CN110887880B - 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法 - Google Patents

一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110887880B
CN110887880B CN201911165863.3A CN201911165863A CN110887880B CN 110887880 B CN110887880 B CN 110887880B CN 201911165863 A CN201911165863 A CN 201911165863A CN 110887880 B CN110887880 B CN 110887880B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mwcnts
cus
solution
tyrosine
oleylamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911165863.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110887880A (zh
Inventor
曹忠
何军意
丰赛飞
刘楚
胡慧颖
朱钦
于冬宏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Changsha University of Science and Technology
Original Assignee
Changsha University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Changsha University of Science and Technology filed Critical Changsha University of Science and Technology
Priority to CN201911165863.3A priority Critical patent/CN110887880B/zh
Publication of CN110887880A publication Critical patent/CN110887880A/zh
Priority to PCT/CN2020/110770 priority patent/WO2021103683A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110887880B publication Critical patent/CN110887880B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • G01N27/3277—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a redox reaction, e.g. detection by cyclic voltammetry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • G01N27/3278—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction involving nanosized elements, e.g. nanogaps or nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/48—Systems using polarography, i.e. measuring changes in current under a slowly-varying voltage

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种基于甲醛媒介作用选择性检测L‑酪氨酸(L‑Tyr)的方法，所述方法包括制备硫化铜纳米片‑壳聚糖/酸化碳纳米管(CuS NS‑CS/F‑MWCNTs)复合材料、制备CuS NS‑CS/F‑MWCNTs/GCE复合膜修饰电极和L‑酪氨酸检测等步骤。由于L‑酪氨酸和L‑色氨酸(L‑Trp)的氧化峰重叠而难以分离，本发明建立了一种通过甲醛(HCHO)与L‑Trp的Pictet–Spengler反应，L‑Trp氧化峰电位转移到0.82V，而L‑Tyr氧化峰电位为0.63V，从而有效地避开L‑Trp的干扰，实现对L‑Tyr进行高选择性检测的方法。将硫化铜纳米片‑壳聚糖/酸化碳纳米管修饰玻碳电极(CuS NS‑CS/F‑MWCNTs/GCE)运用于甲醛媒介中检测L‑酪氨酸，50倍浓度的其它氨基酸包括L‑色氨酸等均不干扰，且稳定性好，L‑Tyr检测下限达到5.4×10‑8mol/L，在生命科学领域具有重要的应用价值。

Description

一种基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸的方法
技术领域
本发明属于化学/生物传感技术领域，具体涉及一种基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸的方法。
背景技术
L-酪氨酸(L-Tyrosine，L-Tyr)是一种含有酚羟基的芳香族极性α-氨基酸，是人体的条件必需氨基酸和生酮生糖氨基酸，对人和动物的新陈代谢、生长发育起着重要的作用，广泛应用在食品、饲料、医药和化工等行业。其常作为苯丙酮尿症患者的营养补充剂，以及多肽类激素、抗生素、L-多巴、黑色素、对羟基肉桂酸、对羟基苯乙烯等医药化工产品的制备原料。酪氨酸是酪氨酸酶单酚酶功能的催化底物，是最终形成优黑素和褐黑素的主要物质，可以减轻白癜风症状；医药上用作氨基酸类营养药，治疗脊髓灰质炎、脑炎、甲状腺机能亢进等疾病。而酪氨酸的含量也将影响动物的营养及毛色，例如猪和羊。因此，寻找快速、灵敏、选择性测定L-Tyr的方法对研究相关疾病的病理和临床诊断具有十分重要的意义。
