CN110857289A - 一种紫杉醇提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫杉醇提取方法，其特征在于包括如下操作步骤：将红豆杉树皮、树枝打成粉，经35‑45℃烘干，用石油醚浸泡脱酯；用纯甲醇萃取浸提，萃取时间为16‑48小时，搅拌过液，在搅拌的不同时间内提取紫杉醇，浸提搅拌的时间以12小时；将已检测确认的洗脱液收集、浓缩、制成浸膏，在少量乙腈中得结果晶，滤出的残渣再用甲醇水溶液洗涤2‑3次即可得到紫杉醇的结晶，过滤烘干即可，紫杉醇纯度达到91.52%‑98.5%。
Description
技术领域
本发明涉及从红豆杉中提取紫杉醇的方法。
背景技术
美国化学家瓦尼（M.C.Wani）和沃尔（MonreE.Wall）,于1963年首次从一种生长在美国西部大森林中的短叶红豆杉树皮和木材中得到了紫杉醇的粗提物并发现其具有抗癌活性。但直到1969年，紫杉醇单体才被分离出来，此后，红豆杉属的多种植物中均发现有紫杉醇存在。随后，全世界通过在临床试验，科学家们得到了紫杉醇对于治疗卵巢癌，乳腺癌、肺癌、大肠癌、黑色素癌、头颈部癌、淋巴癌、脑癌均有显著的疗效，是继阿霉素和顺铂之后最热点的抗癌药物。
目前，已经公开了多种紫杉醇的提取方法，这些方法中各有优点和缺陷。发明内容
本发明旨在提供一种紫杉醇提取方法，确保提取的紫杉醇纯度相对高，
包括如下操作步骤：
1）浸膏制备
将红豆杉树皮、树枝打成粉，经35-45℃烘干，用石油醚浸泡脱酯；
2）用纯甲醇萃取浸提，萃取时间为16-48小时，搅拌过液，在搅拌的不同时间内提取紫杉醇，浸提搅拌的时间以12小时；
3）将已检测确认的洗脱液收集、浓缩、制成浸膏，在少量乙腈中得结果晶，滤出的残渣再用甲醇水溶液洗涤2-3次即可得到紫杉醇的结晶，过滤烘干，紫杉醇纯度达到91.52%-98.5%。
具体实施方式
1、材料
南方红豆杉（Taxus mairei）枝叶取自贵州省惠水县三都镇鸽河6年树龄的南方红豆杉和云南红豆杉鲜枝叶各1000Kg，在高镇一个食用菌栽培场经5天晒干后粉碎过筛120目的细粉备用；
仪器设备
1）JJ-1精密增力电动搅拌仪，2）SENCOR-201旋转蒸发仪，3）玻璃硅胶柱为2CMX40CM，4）UV-2802PC/PCS型分光光度计，5）Sigma-3k18低温离心机4℃，6）高效液相色谱仪，7）氧化铝装置，8）蒸馏水器，9）空气压缩抽滤器，10）通风消化橱，11）层析缸，12）电热鼓风干燥箱，13）电冰箱，14）6孔恒温水浴锅；
化学试剂
10-DABⅢ对照品（Sigma公司、纯度98%），甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醛丁酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、石油醚、乙腈均为分析纯试剂；
2）浸膏制备
取50个塑料桶，每个装30Kg红豆杉细粉，先经45℃烘干,用石油醚预处理,再用50Kg甲醇冷浸,加以搅拌,超声30分钟,反复2次,浸渍液过滤,减压浓缩,加入正已烷75Kg萃取分液,重复操作2次,用旋转蒸发仪旋干溶剂,制成浸膏；
3）紫杉醇的提取
将浸膏置于塑料桶内加入氯仿与水的混合液提取，氯仿层减压浓缩至上柱样品；用硅胶层析柱正相色谱柱分离，分段收集洗脱液，紫监测，收集有效段合并浓缩、在甲醇水中重结晶；
4）提取、分离、纯化工艺流程如下：
红豆杉枝叶——干燥与粉碎——有机溶剂浸提——浸膏——固液萃取——液液萃取——已烷沉淀——硅胶层析柱层析——结晶——TLC检测——高效液相色谱检测；
本研究用固液萃取法提取紫杉醇，石油醚和浸膏用到5倍：1倍时，浸出的杂质数量不再有明显的增加；
用柱层析来分离、纯化紫杉醇有两种常用的柱：一是正相硅胶、氧化铝，二是反相柱C18萃取柱；
苯基—硅胶色谱柱
用CHCl2和甲醇的混合溶液洗脱可分离出两个峰，在色谱流动相中添加0.05%的水时，分离得到了高纯度的紫杉醇，经常压，硅胶柱可获得了纯度为14%的紫杉醇，然后采用不同的催化剂，再用液相法合成的苯基—硅胶介质分离的紫杉醇纯度可达58%，再经过5次层析，紫杉醇含量为91.52%、98.5%。
分析测试方法
采用反相高效液相色谱RP-HPlc方法检测，分析柱为Kromasil C18柱250mm×4.6mm,5um,流动相为乙腈—水30：70，流速为2.0ml/min,每次进样体积为10ul，进样间隙用纯乙腈对柱子进行梯度洗脱，紫杉醇最大吸收波长为227nm，检测器测定波长为232nm，温度30℃，相关数据计算均采用峰面积归一化法；
预处理
由于红豆杉枝叶中含有大量蜡质、植物色素诸如叶绿素等低极性杂质，故在提取前首先加入低极性溶剂如正已烷，石油醚浸泡脱酯，以除去大量存在的此类非极性物质，简化后继操作，该法可除去红豆杉枝叶中多达72%的极性比10—DABⅢ小且可溶于正已烷的杂质；
有机溶剂粗提
用纯甲醇浸提，所需萃取时间为16-48小时，方法是将南方和云南红豆杉枝叶的细粉在45℃下烘干，甲醇浸提，搅拌过液，在搅拌的不同时间内提取紫杉醇，浸提搅拌的时间以12小时左右为佳；
重结晶
将已检测确认的洗脱液收集、浓缩、制成浸膏，在少量乙腈中得结果晶，滤出的残渣再用甲醇/水洗涤2-3次即可得到紫杉醇的结晶、抽滤烘干、称重、总计419.16克，紫杉醇纯度达到TN#91.50%,TN#98.5%。
Claims (1)
1.一种紫杉醇提取方法，其特征在于包括如下操作步骤：
浸膏制备
将红豆杉树皮、树枝打成粉，经35-45℃烘干，用石油醚浸泡脱酯；
2）用纯甲醇萃取浸提，萃取时间为16-48小时，搅拌过液，在搅拌的不同时间内提取紫杉醇，浸提搅拌的时间以12小时；
3）将已检测确认的洗脱液收集、浓缩、制成浸膏，在少量乙腈中得结果晶，滤出的残渣再用甲醇水溶液洗涤2-3次即可得到紫杉醇的结晶，过滤烘干即可。
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