CN110840969B - 一种治疗丙型肝炎的中药组合物及其应用 - Google Patents

一种治疗丙型肝炎的中药组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗丙型肝炎的中药组合物及其应用，按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5‑1.5份、白蔹0.5‑1.5份。本发明材料易得，可有效抑制丙型肝炎病毒，同时降低治疗成本，减少各种副作用和不良反应，因此用于治疗丙型肝炎具有良好的前景。

Description

一种治疗丙型肝炎的中药组合物及其应用
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗丙型肝炎的中药组合物及其应用。
背景技术
丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命危害极大。我国HCV感染者超过4000万，且感染人数持续上升。目前还没有有效疫苗预防HCV感染，临床上治疗丙型肝炎主要为直接抗病毒药物(DAAs)。当前第三代DAAs是最新的泛基因型抗HCV复方药物，其能有效地治疗所有HCV基因型，治愈率超过90％且无需干扰素。尽管这些药物已达成“治愈HCV”的目标，但是人们仍担忧未来DAAs的广泛使用容易产生病毒的耐药性突变。DAAs在治疗期间易引起患者抑郁和抑郁相关综合症，从而导致治疗中断或诱发的肝纤维化和肝癌。这是目前DAAs药物治疗丙型肝炎过程中所不能解决的，而且目前DAAs的治疗费用也十分昂贵，给国家和社会带来的严重经济负担。因此，多靶点药物联合治疗并防治HCV耐药性及治疗过程中引发的相关症是治疗HCV感染的新发展方向。
传统中药天然具备多成分、多靶点的作用方式，且可以对抗多药耐药性，其毒副作用较低，成本费用较低，因此，如能从中药中寻找和开发治疗成本低的、且能改善HCV患者生存质量的新型抗HCV中药，将有效降低患者的经济负担，也使病患者有更多的选择，将是病患者的福音。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗丙型肝炎的中药组合物，其可有效抑制丙型肝炎病毒，同时降低治疗成本和减少各种副作用。
本发明的另一个目的是将上述中药组合物应用于制备治疗丙型肝炎的药物。
本发明的目的是这样实现的：一种治疗丙型肝炎的中药组合物，其特征在于：按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0.5-1.5份。
优选的，按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.8-1.2份、白蔹0.8-1.2份。
更优选的，按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮1份、白蔹1份。
一种中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于；所述中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0-1.5份。
优选的，所述中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0.5-1.5份；或者，配方只包含合欢皮。
所述中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.8-1.2份、白蔹0.8-1.2份。
所述中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮1份、白蔹1份。
所述的药物的有效成分为所述中药组合物的水提物。
所述药物为口服剂型。
所述的药物为汤剂，或者是由所述中药组合物的水提物和药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成的丸剂、膏剂、片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂、胶囊剂或滴丸剂。
本发明材料易得，可有效抑制丙型肝炎病毒，同时降低治疗成本，减少各种副作用和不良反应，因此用于治疗丙型肝炎具有良好的前景。
附图说明
图1是本发明样品与阳性药物对HCV的抑制作用和对细胞的毒性作用，其中，Inhibition rate为抑制率，Cell viability为细胞存活率。
具体实施方式
本发明是一种治疗丙型肝炎的中药组合物，其特征在于：按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0.5-1.5份。优选的，按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.8-1.2份、白蔹0.8-1.2份。更优选的，按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮1份、白蔹1份。
合欢皮为豆科植物合欢的干燥树皮，其性味甘、平。有解郁、和血、宁心、消痈肿之功。有治心神不安、忧郁、失眠、肺痈、痈肿、瘰疠、筋骨折伤之效。
