS(ESI)[M+H]+m/z 557/559。
步骤D：1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(峰1SFC)(Int-4d-1)
将N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(5.10g，9.15mmol)溶解于THF(15.2mL)中，冷却至0℃，添加KHMDS(19.2mL，19.2mmol)且使其升温至rt，持续1h。将反应物冷却至0℃，用100mL饱和氯化铵淬灭，用2×150mL EtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/DCM纯化残留物，得到1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(阻转异构体的混合物)。通过SFC，柱Q，条件：100％MeOH，含15％改性剂的CO2拆分产物，得到：
峰1-Int-4d-1-1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。MS(ESI)[M+H]+m/z 521；并且
峰2-Int-4d-2-1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。MS(ESI)[M+H]+m/z 521。
步骤E及F：(S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶- 3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-4f-1)
向1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(峰1SFC)(Int-4d-1)(1.80g，3.45mmol)添加乙腈(17.3mL)、DIEA(1.81mL，10.36mmol)、POCl3(0.386mL，4.15mmol)，在氮气下脱气且加热至80℃，持续30分钟。将含有1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-4e-1)的反应混合物冷却至0℃，添加DIEA(1.81mL，10.4mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.830g，4.15mmol)且使其在该温度下搅拌20分钟。将反应物用10mL水淬灭，用2×25mL EtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩且经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到(S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-4f-1)。MS(ESI)[M+H]+m/z703。
步骤G：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 4g-1)
将(S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.50g，2.13mmol)、3-氟-2-(三氟-λ4-硼烷基)苯酚酯(602mg，2.77mmol)、乙酸钾(837mg，8.53mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(174mg，0.213mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(9mL)/水(1.5mL)，在氮气下脱气3次且加热至90℃，持续1h。将反应物冷却至室温，用10mL 1:1水/饱和碳酸氢钠淬灭，用2×25mL EtOAc萃取，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于10mL THF中，添加1M TBAF于THF(6.40mL，6.40mmol)中的溶液，且使其在室温下搅拌1.5h。将反应物用50mL饱和NH4Cl/100mL EtOAc淬灭且使其在剧烈搅拌下搅拌5分钟。分离有机层，用1×25mL饱和氯化铵、25mL盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，且经硅胶0-100％3:1EtOAC/EtOH/己烷纯化，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-4g-1)。MS(ESI)[M+H]+m/z 665。
步骤H：(Int-4h-1)。
向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.10g，1.66mmol)及三苯膦(1.09g，4.14mmol)中添加THF(66mL)，在氮气下脱气，超声处理且逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯(652μL，3.31mmol)。反应物经超声处理30分钟，真空移除溶剂，且残留物经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到Int-4h-1。MS(ESI)[M+H]+m/z 647。
步骤I：Int-4i-1
将Int-4i-1(370mg,0.572mmol)溶解于DCM(3.8mL)中，添加TFA(1.1mL 14.3mmol)且使其在rt下搅拌20分钟。真空移除溶剂，且用1×甲苯/1×戊烷使残留物共沸，得到呈三-TFA盐形式的Int-4i-1。MS(ESI)[M+H]+m/z 547。
步骤J：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂 二氮杂环十三烯-4-酮(实施例4a)
将Int-4i-1+3TFA(385mg,0.433mmol)溶解于DCM(5.8mL)中，冷却至0℃，添加DIEA(378μl，2.17mmol)，随后添加丙烯酰氯(38.7μl，0.48mmol)。使反应物搅拌15分钟且用2mL饱和碳酸氢钠淬灭，通过相分离器倒入，用1×6mL DCM洗涤，真空蒸发且经硅胶0-100％己烷(3:1EtOAc/乙醇)纯化，得到18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例4a)。MS(ESI)[M+H]+m/z 601。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝4.9Hz,1H),8.36-8.27(m,1H),7.46(q,J＝8.3Hz,1H),7.16(d,J＝4.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.97(t,J＝8.7Hz,1H),6.94–6.78(m,1H),6.25-6.17(m,1H),5.81-5.74(m,1H),4.90(br s,1H),4.46-4.36(m,2H),4.31-4.11(m,1H),4.06-3.98(m,2H),3.91-3.83(m,1H),3.72-3.6(m,1H),3.61-3.52(m,1H),3.29–3.11(m,1H),2.73–2.56(m,2H),2.45-2.35(m,1H),1.36-1.29(重叠m,4H),1.30–1.11(m,1H),1.05(d,J＝6.7Hz,3H),0.83(d,J＝6.6Hz,3H)。
18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10, 11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂 环十三烯-4-酮(实施例4b)
实施例4b是使用上文针对实施例4a所描述的步骤，由来自SFC的第二洗脱异构体Int-4d-2制备。
实施例4b：MS(ESI)[M+H]+m/z 601。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.45–8.32(m,2H),7.46(q,J＝8.3Hz,1H),7.16(d,J＝4.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),6.96(t,J＝8.7Hz,1H),6.94–6.79(m,1H),6.25-6.17(m,1H),5.8-5.74(m,1H),5.02(brs,1H),4.45-4.37(m,1H),4.35-4,25(m,1H),4.18-4.12(m,1H),4.08-4.0(m,2H),3.9-3.83(m,1H),3.82-3.73(m,1H),3.7-3.64(m,1H),3.16-3.06(m,1H),2.68-2.58(m,2H),2.46-2.35(m,1H),1.39-1.2(overlapped m,5H),1.05(d,J＝6.7Hz,3H),0.81(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例5及6是以与实施例4a类似的方式，利用Int-4f-1，以(1H-吡唑-5-基)二羟硼酸或7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑酸取代步骤G来制备。
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实施例7：2-[(3R,5S)-3,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-18,21-二氟-6- (丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯 并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：Int-7a
将Int-4h-1(330mg，0.510mmol)溶解于MeOH(2.55mL)中，添加KOH(1M于甲醇中)(1.53mL，1.53mmol)且加热至40℃，持续2小时，然后使其冷却至室温过夜。将反应物用20mLEtOAc稀释，倒入50mL饱和氯化铵中，搅拌，且分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化所获得的残留物，得到Int-7a。MS(ESI)[M+H]+m/z 465。
步骤B：Int-7b
将Int-7a(16.5mg,0.036mmol)溶解于乙腈(710μL)中，添加DIEA(18.6μL，0.107mmol)、POCl3(3.97μL，0.043mmol)且加热至80℃，持续30分钟。将反应物冷却至0℃，添加另一份DIEA(18.61μL，0.107mmol)及(2R,6S)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9.5mg，0.044mmol)且经2小时使其升温至室温。将反应物真空浓缩，经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到Int-7b。MS(ESI)[M+H]+m/z 661。
步骤C-D：实施例7
将Int-7b(10mg，0.015mmol)溶解于CH2Cl2中，添加TFA(58.3μl，0.757mmol)，使其在室温下搅拌20分钟，真空浓缩，溶解于CH2Cl2中，添加DIEA(13.2μl，0.076mmol)，冷却至0℃，且添加丙烯酰氯(1.2μl，0.015mmol)且使其搅拌30分钟。将反应物用1mL饱和碳酸氢钠淬灭，通过相分离器倒入，用1×3mL CH2Cl2洗涤，浓缩且经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到2-[(3R,5S)-3,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-18,21-二氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例7)。MS(ESI)[M+H]+m/z 615。
实施例8是以与实施例7类似的方式，利用Int-7a，以(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯取代步骤B中的哌嗪组分来制备。
实施例9：19-氯-16-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-10,11-二 氢-4H-1,17-乙烯桥二苯并[b,h]嘧啶并[6,1-f][1,5,7]氧杂二氮杂环十一烯-4-酮
步骤A：2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯胺(Int-9a)
向2-(2-氨基苯基)乙醇(2.00g，14.6mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中添加TBSCl(2.86g，19.0mmol)及咪唑(2.98g，43.7mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。真空浓缩反应混合物且通过硅胶，0-10％EtOAc/石油醚纯化残留物，得到2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯胺(Int-9a)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.96-7.09(m,2H),6.62-6.80(m,2H),3.98(br s,2H),3.87(t,J＝6.24Hz,2H),2.78(t,J＝6.11Hz,2H),0.87(d,J＝1.71Hz,9H),-0.01(s,6H)。
步骤B：2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-9b)
向2,5,6三氯烟碱酸(8.70g，38.4mmol)于THF(90mL)中的经搅拌溶液中添加CDI(6.85g，42.3mmol)，且在N2气氛下于50℃搅拌反应混合物1h。随后在0℃下添加甲苯(20mL)及氢氧化铵(浓缩，10.7mL，77.0mmol)，且在20℃下搅拌所得混合物10min。将反应混合物用水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×150ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。经硅胶，0-100％EtOAc/石油醚纯化残留物，得到2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-9b)。MS(ESI)：m/z(M+MeCN+H)+266.1,268.1。
步骤C：N-((2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)氨甲酰基)-2,5,6-三 氯烟碱酰胺(Int-9c)
在20℃下向2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-9b)(2.50g，11.1mmol)于THF(50mL)中的经搅拌溶液中添加乙二酰氯(0.932mL，10.6mmol)，且在N2气氛下于65℃搅拌混合物30min。随后将其冷却至20℃且添加2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯胺(Int-9a)(2.93g，11.6mmol)。在20℃下搅拌所得混合物16h。将反应混合物用盐水(40mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。经硅胶，0-30％EtOAc/石油醚纯化残留物，得到N-((2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-9c)。MS(ESI)：[M+H]+m/z502.3/504.3
步骤D：1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯吡啶并[2, 3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-9d)
在0℃下向N-((2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(3.00g，5.97mmol)于THF(50mL)中的经搅拌溶液中添加1M双(三甲基硅烷基)氨基钾于THF(11.9mL，11.9mmol)中的溶液，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。将反应混合物用氯化铵水溶液(饱和，35mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂，得1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-9d)。粗产物未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：[M+H]+m/z 466.2/468.1
步骤E：1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-4,6,7-三氯吡啶并 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-9e)
在25℃下向1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.30g，4.93mmol)于乙腈(50mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(2.15mL，12.3mmol)及POCl3(0.689mL，7.40mmol)，且在N2气氛下于80℃搅拌混合物1h。浓缩反应混合物，得到1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-4,6,7-三氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-9e)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z(M+H)+484.0/486.0。
步骤F：(S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯-2- 氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-9f)
在20℃下向1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-4,6,7-三氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(2.39g，4.93mmol)于DMF(40mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(2.15mL，12.3mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.23g，6.16mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。浓缩反应混合物，且经硅胶上，0-40％EtOAc/石油醚纯化残留物，得到(S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-9f)。MS(ESI)：[M+H]+m/z648.2/650.2。
步骤G：(3S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6-氯-7-(2- 氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-9g)
在N2气氛下，于90℃向(S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.00g，1.54mmol)、乙酸钾(0.756g，7.71mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(0.063g，0.077mmol)于1,4-二噁烷(10mL)及水(2mL)中的经搅拌溶液中添加含3-氟-2-(三氟-λ4-硼烷基)苯酚、钾盐(0.538g，2.47mmol)的1,4-二噁烷(3mL)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物2h。将反应混合物用盐水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。经硅胶，0-50％EtOAc/石油醚纯化残留物，得到(3S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-9g)。MS(ESI)：[M+H]+m/z 724.4。
步骤H：(3S)-4-(6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-(2-羟基乙基)苯基)-2-氧代- 1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-9h)
向(3S)-4-(1-(2-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.00g，1.38mmol)于THF(10mL)中的经搅拌溶液中添加1M TBAF于THF(4.14mL，4.14mmol)中的溶液，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。真空浓缩反应混合物，且经硅胶纯，0-8％MeOH/DCM纯化残留物，得到(3S)-4-(6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-(2-羟基乙基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-9h)MS(ESI)：[M+H]+m/z 610.4
步骤I：Int-9i
向(3S)-4-(6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-(2-羟基乙基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.492mmol)于THF(30mL)中的经搅拌溶液中添加三苯膦(871mg，1.23mmol)(37％装载于树脂上)，且然后在70℃下添加DIAD(0.096mL，0.492mmol)。在N2气氛下，于70℃下搅拌混合物1h。过滤混合物且用二氯甲烷(30mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液且通过制备型HPLC、水(10mM NH4HCO3)/MeCN纯化残留物，得到Int-9i。MS(ESI)：[M+H]+m/z 592.2
步骤J：Int-9j
向Int-9i(20mg，0.034mmol)于DCM(2mL)中的经搅拌溶液中添加TFA(0.5mL)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。真空浓缩反应混合物且通过制备型HPLC、水(10mMNH4HCO3)/MeCN纯化残留物，得到Int-9j。MS(ESI)：[M+H]+m/z 492.2
步骤K：19-氯-16-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-10,11-二 氢-4H-1,17-乙烯桥二苯并[b,h]嘧啶并[6,1-f][1,5,7]氧杂二氮杂环十一烯-4-酮(实施 例9)
向Int-9j+TFA(20.5mg，0.034mmol)于DCM(1.0mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(0.024mL，0.135mmol)及丙烯酰氯(3.67mg，0.041mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。将其浓缩且通过制备型HPLC、水(10mM NH4HCO3)/MeCN纯化残留物，得到呈阻转异构体的混合物形式的19-氯-16-氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-10,11-二氢-4H-1,17-乙烯桥二苯并[b,h]嘧啶并[6,1-f][1,5,7]氧杂二氮杂环十一烯-4-酮(实施例9)。MS(ESI)：[M+H]+m/z 546.2(400MHz,甲醇-d4)δ8.43-8.30(m,1H),7.47-7.38(m,1H),7.37-7.27(m,3H),7.20(br d,J＝8.07Hz,1H),6.97(d,J＝8.31Hz,1H),6.91-6.75(m,2H),6.31(br d,J＝16.14Hz,1H),5.84(dd,J＝1.83,10.64Hz,1H),5.32(br s,1H),4.96(br d,J＝9.54Hz,1H),4.81(br s,1H),4.74-4.59(m,1H),4.57-4.35(m,1H),4.27-3.96(m,2H),3.78-3.40(m,2H),2.95(br dd,J＝7.70,13.57Hz,1H),2.36(br dd,J＝6.36,15.41Hz,1H),1.57-1.36(m,3H)。
实施例10-15
制备4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10c)
步骤A：4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a)
向2,4-二氯-3-硝基吡啶(11.0g，57.0mmol)于DME(150mL)及水(30mL)中的经搅拌溶液中添加Cs2CO3(55.7g，171mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(9.58g，57.0mmol)及双(三苯膦)二氯化钯(II)(4.00g，5.70mmol)，且在85℃下搅拌所得混合物16h。使反应混合物冷却至室温且用EtOAc(200mL×3)萃取。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，石油醚/EtOAc＝10/1纯化残留物，得到4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a)。MS(ESI)：[M+H]+m/z 198.8。
步骤B：(E)-4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙- 1-烯-2-基)吡啶(Int-10b)
向4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(10.0g，50.4mmol)于DME(100mL)及水(20mL)中的经搅拌溶液中添加Cs2CO3(49.2g，151mmol)、(E)-叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)烯丙基)氧基)硅烷(16.52g，55.4mmol)及双(三苯膦)二氯化钯(II)(3.53g，5.04mmol)，且在90℃下搅拌所得混合物16h。使反应物冷却至室温且用EtOAc(200mL×3)萃取。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。在硅胶上用石油醚/EtOAc＝5/1洗脱来纯化残留物，得到(E)-4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶。MS(ESI)：[M+H]+m/z 335.1。
步骤C：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10c)
在氩气气氛下向(E)-4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(9.2g，27.5mmol)于MeOH(300mL)中的混合物中添加无水Pd-C(2.93g，27.5mmol，10％w/w)，且使混合物脱气并用H2吹扫三次，并且在H2气氛(40psi)下于25℃搅拌15h。过滤反应混合物且真空浓缩，得到粗产物。经硅胶，0-30％EtOAc/石油醚纯化粗产物，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10c)。MS(ESI)：[M+H]+m/z 309.3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.87(d,J＝4.9Hz,1H),6.74(d,J＝4.9Hz,1H),3.79(br s,2H),3.57(t,J＝5.7Hz,2H),2.97(spt,J＝6.7Hz,1H),2.52(t,J＝7.5Hz,2H),1.79-1.68(m,2H),1.23(d,J＝6.6Hz,6H),0.85-0.83(m,9H),0.00(s,6H)。
制备4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10f)
步骤A：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-10d)
将2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙-1-醇(9.05g，51.3mmol)溶解于四氢呋喃(155mL)中，冷却至0℃且添加氢化钠(2.05g，51.3mmol)，并使其在该温度下搅拌30分钟。向反应物中分批添加2,4-二氯-3-硝基吡啶(9.00g，46.6mmol)，且经2h使其缓慢升温至rt。将反应物用氯化铵淬灭，用EtOAc稀释，分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，且在硅胶上用0-25％EtOAc/己烷洗脱来纯化，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-10d)。MS(ESI)[M+H]+m/z 333。
步骤B：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基) 吡啶(Int-10e)
向配备有磁性搅拌棒的250mL圆底烧瓶中添加4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(12.0g，36.1mmol)、碳酸铯(35.2g，108mmol)、双(三苯膦)二氯化钯(II)(2.53g，3.61mmol)，在氮气下脱气，添加DME(72mL)及水(18mL)，在氮气下脱气两次，添加异丙烯基二羟硼酸频哪醇酯(7.45mL，39.7mmol)，且使其在85℃下搅拌3h。使反应物冷却至rt，用100mL EtOAc稀释，用50mL饱和氯化铵、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-20％EtOAc/己烷纯化，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10e)。MS(ESI)[M+H]+m/z 339。
步骤C：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int- 10f)
将4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(10.0g，29.5mmol)溶解于EtOH(148mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(0.629g，5.91mmol，10％w/w)，在氮气下脱气，且使其在氢气气氛下搅拌24h。将产物混合物用氮气充分吹扫。通过硅藻土垫过滤经吹扫的产物混合物。将滤液浓缩至干燥，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10f)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.73(d,J＝5.3Hz,1H),6.73(d,J＝5.3Hz,1H),4.45(s,2H),4.09(d,J＝4.5Hz,2H),3.95(dd,J＝5.4,4.1Hz,2H),3.16(p,J＝6.7Hz,1H),1.14(d,J＝6.7Hz,6H),0.88(s,9H),0.07(s,6H)。
制备4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺 (Int-10i)
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步骤A：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶 (Int-10g)
将3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙-1-醇(6.45g，28.5mmol)溶解于四氢呋喃(86mL)中，冷却至0℃且添加氢化钠(1.14g，28.5mmol)，且在该温度下搅拌30分钟。向反应物中分批添加2,4-二氯-3-硝基吡啶(5.00g，25.9mmol)，且经2h使其缓慢升温至rt。将反应物用氯化铵淬灭，用EtOAc稀释，分离，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，且在硅胶上，用0-25％EtOAc/己烷洗脱来纯化，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-10g)。MS(ESI)[M+H]+m/z 383。
步骤B：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1- 烯-2-基)吡啶(Int-10h)
向配备有磁性搅拌棒的250mL圆底烧瓶中添加4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(7.00g，18.3mmol)、碳酸铯(17.9g，54.8mmol)、双(三苯膦)二氯化钯(II)(1.28g，1.83mmol)，在氮气下脱气，添加DME(36mL)及水(9.1mL)，在氮气下脱气两次，添加异丙烯基二羟硼酸频哪醇酯(3.78mL，20.1mmol)，且使其在85℃下搅拌3h。使反应物冷却至rt，用100mL EtOAc稀释，用50mL饱和氯化铵、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-20％EtOAc/己烷纯化，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)(Int-10h)。MS(ESI)[M+H]+m/z 389。
步骤C：4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-异丙基吡啶-3- 胺(Int-10i)
将4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(6.60g，17.0mmol)溶解于EtOH(85mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(0.362g，3.40mmol，10％w/w)，在氮气下脱气，且使其在氢气气氛下搅拌24h。将产物混合物用氮气充分吹扫。通过硅藻土垫过滤经吹扫的产物混合物。浓缩滤液，得到4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10i)。MS(ESI)[M+H]+m/z 361。
实施例10-15是以与实施例1类似的方式，使用步骤D中的Int-10c、Int-10f及Int-10i且以经取代的受保护哌嗪取代步骤G来制备。实施例11利用(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯作为步骤G中的经取代的受保护哌嗪且以含氢氧化钯/H2的MeOH取代步骤J。表示为“编号##a”的实施例对应于SFC上的第一洗脱峰。表示为“编号##b”的实施例对应于SFC上的第二洗脱峰。实施例15将(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈双(盐酸盐)用于步骤G。
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实施例16a/b：19,22-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7- (丙-2-基)-11,12,13,14-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)-6,10-(亚甲桥)嘧啶并[1,6-k][1, 8,11,13]苯并氧杂三氮杂环十六烯-4-酮
步骤A：5-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-16a)
在250mL圆底烧瓶中添加2-溴-5-氯-3-硝基吡啶(Int-16)(5.00g，21.1mmol)、双(三苯膦)二氯化钯(II)(1.48g，2.11mmol)及碳酸铯(13.7g，42.1mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将DME(56mL)及水(14mL)添加至反应容器中且抽空所得混合物并用氮气气球回填三次。将4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(4.16mL，22.1mmol)添加至反应容器中，且将所得混合物加热至85℃，持续4h。用乙酸乙酯(100mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至20％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到5-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-16a)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.74(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(d,J＝2.2Hz,1H),5.38(dd,J＝1.7,0.7Hz,1H),5.17(t,J＝1.0Hz,1H),2.22(t,J＝1.2Hz,3H)。
步骤B：(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙- 1-烯-2-基)吡啶(Int-16b)
将5-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(3.80g，19.1mmol)、碳酸铯(12.t g，38.3mmol)及XPhos-Pd-G3(0.810g，0.957mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填。将二噁烷(51mL)及水(13mL)添加至反应容器中且通过鼓泡氮气30秒使所得混合物脱气。将(E)-叔丁基二甲基((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷(7.17g，23.0mmol)添加至反应容器中且在90℃下加热所得混合物2h。将产物混合物冷却至室温。将经冷却的产物混合物转移至分液漏斗中。分离有机层且经硫酸钠干燥经分离的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至20％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-16b)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.67(d,J＝2.0Hz,1H),8.00(d,J＝2.0Hz,1H),6.46(t,J＝1.8Hz,2H),5.34(d,J＝1.2Hz,1H),5.19–5.04(m,1H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),2.49(q,J＝6.2Hz,2H),2.20(s,3H),0.90(s,9H),0.07(s,6H)。
步骤C：5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-16c)
将(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(6.42g，18.4mmol)溶解于EtOH(92mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(0.392g，3.68mmol，10％w/w)，在氮气下脱气，且使其在氢气气氛下搅拌24h。将产物混合物用氮气充分吹扫。通过硅藻土垫过滤经吹扫的产物混合物。浓缩滤液，得到5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-16c)。MS(ESI)：[M+H]+m/z 323。
步骤D：N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-16d)
在40mL小瓶中添加2,6-二-氯-5-氟烟碱酰胺(2.00g，9.57mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(9.57mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。将2M乙二酰氯溶液(5.74mL，11.5mmol)逐滴添加至反应容器中且在75℃下加热所得混合物1h。使中间体溶液冷却至室温。将经冷却中间体溶液浓缩至其一半体积。将THF(5mL)添加至反应容器中且将所得混合物冷却至0℃。在单独4mL小瓶中，将5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-16c，3.09g，9.57mmol)溶解于THF(5mL)中。将胺溶液逐滴添加至反应容器中且在0℃下搅拌所得混合物1h。将产物混合物升温至室温。将经升温的产物混合物用饱和氯化钠水溶液与氯化铵水溶液的2mL 1:1混合物淬灭。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。合并的有机层经硫酸钠干燥且浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用5％(乙酸乙酯:乙醇＝3:1v/v)-二氯甲烷洗脱，分级至100％(乙酸乙酯:乙醇＝3:1v/v)(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-16d)。MS(ESI)[M+H]+m/z：557/559。
步骤E：1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-16e)
在30mL小瓶中添加N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(2.90g，5.20mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(10.4mL)添加至反应容器中且将所得混合物冷却至0℃。将1M双(三甲基硅烷基)氨基钾溶液(10.4mL，10.4mmol)添加至反应容器中且在0℃下搅拌所得混合物1h。用饱和氯化铵水溶液(3mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。合并有机层且经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法0-100EtOAc/己烷纯化所获得的残留物，得到1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-16e)。MS(ESI)[M+H]+m/z：521。
步骤F：(S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-16f)
在20mL小瓶中添加1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(500mg，0.959mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将乙腈(1.9mL)、N,N-二异丙基乙胺(256μL，1.44mmol)及磷酰三氯(116μL，1.25mmol)添加至反应容器中且将所得混合物加热至80℃，持续1h。将产物混合物浓缩至干燥。将残留物溶解于乙腈(1.9mL)中。将N,N-二异丙基乙胺(512μl,2.88mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(288mg，1.44mmol)依序添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物1h。用乙酸乙酯(100mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v)-己烷(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到(S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-16f)。MS(ESI)[M+H]+m/z：703。
步骤G：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(5-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 16g)
将(S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(535mg，0.761mmol)、3-氟-2-(三氟-λ4-硼烷基)苯酚钾(215mg，0.989mmol)、乙酸钾(299mg，3.04mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(62.1mg，0.076mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(3.3mL)/水(543μl)，在氮气下脱气3次且加热至90℃，持续1h。将反应物冷却至rt，用10mL1:1水/饱和碳酸氢钠淬灭，用2×25mL EtOAc萃取，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于10mL THF中，添加1M TBAF于THF(1.90mL，1.90mmol)中的溶液，且使其在rt下搅拌1.5h。将反应物用饱和氯化铵淬灭，用1×EtOAc萃取，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，且经硅胶0-100％EtOAc:EtOH，3:1/己烷纯化，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(5-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-16g)。MS(ESI)[M+H]+m/z：665。
步骤H：(Int-16h)
在氮气下在100mL圆底烧瓶中将(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(5-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.150mmol)及三苯膦(99mg，0.376mmol)溶解于THF(7.5mL)中。在超声处理后，逐滴添加二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(59.2μl，0.301mmol)。将反应混合物超声处理15min。将产物混合物浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v)(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到(Int-16h)。MS(ESI)[M+H]+m/z：647。
步骤I：Int-16i
在20mL小瓶中添加Int-16h(130mg，0.201mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将DCM(2.0mL)添加至反应容器中。将三氟乙酸(769μL，10.1mmol)逐滴添加至反应容器中且在24℃下搅拌所得混合物1h。浓缩产物混合物，得到Int-16i。MS(ESI)[M+H]+m/z：547。
步骤J：19,22-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(丙-2- 基)-11,12,13,14-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)-6,10-(亚甲桥)嘧啶并[1,6-k][1,8,11, 13]苯并氧杂三氮杂环十六烯-4-酮(实施例16a)
在20mL小瓶中添加Int-16i+3-TFA(160mg，0.180mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将DCM(1.8mL)添加至反应容器中且将所得溶液冷却至0℃。将N,N-二异丙基乙胺(160μL，0.900mmol)及丙烯酰氯(21.4μL，0.270mmol)添加至反应容器中且在0℃下搅拌所得混合物1h。用乙酸乙酯(50mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过硅胶快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％(乙酸乙酯:乙醇＝3:1)来纯化所获得的残留物。通过SFC柱U，条件：35％改性剂：MeOH w/0.25％N,N-二甲基乙胺拆分外消旋物质，得到分离的阻转异构体：
峰1-实施例16a-MS(ESI)[M+H]+m/z：601。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(dd,J＝18.8,9.2Hz,1H),7.57–7.34(m,2H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.01–6.78(m,2H),6.21(dd,J＝16.8,9.3Hz,1H),5.90–5.71(m,1H),4.80(s,1H),4.55–3.91(m,3H),3.82(td,J＝9.7,4.7Hz,1H),3.67–3.47(m,3H),3.19(d,J＝21.4Hz,1H),2.96(p,J＝6.8Hz,1H),2.86–2.70(m,1H),2.57(d,J＝4.2Hz,1H),1.85(td,J＝10.8,10.2,5.7Hz,1H),1.72(t,J＝18.1Hz,1H),1.54–1.42(m,1H),1.40(d,J＝6.5Hz,3H),1.28(d,J＝6.3Hz,1H),1.17(d,J＝6.7Hz,3H),0.87(d,J＝6.8Hz,3H)；并且
峰2-实施例16b-19,22-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(丙-2-基)-11,12,13,14-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)-6,10-(亚甲桥)嘧啶并[1,6-k][1,8,11,13]苯并氧杂三氮杂环十六烯-4-酮。MS(ESI)[M+H]+m/z：601。
实施例17：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,13,14-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂 二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：2-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)乙醇(Int-17a)
在20℃下向2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(50.0g，290mmol)于DMSO(150mL)中的经搅拌溶液中添加多聚甲醛(6.96g，232mmol)及苯甲基三甲铵氢氧化物(5.3mL，约0.02当量，40％于甲醇中)，且在N2气氛下于90℃搅拌混合物4h。将反应混合物用水(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×400mL)萃取。将合并的有机层用盐水(4×60mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-60％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到2-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)乙醇(Int-17a)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：202。
步骤B：2-(3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)乙醇(Int-17b)
向2-(2-氯-3-硝基吡啶-4-基)乙醇(10g，49.4mmol)于DME(100mL)及水(20mL)中的经搅拌溶液中添加Cs2CO3(48.2g，148mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(9.95g，59.2mmol)及双(三苯膦)二氯化钯(II)(1.73g，2.47mmol)，且在85℃下搅拌所得混合物16h。用EtOAc(200mL×3)萃取反应物。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法，石油醚EtOAc＝10/1纯化残留物，得到2-(3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)乙醇(Int-17b)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：208。
步骤C：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡 啶(Int-17c)
向2-(3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)乙醇(9.1g，43.7mmol)于DCM(120mL)中的经搅拌溶液中添加TBSCl(8.56g，56.8mmol)及咪唑(8.93g，131mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。将反应混合物用水(60mL)淬灭且用二氯甲烷(100mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂，其通过0-8％EtOAc/石油醚梯度的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-17c)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：323。
