CN114839020A - 一种细胞病理玻片固定液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种细胞病理玻片固定液，按照1kg质量计，包括醇类800‑900g、聚乙二醇50‑80g、甲醛30‑50g、磷酸盐缓冲剂余量，所述醇类包括乙醇、正丁醇和叔丁醇，所述乙醇、正丁醇和叔丁醇的质量比为2‑3:0.5‑1:1‑2。本发明通过上述三种醇物质的配伍，使得固定液的固定效果提升，标本具有较好的弹性，而且结构保存完好，在后期着色过程中，着色效果极佳，通过实验对比，三者配伍得到的固定液的固定效果要比单纯采用一种醇类得到的固定液的固定效果要好。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞病理玻片固定液及其制备方法，属于细胞固定液技术领域。
背景技术
固定是生物医药研究中不可缺少的基础技术，在生物学领域，固定的目的是抑制生物体或其局部的破坏和自溶，尽量使其外形和内部构造、物质组成等以近似活体的状态保存下来，或者为适应研究的目的，溶去一部分物质，有选择地保存一部分内部构造和物质，以便观察活体状态，同时还可以抑制细菌和霉菌的生长。为了便于用光学显微镜、电子显微镜进行观察，经过固定，可使包埋、切片、染色等操作步骤更易于进行。因为细胞内部的主要成分是蛋白质和水，所以固定主要是依靠蛋白质的凝固变性或水的冷冻来进行的，前者是用固定液或者加热来固定的，后者是通过急速冷却来固定的。
固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。但是，甲醛有刺激性气味，低浓度即可嗅到，其主要危害表现为对皮肤粘膜的刺激作用。
现有使用的固定液成分为160mL甲醇、30mL甲醛和10mL冰乙酸。在实验过程中由于固定液中有高浓度甲醛成分，常常会有刺激性气味，并且，冰乙酸易挥发，会对实验人员呼吸道造成腐蚀等不可逆的损伤。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的第一目的在于提供一种细胞病理玻片固定液。
本发明的第二目的在于提供上述固定液的制备方法。
为了实现第一目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种细胞病理玻片固定液，按照1kg质量计，包括醇类800-900g、聚乙二醇50-80g、甲醛10-50g、磷酸盐缓冲剂余量。
采用上述技术方案，固定液中不含冰醋酸，避免冰醋酸挥发对人体造成伤害，且本申请添加的甲醛含量较低，经过试验验证，本发明的固定液的甲醛挥发性很低，其挥发浓度远远低于市售的福尔马林固定液。
优选的，所述醇类包括乙醇、正丁醇和叔丁醇。
优选的，所述乙醇、正丁醇和叔丁醇的质量比为2-3:0.5-1:1-2。
采用上述技术方案，通过上述三种醇物质的配伍，使得固定液的固定效果提升，标本具有较好的弹性，而且结构保存完好，在后期着色过程中，着色效果极佳，通过实验对比，三者配伍得到的固定液的固定效果要比单纯采用一种醇类得到的固定液的固定效果要好。
优选的，所述乙醇为95％乙醇。
优选的，所述磷酸盐缓冲剂为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，所述磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的质量比为1-2:2-3。
采用上述技术方案，采用磷酸盐缓冲剂作为缓冲液，给固定液提供了良好的溶液环境。
优选的，所述固定液的pH＝6.5-7.0。
为了实现第二目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种细胞病理玻片固定液的制备方法，包括如下步骤：
S1：将95％乙醇、正丁醇、叔丁醇按照质量比混合，得到醇类溶液；
S2：依次向步骤S1得到的醇类溶液中加入聚乙二醇和甲醛，加热，搅拌；
S3：向步骤S2得到的溶液中加入磷酸盐缓冲剂，加热，搅拌，得到固定液。
优选的，步骤S2和步骤S3中的加热温度为30-50℃，步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：转速100-200r/min，搅拌5-10min。
优选的，所述固定液用于动物、植物、细菌、真菌和细胞样本的固定。
优选的，所述固定液用于病理组织制片、石蜡组织切片染色的固定，该固定液用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测。
本发明的有益效果：
(1)将原有固定液中的冰乙酸去掉，降低甲醛的占比，减少酸性气体在实验工作中对人员造成损伤。
