CN110628631A - 一种粪便微生物保存液及其制备方法 - Google Patents

一种粪便微生物保存液及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110628631A
CN110628631A CN201910971323.8A CN201910971323A CN110628631A CN 110628631 A CN110628631 A CN 110628631A CN 201910971323 A CN201910971323 A CN 201910971323A CN 110628631 A CN110628631 A CN 110628631A
Authority
CN
China
Prior art keywords
final concentration
preservation
solution
buffer solution
chelating agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910971323.8A
Other languages
English (en)
Inventor
李强
朱罗罗
徐威
张辉
林清源
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Cheng Cheng Yue Gene Technology Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Cheng Cheng Yue Gene Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Cheng Cheng Yue Gene Technology Co Ltd filed Critical Hangzhou Cheng Cheng Yue Gene Technology Co Ltd
Priority to CN201910971323.8A priority Critical patent/CN110628631A/zh
Publication of CN110628631A publication Critical patent/CN110628631A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种粪便微生物保存液，所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成，蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/L～2mol/L，金属螯合剂的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，氯化钠的终浓度为0.1mmol/L～1mol/L，生物缓冲液的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，稳定剂的终浓度为0.1％/L～10％/L；本发明还公开了一种一种粪便微生物保存液的制备方法：包括以下几个步骤：第一步，向容器内加入1/2体积的无菌水；第二步，依次向容器内加入氯化钠、Tris‑CI缓冲液、乙二胺四乙酸、稳定剂、硫氰酸胍；第三步，加入去离子水完成定容；第四步，调PH至7.5，经过灭菌和室温冷却后得到保存液。本发明具有样本常温保存效果好，保存液使用简便，制备方法整体简单等优点。