目前，国内外检测L-酪氨酸的方法已有许多报道，主要有荧光光谱法、分光光度法、离子交换色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳、气相色谱-质谱联用等。但是这些方法因仪器设备笨重，价格昂贵，操作繁琐，而电化学传感器检测L-酪氨酸具有操作简单、成本低廉、选择性好、灵敏度高等优点，因此引起了研究者们的广泛关注，其中包括通过电化学检测含氮小分子的研究，特别是结合纳米材料检测酪氨酸的电化学传感器。但是，由于L-酪氨酸和L-色氨酸的氧化峰重叠而难以分离，且这一问题在目前运用的非酶传感器检测L-酪氨酸时并没有得到很好的解决，尤其是能否有效避免L-色氨酸的干扰和对L-酪氨酸的高选择性检测。因此建立一种能够高选择性检测L-酪氨酸的方法至关重要，也是目前生命科学领域氨基酸选择性检测研究的重要趋势。基于此，本发明提出了一种基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸的方法，通过HCHO与L-色氨酸的Pictet–Spengler反应，有效地避开L-色氨酸的干扰，达到选择性检测L-酪氨酸的目的。迄今，基于甲醛与色氨酸化学反应以有效避开L-色氨酸的影响，应用于选择性检测L-酪氨酸的电化学传感方法尚未见报道。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种基于甲醛媒介作用高选择性检测L-酪氨酸的方法。
为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
所述基于甲醛媒介作用高选择性检测L-酪氨酸的方法包括如下步骤：
(1)制备CuS NS-CS/F-MWCNTs(硫化铜纳米片-壳聚糖/酸化碳纳米管)复合材料：
a)采用共混酸化法来制备表面羧基化的F-MWCNTs；
b)制备CuS NS；
c)将步骤a)制备的F-MWCNTs溶于无水乙醇中配置成浓度为0.8mg/mL～1.2mg/mL，优选为1mg/mL的F-MWCNTs溶液；将步骤b)制得的CuS NS与质量百分比浓度为0.8～1.2％，优选为1％的CS溶液按质量体积比(4.5～5.5)mg：(0.05～0.15)mL，优选为5mg：0.1mL，混合后再溶于无水乙醇中，配置成CuS浓度为4.5mg/mL～5.5mg/mL，优选为5mg/mL的CuS NS-CS溶液；
(2)制备CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极：对玻碳电极表面进行抛光，超声洗净后晾干，将F-MWCNTs溶液进行超声分散后得到的F-MWCNTs分散液滴涂于玻碳电极表面并晾干，得到表面被F-MWCNTs修饰的玻碳电极，将CuS NS-CS溶液进行超声分散后得到的CuS NS-CS匀相溶液滴涂于表面被F-MWCNTs修饰的玻碳电极上，晾干，即得CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极；
(3)以CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极为工作电极，以银/氯化银电极作为参比电极，以铂丝电极作为对电极，构成三电极体系；然后采用示差脉冲伏安法考察L-酪氨酸在加有甲醛的缓冲溶液里的电化学信号，L-酪氨酸的氧化峰电位为0.63V，并对不同浓度的L-酪氨酸进行测试，绘制工作标准曲线，再采用标准加入法对待测样品中的L-酪氨酸进行检测；其中，所述加有甲醛的缓冲溶液中甲醛的浓度为0.02～0.2M，所述缓冲溶液为pH＝7.0、浓度为0.010～0.10M的PBS缓冲溶液，优选的浓度为0.010M。
优选地，步骤a)中采用共混酸化法来制备表面羧基化的F-MWCNTs具体步骤是：首先将F-MWCNTs与H2SO4和HNO3的混酸混合，其中，所述F-MWCNTs与H2SO4和HNO3的混酸的质量体积比为(0.15～0.25)g：(25～35)mL，优选为0.2g：30mL，所述H2SO4和HNO3的混酸中H2SO4和HNO3的体积比为(2.5～3.5)：1，优选为3:1；然后超声分散后放入115℃～125℃，优选为120℃，油浴下搅拌回流2.5h～3.5h，优选为3h，得混合液；再用超纯水稀释混合液，待冷却后用高速离心机进行离心；最后用乙醇清洗三次并离心后将产物置于电热鼓风干燥箱中于55℃～65℃，优选为60℃干燥成粉末，即得表面羧基化的F-MWCNTs，保存备用。
优选地，步骤b)中制备CuS NS的具体步骤是：首先将CuCl加入装有油胺和正辛胺混合液的容器中，其中，所述CuCl与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.15～0.25)g：(25～45)mL，优选为0.2g：40mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)，油浴加热至100℃，再真空条件下磁力搅拌20min～60min，优选为30min，除去水和氧气；然后升高温度至120～140℃，优选为130℃后并保持在该温度，伴随磁力搅拌4.5h～6.0h，优选为5h；同时备好超声均匀的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液，所述硫粉与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.1～0.2)g：(3～7)mL，优选为0.1443g：5mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)，优选为1：1.5；当加热4.5h～6.0h，优选为5h后溶液变得透明时，再将备好的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液快速注入到容器中的溶液中，得混合溶液，加热混合溶液8h～24h，优选为12h；最后冷却至室温，加入过量乙醇洗涤并离心，后将沉淀置于电热鼓风干燥箱中于55℃～65℃，优选为60℃干燥成粉末，即得CuS NS，于冰箱中保存备用。
优选地，所述CuS NS形状为边长10.46±0.65nm，厚度为5.27±0.74nm的六边形。
优选地，步骤(2)中对玻碳电极表面进行抛光是依次用1.0μm、0.3μm和0.05μm的氧化铝粉对玻碳电极表面进行抛光。
优选地，步骤(2)中所述玻碳电极直径为3mm，将5μL F-MWCNTs分散液滴涂于玻碳电极表面并晾干，将5μL CuS NS-CS匀相溶液滴涂于表面已涂有F-MWCNTs且晾干的玻碳电极上。
