CN112006017A - 一种用于尿液分析的尿液存储保护液及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种用于尿液分析的尿液存储保护液及其制备方法与应用。所述用于尿液分析的尿液存储保护液的成分包含：氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、蔗糖、丙三醇、聚乙二醇辛基苯基醚、Proclin‑300、蒸馏水。该用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法主要包括：将相应比例的原料加入蒸馏水中，搅拌溶解。该尿液存储保护液储存于尿液收集器中，可用于尿液成分的生化与免疫分析。本申请的尿液存储保护液能有效抑制待检测尿液样本中细菌、真菌等各种微生物的繁殖，同时保持待检测尿液样本中各种物质含量的稳定，防止待检测尿液样本在收集、存储与运输过程中出现变质而影响检测结果的准确度。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于尿液分析的尿液存储保护液及其制备方法与应用。
背景技术
尿液是临床医学检验常用的检测样本，尿液中多种化学成分如：尿蛋白（尿总蛋白、尿白蛋白、尿微量白蛋白、尿视黄醇结合蛋白、尿免疫球蛋白等）、尿激素（尿儿茶酚胺、香草扁桃酸、17-羟皮质类固醇、17-酮类固醇、尿醛固酮等）、尿肌酐、尿丙酮、尿λ/κ轻链、尿氨基酸、尿胆原、尿胆红素、尿糖、尿酸、尿素、尿微生物（细菌、真菌、滴虫等）以及尿矿物质元素（钾、钠、氯、钙、磷）等的检测结果对多种重大疾病的诊断、治疗及预后判断都具有重要意义，因此尿液检验项目都是具有重大临床应用价值的检测项目。
然而尿液样本在收集、储存、运输等过程中极易受到环境影响与微生物污染而导致腐败变质，例如尿液在室温保存超过2小时，细菌等微生物会与尿液中的氨发生反应，导致很多尿液成分性质发生变化（包括：pH值改变、红细胞和白细胞破裂、蛋白质降解、晶体改变、尿液发生沉淀等），这些变化都会影响尿液检测结果的准确性，进而对多种疾病的临床诊断、治疗及预后判断都造成极大的影响。因此尿液样本的防腐对保证尿液临床检测结果的准确性具有极其重要的作用。目前，常用的尿液样本防腐方法主要有浓盐酸防腐法、冰醋酸防腐法、麝香草酚防腐法、甲苯防腐法、二甲苯防腐法等。
但是，以上各种防腐方法都具有一定的缺陷及危害。例如：浓盐酸防腐剂具有强烈的挥发性、刺激性与腐蚀性，对人体及环境具有较大的危害；冰醋酸防腐剂虽然酸性弱于浓盐酸防腐剂，但也具有较强的挥发性与腐蚀性，会对操作者的眼睛、呼吸道、消化道及皮肤、粘膜等具有强烈的刺激性作用。二甲苯和甲苯属于致癌物质，用量较难控制，且具有强烈的挥发性气味，易对皮肤、粘膜造成刺激性伤害，对中枢神经系统、造血系统也会造成严重伤害，对环境也有严重危害。此外，浓盐酸、冰醋酸、甲苯均为公安机关管制的易制毒化学品，二甲苯和甲苯还属于易燃易爆的危险品，不便携带与保存。本发明研制出一种新型尿液防腐剂（即尿液存储保护液）能有效抑制尿液样本中细菌、真菌等各种微生物的繁殖，同时能有效保持尿液样本中各种物质含量的稳定，可以提高尿液检测结果的准确度，还能避免对人体和环境造成损害，因此具有重要的价值与应用前景。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种用于尿液分析的尿液存储保护液及其制备方法与应用。该尿液存储保护液能有效抑制待检测尿液样本中细菌、真菌等各种微生物的繁殖，同时保持待检测尿液样本中各种物质含量的稳定，防止待检测尿液样本在收集、存储与运输过程中出现变质而影响检测结果的准确度，并且本发明所用原材料对人体和环境的危害极小。
本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明第一方面提供了一种用于尿液分析的尿液存储保护液，其配方包含以下成分：氯化钠（提供离子强度）、三羟甲基氨基甲烷（缓冲剂）、牛血清白蛋白（稳定剂）、蔗糖（分散剂）、丙三醇（表面活性剂）、聚乙二醇辛基苯基醚（表面活性剂）、Proclin-300（防腐剂）、蒸馏水（溶剂）。
优选地，所述的用于尿液分析的尿液存储保护液，其配方成分的相应浓度范围为：氯化钠的质量分数为0.5%-5.0%、三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为10mmol/L～1000mmol/L、牛血清白蛋白的质量分数为0.01%～1.0%、蔗糖的质量分数为0.5%～5.0%、丙三醇的体积分数为0.1%～1.0%、聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数为0.01%～0.1%、Proclin-300的体积分数为0.02%～1.0%、其余为蒸馏水。
进一步优选地，所述的用于尿液分析的尿液存储保护液，其配方成分的相应浓度为：氯化钠的质量分数为0.9%、三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为100mmol/L、牛血清白蛋白的质量分数为0.2%、蔗糖的质量分数为2.0%、丙三醇的体积分数为0.5%、聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数为0.02%、Proclin-300的体积分数为0.05%、其余为蒸馏水。
本发明第二方面提供了一种如上所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，制备步骤如下：
（1）在一个无菌容器中加入蒸馏水，然后依次添加氯化钠与三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取牛血清白蛋白置于一个无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加蔗糖、丙三醇、聚乙二醇辛基苯基醚及Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用盐酸调节步骤（4）制得的溶液D的pH值，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
优选地，所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，制备步骤如下：