Description

一种粪便微生物保存液及其制备方法
【技术领域】
本发明涉及微生物样本检测保存的技术领域，特别是一种粪便微生物保存液及其制备方法的技术领域。
【背景技术】
肠道微生物在离体后，若不能进行及时的核酸提取，会导致菌群的数量、种类及丰度发生变化。粪便是提取肠道微生物核酸的来源，为了提高肠道基因检测准确性，需要在收集粪便后保证肠道菌群的稳定，而现有的一些医院或体检中心的粪便化验由于受地点与实验条件、检测人员的限制，不能对粪便样本进行及时检测化验，需要对不能及时化验检测的粪便样本进行保存。传统的粪便样本采用冷藏法进行保存，即粪便采集后存放于-20℃或更低的温度中，使其中的肠道微生物处于低代谢速率下，在一段时间内稳定菌群的数量与组成，然而冷藏法依然受限于采样条件，使得样本保存操作较为复杂且保存成本较高，不利于样本的运输，冷藏过程中可能还会对微生物活性和质量有一定影响。随着科研技术的发展，人们通过粪便微生物保存液对粪便样本进行保存，但现有的一些粪便微生物保存液存在粪便样本稳定保存效果不佳，保存时间较短，制备方法较为复杂等问题。
【发明内容】
本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种粪便微生物保存液及其制备方法，能够使粪便样本的常温保存效果好，保存液使用简便，制备方法整体简单。
为实现上述目的，本发明提出了一种粪便微生物保存液，所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成，所述蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/L～2mol/L，所述金属螯合剂的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，所述氯化钠的终浓度为0.1mmol/L～1mol/L，所述生物缓冲液的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，所述稳定剂的终浓度为0.1％/L～10％/L。
作为优选，所述蛋白抑制剂为硫氰酸胍，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠，所述生物缓冲液为Tris-CI缓冲液。
作为优选，所述稳定剂为柠檬酸钠。
作为优选，所述保存液的PH为7.5。
作为优选，所述金属螯合剂和Tris-CI缓冲液的PH均为8.0。
作为优选，所述保存液用于保存粪便样本中的微生物。
作为优选，所述保存液和粪便样本按W/V为(3～5):1的比例进行混匀用于保存粪便样本中的微生物。
一种粪便微生物保存液的制备方法，包括以下几个步骤：
第一步，向容器内加入1/2体积的无菌水；第二步，依次向容器内加入氯化钠、Tris-CI缓冲液、乙二胺四乙酸、稳定剂、硫氰酸胍；第三步，向容器内加入去离子水完成定容；第四步，溶液调PH至7.5，经过灭菌和室温冷却后即可得到保存液。
本发明的有益效果：本发明通过在粪便微生物保存液中添加柠檬酸钠作为稳定剂和辅助防腐剂与硫氰酸胍、EDTA等组合使用，增强保存液常温保存效果，能实现样本的常温保存和常温运输，保存液使用简便，保存粪便样本满足POCT、NGS检测要求，整体制备方法整体简单。
本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。
【附图说明】
图1是本发明粪便微生物保存液的十种菌属引物荧光定量PCR检测结果示意图。
【具体实施方式】
本发明一种粪便微生物保存液，包括所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成，蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/L～2mol/L，金属螯合剂的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，氯化钠的终浓度为0.1mmol/L～1mol/L，所述生物缓冲液的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，稳定剂的终浓度为0.1％/L～10％/L，蛋白抑制剂为硫氰酸胍，金属螯合剂为乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠，生物缓冲液为Tris-CI缓冲液，稳定剂为柠檬酸钠，柠檬酸钠中还可加入DMSO、醋酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐、链球菌素，保存液的PH为7.5，金属螯合剂和Tris-CI缓冲液的PH均为8.0，保存液用于保存粪便样本中的微生物。