(2)本申请通过95％乙醇、正丁醇、叔丁醇的配伍，提高了固定液的固定效果。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
实施例1
一种细胞病理玻片固定液，包括醇类800g、聚乙二醇80g、甲醛50g、磷酸盐缓冲剂补齐至1kg。
本实施例中，醇类是质量比为2:0.5:1的95％乙醇、正丁醇和叔丁醇。
本实施例中，磷酸盐缓冲剂是质量比为1:2的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
本实施例中，固定液的pH＝7.0。
一种细胞病理玻片固定液的制备方法，包括如下步骤：
S1：将95％乙醇、正丁醇、叔丁醇按照质量比混合，得到醇类溶液；
S2：依次向步骤S1得到的醇类溶液中加入聚乙二醇和甲醛，加热，搅拌；
S3：向步骤S2得到的溶液中加入磷酸盐缓冲剂，加热，搅拌，得到固定液。
本实施例中，步骤S2和步骤S3中的加热温度为30℃，步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：转速200r/min，搅拌10min。
实施例2
一种细胞病理玻片固定液，与实施例1不同之处在于：醇类900g、聚乙二醇50g、甲醛30g。
本实施例中，醇类是质量比为2:1:2的95％乙醇、正丁醇和叔丁醇。
本实施例中，磷酸盐缓冲剂是质量比为1:3的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
本实施例中，固定液的pH＝6.8。
一种细胞病理玻片固定液的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2和步骤S3中的加热温度为40℃，步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：转速150r/min。
实施例3
一种细胞病理玻片固定液，与实施例1不同之处在于：醇类850g、甲醛30g。
本实施例中，醇类是质量比为3:1:1的95％乙醇、正丁醇和叔丁醇。
本实施例中，磷酸盐缓冲剂是质量比为1:1的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
一种细胞病理玻片固定液的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2和步骤S3中的加热温度为50℃，步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：转速100r/min。
实施例4
一种细胞病理玻片固定液，与实施例1不同之处在于：聚乙二醇60g、甲醛40g。
本实施例中，磷酸盐缓冲剂是质量比为2:3的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
本实施例中，固定液的pH＝6.5。
一种细胞病理玻片固定液的制备方法，与实施例1不同之处在于：步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：搅拌5min。
实施例5
一种细胞病理玻片固定液，与实施例1不同之处在于：包括醇类850g、聚乙二醇70g。
本实施例中，醇类是质量比为3:1:2的95％乙醇、正丁醇和叔丁醇。
一种细胞病理玻片固定液的制备方法，同实施例1。
试验例1挥发性测定
试验组别：对比例1、实施例1-5；其中对比例1采用市售10％福尔马林固定液(甲醛含量3.6％)。
试验方法：取500ML对比例1和实施例1-5的产品，分别放置相同的口径的广口瓶内，敞口置于密闭空间(0.5m×0.5m×0.5m)中，静置3min后，按GBZ 159-2004、GBZ/T160.54-2004《工作场所空气有毒物质测定脂肪族醛类化合物》进行采样分析。
试验结果：详见表1。
表1对比例1、实施例1-5产品挥发性测定结果
参考表1可知，本发明制备的产品挥发性很低，其挥发浓度远远低于市售的福尔马林固定液，效果十分显著。
试验例2固定效果和稳定性测试
试验组别：对比例1、实施例1-3
试验方法：
(1)固定效果测试：取新鲜的猪肝组织，切取面积为1cm×1cm，厚度为0.4cm；将切好的组织分别泡浸在对比例1、实施例1-3的固定液中，固定液用量为组织体积的8倍，固定染色5h，按病理检验进行常规切片处理后在显微镜下观察。
(2)稳定性测试：将对比例1、实施例1-3的固定液在37℃下放置10天后，再按照上述固定效果测试方法对猪肝组织进行固定，进一步验证固定液的稳定性。
试验结果：详见表2。
表2对比例1、实施例1-3固定液的固定效果和稳定性测试结果
参考表2，经实施例中1-3的组织固定液固定染色后的标本，经切片处理后在显微镜下观察，其结果与市售的福尔马林固定效果相当，提高了检验结果判断的准确定。且经过固定5h后效果依旧良好，表明本发明的组织固定液固定均匀，着色持久。同时，通过稳定性测试，在固定液放置10天后，其固定液性能依然稳定，固定效果并未变差。