步骤D：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-17d)
在N2气氛下向4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(13g，40.3mmol)于MeOH(100mL)中的经搅拌溶液中添加PdC(2.15g，2.02mmol，10％w/w)，且将混合物脱气且用氢气吹扫三次。在氢气球(压力：15psi)下，于20℃搅拌所得混合物16h。过滤混合物且用甲醇(100mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-17d)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：[M+H]+m/z：295。
步骤E：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-17e)
在20℃下向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(3.00g，14.4mmol)于THF(40mL)中的经搅拌溶液中添加乙二酰氯(1.19mL，13.6mmol)，且在N2气氛下于65℃搅拌混合物30min。将混合物冷却至20℃，且在0℃下添加至4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-17d，4.65g，15.8mmol)于DCM(40mL)中的混合物中。在0℃下搅拌所得混合物10min。将反应混合物用碳酸氢钠水溶液(饱和，30mL)淬灭且用二氯甲烷(2×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-40％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-17e)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：529。
步骤F：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-17f)
在0℃下向N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(4.00g，7.55mmol)于THF(60mL)中的经搅拌溶液中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(15.1mL，15.1mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。将反应混合物用氯化铵水溶液(饱和，20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂，得到粗产物1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-17f)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI)：[M+H]+m/z：493。
步骤G：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7- 二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-17g)
在25℃下向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(3.72g，7.54mmol)于乙腈(50mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(3.29mL，18.9mmol)及POCl3(1.06mL，11.3mmol)，且在N2气氛下于80℃搅拌混合物1h。真空浓缩反应混合物，得到粗产物1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-17g)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：[M-Cl+MeOH]+m/z：507。
步骤H：(S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-17h)
在25℃下向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(3.86g，7.55mmol)于DMF(40mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(3.30mL，18.9mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.89g，9.43mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。真空浓缩反应物，且通过快速硅胶色谱法(0-40％EtOAc/石油醚的洗脱剂)纯化残留物，得到(S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-17h)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：675。
步骤I：(3S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-17i)
向(S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.444mmol)、乙酸钾(218mg，2.22mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(18mg，0.022mmol)于1,4-二噁烷(10mL)、水(2mL)中的经搅拌溶液中添加(2-氯-6-氟苯基)二羟硼酸(116mg，0.666mmol)，且在N2气氛下于90℃搅拌所得混合物2h。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-50％EtOAc/石油醚梯度的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-17i)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：769。
步骤J：(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶- 3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-17j)
向(3S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(240mg，0.312mmol)于THF(5mL)中的经搅拌溶液中添加1M TBAF于THF(0.936mL，0.936mmol)中的溶液，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物1h。真空浓缩反应混合物，且通过0-8％MeOH/DCM的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-17j)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：655。
步骤K：(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(2-(乙烯基氧基)乙 基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-17k)
向(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg，0.763mmol)于甲苯(10mL)中的经搅拌溶液中添加氯(1,5-环辛二烯)铱(I)二聚体(103mg，0.153mmol)、Na2CO3(162mg，1.53mmol)及乙酸乙烯酯(131mg，1.53mmol)，且在N2气氛下于100℃搅拌混合物3h。真空浓缩反应混合物，且通过0-40％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(2-(乙烯基氧基)乙基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-17k)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：681。
步骤L：Int-17l
向(3S)-4-(7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(2-(乙烯基氧基)乙基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.220mmol)于DMF(15mL)中的经搅拌溶液中添加N,N-二环己基甲胺(688mg，3.52mmol)、四氟硼酸三-叔丁基膦(128mg，0.440mmol)及C(206mg，0.220mmol)，且在微波中在N2气氛下于160℃搅拌混合物1h。真空浓缩反应混合物，且通过Al2O3色谱法(0-10％MeOH/DCM的洗脱剂)纯化残留物，得到Int-17l。MS(ESI)：[M+H]+m/z：645。
步骤M：Int-17m
向Int-17l(90mg，0.070mmol)于MeOH(10mL)中的经搅拌混合物中添加Pd-C(22mg，0.021mmol，10％w/w)，且将混合物脱气并用氢气吹扫三次。在氢气(压力：15psi)下，于20℃搅拌所得混合物16h。过滤混合物且用甲醇(20mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液且通过制备型HPLC色谱法(水(0.1％TFA)-MeCN)纯化残留物，得到Int-17m。MS(ESI)：[M+H]+m/z：647。
步骤N：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,13,14-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂 二氮杂环十三烯-4-酮(实施例17a及17b)
向Int-17m(30mg，0.046mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.5mL)，且在20℃下搅拌混合物10min。真空浓缩反应混合物，且将残留物溶解于DCM(2mL)中，且随后添加DIEA(0.041mL，0.23mmol)及丙烯酰氯(6.3mg，0.070mmol)。在20℃下搅拌所得混合物5min。真空浓缩反应混合物，且通过制备型TLC板，用10％MeOH/DCM洗脱来纯化残留物。通过SFC柱B，条件：水(0.1％NH4OH)-MeOH 35％拆分外消旋物质，得到分离的阻转异构体：
峰1-实施例17a-18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,13,14-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮。MS(ESI)：[M+H]+m/z：601；1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.42(d,J＝5.0Hz,1H),8.33-8.21(m,1H),7.37(dt,J＝5.9,8.0Hz,1H),7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),7.01(t,J＝8.9Hz,1H),6.93-6.76(m,1H),6.32(br d,J＝16.0Hz,1H),5.84(dd,J＝1.8,10.6Hz,1H),5.02(br s,1H),4.67-4.50(m,2H),4.43-4.26(m,1H),4.02-3.71(m,2H),3.61-3.53(m,1H),3.47(br s,1H),3.42-3.32(m,3H),2.86(br d,J＝7.9Hz,1H),2.73-2.63(m,2H),2.49-2.33(m,2H),1.55(br t,J＝6.7Hz,3H),1.20(d,J＝6.9Hz,3H),0.99(br d,J＝6.1Hz,3H)；并且
峰2-实施例17b-18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,13,14-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮。MS(ESI)m/z(M+H)+：601；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.42(d,J＝5.5Hz,1H),8.33(br t,J＝8.2Hz,1H),7.45-7.35(m,1H),7.31(d,J＝5.1Hz,1H),7.08(d,J＝7.4Hz,1H),7.02(t,J＝8.6Hz,1H),6.93-6.76(m,1H),6.33(br d,J＝17.2Hz,1H),5.84(dd,J＝2.0,10.6Hz,1H),5.23(br s,1H),4.60(br s,2H),4.46(br d,J＝13.7Hz,1H),4.26-4.09(m,1H),3.97(br s,1H),3.78-3.40(m,3H),3.37-3.15(m,2H),2.84(br d,J＝6.7Hz,1H),2.68(br dd,J＝5.5,13.3Hz,2H),2.47(br s,1H),2.35(td,J＝6.8,12.9Hz,1H),1.46(d,J＝7.0Hz,3H),1.19(d,J＝7.0Hz,3H),0.99(br d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例18a：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙- 2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环 十二烯-4(13H)-酮
步骤A：(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1, 2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-18a)
在25℃下向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-17g，3.20g，6.26mmol)于DMF(50mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(2.73mL，15.6mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.57g，7.82mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。真空浓缩反应物，且通过快速硅胶色谱法，使用0-100％EtOAc/石油醚梯度的洗脱剂纯化残留物，得到(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-18a)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：561。
步骤B：Int-18b
向(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.535mmol)、乙酸钾(262mg，2.67mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(43.7mg，0.053mmol)于1,4-二噁烷(4mL)及水(1mL)中的经搅拌溶液中添加(2-氟-6-甲酰基苯基)二羟硼酸(180mg，1.07mmol)且在N2气氛下于90℃搅拌混合物30min。分离反应混合物且有机层经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。残留物通过快速硅胶色谱法，使用0-5％MeOH/DCM梯度的洗脱剂纯化，随后通过反相MPLC 0％-100％MeCN(0.5TFA)/H2O纯化，得到Int-18b MS(ESI)：[M+H]+m/z：649。
步骤C：Int-18c
向Int-18b(60mg，0.092mmol)于CH3NO2(6mL)中的经搅拌溶液中添加三乙基硅烷(0.120mL，0.751mmol)及TfOH(0.0500mL，0.563mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物30min。真空浓缩反应混合物，且通过制备型HPLC，用水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-MeCN10-100％B洗脱来纯化残留物，得到Int-18c。MS(ESI)：[M+H]+m/z：533。
步骤D：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十 二烯-4(13H)-酮(实施例18a)
向Int-18c(99.0mg，0.186mmol)于DCM(2.0mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(0.0970mL，0.558mmol)及丙烯酰氯(20.2mg，0.223mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物10min。真空浓缩反应混合物，且通过制备型HPLC，用水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-MeCN洗脱来纯化残留物。通过制备型SFC柱L，条件：0.1％NH4OH EtOH，55％拆分外消旋物质，得到分离的阻转异构体：
峰1–实施例18a-17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4(13H)-酮。MS(ESI)m/z(M+H)+：587；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.50(d,J＝5.1Hz,1H),8.19(br t,J＝10.8Hz,1H),7.56(d,J＝5.1Hz,1H),7.46(dt,J＝5.5,8.0Hz,1H),7.24-7.15(m,2H),6.96-6.76(m,1H),6.32(br d,J＝17.2Hz,1H),5.84(br d,J＝11.0Hz,1H),4.97-4.91(m,1H),4.70(br t,J＝15.1Hz,1H),4.59-4.37(m,2H),4.22-4.05(m,2H),4.00(d,J＝9.4Hz,1H),3.86-3.63(m,3H),3.44-3.32(m,1H),3.07(quin,J＝6.7Hz,1H),2.59-2.47(m,1H),2.44-2.29(m,1H),1.58(br t,J＝7.2Hz,3H),1.27(d,J＝6.7Hz,3H),1.01(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例19：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,12,13-四氢-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4,10]苯并三氮杂 环十三烯-4,14-二酮
步骤A：N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-19a)
在氮气气氛下，向烧瓶中添加2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(2.0g，9.6mmol)、THF(40mL)及乙二酰氯(2.0M于DCM中，4.8mL，9.6mmol)。将混合物加热至65℃，持续30分钟。30分钟后，将混合物冷却至室温，且随后添加4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10c，3.25g，10.5mmol)于THF(20mL)中的混合物。在室温下搅拌所得混合物1小时。在1小时之后，在减压下浓缩混合物。向所得混合物中添加吡啶(50mL)且然后将混合物冷却至0℃。添加叔丁基二甲基氯硅烷(1.6g，10mmol)。使混合物升温至室温且使其在室温下搅拌一小时。在一小时之后，在减压下浓缩混合物且随后通过硅胶柱色谱法(0-60％乙酸乙酯于己烷中的梯度)纯化，得到不纯混合物。再纯化混合物(0-70％甲基叔丁基醚于己烷中的梯度)，得到N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-19a)。MS(ESI)m/z 543[M+H]+
步骤B：1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-19b)
在氮气气氛下，于0℃向N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-19a，6.3g，12mmol)于THF(60mL)中的混合物中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(1.0M于THF中，23mL，23mmol)。随后使混合物升温至室温且然后在室温下搅拌30分钟。30分钟后，将混合物用氯化铵饱和水溶液(15mL)淬灭且然后用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下浓缩，得到粗1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-19b)，其未经进一步纯化或表征即使用。MS(ESI)m/z 507[M+H]+
步骤C：1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7- 二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-19c)
在室温下在氮气气氛下向含有含粗1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-19b)的乙腈(100mL)的烧瓶中添加DIEA(11mL，62mmol)及氧氯化磷(1.7mL，18mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续2小时。在2小时之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩，得到1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-19c)，其未经进一步纯化或表征即使用。MS(ESI)m/z 526[M+H]+
步骤D：(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1, 2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19d)
在30℃下向1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-19c，6.22g，11.8mmol)于乙腈(60mL)中的经搅拌溶液中添加DIPEA(4.13mL，23.7mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.56g，17.8mmol)，且在N2气氛下于30℃搅拌混合物1h。通过0-100％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19d)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：575。
步骤E：(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基 吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-19E)
在N2气氛下于20℃下向3-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯甲腈(387mg，1.56mmol)、(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19d、600mg，1.04mmol)及乙酸钾(512mg，5.22mmol)于1,4-二噁烷(7mL)及水(2mL)中的经搅拌溶液中添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(85.0mg，0.104mmol)，且在N2气氛下于90℃搅拌混合物15h。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-10％DCM/MeOH梯度的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19e)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：678。
步骤F：(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(3-((甲基磺 酰基)氧基)丙基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-19f)
在0℃下向(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19e，600mg，0.885mmol)于DCM(10mL)中的经搅拌溶液中添加Et3N(0.370mL，2.66mmol)及MsCl(0.207mL，2.66mmol)，且在N2气氛下于30℃搅拌混合物15h。将反应混合物用水(10mL)淬灭且用DCM(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂以得到粗产物，该粗产物通过快速硅胶色谱法、0-100％石油醚/EtOAc纯化，得到(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19f)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：756。
步骤G：Int-19g
在0℃下向(3S)-4-(7-(2-氨甲酰基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-(3-((甲基磺酰基)氧基)丙基)吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-19f，371mg，0.491mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加NaH(39.3mg，0.982mmol)(60％于矿物油中)，且在N2气氛下于30℃搅拌混合物15h。将反应混合物用氯化铵水溶液(饱和，15mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过制备型TLC(纯EtOAc)纯化残留物，得到Int-19g。MS(ESI)：[M+H]+m/z：660。
步骤H：Int-19h
在30℃下向Int-19g(220mg，0.333mmol)于CH2Cl2(3mL)中的经搅拌溶液中添加TFA(1.5mL)，且在30℃下搅拌混合物1h。真空浓缩反应混合物，得到Int-19h。MS(ESI)：[M+H]+m/z：560。
步骤I：18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,12,13-四氢-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4,10]苯并三氮杂 环十三烯-4,14-二酮(实施例19a及19b)
在0℃下，向粗Int-19h+TFA(91.0mg，0.163mmol)于DCM(2mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(0.0280mL，0.163mmol)及丙烯酰氯(14.7mg，0.163mmol)，且在0℃下搅拌混合物10min。通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化残留物。通过制备型SFC柱H，条件：0.1％NH4OH EtOH 35％拆分外消旋物质，得到：
峰1-实施例19a-18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4,10]苯并三氮杂环十三烯-4,14-二酮。MS(ESI)：[M+H]+m/z：614；(500HMz,甲醇-d4)δ：8.48(d,J＝5.0Hz,1H),8.33(br dd,J＝9.1,14.1Hz,1H),7.54(dt,J＝5.3,8.0Hz,1H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.32(t,J＝8.7Hz,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),6.98-6.78(m,1H),6.34(br dd,J＝4.7,16.8Hz,1H),5.86(dd,J＝1.8,10.5Hz,1H),5.19-5.07(m,1H),4.55-4.46(m,2H),4.24-4.12(m,1H),3.90(br d,J＝9.9Hz,1H),3.83-3.60(m,2H),3.40-3.30(br s,1H),3.19-3.06(m,1H),2.78-2.65(m,1H),2.64-2.47(m,2H),2.21-2.08(m,1H),1.99-1.82(m,1H),1.52(br t,J＝5.5Hz,3H),1.16(d,J＝6.9Hz,3H),0.82(br d,J＝6.6Hz,3H)；并且
峰2-实施例19b-18,21-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-1,19-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4,10]苯并三氮杂环十三烯-4,14-二酮。MS(ESI)：[M+H]+m/z：614；1H NMR(500HMz,methanol-d4)δ：8.36(d,J＝5.2Hz,1H),8.21(br t,J＝9.1Hz,1H),7.41(dt,J＝5.3,8.0Hz,1H),7.30(d,J＝5.2Hz,1H),7.19(t,J＝8.7Hz,1H),7.13(d,J＝7.5Hz,1H),6.82-6.68(m,1H),6.22(brdd,J＝4.0,16.8Hz,1H),5.74(br d,J＝10.7Hz,1H),5.09-4.97(m,1H),4.48-4.29(m,2H),4.13-4.00(m,1H),3.79(br s,1H),3.70-3.46(m,2H),3.34-3.13(m,1H),2.99(td,J＝4.5,14.0Hz,1H),2.65-2.51(m,1H),2.50-2.38(m,2H),2.08-1.96(m,1H),1.88-1.75(m,1H),1.38(d,J＝6.7Hz,3H),1.03(d,J＝6.7Hz,3H),0.68(br d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例20a及20b：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6- (丙-2-基)-12,13-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][7,2,4]苯并氧杂二氮 杂环十二烯-4(11H)-酮
步骤A：4-甲氧基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-20a)
向4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，8.00g，40.3mmol)于MeOH(80mL)中的经搅拌溶液中添加甲醇钠(5.44g,101mmol)。在75℃下搅拌所得混合物16h。真空浓缩反应混合物且将残留物分配于水(40mL)与EtOAc(100mL×3)之间。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化残留物，得到4-甲氧基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-20a)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：195。
步骤B：2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-胺(Int-20b)
在氩气气氛下于25℃向4-甲氧基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-20a，13.0g，66.9mmol)于MeOH(300mL)中的溶液中添加Pd-C(1.59g，0.67mmol，5％w/w)。在H2气氛(15psi)下，于25℃搅拌混合物15h。15h之后，添加另一批次Pd-C(4.76g，2.01mmol，5％w/w)，且在H2气氛(30psi)下，于25℃搅拌混合物15h。过滤混合物且在减压下蒸发滤液以得到粗产物，该粗产物通过快速硅胶色谱法，使用0-30％乙酸乙酯/石油醚梯度的洗脱剂纯化，得到2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-胺(Int-20b)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：167。
步骤C：2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)氨甲酰基)烟碱酰胺 (Int-20c)
在N2气氛下，于25℃向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(8.70g，41.6mmol)于THF(82mL)中的溶液中添加乙二酰氯(3.52mL，41.6mmol)，且在65℃下搅拌混合物30min。随后将反应物冷却至室温，添加含2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-胺(Int-20b，6.92g，41.6mmol)的THF(65mL)，且在25℃下搅拌混合物1h。在减压下蒸发混合物以得到粗产物，该粗产物通过0-10％MeOH/DCM梯度的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化，得到2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)氨甲酰基)烟碱酰胺(Int-20c)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：401。
步骤D：7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4 (1H,3H)-二酮(Int-20d)
在N2气氛下，于0℃向2,6-二氯-5-氟-N-((2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)氨甲酰基)烟碱酰胺(Int-20c，11.5g，28.7mmol)于THF(220mL)中的溶液中添加KHMDS(71.7mL，71.7mmol)(1.0M于THF中)。在25℃下搅拌混合物30min。在减压下蒸发混合物，得到粗产物，该粗产物通过快速硅胶色谱法，使用0-10％MeOH/DCM梯度的洗脱剂纯化，得到7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-20d)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：365。
步骤E：4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2 (1H)-酮(Int-20e)
在25℃下向7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-20d，3.64g，9.98mmol)于MeCN(40mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(4.36mL,25.0mmol)及POCl3(2.33mL,25.0mmol)。在80℃下搅拌混合物30min。真空浓缩反应混合物，得到4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-20e)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：[M+H]+m/z：383。
步骤F：(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢 吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20f)
在25℃下向4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-20e，3.80g，9.92mmol)于MeCN(40mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(5.20mL，29.7mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.97g，19.8mmol)，且在80℃下搅拌混合物30min。真空浓缩反应混合物，且通过硅胶柱色谱法，用石油醚/EtOAc＝1/1的洗脱剂纯化残留物，得到(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20f)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：548。
步骤G：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3- 基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20g)
在N2气氛下，于90℃向(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20f，1.14g，2.08mmol)、乙酸钾(1.02g，10.4mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(0.170g，0.208mmol)于1,4-二噁烷(15mL)及水(3mL)中的经搅拌溶液中添加溶解于1,4-二噁烷(0.5mL)中的三氟(2-氟-6-羟基苯基)硼酸钾(0.909g，4.17mmol)。在N2气氛下，于90℃下搅拌混合物0.5h。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-50％DCM/MeOH梯度的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20g)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：624。
步骤H：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯基)-1-(2-异丙 基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-20h)
在N2气氛下，于0℃向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20g，500mg，0.803mmol)于DCM(8mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(191mg，2.41mmol)，随后添加Tf2O(0.407mL，2.41mmol)。在N2气氛下，于20℃搅拌混合物2h。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过快速硅胶色谱法，使用0-10％DCM/MeOH梯度的洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯基)-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20h)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：755。
步骤I：(3S)-4-(7-(2-((E)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-6- 氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶- 4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20i)
在N2气氛下，于25℃向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯基)-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20h，350mg，0.464mmol)于甲苯(6mL)中的经搅拌溶液中添加(E)-叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)烯丙基)氧基)硅烷(208mg，0.696mmol)、磷酸钾(1.39mL，1.39mmol)(1M于水中)及氯(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(33.4mg，0.046mmol)，且在N2气氛下，于60℃搅拌混合物12h。将反应物用水(10mL)淬灭且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法，用石油醚/EtOAc＝1/2洗脱来纯化残留物，得到(3S)-4-(7-(2-((E)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯Int-20i。MS(ESI)：[M+H]+m/z：777。
步骤J：(3S)-4-(7-(2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-6-氟苯基)-6-氟- 1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基 哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20j)
在N2气氛下，于25℃向(3S)-4-(7-(2-((E)-3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-1-烯-1-基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20i，200mg，0.257mmol)于MeOH(5mL)中的经搅拌溶液中添加Pd-C(27.4mg，0.257mmol，10％w/w)。将混合物脱气且用氢气吹扫三次，并在H2气球(15psi)下于25℃搅拌12h。过滤混合物且真空浓缩滤液，得到(3S)-4-(7-(2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20j)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：779。
步骤K：6-氟-7-(2-氟-6-(3-羟基丙基)苯基)-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)- 4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-20k)
向(3S)-4-(7-(2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20j，110mg，0.141mmol)于MeCN(1.5mL)中的经搅拌溶液中添加KI(23.4mg，0.141mmol)及氯三甲基硅烷(15.3mg，0.141mmol)，且在80℃下搅拌所得混合物16h。反应混合物未经进一步纯化即直接用于下一步骤。(Int-20k)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：551。
步骤L：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(3-羟基丙基)苯基)-1-(4-羟基-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 20l)
在N2气氛下，于0℃向6-氟-7-(2-氟-6-(3-羟基丙基)苯基)-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-20k，110mg，0.100mmol)于MeCN(1mL)中的经搅拌溶液中添加含碳酸氢钠(8.4mg，0.10mmol)的水(0.2mL)及Boc2O(0.035mL，0.15mmol)。在N2气氛下，于25℃搅拌混合物1h。用EtOAc(10mL×3)萃取混合物，且合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩滤液。通过制备型TLC板(SiO2，DCM/MeOH＝10/1)纯化残留物，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(3-羟基丙基)苯基)-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20l)。MS(ESI)：[M+H]+m/z：651。
步骤M：Int-20m
向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-(3-羟基丙基)苯基)-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-20，35.0mg，0.0550mmol)于THF(3.0mL)中的经搅拌溶液中添加三苯膦(36.0mg，0.137mmol)。在N2气氛下于65℃搅拌混合物，且随后添加(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二-叔丁酯(25.3mg，0.110mmol)。在65℃下搅拌反应物3h。将混合物冷却至rt且通过制备型TLC板(SiO2，DCM/MeOH＝10/1)直接纯化，得到Int-20m。MS(ESI)：[M+H]+m/z：633。
步骤N：Int-20n
在25℃下搅拌Int-20m(22mg，0.035mmol)于DCM(0.5mL)及TFA(0.1mL)中的溶液10min。真空浓缩混合物，得到Int-20n，其经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：[M+H]+m/z：533。
步骤O：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-12,13-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][7,2,4]苯并氧杂二氮杂环十 二烯-4(11H)-酮(实施例20a及20b)
向Int-20n(18.5mg，0.0350mmol)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中添加DIEA(0.0180mL，0.104mmol)及丙烯酰氯(6.3mg，0.070mmol)。在0℃下搅拌所得混合物10min。通过制备型TLC板(SiO2，DCM/MeOH＝10/1)直接纯化混合物。通过SFC柱N，条件：0.1％NH4OHMeOH，55％拆分外消旋物质，得到经分离的阻转异构体：
峰1-实施例20a-17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][7,2,4]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4(11H)-酮。MS(ESI)：[M+H]+m/z：587；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ：8.40(d,J＝5.9Hz,1H),8.17(br d,J＝8.2Hz,1H),7.49-7.32(m,1H),7.18-7.09(m,2H),7.05(t,J＝9.0Hz,1H),6.95-6.74(m,1H),6.31(br d,J＝16.4Hz,1H),5.84(br d,J＝10.2Hz,1H),4.77-4.62(m,2H),4.59(br s,1H),4.51-4.15(m,1H),4.03-3.94(m,1H),3.70(br d,J＝13.7Hz,2H),3.43–3.31(m,1H),3.07-2.93(m,1H),2.85(br,1H),2.18-2.06(m,1H),1.94(br,1H),1.81-1.65(m,2H),1.57(br t,J＝7.4Hz,3H),1.28(d,J＝6.7Hz,3H),0.99(d,J＝6.7Hz,3H)；并且
峰2-实施例20b-17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][7,2,4]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4(11H)-酮。MS(ESI)：[M+H]+m/z：587；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ：8.40(d,J＝5.9Hz,1H),8.32(br d,J＝8.6Hz,1H),7.46-7.37(m,1H),7.13(dd,J＝12.5,7.0Hz,2H),7.04(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(br dd,J＝16.4,9.8Hz,1H),6.32(br d,J＝16.8Hz,1H),5.84(dd,J＝10.6,2.0Hz,1H),5.33(br s,1H),4.72(br d,J＝11.7Hz,1H),4.59(br,1H),4.46-4.22(m,2H),4.12-3.78(m,3H),3.46(br s,1H),3.00(br d,J＝6.7Hz,1H),2.83(br s,1H),2.11(br t,J＝10.6Hz,1H),1.93(br s,1H),1.79-1.64(m,1H),1.37(br s,3H),1.28(d,J＝7.0Hz,3H),0.99(d,J＝6.7Hz,3H)。
制备2-氯-5-氟-6-(2-氟-6-羟基苯基)烟碱腈(Int-21)
将2,6-二氯-5-氟烟碱腈(2.86g，15mmol)、三氟(2-氟-6-羟基苯基)硼酸钾(3.60g，16.5mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.549g，0.750mmol)及乙酸钾(2.94g，30.0mmol)合并于500mL圆底烧瓶中。用氮气吹扫烧瓶3次。添加二噁烷(150mL)及水(15mL)(10:1)。在60℃下搅拌反应混合物16h。将混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取3至4次，且用无水Na2SO4干燥，随后在真空下蒸发溶剂且通过硅胶柱色谱法，使用10％-30％EtOAc/己烷纯化，得到2-氯-5-氟-6-(2-氟-6-羟基苯基)烟碱腈(Int-21)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.91(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(q,J＝1.6Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.79–6.75(m,1H)。
制备2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙醇(Int-22)
在20℃下向4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-7c，1g，3.4mmol)于THF(10mL)中的经搅拌溶液中添加TBAF(8.49mL，8.49mmol)(1M于THF中)，且在氮气气氛下，于20℃搅拌混合物4h。浓缩反应物且通过快速硅胶色谱法，使用0-100％EtOAc/石油醚的洗脱剂纯化残留物，得到2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙醇(Int-22)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.99(d,J＝4.7Hz,1H),6.84(d,J＝4.7Hz,1H),3.97(t,J＝6.1Hz,4H),3.16-2.95(m,1H),2.80(t,J＝6.1Hz,2H),1.31(d,J＝6.7Hz,6H)。
制备(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c)
步骤A：(3,6-二氟-2-甲氧基苯基)二羟硼酸(Int-23a)
在氮气下将1,4-二氟-2-甲氧基苯(2.40mL，20.8mmol)溶解于THF(20.8mL)中。将所得溶液冷却至0℃。在0℃下将二异丙氨基锂(25.0mL，25.0mmol)于THF-己烷中的1M溶液逐滴添加至反应混合物中。在0℃下搅拌所得混合物15min且随后将硼酸三甲酯(2.79mL，25.0mmol)逐滴添加至反应容器中。在0℃下搅拌所得混合物30min。将硫酸(52.0mL，104mmol)的冰冷的2M水溶液逐滴添加至反应混合物中且在0℃搅拌所得混合物2h。用氯彷(3×100mL)萃取产物混合物三次。合并有机层且经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。含有(3,6-二氟-2-甲氧基苯基)二羟硼酸(Int-23a)的所获得残留物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤B：(3,6-二氟-2-羟基苯基)二羟硼酸(Int-23b)
在氮气下将(3,6-二氟-2-甲氧基苯基)二羟硼酸(2.8g，14.9mmol)溶解于DCM(49.7mL)中。将所得溶液冷却至0℃。小心地将纯三溴硼烷(4.31mL，44.7mmol)逐滴添加至反应容器中。当TLC显示起始物质完全转化时，在0℃下搅拌反应混合物15min。通过逐滴添加冰冷水(5mL)小心地淬灭产物混合物。用氯彷(3×100mL)萃取产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。含有(3,6-二氟-2-羟基苯基)二羟硼酸(Int-23b)的所获得残留物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤C：(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c)
