CN101375951B - 一种治疗乙型肝炎的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抑制治疗乙型肝炎的药物组合物，该组合物由原料药叶下珠和虎杖组成，通过分别提取各原料药的药效部位，再将其有效部位合并，即可得到本发明活性提取物。本发明组合物具有抗乙肝病毒的作用，可用于制备具有治疗乙肝疾病的药物。

Description

一种治疗乙型肝炎的药物组合物

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种由叶下珠和虎杖组成的中药复方，本发明复方具有抗乙肝病毒的作用。

背景技术

当前全世界约有20亿人遭受过乙型肝炎病毒(HBV)的侵袭，其中有3.5亿人次发展成慢性HBV感染者。慢性乙型肝炎可发展为肝硬化和肝癌，全球每年约有100万人死于HBV感染相关的疾病。我国为乙型肝炎高发病区，约有50％的人感染过HBV，慢性HBV携带者占全国人口的9.75％。当前，国内外用于治疗乙肝的抗病毒药物主要有干扰素及拉米夫定，但效果不很理想，且容易产生耐药性。因此，安全、有效、稳定的药物已显得非常必要，中药在这方面有其独特的疗效。

叶下珠(Phyllanthus urinaria L.)为大戟科叶下珠属植物，有平肝清热、利水解毒之功效，主要用于治疗传染性肝炎、肠炎、痢疾、肾炎水肿、小儿疳积等。1988年印度学者Thyagarajan在英国LANCET杂志首次报道苦味叶下珠具有抗HBV作用，能使59％HBV携带者乙型肝炎s抗体(HBsAg)转阴，引起了国内外极大的关注。其主要有效成分为总酚酸类化合物。

虎杖为廖科植物虎杖polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎及根，主要含有蒽醌类化合物、黄酮、白藜芦醇苷、水溶性多糖和鞣质等成分。虎杖性寒微苦，归肝、胆、肺经，有祛风湿、止咳化痰之功效。中医临床用于治疗湿热黄疸、肺热咳嗽、疮痈肿毒、经闭痛经、水火烫伤、跌打损伤等。现代药理学表明，虎杖具有扩张血管、抗血栓、抗休克、降血脂、抗菌抗病毒、抗氧化和保肝的作用。文献(洪照友，高毅，等.中药虎杖对大鼠肝脏缺血性损伤保护形态学观察[J].世界华人消化杂志，2000，8(2)：162-164)表明，虎杖煎剂具有改善损伤肝组织的微循环，抑制白细胞、血小板与肝脏内皮细胞的黏附，达到促进肝细胞再生、修复损伤的能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由叶下珠和虎杖组成的药物组合物。本发明中，青叶胆与虎杖的比例为1∶50-50∶1，优选为1∶10-10∶1，更优选为叶下珠10重量份，虎杖5重量份。

众多研究表明，叶下珠具有较强的抗乙肝病毒作用，而虎杖则具有保肝作用，可以保护肝细胞免受损伤。在研究中我们意外发现，将叶下珠和虎杖组合在一起用于治疗乙型肝炎，具有令人惊喜的效果，其联合应用较单独用药效果明显增强。

本发明通过适当的提取分离方法，分别提取叶下珠和虎杖的有效部位，而后将两活性部位混合在一起，即成本发明组合物活性提取部位。

本发明中，叶下珠有效部位的提取可以通过如下方法得到：称取叶下珠，粉碎成粗粉，以8～12倍量的0-60％的乙醇提取1～3次，过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的0.5～2倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位。

提取时，所用的提取方法可以是温浸法，也可以是回流提取或煎煮法。

本发明中，提取叶下珠有效部位时，溶剂可以是用水煎煮提取，温水浸泡提取；也可以用小于60％的乙醇回流提取。

本发明中，虎杖有效部位的提取可以通过如下方式实现：取虎杖，粉碎成粗粉，以8-10倍量的50％-80％的乙醇回流提取2～4次，每次1～2小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用60％-80％的乙醇洗脱3-6个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物。