优选地，步骤(3)中是采用示差脉冲伏安法考察L-酪氨酸在加有甲醛的缓冲溶液里的电化学信号，L-酪氨酸的氧化峰电位为0.63V，设置示差脉冲伏安法参数为：振幅0.05V、脉冲宽度为0.2s、抽样宽度为0.02、脉冲周期为0.5s，对不同浓度的L-酪氨酸进行测试，绘制工作标准曲线，再采用标准加入法对待测样品中的L-酪氨酸进行检测；其中，所述加有甲醛的缓冲溶液中甲醛的浓度为0.02～0.2M，所述缓冲溶液为pH＝7.0、浓度为0.010～0.10M的PBS缓冲溶液，优选的浓度为0.010M。
本发明中，基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸方法的电化学信号测量氧化峰电位为0.63V，L-酪氨酸的线性范围为1.0×10-7～1.0×10-6mol/L，检测下限达到5.4×10- 8mol/L。本发明所述方法可用于构建选择性检测L-酪氨酸的传感平台，L-酪氨酸与L-色氨酸分离开的氧化峰电位差的范围为0.12～0.24V。
下面对本发明作进一步说明：
本发明建立了一种选择性检测L-酪氨酸(L-Tyr)的新方法，通过媒介物甲醛(HCHO)与L-色氨酸(L-Trp)发生Pictet–Spengler反应而生成中间产物(2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸)，导致L-Trp的氧化峰电位正移0.19V，有效地避开了L-Trp氧化峰的干扰，从而实现高选择性地检测L-Tyr。采用所制备的边长为10.46±0.65nm，厚度为5.27±0.74nm的六边形硫化铜纳米片来组装形成硫化铜纳米片-壳聚糖/酸化碳纳米管复合膜修饰的玻碳电极(CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE)。基于甲醛媒介反应方法对L-酪氨酸进行检测，氧化峰电位为0.63V，线性范围为1.0×10-7～1.0×10-6mol/L，检测下限达到5.4×10-8mol/L。该方法有良好的重复性、重现性和稳定性，且50倍浓度共存的其它氨基酸包括L-色氨酸等均没有干扰。采用该方法对猪血清中的L-酪氨酸进行检测，与高效液相色谱法的测定结果一致，且测得的回收率为95.6％～104.8％。此外，将甲醛媒介方法用于其它传感界面的测试，均发现L-Trp氧化峰电位正移而与L-Tyr的可分辨开来，即L-酪氨酸与L-色氨酸分离开的氧化峰电位差的范围为0.12～0.24V，充分表明此方法有望构建一种选择性检测L-酪氨酸的传感平台，在生物分析领域具有潜在的应用价值。
附图说明
图1为CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极与L-酪氨酸检测方法构建示意图；
图2为CuS NS的材料表征图，其中：(A)TEM形貌图；(B)TEM厚度图；(C)XRD衍射图：CuS NS(hexagonal,PDF:06-0464,
Figure BDA0002287438770000041
)；
图3为甲醛媒介作用对L-酪氨酸(L-Tyr)和L-色氨酸(L-Trp)的氧化峰电位的影响；(A)CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极分别在依次加入L-Trp，HCHO，L-Tyr的混合溶液中和依次加入L-Tyr，HCHO，L-Trp的混合溶液中的DPV曲线；(B)电极在L-Trp和L-Trp+HCHO溶液中的DPV曲线；其中L-Trp和L-Tyr的浓度均为4.0×10-5mol/L。
图4为CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE在含L-Trp、不同醛的PBS和含L-Tyr、不同醛的PBS溶液中的DPV曲线比较图；其中L-Trp和L-Tyr的浓度均为4.0×10-5mol/L，各种不同醛的浓度均为0.131mol/L，PBS的浓度为0.010mol/L(pH＝7.0)。A.甲醛(FH)，B.乙醛(AH)，C.丁醛(BH)，D.苯甲醛(BAL)，E.水杨醛(SAL)，F.甲基苯甲醛(PTAL)，G.对甲氧基苯甲醛(PMAL)，H.对羟基苯甲醛(PHBA).
图5为L-Tyr氧化峰电流(A)与氧化峰电位(B)随pH值变化的关系曲线；
图6为L-色氨酸与甲醛反应后在CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE上的氧化机理图；
图7为L-Trp氧化峰电流与甲醛反应不同时间的关系图；
图8：(A)CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE响应不同浓度L-Tyr的DPV曲线；(B)氧化峰电流与L-Tyr浓度的线性关系曲线；
图9为干扰物质对在甲醛媒介中检测L-Tyr的影响图；
图10为不同修饰电极GO/F-MWCNTs/Nafion/GCE(A)、3D Pt-Cu/CNDs/GQDs/GCE(B)、Fe3O4-SiO2/AB-GO/GCE(C)、Ce@In2O3/F-MWCNTs/GCE(D)分别在PBS、含L-Trp的PBS、含L-Trp+甲醛的PBS和含L-Trp+甲醛+L-Tyr的PBS溶液中的DPV曲线图；其中L-Trp和L-Tyr的浓度均为4.0×10-5mol/L，各种不同醛的浓度均为0.131mol/L，PBS的浓度为0.010mol/L(pH＝7.0)。
具体实施方式
实施例中所用试剂均为分析纯(AR)，实验用水均为超纯水(电阻率≥18.3MΩ·cm)。以下描述中，氨基酸的描述均采用英文缩写。
一、实验过程
1、CuS NS-CS/F-MWCNTs复合材料的制备
采用共混酸化法来制备酸化多壁碳纳米管(F-MWCNTs)，使其表面羧基化。具体步骤为：先将0.2g多壁碳纳米管与30mL H2SO4和HNO3的混酸(混酸中H2SO4和HNO3的体积比为3:1)混合；然后在室温下超声分散4h后放入120℃油浴下搅拌回流3h；再用超纯水稀释混合液，待冷却后用高速离心机进行离心分离；最后用乙醇清洗三次并离心，后将产物置于电热鼓风干燥箱中(60℃)干燥成粉末，于室温中保存备用。