（1）在一个10L～20L的无菌容器中加入3.5L～8.5L的蒸馏水，然后依次添加50g～500g氯化钠与100mmol～10000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取1g～100g牛血清白蛋白置于一个0.2L～1.0L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加50g～500g蔗糖、10mL～100mL丙三醇、1mL～10mL聚乙二醇辛基苯基醚以及2mL～100mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌20～60分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.0～8.0，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
进一步优选地，所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，制备步骤如下：
（1）在一个15L的无菌容器中加入6L的蒸馏水，然后依次添加90g氯化钠与1000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取20g牛血清白蛋白置于一个0.5L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加200g蔗糖、50mL丙三醇、2mL聚乙二醇辛基苯基醚以及5mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌30分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.5，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
本发明第三方面提供了一种如上所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的应用，将所述尿液存储保护液储存于尿液收集器中，并用于尿液成分的生化与免疫分析，所述的尿液收集器为一种可用于尿液存储、运输以及分析的尿液收集装置。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
（1）使用本发明的尿液存储保护液，尿液样本在室温下至少可以稳定保存一个星期；
（2）使用本发明的尿液存储保护液，对酶联免疫、化学发光、免疫胶体金、均相酶免疫、免疫比浊、胶乳增强免疫比浊等常见检验系统都没有任何干扰；
（3）本发明的尿液存储保护液配制过程简单、室温运输、使用方便，尿液样本到实验室后无需特殊处理即可直接检测；
（4）使用本发明的尿液存储保护液的样本可进行特种蛋白、肌酐、激素、氨基酸、有机酸、药物及药物代谢物等各种尿液成分的检验；
（5）本发明的尿液存储保护液配制完成后储存于尿液收集器中，可在室温下有效使用2年；
（6）本发明的尿液存储保护液对人体无毒无害，不会造成环境污染，特别适合各级各类医疗机构及第三方实验室使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步阐述，实施例的内容不作为对本发明的保护范围的限制。除非特别指明，以下实施例中所用的试剂、仪器、设备、耗材均可从正规采购渠道购买获得。
实施例1：用于尿液分析的尿液存储保护液的制备
（1）在一个10L的无菌容器中加入3.5L的蒸馏水，然后依次添加50g氯化钠与100mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取1g牛血清白蛋白置于一个0.2L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加50g蔗糖、10mL丙三醇、1mL聚乙二醇辛基苯基醚以及2mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌20分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.0，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
实施例2：用于尿液分析的尿液存储保护液的制备
（1）在一个20L的无菌容器中加入8.5L的蒸馏水，然后依次添加500g氯化钠与10000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取100g牛血清白蛋白置于一个1.0L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加500g蔗糖、100mL丙三醇、10mL聚乙二醇辛基苯基醚以及100mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌60分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至8.0，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
实施例3：用于尿液分析的尿液存储保护液的制备
（1）在一个15L的无菌容器中加入6L的蒸馏水，然后依次添加90g氯化钠与1000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取20g牛血清白蛋白置于一个0.5L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加200g蔗糖、50mL丙三醇、2mL聚乙二醇辛基苯基醚以及5mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌30分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.5，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
实施例4：尿液样本防腐效果对比实验
对上述实施例1至3制备的尿液存储保护液进行尿液样本防腐效果对比实验，使用上述的尿液收集器采集健康人的随机尿液样本并分为4组，其中1-3组按体积比1∶1的比例分别加入实施例1-3制备的尿液存储保护液，混合均匀；并将第4组未添加尿液存储保护液的尿液样本作为对照组。采用临床上常用的尿肌酐（生化酶法）、尿17-酮类固醇（均相酶免疫法）、尿皮质醇（酶联免疫法）、尿醛固酮（化学发光法）、尿酸（免疫胶体金法）、尿微量白蛋白（免疫比浊法）、尿免疫球蛋白G（胶乳增强免疫比浊法）等尿液检测试剂分别检测采集后0小时、常温储存24小时及常温储存7天的尿液样本，并结合尿液菌落计数的结果，来说明本发明的尿液存储保护液的防腐效果及其对尿液检测结果的影响。具体实验结果如表1所示：
表1 尿液样本检测结果
由上表可知，使用实施例1至3制备的尿液存储保护液，尿液样本在室温下至少可以稳定保存一个星期，尿液中菌落总数没有显著增加；并且使用实施例1至3制备的尿液存储保护液，对生化酶法、均相酶免疫法、酶联免疫法、化学发光法、免疫胶体金法、免疫比浊法、胶乳增强免疫比浊法等常见检验方法都没有任何影响。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明实施方式的限定。本领域技术人员应当清楚，在上述实施例的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动依然落入本发明技术方案所限定的范围之内。
Claims (7)
1.一种用于尿液分析的尿液存储保护液，其特征在于，其配方包含以下成分：氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、蔗糖、丙三醇、聚乙二醇辛基苯基醚、Proclin-300、蒸馏水。
2.根据权利要求1所述的用于尿液分析的尿液存储保护液，其特征在于，其配方成分的相应浓度范围为：氯化钠的质量分数为0.5%-5.0%、三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为10mmol/L～1000mmol/L、牛血清白蛋白的质量分数为0.01%～1.0%、蔗糖的质量分数为0.5%～5.0%、丙三醇的体积分数为0.1%～1.0%、聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数为0.01%～0.1%、Proclin-300的体积分数为0.02%～1.0%、其余为蒸馏水。
3.根据权利要求1或2任一项所述的用于尿液分析的尿液存储保护液，其特征在于，其配方成分的相应浓度为：氯化钠的质量分数为0.9%、三羟甲基氨基甲烷的摩尔浓度为100mmol/L、牛血清白蛋白的质量分数为0.2%、蔗糖的质量分数为2.0%、丙三醇的体积分数为0.5%、聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数为0.02%、Proclin-300的体积分数为0.05%、其余为蒸馏水。
4.一种如权利要求1或3任一项所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
（1）在一个无菌容器中加入蒸馏水，然后依次添加氯化钠与三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取牛血清白蛋白置于一个无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加蔗糖、丙三醇、聚乙二醇辛基苯基醚及Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用盐酸调节步骤（4）制得的溶液D的pH值，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
5.根据权利要求4所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
（1）在一个10L～20L的无菌容器中加入3.5L～8.5L的蒸馏水，然后依次添加50g～500g氯化钠与100mmol～10000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取1g～100g牛血清白蛋白置于一个0.2L～1.0L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加50g～500g蔗糖、10mL～100mL丙三醇、1mL～10mL聚乙二醇辛基苯基醚以及2mL～100mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌20～60分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.0～8.0，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
6.根据权利要求4-5任一项所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
（1）在一个15L的无菌容器中加入6L的蒸馏水，然后依次添加90g氯化钠与1000mmol三羟甲基氨基甲烷，同时进行搅拌制成溶液A；
（2）称取20g牛血清白蛋白置于一个0.5L的无菌烧瓶中，使用步骤（1）制得的溶液A溶解牛血清白蛋白，用搅拌器搅拌直到牛血清白蛋白粉末全部溶解，制成溶液B；
（3）待牛血清白蛋白完全溶解后，将步骤（2）制得的溶液B逐滴加入到步骤（1）制得的溶液A中制成溶液C；
（4）在步骤（3）制得的溶液C中依次添加200g蔗糖、50mL丙三醇、2mL聚乙二醇辛基苯基醚以及5mL的Proclin-300；然后加入蒸馏水，使总体积达到10L，搅拌30分钟，使所有成分充分溶解，制成溶液D；
（5）用6mol/L的盐酸将步骤（4）制得的溶液D的pH值调节至7.5，得到用于尿液分析的尿液存储保护液。
7.一种如权利要求1或3任一项所述的用于尿液分析的尿液存储保护液的应用，其特征在于，将所述尿液存储保护液储存于尿液收集器中，并用于尿液成分的生化与免疫分析，所述的尿液收集器为一种可用于尿液存储、运输以及分析的尿液收集装置。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20201201 |