CN110836803A - 一种无甲醛固定液 - Google Patents
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Abstract
本发明“一种无甲醛固定液”，公开了一种无甲醛的快速固定液及其制备方法，每1000ml该固定液中包括如下体积和质量的组份：无水乙醇680‑780ml，乙二醇聚氧乙烯醚200 70‑120ml，弱酸60‑90ml，曲拉通X‑100 1‑5ml，D(+)‑木糖3‑10g，酸碱缓冲剂1‑5g，补加水至1000ml。该无甲醛固定液不易对人体造成危害，而且固定速度快，实现了环保快速固定，可以用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测的固定。
Description
技术领域：
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种环保的无甲醛快速固定液及制备方法。
背景技术：
固定是生物医药研究中不缺少的基础技术，凡是需要组织学检查的标本(如器官、组织、植物根茎等)，离开活体后应尽快置于装有足够量固定液的容器中固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶，抑制细菌和霉菌的生长。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。传统的以福尔马林为主体配方的固定液的优点在于价格低廉，易于获取，但却让操作人员受到甲醛毒性的困扰。尤其在大量使用甲醛作为组织标本固定液的病理科，取材室内空气中弥散的甲醛浓度高出安全浓度很多倍。世界卫生组织国际癌症研究机构于2004年将甲醛由2类致癌物上升为1类致癌物，甲醛为无色有刺激性气体，分子量30，又称蚁醛，对人眼、鼻、口等有刺激作用。
因此，研究替代品来替代甲醛用于组织的固定和病理科常规操作具有重要意义，目前已有部分甲醛替代物用于组织的固定。发明专利“标本防腐固定促进剂(专利号为2011010291911.6)”公开了一种标本防腐固定促进剂，虽然不含甲醛，但有如下不足：1、月桂氮卓酮、噻酮、薄荷醇及肉豆蔻酸异丙脂价格较贵，较难大面积普及使用；2、从专利名称上即可知，其更为强调防腐和促进功能。发明专利“动物组织石蜡切片的绿色环保制作技术(专利号为201110175687.9)”公布了一种一种应用于农业大学动物医学等专业对动物组织进行石蜡切片的技术，其固定液(100ml固定液的比例是：85％酒精91ml，甲醛4ml，冰醋酸5ml)含有甲醛，实际固定时并非绿色环保。发明专利“一种无甲醛组织标本固定液(专利号为201110023748.X)”包括如下体积份数的组分：乙醇710-790份、冰乙酸20-40份、丙酮10-30份、多元醇40-60份、三氯乙酸40-60份、表面活性剂40-60份、增溶剂40-60份，虽然不含甲醛，但其中含有易制毒化学品丙酮，且丙酮有特殊的辛辣气味和腐蚀性，对人体有害；三氯乙酸属于危险化学品，有强烈的腐蚀性，对人体亦有害，并非理想的环保固定液。发明专利“一种无甲醛组织固定防腐液及其制备方法(申请号为201711172988.X)其中的渗透压调节剂中含有蔗糖，而蔗糖易于细菌、霉菌等微生物生长，防腐效果大打折扣；另外从专利申请的名称上即可知，其更为强调防腐功能。
发明内容：
为了解决上述技术的不足，本发明“一种无甲醛固定液”旨在提供一种无甲醛的快速固定液及其制备方法，每1000ml该固定液中包括如下体积和质量的组份：无水乙醇680-780ml，乙二醇聚氧乙烯醚20070-120ml，弱酸60-90ml，曲拉通X-1001-5ml，D(+)-木糖3-10g，酸碱缓冲剂1-5g，补加水至1000ml。该无甲醛固定液不易对人体造成危害，而且固定速度快，实现了环保快速固定，可以用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测的固定。
本发明所采用的技术方案是：
一种无甲醛固定液，其特征在于，上述固定液每1000ml包括如下体积和质量的组份：无水乙醇680-780ml，乙二醇聚氧乙烯醚20070-120ml，弱酸60-90ml，曲拉通X-1001-5ml，D(+)-木糖3-10g，酸碱缓冲剂1-5g，补加水至1000ml，该试剂无甲醛同时兼有快速固定的作用。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的无水乙醇是指不低于分析纯级别的无水乙醇，所述的曲拉通X-100是指不低于化学纯级别的曲拉通X-100，所述的D(+)-木糖是指不低于生物试剂级别的D(+)-木糖。
其中优选的方案是，无水乙醇采用GR级别。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的乙二醇聚氧乙烯醚200是指平均分子量在190～210之间的液体状的乙二醇聚氧乙烯醚。
其中优选的方案是，乙二醇聚氧乙烯醚200采用平均分子量在195～205之间的乙二醇聚氧乙烯醚。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的弱酸是指甲酸、丙酸的一种或二种。
其中优选的方案是，弱酸采用甲酸。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的酸碱缓冲剂是指磷酸氢二钾、磷酸二氢钾的一种或二种。
其中优选的方案是，酸碱缓冲剂采用磷酸氢二钾、磷酸二氢钾的混合物，且磷酸氢二钾、磷酸二氢钾均不低于分析纯级别。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的水是指蒸馏水、去离子水的一种或二种。
其中优选的方案是，水采用去离子水。
一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述无水乙醇、乙二醇聚氧乙烯醚200、弱酸、曲拉通X-100、D(+)-木糖、酸碱缓冲剂、水，依次加入混合混匀。
其中优选的方案是，上述固定液每1000ml包括如下体积和质量的组份：无水乙醇700-730ml，乙二醇聚氧乙烯醚20090-110ml，弱酸70-85ml，曲拉通X-1002-3ml，D(+)-木糖4-7g，酸碱缓冲剂2-4g，补加水至1000ml。
一种无甲醛固定液，其特征在于，该固定液用于动物、植物、细菌、真菌和细胞样本的固定。
一种无甲醛固定液，其特征在于，该固定液用于病理组织制片、石蜡组织切片染色的固定，该固定液用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测。