制备超薄CuS NS(CuS纳米片)：首先取0.21g CuCl2·2H2O，以及16mL油胺(OM)和24mL正辛胺(OTA)的混合液于100mL三颈烧瓶，充满氮气在油浴中加热至100℃，再真空条件下磁力搅拌30min，达到除去水和氧气的目的；然后调整温度至130℃磁力搅拌5h，至溶液变透明；再调整温度为95℃，同时快速向三颈烧瓶中注入0.1443g硫粉和2.5mL OM、3.75mLOTA的混合液，加热混合溶液12h；最后冷却至室温，加入过量乙醇洗涤三次并离心，后将沉淀置于电热鼓风干燥箱中(60℃)干燥成粉末，于冰箱中保存备用。
将上述制备的F-MWCNTs溶于无水乙醇中配置成1.0mg/mL的溶液。将上述制得的CuS NS称取5mg，加入0.1mL 1％(质量百分比浓度)CS溶液混合溶于0.9mL的无水乙醇中，使CuS的浓度为5.0mg/mL。两种溶液均超声振荡，使其混合均匀，于冰箱中保存备用。
2、CuS NS/CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极的制备
依次用1.0μm、0.3μm和0.05μm的氧化铝粉对玻碳电极(直径3mm)表面进行抛光，分别在超纯水、无水乙醇、超纯水中超声10min清洗干净，室温下自然晾干。取5μL超声分散后的F-MWCNTs分散液滴涂于玻碳电极表面，室温下自然晾干；晾干后滴涂5μL超声分散后CuSNS-CS均相溶液，晾干后于4℃下保存备用(如图1所示)。
3、L-Tyr的电化学检测
以CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰的玻碳电极作为工作电极，银/氯化银(饱和氯化钾)电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极的三电极体系，使用电化学工作站对L-酪氨酸(L-Tyr)和加入甲醛后的混合溶液(其中甲醛的浓度为0.02～0.2M)进行电化学检测，L-酪氨酸的氧化峰电位为0.63V，背景缓冲溶液为pH＝7.0、0.010mol/L的PBS缓冲溶液。设置示差脉冲伏安法(DPV)参数：振幅为0.05V，脉冲宽度为0.2s，抽样宽度为0.02，脉冲周期为0.5s。采用DPV法考察L-Tyr在加入甲醛溶液里的电化学信号，并对不同浓度的L-Tyr进行测试，绘制工作曲线。采用标准加入法对猪血清样品中L-Tyr进行检测。猪血清样品(来源于5头活体三元杂小猪，体重为7～15Kg)由中国科学院亚热带农业生态研究所(长沙)提供。分别将5种不同的猪血清样品50.00μL加入pH＝7.0的PBS缓冲溶液(4.950mL)中稀释100倍，再向猪血清溶液中加入不同浓度的L-Tyr，采用DPV法进行测定。
二、实验结果与分析
1、材料的表征
采用透射电子显微镜(TEM)对CuS NS的结构和表面形貌进行表征。如图2A和2B所示，CuS呈边长为10.46±0.65nm，厚度为5.27±0.74nm的超薄六形纳米片状；图2C是CuS纳米片的XRD衍射图，从实验结果可以得出该其衍射峰对映六方晶系结构的硫化铜(PDF:06-0464)，其晶格常数为
Figure BDA0002287438770000061
说明成功制备硫化铜纳米片是超微结构的纳米晶，对提高了电极表面电催化性能起到重要作用。
2、电化学性能测试
考察了CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合电极分别在依次加入L-Trp(4.0×10-5mol/L)，HCHO，L-Tyr(4.0×10-5mol/L)的混合溶液中，和依次加入L-Tyr(4.0×10-5mol/L)，HCHO，L-Trp(4.0×10-5mol/L)的混合溶液中的示差脉冲伏安(DPV)行为(如图3所示)。由图3A可知，复合电极对Trp在电位0.632V处有明显的电化学信号响应，在加入甲醛之后，Trp的氧化峰位置变到了0.816V处，说明在加入了甲醛后，Trp的氧化峰电位增大，更难发生氧化；为了验证加入甲醛的方法对酪氨酸的电化学反应信号并没有改变，本实验继续加入了等浓度的L-酪氨酸，实验结果显示酪氨酸与色氨酸的峰电位产生了明显的分离。为了进一步验证该方法，实验又先加入酪氨酸和甲醛，从图中可看到酪氨酸的氧化峰电位在加入甲醛后并没有发生改变，说明溶液中的甲醛对酪氨酸的检测并没有影响。而当加入色氨酸后，因溶液中存在甲醛，色氨酸的峰电位从0.63左后处移动到了0.8V之后，而且从图3B中可以直观地看到加入甲醛使色氨酸的电化学信号的峰电位增大，说明该方法能够很好地选择性检测色氨酸。
3、最佳媒介醛的选择
采用DPV法测试在含4.0×10-5M L-Trp的0.010M PBS溶液中加入0.131M的不同醛对色氨酸峰电位的影响，结果如图4所示。甲醛(FH)对色氨酸氧化峰电位有较大的影响，峰电位左移，电位差ΔE＝0.184V(图4A)；乙醛(AH)对色氨酸氧化峰电位基本无影响(图4B)；丁醛(BH)对色氨酸氧化峰电位影响较小，电位差ΔE＝0.052V(图4C)；苯甲醛(BAL)对色氨酸氧化峰电位有较大的影响，峰电位左移，电位差ΔE＝0.136V(图4D)；水杨醛(SAL)对色氨酸氧化峰电位有较大的影响，峰电位右移，电位差ΔE＝0.120V(图4E)；对甲基苯甲醛(PTAL)对色氨酸氧化峰电位影响很小，峰电位右移，电位差ΔE＝0.032V(图4F)；对甲氧基苯甲醛(PMAL)对色氨酸氧化峰电位有较大的影响，峰电位左移，电位差ΔE＝0.208V(图4G)；对羟基苯甲醛(PHBA)对色氨酸氧化峰电位影响较大，峰电位右移，电位差ΔE＝0.292V(图4H)。由以上结果证明FH、BAL、SAL、PMAL、PHBA均对色氨酸氧化峰电位有较大影响。
为进一步验证这几种醛对酪氨酸是否也存在影响，用CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极在含4.0×10-5M Tyr的0.010M PBS混合溶液中分别加入0.131M的FH、BAL、SAL、PMAL、PHBA测定对酪氨酸峰电位的影响，结果如图4(A)、(D)、(E)、(G)、(H)所示。甲醛对酪氨酸峰电位没有影响，苯甲醛、水杨醛、对甲氧基苯甲醛、对羟基苯甲醛都对L-色氨酸、L-酪氨酸有影响，这四种醛对两种氨基酸峰电位的影响一致，说明苯甲醛、水杨醛、对甲氧基苯甲醛、对羟基苯甲醛都不能将色氨酸和酪氨酸的氧化峰分离开。因此，甲醛是色氨酸和酪氨酸的氧化峰分离开的最佳媒介物。
4、pH值对L-Tyr电化学行为的影响