将(3,6-二氟-2-羟基苯基)二羟硼酸(2.59g，14.9mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气回填三次。将甲醇(18.6mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(4.65g，59.6mmol)及水(18.6mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(50mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(100mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(200mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.14(q,J＝14.7Hz,1H),6.86(ddd,J＝10.8,8.8,5.2Hz,1H),6.32(td,J＝8.3,3.2Hz,1H)。
制备(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-24)
将(2,3-二氟-6-羟基苯基)二羟硼酸(0.500g，2.88mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲醇(3.59mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(0.898g，11.5mmol)及水(3.59mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(20mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(40mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(200mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-24)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.84(q,J＝13.3Hz,1H),6.91(q,J＝8.3Hz,1H),6.32(dd,J＝10.0,5.0Hz,1H)。
制备三氟(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-25)
向含2-羟基-3-(三氟甲基)苯基二羟硼酸(500mg，2.43mmol)的甲醇(3.04mL)/水(3.04mL)中添加二氟化钾(759mg，9.71mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜。用丙酮(20mL)稀释反应混合物且过滤。将滤液真空浓缩且仅仅再溶解于丙酮中。添加己烷(约4mL)且再次过滤混合物。再次浓缩有机物，得到三氟(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-25)。MS(ESI)m/z 229[M–K]–。
制备三氟(2-羟基-5-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-26)
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将(2-羟基-5-(三氟甲基)苯基)二羟硼酸(0.500g，2.43mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气回填三次。将甲醇(3.04mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(0.759g，9.71mmol)及水(3.04mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(25mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(50mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(50mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到三氟(2-羟基-5-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-26)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(q,J＝9.7Hz,1H),7.41(d,J＝2.5Hz,1H),7.28(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),6.69(d,J＝8.4Hz,1H)。
制备三氟(3-氟-2-羟基苯基)硼酸钾(Int-27)
将(3-氟-2-羟基苯基)二羟硼酸(1.15g，7.38mmol)添加至50mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲醇(14.8mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(2.30g，29.5mmol)及水(14.8mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(50mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(100mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(200mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到三氟(3-氟-2-羟基苯基)硼酸钾(Int-27)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.43(d,J＝9.6Hz,1H),6.92(dd,J＝7.2,1.6Hz,1H),6.83(ddd,J＝11.8,7.9,1.7Hz,1H),6.60(td,J＝7.6,4.3Hz,1H)。
制备(4,5-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-28)
将(4,5-二氟-2-羟基苯基)二羟硼酸(0.500g，2.88mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲醇(3.59mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(0.898g，11.5mmol)及水(3.59mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(25mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(40mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(约20mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到(4,5-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-28)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.52(qd,J＝9.7,1.4Hz,1H),6.92(t,J＝10.9Hz,1H),6.51(dd,J＝12.8,6.5Hz,1H)。
制备(2-氯-6-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-29)
将(2-氯-6-羟基苯基)二羟硼酸(0.500g，2.90mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲醇(3.63mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(0.906g，11.6mmol)及水(3.63mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(50mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(100mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(200mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到(2-氯-6-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-29)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.45(q,J＝16.7Hz,1H),6.92(t,J＝7.9Hz,1H),6.65(d,J＝7.8Hz,1H),6.48(d,J＝8.0Hz,1H)。
制备三氟(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-30)
将(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)二羟硼酸(0.500g，2.43mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲醇(3.04mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。在单独40mL小瓶中添加二氟化钾(0.759g，9.71mmol)及水(3.04mL)。将所得氟化物溶液沿流向添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。用丙酮(25mL)稀释产物混合物。过滤经稀释的产物混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(40mL)稀释所获得的残留物。过滤经稀释的混合物且将滤液浓缩至干燥。用丙酮(3mL)稀释所获得的残留物，且然后用己烷(约20mL)湿磨溶液。通过过滤收集产物，得到三氟(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-30)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.60(q,J＝16.7Hz,1H),7.12(t,J＝7.9Hz,1H),7.01(d,J＝7.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.0Hz,1H)。
制备2-氯-6-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-5-氟烟碱腈(Int-31)
将2,6-二氯-5-氟烟碱腈(0.382g，2.00mmol)、(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(0.472g，2.00mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.146g，0.200mmol)及乙酸钾(0.393g，4.00mmol)合并于50mL圆底烧瓶中。用氮气吹扫烧瓶3次。添加二噁烷(15.3mL)及水(0.955mL)(15:1)。在60℃下搅拌反应混合物过夜。过滤反应混合物且通过柱色谱法，使用10％-20％乙酸乙酯-己烷纯化粗产物，得到2-氯-6-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-5-氟烟碱腈(Int-31)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.26(td,J＝9.5,5.0Hz,1H),6.75(td,J＝9.2,3.7Hz,1H)。
制备3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-32)
向含有4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10c，2.00g，6.48mmol)的烧瓶中添加THF(13mL)，并然后添加TBAF(19.5mL，19.5mmol，1M于THF中)。将混合物加热至50℃，持续一小时。在冷却至室温后，在减压下浓缩混合物，且然后通过柱色谱法，使用0-30％乙酸乙酯/己烷来纯化粗产物，得到3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-32)。MS(ESI)m/z 195[M+H]+。
制备(R)-3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-33b)
步骤A：(R)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶 (Int-33a)
将(R)-1-(苯甲基氧基)丙-2-醇(0.178mL，1.10mmol)溶解于THF(2.98mL)中且冷却至0℃。接下来，缓慢添加氢化钠(0.044g，1.1mmol，60wt％于矿物油中)且在0℃下搅拌反应物30min。此后，逐滴添加4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，0.199g，1.00mmol)且在此温度下搅拌反应混合物2h直至起始物质耗尽为止。然后，将其用饱和氯化铵淬灭且用乙酸乙酯稀释。分离各层且用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物，得到(R)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-33a)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝5.8Hz,1H),7.40–7.29(m,5H),6.98(d,J＝5.8Hz,1H),5.36(dq,J＝2.1,1.3Hz,1H),5.30–5.22(m,1H),4.78(pd,J＝6.5,3.9Hz,1H),4.62–4.50(m,2H),3.66(dd,J＝10.6,6.8Hz,1H),3.62(dd,J＝10.6,3.9Hz,1H),2.19(t,J＝1.2Hz,3H),1.38(d,J＝6.3Hz,3H)。
步骤B：(R)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-33b)
在H2下，于30℃搅拌(R)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(4g，12mmol)、AcOH(4mL)及Pd/C(2g)于EtOH(40mL)中的混合物过夜。过滤反应混合物且浓缩，得到(R)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-33b)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.78(d,J＝5.6Hz,1H),6.80(d,J＝5.6Hz,1H),4.64-4.56(m,1H),3.78-3.68(m,2H),3.19(s,1H),1.33(d,J＝6.4Hz,3H),1.25(dd,J＝1.2,6.6Hz,6H)。
制备(S)-3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-34c)
步骤A：(S)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶 (Int-34a)
在0℃下(S)-1-(苯甲基氧基)丙-2-醇(4.20g，25.3mmol)于THF(40mL)中的混合物中添加NaH(2.50g，63.3mmol，60wt％)。在室温下搅拌混合物1h，并然后添加含4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，5.00g，25.3mmol)的THF(10mL)。在室温下搅拌反应混合物过夜。将以上溶液倒入NH4Cl溶液中。用EtOAc(80mL×3)萃取溶液。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩。通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50:1)纯化粗产物，得到(S)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-34a)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝5.6Hz,1H),7.40–7.28(m,5H),6.97(d,J＝6.0Hz,1H),5.36–5.24(m,2H),4.81–4.75(m,1H),4.61–4.52(m,2H),3.69–3.57(m,2H),2.19(s,3H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H)。
步骤B：(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-34b)
在H2下，于30℃搅拌(S)-4-((1-(苯甲基氧基)丙-2-基)氧基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(4.0g，12mmol)、AcOH(4mL)及Pd/C(2.0g，10wt％)于EtOH(40mL)中的混合物过夜。过滤反应混合物且浓缩，未经进一步纯化即得到(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-34b)。
步骤C：(S)-3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-34c)
在室温下向(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(10.0g，47.6mmol)及咪唑(6.50g，95.2mmol)于DCM(100mL)中的混合物中添加叔丁基氯二甲基硅烷(10.7g，71.4mol)。在室温搅拌反应混合物过夜。用水(20mL)洗涤反应混合物且浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH＝100:1)纯化粗产物，得到(S)-3-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)丙-1-醇(Int-34c)。MS(ESI)m/z 325[M+H]+。
制备4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d 4 )-2-异丙基吡啶-3- 胺(Int-35c)
步骤A：2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙-1,1,2,2-d4-1-醇(Int-35a)
在500mL圆底烧瓶中添加乙烷-d4-1,2-二醇(5.0g，76mmol)。抽空反应容器且用氮气回填三次。将THF(100mL)添加至反应容器中。在24℃下经15min将氢化钠(3.0g，76mmol60％于矿物油中的悬浮液)分六份添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物1h。在200mL尖烧瓶中，在氮气下将叔丁基氯二甲基硅烷(11.4g，76.0mmol)溶解于30mL THF中。通过插管将所得混合物逐滴添加至反应容器中。将THF(2×10mL)添加至含有氯化硅烷的容器中且将冲洗液逐滴添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物1h。用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭产物混合物。用乙醚(3×50mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过快速柱色谱法，用0-30％乙酸乙酯-己烷洗脱来纯化残留物，得到2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙-1,1,2,2-d4-1-醇(Int-35a)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ0.93(s,9H),0.11(s,6H)。
步骤B：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4 )-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-35b)
将2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙-1,1,2,2-d4-1-醇(4.82g，26.7mmol)添加至500mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气回填三次。将THF(50mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。在15min中以五等份添加氢化钠(1.12g，28.0mmol，60％于矿物油中的悬浮液)。在0℃下搅拌所得混合物30min。在尖100mL烧瓶中，在氮气下将4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，5.05g，25.4mmol)溶解于THF(25mL)中。在0℃下通过插管将所得溶液逐滴转移至反应混合物中。在0℃下搅拌所得混合物2h。用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过快速柱色谱法，用0-40％乙酸乙酯-己烷洗脱来纯化所获得的残留物，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-35b)。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)δ8.49(d,J＝5.8Hz,1H),7.13(d,J＝5.8Hz,1H),5.45–5.26(m,1H),5.21–4.97(m,1H),2.11(s,3H),0.85(s,9H),0.04(s,6H)。
步骤C：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶- 3-胺(Int-35c)
将4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(4.82g，14.1mmol)溶解于EtOH(70mL)中，在氮气下脱气，添加Pd-C(10wt％，0.300g，2.81mmol)，在氮气下脱气，且使其在氢气气氛下搅拌24h。将产物混合物用氮气充分吹扫。通过硅藻土垫过滤经吹扫的反应混合物。将滤液浓缩至干燥。用乙酸乙酯(20mL)稀释所获得的残留物且通过针筒过滤器过滤经稀释的产物混合物以进一步移除残留物催化剂/活性炭。将滤液浓缩至干燥，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-35c)。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)δ7.84(d,J＝5.5Hz,1H),6.73(d,J＝5.5Hz,1H),4.03(s,2H),3.11(p,J＝6.7Hz,1H),1.23(d,J＝6.7Hz,6H),0.92(s,9H),0.11(s,6H)。
制备4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-36c)
/>
步骤A：4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-氯嘧啶-5-胺 (Int-36a)
向用惰性氮气气氛吹扫及保持的5000mL 3颈圆底烧瓶中置入DME(2000mL)、H2O(400mL)、Na2CO3(248g，2343mmol，3.00当量)、叔丁基二甲基[[(2E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]硅烷(233g，781mmol，1.00当量)、4,6-二氯嘧啶-5-胺(128g，781mmol，1.00当量)、Pd(PPh3)2Cl2(47g，67mmol，0.10当量)。将所得溶液在油浴中于80℃搅拌3h。将所得溶液冷却至室温，用2×500mL乙酸乙酯萃取，且合并有机层并在真空下浓缩。通过柱色谱法，使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)纯化残留物，得到4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-氯嘧啶-5-胺(Int-36a)。MS(ESI)m/z300[M+H]+。
步骤B：4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-(丙-1-烯-2- 基)嘧啶-5-胺(Int-36b)
向用惰性氮气气氛吹扫及保持的5000mL 3颈圆底烧瓶中置入DME(2000mL)、H2O(400mL)、Cs2CO3(531g，1630mmol，3当量)、4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-氯嘧啶-5-胺(163g，543mmol，1.00当量)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-2-烯-1-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(91g，544mmol，1.00equiv)、Pd(PPh3)2Cl2(38g，54mmol，0.1当量)。将所得溶液在油浴中于100℃搅拌12h。将所得溶液冷却至室温，且用2×500mL乙酸乙酯萃取。合并有机层且在真空下浓缩。通过柱色谱法，用乙酸乙酯/石油醚(1:1)纯化残留物，得到4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(Int-36b)。MS(ESI)m/z 306[M+H]+。
步骤C：4-[3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙基]-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-36c)
向用惰性氮气气氛吹扫及保持的3000mL 3颈圆底烧瓶中置入乙醇(1500mL)、4-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(107g，350mmol，1.00当量)及Pd/C(3.73g，35.0mmol，0.1当量)。将H2(气体)引入混合物中。在25℃下搅拌所得溶液12h。滤出固体。浓缩所得混合物。通过柱色谱法(EtOAc：石油醚＝1:1)纯化残留物，得到4-[3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]丙基]-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-36c)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ8.28(s,1H),5.00(s,2H),3.66(t,J＝6.5Hz,2H),3.29-3.12(m,1H),2.63(t,J＝7.4Hz,2H),1.93-1.77(m,2H),1.14(d,J＝6.6Hz,6H),0.86(s,9H),0.02(s,6H)。
制备4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁烷-2-基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int- 37d-1及Int-37d-2)
步骤A：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-醇(Int- 37a)
向含有磁性搅拌棒的微波小瓶中添加Pd(Ph3P)4(4.01g，3.47mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(26.4g，104mmol)。抽空小瓶且用氮气回填三次。添加甲苯(24mL)，随后添加丁-3-炔-1-醇(6.08g，87mmol)及乙酸(4.4mL)。将反应混合物预先搅拌5min，然后在微波中加热至80℃，持续30min。在冷却至室温之后，真中浓缩混合物，且通过硅胶柱色谱法(石油醚：EtOAc＝50:1至20:1)纯化残留物，得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-醇(Int-37a)。将反应物以四批(各1.52g)装配。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.89(d,J＝3.0Hz,1H),5.70(s,1H),3.67(t,J＝6.0Hz,2H),2.42(t,J＝6.0Hz,2H),1.26(s,12H)。
步骤B：叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3- 烯-1-基)氧基)硅烷(Int-37b)
向3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-醇(15g，76mmol)于DCM(260mL)中的经搅拌溶液中添加叔丁基氯二甲基硅烷(17.1g，114mmol)及咪唑(10.3g，151mmol)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。将反应混合物用水(200mL)淬灭，且用二氯甲烷(250mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(180mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂，其通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝60:1至30:1)纯化，得到叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷(Int-37b)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.78(d,J＝3.2Hz,1H),5.62(s,1H),3.61(t,J＝7.2Hz,2H),2.33(t,J＝7.2Hz,2H),1.21(s,12H),0.84(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤C：4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-2-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯- 2-基)吡啶(Int-37c)
向4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，4.00g，20.1mmol)于DME(175mL)及水(25mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸铯(13.1g，40.3mmol)、叔丁基二甲基((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷(9.44g，30.2mmol)及双(三苯膦)二氯化钯(II)(0.707g，1.01mmol)，且在N2气球下，于70℃搅拌所得混合物16h。冷却混合物，用水(200mL)稀释，用EtOAc(2×300mL)萃取，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂，得到粗产物。通过硅胶色谱法(EtOAc/石油醚，1:10至1:5)纯化粗产物，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-2-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-37c)。MS(ESI)m/z 349[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(d,J＝5.2Hz,1H),7.18(d,J＝5.2Hz,1H),5.31(d,J＝4.4Hz,2H),5.15(d,J＝11.2Hz,2H),3.69(t,J＝6.4Hz,2H),2.57(t,J＝6.4Hz,2H),2.18(s,3H),0.86(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤D：4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁烷-2-基)-2-异丙基吡啶-3-胺 (Int-37d-1及Int-37d-2)
在氮气气氛下向4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-2-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(4.00g，11.5mmol)于MeOH(50mL)中的经搅拌溶液中添加Pd-C(1.22g，1.15mmol)(10wt％)，且将混合物脱气并用氢气吹扫三次。在(压力：15psi)氢气球下，于20℃搅拌所得混合物4h。过滤混合物且用甲醇(100mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁烷-2-基)-2-异丙基吡啶-3-胺。通过制备型SFC柱M，条件：0.1％NH3H2O IPA拆分外消旋物质，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁烷-2-基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-37d-1)作为峰1。MS(ESI)m/z 323[M+H]+。及4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁烷-2-基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-37d-2)作为峰2。MS(ESI)m/z 323[M+H]+。
制备4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基吡啶- 3-胺(Int-38g)
步骤A：2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-醇(Int-38a)
在0℃下将NaH(60％)(8.85g，221mmol)添加至2-亚甲基丙烷-1,3-二醇(15.0g，170mmol)于THF(800mL)中的溶液。在0℃下搅拌0.5h之后，在0℃下将叔丁基氯二甲基硅烷(26.9g，179mmol)添加至混合物中，得到白色混合物。在20℃下再搅拌所得混合物2h。随后将反应物缓慢倒入200mL冰水中。用乙酸乙酯(2×300mL)萃取所得溶液，且合并有机层。将有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈油状物的粗产物。通过快速硅胶色谱法(0-3％EtOAc/石油醚)纯化油状物，得到2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-醇(Int-38a)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.09(dd,J＝0.8,9.0Hz,2H),4.25(s,2H),4.17(d,J＝5.8Hz,2H),0.91(s,9H),0.09(s,6H)。
步骤B：((2-(溴甲基)烯丙基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(Int-38b)
在0℃下向2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)丙-2-烯-1-醇(33.0g，163mmol)于CH2Cl2(500mL)中的经搅拌溶液中添加三苯膦(51.3g，196mmol)，随后添加全溴甲烷(64.9g，196mmol)。在15℃下搅拌溶液17h。过滤溶液且在真空下浓缩滤液。经硅胶(EtOAc/石油醚，自0:100分级至5:95)色谱法残留物，得到((2-(溴甲基)烯丙基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(Int-38b)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.27-5.21(m,2H),4.27(s,2H),4.01(s,2H),0.92(s,9H),0.10(s,6H)。
步骤C：叔丁基二甲基((2-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)甲 基)烯丙基)氧基)硅烷(Int-38c)
向配备有磁性搅拌棒及冷凝器的双颈圆底烧瓶中添加镁(3.30g，136mmol)且装配有橡胶隔膜。将烧瓶用氩气吹扫且添加无水THF(500mL)，随后添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(14.5g，113mmol)。在25℃下随著不断搅拌向反应混合物中逐滴添加((2-(溴甲基)烯丙基)氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(30.0g，113mmol)。在25℃下搅拌90min之后，然后将反应物用己烷(200mL)稀释且用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到叔丁基二甲基((2-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)甲基)烯丙基)氧基)硅烷(Int-38c)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.00(d,J＝1.8Hz,1H),4.81(d,J＝1.7Hz,1H),4.07(s,2H),1.67(s,2H),1.24(s,12H),0.91(s,9H),0.06(s,6H)。
步骤D：4-氯-2-异丙基-3-硝基吡啶(Int-38d)
在氮气气氛下向4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，6.00g，30.2mmol)于乙醇(100mL)及甲苯(20mL)中的经搅拌溶液中添加三(三苯膦)氯化铑(I)(2.80g，3.02mmol)，且将混合物脱气并用氢气吹扫三次。在(压力：50psi)氢气下，于50℃搅拌所得混合物6h。真空浓缩反应混合物，且通过快速硅胶色谱法(0-8％EtOAc/石油醚梯度的洗脱剂)纯化残留物，得到4-氯-2-异丙基-3-硝基吡啶(Int-38d)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝5.1Hz,1H),7.33(d,J＝5.1Hz,1H),3.12-3.01(m,1H),1.31(d,J＝6.7Hz,6H)。
步骤E：4-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)烯丙基)-2-异丙基-3-硝基吡 啶(Int-38e)
在N2气氛下于25℃向4-氯-2-异丙基-3-硝基吡啶(4.90g，24.4mmol)于二噁烷(100mL)中的经搅拌溶液中添加叔丁基二甲基((2-((4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)甲基)烯丙基)氧基)硅烷(22.9g，73.3mmol)、Cs2CO3(16.3mL，48.8mmol)(3M水溶液)及RuPhos Pd G3(1.90g，2.44mmol)，且在N2气氛下于80℃搅拌混合物3h。将反应混合物用水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过快速硅胶色谱法(0-2％EtOAc/石油醚的洗脱剂)纯化残留物，得到4-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)烯丙基)-2-异丙基-3-硝基吡啶(Int-38e)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝4.9Hz,1H),7.19-7.12(m,1H),5.23(s,1H),4.83(d,J＝1.2Hz,1H),4.08-3.99(m,2H),3.40-3.31(m,2H),3.11-2.99(m,1H),1.31(d,J＝6.7Hz,6H),0.88(s,9H),0.05-0.02(m,6H)。
步骤F：4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基-3- 硝基吡啶(Int-38f)
在3h内，于-20℃至-10℃下向4-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)烯丙基)-2-异丙基-3-硝基吡啶(6.00g，17.1mmol)及Pd(OAc)2(0.192g，0.856mmol)于DCM(200mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加重氮甲烷(1.03L，514mmol)(约0.5M Et2O溶液)。过滤混合物且用二氯甲烷(50mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤过物。通过快速硅胶色谱法(0至10％EtOAc/石油醚的洗脱剂)纯化残留物，得到4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基-3-硝基吡啶(Int-38f)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝5.1Hz,1H),7.36(d,J＝5.1Hz,1H),3.39-3.29(m,2H),3.02(td,J＝6.7,13.4Hz,1H),2.77-2.67(m,2H),1.30(d,J＝6.6Hz,6H),0.86(s,9H),0.55-0.49(m,2H),0.48-0.43(m,2H),0.00--0.05(m,6H)。
步骤G：4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基吡 啶-3-胺(Int-38g)
在0℃下向4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基-3-硝基吡啶(2.60g，7.13mmol)于THF(30mL)中的经搅拌溶液中添加锌粉(3.73g，57.1mmol)及含氯化铵(6.10mL，饱和水溶液)的水(5mL)，且在30℃下搅拌混合物2h。过滤混合物且用EtOAc(100mL)洗涤滤饼。将有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法(0-20％EtOAc/石油醚的洗脱剂)纯化残留物，得到4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-38g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(d,J＝4.9Hz,1H),6.75(d,J＝4.9Hz,1H),4.23-4.08(s,2H),3.37(s,2H),3.06(spt,J＝6.7Hz,1H),2.71(s,2H),0.97(s,9H),0.91-0.82(m,6H),0.38(br d,J＝3.4Hz,4H),0.03(s,6H)。
步骤H：(1-((3-氨基-2-氯吡啶-4-基)乙炔基)环丙基)甲醇(Int-38h)
向含有含4-溴-2-氯吡啶-3-胺(0.45g，2.2mmol)的TEA(5.4mL，39mmol)的烧瓶中添加(1-乙炔基环丙基)甲醇(0.25g，2.6mmol)、碘化铜(I)(21mg，0.11mmol)及双(三苯膦)二氯化钯(II)(29mg，0.043mmol)。用氮气吹扫烧瓶，且随后加热至75℃，持续三小时。3小时后，使混合物冷却至室温且随后添加更多(1-乙炔基环丙基)甲醇(98mg，1.02mmol)。随后将混合物加热至75℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。添加乙酸乙酯及盐水。分离有机层，经无水硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷及乙酸乙酯:乙醇的3:1混合物)纯化所得残留物，得到(1-((3-氨基-2-氯吡啶-4-基)乙炔基)环丙基)甲醇(Int-38h)。MS(ESI)m/z 223[M+H]+
步骤I：4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-氯吡啶- 3-胺(Int-38i)
将含有(1-((3-氨基-2-氯吡啶-4-基)乙炔基)环丙基)甲醇(Int-38h，0.38g，1.7mmol)的DCM(5.0mL)及DMF(0.50mL)的烧瓶冷却至0℃。添加叔丁基氯二甲基硅烷(0.34g，2.2mmol)及咪唑(0.35g，5.2mmol)，使混合物升温至室温且然后搅拌3小时。在3小时之后，在减压下浓缩混合物。添加乙酸乙酯及盐水。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-氯吡啶-3-胺(Int-38i)。MS(ESI)m/z 337[M+H]+
步骤J：4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-(丙-1- 烯-2-基)吡啶-3-胺(Int-38j)
向含有4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-氯吡啶-3-胺(Int-38i，0.32g，0.96mmol)、异丙烯基三氟硼酸钾(0.17g，1.1mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(78mg，0.096mmol)及碳酸钾(0.26g，1.9mmol)的小瓶中添加二噁烷(1.0mL)及水(0.15mL)。用氮气吹扫小瓶，且随后加热至90℃，持续3小时。在3小时之后，使混合物冷却至室温。随后过滤混合物且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(己烷及乙酸乙酯:乙醇的3:1混合物)纯化所得残留物，得到4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(Int-38j)。MS(ESI)m/z 343[M+H]+
步骤K：4-(2-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙基)-2-异丙基吡 啶-3-胺(Int-38k)
将含有含4-((1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙炔基)-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺(Int-38j，0.32g，0.94mmmol)的甲醇(10mL)的烧瓶用氮气吹扫。添加钯/碳(10％催化剂负载，32mg，0.030mmol)。随后抽空烧瓶且用氢气吹扫。然后在室温下搅拌混合物一小时。在一小时之后，通过硅藻土过滤混合物。在减压下浓缩滤液且通过硅胶柱色谱法(己烷及乙酸乙酯:乙醇的3:1混合物)纯化所得残留物，得到4-(2-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-38k)。MS(ESI)m/z 349[M+H]+
制备(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-39c)
步骤A：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨 甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-39a)
在8mL小瓶中添加2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(500mg，2.39mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(2.4mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。将2M乙二酰氯溶液(1.44mL，2.87mmol)逐滴添加至反应容器中且在75℃下加热所得混合物1h。使中间体溶液冷却至室温。将经冷却中间体溶液浓缩至其一半体积。将THF(200uL)添加至反应容器中且将所得混合物冷却至0℃。在单独4mL小瓶中，将4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10f，743mg，2.39mmol)溶解于THF(200uL)中。将胺溶液逐滴添加至反应容器中且在0℃下搅拌所得混合物1h。将产物混合物升温至室温。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液与氯化铵水溶液的2mL 1:1混合物淬灭。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物三次。合并有机层且经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过快速柱色谱法，用5％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷至50％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷洗脱来纯化所获得的残留物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-39a)。MS(ESI)m/z 545[M+H]+
步骤B：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-39b-1)
将N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(830mg，1.52mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气回填三次。将THF(3.0mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。将双(三甲基硅烷基)氨基钾(3.04mL，3.04mmol，1M于THF中)逐滴添加至反应容器中。在0℃下搅拌所得混合物1h。用饱和碳酸氢铵水溶液(2mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过快速柱色谱法，用己烷至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v)-己烷洗脱来纯化所获得的残留物。通过SFC柱C，条件MeOH w/0.05％二乙胺来拆分外消旋物质，得到峰1：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-39b-1)。MS(ESI)m/z：509[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-39c-1)
将1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-39b-1，630mg，1.24mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气回填三次。将乙腈(2.5mL)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(330μL，1.86mmol)及磷酰三氯(150μL，1.601mmol)添加至反应容器中且在80℃下加热所得混合物1h。将混合物浓缩至干燥。在20mL小瓶中将所获得的残留物溶解于乙腈(1.3mL)中。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(341μL，1.91mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(205mg，0.956mmol)添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物1h。用乙酸乙酯(100mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过快速柱色谱法，用己烷至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v)-己烷洗脱来纯化所获得的残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-39c-1)。MS(ESI)m/z 706[M+H]+。
中间体Int-40-1至Int-48是以与中间体Int-39c-1类似的方式，使用适当的起始物质来制备。
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*Int-46及Int-47是由起始经取代氨基吡啶的分离及通过步骤A-C实施经分离的对映异构体而产生。
制备17,20-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-2H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e] 嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯e-2,4(3H)-二酮(Int-49d)
步骤A：(3S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌 嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-49a-1)