试验例3乙醇、正丁醇和叔丁醇的配伍对固定效果的影响
试验组别：实施例1、对比例2-4，其中，对比例2的醇类选为95％乙醇，对比例3的醇类选为正丁醇，对比例4的醇类选为叔丁醇，其他同实施例1。
试验方法：取新鲜的猪肝组织，切取面积为1cm×1cm，厚度为0.4cm；将切好的组织分别泡浸在实施例1、对比例2-4的固定液中，固定液用量为组织体积的8倍，固定染色5h，按病理检验进行常规切片处理后在显微镜下观察。
试验结果：详见表3。
表3乙醇、正丁醇和叔丁醇的配伍对固定效果的影响
| 固定效果 | |
| 对比例2 | 猪肝组织具有弹性、结构保存完好、略有收缩现象、着色明显，可辨认细小组织 |
| 对比例3 | 猪肝组织弹性较差、结构保存完好、略有收缩现象、着色较差 |
| 对比例4 | 猪肝组织弹性较差、结构保存完好、未见收缩现象、着色明显，可辨认细小组织 |
| 实施例1 | 猪肝组织具有弹性、结构保存完好、未见收缩现象、着色明显，可辨认细小组织 |
参考表3，通过上述三种醇物质的配伍，使得固定液的固定效果提升，标本具有较好的弹性，而且结构保存完好，在后期着色过程中，着色效果极佳，通过实验对比，三者配伍得到的固定液的固定效果要比单纯采用一种醇类得到的固定液的固定效果要好。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (9)
1.一种细胞病理玻片固定液，其特征在于，按照1kg质量计，包括醇类800-900g、聚乙二醇50-80g、甲醛30-50g、磷酸盐缓冲剂余量，所述醇类包括乙醇、正丁醇和叔丁醇。
2.如权利要求1所述的一种细胞病理玻片固定液，其特征在于，所述乙醇、正丁醇和叔丁醇的质量比为2-3:0.5-1:1-2。
3.如权利要求2所述的一种细胞病理玻片固定液，其特征在于，所述乙醇为95％乙醇。
4.如权利要求3所述的一种细胞病理玻片固定液，其特征在于，所述磷酸盐缓冲剂为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，所述磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的质量比为1-2:2-3。
5.如权利要求4所述的一种细胞病理玻片固定液，其特征在于，所述固定液的pH＝6.5-7.0。
6.一种制备如权利要求1-5任一所述的固定液的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将95％乙醇、正丁醇、叔丁醇按照质量比混合，得到醇类溶液；
S2：依次向步骤S1得到的醇类溶液中加入聚乙二醇和甲醛，加热，搅拌；
S3：向步骤S2得到的溶液中加入磷酸盐缓冲剂，加热，搅拌，得到固定液。
7.如权利要求6所述的一种细胞病理玻片固定液的制备方法，其特征在于，步骤S2和步骤S3中的加热温度为30-50℃，步骤S2和步骤S3中的搅拌条件为：转速100-200r/min，搅拌5-10min。
8.如权利要求1-5任一所述的固定液，其特征在于，所述固定液用于动物、植物、细菌、真菌和细胞样本的固定。
9.如权利要求1-5任一所述的固定液，其特征在于，所述固定液用于病理组织制片、石蜡组织切片染色的固定，该固定液用于常规病理检测、免疫组化检测、分子生物学检测。
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| CN202210523406.2A CN114839020A (zh) | 2022-05-13 | 2022-05-13 | 一种细胞病理玻片固定液及其制备方法 |
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| CN202210523406.2A CN114839020A (zh) | 2022-05-13 | 2022-05-13 | 一种细胞病理玻片固定液及其制备方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118090378A (zh) * | 2024-04-28 | 2024-05-28 | 天津金域医学检验实验室有限公司 | 一种套染的染色方法及应用 |
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2022
- 2022-05-13 CN CN202210523406.2A patent/CN114839020A/zh active Pending
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