缓冲溶液的pH值是影响L-Tyr在电极表面发生氧化反应的一个重要因素。采用DPV考察了CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极在pH值在4.5～8.0的范围内PBS缓冲溶液(0.010mol/L)对L-Tyr(4.0×10-5mol/L)的峰电流、峰电位的关系影响。通过考察L-Tyr的氧化峰电流随pH值变化如图5A所示。由此图可知：当pH小于7.0时，峰电流随pH变大而逐渐增大；当pH等于7.0时，峰电流达到最大值；当pH大于7.0时，峰电流随pH变大而逐渐减小。因此选择pH＝7.0的PBS缓冲溶液作为检测L-Tyr的最佳pH。由峰电位曲线图5B可以看出L-Tyr的峰电位与pH值成线性关系，说明L-Tyr在其电极反应中存在质子和电子的转移过程。其线性拟合方程为Epa＝1.0186–0.0547pH，线性相关系数R＝0.9863。根据能斯特方程：Ep＝E0+0.05916(m/n)pH(m为反应转移的质子数，n为转移的电子数)，可推算出m＝0.9246n，即m≈n，说明L-Tyr在该修饰电极界面上是等电子等质子转移。
5、L-Trp与甲醛反应后的电化学机理
由于L-酪氨酸和L-色氨酸的氧化峰重叠而难以分离，为了有效避免L-色氨酸的干扰而加入了甲醛媒介物，对其作用机制进行了深入探讨，如图6所示，甲醛与L-色氨酸(L-Trp，1)能发生Pictet–Spengler反应，使L-Trp上的β-芳香乙胺缩合脱水形成亚胺(2)(席夫碱)，然后亚胺正离子异构为碳正离子，随后进攻吲哚3位形成中间体(3)，这一反应具有高度活性，同时溶液体系中的PBS缓冲溶液给该反应提供氢离子以促使反应的进行，最后对芳环进行亲电芳香取代得到中间体(4)，再发生环化便得到2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸(5)。该生成物(5)在CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极上被氧化失去一个电子得到一个带正电荷的自由基(6)，经过去质子化得到中间体(7)，再经过分子内重排形成4-自由基-2,3,4,4a-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸(8)。通过进一步氧化作用失去一个电子而产生一个正离子(9)，去质子化后生成最后的2,3-二氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸(10)。
6、L-Trp与甲醛反应的时间优化
甲醛与色氨酸在缓冲溶液中发生氧化反应，在最佳pH＝7.0的PBS缓冲溶液(0.010mol/L)中采用DPV考察了甲醛与色氨酸反应不同时间后CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极上L-Trp(4.0×10-6mol/L)峰电流值的变化(图7)，实验加入的是10μL 37％甲醛溶液(0.026mol/L)。结果如图7所示，甲醛与色氨酸反应时间在1～5min内时，转移的峰电流信号逐渐增强，当时间超过5min之后，L-Trp转移的峰的电流信号逐渐减弱。因此本实验采用5min为最佳反应时间，使甲醛与L-色氨酸充分反应，避免对L-酪氨酸的检测产生干扰。
7、线性范围和检出限
配制了一系列不同浓度的L-酪氨酸(L-Tyr)标准溶液，在选定最优缓冲溶液pH值下，使用CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极，采用示差脉冲伏安法(DPV)对甲醛溶液中不同浓度的L-Tyr进行检测，L-Tyr氧化峰电位为0.63V。如图8可知，L-Tyr的氧化峰电流与其浓度有较好的线性关系，浓度范围在1.0×10-7～1.0×10-6mol/L，线性拟合方程是Ipa＝0.019-0.378lgC，线性相关系数R＝0.9953；检测下限达到5.4×10-8mol/L(S/N＝3)。
8、电极的重现性、重复性与稳定性
采用同一批次相同条件下制备的4支CuS NS-CS/F-MWCNTs修饰电极分别检测含甲醛媒介物的0.2μM和0.5μM的L-Tyr样品溶液，测得电流的相对标准偏差分别为4.37％和3.34％，充分说明该修饰电极的重现性很好。采用同一支修饰电极检测甲醛媒介中的0.5μM的L-Tyr样品溶液，连续测定6次，测得电流响应的相对标准偏差为2.81％，说明该修饰电极具有好的重复性。同时还考察了该修饰电极的稳定性，取同一支电极每隔2d对甲醛溶液中的L-Tyr在最佳pH条件下检测一次，不用时在4℃冰箱条件下保存，结果表明经12d后，修饰电极对0.6μM L-Tyr的响应信号是最初时的95.2％，从而可以判断该电极对甲醛媒介中的L-Tyr测定具有好的稳定性。
9、抗干扰性测试
考察了运用该方法检测L-酪氨酸时，其他氨基酸对L-酪氨酸的氧化峰电流值的影响，采用以pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液(0.010mol/L)做底液的三电极体系中在其他氨基酸存在的情况下对L-Tyr(5.0×10-7mol/L)的检测，结果如图9所示，加入50倍的L-甘氨酸(L-Gly)、L-赖氨酸(L-Lys)、L-谷氨酸(L-Glu)、L-苏氨酸(L-Thr)、L-天冬氨酸(L-Asp)、L-亮氨酸(L-Leu)、L-甲硫氨酸(L-Met)、L-缬氨酸(L-Val)、L-异亮氨酸(L-Ile)、L-脯氨酸(L-Pro)、L-精氨酸(L-Arg)、L-组氨酸(L-His)、L-苯丙氨酸(L-Phe)、L-丙氨酸(L-Ala)、谷氨酰胺(L-Gln)、L-色氨酸(L-Trp)后峰电流没有发生明显变化。表明CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极对L-Tyr有很好的选择性。
10、实际样品检测及回收率测定
考察了CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE修饰电极采用甲醛作用的方法对实际样品(血清)中L-酪氨酸的检测应用。检测时将血清样品用0.010mol/L PBS(pH＝7.0)稀释100倍，在最优实验条件下重复实验5次，并与高效液相色谱法(HPLC)进行对比，二者检测结果比较一致；采用标准加入法进行测定时，即向加有血清的缓冲溶液中加入不同浓度的L-Tyr，用该方法进行检测并计算回收率，测得的回收率为95.6％～104.8％，表明该方法检测色氨酸具有较高的准确性和精确度，可用于实际样品中L-Tyr的检测。
11、基于甲醛媒介作用的不同传感界面的电化学测试