在N2气氛下于90℃向(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-43-1，10.5g，15.2mmol)、乙酸钾(7.47g，76.0mmol)及1,1'-双(二苯基膦基二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(0.62g，0.76mmol)于1,4-二噁烷(100mL)及水(20mL)中的经搅拌溶液中添加含3-氟-2-(三氟-l4-硼烷基)苯酚钾盐(4.98g，22.8mmol)的1,4-二噁烷(0.2mL)/水(0.1mL)，且在N2气氛下于90℃搅拌混合物2h。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过0-50％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-49a-1)。MS(ESI)m/z 765[M+H]+。
步骤B：(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 49b-1)
向(3S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-49a-1，8.90g，11.6mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加TBAF(34.9mL，34.9mmol)(1M于THF中)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物16h。通过快速硅胶色谱法，使用0-8％MeOH/DCM的洗脱剂纯化残留物，得到(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-49b-1)。MS(ESI)m/z 651[M+H]+。
步骤C：Int-49c-1
向(3S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-49b-1，7.10g，10.9mmol)于THF(350mL)中的经搅拌溶液中添加三苯膦(7.15g，27.3mmol)，且在N2气氛下于65℃搅拌混合物，并然后添加DIAD(4.24mL，21.8mmol)。在65℃下搅拌反应物10min。真空浓缩反应混合物。通过0-10％CH2Cl2/MeOH的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到Int-49c-1。MS(ESI)m/z 633[M+H]+。
步骤D：17,20-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-2H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3- e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-2,4(3H)-二酮(Int-49d-1)
将Int-49c-1(3.50g，5.53mmol)溶解于MeOH(50mL)中。随后将KOH(0.93g,16.6mmol)添加至混合物中且加热至40℃。在40℃下搅拌反应混合物15h。将混合物冷却至室温，用100mL饱和氯化铵淬灭，用150mL EtOAc稀释，将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。通过0-60％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到17,20-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-2H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-2,4(3H)-二酮(Int-49d-1)。MS(ESI)m/z 451[M+H]+。
实施例50：(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪- 1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶 并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨 甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-50a)
在100mL圆底烧瓶中添加2,5,6-三氯烟碱酰胺(1.09g，4.83mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(4.83mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。将2M乙二酰氯溶液(2.90mL，5.80mmol)逐滴添加至反应容器中且在75℃下加热所得混合物1h。使中间体溶液冷却至室温。将经冷却的中间体溶液浓缩至干燥。在真空下干燥所获得的残留物1h。用氮气气球回填反应容器，且将THF(10mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。在单独25mL烧瓶中，将4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10f，1.50g，4.83mmol)溶解于THF(9.3mL)中。将胺溶液逐滴添加至反应容器中，且在0℃下搅拌所得混合物1h。通过添加pH 7缓冲液(10mL)小心地淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。合并有机层，且经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用5％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷洗脱，分级至50％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-50a)。MS(ESI)m/z 563[M+H]+。
步骤B：5aSa-1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-50b-1)
将N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-50a，2.00g，3.56mmol)添加至100mL烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(7.1mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。将双(三甲基硅烷基)氨基钾(7.12mL，7.12mmol)的1M THF溶液逐滴添加至反应容器中。在0℃下搅拌所得混合物30min。用饱和碳酸氢铵水溶液(25mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1，v/v)-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。通过SFC柱K，条件：MeOH w/0.1％NH4OH拆分外消旋物质，得到峰1：呈单一阻转异构体形式的5aSa-1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-50b-1)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.62(d,J＝5.6Hz,1H),8.50(s,1H),6.87(d,J＝6.0Hz,1H),4.06-4.09(m,2H),3.75-3.79(m,2H),2.74-2.81(m,1H),1.23(d,J＝5.2Hz,3H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),0.76(s,9H),0.07(s,3H),0.11(s,3H)。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-50c-1)
在20mL小瓶中添加5aSa-1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-50b-1，800mg，1.52mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将乙腈(3.0mL)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(407μL，2.28mmol)及磷酰三氯(184μL，1.97mmol)添加至反应容器中且加热所得混合物至80℃，持续1h。将产物混合物冷却至室温。将经冷却的产物混合物浓缩至干燥。在20mL小瓶中将残留物溶解于乙腈(3.04mL)中。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(812uL，4.56mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(489mg，2.28mmol)添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物1h。用乙酸乙酯(100mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×10mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱、分级至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v)-己烷、线性梯度纯化所获得的残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50c-1)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.48(s,1H),8.43(s,1H),7.07(d,J＝5.6Hz,1H),4.75(s,1H),4.34(s,1H),4.00-4.04(m,3H),3.95(s,1H),3.64-3.67(m,3H),2.63-2.69(m,1H),1.44(s,9H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H),1.13(d,J＝4.4Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝6.4Hz,3H),0.68(s,9H),0.17(s,6H)。
步骤D：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50d-1)
在25℃下向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50c-1，12.0g，16.6mmol)于二噁烷(200mL)及水(20mL)中的经搅拌溶液中添加乙酸钾(6.53g，66.5mmol)及[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的复合物(1.35g，1.66mmol)，且在N2气氛下于90℃搅拌混合物5min。随后将含(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c，6.50g，27.5mmol)的1,4-二噁烷(20mL)及水(20mL)添加至上述混合物中，且在90℃下搅拌混合物30min。将反应混合物用盐水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。经合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且过滤，且在减压下蒸发溶剂。通过0-100％EtOAc/石油醚的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50d-1)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.44-8.32(m,2H),7.10(dt,J＝5.3,9.7Hz,1H),6.99(d,J＝5.9Hz,1H),6.55(dt,J＝3.4,8.8Hz,1H),4.92-4.86(m,1H),4.59-4.38(m,2H),4.09-4.04(m,1H),4.00-3.93(m,1H),3.91-3.79(m,2H),3.77-3.69(m,1H),3.68-3.61(m,1H),3.59-3.39(m,1H),2.93(td,J＝6.5,13.3Hz,1H),1.57-1.49(m,12H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H),1.23-1.20(m,3H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H),0.78(s,9H),-0.11(d,J＝5.6Hz,6H)。
步骤E：(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2- 异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸 叔丁酯(Int-50e-1)
在20℃下向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50d-1，17.0g，20.9mmol)于DCM(200mL)中的经搅拌溶液中添加三氢氟化三乙胺(10.2mL，62.5mmol)且在20℃下搅拌混合物2h。将反应混合物用300mL DCM稀释，用碳酸氢钠水溶液(饱和，200mL)淬灭，且用二氯甲烷(200mL)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥且过滤，且在减压下蒸发溶剂，得到(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50e-1)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.45-8.33(m,2H),7.06(dt,J＝5.4,9.7Hz,1H),7.00(d,J＝5.9Hz,1H),6.58-6.39(m,1H),4.97-4.88(m,1H),4.55-4.31(m,2H),4.17-4.08(m,1H),3.98(td,J＝4.9,10.1Hz,1H),3.94-3.79(m,2H),3.66-3.46(m,3H),2.98-2.84(m,1H),1.51(s,12H),1.31(br d,J＝6.4Hz,3H),1.23-1.18(m,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤F：Int-50f-1
在40℃下向(2R,5S)-叔丁基4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-50e-1，14.0g，20.0mmol)及三苯膦(10.5g，39.9mmol)于DCM(750mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加DIAD(8.07g，39.9mmol)。在氮气气氛下于40℃搅拌所得混合物30min。真空浓缩反应混合物，且通过0-0.5％MeOH/DCM的快速硅胶色谱法洗脱剂纯化残留物，得到Int-50f-1。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.41(d,J＝5.9Hz,1H),8.33(s,1H),7.30(ddd,J＝5.1,9.4,11.0Hz,1H),7.05(d,J＝5.9Hz,1H),6.95(dt,J＝3.5,8.8Hz,1H),4.83-4.60(m,4H),4.59-4.45(m,1H),4.39-4.28(m,1H),4.17-4.08(m,1H),3.87(d,J＝13.7Hz,1H),3.70-3.61(m,1H),3.51-3.33(m,1H),3.10(td,J＝6.9,13.5Hz,1H),1.60(br d,J＝5.9Hz,3H),1.52(br d,J＝5.5Hz,9H),1.40(br d,J＝6.3Hz,3H),1.29(d,J＝7.0Hz,3H),1.05(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤G：Int-50g-1
向Int-50f-1(11.0g，16.1mmol)于CH2Cl2(100mL)中的溶液中添加TFA(50mL)，且在20℃下搅拌混合物30min。真空浓缩反应混合物，得到Int-50g-1。MS(ESI)m/z 583[M+H]+。
步骤H：(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1- 基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并 [1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例50)
向(Int-50g-1,16.4g,20.5mmol)及DIEA(35.9mL，205mmol)于CH2Cl2(200mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加丙烯酰氯(2.42g，26.7mmol)，且在20℃下搅拌混合物30min。用水(50mL)洗涤反应混合物，且用DCM(100mL)萃取水层。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。残留物是通过快速硅胶色谱法，使用0-10％MeOH/DCM的洗脱剂纯化，随后通过制备型HPLC(柱：YMC Triart C18 250mm*50mm，7μm：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-MeOH，B25开始，B 60结束；梯度时间(min)：20；100％B保持时间(min)：3；流速(mL/min)110纯化。通过制备型SFC柱E，条件：0.1％NH3·H2O MeOH，B 25％开始，B 25％结束；流速(mL/min)：200；注射：210")来进一步纯化产物，得到呈单一阻转异构体形式的(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例50)。MS(ESI)m/z 637[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.41(d,J＝5.8Hz,1H),8.33(d,J＝17.9Hz,1H),7.30(ddd,J＝5.1,9.4,10.8Hz,1H),7.05(d,J＝6.0Hz,1H),6.95(dt,J＝3.4,8.8Hz,1H),6.92-6.74(m,1H),6.34-6.25(m,1H),5.86-5.79(m,1H),5.06-4.88(m,1H),4.83(br d,J＝10.8Hz,1H),4.78-4.27(m,5H),4.18-4.09(m,1H),3.95-3.72(m,1H),3.66(br d,J＝14.0Hz,1H),3.10(qd,J＝6.8,10.5Hz,1H),1.59(brdd,J＝7.0,9.2Hz,3H),1.47(dd,J＝6.7,19.2Hz,3H),1.29(d,J＝6.7Hz,3H),1.05(dd,J＝3.4,6.8Hz,3H)。
实施例51-1：(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌 嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二[(2H)氢](11,12-2H2)-4H-1,18-(联二亚甲 基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基 吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-51a)
将2,5,6-三氯烟碱酰胺(1.72g，7.63mmol)添加至配备有回流冷凝器的100mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(7.6mL)添加至反应容器中以溶解起始物质。将2M乙二酰氯溶液(4.58mL，9.16mmol)逐滴添加至反应容器中且在75℃下加热所得混合物1h。使中间体溶液冷却至室温。将经冷却中间体溶液浓缩至其一半体积。将THF(3.8mL)添加至反应容器中且将所得混合物冷却至0℃。在单独20mL小瓶中，将4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-35c，2.40g，7.63mmol)溶解于THF(3.8mL)中。将胺溶液逐滴添加至反应容器中，且在0℃下搅拌所得混合物1h。将产物混合物升温至室温。用20mL pH 7溶液淬灭经升温的产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。合并有机层且经硫酸钠干燥合并的有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用5％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷洗脱，分级至50％(乙酸乙酯:乙醇，3:1，v/v)-二氯甲烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-51a)。MS(ESI)m/z567[M+H]+。
步骤B：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-51b)
将N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(3.35g，5.92mmol)添加至100mL烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(11.8mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。将双(三甲基硅烷基)氨基钾(11.8mL，11.8mmol)的1M THF溶液逐滴添加至反应容器中。在0℃下搅拌所得混合物30min。用饱和碳酸氢铵水溶液(25mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至66％(乙酸乙酯-乙醇＝3:1，v/v)-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-51b)。MS(ESI)m/z 529[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2- d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二 甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-51c)
1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.95g，5.57mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将乙腈(11.1mL)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.49mL，8.36mmol)及磷酰三氯(0.67μL，7.2mmol)添加至反应容器中且加热所得混合物至80℃，持续1h。将所得混合物冷却至0℃。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(2.98mL，16.7mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.79g，8.36mmol)添加至反应混合物中且在0℃下搅拌所得混合物30min。用乙酸乙酯(200mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×50mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用80-g硅胶柱的快速柱色谱法，最初用DCM洗脱，分级至50％乙酸乙酯:乙醇＝3:1-DCM(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-51c)。MS(ESI)m/z 725[M+H]+。
步骤D：(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基-1,1, 2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基 哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-51d)
将(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.00g，1.38mmol)、(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c，0.421g，1.79mmol)、乙酸钾(0.540g，5.51mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(0.113g，0.138mmol)添加至装配有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(5.9mL)/水(0.98mL)，在氮气下脱气三次且加热至90℃，持续1h。将反应物冷却至24℃，用10mL 1:1水/饱和碳酸氢钠淬灭，用2×25mL EtOAc萃取，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于10mL THF中，添加1M TBAF于THF(3.44mL，3.44mmol)中的溶液，且使其在24℃下搅拌1.5h。将反应物用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取一次，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，且经硅胶，0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-51d)。MS(ESI)m/z 705[M+H]+。
步骤E：Int-51e
在装配有回流冷凝器的100mL烧瓶中添加(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基-1,1,2,2-d4)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(802mg，1.14mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲苯(45.5mL)及氰基亚甲基三丁基膦烷(1.0M于甲苯中，2.3mL，2.3mmol)添加至反应容器中。将所得混合物加热至60℃，持续24h。将产物混合物浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％乙酸乙酯:乙醇3:1(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到Int-51e。MS(ESI)m/z 687[M+H]+。
步骤F：Int-51f
在氮气下将Int-51e(2.21g，0.322mmol)溶解于DCM(3.2mL)中。将三氟乙酸(1.23mL，16.1mmol)添加至反应容器中。搅拌所得混合物1h且将产物混合物浓缩至干燥。含有Int-51f的所获得残留物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤G：(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1- 基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二[(2H)氢](11,12-2H2)-4H-1,18-(联二亚甲基)吡 啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例51-1)
将Int-51f(299mg，322μmol)添加至20mL小瓶中。用DCM(1.6mL)溶解所得混合物。将所获得的溶液冷却至0℃。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(287μL，1.61mmol)及丙烯酰氯(39μL，0.48mmol)添加至反应容器中。在0℃下搅拌反应混合物1h。用饱和碳酸氢铵水溶液(2mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过SFC柱G，条件：MeOH w/0.25％DMEA拆分外消旋物质，得到峰1：呈单一阻转异构体形式的(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二[(2H)氢](11,12-2H2)-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例51-1)。MS(ESI)m/z 641[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(d,J＝5.7Hz,1H),8.23(d,J＝19.9Hz,1H),7.50(ddd,J＝11.1,9.3,5.2Hz,1H),7.34–7.09(m,2H),6.84(ddd,J＝50.1,16.7,10.5Hz,1H),6.19(ddd,J＝16.8,8.1,2.4Hz,1H),5.76(ddd,J＝10.4,4.9,2.3Hz,1H),4.88(s,0.5H),4.74(s,0.5H),4.69–4.49(m,2H),4.21(d,J＝13.8Hz,0.5H),3.85(d,J＝14.1Hz,0.5H),3.77–3.58(m,0.5H),3.52(t,J＝15.8Hz,1H),3.25(dd,J＝13.9,3.9Hz,0.5),3.05(q,J＝6.4Hz,1H),1.46(t,J＝7.8Hz,3H),1.40–1.32(m,3H),1.17(dd,J＝6.8,2.0Hz,3H),0.98(dd,J＝6.7,4.1Hz,3H)。
实施例52：(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]- 12,12,18,21-四氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3- f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-醇(Int-52a)
将2-(苯甲基氧基)乙醛(6.20g，41.3mmol)添加至250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(103mL)添加至反应容器中。将所得混合物冷却至0℃。逐滴添加乙炔基溴化镁(0.50M于THF中，100mL，49.5mmol)且在0℃下搅拌2h。用饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。有机层经硫酸钠干燥，过滤，且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至30％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-醇。(Int-52a)。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ7.41-7.28(m,5H),4.69-4.58(m,2H),3.67(dd,J＝9.8,3.6Hz,1H),3.59(dd,J＝9.8,7.1Hz,1H),2.46(d,J＝2.2Hz,1H)。
步骤B：1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-酮(Int-52b)
在250mL圆底烧瓶中将1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-醇(Int-52a，7.10g，40.3mmol)溶解于DCM(饱和水)(101mL)中。将戴斯-马丁高碘烷(20.5g，48.4mmol)以5等份添加至反应容器中。搅拌所得混合物30min。用乙醚(100mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)及饱和硫代硫酸钠水溶液(50mL)淬灭经稀释的产物混合物。用乙醚(3×100mL)萃取经淬灭的混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至25％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-酮(Int-52b)。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ7.54-7.30(m,5H),4.67(s,2H),4.27(s,2H),3.34(s,1H)。
步骤C：2,2-二氟丁-3-炔-1-基)氧基)甲基)苯(Int-52c)
将二乙氨基(二氟)锍鎓四氟硼酸(13.0g，56.8mmol)添加至100mL塑胶管中。将三氢氟化三乙胺(12.3mL，76.0mmol)添加至反应容器中。搅拌所得混合物5min。在单独小瓶中，将1-(苯甲基氧基)丁-3-炔-2-酮(Int-52b，6.60g，37.9mmol)溶解于DCM(30mL)中。通过塑胶吸液管将起始物质溶液逐滴添加至反应混合物中。用DCM(2×4mL)冲洗起始物质容器两次。将冲洗液添加至反应容器中。在24℃下搅拌所得混合物16h。将产物混合物冷却至0℃。将饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)添加至反应容器中。通过逐滴转移至冷却(0℃)过饱和碳酸氢钠溶液(100mL+20g固体)中来进一步淬灭所得两相混合物。搅拌所得混合物30min。用乙醚(3×200mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至20％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物两次，得到(((2,2-二氟丁-3-炔-1-基)氧基)甲基)苯(Int-52c)。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ7.52-7.30(m,5H),4.74(s,2H),3.81(t,J＝12.1Hz,2H),2.85(t,J＝5.1Hz,1H)。
步骤D：(E)-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)三氟硼酸钾(Int-52d)
在氮气下将2,5-二甲基己-2,4-二烯(26.0mL，182mmol)添加至500mL圆底烧瓶中。将THF(14.3mL)添加至反应容器中且将所得溶液冷却至0℃。经15min将硼烷-THF加合物(83.0mL，83.0mmol)于THF中的1M溶液逐滴添加至反应容器中以维持反应温度低于5℃。在0℃下搅拌所得混合物3h。在单独容器中，在氮气下将(((2,2-二氟丁-3-炔-1-基)氧基)甲基)苯(Int-52c，6.50g，33.1mmol)溶解于THF(25mL)中。经25min将起始物质溶液逐滴添加至反应容器中以维持反应温度低于5℃。用THF(2×5mL)冲洗含有起始物质的容器且将冲洗液逐滴添加至反应容器中。移除冷却浴，且经30min使反应物升温至rt。在rt下搅拌所得混合物3h。将所得混合物冷却回至0℃且将水(11.9mL)逐滴添加至反应容器中，从而维持反应温度低于5℃。经30min使所得混合物升温至rt且在24℃下搅拌所得混合物2h。将37％w/w甲醛水溶液(29.6mL，398mmol)逐滴添加至反应混合物中。观测到轻微放热事件。将所得混合物用水浴冷却且在24℃下搅拌12h。用饱和氯化钠水溶液(30mL)淬灭所得混合物。将所得混合物转移至分液漏斗中。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层三次。合并有机层，且经硫酸钠干燥经合并的有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。用乙腈(143mL)稀释所获得的残留物。在单独容器中，将氟化钾(7.70g，133mmol)溶解于水(11.0mL)中。将氟化钾溶液沿流向添加至反应容器中且在未观测到混浊时搅拌所得混合物15min。在单独容器中，将L-(+)-酒石酸(9.94g，66.3mmol)溶解于四氢呋喃(51.0mL)中。将所得溶液转移至加料漏斗中。在24℃下经20min将酒石酸溶液逐滴添加至反应混合物中。在24℃下搅拌所得混合物30min。过滤所得混合物，且用乙腈(3×50mL)充分洗涤滤饼。使所得残留物与乙醚(3×200mL)共沸三次。用乙醚(100mL)稀释所获得的残留物。剧烈搅拌混合物且冷却至0℃。将乙醚(200mL)及己烷(200mL)添加至混合物中且在0℃下搅拌所得混合物1h。收集沉淀物且用20％乙醚-己烷(10×50mL)洗涤所获得的固体。产物为(E)-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)三氟硼酸钾。(Int-52d)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ7.40-7.26(m,5H),5.97(dq,J＝18.2,3.1Hz,1H),5.75-5.46(m,1H),4.57(s,2H),3.66(t,J＝13.7Hz,2H)。
步骤E：(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯- 2-基)吡啶(Int-52e)
将4-氯-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-10a，2.10g，10.6mmol)、(E)-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)三氟硼酸钾(Int-52d，3.54g，11.6mmol)及A-Pd-G3(0.385g，0.529mmol)添加装备有两个隔板及一个回流冷凝器的3颈250mL圆底烧瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将THF(35mL)及磷酸三钾(21.2mL，21.2mmol)的1M水溶液添加至反应容器中。将所得混合物脱气两次且在60℃下加热16h。TLC分析显示完全转化。冷却产物混合物，用乙醚(100mL)稀释，且用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至20％乙酸乙酯-己烷(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-52e)。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)：δ8.72(d,J＝5.2Hz,1H),7.62(d,J＝5.2Hz,1H),7.44-7.26(m,5H),6.89(dt,J＝16.0,2.6Hz,1H),6.71(dt,J＝16.1,10.9Hz,1H),5.50-5.30(m,1H),5.17(d,J＝1.0Hz,1H),4.65(s,2H),3.88(t,J＝12.8Hz,2H),2.19(t,J＝1.2Hz,3H)。
步骤F：4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-52f)
将(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-52e，3.13g，8.69mmol)添加至500mL帕尔震荡器容器中。将甲醇(87mL)添加至反应容器中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将钯/碳(0.924g，0.869mmol，10wt％Pd)添加至反应容器中。向所得混合物中添加50psi氢气且反应16h。过滤产物混合物且将滤液浓缩至干燥，得到4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-52f)。MS(ESI)：m/z 335[M+H]+。
步骤G：4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺 (Int-52g)
将4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-52f，3.00g，8.97mmol)添加至500mL帕尔震荡器容器中。将甲醇(45mL)添加至反应容器中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将1.25M盐酸(28.7mL，35.9mmol)于甲醇中的溶液添加至反应容器中，随后添加钯/碳(0.955g，0.897mmol)，在帕尔震荡器中向反应容器中添加50psi氢气且反应16h。用氮气吹扫所得混合物且过滤混合物，并将滤液浓缩至干燥。将所获得的残留物溶解于DMF(20mL)中。将三乙胺(25.0mL，179mmol)及叔丁基氯二甲基硅烷(13.5g，90.0mmol)添加至反应容器中且将所得混合物加热至45℃，持续6h。用乙酸乙酯(400mL)稀释产物混合物。将经稀释的产物混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)洗涤一次且用饱和氯化钠水溶液(5×30mL)洗涤五次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液，且将滤液浓缩至干燥。使用220-g硅胶柱，最初用己烷洗脱，分级至100％乙酸乙酯:乙醇＝3:1(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-52g)。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)：δ7.84(d,J＝4.8Hz,1H),6.87(d,J＝4.8Hz,1H),4.08(q,J＝5.4,3.8Hz,2H),3.88(t,J＝12.9Hz,2H),3.13(hept,J＝6.6Hz,1H),2.81-2.52(m,2H),2.31-2.19(m,2H),1.23(d,J＝6.7Hz,6H),0.93(s,9H),0.13(s,6H)。
步骤H：N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丁基)-2-异丙基吡啶- 3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-52h)
在75℃下向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(1.34g，6.41mmol)于THF(6.4mL)中的经搅拌溶液中添加乙二酰氯(3.85mL，7.70mmol，2M于二氯甲烷中)，且利用回流冷凝器将反应物加热至75℃，持续1h。将反应混合物蒸发至干燥且真空干燥30分钟。随后向残留物添加THF(6.4mL)，冷却至0℃且逐滴添加4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-52g，2.3g，6.41mmol)于THF(6.4mL)中的溶液。使反应物在0℃下搅拌1h且在0℃下用130mL 1:1pH 7缓冲液/盐水淬灭。将此混合物然后用100mL EtOAc稀释，用100mL EtOAc萃取第二次，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶，0-50％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2,2-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-52h)。MS(ESI)：m/z 593[M+H]+。
步骤I：1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶- 3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-52i-1)
将N-((4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-52h，3.35g，5.64mmol)溶解于THF(9.4mL)中，冷却至0℃，添加KHMDS(11.8mL，11.8mmol，1M于THF中)且使其搅拌5分钟。根据LC/MS，反应完成。然后将其冷却至0℃，用100mL饱和氯化铵淬灭且用2×150mL EtOAc萃取。将萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶柱，10-100％己烷/3:1EtOAc/EtOH纯化残留物。通过SFC柱R，条件：15％CO2/MeOH拆分外消旋物质，得到峰1作为呈单一阻转异构体形式的1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-52i-1)。MS(ESI)：m/z 557[M+H]+。
步骤J：(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2- 异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基 哌嗪-1-甲酸酯(Int-52j-1)
向1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-52i-1,658mg,1.18mmol)添加乙腈(4725uL)、DIEA(619uL，3.54mmol)、POCl3(132uL，1.42mmol)，在氮气下脱气且加热至80℃，持续30分钟。将反应物冷却至0℃，添加第二份DIEA(619ul，3.54mmol)，随后添加固体(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(304mg，1.42mmol)，且使反应物在相同温度下搅拌20分钟。在真空中蒸发反应物且经硅胶，0-60％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-52j-1)。MS(ESI)：m/z 753[M+H]+。
步骤K：(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟- 7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1- 甲酸叔丁酯(Int-52k-1)
将(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.265mmol)、三氟(2-氟-6-羟基苯基)硼酸钾(75mg，0.35mmol)、[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯与二氯甲烷的复合物(22mg，0.027mmol)、乙酸钾(104mg，1.06mmol)添加至20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(1.1mL)/水(190μL)，在氮气下脱气三次且加热至90℃，持续30分钟。将反应物冷却至24℃，用3mL氯化铵饱和水溶液淬灭且用10mL EtOAc稀释。分离有机物，用盐水洗涤一次，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。将残留物溶解于4mL THF中，添加1M THF于TBAF(1.06mL，1.06mmol)中的溶液且在24℃下搅拌3h。将反应物用5mL饱和氯化铵淬灭，用5mL EtOAc稀释，分离各层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶0-80％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化橙色残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-52k-1)。MS(ESI)：m/z 715[M+H]+。
步骤L：Int-52l-1
在20mL小瓶中添加(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.140mmol)。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲苯(7.0mL)及CMBP(67.5mg，0.280mmol)添加至反应容器中。在120℃下加热反应混合物16h。将产物混合物冷却至室温。将经冷却的产物混合物浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％乙酸乙酯:乙醇3:1(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到Int-52l-1。MS(ESI)：m/z 697[M+H]+。
步骤M：Int-52m-1
将Int-52l-1(67.9mg，0.097mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填。将DCM(975μL)添加至反应容器中，随后逐滴添加三氟乙酸(373μL，4.87mmol)。在24℃下搅拌反应混合物1h。将产物混合物浓缩至干燥。使所获得的残留物与甲苯(5mL)共沸一次。含有Int-52m-1的所获得残留物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤N：(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12, 12,18,21-四氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f] 嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例52)
将Int-52m-1添加至20mL小瓶中。用DCM(485μL)溶解所得混合物。将所获得的溶液冷却至0℃。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(86μL，0.49mmol)及丙烯酰氯(12μL，0.15mmol)添加至反应容器中。在0℃下搅拌反应混合物1h。用饱和碳酸氢铵水溶液(2mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,18,21-四氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例52)。MS(ESI)：m/z 651[M+H]+。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)：δ8.48(d,J＝5.0Hz,1H),8.11(dd,J＝8.9,6.7Hz,1H),7.50(td,J＝8.5,6.8Hz,1H),7.22(d,J＝5.0Hz,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(t,J＝8.8Hz,1H),6.76(ddd,J＝47.1,16.8,10.5Hz,1H),6.37-6.19(m,1H),5.84-5.65(m,1H),4.52-4.85(m,1.5H),4.58-4.25(m,2H),4.15(q,J＝10.1Hz,1H),3.96-3.65(m,3H),3.40(dd,J＝13.9,4.0Hz,0.5H),2.83(h,J＝6.9Hz,1H),2.75(dd,J＝8.0,5.9Hz,2H),2.25-2.18(m,2H),1.49(dd,J＝6.8,2.7Hz,3H),1.32(d,J＝7.1Hz,3H),1.12(d,J＝6.7Hz,3H),0.92-0.87(m,3H)。
步骤O：(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-6- 异丙基嘧啶-5-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基 哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-52o)
Int-52o是以与Int-52k-1类似的方式，使用Int-69d，按照步骤h-k来制备。MS(ESI)：m/z 754[M+H]+。
步骤P：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)乙 基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5- 二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-52p)
Int-52p是以与Int-52k-1类似的方式，使用Int-38k，按照步骤h-k来制备。MS(ESI)：m/z 743[M+H]+。
制备(2,4-二氟-6-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-53d)
步骤A：2-溴-1,5-二氟-3-(甲氧基甲氧基)苯(Int-53a)
在0℃下向2-溴-3,5-二氟苯酚(4.00g，19.1mmol)及DIPEA(4.01mL，23.0mmol)于DCM(40mL)中的溶液中逐滴添加氯(甲氧基)甲烷(1.75mL，23.0mmol)。在N2气氛下于室温搅拌混合物2h。在减压下蒸发反应物的溶剂，得到粗产物。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化粗产物，得到2-溴-1,5-二氟-3-(甲氧基甲氧基)苯(Int-53a)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ6.75(dt,J＝10.39,2.26Hz,1H),6.58(td,J＝8.56,2.69Hz,1H),5.23(s,2H),3.50(s,3H)。
步骤B：2-(2,4-二氟-6-(甲氧基甲氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼 杂环戊烷(Int-53b)
在N2气氛下向2-溴-1,5-二氟-3-(甲氧基甲氧基)苯(2.50g，9.88mmol)、4,4,4',4',5,5,5'-七甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(7.11g，29.6mmol)及乙酸钾(3.88g，39.5mmol)于甲苯(25mL)中的经搅拌溶液中添加[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯与二氯甲烷的复合物(0.807g，0.988mmol)。在N2气氛下，于100℃搅拌混合物16h。过滤混合物且真空浓缩滤液，得到粗产物。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化粗产物，得到2-(2,4-二氟-6-(甲氧基甲氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(Int-53b)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ6.59-6.51(m,1H),6.44-6.34(m,1H),5.11(s,2H),3.44(s,3H),1.34(s,12H)。