一种粪便微生物保存液的制备方法，包括以下几个步骤：
第一步，向容器内加入1/2体积的无菌水；第二步，依次向容器内加入20ml氯化钠、6mlTris-CI缓冲液、20ml乙二胺四乙酸、34ml柠檬酸钠、100ml硫氰酸胍；第三步，向容器内加入320ml去离子水定容至1L；第四步，溶液调PH至7.5，经过灭菌和室温冷却后即可得到保存液。
粪便微生物保存液在使用时，需要将保存液和粪便样本按W/V为3:1进行混匀即可对粪便样本进行保存，如取制备好的保存液3ml放入容器内，之后取1g粪便样本放入容器内之后将二者混匀，将容器放置在室温下密封保存并避免强光照射，之后在0、3、7、14、21、28、42、60天时取样进行DNA核酸提取，并采用十种菌属引物进行荧光定量PCR检测，并测定粪便样本中微生物的核酸浓度。具体检测结果如图1所示如下。
参阅图1，检测结果示意图显示扩增结果在六十天内基本保持一致，表明该粪便微生物保存液可长时间保存粪便样本中微生物核酸的稳定性。
该粪便微生物保存液中添加柠檬酸钠，由于柠檬酸钠本身无毒，具有PH调节和缓冲作用，可作为辅助螯合剂降低降解风险，还具有防腐作用，作为稳定剂和辅助防腐剂与硫氰酸胍、EDTA等组合使用，增强保存液常温保存效果，能实现样本的常温保存和常温运输，保存液使用简便，保存粪便样本满足POCT、NGS检测要求，整体制备方法整体简单节省了大量前处理成本。
上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种粪便微生物保存液，其特征在于：所述保存液由蛋白抑制剂、具有螯合剂和防腐作用的稳定剂、生物缓冲液、金属螯合剂、氯化钠及水组成，所述蛋白抑制剂的终浓度为0.1mol/L～2mol/L，所述金属螯合剂的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，所述氯化钠的终浓度为0.1mmol/L～1mol/L，所述生物缓冲液的终浓度为1mmol/L～100mmol/L，所述稳定剂的终浓度为0.1％/L～10％/L。
2.如权利要求1所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述蛋白抑制剂为硫氰酸胍，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠，所述生物缓冲液为Tris-CI缓冲液。
3.如权利要求2所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述稳定剂为柠檬酸钠。
4.如权利要求1所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述保存液的PH为7.5。
5.如权利要求2所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述金属螯合剂和Tris-CI缓冲液的PH均为8.0。
6.如权利要求1所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述保存液用于保存粪便样本中的微生物。
7.如权利要求6所述的粪便微生物保存液，其特征在于：所述保存液和粪便样本按W/V为(3～5):1的比例进行混匀用于保存粪便样本中的微生物。
8.一种粪便微生物保存液的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
第一步，向容器内加入1/2体积的无菌水；
第二步，依次向容器内加入氯化钠、Tris-CI缓冲液、乙二胺四乙酸、稳定剂、硫氰酸胍；
第三步，向容器内加入去离子水完成定容；
第四步，溶液调PH至7.5，经过灭菌和室温冷却后即可得到保存液。
CN201910971323.8A 2019-10-14 2019-10-14 一种粪便微生物保存液及其制备方法 Pending CN110628631A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910971323.8A CN110628631A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种粪便微生物保存液及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910971323.8A CN110628631A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种粪便微生物保存液及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110628631A true CN110628631A (zh) 2019-12-31