采用DPV法测试了几种不同传感界面如GO/F-MWCNTs/Nafion/GCE(A)、3D Pt-Cu/CNDs/GQDs/GCE(B)、Fe3O4-SiO2/AB-GO/GCE(C)、Ce@In2O3/F-MWCNTs/GCE(D)对基于甲醛媒介作用的色氨酸和酪氨酸的混合溶液的检测(图10)。结果表明，对色氨酸和酪氨酸均有响应的电化学传感器在含色氨酸、甲醛、酪氨酸的混合溶液中，都能使L-酪氨酸与L-色氨酸的氧化峰分离开，峰电位差分别为0.136V、0.188V、0.144V、0.148V，有效地避免了L-色氨酸对L-酪氨酸检测的干扰。
总之，本发明在L-色氨酸(L-Trp)与甲醛发生Pictet–Spengler反应生成中间产物2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸的基础上建立了一种新型高选择性的检测L-酪氨酸(L-Tyr)的方法。通过HCHO的媒介作用，L-Trp的氧化峰电位发生移动，与L-酪氨酸的氧化峰电位对比，两者产生0.12～0.24V的氧化峰电位差，有效地避免了L-Trp对L-Tyr检测的干扰，从而实现对L-Tyr高选择性的测定。采用DPV法测试CuS NS-CS/F-MWCNTs复合电极及其它不同传感界面电极，均对与甲醛反应后的L-Tyr可实现灵敏的选择性检测，L-色氨酸等其它氨基酸均不干扰，表明应用该方法能够构建高选择性检测L-Tyr的传感检测平台，在生命科学领域具有重要的应用价值。

Claims (10)

1.一种基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备CuS NS-CS/F-MWCNTs复合材料：
a)采用共混酸化法来制备表面羧基化的F-MWCNTs；
b)制备CuS NS：首先将CuCl加入装有油胺和正辛胺混合液的容器中，其中，所述CuCl与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.15～0.25)g：(25～45)mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)，油浴加热至100℃，再真空条件下磁力搅拌20min～60min，除去水和氧气；然后升高温度至120～140℃后并保持在该温度，伴随磁力搅拌4.5h～6.0h；同时备好超声均匀的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液，所述硫粉与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.1～0.2)g：(3～7)mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)；当加热4.5h～6.0h后溶液变得透明时，再将备好的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液快速注入到容器中的溶液中，得混合溶液，加热混合溶液8h～24h；最后冷却至室温，加入过量乙醇洗涤并离心，后将沉淀置于电热鼓风干燥箱中于55℃～65℃干燥成粉末，即得CuS NS，于冰箱中保存备用；
c)将步骤a)制备的F-MWCNTs溶于无水乙醇中配置成浓度为0.8mg/mL～1.2mg/mL的F-MWCNTs溶液；将步骤b)制得的CuS NS与质量百分比浓度为0.8～1.2％的CS溶液按质量体积比(4.5～5.5)mg：(0.05～0.15)mL混合后再溶于无水乙醇中，配置成CuS浓度为4.5mg/mL～5.5mg/mL的CuS NS-CS溶液；
(2)制备CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极：对玻碳电极表面进行抛光，超声洗净后晾干，将F-MWCNTs溶液进行超声分散后得到的F-MWCNTs分散液滴涂于玻碳电极表面并晾干，得到表面被F-MWCNTs修饰的玻碳电极，将CuS NS-CS溶液进行超声分散后得到的CuSNS-CS匀相溶液滴涂于表面被F-MWCNTs修饰的玻碳电极上，晾干，即得CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极；
(3)以CuS NS-CS/F-MWCNTs/GCE复合膜修饰电极为工作电极，以银/氯化银电极作为参比电极，以铂丝电极作为对电极，构成三电极体系；然后采用示差脉冲伏安法考察L-酪氨酸在加有甲醛的缓冲溶液里的电化学信号，L-酪氨酸的氧化峰电位为0.63V，并对不同浓度的L-酪氨酸进行测试，绘制工作标准曲线，再采用标准加入法对待测样品中的L-酪氨酸进行检测；其中，所述加有甲醛的缓冲溶液中甲醛的浓度为0.02～0.2M。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中采用共混酸化法来制备表面羧基化的F-MWCNTs具体步骤是：首先将F-MWCNTs与H2SO4和HNO3的混酸混合，其中，所述F-MWCNTs与H2SO4和HNO3的混酸的质量体积比为(0.15～0.25)g：(25～35)mL，所述H2SO4和HNO3的混酸中H2SO4和HNO3的体积比为(2.5～3.5)：1；然后超声分散后放入115℃～125℃油浴下搅拌回流2.5h～3.5h得混合液；再用超纯水稀释混合液，待冷却后用高速离心机进行离心；最后用乙醇清洗三次并离心后将产物置于电热鼓风干燥箱中于55℃～65℃干燥成粉末，即得表面羧基化的F-MWCNTs，保存备用。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中制备CuS NS的具体步骤是：