步骤C：(2,4-二氟-6-羟基苯基)二羟硼酸(Int-53c)
在N2气氛下，于0℃向2-(2,4-二氟-6-(甲氧基甲氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(300mg，1.00mmol)于无水DCM(3mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加BBr3(0.473mL，5.00mmol)。搅拌20min之后，将反应混合物倒入冰水中，通过3N NaOH碱化至pH约10且分离有机层。用1N HCI将分离的水层调节至pH约3且用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩，得到(2,4-二氟-6-羟基苯基)二羟硼酸(Int-53c)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ6.44-6.23(m,2H)。
步骤D：(2,4-二氟-6-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-53d)
向(2,4-二氟-6-羟基苯基)二羟硼酸(170mg，0.978mmol)于MeCN(3mL)中的经搅拌溶液中添加溶解于水(0.5mL)中的氟化钾(227mg，3.91mmol)，且在20℃下搅拌混合物10min。将L-(+)-酒石酸(367mg，2.44mmol)于THF(2mL)中的溶液逐滴添加至以上溶液中且在20℃下搅拌所得混合物15h。过滤混合物且真空浓缩滤液，得到粗产物。添加乙腈(3.0mL)且随后过滤混合物。收集所得固体，得到(2,4-二氟-6-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-53d)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)：δ6.44-5.94(m,2H)。
实施例54：(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]- 12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并 [4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2, 3-二氟-6-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌 嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-54a-1)
将(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-52j-1，150mg，0.199mmol)、3,4-二氟-2-(三氟-l4-硼烷基)苯酚钾(Int-24，61mg，0.26mmol)、乙酸钾(78mg，0.80mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(16mg，0.020mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(853μL)/水(142μl)，在氮气下脱气三次且加热至90℃，持续1h。将反应物冷却至24℃，用10mL 1:1水/饱和碳酸氢钠淬灭，用25mL EtOAc萃取两次，用盐水洗涤且真空浓缩。将粗残留物溶解于10mL THF中，添加TBAF(498μL，0.498mmol)的1M THF溶液，且使其在24℃下搅拌1.5h。将反应物用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取一次，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶0-100％3:1EtOAc/EtOH/己烷纯化残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2,3-二氟-6-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-54a-1)。MS(ESI)：m/z 733[M+H]+。
步骤B：Int-54b-1
将(2R,5S)-4-(1-(4-(3,3-二氟-4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2,3-二氟-6-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-54a-1，125mg，0.171mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填三次。将甲苯(8.5mL)及CMBP(82mg，0.34mmol)添加至反应容器中。在120℃下加热反应混合物16h。将产物混合物冷却至室温且浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用DCM洗脱，分级至100％乙酸乙酯:乙醇3:1(线性梯度)纯化所获得的残留物，得到Int-54b-1。MS(ESI)：m/z 715[M+H]+。
步骤C：Int-54c-1
将Int-54b-1(76.7mg，0.107mmol)添加至20mL小瓶中。抽空反应容器且用氮气气球回填。将DCM(1.1mL)添加至反应容器中，随后逐滴添加三氟乙酸(411μL，5.37mmol)。在24℃下搅拌反应混合物1h。将产物混合物浓缩至干燥。使所获得的残留物与甲苯(5mL)共沸一次。含有Int-54c-1的所获得残留物未经纯化即直接用于下一步骤中。
步骤D：(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12, 12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3- f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例54)
将Int-54c-1添加至20mL小瓶中。用DCM(550μL)溶解所得混合物。将所获得的溶液冷却至0℃。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(98μL，0.55mmol)及丙烯酰氯(13μL，0.17mmol)添加至反应容器中。在0℃下搅拌反应混合物1h。用饱和碳酸氢铵水溶液(2mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取所得混合物三次。经硫酸钠干燥有机层。过滤经干燥溶液且将滤液浓缩至干燥。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用己烷洗脱，分级至100％乙酸乙酯-乙醇＝3:1v/v(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例54)。MS(ESI)：m/z 669[M+H]+。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)δ8.48(d,J＝5.0Hz,1H),8.14(dd,J＝9.0,6.3Hz,1H),7.40(dt,J＝10.3,9.3Hz,1H),7.22(d,J＝4.9Hz,1H),7.02(ddd,J＝9.3,3.7,1.9Hz,1H),6.76(ddd,J＝46.0,16.7,10.6Hz,1H),6.25(ddd,J＝16.8,5.9,2.3Hz,1H),5.75(ddd,J＝10.2,7.4,2.2Hz,1H),4.90(br s,1.5H),4.50–4.21(m,2H),4.18–4.05(m,1H),3.80(q,J＝9.9,8.6Hz,3H),3.41(dd,J＝13.9,4.1Hz,0.5H),3.05–2.60(m,3H),2.23–2.18(m,1H),2.15–2.07(m,1H),1.48(dd,J＝6.8,3.5Hz,3H),1.34(dd,J＝33.8,6.8Hz,3H),1.11(d,J＝6.7Hz,3H),0.92(dd,J＝6.7,3.0Hz,3H)。
实施例55至68是使用与实施例54中描述的程序类似的程序，由指定中间体制备。
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制备4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺 (Int-69d)
步骤A：4-氯-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(Int-69a)
将异丙烯基二羟硼酸频哪醇酯(6.88mL，36.6mmol)溶解于DME(81mL)中且添加至含有4,6-二氯嘧啶-5-胺(5.00g，30.5mmol)的微波小瓶中。添加碳酸铯(29.8g，91.0mmol)，随后添加水(20.3mL)，且使氩气鼓泡通过混合物。添加双(三苯膦)二氯化钯(II)(2.14g，3.05mmol)，且使氩气鼓泡通过混合物4分钟。随后将混合物加热至85℃，持续3h。冷却至24℃后，用乙酸乙酯及饱和碳酸氢钠水溶液稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。使用柱色谱法进行纯化(0-20％乙酸乙酯于己烷中的梯度)，得到4-氯-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(Int-69a)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.22(s,1H),5.61-5.57(m,1H),5.50(s,2H),5.46(t,J＝1.1Hz,1H),2.07(t,J＝1.3Hz,3H)。
步骤B：(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)嘧 啶-5-胺(Int-69b)
将4-氯-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(1.00g，5.90mmol)及(E)-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)三氟硼酸钾(Int-52d，1.97、6.49mmol)置于小瓶中且添加THF(13.8mL)。使氩气鼓泡通过混合物。添加Catacxium A-Pd-G3(215mg，0.295mmol)、磷酸三钾(2.50g，11.8mmol)，并然后添加水(5.9mL)，且使氩气鼓泡通过混合物五分钟。随后将反应物加热至60℃，持续16h。冷却至24℃后，用乙酸乙酯及水稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过柱色谱法(0-20％乙酸乙酯于己烷中的梯度)纯化所得混合物，得到(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(Int-69b)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.39(s,1H),7.47(dt,J＝15.3,2.7Hz,1H),7.43-7.22(m,5H),6.95(dt,J＝15.3,12.3Hz,1H),5.62-5.49(m,3H),5.38(t,J＝1.2Hz,1H),4.64(s,2H),3.93(t,J＝13.3Hz,2H),2.07(d,J＝1.2Hz,3H)。
步骤C：4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-69c)
通过表面下鼓泡用氮气使含有(E)-4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁-1-烯-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)嘧啶-5-胺(903mg，2.73mmol)及甲醇(14mL)的烧瓶脱气。添加Pd/C(10wt％，29.0mg，0.273mmol)且抽空烧瓶并随后用氢气吹扫5次。在24℃下搅拌混合物16h。然后通过硅藻土过滤混合物且在减压下浓缩滤液。含有4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-69c)的所得混合物未经进一步纯化即用于后续反应中。
步骤D：4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺 (Int-69d)
在氮气下将4-(4-(苯甲基氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺(710mg，2.12mmol)溶解于DCM(11mL)中。将所得混合物冷却至-78℃。逐滴添加三氯硼烷(1.0M于DCM中，6.4mL，6.4mmol)。在-78℃下搅拌所得混合物2h且在-78℃下用1:1MeOH/DCM混合物(2mL)淬灭。使所得混合物升温至室温且浓缩至干燥。将所获得的残留物溶解于DMF(1mL)中。将三乙胺(2.93mL，21.2mmol)及叔丁基二甲基氯硅烷(638mg，4.23mmol)添加至反应容器中。将所得混合物加热至45℃，持续2h。冷却至室温后，用乙酸乙酯(20mL)稀释产物混合物。用饱和碳酸氢钠水溶液(3×20mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。有机层经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过使用硅胶柱的快速柱色谱法，最初用DCM洗脱，分级至80％乙酸乙酯:乙醇3:1-DCM(线性梯度)来纯化所获得的残留物，得到4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-3,3-二氟丁基)-6-异丙基嘧啶-5-胺(Int-69d)。MS(ESI)：m/z 360[M+H]+。
实施例70：9-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20- 二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1, 4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异丙基吡啶-3- 基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-70a-1)
在24℃下用三氯异三聚氰酸(91mg，0.39mmol)处理含1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-39b-1，100mg，0.196mmol)的乙腈(2.0mL)。将小瓶加盖且在60℃下加热24h。将混合物冷却至0℃且用碳酸钠饱和水溶液(1mL)处理，随后用硫代硫酸钠饱和水溶液(0.5mL)处理，并然后用水(0.5mL，以便促进搅拌)处理。用乙酸乙酯(3×2mL)萃取所获得的混合物。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩滤液。将残留物溶解于极少二氯甲烷中且上样至硅胶柱。通过硅胶柱色谱法(0至100％EtOAc/己烷；产物以30％洗脱)纯化，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-70a-1)。MS(ESI)m/z 543[M+H]+。
步骤B：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异 丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌 嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-70b-1)
在24℃下用DIEA(0.109mL,0.622mmol)及POCl3(0.043mL，0.47mmol)处理含1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-70a-1，169mg，0.311mmol)的乙腈(2.0mL)。在80℃下加热混合物2h。将所得混合物冷却至24℃且浓缩。将残留物溶解于乙腈(2.0mL)中且用DIEA(0.109mL，0.622mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(133mg，0.622mmol)处理。在24℃下搅拌混合物16h。用乙酸乙酯(10mL)及水(10mL)稀释所得混合物。用乙酸乙酯萃取混合物。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩滤液。将残留物溶解于极少二氯甲烷中且装载至硅胶柱上。通过硅胶柱色谱法(0-100％EtOAc/己烷；产物以60-65％洗脱)纯化，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-70b-1)。MS(ESI)m/z 739[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(5-氯-4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7- (2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-70c-1)
将(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-5-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-70b-1，110mg，0.149mmol)、三氟(2-氟-6-羟基苯基)硼酸钾(48.4mg，0.223mmol)、乙酸钾(58.4mg，0.595mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(24mg，0.030mmol)添加至配备有磁性搅拌棒的20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，添加二噁烷(1mL)/水(167μL)，在氮气下脱气三次且在100℃下加热30分钟。将混合物冷却至24℃。用乙酸乙酯稀释混合物且通过1:1v/v硅酸镁(FLORSIL)/无水硫酸钠滤垫过滤。用乙酸乙酯冲洗置换的滤垫，且浓缩经合并的滤液。将此残留物溶解于THF(6mL)中，得到淡黄色溶液，且用TBAF(1M于THF中，297μL，0.297mmol)处理，随后用乙酸(10μL，0.18mmol)处理。在24℃下搅拌此混合物16h。将产物混合物用碳酸氢钠饱和水溶液(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取，且将合并的有机层用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0至100％EtOAc/己烷；产物于60％下洗脱出)纯化所获得的残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(5-氯-4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-70c-1)。MS(ESI)m/z 701[M+H]+。1H NMR(500MHz,Acetone-d6)：δ8.56(s,1H),8.29(d,J＝9.3Hz,1H),7.33(td,J＝8.3,6.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(t,J＝9.0Hz,1H),4.99(s,1H),4.49(d,J＝38.4Hz,1H),4.34–4.17(m,2H),4.11–3.93(m,3H),3.93–3.79(m,1H),3.72–3.49(m,4H),2.07(p,J＝2.2Hz,1H),1.51(s,12H),1.30(s,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
步骤D：Int-70d-1
在氮气下将三苯膦(187mg，0.713mmol)于四氢呋喃(3.0mL)中的溶液冷却至0℃且用滴加DIAD(0.139mL，0.713mmol)处理。在0℃下搅拌所得浆液15分钟，且然后滴加(2R,5S)-4-(1-(5-氯-4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-70c-1，100mg，0.143mmol)于四氢呋喃(2.00mL)中的溶液处理。使混合物升温至rt且搅拌1h，产生浆液。添加水(0.2mL)且使浆液溶解以得到澄清溶液。将混合物用额外水(5mL)稀释且用乙酸乙酯(5mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0至100％[1:3EtOH/EtOAc]/己烷)纯化，得到Int-70d-1。MS(ESI)m/z 683[M+H]+。
步骤E：9-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20-二 氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4, 7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例70)
在24℃下用TFA(0.250mL)处理含Int-70d-1(25mg，0.037mmol)的二氯甲烷(1.0mL)。在24℃下搅拌混合物16h。浓缩反应混合物。将残留物溶解于乙腈(2mL)中且浓缩。在真空下干燥残留物过夜，且随后溶解于二氯甲烷(2mL)中，冷却至0℃且用N-甲基吗啉(100μL，0.910mmol)及丙烯酸酐(50μL，0.43mmol)处理。在24℃下搅拌所得混合物1h。将残留物直接装载至40g硅胶柱上。通过硅胶柱色谱法(0至100％EtOAc/己烷)纯化，随后用3:1乙酸乙酯/乙醇冲洗。浓缩馏分，通过在C18-官能化柱上的反相HPLC，利用使用经氢氧化铵改质的乙腈及水的梯度洗脱进一步纯化所获得的残留物，得到9-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例70)。MS(ESI)m/z 637[M+H]+。1H NMR(500MHz,Acetone-d6)：δ8.40(s,1H),8.16(dd,J＝18.3,9.1Hz,1H),7.52(td,J＝8.4,6.7Hz,1H),7.16(d,J＝8.3Hz,1H),6.99(t,J＝8.8Hz,1H),6.94–6.75(m,1H),6.37–6.16(m,1H),5.74(t,J＝9.0Hz,1H),5.62(dd,J＝13.7,2.6Hz,1H),5.06–4.87(m,1.5H),4.81(d,J＝13.9Hz,0.5H),4.73–4.57(m,2H),4.42(d,J＝13.8Hz,0.5H),4.35(ddd,J＝14.1,9.7,1.3Hz,1H),4.08–4.02(m,1H),3.97(d,J＝14.1Hz,0.5H),3.84(dd,J＝13.9,3.7Hz,0.5H),3.79–3.64(m,1H),3.41–3.31(m,0.5H),3.02–2.91(m,1H),1.60(t,J＝7.3Hz,3H),1.54–1.48(m,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,3H),0.94(dd,J＝6.8,4.3Hz,3H)。
制备(2R,5S)-4-(7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异 丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 71d-2)
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步骤A：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨 甲酰基)-2,4-二氯-5-氟苯甲酰胺(Int-71a)
在24℃下向2,4-二氯-5-氟苯甲酰胺(2.04g，9.81mmol)于THF(9.8mL)中的经搅拌溶液中添加乙二酰氯(5.86mL，11.7mmol，2M于二氯甲烷中的溶液)且用回流冷凝器将反应物加热至75℃，持续1h。将反应物蒸发至干燥且在高真空下干燥30分钟。向残留物添加20mLTHF，冷却至0℃且逐滴添加4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-10f，3.26g，9.76mmol)于THF(9.8mL)中的溶液。使反应物在0℃下搅拌1h，然后在0℃下用130mL 1:1pH 7缓冲液/盐水淬灭，且用100mL EtOAc稀释。将反应物用100mL EtOAc萃取第二次，经无水硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶(0-10％DCM/MeOH)纯化，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,4-二氯-5-氟苯甲酰胺(Int-71a)。MS(ESI)m/z 544[M+H]+
步骤B：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7- 氯-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(Int-71b)
将N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,4-二氯-5-氟苯甲酰胺(Int-71a，3.00g，5.51mmol)溶解于THF(22.0)中，冷却至-20℃，添加KHMDS(11.6mL，11.6mmol)的1M THF溶液，然后加热以回流1h。将反应物冷却至24℃，用饱和氯化铵淬灭，用100mL EtOAc萃取两次，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶(0-10％MeOH/DCM)纯化残留物，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(Int-71b)MS(ESI)m/z 508[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (Int-71c-2)
将1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(Int-71b)溶解于乙腈(13.0mL)中，添加DIEA(1.36mL，7.79mmol)，随后添加POCl3(0.291mL，3.12mmol)且加热至80℃，持续1h。将反应物冷却至0℃，添加另一份DIEA(1.36mL，7.79mmol)且添加(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.67g，3.1mmol)并使其搅拌20分钟。将反应物真空蒸发，装载于硅胶柱上且用0-5％MeOH/DCM洗脱，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯。使用柱T，条件：MeOH w/0.1％NH4OH，20％CO2对外消旋物质进行SFC纯化，得到峰2作为(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-71c-2)。MS(ESI)m/z 704[M+H]+
步骤D：(2R,5S)-4-(7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2- 异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 71d-2)
将(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-71c-2，299mg，0.425mmol)、(2-二环己基膦基-2′,6′-二甲氧基联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]甲烷磺酸钯(II)(33mg，0.042mmol)、(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c，200mg，0.849mmol)添加20mL闪烁瓶中，在氮气下脱气，且添加DME(4.2mL)、2M碳酸钠水溶液(637μL，1.27mmol)并加热至90℃，持续2h。将反应物冷却至24℃，用3mL饱和氯化铵淬灭，用20mL EtOAc萃取一次，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。向残留物中添加5mL THF及TBAF(1M于THF中的溶液，1.27mL，1.27mmol)且使其在24℃下搅拌过夜。将反应物用3mL饱和氯化铵淬灭，用20mL EtOAc萃取两次，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且真空浓缩。经硅胶(0-100％EtOAc/EtOH 3:1/己烷)纯化残留物，得到(2R,5S)-4-(7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢喹唑啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-71d-2)。MS(ESI)m/z 684[M+H]+
制备(2R,5S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲 基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-72h)
步骤A：5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(Int-72a)
向4-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(95.0g，620mmol)于MeCN(900mL)中的经搅拌溶液中添加1-氯吡咯啶-2,5-二酮(108g，806mmol)，且在N2气氛下于70℃搅拌混合物12h。过滤混合物，且真空浓缩滤液，且通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化残留物，得到5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(Int-72a)。MS(ESI)m/z 188[M+H]+。
步骤B：2-溴-5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(Int-72b)
在65℃下经10min的时段向无水溴化铜(II)(29.4g，205mmol)及5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(32.0g，171mmol)于无水乙腈(350mL)中的溶液中分批添加亚硝酸叔丁酯(26.4g，256mmol)。将反应混合物维持在65℃下，持续2h，且随后使其冷却至室温。然后将反应混合物倒入50mL的2M HCl水溶液中，随后用乙酸乙酯(300mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速柱色谱法，使用95:5v/v己烷:乙酸乙酯作为溶剂纯化粗产物，得到2-溴-5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(Int-72b)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.58-8.39(m,1H),2.40(s,3H)。
步骤C：5-氯-4-甲基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-72c)
向2-溴-5-氯-4-甲基-3-硝基吡啶(9.00g，35.8mmol)于DME(90mL)及水(15mL)中的经搅拌溶液中添加Cs2CO3(23.3g，71.6mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(6.31g，37.6mmol)及双(三苯基膦)二氯化钯(II)(2.51g，3.58mmol)，且在80℃下搅拌所得混合物16h。用EtOAc(200mL×3)萃取反应物。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化残留物，得到5-氯-4-甲基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-72c)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.59(s,1H),5.33(d,J＝0.8Hz,1H),5.20(s,1H),2.36(s,3H),2.15(s,3H)。
步骤D：(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-4-甲基-3-硝基- 2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-72d)
向5-氯-4-甲基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(6.40g，30.1mmol)于甲苯(70mL)及水(10mL)中的经搅拌溶液中添加Cs2CO3(24.2g，75mmol)、(E)-叔丁基二甲基((4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)丁-3-烯-1-基)氧基)硅烷(14.1g，45.1mmol)、2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(1.44g,3.01mmol)及Pd(OAc)2(0.338g，1.505mmol)，且在N2气氛下于80℃搅拌所得混合物16h。真空浓缩反应物，且将残留物用H2O(15mL)淬灭，且用EtOAc(100mL×2)萃取。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝10/1)纯化残留物，得到(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-4-甲基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(Int-72d)。1HNMR(400MHz,CDCl3)：δ8.60(s,1H),6.51(d,J＝16.0Hz,1H),6.25(td,J＝6.9,15.8Hz,1H),5.30(d,J＝3.1Hz,1H),5.19(s,1H),3.76(t,J＝6.3Hz,2H),2.48(q,J＝6.3Hz,2H),2.25(s,3H),2.16(s,3H),0.89(s,9H),0.06(s,6H)。
步骤E：5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-胺 (Int-72e)
在N2气氛下向(E)-5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-烯-1-基)-4-甲基-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶(7.00g，19.3mmol)于MeOH(100mL)中的经搅拌溶液中添加10％Pd-C(2.06g，19.3mmol，10％wt％)，且在H2气氛(15psi)下于25℃搅拌所得混合物16h。过滤反应混合物且真空浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝3/1)纯化残留物，得到5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-胺(Int-72e)。1HNMR(400MHz,CDCl3)：δ7.85(s,1H),3.65-3.54(m,4H),3.07-2.88(m,1H),2.57(br t,J＝7.4Hz,2H),2.09(s,3H),1.61-1.54(m,4H),1.29(d,J＝7.0Hz,6H),0.87(s,9H),0.03(s,6H)。
步骤F：N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3- 基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-72f)
在20℃下向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(3.00g，14.4mmol)于THF(40mL)中的经搅拌溶液中添加乙二酰氯(1.26mL，14.4mmol)，且在N2气氛下于65℃搅拌混合物30min。随后将混合物冷却至20℃，且真空浓缩。将残留物溶解于THF(50mL)中且添加含5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-胺(Int-72e，4.83g，14.4mmol)的THF(40mL)。在20℃下搅拌所得混合物1h。将反应混合物用NH4Cl(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过快速硅胶色谱法(0-30％石油醚/EtOAc)纯化残留物，得到N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-72f)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ9.70(s,1H),9.44(br s,1H),8.33(s,1H),8.01(d,J＝7.0Hz,1H),3.66(t,J＝5.7Hz,2H),3.22(quin,J＝6.8Hz,1H),2.64(br t,J＝7.2Hz,2H),2.23(s,3H),1.66-1.59(m,4H),1.25(d,J＝6.7Hz,6H),0.89(s,9H),0.05(s,6H)。
步骤G：1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3- 基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-72g)
在0℃下向N-((5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-72f，5.00g，8.75mmol)于THF(500mL)中的经搅拌溶液中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(17.5mL，17.5mmol)(1M THF溶液)，且在N2气氛下于20℃搅拌混合物10min。将反应混合物用NH4Cl饱和溶液(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过硅胶色谱法(DCM/MeOH＝10/1)纯化残留物，得到1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-72g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.50(s,2H),3.66(t,J＝5.9Hz,2H),2.74-2.63(m,3H),2.00(s,3H),1.71-1.62(m,4H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H),1.11(d,J＝6.7Hz,3H),0.89(s,9H),0.05(s,6H)。
步骤H：(2R,5S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4- 甲基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌 嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-72h)
向1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-72g，1.15g，2.15mmol)于MeCN(20mL)中的经搅拌溶液中添加DIEA(1.88mL，10.8mmol)及POCl3(1.40mL，15.0mmol)，且在80℃下搅拌所得混合物2h。真空浓缩反应混合物。将所获得的残留物溶解于MeCN(20mL)中。在25℃下将DIEA(1.13mL，6.45mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.507g，2.37mmol)添加至反应混合物中，且在25℃下搅拌混合物1h。真空浓缩反应混合物，且通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(5-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-72h)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.44(d,J＝2.7Hz,1H),7.77(br d,J＝7.4Hz,1H),5.10-4.74(m,1H),4.61-4.27(m,1H),4.05-3.70(m,3H),3.65(br t,J＝5.5Hz,2H),3.60-3.38(m,1H),2.70-2.62(m,2H),2.61-2.43(m,1H),1.93(d,J＝6.3Hz,3H),1.73-1.62(m,4H),1.49(s,9H),1.40(br s,3H),1.24-1.16(m,6H),1.12-1.02(m,3H),0.88(s,9H),0.04(s,6H)。
实施例73：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6-(丙- 2-基)-17-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g] [1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮。
步骤A：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧 基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-73A)
向含有(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.10g，0.14mmol)的烧瓶中添加二噁烷(1.5mL)。添加三氟(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-30，57mg，0.21mmol)及乙酸钾(56mg，0.57mmol)，随后添加水(0.25mL)。使氩气鼓泡通过混合物3分钟。添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(12mg，0.014mmol)且使氩气鼓泡通过混合物。将混合物加热至90℃，持续18小时且随后使其冷却至室温。用乙酸乙酯及碳酸氢钠饱和水溶液稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。向所得混合物中添加THF(1.5mL)，然后添加TBAF(1.0M于THF中，0.35mL，0.35mmol)。将混合物加热至50℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温。用乙酸乙酯及水稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-73a)。MS(ESI)m/z 717[M+H]+。
步骤B：Int-73b
向含有(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-6-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-73a，69mg，0.096mmol)及THF(3.9mL)的烧瓶中添加三苯膦(63mg，0.24mmol)，且然后添加偶氮二甲酸二异丙酯(37μL，0.19mmol)。随后将混合物加热至50℃，持续3小时。在3小时之后，使混合物冷却至室温。然后在减压下浓缩混合物。通过柱色谱法(0-100％梯度的3:1乙酸乙酯:乙醇于己烷中的梯度)纯化所得油状物，得到Int-73b。MS(ESI)m/z 699[M+H]+。
步骤C：Int-73c
向含有Int-73b(33mg，0.047mmol)的烧瓶中添加二氯甲烷(1.5mL)且随后添加TFA(0.50mL)。将混合物加热至45℃，持续一小时。在一小时之后，在减压下浓缩混合物且未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。MS(ESI)m/z 599[M+H]+。
步骤D：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6-(丙-2- 基)-17-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g] [1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例73)
向含有Int-73c(28mg，0.047mmol)的烧瓶中添加二氯甲烷(1.5mL)，随后添加休尼格氏碱(31μL，0.18mmol)并然后添加丙烯酰氯(7.6μL，0.094mmol)。在室温下搅拌混合物一小时。在一小时之后，用乙酸乙酯及水稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得混合物，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6-(丙-2-基)-17-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例73)。MS(ESI)m/z 653[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.37(d,J＝5.6Hz,1H),8.04(dd,J＝20.4,9.0Hz,1H),7.72(t,J＝8.1Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.52(d,J＝7.9Hz,1H),7.08(d,J＝5.7Hz,1H),6.84(ddd,J＝46.9,16.6,10.3Hz,1H),6.19(dd,J＝16.7,6.8Hz,1H),5.76(d,J＝10.3Hz,1H),4.87(s,0.5H),4.81–4.48(m,5H),4.25(t,J＝13.2Hz,1.5H),3.94–3.84(m,1.5H),3.70(d,J＝14.0Hz,0.5H),3.53(d,J＝12.5Hz,1H),3.07(q,J＝6.9Hz,1H),1.52–1.35(m,6H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H),0.92(t,J＝5.7Hz,3H)。
实施例74至92是以与实施例73类似的方式制备。在实施例74、76-78、80-82、90及91中，使用DBAD代替步骤B中的DIAD。对于实施例85，使用2-氟丙烯酸及T3P代替步骤D的丙烯酰氯。
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实施例94：(11S)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17, 20-三氟-11-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6- g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-94a)
在室温下向(S)-4-((1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙-2-基)氧基)-2-异丙基吡啶-3-胺(1.0g，3.1mmol)于THF(6.0mL)中的混合物中添加TBAF(1.0M于THF中，6.2mL，6.2mmol)。在2小时之后，在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0-90％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到呈固体的(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-94a)。MS(ESI)：m/z[M+H]+211。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.78(d,J＝5.6Hz,1H),6.80(d,J＝5.6Hz,1H),4.64-4.56(m,1H),3.78-3.68(m,2H),3.19(s,1H),1.33(d,J＝6.4Hz,3H),1.25(dd,J＝1.2,6.6Hz,6H)。
步骤B：6-(2-((S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙氧基)-3,6-二氟苯 基)-2-氯-5-氟烟碱腈(Int-94b)
在氮气气氛下于室温向2-氯-6-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-5-氟烟碱腈(0.70g，2.5mmol)于THF(15mL)中的混合物中添加(S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙-1-醇(Int-94a，0.52g，2.5mmol)及三苯膦(1.3g，4.9mmol)。添加偶氮二甲酸二-叔丁酯(1.1g，4.9mmol)于THF(5.0mL)中的混合物且使混合物在室温下搅拌40分钟。在40分钟之后，在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(40％MeCN/水)纯化所得混合物，得到6-(2-((S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙氧基)-3,6-二氟苯基)-2-氯-5-氟烟碱腈(Int-94b)。MS(ESI)：m/z[M+H]+477。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.09(br s,1H),7.73(d,J＝5.5Hz,1H),7.45-7.39(m,1H),7.07-7.01(m,1H),6.60(br s,1H),4.76-4.63(m,1H),4.44(br d,J＝10.7Hz,1H),4.26(dd,J＝7.3,10.7Hz,1H),3.23-3.16(m,1H),1.34(d,J＝6.7Hz,3H),1.23(d,J＝2.4Hz,3H),1.22-1.20(m,3H)。
步骤C：Int-94c
在手套工作箱中向6-(2-((S)-2-((3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)氧基)丙氧基)-3,6-二氟苯基)-2-氯-5-氟烟碱腈(Int-94b，0.29g，0.61mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的混合物中添加三磷酸钾(0.20g，0.92mmol)及SPhos Pd G3(48mg，0.061mmol)。在氮气气氛下将混合物加热至90℃，持续3小时。在3小时之后，使混合物冷却至室温，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到Int-94c。MS(ESI)：m/z[M+H]+441。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝5.5Hz,1H),7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.11(br d,J＝6.7Hz,1H),6.83(dd,J＝3.5,8.2Hz,1H),6.65(d,J＝5.9Hz,1H),6.43(s,1H),4.88-4.81(m,1H),4.53-4.48(m,1H),4.12(s,1H),3.37(s,1H),1.42(d,J＝6.3Hz,3H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H),1.21(d,J＝6.7Hz,3H)。
步骤D：Int-94d
在室温下向Int-94c(0.33g，0.75mmol)于DMSO(5.0mL)中的混合物中添加碳酸钾(0.52g，3.8mmol)及过氧化氢(30％于水中，0.38mL，3.8mmol)。1.5小时后，将混合物用水(10mL)稀释且用EtOAc(2×15mL)萃取。将合并的有机层用亚硫酸钠饱和水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0-45％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到Int-94d。MS(ESI)：m/z 459[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.16(d,J＝5.8Hz,1H),8.04(d,J＝9.2Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),6.93(d,J＝6.1Hz,1H),6.90(d,J＝3.4Hz,1H),5.02-4.96(m,1H),4.54-4.50(m,1H),4.10-4.07(m,1H),3.47-3.40(m,1H),1.36(d,J＝6.4Hz,3H),1.29(d,J＝6.7Hz,3H),1.19(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤E：Int-94e
在室温下向Int-94d(0.25g，0.55mmol)于THF(5.0mL)中的混合物中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(0.44g，2.2mmol)。在30分钟之后，添加1,1′-羰基二咪唑(0.10g，0.65mmol)。在氮气气氛下将所得混合物加热至70℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚)直接纯化，得到Int-94e。MS(ESI)：m/z 485[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.42(d,J＝5.8Hz,1H),8.36(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(br dd,J＝1.4,5.0Hz,1H),7.07(d,J＝5.8Hz,1H),6.97(dt,J＝3.5,8.8Hz,1H),5.07-5.01(m,1H),4.49(br s,1H),4.16(d,J＝11.3Hz,1H),3.10-3.04(m,1H),1.31(dd,J＝4.1,6.6Hz,6H),0.96(d,J＝6.7Hz,3H)。
步骤F：Int-94f
在室温下向Int-94e(0.10g，0.21mmol)于乙腈(3.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙基胺(72μL，0.41mmol)及氧氯化磷(29μL，0.31mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。所得粗产物Int-94f未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI)：m/z 503[M+H]+。
步骤G：Int-94g
在室温下向Int-94f(0.10g，0.20mmol)于乙腈(3.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(0.15mL，0.86mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(64mg，0.30mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。通过制备型TLC(在硅胶上，用乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化所得残留物，得到Int-94g。MS(ESI)：m/z 681[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.40(d,J＝6.1Hz,1H),8.14(d,J＝8.9Hz,1H),7.34-7.28(m,1H),7.06(d,J＝5.8Hz,1H),6.98(br d,J＝3.1Hz,1H),5.04-4.98(m,1H),4.84-4.73(m,1H),4.72-4.61(m,1H),4.60-4.44(m,2H),4.20-4.15(m,1H),3.89-3.84(m,1H),3.72-3.64(m,1H),3.50-3.36(m,1H),3.06(s,1H),1.59(br d,J＝6.4Hz,3H),1.52(br d,J＝7.0Hz,9H),1.38(d,J＝6.7Hz,3H),1.29(d,J＝6.7Hz,3H),1.24-1.22(m,3H),1.02(d,J＝7.0Hz,3H)。
步骤H：Int-94h
在室温下向Int-94g(50mg，0.073mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的混合物中添加三氟乙酸(1.0mL，13mmol)。在1小时之后，在减压下浓缩混合物，得到粗产物Int-94h，其未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。MS(ESI)：m/z 581[M+H]+。
步骤I：(11S)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17,20- 三氟-11-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g] [1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例94)
在室温下向Int-94h(42mg，0.072mmol)于二氯甲烷(1.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(50μL，0.29mmol)及丙烯酰氯(20μL，0.25mmol)。在1小时之后，在减压下浓缩混合物。通过反相制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5um；条件：水(0.04％NH3·H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化所得残留物，得到(11S)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17,20-三氟-11-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(Ex-94)。MS(ESI)：m/z 635[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.41(d,J＝5.8Hz,1H),8.15(dd,J＝8.7,17.2Hz,1H),7.34-7.28(m,1H),7.07(d,J＝6.1Hz,1H),6.97(br d,J＝3.4Hz,1H),6.93-6.74(m,1H),6.29(ddd,J＝1.7,5.8,16.6Hz,1H),5.83(t,J＝11.1Hz,1H),5.04-4.90(m,2H),4.84-4.67(m,1H),4.64-4.36(m,2H),4.18(d,J＝11.0Hz,1H),3.95-3.74(m,1H),3.69(br d,J＝14.0Hz,1H),3.37-3.32(m,1H),3.10-3.03(m,1H),1.58(dd,J＝7.0,8.9Hz,3H),1.51-1.42(m,3H),1.29(d,J＝6.7Hz,3H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),1.02(dd,J＝4.9,6.7Hz,3H)。
实施例95及96是以与实施例94类似的方式，使用经适当的取代的吡啶前体物来制备。
实施例97：12,12,17,18,21-五氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1- 基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6- h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：Int-97a
向含有Int-54b-1(150mg，0.210mmol)的烧瓶中添加甲醇(1.0mL)，且然后添加氢氧化钾(1.0M于甲醇中，0.63mL，0.63mmol)。密封反应容器且抽空经密封反应容器并用氮气气球回填三次。将反应混合物加热至40℃，持续16小时。在16小时之后，使混合物冷却至室温，且随后用氯化铵饱和水溶液(10mL)淬灭。用氯彷:异丙醇(3:1混合物，3×50mL)萃取经淬灭的产物混合物三次。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下浓缩滤液，得到Int-97a。MS(ESI)m/z 519[M+H]+。
步骤B：Int-97b
抽空含有Int-97a(40mg，0.077mmol)的烧瓶且用氮气气球回填三次。将乙腈(0.40mL)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(21μL，0.12mmol)及磷酰三氯(9.0μL，0.10mmol)添加至反应容器中且加热所得混合物至80℃，持续1h。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩至干燥。将所得混合物溶解于乙腈(0.40mL)中。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(69μL，0.39mmol)添加至反应混合物中，随后添加(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(23mg，0.12mmol)。在室温下搅拌所得混合物1h。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释产物混合物。用碳酸氢钠饱和水溶液(3×10mL)洗涤经稀释的产物混合物三次。有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过快速柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/二氯甲烷)纯化所获得的残留物，得到Int-97b。MS(ESI)m/z 701[M+H]+。
步骤C：Int-97c
抽空含有Int-97b(39mg，0.056mmol)的小瓶且用氮气气球回填。将二氯甲烷(0.60mL)添加至反应容器中，随后逐滴添加三氟乙酸(0.20mL，2.8mmol)。在24℃下搅拌反应混合物1.5h。在1.5小时之后，在减压下浓缩混合物。使所获得的残留物与甲苯(1mL)共沸一次。所获得的残留物(Int-97c)未经纯化或表征即直接用于下一步骤中。
步骤D：12,12,17,18,21-五氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6- (丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1, 8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例97)
将含有Int-97c(53mg，0.056mmol)及二氯甲烷(0.30mL)的烧瓶冷却至0℃。将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(50μL，0.28mmol)及丙烯酰氯(7.0μL，0.084mmol)添加至反应容器中。在0℃下搅拌反应混合物1小时。在1小时之后，用碳酸氢铵饱和水溶液(50mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物三次。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且然后在减压下浓缩。通过柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得残留物，得到12,12,17,18,21-五氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例97)。MS(ESI)m/z 655[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝4.9Hz,1H),8.40(dd,J＝20.8,9.2Hz,1H),7.62(q,J＝9.5Hz,1H),7.24(t,J＝5.8Hz,2H),6.92–6.82(m,1H),6.30–6.13(m,1H),5.78(d,J＝10.9Hz,1H),4.96–4.83(m,1H),4.49–4.41(m,1H),4.41–4.35(m,1H),4.31–4.19(m,2H),4.19–4.12(m,1H),4.08–3.97(m,1H),3.91–3.77(m,1H),3.74–3.61(m,2H),3.29–3.22(m,1H),2.75–2.61(m,2H),1.46–1.32(m,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),0.84(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例98至106是以与实施例97类似的方式，使用Int-49d-1及经适当的取代的哌嗪来制备。
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实施例107：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-19,22-二氟- 6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)吡啶并[4',3':12,13]嘧啶并 [1',6':1,2][1,3,7]三氮杂环十三烯并[5,6,7-hi]吲唑-4-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-107a)
向含有含1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-16e，0.16mg，0.30mmol)的乙腈(2.00ml)的烧瓶中添加DIEA(0.10mL，0.60mmol)及氧氯化磷(0.034mL，0.36mmol)。将混合物加热至80℃，持续一小时。在一小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。在真空下干燥所得混合物15分钟。向此混合物中添加乙腈(2.0mL)且将混合物冷却至0℃。缓慢添加DIEA(0.21mL，1.2mmol)且然后添加(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(77mg，0.362mmol)于乙腈(0.50mL)中的混合物。在30分钟之后，用冷水淬灭混合物且随后添加乙酸乙酯。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷及乙酸乙酯:乙醇的3:1混合物)纯化所得混合物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-107a)。MS(ESI)m/z 717[M+H]+
步骤B：7-溴-6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(Int-107b)
向含有含7-溴-6-氟-1H-吲唑(1.0g，4.7mmol)的二氯甲烷(10mL)的烧瓶中添加对甲苯磺酸吡啶鎓(117mg，0.465mmol)，随后添加3,4-二氢-2H-哌喃(0.85mL，9.3mmol)。添加乙腈(2mL)且使混合物搅拌48小时。48小时后，在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得混合物，得到7-溴-6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(Int-107b)。MS(ESI)m/z 299[M+H]+。
步骤C：(6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-7-基)二羟硼酸(Int-107c)
向含有7-溴-6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(Int-107b，0.50g，1.7mmol)的烧瓶中添加双(频哪醇根基)二硼(0.64g，2.5mmol)、乙酸钾(0.49g，5.0mmol)及[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的复合物(72mg，0.089mmol)及二噁烷(8.3mL)。通过表面下充气用氮气吹扫小瓶且加热至80℃，持续16小时。在16h之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得混合物，得到(6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-7-基)二羟硼酸(Int-107c)。MS(ESI)m/z 265[M+H]+。
步骤D：(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氟-7-(6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶 并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-107d)
向含有(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-107a，70mg，0.098mmol)的烧瓶中添加(6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-7-基)二羟硼酸(Int-107c，31mg，0.12mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯二氯甲烷复合物(8.0mg，9.8μmol)、乙酸钾(38mg，0.39mmol)及二噁烷(0.80mL)以及水(0.20mL)。通过表面下充气用氮气吹扫小瓶且加热至90℃，持续18小时。在18小时之后，用乙酸乙酯及水稀释混合物。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。所得混合物未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。
步骤E：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(6-氟-1H-吲唑-7-基)-1-(4-(4-羟基丁基)-2-异丙 基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-107e)
向含有(2R,5S)-4-(1-(4-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(6-氟-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-107d，88mg，0.098mmol)的烧瓶中添加二氯甲烷(0.5mL)，随后添加HCl(4M于水中，30μL，0.12mmol)。使混合物在室温下搅拌45分钟。在45分钟之后，在减压下浓缩混合物。向混合物中添加二氯甲烷且在减压下浓缩所得混合物。再重复此过程两次。所得油状物未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。
步骤F：Int-107f
向含有(2R,5S)-4-(6-氟-7-(6-氟-1H-吲唑-7-基)-1-(4-(4-羟基丁基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-107e，29mg，0.041mmol)的烧瓶中添加四氢呋喃(1.7mL)、偶氮二甲酸二异丙酯(16μL，0.083mmol)及三苯膦(27mg，0.10mmol)。将混合物加热至50℃，持续3小时。在3小时之后，使混合物冷却至室温且在减压下浓缩溶剂。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得混合物，得到Int-107f。MS(ESI)m/z 685[M+H]+。
步骤G：Int-107g
向含有Int-107f(15mg，0.022mmol)的烧瓶中添加二氯甲烷(1.0mL)，随后添加三氟乙酸(0.043mL，0.66mmol)。使混合物在室温下搅拌一小时。在一小时之后，在减压下浓缩混合物，得到Int-107g，其未经进一步纯化或表征即使用。
步骤H：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-19,22-二氟-6- (丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)吡啶并[4',3':12,13]嘧啶并[1', 6':1,2][1,3,7]三氮杂环十三烯并[5,6,7-hi]吲唑-4-酮(实施例107)
将含有粗Int-107g(15mg，0.026mmol)及二氯甲烷(1.7ml)的烧瓶冷却至0℃。添加N,N-二异丙基乙胺(18μL，0.10mmol)，然后添加丙烯酰氯(2.3μL，0.028mmol)，且搅拌混合物30分钟。在30分钟之后，使混合物升温至室温。用乙酸乙酯及盐水稀释混合物。分离有机层，经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-10％MeOH/DCM)纯化所得残留物，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-19,22-二氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,20-(联二亚甲基)吡啶并[4',3':12,13]嘧啶并[1',6':1,2][1,3,7]三氮杂环十三烯并[5,6,7-hi]吲唑-4-酮(实施例107)。MS(ESI)m/z 639[M+H]+。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.43–8.36(m,2H),8.17(s,1H),7.98–7.93(m,1H),7.21–7.13(m,2H),6.92(s,1H),6.31–5.99(m,2H),5.85(d,J＝10.5Hz,1H),4.99–4.82(m,1H),4.47–4.32(m,1H),4.21(d,J＝19.8Hz,1H),4.06–3.98(m,1H),3.91–3.84(m,1H),3.84–3.76(m,1H),2.81–2.72(m,1H),2.50–2.46(m,2H),1.85–1.74(m,1H),1.74–1.61(m,1H),1.39(d,J＝6.6Hz,3H),1.31–1.23(m,4H),1.21–1.17(m,2H),1.07(d,J＝6.7Hz,3H),0.86(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例108是以与实施例107类似的方式，使用经适当的取代的氟吲唑来制备。
实施例109：20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17- 氟-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧 杂二氮杂环十二烯-4(13H)-酮
步骤A：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-109a)
向2,5,6-三氯烟碱酰胺(1.0g，4.4mmol)于四氢呋喃(18mL)中的经搅拌混合物中添加乙二酰氯(0.43mL，4.9mmol)。然后在氮气气氛下加热混合物至65℃，持续30min。在30分钟之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。向所得残留物中添加二氯甲烷(10mL)。将所得混合物一次性添加至4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(Int-7c，1.3g，4.4mmol)于DCM(10mL)中的混合物中。使反应混合物在室温下搅拌5分钟。随后用盐水(50mL)淬灭反应混合物且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-30％乙酸乙酯/石油醚)纯化所得残留物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-109a)。MS(ESI)：m/z 547[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.40(d,J＝4.9Hz,1H),8.36(s,1H),7.29(d,J＝4.9Hz,1H),3.93(t,J＝6.4Hz,2H),3.42-3.35(m,1H),2.92(t,J＝6.2Hz,2H),1.29(d,J＝6.8Hz,6H),0.84(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤B：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7- 二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-109b)
将N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-109a，1.2g，2.2mmol)于THF(8.0mL)中的混合物冷却至0℃。添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(1.0M于THF中，4.4mL，4.4mmol)，使混合物升温至室温且然后在室温下搅拌30分钟。随后用氯化铵饱和水溶液(15mL)淬灭混合物且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-109b)。MS(ESI)：m/z 509[M+H]+。
步骤C及D：(2R,5S)4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-109d)
在室温下向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-109b，1.0g，2.0mmol)于乙腈(10mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(3.4mL，20mmol)并然后添加氧氯化磷(0.37mL，3.9mmol)。随后在N2气氛下将混合物加热至80℃，持续30分钟。在30分钟之后，使混合物冷却至室温。添加(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.98g，3.9mmol)且在室温下搅拌所得混合物5min。随后用水(20mL)淬灭混合物且用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-109d)。MS(ESI)：m/z 706[M+H]+。
步骤E：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2, 5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-109e)
向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-109d，300mg，0.425mmol)、乙酸钾(209mg，2.13mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(35mg，0.043mmol)于1,4-二噁烷(3.0mL)及水(0.30mL)中的混合物中添加(2-氟-6-甲酰基苯基)二羟硼酸(93mg，0.55mmol)，且在氮气气氛下将混合物加热至90℃，持续30min。在30分钟之后，使混合物冷却至室温。然后用水(5.0mL)淬灭混合物，并随后用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-60％乙酸乙酯/石油醚)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-109e)。MS(ESI)：m/z 793[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ9.87-9.74(m,1H),8.52-8.42(m,1H),8.37(dd,J＝1.4,5.0Hz,1H),7.88-7.79(m,1H),7.78-7.68(m,1H),7.58-7.44(m,1H),7.34-7.24(m,1H),4.98(br d,J＝19.5Hz,1H),4.50-4.28(m,2H),4.05-3.94(m,1H),3.85(br s,1H),3.72-3.57(m,3H),2.83-2.64(m,1H),2.58-2.45(m,2H),1.52(s,12H),1.31-1.25(m,3H),1.18-1.15(m,3H),0.99-0.91(m,3H),0.85-0.82(m,9H),-0.02--0.09(m,6H)。
步骤F：Int-109f
将(2R,5S)-叔丁基4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-109e，220mg，0.277mmol)于THF(3.0mL)中的混合物冷却至0℃。添加TBAF(1.0M于THF中，0.56mL，0.56mmol)。使混合物升温至室温且然后在室温下搅拌1小时。然后用水(5.0mL)淬灭混合物，且用乙酸乙酯(20mL)萃取。将有机层用盐水(2×5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过反相MPLC(C18，0-60％乙腈于水中的梯度+0.5％TFA改性剂)纯化所得残留物，得到Int-109f。MS(ESI)：m/z 679[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.80(d,J＝18.4Hz,1H),8.65-8.46(m,2H),7.86-7.40(m,4H),4.99(brs,1H),4.46(br s,2H),4.01(br s,1H),3.90-3.73(m,2H),3.73-3.53(m,2H),3.27-3.20(m,1H),3.16-2.88(m,1H),2.86-2.55(m,2H),1.51(s,12H),1.31-1.24(m,6H),1.13-1.05(m,3H)。
步骤G：Int-109g
在氮气气氛下于室温向Int-109f(0.10g，0.15mmol)于CH3NO2(12mL)中的混合物中添加三氟甲磺酸(0.13mL，1.5mmol)及三乙基硅烷(0.24mL，1.5mmol)。使混合物在室温下搅拌30分钟。然后在减压下浓缩混合物，得到Int-109g，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z 563[M+H]+。
步骤H：20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17-氟-6- (丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮 杂环十二烯-4(13H)-酮(实施例109)
在室温下向Int-109g(60mg，0.11mmol)于DCM(2.0mL)中的混合物中添加DIEA(0.056mL，0.32mmol)及丙烯酰氯(17μL，0.21mmol)。在室温下搅拌混合物5分钟。然后在减压下浓缩混合物且随后通过制备型TLC硅胶板(7％MeOH/DCM)纯化。随后通过制备型SFC柱F，条件：0.1％NH3·H2O EtOH分离混合物，得到峰1：呈单一阻转异构体形式的20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17-氟-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4(13H)-酮(实施例109)。MS(ESI)：m/z 617[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.36(d,J＝15.7Hz,1H),7.52-7.43(m,2H),7.24(d,J＝7.6Hz,1H),7.16(t,J＝9.0Hz,1H),6.95-6.73(m,1H),6.35-6.24(m,1H),5.83(dt,J＝1.8,10.7Hz,1H),5.11-4.92(m,1H),4.82-4.59(m,1H),4.43-3.90(m,4H),3.81-3.57(m,3H),3.39-3.31(m,1H),3.11-3.02(m,1H),2.51-2.44(m,2H),1.62(br t,J＝7.2Hz,3H),1.52-1.43(m,3H),1.24(d,J＝6.7Hz,3H),1.03(br t,J＝3.4Hz,3H)。
实施例110：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟- 20-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4, 7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
将含有20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例50)(50mg，0.78mmol)、甲基硼酸(14mg，0.24mmol)及Catacxium A Pd G3(6.0mg，0.078mmol)的烧瓶抽空且用氮气回填三次。添加环戊基甲基醚(0.40mL)及碳酸铯水溶液(1.5M于H2O中，0.16mL，0.24mmol)。随后将混合物加热至70℃，持续3h。在3小时之后，使混合物冷却至室温。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释混合物且用氯化钠饱和水溶液(3×10mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-20-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例110)。MS(ESI)m/z：617[M+H]+。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)δ8.42(d,J＝5.6Hz,1H),8.09(d,J＝13.7Hz,1H),7.28(ddd,J＝11.1,9.3,5.3Hz,1H),6.97(td,J＝8.9,3.6Hz,1H),6.89(d,J＝5.7Hz,1H),6.82(dd,J＝16.8,10.6Hz,0.5H),6.71(dd,J＝16.7,10.6Hz,0.5H),6.24(ddd,J＝16.7,4.1,2.2Hz,1H),5.75(td,J＝10.2,2.3Hz,1H),4.99(d,J＝8.1Hz,0.5H),4.85–4.72(m,1H),4.67–4.59(M,2.5H),4.58–4.42(M,1H),4.34(D,J＝13.8HZ,0.5H),4.27–4.19(M,1H),4.13–4.04(M,1H),3.84–3.67(M,1H),3.59(DDD,J＝18.2,14.1,3.9HZ,1H),3.27(DD,J＝13.7,4.1HZ,0.5H),3.16(PD,J＝6.7,3.7HZ,1H),2.22(S,3H),1.56–1.41(M,6H),1.24(D,J＝6.7HZ,3H),1.00(DD,J＝6.8,2.8HZ,3H)。
实施例111：6-环丙基-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]- 14,17,20-三氟-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯 并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int- 111a)
在0℃下向2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙醇(50.3g，285mmol)于THF(150mL)中的混合物中添加NaH(60％于矿物油中的分散液，15.5g，389mmol)。在30分钟之后，将混合物逐滴添加至2,4-二氯-3-硝基吡啶(50g，0.26mol)于THF(150mL)中的混合物中且将混合物维持在0℃下30分钟。在30分钟之后，使混合物升温至室温且随后搅拌3小时。随后将反应混合物用氯化铵饱和水溶液(50mL)淬灭，且然后用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-25％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(Int-111a)。MS(ESI)：m/z 333[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.28(d,J＝5.87Hz,1H),7.00(d,J＝5.87Hz,1H),4.22(t,J＝4.65Hz,2H),3.91(t,J＝4.65Hz,2H),0.82(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤B：4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-胺(Int-111b)
在0℃下向4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯-3-硝基吡啶(10g，30mmol)于THF(90mL)中的混合物中添加锌粉(15.7g，240mmol)及氯化铵(25.7g，481mmol)于水(20mL)中的混合物。使混合物升温至室温，持续15小时。15小时后，过滤混合物且用EtOAc(100mL)洗涤滤饼。随后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取滤液。用盐水(50mL)及碳酸氢钠饱和水溶液(50mL)洗涤合并的有机层。有机层然后经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-25％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-胺(Int-111b)。MS(ESI)：m/z303[M+H]+。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.64(d,J＝5.38Hz,1H),6.61(d,J＝5.38Hz,1H),4.03-4.07(m,2H),3.99(br s,2H),3.89-3.92(m,2H),0.81(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤C：N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)氨甲酰 基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-111c)
在氮气气氛下，于室温向2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(5.0g，24mmol)于THF(60mL)中的混合物中添加乙二酰氯(2.3mL，26mmol，2M于二氯甲烷中)。随后将混合物加热至60℃，持续30min。在30分钟之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。在室温下向所得混合物中添加THF(60mL)，且随后添加4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-胺(Int-111b，7.25g，23.9mmol)。10分钟后，将混合物用水(100mL)淬灭，用碳酸氢钠调节至约pH 8，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得混合物，得到N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(Int-111c)。MS(ESI)：m/z 537[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：9.68(br s,1H),8.19(d,J＝5.87Hz,1H),8.02–8.08(m,1H),7.93(d,J＝7.09Hz,1H),6.88(d,J＝5.87Hz,1H),4.13–4.16(m,2H),3.93(t,J＝4.77Hz,2H),0.81(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤D：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-氯- 6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-111d)
在氮气气氛下，于0℃向N-((4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,6-二氯-5-氟烟碱酰胺(2.0g，3.7mmol)于THF(50mL)中的混合物中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(1.0M于THF中，7.4mL，7.4mmol)。随后使混合物升温至室温，持续30分钟。随后将混合物用水(20mL)淬灭，用碳酸氢钠调节至pH约8，并然后用EtOAc(3×70mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0至50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-111d)。MS(ESI)：m/z 501[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.41(d,J＝5.87Hz,2H),8.21(d,J＝6.4Hz,1H),7.04(d,J＝5.87Hz,1H),4.12–4.17(m,2H),3.77–3.85(m,2H),0.76(s,9H),-0.07(s,3H),-0.11(s,3H)。
步骤E：1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-4,7-二 氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-111e)
向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.4g，2.8mmol)于MeCN(10mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(2.5mL，14mmol)及氧氯化磷(0.52mL，5.6mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续30min。随后使混合物冷却至室温，并然后在减压下浓缩，得到粗1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-111e)，其未经进一步纯化或表征即使用。MS(ESI)：m/z 519[M+H]+。
步骤F：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶- 3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸 叔丁酯(Int-111f)
在氮气气氛下于室温向1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-4,7-二氯-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(18.7g，35.9mmol)于MeCN(180mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(6.3mL，36mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11.5g，53.8mmol)。使混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将混合物用水(20mL)淬灭，用碳酸氢钠调节至约pH 8，且然后用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得混合物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-111f)。MS(ESI)：m/z 697[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.53(d,J＝5.9Hz,1H),7.96–7.89(m,1H),7.18(d,J＝5.9Hz,1H),5.16–4.89(m,1H),4.81–4.48(m,1H),4.36–4.29(m,2H),4.29–4.09(m,2H),4.08–3.97(m,2H),3.96–3.91(m,2H),1.68(s,9H),1.48–1.36(m,6H),0.92(d,J＝8.1Hz,9H),0.10–-0.01(m,6H)。
步骤G：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶- 3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2, 5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-111g)
在氮气气氛下向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.0g，7.2mmol)、(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(Int-23c，2.0g，8.6mmol)及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(0.52g，0.72mmol)于1,4-二噁烷(50mL)及水(15mL)中的混合物添加乙酸钾(3.5g，36mmol)。然后将混合物加热至90℃，持续2小时。在2小时之后，使混合物冷却室温，且随后用盐水(20mL)淬灭。随后用EtOAc(2×50mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中)的梯度纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-111g)。MS(ESI)：m/z 791[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.36(br s,1H),8.61(d,J＝5.9Hz,1H),8.15–8.06(m,1H),7.32–7.25(m,2H),6.87–6.80(m,1H),5.29–4.95(m,1H),4.92–4.50(m,2H),4.45–4.35(m,2H),4.34–4.21(m,2H),4.16(br s,1H),4.03–3.97(m,2H),1.72(s,9H),1.59–1.40(m,6H),0.90(d,J＝4.9Hz,9H),0.05(d,J＝6.1Hz,3H),0.01(d,J＝10.8Hz,3H)。
步骤H：(2R,5S)-4-(1-(2-氯-4-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟 基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-111h)
在0℃下向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-氯吡啶-3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.6g，7.1mmol)于THF(40mL)中的混合物中添加氟化四丁铵(1.0M于THF中，14.2mL，14.2mmol)。使所得混合物在室温下搅拌15小时。随后将混合物倒入水中，用HCl水溶液(1.0N)调整至pH约5且用EtOAc(3×80mL)萃取。随后将合并的有机层用碳酸氢钠饱和水溶液碱化至约pH 8，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液，得到(2R,5S)-4-(1-(2-氯-4-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-111h)。MS(ESI)：m/z 677[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.24(dd,J＝5.9,1.0Hz,1H),8.17–8.14(m,1H),7.17(dd,J＝5.9,3.4Hz,1H),7.10–7.00(m,1H),6.44(dt,J＝3.4,9.0Hz,1H),4.96(br s,1H),4.38–4.36(m,1H),4.18–4.13(m,1H),3.96–3.70(m,1H),3.92–3.68(m,1H),3.67–3.46(m,3H),3.22–3.12(m,2H),1.46(s,9H),1.42–1.22(m,6H)。
步骤I：Int-111i
向(2R,5S)-4-(1-(2-氯-4-(2-羟基乙氧基)吡啶-3-基)-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.3g，7.8mmol)于THF(350mL)中的混合物中添加三苯膦(10.3g，39.1mmol)及偶氮二甲酸二-叔丁酯(9.0g，39mmol)。将混合物脱气且用氮气吹扫1分钟。随后将混合物加热至65℃，持续30min。在30分钟之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物。随后通过MPLC(10-100％乙腈于水中的梯度+0.5％TFA改性剂)进一步纯化混合物，得到Int-111i。MS(ESI)：m/z 659[M+H]+。
步骤J：Int-111j-1
通过制备型SFC柱H，条件：流动相：0.1％NH3H2O MeOH分离Int-111i(2.0g，3.0mmol)的阻转异构体，得到峰1作为Int-110j-1。MS(ESI)：m/z 659[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.29(br s,1H),8.13(br s,1H),7.42–7.22(m,2H),7.00(br s,1H),4.86–4.62(m,4H),4.59–4.35(m,2H),4.14(br s,1H),3.85(br s,1H),3.65(br s,1H),3.43(br s,1H),1.60(br s,3H),1.51(br s,9H),1.36(br s,3H)。
步骤K：Int-111k-1
在氮气气氛下向Int-111j-1(0.10g，0.15mmol)于环戊基甲基醚(1.5mL)中的混合物中添加环丙基三氟硼酸钾(0.22g，1.5mmol)、氯[(二(1-金刚烷基)-正丁基膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(10mg，0.015mmol)及碳酸铯水溶液(0.030M，20mL，0.61mmol)。将所得混合物加热至60℃，持续15小时。在15小时之后，使混合物冷却至室温且随后用盐水(2mL)淬灭。随后用EtOAc(2×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(2mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过TLC板(硅胶，100％乙酸乙酯)纯化所得残留物，得Int-111k。MS(ESI)：m/z 665[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝5.9Hz,1H),8.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.36–7.28(m,1H),7.01–6.95(m,2H),4.75–4.72(m,2H),4.70–4.60(m,2H),4.38–4.30(m,1H),4.18–4.10(m,1H),3.87–3.65(m,2H),3.47–3.31(m,2H),1.97(br d,J＝5.9Hz,1H),1.51(br d,J＝2.7Hz,9H),1.48–1.27(m,6H),1.04–0.92(m,4H)。
步骤L：Int-111l-1
向Int-111k-1(28mg，0.042mmol)于二氯甲烷(1.0mL)中的混合物中添加三氟乙酸(1.0mL，13mmol)。使所得混合物在室温下搅拌30分钟。随后在减压下浓缩混合物，得到Int-111l-1，其未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。MS(ESI)：m/z 565[M+H]+。
步骤M：6-环丙基-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17, 20-三氟-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧 杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例111)
向Int-111l-1(24mg，0.042mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(13μL，0.076mmol)及丙烯酰氯(0.40mL，0.076mmol)。使所得混合物在室温下搅拌30分钟。在30分钟之后，在减压下浓缩混合物。通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18150mm*25mm*5um；条件：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化所得残留物，得到6-环丙基-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17,20-三氟-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例111)。MS(ESI)：m/z 619[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝5.9Hz,1H),8.16–8.11(m,1H),7.43–7.25(m,1H),7.11–6.95(m,2H),6.93–6.69(m,1H),6.32–6.28(m,1H),5.86–5.82(m,1H),5.02(br s,1H),4.86–4.73(m,3H),4.71–4.59(m,2H),4.41–4.34(m,1H),4.21–4.12(m,1H),3.96–3.76(m,1H),3.70–3.67(m,1H),2.07–1.93(m,1H),1.60–1.57(m,3H),1.46–1.43(m,3H),1.08–0.78(m,4H)。
实施例112：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙- 2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并三 氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：(3S)-4-(7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int- 112a)
在氮气气氛下向(S)-4-(7-氯-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-43-1，700mg，1.22mmol)于1,4-二噁烷(7.0mL)及水(2.0mL)中的混合物中添加(2-氨基-6-氟苯基)二羟硼酸(377mg，2.43mmol)、四(三苯膦)钯(0)(141mg，0.122mmol)及碳酸钾(336mg，2.43mmol)。随后将混合物加热至90℃，持续15小时。在15小时之后，使混合物冷却至室温，且随后用盐水(10mL)淬灭。随后用乙酸乙酯(2×30mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化残留物，得到(3S)-4-(7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-112a)。MS(ESI)：m/z 650[M+H]+。
步骤B：(3S)-4-(7-(2-((叔丁氧基羰基羰基)氨基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟 基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3甲基哌嗪-1 甲酸叔丁酯(Int-112b)
在氮气气氛下向(3S)-4-(7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-112a，620mg，0.95mmol)于MeOH(6.0mL)中的混合物中添加二碳酸二-叔丁酯(3.0mL，13mmol)。随后将混合物加热至65℃，持续15小时。在15小时之后，使混合物冷却至室温，且随后添加更多二碳酸二-叔丁酯(3.0mL，13mmol)。随后将混合物加热至65℃，持续15小时。在15小时之后，使混合物冷却至室温，且随后添加更多二碳酸二-叔丁酯(3.0mL，13mmol)。随后将混合物加热至65℃，持续15小时。在15小时之后，使混合物冷却至室温。在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-100％乙酸乙酯/石油醚)纯化所得残留物，得到(3S)-4-(7-(2-((叔丁氧基羰基羰基)氨基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-112b)。MS(ESI)：m/z 750[M+H]+。
步骤C：Int-112c
在氮气气氛下向(3S)-4-(7-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟苯基)-6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-112b，450mg，0.600mmol)于THF(35mL)中的混合物中添加三苯膦(1.26g，4.80mmol)。将混合物加热至65℃。添加偶氮二甲酸二异丙酯(1.8mL，9.0mmol)且在65℃下搅拌混合物20分钟。在20分钟之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-20％甲醇/二氯甲烷)纯化所得残留物，得到Int-112c。MS(ESI)：m/z732[M+H]+。
步骤D：Int-112d
向Int-112c(290mg，0.396mmol)于DCM(5.0mL)中的混合物中添加TFA(2.0mL)，且在室温下搅拌混合物3小时。随后在减压下浓缩混合物且通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝10:1)纯化所得残留物，得到Int-112d。MS(ESI)：m/z 532[M+H]+。
步骤E：17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2- 基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并三氮 杂环十二烯-4-酮(实施例112)
在氮气气氛下，将Int-112d(90mg，0.17mmol)THF(2.0mL)及水(0.50mL)中的混合物冷却至0℃。添加DIPEA(0.15mL，0.85mmol)及丙烯酰氯(14μL，0.17mmol)且在0℃下搅拌混合物30分钟。将混合物用盐水(10mL)稀释且然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩滤液。通过制备型TLC(100％乙酸乙酯)纯化所得残留物。随后通过SFC，柱D，条件：0.1％NH3H2O EtOH拆分外消旋物质，得到17,20-二氟-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并三氮杂环十二烯-4-酮(实施例112)。MS(ESI)：m/z 586[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)：δ8.52(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(br dd,J＝9.1,15.3Hz,1H),7.44(d,J＝5.2Hz,1H),7.34–7.25(m,1H),6.94–6.79(m,1H),6.74(d,J＝8.2Hz,1H),6.59(t,J＝8.9Hz,1H),6.34(br d,J＝16.8Hz,1H),5.87(br d,J＝9.5Hz,1H),4.94(br s,1H),4.87–3.44(m,6H),3.36(br s,1H),3.00–2.82(m,2H),2.72(br d,J＝16.2Hz,1H),2.61–2.50(m,1H),2.42(br t,J＝11.3Hz,1H),2.12–1.97(m,1H),1.65–1.55(m,3H),1.25(d,J＝6.7Hz,3H),0.98(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例113：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-14-羟 基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g] [1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(7-(2-(苯甲基氧基)-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(4-(3-((叔 丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2, 3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113a-1)
将含有(2-(苯甲基氧基)-3-(甲氧基甲氧基)苯基)二羟硼酸(0.100g，0.347mmol)、乙酸钾(112mg，1.14mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(23.0mg，0.028mmol)、(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-42-1，0.200g，0.284mmol)的烧瓶密封且用氩气吹扫。添加二噁烷(1.2mL)及水(0.20mL)且吹扫混合物10min。随后将反应混合物加热至100℃，持续18小时。18小时后，使混合物冷却至室温，并然后用碳酸氢钠饱和水溶液(125mL)及水(125mL)稀释且用EtOAc(3×250mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩。所得残留物未经进一步纯化或表征即用于下一步骤。
步骤B：(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧 啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113b-1)
用氮气对含有含(2R,5S)-4-(7-(2-(苯甲基氧基)-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113a-1，246mg，0.270mmol)的EtOH(1.4mL)的烧瓶充气。随后添加钯/碳(10重量％，58mg，0.054mmol)。烧瓶装备有氢气球。通过表面下鼓泡使氢气鼓泡通过混合物。使氢气鼓泡通过混合物30分钟。随后搅拌混合物18小时。在18小时之后，移除氢气球且将混合物搅拌以通大气。然后通过硅藻土过滤混合物且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得混合物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113b-1)。MS(ESI)：m/z 821[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(4-(3-羟基丙 基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-113c-1)
将含有含(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113b-1，186mg，0.227mmol)的THF(1.0mL)的烧瓶冷却至0℃。添加TBAF(1.0M于THF中，1.0mL，1.0mmol)，且随后使混合物升温至室温并在室温下搅拌混合物4小时。4小时后，在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化混合物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113c-1)。MS(ESI)：m/z707[M+H]+。
步骤D：Int-113d-1
向(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(甲氧基甲氧基)苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-113c-1，0.13g，0.19mmol)于THF(6.2mL)中的混合物中添加三苯膦(0.12g，0.46mmol)，随后添加偶氮二甲酸二异丙酯(72μL，0.37mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。在2小时之后，在减压下浓缩混合物，且随后通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化，得到Int-113d-1。MS(ESI)：m/z 689[M+H]+。
步骤E：Int-113e-1
向含有含Int-113d-1(0.090g，0.13mmol)的DCM(5.0mL)的烧瓶中添加TFA(1.0ml，13mmol)。在室温下搅拌反应混合物18小时。18小时后，在减压下浓缩混合物。所得残留物未经进一步纯化或表征即使用。
步骤F：Int-113f-1及Int-113f-1a
向粗Int-113e-1(71mg，0.13mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(0.23mL，1.3mmol)，随后添加丙烯酰氯(12μL，0.14mmol)。使混合物在室温下搅拌1小时。在1小时之后，在减压下浓缩混合物，且随后通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化，得到Int-113f-1与Int-113f-1a的1:1混合物。此混合物未经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤G：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-14-羟基- 6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1, 7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例113)
向粗Int-113f-1及Int-113f-1a(共50mg)于THF(1.0mL)中的1:1混合物中添加氢氧化锂(10mg，0.42mmol)。使反应混合物在室温下搅拌18小时。在18小时之后，通过RP-HPLC((C-18)，乙腈/水+0.1％TFA)纯化所得混合物。合并含有产物的馏分且然后在减压下浓缩，得到所需产物。随后通过RP-HPLC((C-18)，乙腈/水+0.1％TFA)进一步纯化混合物。合并含有产物的馏分且在减压下浓缩，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-14-羟基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-3][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例113)。MS(ESI)：m/z 599[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)：δ8.65(d,J＝6.0Hz,1H),8.19(dd,J＝19.3,9.5Hz,1H),7.95(d,J＝6.1Hz,1H),7.04–7.00(m,1H),6.99–6.88(m,2H),6.80(dd,J＝16.8,10.7Hz,1H),6.32(dd,J＝16.7,4.3Hz,1H),5.90–5.82(m,1H),5.07–5.00(m,1H),5.00–4.91(m,1H),4.77–4.69(m,1H),4.69–4.59(m,1H),4.43–4.35(m,1H),4.01–3.92(m,1H),3.85–3.70(m,2H),3.53–3.45(m,1H),2.84–2.75(m,1H),2.66–2.50(m,2H),2.20–2.09(m,1H),1.62(dd,J＝15.3,6.6Hz,3H),1.46(dd,J＝18.8,6.8Hz,3H),1.38(d,J＝5.6Hz,3H),1.18(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例114：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,20-二氟- 6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7, 9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(3-氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙 基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-114a-1)
将含有(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-39c-1，0.10g，0.14mmol)、三氟(3-氟-2-羟基苯基)硼酸钾(Int-27，40.0mg，0.180mmol)、乙酸钾(56mg，0.57mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(12.0mg，0.014mmol)的烧瓶用氮气脱气，并然后添加二噁烷(0.60mL)及水(0.10mL)。繼续对混合物脱气且随后将混合物加热至90℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温且用水与碳酸氢钠饱和水溶液(10mL)的1:1混合物淬灭。用乙酸乙酯(2×25mL)萃取混合物，且然后将合并的有机层用盐水洗涤并在减压下浓缩。向所得残留物中添加THF(10mL)，然后添加TBAF(1.0M于THF中，0.35mL，0.35mmol)。搅拌混合物1.5小时。然后用氯化铵饱和水溶液淬灭反应物且用乙酸乙酯洗涤混合物。分离有机层且然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且然后在减压下浓缩。随后通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(3-氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-114a-1)。1H NMR(500MHz,乙腈-d3)：δ11.76(s,1H),8.62(d,J＝5.6Hz,1H),8.13(d,J＝12.5Hz,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(dd,J＝10.0,8.2Hz,1H),7.05(d,J＝5.7Hz,1H),6.93(td,J＝8.2,5.2Hz,1H),4.86–4.73(m,1H),4.54–4.45(m,1H),4.44–4.34(m,1H),4.26(d,J＝13.7Hz,1H),4.21–4.14(m,1H),4.02–3.94(m,1H),3.86–3.74(m,2H),3.60–3.53(m,1H),3.53–3.45(m,1H),3.04–2.93(m,1H),2.80(t,J＝6.1Hz,1H),1.50(s,9H),1.48(s,3H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,3H),1.07(d,J＝6.7Hz,3H)。
步骤B：Int-114b-1
将含有(2R,5S)-4-(6-氟-7-(3-氟-2-羟基苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-114a-1，50.0mg，0.075mmol)的烧瓶抽空且用氮气气球回填三次。将二氯甲烷(4.0mL)及三丁基膦(46μL，0.19mmol)添加至反应容器中。将二氮烯-1,2-二基双(哌啶-1-基甲酮)(38mg，0.15mmol)添加至反应容器中且搅拌混合物3小时。在3小时之后，在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物。合并含有产物的馏分，在减压下浓缩且随后通过RP-HPLC(15-100％乙腈于水中的梯度+0.1％TFA改性剂)进一步纯化。合并含有产物的馏分且在减压下浓缩，得到Int-114b-1。MS(ESI)：m/z 649[M+H]+。
步骤C：Int-114c-1
向含有Int-114b-1的烧瓶中添加二氯甲烷(0.40mL)及TFA(0.30mL，3.9mmol)。在室温下搅拌混合物1小时。然后在减压下浓缩混合物。所得残留物未经进一步纯化即用于后续反应中。MS(ESI)：m/z 549[M+H]+。
步骤D：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,20-二氟-6- (丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9] 苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例114)
将含有粗Int-114c-1及二氯甲烷(0.25mL)的烧瓶冷却至0℃。向反应容器中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(40μL，0.23mmol)及丙烯酰氯(5.50μL，0.067mmol)。在0℃下搅拌反应混合物一小时。然后用碳酸氢铵饱和水溶液(2.0mL)淬灭产物混合物。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取所得混合物。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,20-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例114)。MS(ESI)：m/z 603[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ8.41(d,J＝5.7Hz,1H),8.08(dd,J＝17.5,9.2Hz,1H),7.51–7.39(m,1H),7.30–7.20(m,2H),7.15(d,J＝5.8Hz,1H),6.94–6.76(m,1H),6.23–6.16(m,1H),5.80–5.73(m,1H),4.81–4.75(m,1H),4.60–4.48(m,2H),4.37–4.30(m,1H),4.21(d,J＝13.5Hz,1H),4.05–3.97(m,1H),3.89–3.82(m,1H),3.69–3.62(m,1H),3.62–3.53(m,1H),3.27–3.18(m,1H),3.01–2.91(m,1H),1.49–1.42(m,3H),1.38–1.30(m,3H),1.20–1.14(m,3H),0.96–0.90(m,3H)。
实施例115：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20-二氟- 6-(丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二 氮杂环十二烯-4(13H)-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2, 5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-115a-1)
向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-45-1，0.77g，1.1mmol)、乙酸钾(0.55mg，5.6mmol)及1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(91mg，0.11mmol)于1,4-二噁烷(18mL)、水(2.0mL)中的混合物中添加(2-氟-6-甲酰基苯基)二羟硼酸(0.38g，2.2mmol)。在氮气气氛下将混合物加热至90℃，持续30min，冷却至室温且然后用乙酸乙酯(35mL)稀释。将混合物用盐水(2×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-115a-1)。MS(ESI)：m/z 777[M+H]+。
步骤B：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙 基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(Int-115b-1)
在0℃下向(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-115a-1，0.40g，0.52mmol)于THF(6.0mL)中的混合物中添加氟化四丁铵(1.0M于THF中，1.0mL，1.0mmol)。使混合物升温至室温且然后在室温下搅拌1小时。在1小时之后，将混合物用盐水(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(40mL)萃取。将有机层用盐水(2×8mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过反相MPLC(C18，20-35um，梯度洗脱0-34％MeCN/水+0.5％三氟乙酸改性剂)纯化所得混合物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-氟-6-甲酰基苯基)-1-(4-(2-羟基乙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯Int-115b-1。MS(ESI)：m/z663[M+H]+。1H NMR(400MHz,氯form-d)δ9.82(s,1H),8.89(br d,J＝5.9Hz,1H),7.92(br d,J＝8.2Hz,1H),7.79–7.63(m,3H),7.51–7.37(m,1H),5.00(br s,1H),4.73–4.39(m,1H),4.39–4.15(m,1H),3.95(br s,2H),3.86–3.78(m,3H),3.49(br d,J＝12.5Hz,1H),2.89(brs,1H),2.73(br d,J＝18.4Hz,2H),1.52(s,12H),1.44–1.38(m,3H),1.32(br d,J＝5.9Hz,3H),1.22–1.13(m,3H)。
步骤C：Int-115c-1
在氮气气氛下向Int-115b-1(0.10g，0.15mmol)于CH3NO2(12mL)中的混合物中添加三氟甲磺酸(0.20mL，2.3mmol)及三乙基硅烷(0.24mL，1.5mmol)。使混合物在室温下搅拌30min。在减压下浓缩混合物，得到Int-115c-1，其未经进一步纯化即使用。Int-115c-1。MS(ESI)：m/z 547[M+H]+。
步骤D：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20-二氟-6- (丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮 杂环十二烯-4(13H)-酮(实施例115)
在室温下向Int-115c-1(80mg，0.15mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(77μL，0.44mmol)及丙烯酰氯(24μL，0.29mmol)。搅拌混合物5分钟且然后在减压下浓缩。通过制备型TLC(7％甲醇/DCM)纯化所得残留物。随后通过SFC(柱O，条件：45％(0.1％氢氧化铵/乙醇)纯化来自制备型TLC的顶点，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17,20-二氟-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][9,2,4]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4(13H)-酮(实施例115)：MS(ESI)：m/z 601[M+H]+：1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.40(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(dd,J＝6.6,8.9Hz,1H),7.46(d,J＝5.3Hz,1H),7.38(dt,J＝5.8,7.9Hz,1H),7.18–7.07(m,2H),6.81–6.66(m,1H),6.20(ddd,J＝1.8,10.4,16.7Hz,1H),5.77–5.68(m,1H),5.10(br s,1H),4.41–4.34(m,1H),4.21–4.03(m,3H),3.94–3.80(m,2H),3.73–3.68(m,1H),3.65–3.58(m,1H),3.12(q,J＝7.2Hz,1H),2.86(td,J＝6.8,13.5Hz,1H),2.48–2.37(m,2H),1.36–1.29(m,3H),1.27(d,J＝6.6Hz,3H),1.16–1.11(m,3H),0.89(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例116：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6- (丙-2-基)-14-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g] [1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
步骤A：(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4- 基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116a)
将含有1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(23mg，0.028mmol)、三氟(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)硼酸钾(Int-30，76mg，0.28mmol)、乙酸钾(83mg，0.85mmol)及(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-39c，0.20g，0.28mmol)的烧瓶密封于套管中且用氮气吹扫。添加二噁烷(1.8mL)及水(0.36mL)，且在表面下用氮气对混合物充气10分钟。将混合物加热至100℃，持续18小时。在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116a-1)。MS(ESI)m/z：831[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.62(d,J＝5.9Hz,1H),8.41–8.32(m,2H),7.70(d,J＝7.1Hz,1H),7.22(d,J＝5.9Hz,1H),7.10(t,J＝7.9Hz,1H),4.99–4.93(m,1H),4.57–4.40(m,2H),4.18–4.13(m,2H),3.95–3.86(m,2H),3.77–3.73(m,2H),3.05–2.93(m,1H),1.36(d,J＝6.6Hz,3H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),1.23–1.20(m,9H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),0.69(s,9H),-0.15(s,3H),-0.16(s,3H)。
步骤B：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧 基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-116b-1)
向含有含(2R,5S)-4-(1-(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116a-1，151mg，0.182mmol)的THF(2.0ml)的烧瓶中添加氟化四丁铵(1.0M于THF中，0.55mL，0.55mmol)。在室温下搅拌反应混合物30min。然后在减压下浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)于己烷中的梯度)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116b-1)。MS(ESI)m/z：717[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-碘乙氧基)- 2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-116c-1)
向含有含(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-羟基乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116b-1，50mg，0.070)的二氯甲烷(0.70mL)的烧瓶中添加碘化甲基三苯氧基膦(35mg，0.077mmol)，且使混合物在室温下搅拌2h。然后在减压下浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱法(0-100％(3:1乙酸乙酯:乙醇)/己烷)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-碘乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116c-1)。MS(ESI)m/z：827[M+H]+。
步骤D：(Int-116d-1)
向含有含(2R,5S)-4-(6-氟-7-(2-羟基-3-(三氟甲基)苯基)-1-(4-(2-碘乙氧基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-116c-1，25mg，0.030mmol)的DMF(1.5mL)的烧瓶中添加碳酸钾(21mg，0.15mmol)。将混合物加热至70℃，持续18小时。在18小时之后，使混合物冷却至室温。过滤反应混合物且通过RP-HPLC(C-18柱，乙腈/水+0.1％TFA)纯化滤液。在减压下浓缩含有产物的馏分，得到Int-116d-1。MS(ESI)m/z：699[M+H]+。
步骤E：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6-(丙-2- 基)-14-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7, 9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例116)
向含有含Int-116d-1(5.3mg，7.6μmol)的氯彷(2.0mL)的烧瓶中添加TFA(5.0μL，65μmol)，且在室温下搅拌混合物18小时。在减压下浓缩混合物。向所得残留物中添加DMSO(2.0mL)，随后添加吡啶(20μL，0.25mmol)及丙烯酸酐(50μL，0.43mmol)。使混合物搅拌2小时。随后过滤混合物且通过RP-HPLC(C-18，乙腈/水+0.1％TFA)纯化滤液，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-20-氟-6-(丙-2-基)-14-(三氟甲基)-11,12-二氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例116)。MS(ESI)m/z：653[M+H]+。1H NMR(600MHz,甲醇-d4)δ8.70(d,J＝5.5Hz,1H),8.25(dd,J＝23.8,8.7Hz,1H),7.97(d,J＝6.4Hz,1H),7.95–7.92(m,1H),7.82(d,J＝7.2Hz,1H),7.45(t,J＝6.8Hz,1H),6.98–6.72(m,1H),6.39–6.25(m,1H),5.86(t,J＝11.3Hz,1H),5.39(t,J＝11.6Hz,1H),4.44(d,J＝13.7Hz,1H),4.35(d,J＝13.3Hz,1H),4.05(d,J＝10.7Hz,1H),3.97(d,J＝14.1Hz,1H),3.80(d,J＝13.1Hz,1H),3.59–3.52(m,1H),3.48(bs,1H),3.38–3.34(m,1H),1.69–1.58(m,3H),1.54–1.41(m,6H),1.25(s,3H)。
实施例117：22-氟-9-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-13-(丙-2- 基)-18,19-二氢-11H,17H-6,8-乙烯桥吡啶并[4',3':11,12]嘧啶并[1',6':1,2][1,3,7] 三氮杂环十二烯并[5,6,7-hi]吲唑-11-酮
步骤A：(S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪- 1-甲酸叔丁酯(Int-117a-1)
在氮气气氛下，于25℃向(S)-叔丁基-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-氯-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(0.30g，0.44mmol)于1,4-二噁烷(6.0mL)及水(1.0mL)中的混合物中添加7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(159mg，0.653mmol)、乙酸钾(Int-43-1，171mg，1.74mmol)及[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的复合物(36mg，0.044mmol)。将混合物加热至90℃，持续30min。使混合物冷却至rt且用水(10mL)淬灭。用乙酸乙酯(2×50mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩混合物。通过硅胶柱色谱法(0-100％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化残留物，得到(S)-叔丁基-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(Int-117a-1)。MS(ESI)：m/z 772[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.80(d,J＝5.1Hz,1H),8.44(d,J＝7.4Hz,1H),8.36(dd,J＝16.0,12.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.98(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(dd,J＝5.1,2.0Hz,1H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),5.14–4.94(m,1H),4.53–4.33(m,1H),4.20–4.09(m,1H),4.01(br d,J＝13.3Hz,1H),3.92–3.71(m,1H),3.55–3.40(m,3H),3.30–3.15(m,1H),2.95–2.80(m,1H),2.62–2.47(m,2H),1.75(br dd,J＝13.5,7.2Hz,1H),1.69–1.59(m,1H),1.55-1.49(m,12H),1.25–1.19(m,3H),0.89(dd,J＝6.7,5.1Hz,3H),0.65(s,9H),-0.17(s,3H),-0.22(d,J＝0.8Hz,3H)。
步骤B：(S)-4-(6-氟-1-(2-(3-羟基丙基)-6-异丙基苯基)-7-(1H-吲唑-7-基)-2- 氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-117b-1)
向(S)-4-(1-(2-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-6-异丙基苯基)-6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int117a-1，280mg，0.364mmol)于THF(5.0mL)中的混合物中添加TBAF(1.0M于THF中，0.73mL，0.73mmol)，且在氮气气氛下于室温搅拌混合物1h。在1h之后，在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-100％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到(S)-叔丁基-4-(6-氟-1-(2-(3-羟基丙基)-6-异丙基苯基)-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(Int-117b-1)。MS(ESI)：m/z 657[M+H]+。1HNMR(Methanol-d4)δ：8.78(d,J＝5.1Hz,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.33(dd,J＝12.5,8.3Hz,1H),8.02(s,1H),7.95(d,J＝8.1Hz,1H),7.56(d,J＝4.2Hz,1H),7.29(t,J＝7.7Hz,1H),5.02(br d,J＝16.9Hz,1H),4.50–4.32(m,1H),4.12(br d,J＝15.2Hz,1H),3.99(brd,J＝13.4Hz,1H),3.80(br d,J＝12.2Hz,1H),3.48–3.31(m,4H),2.87–2.70(m,1H),2.62–2.42(m,2H),1.83–1.71(m,1H),1.67–1.57(m,1H),1.55–1.46(m,12H),1.24–1.19(m,3H),0.90–0.80(m,3H)。
步骤C：(S)-4-(6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-1-(4-(3-碘丙基)-2-异丙基吡啶-3- 基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-117c- 1)
在氮气气氛下，于室温向(S)-叔丁基-4-(6-氟-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(1H-吲唑-7-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(0.11g，0.17mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的混合物中添加三苯膦(132mg，0.502mmol)、I2(170mg，0.670mmol)及1H-咪唑(46mg，0.67mmol)。5h之后，在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-10％甲醇于二氯甲烷中的梯度)纯化所得残留物，得到(S)-叔丁基-4-(6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-1-(4-(3-碘丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(Int-117c-1)。MS(ESI)：m/z 768[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ：8.81(d,J＝5.1Hz,1H),8.44(d,J＝7.8Hz,1H),8.36(dd,J＝12.5,9.8Hz,1H),8.04(s,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝5.1Hz,1H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),5.14–4.96(m,1H),4.54–4.37(m,1H),4.20–4.11(m,1H),4.50–3.95(m,1H),3.93–3.70(m,1H),3.34(s,2H),3.19–3.09(m,1H),3.08–2.95(m,1H),2.86(br dd,J＝16.8,6.7Hz,1H),2.67–2.54(m,2H),2.01–1.93(m,1H),1.92–1.78(m,1H),1.57–1.50(m,12H),1.24-1.22(m,3H),0.89(dd,J＝6.7,4.7Hz,3H)。
步骤D：Int-117d-1
在氮气气氛下，于室温向(S)-叔丁基-4-(6-氟-7-(1H-吲唑-7-基)-1-(4-(3-碘丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(Int-117c-1，0.25mg，0.26mmol)于DMF(4.0mL)中的混合物中添加碳酸钾(0.11g，0.78mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续5小时。在5小时之后，使混合物冷却至室温且通过制备型TLC(100％乙酸乙酯)纯化所得残留物，得到Int-117d。MS(ESI)：m/z 639[M+H]+。
步骤E：Int-117e-1
在氮气气氛下，于25℃将Int-117d-1(0.15g，0.19mmol)于二氯甲烷(2.0mL)及TFA(0.40mL)中的混合物搅拌10min。然后在减压下浓缩混合物且通过制备型HPLC(PhenomenexLuna C18，75mm×30mm，3μm；15-45％乙腈/水+0.1％TFA)纯化残留物，得到Int-117e-1。MS(ESI)：m/z 539[M+H]+。
步骤F：22-氟-9-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-13-(丙-2-基)-18, 19-二氢-11H,17H-6,8-乙烯桥吡啶并[4',3':11,12]嘧啶并[1',6':1,2][1,3,7]三氮杂环 十二烯并[5,6,7-hi]吲唑-11-酮
(实施例117)
在0℃下向Int-117e-1(80mg，0.12mmol)于二氯甲烷(1.0mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(62μL，0.36mmol)及丙烯酰氯(29μL，0.36mmol)。使混合物升温至室温，且随后在室温下搅拌10分钟。在减压下浓缩混合物且通过制备型HPLC(Agela DuraShellC18，150mm×25mm，5μm；29至59％水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)/乙腈25mL/min)纯化残留物，得到外消旋物质，该外消旋物质通过制备型SFC柱D，条件：50％水(0.1％NH3H2O)/异丙醇)进一步纯化，得到22-氟-9-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-13-(丙-2-基)-18,19-二氢-11H,17H-6,8-乙烯桥吡啶并[4',3':11,12]嘧啶并[1',6':1,2][1,3,7]三氮杂环十二烯并[5,6,7-hi]吲唑-11-酮(实施例117)。MS(ESI)：m/z 593[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.40–8.27(m,2H),8.11(s,1H),7.86(d,J＝7.4Hz,1H),7.44(d,J＝7.4Hz,1H),7.29–7.18(m,2H),6.97–6.74(m,1H),6.32(br d,J＝16.0Hz,1H),5.85(br d,J＝10.6Hz,1H),4.97(br s,1H),4.74–4.38(m,2H),4.28–4.02(m,2H),3.84–3.68(m,2H),3.50–3.34(m,2H),2.92(quin,J＝6.7Hz,1H),2.84–2.72(m,1H),2.46–2.20(m,2H),2.14(br d,J＝14.5Hz,1H),1.58(br dd,J＝6.7,13.3Hz,3H),1.22(d,J＝7.0Hz,3H),0.90(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例118：17,20-二氟-12-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1- 基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-E]嘧啶并[6,1-C][2, 4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-2)及17,20-二氟-11-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4- (丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3, 4-E]嘧啶并[6,1-C][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-1)
步骤A：7-氯-6-氟-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H, 3H)-二酮(Int-118a)
向7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲氧基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-20e，4.95g，13.6mmol)于乙腈(60mL)中的混合物中添加碘化钾(4.51g，27.1mmol)及氯三甲基硅烷(2.95g，27.1mmol)。将所得混合物加热至80℃，持续10小时。在10小时之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。添加水(10mL)且过滤所形成的固体并收集，得到7-氯-6-氟-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-118a)。MS(ESI)：m/z 351[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.35(d,J＝7.4Hz,1H),8.20(d,J＝7.0Hz,1H),6.92(d,J＝7.0Hz,1H),3.25–3.12(m,1H),1.33–1.19(m,6H)。
步骤B：4,7-二氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2 (1H)-酮(Int-118b)
在氮气气氛下，于室温下向7-氯-6-氟-1-(4-羟基-2-异丙基吡啶-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(6.0g，17mmol)于MeCN(80mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(8.9mL，51mmol)及POCl3(9.6mL，0.10mol)。随后将混合物加热至80℃，持续1小时。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩，得到粗4,7-二氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(Int-118b)，其未经进一步纯化即使用。MS(ESI)：m/z 387[M+H]+。
步骤C：(S)-4-(7-氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶 并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118c)
向4,7-二氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(6.63g，17.1mmol)于乙腈(80mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(8.9mL,51mmol)及(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.85g，34.2mmol)。将混合物加热至80℃，持续10min。在10分钟之后，使混合物冷却至室温且随后在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-33％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到(S)-4-(7-氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118c)。MS(ESI)：m/z 551[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.60(d,J＝5.1Hz,1H),7.78(dd,J＝7.4,2.0Hz,1H),7.35(dd,J＝5.3,1.0Hz,1H),4.84(br s,1H),4.27(br s,1H),4.11–3.88(m,2H),3.64(br s,1H),3.16(br s,2H),2.77(br dd,J＝14.7,7.2Hz,1H),1.51(s,9H),1.46(s,3H),1.25(dd,J＝6.7,3.9Hz,3H),1.15(t,J＝6.5Hz,3H)。
步骤D：(3S)-4-(1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧 代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118d)
在氮气气氛下，于室温向(S)-4-(7-氯-1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0g，3.6mmol)于1,4-二噁烷(20mL)及水(2.0mL)中的混合物中添加乙酸钾(1.78g，18.1mmol)、(2-氯-6-氟苯基)二羟硼酸(1.9g，11mmol)及1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷复合物(0.30g，0.36mmol)。将混合物加热至90℃，持续12小时。在12小时之后，使混合物冷却至室温，且然后用盐水(10mL)淬灭。用乙酸乙酯(2×50mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得残留物，得到(3S)-4-(1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118d)。MS(ESI)：m/z 645[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.50(d,J＝5.5Hz,1H),7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.40–7.31(m,1H),7.28(br d,J＝5.5Hz,1H),7.23(d,J＝8.2Hz,1H),7.05(t,J＝8.8Hz,1H),4.87(br s,1H),4.52–3.94(m,3H),3.66(br s,1H),3.29(br s,2H),2.91(br s,1H),1.56–1.44(m,12H),1.30–1.24(m,3H),1.16–0.97(m,3H)。
步骤E：(3S)-4-(1-(4-烯丙基-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-烯丙基-6-氟苯基)-6- 氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118e)
在手套工作箱中，在氮气气氛下于室温向(3S)-4-(1-(4-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-氯-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.30g，0.46mmol)于DMF(5.0mL)中的混合物中添加烯丙基三氟硼酸钾(0.20g，1.4mmol)、Cs2CO3水溶液(3.0M，0.46mL，1.4mmol)及(2'-氨基-[1,1'-联苯]-2-基)(二环己基(2',6'-二异丙氧基-[1,1'-联苯]-2-基)磷烷基)氯化钯(III)(35mg，0.046mmol)。随后将混合物加热至80℃，持续12小时。12小时之后，使混合物冷却至室温且然后用水(30mL)淬灭。随后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化所得混合物，得到(3S)-4-(1-(4-烯丙基-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-烯丙基-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-118e)。MS(ESI)：m/z 657[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ8.54(br d,J＝4.3Hz,1H),7.82(br d,J＝8.6Hz,1H),7.38–7.29(m,1H),7.50–7.06(m,1H),7.04–6.94(m,2H),5.72(br s,1H),5.45(br s,1H),5.02–4.80(m,4H),4.46–4.20(m,2H),4.05–3.90(m,1H),3.68(br s,1H),3.21(br d,J＝14.9Hz,1H),3.16–2.89(m,4H),2.86–2.55(m,1H),1.51(s,12H),1.22–1.15(m,3H),1.14–1.04(m,2H),0.97–0.79(m,3H)。
步骤F：Int-118f