Family

ID=68974947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910971323.8A Pending CN110628631A (zh) 2019-10-14 2019-10-14 一种粪便微生物保存液及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110628631A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112029824A (zh) * 2020-09-15 2020-12-04 北京康美天鸿生物科技有限公司 一种通用于多种样本的核酸保存液
CN114657069A (zh) * 2022-04-24 2022-06-24 深圳净拓生物科技有限公司 一种粪便保存液及粪菌悬液的制备方法
CN114806884A (zh) * 2022-06-15 2022-07-29 中国医学科学院北京协和医院 一种常温长效微生物保存液及其制备方法、试剂盒与应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060088813A1 (en) * 2004-10-27 2006-04-27 Rocha Andrew J Glyoxal/zinc fixative
CN104073564A (zh) * 2014-07-15 2014-10-01 浙江诺辉生物技术有限公司 粪便样品稳定液及制备方法与应用
CN104480012A (zh) * 2014-11-27 2015-04-01 南方医科大学 一种粪便细菌的保存液
CN105695447A (zh) * 2016-03-10 2016-06-22 智海生物工程（北京）股份有限公司 一种用于保存唾液中dna的组合物
CN106755442A (zh) * 2016-12-30 2017-05-31 苏州普瑞森基因科技有限公司 一种粪便微生物样品dna保存液
CN107760675A (zh) * 2017-11-07 2018-03-06 泰州达安达瑞医学检验有限公司 一种人粪便样本中脱落细胞dna的提取试剂盒及提取方法
CN107988076A (zh) * 2017-12-19 2018-05-04 东莞博奥木华基因科技有限公司 一种粪便保存液及其应用
CN108935444A (zh) * 2018-07-27 2018-12-07 广州奇辉生物科技有限公司 一种rna样本保存液及其应用方法
CN109122667A (zh) * 2018-09-27 2019-01-04 广州新诚生物科技有限公司 保存液及其制备方法和应用
CN109371015A (zh) * 2018-12-14 2019-02-22 北京奥维森基因科技有限公司 一种粪便保存液及其制备方法和应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060088813A1 (en) * 2004-10-27 2006-04-27 Rocha Andrew J Glyoxal/zinc fixative
CN104073564A (zh) * 2014-07-15 2014-10-01 浙江诺辉生物技术有限公司 粪便样品稳定液及制备方法与应用
CN104480012A (zh) * 2014-11-27 2015-04-01 南方医科大学 一种粪便细菌的保存液
CN105695447A (zh) * 2016-03-10 2016-06-22 智海生物工程（北京）股份有限公司 一种用于保存唾液中dna的组合物
CN106755442A (zh) * 2016-12-30 2017-05-31 苏州普瑞森基因科技有限公司 一种粪便微生物样品dna保存液
CN107760675A (zh) * 2017-11-07 2018-03-06 泰州达安达瑞医学检验有限公司 一种人粪便样本中脱落细胞dna的提取试剂盒及提取方法
CN107988076A (zh) * 2017-12-19 2018-05-04 东莞博奥木华基因科技有限公司 一种粪便保存液及其应用
CN108935444A (zh) * 2018-07-27 2018-12-07 广州奇辉生物科技有限公司 一种rna样本保存液及其应用方法
CN109122667A (zh) * 2018-09-27 2019-01-04 广州新诚生物科技有限公司 保存液及其制备方法和应用
CN109371015A (zh) * 2018-12-14 2019-02-22 北京奥维森基因科技有限公司 一种粪便保存液及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M TAKAHASHI ET AL.: "Faecal freezing preservation period influences colonization ability for faecal microbiota transplantation", 《JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY 》 *
吉鹤立: "《中国食品添加剂及配料使用手册》", 30 June 2016, 中国质检出版社 *
宁平: "《饲料添加剂开发加工新工艺与应用新技术实务全书》", 31 March 2004, 清华同方光盘电子出版社 *
王智才 等: "《中国饲料工业年鉴2011》", 29 February 2012, 中国商业出版社 *
苏春康等: "PARA test Green Fix保存液对粪便检验结果的影响", 《承德医学院学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112029824A (zh) * 2020-09-15 2020-12-04 北京康美天鸿生物科技有限公司 一种通用于多种样本的核酸保存液
CN114657069A (zh) * 2022-04-24 2022-06-24 深圳净拓生物科技有限公司 一种粪便保存液及粪菌悬液的制备方法
CN114657069B (zh) * 2022-04-24 2023-10-20 深圳净拓生物科技有限公司 一种粪便保存液及粪菌悬液的制备方法
CN114806884A (zh) * 2022-06-15 2022-07-29 中国医学科学院北京协和医院 一种常温长效微生物保存液及其制备方法、试剂盒与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110628631A (zh) 一种粪便微生物保存液及其制备方法
CN110760567A (zh) 尿液样本rna稳定液及制备方法
Bucheder et al. Energy‐dependent zinc transport by Escherichia coli
JP7125579B2 (ja) 検体保存液並びにそれを用いた分析用装置及び分析方法
CN107980763A (zh) 一种粪便保存试剂及其应用
CN109609600A (zh) 常温下一种粪便样本的dna保存液及其制备方法和用途
CN108192827A (zh) 一种肠道菌群样本常温保存液及其制备方法和用途
Nedwell et al. Hydrogen as an electron donor for sulfate-reducing bacteria in slurries of salt marsh sediment
CN111513060A (zh) 用于低温条件保持细胞活性的保存液及保存方法
RU2619834C2 (ru) Способ исследования кала на дисбактериоз кишечника
CN107447007A (zh) 一种dna类组织样品保存液及应用
CN101551382A (zh) 细胞活力检测试剂盒及其制备方法、应用
JP2016136911A (ja) 生物群集構造の維持、常温保存、輸送が可能な保存・輸送技術及びこの技術を用いた検体の採取・輸送・保管容器
CN114410739A (zh) 一种rna保护剂及其应用
JP2020022374A (ja) 微生物検査
CN111139236A (zh) 一种粪便样品稳定液及其制备、使用方法
WO2018138913A1 (ja) 保存溶液およびその保存溶液を用いた検体の保存方法、特に、検体のｄｎａおよび有機酸やポリアミン類などの化学物質の保存溶液およびその保存溶液を用いた保存方法
CN113637723A (zh) 一种粪便样本核酸保存液及其制备方法
CN111808842A (zh) 一种核酸保护试剂及其使用方法
CN117165580B (zh) 一种用于稳定样本中核酸的组合物、制备方法及其应用
RU2603104C2 (ru) Способ биохемилюминесцентной оценки токсичности рубцовой жидкости in vitro
US20230183777A1 (en) Hypoosmotic stabilizer for genomic dna of gut microbiota, and preparation method and use thereof
CN117587101A (zh) 一种粪便样本保存液及其应用
CN116287120A (zh) 一种可常温保存且可60℃高温下保存唾液样本中人源细胞核酸dna与rna的保存液及其制备方法
Perepelytsina et al. Development of effective hematopoietic stem cell freezing protocols

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191231

RJ01 Rejection of invention patent application after publication