首先将CuCl加入装有油胺和正辛胺混合液的容器中，其中，所述CuCl与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.15～0.25)g：(25～45)mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)，油浴加热至100℃，再真空条件下磁力搅拌20min～60min，除去水和氧气；然后升高温度为120～140℃并保持在该温度，伴随磁力搅拌4.5h～6.0h；同时备好超声均匀的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液，所述硫粉与油胺和正辛胺混合液的质量体积比为(0.1～0.2)g：(3～7)mL，所述油胺和正辛胺混合液中油胺和正辛胺的体积比为1:(1～2)；当加热4.5h～6.0h后溶液变得透明时，再将备好的硫粉与油胺和正辛胺混合液的溶液快速注入到容器中的溶液中，得混合溶液，加热混合溶液8h～24h；最后冷却至室温，加入过量乙醇洗涤并离心，后将沉淀置于电热鼓风干燥箱中于55℃～65℃干燥成粉末，即得CuS NS，于冰箱中保存备用。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CuS NS形状为边长10.46±0.65nm，厚度为5.27±0.74nm的六边形。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中对玻碳电极表面进行抛光是依次用1.0μm、0.3μm和0.05μm的氧化铝粉对玻碳电极表面进行抛光。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述玻碳电极直径为3mm，将5μLF-MWCNTs分散液滴涂于玻碳电极表面并晾干，将5μL CuS NS-CS匀相溶液滴涂于表面已涂有F-MWCNTs且晾干的玻碳电极上。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中是采用示差脉冲伏安法考察L-酪氨酸在加有甲醛的缓冲溶液里的电化学信号，L-酪氨酸的氧化峰电位为0.63V，设置示差脉冲伏安法参数为：振幅0.05V、脉冲宽度为0.2s、抽样宽度为0.02、脉冲周期为0.5s，对不同浓度的L-酪氨酸进行测试，绘制工作标准曲线，再采用标准加入法对待测样品中的L-酪氨酸进行检测；其中，所述加有甲醛的缓冲溶液中甲醛的浓度为0.02～0.2M。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为pH＝7.0、浓度为0.01～0.1M的PBS缓冲溶液。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，基于甲醛媒介作用选择性检测L-酪氨酸方法的电化学信号测量氧化峰电位为0.63V，L-酪氨酸的线性范围为1.0×10-7～1.0×10-6mol/L，检测下限达到5.4×10-8mol/L。
10.如权利要求1至9任一项所述方法在构建选择性检测L-酪氨酸传感平台中的应用，L-酪氨酸与L-色氨酸分离开的氧化峰电位差的范围为0.12～0.24V。
CN201911165863.3A 2019-11-25 2019-11-25 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法 Active CN110887880B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911165863.3A CN110887880B (zh) 2019-11-25 2019-11-25 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法
PCT/CN2020/110770 WO2021103683A1 (zh) 2019-11-25 2020-08-24 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911165863.3A CN110887880B (zh) 2019-11-25 2019-11-25 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110887880A CN110887880A (zh) 2020-03-17
CN110887880B true CN110887880B (zh) 2021-05-11

Family

ID=69748716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911165863.3A Active CN110887880B (zh) 2019-11-25 2019-11-25 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN110887880B (zh)
WO (1) WO2021103683A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110887880B (zh) * 2019-11-25 2021-05-11 长沙理工大学 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110082416A (zh) * 2019-06-06 2019-08-02 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸和多巴胺同时检测方法及传感器
CN110082413A (zh) * 2019-05-27 2019-08-02 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸检测方法及传感器
CN110161101A (zh) * 2019-06-06 2019-08-23 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的肾上腺素检测方法及传感器
CN110220959A (zh) * 2019-06-19 2019-09-10 长沙理工大学 一种基于聚合膜修饰电极的l-谷氨酸检测方法及传感器

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101190915B (zh) * 2006-11-30 2010-05-12 首都医科大学 抗血栓的n-丁基-2，2-二甲基-4-氧代-四氢咪唑并吡啶并吲哚及其合成和应用
CN103389328B (zh) * 2013-07-24 2016-01-20 湖南大学 基于修饰电极的酪氨酸酶生物传感器及制备方法和应用
US20170082571A1 (en) * 2015-09-17 2017-03-23 King Fahd University Of Petroleum And Minerals Method for detecting l-tyrosine by using graphene-modified graphite pencil electrode system