将以下反应物各分成10批50mg。在N2气氛下，于25℃向(3S)-4-(1-(4-烯丙基-2-异丙基吡啶-3-基)-7-(2-烯丙基-6-氟苯基)-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.50g，0.61mmol)于DCM(24mL)中的混合物中添加格拉布氏II催化剂(103mg，0.122mmol)。在25℃下搅拌混合物12小时。然后在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(0-50％乙酸乙酯于石油醚中的梯度)纯化混合物，得到Int-118f。MS(ESI)：m/z 629[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.72–8.57(m,1H),8.37–8.23(m,1H),8.00–7.82(m,1H),7.49–7.35(m,1H),7.25–7.01(m,2H),5.32–4.90(m,2H),4.63–4.21(m,1H),4.14(br d,J＝10.6Hz,1H),4.01–3.65(m,2H),3.50–3.31(m,6H),3.19–2.92(m,2H),1.59–1.44(m,12H),1.40–1.30(m,3H),1.22–1.09(m,3H)。
步骤G：Int-118g
在0℃下向Int-118f(0.50g，0.80mmol)于THF(8.0mL)中的混合物中添加BH3·DMS(10M于THF中，0.15mL，1.5mmol)。使混合物升温至室温且然后搅拌1小时。添加水(0.5mL)，并然后添加过硼酸钠四水合物(367mg，2.39mmol)，且使混合物在室温下搅拌1小时。随后用Na2SO3饱和水溶液(1.0mL)及水(5.0mL)淬灭混合物。用EtOAc(2×50mL)萃取混合物。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(0-10％甲醇于二氯甲烷中的梯度)纯化所得残留物，得到Int-118g。MS(ESI)：m/z 647[M+H]+。
步骤H：Int-118h
在氮气气氛下，于25℃向Int-118g(0.500g，0.387mmol)于DCM(6.0mL)中的混合物中添加TFA(2.0mL，26mmol)。在室温下搅拌混合物10min。随后在减压下浓缩混合物，得到Int-118h，其未经进一步纯化或表征即使用。MS(ESI)：m/z 547[M+H]+。
步骤I：17,20-二氟-11-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6- (丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4]苯并 二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-1)及17,20-二氟-12-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2- 烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧 啶并[6,1-c][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-2)
在0℃下向Int-118h(0.30g，0.27mmol)于DCM(1.5mL)中的混合物中添加DIEA(0.14mL，0.82mmol)及丙烯酰氯(67μL，0.82mmol)。使混合物升温至室温且然后搅拌10分钟。然后在减压下浓缩混合物且通过制备型TLC板(8％甲醇/DCM，两次)纯化所得残留物。然后通过SFC柱L，条件：0.1％NH3H2O IPA纯化经分离的混合物，得到3个峰。第二洗脱峰对应于17,20-二氟-12-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-1)。通过制备型SFC柱J，条件：0.1％NH3H2O ETOH进一步纯化第一洗脱峰(6种异构体的混合物)，得到4个峰。通过SFC柱N，条件：0.1％NH3H2O MEOH进一步纯化第三洗脱峰(3种异构体的混合物)。第二洗脱异构体对应于17,20-二氟-11-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-2)。
17,20-二氟-12-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-1)的表征资料：1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.48(d,J＝5.1Hz,1H),8.34(br d,J＝9.4Hz,1H),7.51(d,J＝5.5Hz,1H),7.46–7.35(m,1H),7.35–7.28(m,1H),7.06(t,J＝8.6Hz,1H),6.82(br d,J＝11.3Hz,1H),6.32(br d,J＝15.3Hz,1H),5.84(dd,J＝2.0,10.6Hz,1H),5.43–5.20(m,1H),4.58(s,1H),4.46–4.34(m,1H),4.29–4.06(m,1H),4.01(br s,1H),3.53–3.34(m,2H),2.85(br s,1H),2.65(br s,1H),2.35(br d,J＝19.2Hz,4H),1.86(br s,2H),1.39(br d,J＝6.3Hz,3H),1.23(d,J＝6.7Hz,3H),0.93(brd,J＝6.7Hz,3H)。MS(ESI)：m/z 601[M+H]+。
17,20-二氟-11-羟基-2-[(2S)-2-甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,18-乙烯桥吡啶并[3,4-e]嘧啶并[6,1-c][2,4]苯并二氮杂环十二烯-4-酮(实施例118-2)的表征资料：1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.40(d,J＝5.5Hz,1H),8.35(br d,J＝9.0Hz,1H),7.98(d,J＝5.1Hz,1H),7.44–7.35(m,1H),7.12(br d,J＝7.8Hz,1H),7.02(t,J＝9.0Hz,1H),6.93–6.76(m,1H),6.32(br d,J＝16.4Hz,1H),5.84(dd,J＝2.0,10.6Hz,1H),5.27(br s,1H),4.58(br s,1H),4.39(br d,J＝13.7Hz,1H),4.29–4.07(m,1H),3.99(br s,1H),3.84–3.67(m,2H),3.52–3.39(m,1H),2.91–2.68(m,3H),2.58(br s,1H),1.69(br d,J＝10.2Hz,3H),1.40(d,J＝6.7Hz,3H),1.21(d,J＝7.0Hz,3H),0.93(br d,J＝5.9Hz,3H)。MS(ESI)：m/z 601[M+H]+。
实施例119：19-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-16- 氟-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-4H-1,17-乙烯桥吡啶并[4,3-D]嘧啶并[1,6-F][1,6,8]苯并 氧杂二氮杂环十一烯-4-酮
步骤A：2,5-二氯-6-(2-氟-6-羟基苯基)烟碱腈(Int-119a)
在N2气氛下，于室温向2,5,6-三氯烟碱腈(4.00g，19.3mmol)于1,4-二噁烷(40mL)及水(8.0mL)中的混合物中添加乙酸钾(3.78g，38.6mmol)及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(1.41g，1.93mmol)。在N2气氛下将混合物加热至90℃，持续5min。随后将1,4-二噁烷(24mL)及水(8.0mL)中的三氟(2-氟-6-羟基苯基)硼酸钾(4.62g，21.2mmol)添加至混合物中，且在N2气氛下，于90℃搅拌混合物2h。在冷却至室温后，在减压下浓缩混合物。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化残留物，得到2,5-二氯-6-(2-氟-6-羟基苯基)烟碱腈(Int-119a)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.51(s,1H),7.32(dt,J＝6.8,8.3Hz,1H),6.77-6.66(m,2H)。
步骤B：6-(2-(2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙氧基)-6-氟苯基)-2,5-二氯烟 碱腈(Int-119b)
在0℃下向2,5-二氯-6-(2-氟-6-羟基苯基)烟碱腈(2.40g，8.48mmol)、2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙醇(1.99g，11.0mmol)及三苯膦(4.45g，17.0mmol)于THF(25mL)中的混合物中添加DBAD(3.90g，17.0mmol)于THF(15mL)中的溶液。使混合物升温至25℃且然后在N2气氛下，于25℃搅拌1h。随后在减压下浓缩反应物。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化所得残留物，得到6-(2-(2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙氧基)-6-氟苯基)-2,5-二氯烟碱腈(Int-119b)。MS(ESI)：m/z 445[M+H]+。
步骤C：Int-119c
在手套工作箱向6-(2-(2-(3-氨基-2-异丙基吡啶-4-基)乙氧基)-6-氟苯基)-2,5-二氯烟碱腈(500mg，1.12mmol)于1,4-二噁烷(40mL)中的经搅拌混合物中添加K3PO4(357mg，1.68mmol)及甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(SPhos Pd G3、88mg，0.11mmol)。在N2气氛下将混合物加热至90℃，持续2h。在2h之后，使混合物冷却至室温，过滤且在减压下浓缩滤液。通过硅胶柱色谱法(石油醚/EtOAc＝2/1)纯化所得残留物，得到Int-119c。MS(ESI)：m/z 409[M+H]+。
步骤D：Int-119d
向Int-119c(520mg，1.27mmol)于DMSO(10mL)中的经搅拌混合物中添加K2CO3(88mg，0.64mmol)。在20℃下搅拌混合物10min。在20℃下将H2O2(30％于水中，0.111mL，1.27mmol)逐滴添加至混合物中。在1h之后，用Na2SO3饱和水溶液(2.0mL)淬灭反应混合物。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物且用盐水(3×5mL)及水(3×5mL)洗涤混合物。合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过快速硅胶色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化残留物，得到Int-119d。MS(ESI)：m/z 427[M+H]+。
步骤E：Int-119e
在20℃下向Int-119d(150mg，0.351mmol)于THF(3.0mL)中的经搅拌混合物中添加KHMDS(1.0M于THF中，1.05mL，1.05mmol)。在20℃下搅拌10min之后，添加CDI(63mg，0.39mmol)。在氮气气氛下将所得混合物加热至70℃，持续1h。在1h之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。通过制备型TLC板(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/1)纯化所得残留物，得到Int-119e。MS(ESI)：m/z 453[M+H]+。
步骤F：Int-119f
向Int-119e(60mg，0.13mmol)于乙腈(2.0mL)中的经搅拌混合物中添加DIEA(93μL，0.53mmol)及POCl3(25μL，0.27mmol)，且将混合物加热至80℃，持续0.5h。在0.5h之后，使混合物冷却至室温。在减压下浓缩反应混合物，得到Int-119f，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z 471[M+H]+。
步骤G：Int-119g
在氮气气氛下，于20℃向Int-119f(63mg，0.13mmol)于乙腈(2.0mL)中的经搅拌混合物中添加DIEA(69μL，0.40mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(37mg，0.17mmol)。5min之后，在减压下浓缩混合物且通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH＝20/1)纯化所得残留物，得到Int-119g。MS(ESI)：m/z 649[M+H]+。
步骤H：Int-119h
在25℃下搅拌Int-119g(55mg，0.085mmol)于DCM(2.0mL)及TFA(0.75mL)中的经搅拌混合物0.5h。随后在减压下浓缩反应混合物，得到Int-119h，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z 549[M+H]+。
步骤I：19-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-16-氟-6- (丙-2-基)-10,11-二氢-4H-1,17-乙烯桥吡啶并[4,3-d]嘧啶并[1,6-f][1,6,8]苯并氧杂 二氮杂环十一烯-4-酮(实施例119)
在0℃下向Int-119h(46mg，0.085mmol)于DCM(2.0mL)中的经搅拌混合物中添加DIEA(44μL，0.25mmol)及丙烯酰氯(21μL，0.25mmol)。使混合物升温至25℃且然后在25℃下搅拌10min。随后在减压下浓缩反应混合物且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18150mm×25mm，5um；条件：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化所得残留物。合并含有产物的馏分且在减压下浓缩。通过制备型SFC(柱D；条件：0.1％NH3H2O-IPA；40％改性剂；流速(mL/min)：80)分离阻转异构体。第一洗脱异构体对应于19-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-16-氟-6-(丙-2-基)-10,11-二氢-4H-1,17-乙烯桥吡啶并[4,3-d]嘧啶并[1,6-f][1,6,8]苯并氧杂二氮杂环十一烯-4-酮(实施例119)。MS(ESI)：m/z603[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.33(d,J＝5.2Hz,1H),8.22(d,J＝17.2Hz,1H),7.38-7.26(m,1H),7.13(d,J＝5.2Hz,1H),6.87(d,J＝8.2Hz,1H),6.83-6.62(m,2H),6.30-6.16(m,1H),5.85-5.64(m,1H),4.98-4.78(m,3H),4.56-4.28(m,1H),3.99(br dd,J＝9.2,7.2Hz,1H),3.86-3.50(m,2H),3.27-3.21(m,1H),2.94(dtd,J＝13.4,6.7,2.9Hz,1H),2.85(br dd,J＝14.4,7.4Hz,1H),2.26(dd,J＝15.3,6.4Hz,1H),1.51(br t,J＝7.7Hz,3H),1.37(br dd,J＝18.3,6.7Hz,3H),1.17(d,J＝6.7Hz,3H),0.91(dd,J＝6.7,3.5Hz,3H)。
实施例120：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟- 20-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-E]嘧啶并[1,6-G] [1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮
/>
步骤A：N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲 酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-120a)
在室温20℃下向2,5,6-三氯烟碱酰胺(22g，98mmol)于THF(150mL)中的经搅拌混合物中添加乙二酰氯(12.8mL，146mmol)。在N2气氛下将混合物加热至60℃，持续30min。在30分钟之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。将THF(150mL)添加至混合物中且随后添加4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-胺(30.1g，98.0mmol)。在25℃下搅拌混合物10min。随后将反应混合物用水(200mL)淬灭且用固体碳酸氢钠调节至pH约8。用乙酸乙酯(2×300mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过快速硅胶色谱法(0-35％EtOAc/石油醚梯度)纯化粗产物，得到N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(Int-120a)。MS(ESI)：m/z 559[M+H]+。
步骤B：1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7- 二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-120b-1)
在氮气气氛下，于0℃向N-((4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)氨甲酰基)-2,5,6-三氯烟碱酰胺(57.0g，102mmol)于THF(400mL)中的混合物中添加双(三甲基硅烷基)氨基钾(1.0M于THF中，204mL，204mmol)。使混合物升温至20℃且随后在20℃下搅拌30min。随后将反应混合物用氯化铵饱和水溶液(150mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×600mL)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液。通过快速硅胶色谱法(0-30％EtOAc/己烷)纯化粗产物。收集含有产物的馏分且在减压下浓缩。通过制备型SFC(柱V，条件0.1％NH3·H2O/EtOH，20％改性剂；流速(mL/min)：200)分离阻转异构体。洗脱的第一峰对应于1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(Int-120b-1)。MS(ESI)：m/z 523[M+H]+。
步骤C：(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(Int-120c-1)
向1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.29g，4.37mmol)于MeCN(10mL)中的混合物中添加DIEA(1.5mL，8.7mmol)及POCl3(490μL，5.25mmol)。将混合物加热至80℃，持续一小时。一小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。将所得混合物置于真空下15min。随后添加乙腈(10mL)且将混合物冷却至0℃。缓慢添加DIEA(3.0mL，18mmol)及(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.12g，5.25mmol)于乙腈(0.50mL)中的混合物。搅拌反应混合物30min。随后将混合物用冷水淬灭且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷+乙酸乙酯:乙醇的3:1混合物)纯化所得残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-120c-1)。MS(ESI)：m/z 719[M+H]+。
步骤D：(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡 啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-120d-1)
在室温下向(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6,7-二氯-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.417mmol)于1,4-二噁烷(3.0mL)及水(0.30mL)中的经搅拌混合物中添加(3,6-二氟-2-羟基苯基)三氟硼酸钾(150mg，0.636mmol)、乙酸钾(82mg，0.83mmol)及[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的复合物(34mg，0.042mmol)。在N2气氛下将混合物加热至90℃，持续15h。15h之后，使混合物冷却至室温。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭且用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下蒸发溶剂。通过快速硅胶色谱法(0-50％EtOAc/石油醚)纯化残留物，得到(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-120d-1)。MS(ESI)：m/z 813[M+H]+。
步骤E：(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异 丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔 丁酯(Int-120e-1)
在氮气气氛下，于0℃向(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(210mg，0.258mmol)于THF(2.0mL)中的经搅拌混合物中添加三氢氟化三乙胺(0.126mL，0.774mmol)。随后使混合物升温至20℃且在20℃下搅拌混合物15h。15h之后，将反应混合物用DCM(5.0mL)稀释，用碳酸氢钠饱和水溶液(4.0mL)淬灭且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液，得到(2R,5S)-4-(6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-1-(4-(3-羟基丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Int-120e-1)，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z699[M+H]+。
步骤F：Int-120f-1
向(2R,5S)-4-(1-(4-(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丙基)-2-异丙基吡啶-3-基)-6-氯-7-(3,6-二氟-2-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.14g，0.20mmol)于DCM(7.0mL)中的经搅拌混合物中添加三苯膦(263mg，1.00mmol)及DIAD(0.195mL，1.00mmol)。在N2气氛下将混合物加热至40℃，持续1h。在1小时之后，使混合物冷却至室温，且随后在减压下浓缩。通过快速反相硅胶色谱法(0-47％H2O/MeCN)纯化所得残留物，得到Int-120f-1。MS(ESI)：m/z 681[M+H]+。
步骤G：Int-120g-1
在氮气气氛下，于室温(20℃)向Int-120f-(50mg，0.073mmol)于环戊基甲基醚(2.5mL)及水(0.20mL)中的经搅拌混合物中添加甲基硼酸(13mg，0.22mmol)、Cs2CO3(48mg，0.15mmol)及氯[(二(1-金刚烷基)-正丁基膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(4.9mg，7.3μmol)。将混合物加热至90℃，持续15h。在15h之后，使混合物冷却至室温。将混合物用盐水(10mL)淬灭且用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩滤液，得到Int-120g-1，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z661[M+H]+。
步骤H：Int-120h-1
向Int-120g-1(48mg，0.073mmol)于DCM(1.0mL)中的混合物中添加TFA(2.0mL，26mmol)且在室温(20℃)下搅拌混合物30min。随后在减压下浓缩混合物，得到Int-120h-1且未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z 561[M+H]+。
步骤I：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-20- 甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7, 9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例120)
向Int-120h-1(38mg，0.068mmol)于DCM(2.0mL)中的混合物中添加DIPEA(12μL，0.068mmol)及丙烯酰氯(5.5μL，0.068mmol)。在室温(20℃)下搅拌混合物30min。过滤混合物且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm,5um；条件：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化滤液，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-20-甲基-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮(实施例120)。MS(ESI)：m/z615[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.47(d,J＝5.1Hz,1H),8.20(d,J＝12.1Hz,1H),7.33(d,J＝5.5Hz,1H),7.23(ddd,J＝11.3,9.2,5.3Hz,1H),6.96-6.73(m,2H),6.34-6.25(m,1H),5.86-5.78(m,1H),5.05(br s,1H),4.87-4.35(m,3H),3.95-3.71(m,1H),3.66(br d,J＝14.1Hz,1H),3.59-3.51(m,1H),3.34(s,1H),3.10-2.99(m,1H),2.52-2.43(m,1H),2.42-2.28(m,2H),2.25(s,3H),2.15-2.02(m,1H),1.61(br dd,J＝9.0,7.0Hz,3H),1.47(dd,J＝12.3,6.8Hz,3H),1.25(d,J＝6.7Hz,3H),1.03(dd,J＝6.7,3.9Hz,3H)。
实施例121：2-{(2R,5S)-4-[20-氯-14,17-二氟-4-氧代-6-(丙-2-基)-11,12-二 氢-4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-E]嘧啶并[1,6-G][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯- 2-基]-2,5-二甲基哌嗪-1-羰基}丙-2-烯腈
/>
步骤A：Int-121a
向Int-120f(330mg，0.484mmol)于CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中添加TFA(0.5mL，6.49mmol)，且在室温下搅拌混合物30min。真空浓缩混合物，得到Int-121a，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ESI)：m/z 581[M+H]+。
步骤B：Int-121b
在室温下向2-氰基乙酸(13.2mg，0.155mmol)于CH2Cl2(1mL)中的溶液中添加DIEA(0.108mL，0.620mmol)及HATU(118mg，0.310mmol)。在室温下搅拌混合物10min，此时向反应溶液中添加Int-121a(90mg，0.16mmol)，且在室温下搅拌混合物15h。将混合物用水(1mL)淬灭且用DCM(2×2mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，且在减压下蒸发溶剂，得到粗产物。通过反相制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 100mm×30mm，5um；条件：水(0.1％TFA)-MeCN)纯化粗产物，得到Int-121b。MS(ESI)：m/z648[M+H]+。
步骤C：2-{(2R,5S)-4-[20-氯-14,17-二氟-4-氧代-6-(丙-2-基)-11,12-二氢- 4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-2- 基]-2,5-二甲基哌嗪-1-羰基}丙-2-烯腈(实施例121)
向Int-121b(42mg，0.065mmol)于MeCN(0.5mL)中的经搅拌溶液中添加多聚甲醛(3.9mg，0.13mmol)，且随后在90℃下将其搅拌30min。随后添加含三氟甲烷磺酸镱(III)(4.0mg，6.5μmol)的MeCN(0.5mL)。在N2气氛下于90℃搅拌所得混合物16h。在未经处理的情况下，通过反相制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 100mm×30mm，5um；条件：水(0.1％TFA)-MeCN)纯化反应混合物，得到2-{(2R,5S)-4-[20-氯-14,17-二氟-4-氧代-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-乙烯桥吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-2-基]-2,5-二甲基哌嗪-1-羰基}丙-2-烯腈(实施例121)。MS(ESI)：m/z 660[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ8.73(d,J＝5.9Hz,1H),8.26(br d,J＝12.9Hz,1H),7.72(d,J＝5.9Hz,1H),7.31(ddd,J＝5.1,9.3,11.4Hz,1H),6.97(dt,J＝3.5,9.0Hz,1H),6.57–6.42(m,2H),4.83(br s,2H),4.66(br dd,J＝2.9,9.6Hz,1H),4.43(br s,1H),4.24–3.77(m,1H),3.70(br d,J＝13.3Hz,1H),3.56–3.49(m,1H),3.39(br s,2H),2.68–2.60(m,1H),2.56–2.45(m,1H),2.43–2.32(m,1H),2.22–2.12(m,1H),1.59(br d,J＝6.7Hz,3H),1.51–1.41(m,3H),1.34(d,J＝6.7Hz,3H),1.20–1.17(m,3H)。
实施例122：2-{(2S,5R)-4-[4-(二甲基氨基)丁-2-炔酰基]-2,5-二甲基哌嗪-1- 基}-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶 并[4,3-F]嘧啶并[1,6-H][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸(Int-122a)
在N2气氛下于-78℃向N,N-二甲基丙-2-炔-1-胺(0.500g，6.01mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.89mL，7.22mmol)(2.5M于己烷中)。在-78℃下搅拌混合物30min，并然后将无水二氧化碳鼓泡至反应溶液中，持续10min。通过添加35％HCl水溶液(3mL)将混合物调节至pH 1，且真空浓缩反应混合物以移除THF。随后通过冻干干燥残留物。将固体溶解于EtOH(5mL)中，且在65℃下搅拌以溶解固体。随后在0℃下搅拌澄清反应混合物，且形成沉淀物。过滤沉淀物且真空浓缩滤液，得到4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸(Int-122a)。MS(ESI)：m/z 128[M+H]+。
步骤B：2-{(2S,5R)-4-[4-(二甲基氨基)丁-2-炔酰基]-2,5-二甲基哌嗪-1-基}- 12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并 [4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例122)
在25℃下向Int-54c-1(20mg，0.033mmol)于DCM(1mL)中的溶液中添加4-(二甲基氨基)丁-2-炔酸(6.2mg，0.049mmol)、DIEA(0.017mL，0.098mmol)及HATU(19mg，0.049mmol)。在25℃下搅拌所得溶液1h。真空浓缩反应混合物，且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm,5um；条件：水(0.04％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化残留物，得到2-{(2S,5R)-4-[4-(二甲基氨基)丁-2-炔酰基]-2,5-二甲基哌嗪-1-基}-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例122)。MS(ESI)：m/z724[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ8.53(d,J＝4.9Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.25–7.19(m,1H),7.12(d,J＝4.0Hz,1H),6.88–6.79(m,1H),5.14–4.80(m,2H),4.46–4.36(m,1H),4.18(br t,J＝13.1Hz,1H),4.06–3.75(m,3H),3.50(d,J＝3.4Hz,2H),3.49–3.40(m,1H),2.88–2.74(m,2H),2.62–2.51(m,1H),2.36(d,J＝3.8Hz,6H),2.12–1.93(m,2H),1.51(dd,J＝6.9,11.1Hz,3H),1.45–1.30(m,3H),1.18(dd,J＝2.7,6.7Hz,3H),0.93(dd,J＝6.7,10.2Hz,3H)。
实施例123：2-[(2S,5R)-4-(丁-2-炔酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-12,12,17, 18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶 并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
在25℃下向Int-54c-1(20mg，0.033mmol)于DCM(1mL)中的溶液中添加丁-2-炔酸(3.3mg，0.039mmol)、DIEA(0.017mL，0.098mmol)及HATU(19mg，0.049mmol)，且在25℃下搅拌所得溶液1h。真空浓缩反应混合物，且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm,5um；条件：水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化残留物，得到2-[(2S,5R)-4-(丁-2-炔酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例123)。MS(ESI)：m/z 681[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)：δ8.48(d,J＝5.0Hz,1H),8.33(dd,J＝8.8,13.5Hz,1H),7.40(q,J＝9.3Hz,1H),7.32(d,J＝4.9Hz,1H),7.08(br d,J＝9.0Hz,1H),5.06(br s,1H),4.82–4.49(m,2H),4.33–4.19(m,1H),4.13(q,J＝9.1Hz,1H),3.80–3.41(m,3H),2.89–2.70(m,3H),2.11(d,J＝10.1Hz,5H),1.61–1.50(m,3H),1.46–1.28(m,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,3H),0.95(t,J＝6.3Hz,3H)。
实施例124：2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(2-甲基丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12, 12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3- f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
在0℃下向Int-54c-1(20mg，0.033mmol)于DCM(1mL)中的溶液中添加DIEA(0.017mL，0.098mmol)及甲基丙烯酰氯(6.8mg，0.065mmol)，且在25℃下搅拌所得溶液0.5h。通过吹氮移除溶剂，且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm，5um；条件：水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN)纯化残留物，得到2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(2-甲基丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例124)。MS(ESI)：m/z 683[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)：δ8.48(d,J＝5.0Hz,1H),8.41–8.28(m,1H),7.40(q,J＝9.4Hz,1H),7.32(d,J＝5.0Hz,1H),7.12–7.02(m,1H),5.34(br d,J＝8.1Hz,1H),5.24–4.98(m,2H),4.69–4.46(m,2H),4.37–3.46(m,5H),2.91–2.68(m,3H),2.28–1.96(m,5H),1.57(d,J＝6.7Hz,3H),1.46–1.31(m,3H),1.18(d,J＝6.7Hz,3H),1.00–0.89(m,3H)。
实施例125：2-{(2S,5R)-4-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-2,5-二甲基哌 嗪-1-基}-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲 基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
步骤A：Int-125a
在25℃下向Int-54c-1(20mg，0.033mmol)于DCM(1mL)中的溶液中添加(E)-4-溴丁-2-烯酸(6.4mg，0.039mmol)、DIEA(0.017mL，0.098mmol)及HATU(19mg，0.049mmol)，且在25℃下搅拌所得溶液1h。真空浓缩反应混合物，得到Int-125a，其未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ESI)：m/z 761及763[M+H]+。
步骤B：2-{(2S,5R)-4-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-2,5-二甲基哌嗪-1- 基}-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶 并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例125)
在25℃下向Int-125a(24mg，0.025mmol)于DCM(1mL)中的溶液中添加二甲胺(0.200mL，0.400mmol)(2M于THF中)，且在25℃下搅拌所得溶液1h。通过吹氮移除溶剂，且通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm，5μm；条件：水(0.05％NH3H2O+10mMNH4HCO3)-ACN)纯化残留物，得到2-{(2S,5R)-4-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-2,5-二甲基哌嗪-1-基}-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例125)。MS(ESI)：m/z 726[M+H]+。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)：δ8.36(d,J＝5.0Hz,1H),8.23(dd,J＝8.9,20.0Hz,1H),7.28(q,J＝9.4Hz,1H),7.21(d,J＝5.0Hz,1H),6.96(br d,J＝9.3Hz,1H),6.88–6.75(m,1H),6.74–6.64(m,1H),5.01–4.78(m,2H),4.62–4.24(m,2H),4.01(q,J＝9.2Hz,1H),3.90–3.71(m,2H),3.68–3.38(m,3H),2.62(d,J＝6.7Hz,9H),2.16–1.88(m,2H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H),1.36–1.20(m,3H),1.06(d,J＝6.7Hz,3H),0.82(dd,J＝6.7,11.9Hz,3H)。
实施例126：2-[(2S,5R)-4-(乙烯磺酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-12,12,17,18, 21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并 [1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮
在-78℃下向Int-54c-1(20mg，0.033mmol)于DCM(0.5mL)中的溶液中添加溶解于DCM(0.5mL)中的TEA(0.014mL，0.098mmol)及乙烯磺酰氯(6.2mg，0.049mmol)，且在-78℃下搅拌所得溶液0.5h。在-78℃下用MeOH(0.5mL)淬灭反应混合物，且通过吹氮移除溶剂。通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150mm×25mm，5μm；条件：水(0.05％NH3H2O+10mMNH4HCO3)-ACN)纯化残留物，得到2-[(2S,5R)-4-(乙烯磺酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮(实施例126)。MS(ESI)：m/z 705[M+H]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δ8.52(d,J＝4.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.26–7.18(m,1H),7.12(d,J＝4.7Hz,1H),6.88–6.77(m,1H),6.48(dd,J＝9.8,16.6Hz,1H),6.31(d,J＝16.5Hz,1H),6.02(d,J＝9.8Hz,1H),5.01(br s,1H),4.32–4.22(m,2H),3.99–3.89(m,2H),3.64–3.57(m,1H),3.51–3.45(m,2H),2.87–2.74(m,2H),2.61–2.49(m,1H),2.12–1.95(m,2H),1.60(br s,3H),1.32(d,J＝6.7Hz,3H),1.17(d,J＝6.7Hz,3H),0.92(d,J＝6.7Hz,3H)。
生物分析：
SOS-催化的核苷酸交换分析方法
SOS-催化的核苷酸交换分析利用含有G12C/C51S/C80L/C118S突变的重组生物素化KRAS蛋白(183个氨基酸；K10上的生物素；作为AviTag的前导序列；在下文中称为SEQ IDNO:1或“经生物素标记的KRAS G12C蛋白”)、Bodipy-GDP及铽-链霉亲和素的预制复合物。将化合物添加至此复合物中，且然后在孵育60分钟之后，用重组SOS蛋白及未标记的GTP处理混合物。小分子抑制剂使Bodipy-GDP复合物稳定，而未经处理的蛋白将Bodipy-GDP快速交换为未经标记的GTP，从而产生降低的TR-FRET信号。
将生物素化KRAS G12C蛋白(SEQ ID NO:1)在EDTA缓冲液(20mM HEPES、150mM氯化钠、10mM EDTA及0.01％吐温)中稀释至2μM且在室温下孵育一小时。随后将此混合物在含有15nM铽-链霉亲和素(Invitrogen，目录号#PV3577)及900nM Bodipy-GDP的分析缓冲液(20mM HEPES、150mM氯化钠、10mM氯化镁及0.005％吐温)中进一步稀释至90nM，且在室温下孵育六小时。此溶液被称为生物素化KRAS G12C混合物。
将各测试化合物(DMSO中的10mM储备液)稀释于DMSO中以制备384孔低死体积微孔板(Labcyte，目录号LP-0200)中的10点3倍连续稀释液。一旦进行滴定，使用Echo 550(Labcyte)将10nL经稀释化合物声学分配至384孔板(Corning，目录号3820)中。
培养板的各孔使用BioRAPTR(Beckman Coulter)接受已孵育六小时的3μL经生物素标记的KRAS G12C混合物及3μL分析缓冲液，且在室温下孵育60分钟。各孔然后接收3μL含240nM重组人类SOS蛋白质及9mM GTP(Sigma，G8877)的分析缓冲液且在室温下孵育60分钟。
在Envision(PerkinElmer)板式读取器上测量培养板的时差式荧光共振能量转移信号：激发滤波器＝340nm；发射1＝495nm；发射2＝520nm；双向色镜＝D400/D505；延迟时间＝100μs。将各孔的信号测定为520nm下的发射与495nm下的发射的比例。在标准化至含有DMSO(无效果)或抑制剂的饱和浓度(最大效果)的对照孔之后测定各孔的作用百分比。作为化合物浓度的函数的表观效应适合于四参数对数方程式。
细胞磷酸-ERK分析的程序
NCI-H358细胞(CRL-5807TM)用T150烧瓶在生长培养基(含有10％胎牛血清(ThermoFisher Scientific 10091148)的RPMI培养基1640-GlutaMAXTM-I(ThermoFisherScientific 61870))中进行培养。在TrypLE(ThermoFisher scientific12604021)消化之后，在生长培养基中捕获细胞，并将其以15,000个细胞/孔的密度接种在384孔胶原蛋白涂布的细胞培养板(Corning 356702)中，且在37℃，5％CO2下孵育过夜。准备化合物剂量反应滴定且使用Echo 550液体处置器将适量化合物施配于384孔中间板中。将RPMI培养基1640-GlutaMAXTM-I添加至中间板中且转移至384孔细胞培养板中，其在37℃、5％CO2下孵育2小时。从培养板移除培养基之后，在室温下通过在300rpm下持续摇动30分钟将细胞裂解于来自含有HaltTM蛋白酶及磷酸酶抑制剂混合物(ThermoFisher Scientific 78446)的UltraTM多倍p-Erk及总Erk分析试剂盒(PerkinElmer MPSU-PTERK)的溶解缓冲液中。随后将细胞溶解物转移至OptiPlate-384培养板(PerkinElmer 6005620)，且按照制造商的方案，通过Alpha SureFire Ultra Multiplex p-Erk试剂盒(PerkinElmerMPSU-PTERK)检测Erk的磷酸化及总Erk水平。在EnVision多模板式读取器(PerkinElmer)上读取分析板，且各孔中p-Erk与总Erk的比例用作最终读数。使用4-参数逻辑模型分析剂量反应曲线以使用spotfire软件计算IC50值。
表1.SOS催化的核苷酸交换分析中的体外表观效能(IC50)，在添加SOS之前预孵育时间为60分钟。孵育2小时后的细胞磷酸-ERK分析中的体外效能。
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蛋白质序列
生物素化KRAS G12C蛋白
GLNDIFEAQKIEWHETEYKLVVVGACGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVVIDGETSLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMRTGEGFLLVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVKDSEDVPMVLVGNKSDLPSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQGVDDAFYTLVREIRKHKEK(SEQ ID NO:1)

Claims (16)

1.化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-18,21-二氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-乙烯桥吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮；
(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-14,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二[(2H)氢](11,12-2H2)-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮；
(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,18,21-四氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,15,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
(5aRa,18aRa)-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,16,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
(5aSa,17aRa)-20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-16,17-二氟-6-(丙-2-基)-11,12-二[(2H)氢](11,12-2H2)-4H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,4,7,9]苯并二氧杂二氮杂环十二烯-4-酮；
2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,17,18,21-五氟-6-(丙-2-基)-10,11,12,13-四氢-4H-1,19-(联二亚甲基)二嘧啶并[4,5-f:1',6'-h][1,8,10]苯并氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
21-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-12,12,18-三氟-6-(丙-2-基)-12,13-二氢-4H,11H-1,19-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-f]嘧啶并[1,6-h][1,5,8,10]苯并二氧杂二氮杂环十三烯-4-酮；
20-氯-2-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-17-氟-6-(丙-2-基)-11,12-二氢-4H,10H-1,18-(联二亚甲基)吡啶并[4,3-e]嘧啶并[1,6-g][1,7,9]苯并氧杂二氮杂环十二烯-4-酮。
2.具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
3.具有以下结构的化合物：
4.具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
5.具有以下结构的化合物：
6.具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
7.具有以下结构的化合物：
8.具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
9.具有以下结构的化合物：
10.具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐：
11.具有以下结构的化合物：
12.一种药物组合物，其包含如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
13.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抑制KRASG12C蛋白活性的药物中的用途。
14.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，其用于制备治疗癌症的药物。
15.如权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐及额外抗癌剂的用途，其用于制备治疗癌症的药物。
16.如权利要求15所述的用途，其中所述额外抗癌剂选自EGFR抑制剂、抗PD-1剂、SHP2抑制剂和ERK抑制剂。
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