白蔹为葡萄科植物白蔹的干燥块根，其苦，微寒。可以清热解毒，消痈散结，敛疮生肌。用于痈疽发背，疔疮，瘰疬，烧烫伤。
一种中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0-1.5份，该中药组合物应用于制备治疗丙型肝炎的药物。优选的，所述中药组合物按重量份数计算，配方由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0.5-1.5份；更优选为合欢皮0.8-1.2份、白蔹0.8-1.2份；最优选为合欢皮1份、白蔹1份。或者，配方只包含合欢皮，即合欢皮在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用。
优选的，所述的药物的有效成分为所述中药组合物的水提物。优选的，所述药物为口服剂型，例如为汤剂，或者是由中药组合物的水提物和药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成的丸剂、膏剂、片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂、胶囊剂或滴丸剂等。水提物可以按常规的水提工艺进行，例如：水提两次，每次添加药材量5-15倍的水进行煎煮，煮沸提取0.5-1.5小时，然后合并提取液过滤蒸发浓缩。
以下通过具体例子对本发明进行进一步的阐述，但本发明并不限于此特定例子。
实施例1(片剂)
药方组成：称取合欢皮、白蔹以1:1的重量比例混合，加10倍量的蒸馏水浸泡30min后，用中药煎煮壶煎煮，先武火煮至沸腾，然后再调至文火煎煮1h，停止加热，用纱布趁热过滤，药渣再次加入10倍量的蒸馏水，重复上述步骤，合并滤液，将滤液用高速离心机以3000r/min离心15min，取上清液浓缩，真空干燥48h，研磨成粉即得合欢饮药粉。
然后，与药用辅料混合，通过相应剂型的工艺制成片剂。
实施例2(汤剂)
药方组成：称取合欢皮15克、白蔹15克混合，加10倍量的蒸馏水浸泡30min后，用中药煎煮壶煎煮，先武火煮至沸腾，然后再调至文火煎煮1h，停止加热，用纱布趁热过滤，即得。
实施例3(冲剂)
药方组成：合欢皮、白蔹以0.8:1的比例混合。合欢饮药粉与药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成的冲剂。其他同实施例1。
实施例4(汤剂)
药方组成：合欢皮5克、白蔹5克混合。其他同实施例2。
实施例5(胶囊)
药方组成：合欢皮、白蔹以1.5:0.8的比例混合。合欢饮药粉与药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成胶囊剂。其他同实施例1。
实施例6(汤剂)
药方组成：合欢皮15克。其他同实施例2。
实施例7(冲剂)
药方组成：合欢皮、白蔹以1.5:0.5的比例混合。合欢饮药粉与药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成的冲剂。其他同实施例1。
对比试验
1实验材料
1.1样品制备：
称取适量合欢皮，加10倍量的蒸馏水浸泡30min后，用中药煎煮壶煎煮，先武火煮至沸腾，然后再调至文火煎煮1h，停止加热，用纱布趁热过滤，药渣再次加入10倍量的蒸馏水，重复上述实验，合并滤液，减压浓缩，真空干燥48h，研磨成粉，即得合欢皮粉末。
称取适量白蔹，加10倍量的蒸馏水浸泡30min后，用中药煎煮壶煎煮，先武火煮至沸腾，然后再调至文火煎煮1h，停止加热，用纱布趁热过滤，药渣再次加入10倍量的蒸馏水，重复上述实验，合并滤液，减压浓缩，真空干燥48h，研磨成粉，即得白蔹粉末。
称取合欢皮、白蔹以1:1的比例混合，加10倍量的蒸馏水浸泡30min后，用中药煎煮壶煎煮，先武火煮至沸腾，然后再调至文火煎煮1h，停止加热，用纱布趁热过滤，药渣再次加入10倍量的蒸馏水，重复上述实验，合并滤液，将滤液用高速离心机以3000r/min离心15min，取上清液浓缩，真空干燥48h，研磨成粉，即得合欢饮粉末。
1.2病毒株：检测所用病毒株为含有Rluc报告基因的感染性HCV 2a型病毒株，由中科院武汉病毒研究所制备保存提供。
1.3细胞模型：检测所用细胞系为HCV易感细胞系肝癌细胞株Huh7.5.1，由中科院武汉病毒研究所传代保存提供。细胞培养条件：培养于添加10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养液，在37℃和5％CO2培养箱中培养。
1.4受检样品：受检样品合欢皮粉末、白蔹粉末、合欢饮粉末由南方医科大学中医药学院提供，阳性对照药物2-甲基胞苷(2’CMC)由中科院武汉病毒研究所提供。
受检样品药物用DMEM培养基从4倍最高测试浓度起连续3倍梯度稀释8个梯度，分别为1000、333、111、37、12、4、1.37、0.45μg/ml。
阳性对照药物用DMEM培养基从4倍最高测试浓度起连续3倍梯度稀释8个梯度，分别为30、10、3.34、1.11、0.37、0.12、0.04、0.01μM。
2实验原理及方法
2.1样品的细胞毒性检测
实验采用CellTiter-GloTM(Promega)试剂盒检测样品对细胞的毒性作用。
实验原理：CellTiter-Glo试剂盒通过对ATP进行定量测定来检测培养物中活细胞数目。有代谢活性细胞的呼吸作用和其他生命活动过程可以产生ATP，试剂盒中使用萤光素酶生成的稳定辉光型信号，发光过程中萤光素酶需要ATP的参与。向细胞培养基中加入CellTiter-Glo试剂测量发光值，光信号和体系中ATP量成正比，而ATP量和活细胞数呈正相关，因此光信号值可以反映活细胞的数目。
实验步骤：将Huh7.5.1细胞接种于96孔细胞培养板中，细胞贴壁后备用。药物用DMEM培养基从4倍最高测试浓度起连续3倍梯度稀释8个梯度。将药物及适量培养基加入到细胞中，于37℃的CO2培养箱中培养。加药培养72h后，显微镜下观察药物引起的细胞病变效应(CPE)，加入CellTiter-Glo检测细胞存活率。药物对细胞的毒性以细胞的活性表示。
计算公式：细胞活性(％)＝药物组数值/细胞对照组平均值*100
2.2样品的抗病毒活性检测
实验采用Renilla Luciferase Assay System(Promega)试剂盒检测化合物对HCV的抑制活性。
实验原理：含有Rluc报告基因的HCV病毒株感染Huh7.5.1细胞后，Rluc蛋白随着病毒的复制得以表达，Rluc报告基因的表达水平可以反映HCV病毒的复制水平。通过检测Rluc酶活来确定化合物对病毒的抑制效果。
方法步骤：Huh7.5.1细胞接种于96孔细胞培养板中培养过夜后备用。药物用DMEM培养基从4倍最高测试浓度起连续3倍梯度稀释8个梯度。将药物及病毒液加入到细胞中，于37℃的CO2培养箱中培养。加药加病毒培养72h后，用Renilla Luciferase Assay Kit检测Rluc读值。实验设定2’CMC为阳性药物对照、不加病毒和化合物的细胞孔为细胞对照、只加病毒的孔为病毒对照。
计算公式：抑制率(％)＝100-(样品孔数值-细胞对照数值)/(病毒对照数值-细胞对照数值)*100
3检测结果
通过检测，阳性药物2’CMC及受检样品对HCV病毒的具体抑制作用和对Huh7.5.1细胞的毒性结果如表1及图1所示。
表1 样品对HCV的抑制作用和对细胞的毒性作用
Figure BDA0002285029290000061
注：SI＝CC50/EC50
EC50即指半数病毒抑制有效浓度，CC50指致半数细胞毒性所需浓度。
本实验的SI＝CC50/EC50数值表明受试样品的半数抑制病毒的有效浓度远低于细胞毒性的半数有效浓度，即样品在较高浓度下才显示出细胞毒性，而样品在较低浓度下就可以已经显示出抑制病毒活性，因此，本发明样品在EC50时是具有较高的安全性。
4总结
中药普遍具有“一药多用”的基本特征，即同时具有多种药理作用。本实验通过在Huh7.5.1细胞系上检测合欢皮水提物作用后HCV感染的复制水平，结果表明，与阳性对照药物2’CMC对HCV 2a型病毒具有剂量依赖的抑制作用，合欢皮在所检测浓度范围内对HCV 2a在Huh7.5.1细胞系中的复制都具有明显的抑制效果，白蔹对HCV 2a在Huh7.5.1细胞系中的复制具有一定的抑制效果。合欢皮与白蔹合用对HCV 2a在Huh7.5.1细胞系中的复制都具有显著的抑制效果，与阳性对照药物2’CMC相仿。合欢皮作为传统的安神药，中医临床主要用于治疗心神不宁，忧郁失眠，在中医临床常与白蔹配伍应用。本发明发现此前从未报道过的合欢皮与白蔹配伍使用具有显著的抗HCV作用，作为传统中药安神方剂具有明确的抗HCV作用，因此有理由相信该中药组合能够解决当前一线临床DAAs在治疗HCV期间易引起患者抑郁和抑郁相关综合征的缺陷，改善HCV患者生存质量，降低患者的经济负担。

Claims (6)

1.一种中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述中药组合物按重量份数计算，由以下组分组成：合欢皮0.5-1.5份、白蔹0.5-1.5份。
2.根据权利要求1所述中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述中药组合物按重量份数计算，由以下组分组成：合欢皮0.8-1.2份、白蔹0.8-1.2份。
3.根据权利要求1所述中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述中药组合物按重量份数计算，由以下组分组成：合欢皮1份、白蔹1份。
4.根据权利要求1所述中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述的药物的有效成分为所述中药组合物的水提物。
5.根据权利要求1所述中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述药物为口服剂型。
6.根据权利要求5所述中药组合物在制备治疗丙型肝炎的药物上的应用，其特征在于：所述的药物为汤剂，或者是由所述中药组合物的水提物和药用辅料混合并通过相应剂型的工艺制成的丸剂、膏剂、片剂、冲剂、袋泡剂、口服液剂、胶囊剂或滴丸剂。
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