本发明“一种无甲醛固定液”中的无甲醛固定液的制备方法，包括如下步骤：取上述无水乙醇、乙二醇聚氧乙烯醚200、弱酸、曲拉通X-100、D(+)-木糖、酸碱缓冲剂、水，依次加入混合混匀，50-300目过滤，密闭保存，即为无甲醛固定液。
需要说明的是，在所述的无甲醛固定液的制备过程中，各所述的试剂应分批依次加入。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的无甲醛固定液。
本发明“一种无甲醛固定液”与现有技术相比具有以下优点：
1、以无水乙醇、乙二醇聚氧乙烯醚200、D(+)-木糖、酸碱缓冲剂等混合组成的新型无甲醛固定液进行固定的方法，具有不含甲醛、无色特性，不易对人体造成危害，对人体和环境影响也极小。
2、配制好的无甲醛固定液与常规甲醛固定液的固定效果基本一致，可替代甲醛进行固定。
3、配制好的无甲醛固定液与常规甲醛固定液相比，固定速度更快。
4、配制好的无甲醛固定液挥发性低。
附图说明：
图1为本发明“一种无甲醛固定液”处理的动物组织肉眼示意图。其中图1A为实施例一以无甲醛固定液进行固定2小时的肉眼观察结果，图1B为实施例一以常规甲醛固定液进行固定2小时的肉眼观察结果。
图2为本发明“一种无甲醛固定液”处理的动物组织肉眼示意图。其中图2A为实施例二以无甲醛固定液进行固定1.5小时的肉眼观察结果，图2B为实施例二以常规甲醛固定液进行固定4.5小时的肉眼观察结果。
具体实施方式：
以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种无甲醛固定液”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种无甲醛固定液”，用于动物组织的固定，每1000ml无甲醛固定液的组份为：无水乙醇750ml，乙二醇聚氧乙烯醚20080ml，甲酸70ml，曲拉通X-1002ml，D(+)-木糖5g，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的混合物2g，补加去离子水至1000ml。以下实施例以相同处理时间、组织、温度的常规甲醛固定液作为对照。
无甲醛固定液的制备方法：无水乙醇750ml，乙二醇聚氧乙烯醚20080ml，甲酸70ml，曲拉通X-1002ml，D(+)-木糖5g，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的混合物2g，补加去离子水至1000ml，依次混合，充分混匀，100目过滤，密闭保存，即为无甲醛固定液。
取经上述步骤配制的无甲醛固定液，对相同动物组织固定2小时；取常规甲醛固定液，对相同动物组织固定2小时；结果见附图1。
实验结果显示，以相同动物组织固定时，在同等条件下，以实施例一的无甲醛固定液与常规甲醛固定液对比，无甲醛固定液固定的组织硬度更高，提示无甲醛固定液固定速度更快。
实施例二
本发明“一种无甲醛固定液”，用于动物组织的固定，每1000ml无甲醛固定液的组份为：无水乙醇690ml，乙二醇聚氧乙烯醚200110ml，乙酸65ml，曲拉通X-1003ml，D(+)-木糖6g，磷酸氢二钾5g，补加蒸馏水至1000ml。以下实施例以不同处理时间，相同组织、温度的常规甲醛固定液作为对照。
无甲醛固定液的制备方法：无水乙醇690ml，乙二醇聚氧乙烯醚200110ml，乙酸65ml，曲拉通X-1003ml，D(+)-木糖6g，磷酸氢二钾5g，补加蒸馏水至1000ml，依次混合，充分混匀，150目过滤，密闭保存，即为无甲醛固定液。
取经上述步骤配制的无甲醛固定液，对相同动物组织固定1.5小时；取常规甲醛固定液，对相同动物组织固定4.5小时；结果见附图2。
实验结果显示，以相同动物组织固定时，在同等条件下，以实施例二的无甲醛固定液固定1.5小时的固定效果与常规甲醛固定液固定4.5相比，结果基本一致。从而提示无甲醛固定液固定较短时间即可达到常规甲醛固定液的效果。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述固定的时间、温度、样本可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
Claims (10)
1.一种无甲醛固定液，其特征在于，上述固定液每1000ml包括如下体积和质量的组份：无水乙醇680-780ml，乙二醇聚氧乙烯醚200 70-120ml，弱酸60-90ml，曲拉通X-100 1-5ml，D(+)-木糖3-10g，酸碱缓冲剂1-5g，补加水至1000ml，包括该无甲醛固定液的制备方法。
2.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的无水乙醇是指不低于分析纯级别的无水乙醇，所述的曲拉通X-100是指不低于化学纯级别的曲拉通X-100，所述的D(+)-木糖是指不低于生物试剂级别的D(+)-木糖。
3.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的乙二醇聚氧乙烯醚200是指平均分子量在190～210之间的液体状的乙二醇聚氧乙烯醚。
4.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的弱酸是指甲酸、丙酸的一种或二种。
5.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的酸碱缓冲剂是指磷酸氢二钾、磷酸二氢钾的一种或二种。
6.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的水是指蒸馏水、去离子水的一种或二种。
7.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：取上述无水乙醇、乙二醇聚氧乙烯醚200、弱酸、曲拉通X-100、D(+)-木糖、酸碱缓冲剂、水，依次加入混合混匀。
8.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，该固定液用于动物、植物、细菌、真菌和细胞样本的固定。
9.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，该固定液用于病理组织制片、石蜡组织切片染色的固定，该固定液用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测。
10.根据权利要求1所述的一种无甲醛固定液，其特征在于，该固定液用于临床检测试剂和科研试剂。
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