将叶下珠提取物和虎杖提取物合并，混匀，即可得到本发明组合物活性提取物。

本发明中，加入药剂上可接受的制药辅料，通过适当的方法，即可制成所需的各种剂型，本发明优选口服制剂。

本发明中，制药上可接受的辅料可以是粘合剂(可以是聚维酮、淀粉浆、纤维素等)、崩解剂(可以是干燥淀粉、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、聚乙烯比咯烷酮等)、润滑剂(可以是滑石粉、硬脂酸、硬脂酸钙镁、硬脂酸钙等)、矫味剂(可以是蔗糖、阿司巴甜、甜菊素、果糖等)、稳定剂(可以是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、稀释剂(可以是淀粉、糊精、糖粉、乳糖等)、润湿剂(可以是水或乙醇)、助流剂(可以是微粉硅胶)、赋形剂(可以是糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇；淀粉类衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精或羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维、羟丙基纤维、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙；硅酸盐衍生物如硅酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；阿拉伯胶；右旋糖苷)。

本发明中药组合物具有抗乙肝病毒的作用，可用于制备具有治疗乙型肝炎的药物。

具体实施例

本发明药物制备实施例

实施例1

叶下珠100g，粉碎成粗粉，以8倍量的水提取1次，过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至相对密度约为1.15，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的0.5倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖5kg，粉碎成粗粉，以8倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次1小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用60％的乙醇洗脱3个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

实施例2

称取叶下珠5kg，粉碎成粗粉，以12倍量的60％的乙醇提取3次，每次1小时过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的2倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖100g，粉碎成粗粉，以10倍量的80％的乙醇回流提取4次，每次2小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用80％的乙醇洗脱6个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

实施例3

称取叶下珠1kg，粉碎成粗粉，以9倍量的10％的乙醇提取3次，每次1小时过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的1倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖10kg，粉碎成粗粉，以9倍量的70％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用70％的乙醇洗脱5个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

实施例4

称取叶下珠10kg，粉碎成粗粉，以9倍量的20％的乙醇提取2次，每次1小时过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的1倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖1kg，粉碎成粗粉，以8倍量的60％的乙醇回流提取2次，每次1.5小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用60％的乙醇洗脱5个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

实施例5

称取叶下珠10kg，粉碎成粗粉，以9倍量的10％的乙醇提取3次，每次1小时过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的1倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖5kg，粉碎成粗粉，以9倍量的70％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用70％的乙醇洗脱5个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

实施例6

称取叶下珠5kg，粉碎成粗粉，以9倍量的10％的乙醇提取3次，每次1小时过滤，合并各次滤液，60℃减压浓缩至无醇味浸膏状，加适量蒸馏水分散，蒸馏水的用量与浸膏的量的比例约为1g浸膏1ml蒸馏水，然后用水饱和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量为分散液的1倍，至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，薄膜浓缩或减压浓缩，干燥，即得叶下珠活性部位；

虎杖5kg，粉碎成粗粉，以9倍量的70％的乙醇回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并乙醇提取液，薄膜或减压浓缩至无醇味，浓缩液相对密度约为1.15浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用70％的乙醇洗脱5个柱体积，合并乙醇洗脱液，薄膜或减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

将叶下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混匀，即得本发明活性提取物。

药理实施例

以下从药理实施例对本发明的有益效果做进一步说明。以下药理实施例中，所用的原料药叶下珠10重量份，虎杖5重量份。需要说明的是，用此重量份说明不是为了限制本发明原料配比关系，而是一种非限制性的举例说明。

给药：按本发明制备方法得到的本发明提取物；

同工艺得到的青叶胆提取物、虎杖提取物。

(1)对鸭乙型肝炎病毒的影响

重庆麻鸭蛋孵化的1日龄雏鸭，经腹腔接种0.1mLDHBV-DNA阳性血清，1周后颈外筋脉抽血，用地高辛标记的DHBV-DNA探针经斑点杂交检测选出感染阳性鸭，饲养2～3周后作为实验动物。正常对照组用未感染病毒的同龄鸭。

将40只DHBV-DNA阳性鸭随机分为4组，分别每日清晨ip给药。另设正常对照组。每天给药一次，连续一个月，各组动物于用药前、用药2周、用药1个月、停药后1周分别于颈外静脉取血，分离血清于-20℃保存，采用斑点杂交法(陈压西，等.重庆医科大学学报，1994：19(4)：295)，用地高辛探针，将用药前后4次血清统一对比检测血清DHBV-DNA，以与探针同源性的质粒DNA倍比稀释后点样与硝酸纤维膜上杂交显示的斑点颜色深浅为标准，与待检测血清斑点杂交斑点的颜色深浅比较来定量，结果见表1。用药1个月测血清ALT、AST(赖氏法)，结果见表2。

表1本发明组合物对血清DHBV-DNA滴度的影响

与病毒对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2本发明用药1月后对血清转氨酶改变情况

与病毒对照组相比，^**P＜0.01

从表1中可以看出，各给药组均使血清DHBV-DNA滴度总体水平明显降低，停药后一周，各给药组的DHBV-DNA滴度总体回升也不明显，说明各给药组均具有一定的抑制乙肝病毒的作用。其中本发明联合用药组与病毒对照组相比，显著性明显(P＜0.01)，而单独用药组与病毒对照组相比，也具有差异性(P＜0.05)，不如联合用药效果强。从表3可以看出，用药1个月后，各给药组均比病毒对照组同一时相ALT明显下降，但AST变化不明显，说明各药物均具有显著降低转氨酶的作用，联合用药组作用较单独用药稍强，但不明显。

(2)体外抗HBV活性研究

将乙肝病毒细胞HBV 2.2.15解冻后常法(唐红，等.中华传染病杂志，1992：10(4)：215)接种到96孔板上，37℃5％CO2条件下培养4天，换治疗药物浓度分别为25、50、75、100μg/ml的RPMI1640完全培养基，每个浓度接种6孔，培养10天后测定(第五天时换液1次)，结果取平均值，求出对细胞基本无毒性的最高药物浓度为100μg/ml。选用基本无毒性的浓度三个，每个平均6孔，并设不加药物的对照，结果取平均值。将2.2.15细胞按常规方法传入96孔板，5％CO2条件下培养4天后，各孔分别换不同浓度药物培养基(50、75、100μg/ml)，继续培养10天并分别收集药物作用后10天的培养上清液，分别做HBsAg、HBeAg和HBV-DNA测定，操作按试剂盒说明书进行，结果如表3。

表3本发明对2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用

从表3可知，作用10天后，各药物组中，当浓度在75和100μg/ml时，叶下珠组和本发明组合物组对细胞HBeAg均具有有效(以抑制率大于50％为有效)，并可使培养上清液中的HBV-DNA量减少。同等剂量下，本发明组合物对2.2.15细胞HBeAg的作用强于叶下珠，说明当叶下珠与虎杖合用时，虎杖对叶下珠体外抗HBV活性有一定的协同增强作用。

以上体内体外实验证明，虎杖和叶下珠合用在治疗乙型肝炎时，具有协同增强的作用。

Claims (4)

1.一种治疗乙型肝炎的药物组合物，其特征是原料药重量配比为叶下珠∶虎杖＝1∶50-50∶1。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征是原料药叶下珠与虎杖的重量配比为1∶10-10∶1。

3.一种制备如权利要求1或2所述的药物组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取叶下珠，粉碎成粗粉，以0-60％的乙醇提取1～3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，以蒸馏水分散，用水饱和的正丁醇萃取至正丁醇萃取液颜色变淡，合并正丁醇萃取液，减压浓缩，干燥即得叶下珠活性提取物；

(2)取虎杖，粉碎成粗粉，以50％-80％的乙醇提取，过滤，合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至洗脱液颜色变淡，改用60％-80％的乙醇洗脱3-6个柱体积，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得虎杖活性提取物；

(3)将叶下珠活性提取物和虎杖活性提取物合并，混合均匀，粉碎，即得。

4.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。