CN110887880B (zh) * 2019-11-25 2021-05-11 长沙理工大学 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110082413A (zh) * 2019-05-27 2019-08-02 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸检测方法及传感器
CN110082416A (zh) * 2019-06-06 2019-08-02 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸和多巴胺同时检测方法及传感器
CN110161101A (zh) * 2019-06-06 2019-08-23 长沙理工大学 一种基于复合膜修饰电极的肾上腺素检测方法及传感器
CN110220959A (zh) * 2019-06-19 2019-09-10 长沙理工大学 一种基于聚合膜修饰电极的l-谷氨酸检测方法及传感器

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Highly sensitive determination of L-tyrosine in pig serum based on ultrathin CuS nanosheets composite electrode;Qin Zhu et al;《Biosensors and Bioelectronics》;20190529;第140卷;111356 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110887880A (zh) 2020-03-17
WO2021103683A1 (zh) 2021-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110887881B (zh) 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-色氨酸的方法
Zhang et al. Electrochemical DNA sensor for inorganic mercury (II) ion at attomolar level in dairy product using Cu (II)-anchored metal-organic framework as mimetic catalyst
CN110082413B (zh) 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸检测方法及传感器
CN110133082B (zh) 一种适体传感器用电极材料，电化学适体传感器及其制备方法
CN109364995B (zh) 高分散石墨烯/Fe基金属有机骨架复合材料电化学传感器的制备方法及应用
CN110082416A (zh) 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸和多巴胺同时检测方法及传感器
CN112129940B (zh) 一种利用胆红素氧化酶放大检测信号的阴极光电化学免疫传感器及其制备方法与应用
CN110887880B (zh) 一种基于甲醛媒介作用选择性检测l-酪氨酸的方法
CN109097029B (zh) 一种硅纳米粒子/金纳米簇比率荧光探针的合成及其对利福平比率荧光检测的应用
CN109046429A (zh) 海绵状金纳米粒子/石墨相氮化碳复合材料电化学传感器用于氯霉素检测
CN105699645A (zh) 一种电化学沙丁胺醇传感器的制备方法及应用
CN109187690B (zh) 一种GR/PSS/Pt/GCE电化学传感器的应用
CN110441294B (zh) 一种基于铁蛋白包裹Co3O4核壳结构的生物传感器的制备方法
CN109187687B (zh) 共轭有机微孔材料修饰电极的制备及作为过氧亚硝基阴离子电化学传感器的应用
CN109813787B (zh) 一种MnO2/Fe2O3@无定形碳复合材料、核酸适体传感器及其制备方法和应用
Shi et al. Colorimetric determination of biothiols with AuNPs@ MoS 2 NSs as a peroxidase mimetic enzyme
Shi et al. AuNPs@ MoSe2 heterostructure as a highly efficient coreaction accelerator of electrocheluminescence for amplified immunosensing of DNA methylation
CN113075279A (zh) 一种氮掺杂石墨炔量子点在检测氯霉素中的应用
Lin et al. A highly sensitive glutamic acid biosensor based on the determination of NADH enzymically generated by L-glutamic dehydrogenase
Yang et al. Voltammetric Detection of Ofloxacin in Human Urine at a Congo Red Functionalized Water‐Soluble Carbon Nanotube Film Electrode
CN210071734U (zh) 一种基于复合膜修饰电极的l-酪氨酸检测传感器
CN111537584A (zh) 一种亚甲基蓝-纳米花、电化学适配体生物传感器体系及其制备方法和应用
CN114878648B (zh) 一种半胱氨酸电化学传感器及其制备方法和应用
CN108132287B (zh) 一种基于聚吡咯纳米片复合材料的电流型免疫传感器的制备方法及应用
CN210376222U (zh) 一种基于复合膜修饰电极的苯乙醇胺a检测传感器

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant